Способ обнаружения и идентификации энтеровирусов в патологическом материале
Назначение: ветеринарная и медицинская вирусология, для обнаружения и идентификации энтеровирусов в патологическом материале. Сущность изобретения: патологический материал последовательно центрифугируют в деионизированной воде и с медицинским активированным углем, а надосадочную жидкость используют в качестве антигена в реакции латекс-агглютинации.
Изобретение относится к ветеринарной и медицинской вирусологии, в частности, к способам обнаружения и идентификации микроорганизмов и может быть использовано для обнаружения и идентификации энтеровирусов в патологическом материале.
Известен способ обнаружения энтеровирусов, включающий отбор патологического материала, его посев на культуру тканей с регистрацией цитопатогенного действия с последующей идентификацией в реакции торможения роста с добавлением специфических сывороток [1] Способ сложен в осуществлении, требует значительных затрат времени, высокая квалификации персонала; точность способа ограничена тем, что не все вирусы обладают цитопатогенным действием. Предлагается способ обнаружения и идентификации энтеровирусов, включающий отбор патологического материала, центрифугирование в деионизированной воде с последующей очисткой поверхностно-активными веществами и использование надосадочной жидкости в качестве антигена в реакции агглютинации частиц латекса, сенсибилизированных иммуноглобулинами против группы родственных вирусов. Способ осуществляется следующим образом. Патологический материал разводят деионизированной водой, центрифугируют, в надосадок добавляют поверхностно-активные вещества, центрифугируют, а надосадок используют в качестве антигена в реакции агглютинации частиц латекса, сенсибилизированных видоспецифическими иммуноглобулинами по методу Ю.В. Лукина (1990). Пример 1. У 30 больных с клиническим диагнозом "инфекция, вызванная энтеровирусами", отбирают патологический материал 27 проб фекалий, 3 пробы - спиномозговой жидкости. Патологический материал разводят деионизированной водой в соотношении фекалии 1 5, спиномозговую жидкость 1 2, центрифугируют при 4000 5000 об/мин в течение 15 20 мин. Из надосадочной жидкости отбирают 0,20 0,22 мл в конические пластмассовые пробирки с крышкой объемом 0,5 см3, добавляют поверхностно-активное вещество (200 220 мг) взбалтывают в течение 2 3 мин, оставляют на 60 70 мин при комнатной температуре. Повторно центрифугируют при 3000 4000 об/мин. в течение 5 мин, надосадок используют в качестве антигена в реакции латекс-агглютинации. Частицы латекса сенсибилизируют смесью иммуноглобулинов к трем серотипам вируса полиомиелита (I, II, III) по методу Ю.В.Лукина (1990). В качестве контроля используют несенсибилизированные частицы латекса. Параллельно проводят обнаружение вируса известным способом: посев патологического материала на культуру тканей с регистрацией цитопатогенного действия. Результаты РАЛ представлены в табл. 1. Как видно из табл. 1, в 25 случаях получена положительная, в 2 случаях отрицательная, в 3 случаях сомнительная реакция. Положительные результаты РАЛ в 100% случаев совпадают с положительными результатами известного способа. Пример 2. У 48 здоровых детей в возрасте 5 6 лет, посещающих детский комбинат, берут пробы фекалий для исследования предлагаемым способом. Пробы обрабатывают, как в примере 1. Результаты представлены в табл. 2. Как видно из табл. 2, у 10 детей результат РАЛ положительный, а у 6 детей сомнительный. Наличие положительного результата указывает на миграцию диких или вакцинных вирусов: в возрасте 5 лет дети прививаются вакциной Себина. По литературным данным, носительство энтеровирусов колеблется от 2 до 30% в зависимости от возраста, сезонности и эпизоотической обстановки что совпадает с полученными результатами. Пример 3. Вакцину Себина в количестве 0,2 0,22 мл помещают в конические пластмассовые пробирки с крышкой объемом 0,5 см3, добавляют поверхностно-активное вещество (200 220 мг), взбалтывают в течение 2 3 мин, оставляют при комнатной температуре на 60-70 мин, после чего центрифугируют при 3000 4000 об/мин в течение 5 мин. Частицы латекса сенсибилизируют иммуноглобулинами, приготовленными к трем серотипам вируса полиомелита I, II, III и к вирусам Коксаки и Эхо. Результаты представлены в табл. 3. Как видно из табл. 3, результаты титрования вакцины Себина с латексом, сенсибилизированным иммуноглобулинами к различным полиовирусам, указывают на наличие общих антигенов у этой группы вирусов и на возможность группового выявления энтеровирусов с помощью одного препарата латекса, сенсибилизированного иммуноглобулинами к любому из серотипов или смесью иммуноглобулинов к различным полиовирусам. Пример 4. У больного в возрасте 4 лет с клиническим диагнозом "полиомиелит", подтвержденным лабораторными исследованиями, берут пробу фекалий. Исследования проводят предлагаемым способом, как в пример 1. Результаты представлены в табл. 4. Как видно из табл. 4, исследование материала в наибольшем титре 1/40 дает положительную реакцию с латексом, сенсибилизированным иммуноглобулинами к типу III вируса полиомиелита, что указывает на возможность идентификации полиовируса при использовании 5 препаратов сенсибилизированного латекса. Предлагаемый способ имеет следующие преимущества по сравнению с известным способом: 1. Простота осуществления исключается многоступенчатость исследований (подготовка вируссодержащего материала, посев на культуру тканей, инкубирование, пересев), отпадает необходимость в соблюдении стерильности, дополнительном оборудовании и реактивах. 2. Быстрота результат можно получить в течение 3-4 часов (известный способ 2 4 недели). 3. Точность. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе: 1. Н. М. Златковская Энтеровирусные заболевания у детей Л. Медицина, 1976.Формула изобретения
Способ обнаружения и идентификации энтеровирусов в патологическом материале, включающий постановку реакции латекс-агглютинации, отличающийся тем, что патологический материал центрифугируют последовательно в деионизированной воде и с медицинским активированным углем, а надосадочную жидкость используют в качестве антигена.РИСУНКИ
Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3
Похожие патенты:
Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологическим методам исследования, и касается выявления в организме человека активированных лимфоцитов
Изобретение относится к медицине, а именно к способам диагностики аллергизации организма больных хроническим гнойным гайморитом неинфекционными аллергенами и может быть использовано для раннего выявления аллергизации организма больных клещами домашней пыли
Способ диагностики инфаркта миокарда // 2079134
Изобретение относится к медицине, в частности, к генетике и кардиологии
Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству, и может быть использовано для доклинической диагностики невынашивания беременности
Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в медицине для определения резус-принадлежности крови человека экспресс-методом в прямой реакции агглютинации на плоскости или в пробирочном тесте
Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству, и может быть использовано для оценки состояния иммунной системы беременной женщины с целью прогнозирования осложнений беременности
Изобретение относится к области офтальмологии и предназначено для дифференциальной диагностики ретинобластомы (RBL) и инфекционных поражений увеального тракта и сетчатки
Способ обнаружения раковоэмбрионального антигена при помощи специального антительного диагностикума // 2077725
Изобретение относится к медицине, к способам диагностики, а именно, к иммунологическому анализу с помощью лекарственных препаратов, содержащих носители, связанные с антителами, и может быть использовано для выявления лиц с наличием опухолей продуцентов раково-эмбрионального антигена (РЭА)
Изобретение относится к медицине, а именно к педиатрии, и может быть использовано для диагностики ранних отклонений в иммунном статусе новорожденных
Способ выявления высокоаффинных поли- и моноклональных антител к водонерастворимым гаптенам // 2102080
Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к методам иммунохимического определения гаптенов (ксенобиотиков) в образцах биологического происхождения и объектах окружающей среды, и может быть использовано для выявления высокоаффинных поли- и моноклональных антител к водонерастворимым гаптенам
Изобретение относится к предотвращению болезни Лайма у млекопитающих
Изобретение относится к устройству для автоматического проведения иммуноанализа за несколько последовательных этапов по меньшей мере, одного биологического вещества из множества биологических образцов, а также к способу и реактивам для использования указанного прибора
Изобретение относится к анализам и, в частности к катализируемому осаждению репортера через активированный конъюгат для усиления детектируемого сигнала, вследствие чего улучшается детекция и/или количество аналита в образце
Изобретение относится к анализам и, в частности к катализируемому осаждению репортера через активированный конъюгат для усиления детектируемого сигнала, вследствие чего улучшается детекция и/или количество аналита в образце
Способ определения биологически активных веществ в жидкостях и устройство для его осуществления // 2102760
Изобретение относится к области медицины, медицинской техники, ветеринарии, экологии и может быть использовано для определения биологически активных веществ в любых биологических жидкостях, окружающей среде, пищевых продуктах, в частности в диагностике вирусных, бактериальных, паразитарных и соматических заболеваний, а также для контроля эффективности лечения
Изобретение относится к медицине, а именно к детской хирургии и клинической иммунологии, и может быть использовано для диагностики спаечной болезни брюшины у детей, оперированных по поводу острого аппендицита
Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и может быть использовано для оценки состояния иммунной системы беременной женщины
Способ диагностики хронического простатита // 2103691
Изобретение относится к медицине, а именно к урологии, и может быть использовано для диагностики хронического простатита