Способ определения величины усадки тканей при гистологической обработке

 

Использование: медицина и ветеринария. Сущность изобретения: для определения величины усадки ткани при гистологической обработке осуществляют иссечение ткани, фиксацию, дегидратацию, заливку и окраску, с последующим определением степени ее усадки. Сравнивают линейные и поверхностные показатели двух гистологических срезов, один из которых получен по общепринятой методике, а второй - в криостате и окрашен толуидиновым синим.

Изобретение относится к медицине и ветеринарии, касается гистологической техники и может быть использовано в лабораторной практике при обработке гистологического материала.

Известен способ определения усадки ткани по уменьшению объема кусочка после этапа обработки материала: фиксации, дегидрации, заливки и окраски. При невозможности определения объема обрабатываемого кусочка, для расчета линейного, плоскостного и объемного коэффициентов усадки используют результаты линейных измерений до и после каждого этапа обработки (Автандилов Г.Г. Медицинская морфометрия. М. Медицина, 1990, с. 233 235).

Недостатками данного способа являются, во-первых, его многоступенчатость, что оказывает отрицательное влияние на качество обработки материала и повышает вероятность ошибки измерения, во-вторых, его использование возможно только для объектов доступных для макроскопического измерения, в-третьих, ограниченный диапазон определения усадки ткани только компактных органов (поджелудочная железа, печень, лимфоузлы и т.п.), в-четвертых, при его использовании не учитывается известный факт разной степени сжатия эпителиальной, соединительной, мышечной и нервной тканей. Все это приводит к значительным ограничениям применения данного метода (в доступной литературе имеются единичные факты его применения) и снижает его точность.

Технический эффект заключается в расширении диапазона морфологических исследований и повышении точности определения усадки тканей за счет исследования гистологических срезов только на конечном этапе.

Сущность заключается в том, что в способе определения величины усадки ткани при гистологической обработке путем иссечения ткани, фиксации, дегидратации, заливки и окраски, с последующим определением степени ее усадки, сравнивают линейные и поверхностные показатели двух гистологических срезов, один из которых получен по общепринятой методике, а второй в криостате и окрашен толуидиновым синим.

Пример. У телок в разные стадии полового цикла необходимо определить диаметр маточных желез и сравнить, в дальнейшем, эти данные с аналогичными показателями у новорожденных телят и коров. Количество материала и его размеры ограничены, т.к. он будет получен прижизненно с помощью биопсии.

Для этого определяли величину усадки тканей следующим образом. Часть биоптата фиксировали в жидком азоте, помещали в криостат при температуре 20-25^oС, монтировали на блок-держатель и получали срезы. Последние помещали на предметное стекло, извлекали из криостата и окрашивали толуидиновым синим. С помощью окуляр-микрометра измеряли диаметр маточных желез. Получали следующие показатели 60 мкм, 65 мкм, 61 мкм, 63 мкм, 64 мкм, 61 мкм, 62 мкм, 64 мкм, 63 мкм, 62 мкм. Находили среднюю арифметическую, которая равнялась 62,5 мкм.

Вторую часть кусочка фиксировали в жидкости Карнуа (1 час), обезвоживали в 96^o спирте (2 часа) и в абсолютном спирте (2 часа). Заливали в парафин по следующей схеме: спирт-хлороформ (2 часа), хлороформ (2 часа), хлороформ-парафин (2 часа при температуре 37^oС), две порции парафина (по 1 часу при температуре 54^oС). На микротоме получали срезы, наклеивали их на стекла и окрашивали гематоксилином-аозином (Меркулов Г.А. Курс патогистологической техники. М. Медицина, 1969, 423 с.). Измеряли диаметр маточных желез и получали ряд цифр: 53 мкм, 52 мкм, 54 мкм, 53 мкм, 54 мкм, 55 мкм, 52 мкм, 55 мкм, 53 мкм, 55 мкм. Находили среднюю арифметическую, которая была равна 53,6 мкм. Таким образом, линейный коэффициент усадки будет равен 62,5 мкм: 53,6 мкм 1,17.

В дальнейшем, материал от других животных, заливается в парафин так, как описано выше, и используется уже найденный коэффициент. Аналогичным образом можно рассчитать и другие коэффициенты (поверхностный, объемный, плотности расположения структур).

Величину поверхностного коэффициента усадки рассчитывают по формуле: ПКУ П1:П2 где: П1 площадь структуры на криостатном срезе, П2 площадь структуры на срезе обработанным обычным способом.

Величину объемного коэффициента усадки определяют по линейному коэффициенту возведя его в куб: ОКУ ЛКУ³ Коэффициент плотности расположения структур определяют по формуле: КПС ПЛ1:ПЛ2 где: ПЛ1 плотность расположения структур в криостатном срезе, ПЛ2 - плотность расположения структур в срезе обработанном обычным образом.

В последующей работе не требуется каждый раз получать срезы на криостате, а используются уже полученные ранее коэффициенты, при условии, что проводится исследование аналогичного материала той же методикой.

По сравнению с известными решениями предлагаемый способ позволяет расширить диапазон морфологических исследований за счет возможности изучения любого органа и кусочков небольшого размера, а также сократить время и повысить точность определения усадки ткани за счет исследования гистологических срезов только на конечном этапе гистологической обработки.

Формула изобретения

Способ определения величины усадки ткани при гистологической обработке путем иссечения, фиксации, дегидратации и окраски ткани с последующим определением линейных и поверхностных показателей, отличающийся тем, что сравнивают линейные и поверхностные показатели двух гистологических срезов, один из которых получен по общепринятой методике, а второй в криостате и окрашен толуидиновым синим на стекле.