Способ получения вещества, обладающего противоопухолевой активностью, вещество, полученное этим способом, и фармацевтическая композиция на его основе

 

Использование: изобретение относится к медицине, а именно к химико-фармацевтической промышленности, и касается способа получения вещества, обладающего противоопухолевой активностью, вещества, полученного этим способом, и фармацевтической композиции на его основе из растений семейства Pittosporacea. Сущность способа заключается в экстракции этанолом плодов методом мацерации, извлечении хлороформом, упаривании хлороформ-спиртовой фазы, очистки осаждением изопропиловым спиртом, фильтрации, сушки и измельчения осадка, солюбилизации его смесью этиловый спирт:вода 4:1, очистки активированным углем с последующей элюцией целевого продукта смесью этиловый спирт:вода 4: 1, перекристаллизации из изопропилового спирта, сушки и измельчения. Противоопухолевое вещество представляет собой водорастворимое вещество импирической формулы C₆H₁₀O₄ с температурой плавления 205-255^oC, имеющее времена удерживания, соответствующие 1, 131 и 1,551 при проведении анализа с использованием хроматогрофа Перкин-Элмер-250 с колонкой 125 x 4 мм с подвижной фазой, состоящей из метанола при определении при длине волны 217, фармацевтическая композиция содержит противоопухолевое вещество и соответствующие наполнители и носители, позволяющие получать различные лекарственные формы. Технический результат изобретения заключается в усилении специфической активности и повышении специфичности вещества. 3с. и 24 з.п. ф-лы.

Изобретение относится к веществам и композициям обладающим противоопухолевой активностью и экстрагированным из растений семейства Pittosporacea, а также к фармацевтическим препаратам, изготовленным на основе по крайней мере одного из указанного веществ и композиций, к способам экстракции указанных веществ и соответственно к способам изготовления из этих веществ лекарственных препаратов.

Известно, что одним из многообещающих направлений исследований, которое по крайней мере с теоретической точки зрения представляет собой достаточно простое средство, облегчающее поиски способов борьбы с опухолевыми заболеваниями, является противоопухолевая химиотерапия. Антипролиферативные средства, которые были выделены до настоящего времени, происходят из широкого спектра источников, и обладают гетерогенными химическими свойствами. Среди этих антипролиферативных средств, имеются также некоторые вещества, экстрагированные из растений, например, такие, как колцихин и винкалейкобластин, причем первый из них был экстрагирован из Colchicum Autumnale, а другой - из Vinca Rocea. Хотя указанные антипролиферативные агенты обладают более или менее специфической противоопухолевой активностью, однако их селективность по отношению к дегенерированным клеткам обычно очень низка. Опасность их возможного вмешательства в метаболизм здоровых клеток является главным препятствием для более широкого их использования.

Неожиданно было обнаружено, что настоящее изобретение позволяет преодолеть вышеуказанные ограничения путем использования химиотерапевтических противоопухолевых агентов на основе активных начал растительного происхождения, которые обладают высокоизбирательной противоопухолевой активность и по сравнению с другими противоопухолевыми лекарственными средствами гораздо более низкой токсичностью.

Основным предметом настоящего изобретения является способ получения веществ и/или композиций, обладающих противоопухолевой активностью, отличающийся тем, что части и/или продукты растений, происходящих от семейства Pittosporacea (в любой стадии их развития или зрелости), подвергают в основном следующим операциям: a) экстрагированию компонентов путем мацерации в органическом растворителе; b) необязательному размешиванию или встряхиванию раствора, содержащего экстракт, с другим растворителем, который по крайней мере частично смешивается с первым растворителем в целях распределения компонентов экстракта по образовавшимся фазам; c) необязательной обработке каждой фазы независимо друг от друга с использованием по крайней мере еще одной органической жидкости, обладающей свойствами растворителя по крайней мере для одного из компонентов экстракта, с последующим фильтрованием любой образующей суспензии, сбором твердой фазы и ее последовательной очисткой; d) необязательному разделению компонентов, находящихся в каждой жидкой фазе; e) сбору выделенных компонентов, обладающих противоопухолевой активностью, и компонентов, не обладающих противоопухолевой активностью.

Экстракты могут быть осушены и очищены перед каждой последующей стадией данного способа.

Растения семейства Pittosporacea являются предпочтительно растениями вида Pittosporum. Указанные растения могут быть выбраны, например, из группы, включающей в себя Pittosporum ondulatum, Pittosporum coridceum, Pittosporum viridicolor, Pittosporum rhombipholium, Pittosporum eugenoides, Pittosporum crossifolium и Pittosporum Tobira и их комбинации.

Растворителем может быть спирт. Хорошие результаты были получены с использованием этилового спирта.

Объемное отношение между органическими растворителем и обработанными частями растений составляет предпочтительно от 1:10 до 10:1.

Время обработки предпочтительно составляет от 5 до 3 мес. Температура обработки может варьироваться предпочтительно от 5^oC до 100^oC.

Выделение компонентов из экстракта может быть осуществлено предпочтительно с использованием хроматографической техники. Хорошие результаты были получены с использованием хроматографии на колонке с силикагелем или на ЖХВР-препаративной колонке.

Экстракция может быть осуществлена с использованием этанола и сбора компонентов, время удерживания которых при ЖХВР составляет около 1,157; 1,545; 1,883; 2,051; 2,273; 2,572 и 2,743.

Следует отметить, что аналитические тесты при ЖХВР как в данных случаях, так и в последующих случаях проводили с использованием хроматографа Perkin-Elmer серий 250 с колонкой RP 18 (125 мм x 4 мм), где подвижная фаза состояла из метанола и H₂O (80:20), а длина волны составляла 210 нм.

После экстрагирования этанолом полученный таким образом раствор может быть смешан путем встряхивания с хлороформом с образованием двух фаз: фазы спирта-хлороформа интенсивной зеленой окраски и водной фазы оранжево-желтого цвета. В этом случае компоненты, обладающие противоопухолевой активностью, обнаруживались в фазе спирта-хлороформа. Сбор компонентов, обладающих противоопухолевой активностью, осуществляли хроматографически после того, как их осушили от фазы спирта-хлороформа, а сорбит ресолюбилизировали в метаноле. При осуществлении хроматографии на метаноловом растворе с использованием ЖХВР-техники собирали те компоненты, времена удерживания которых составляли около 1,969; 2,296 и 2,756.

Хлороформ-спиртовой раствор может быть концентрирован путем выпаривания, после чего может быть добавлен изопропиловый спирт для образования суспензии, которую затем фильтруют, а твердую фазу подвергают горячей осушке и измельчению в ступе. После ресолюбилизации в смеси воды и этанола продукт может быть очищен на хроматографической колонке с активированным углем. Две твердые фракции (неочищенная и очищенная), растворенные в смеси этанола и воды или в метаноле, могут быть подвергнуты хроматографии с использованием ЖХВР-техники со сбором компонентов, времена удерживания которых составляют около 1,157; 1,545 и 1,264.

Настоящее изобретение также относится к веществам и композициям, полученным perse и отличающимся тем, что они могут быть получены с использованием способа, описанного выше.

Предметом настоящего изобретения являются также вещества и композиции, обладающие противоопухолевой активностью и отличающиеся тем, что они могут быть получены способом, описанным выше.

Эти вещества и композиции, обладающие противоопухолевой активностью, могут быть обработаны в целях получения солей, соединений или компонентов, чтобы сделать их водорастворимыми Кроме того, настоящее изобретение включает в себя фармацевтические препараты, отличающиеся тем, что они содержат в качестве по крайней мере одного из своих начал вещество или композицию, выбранные из группы веществ или композиций, которые обладают противоопухолевой активностью и которые могут быть получены описанным выше способом, или их комбинаций.

Фармацевтический препарат может быть выбран из группы, включающей в себя водный раствор для парентерального введения, капсулы для перорального введения, суппозитории для ректального введения, овули для введения во влагалище, а также мази, бальзамы, кремы и гели.

Водный раствор может быть изготовлен в ампулах. Каждая ампула содержит 0,1-2,5 г активного компонента, предпочтительно 0,1-1,5 г, а более предпочтительно 0,2-1,0 г активного компонента.

В случае фармацевтического препарата, изготовленного в виде капсул, каждая капсула содержит 0,2-2,0 г активного компонента, а предпочтительно 0,8-1,2 г активного компонента.

В случае фармацевтического препарата, изготовленного в виде суппозитория для ректального использования, каждый суппозиторий содержит 0,2- 2,5 г, а предпочтительно 0,3-1,0 г или 1,2-1,7 г активного компонента.

В случае, если фармацевтический препарат изготовлен в виде вагинальных овулей, то каждый из этих овулей содержит 0,1-2,5 г, предпочтительно 0,5-2,5 г, а более предпочтительно 0,3-1,7 г активного ингредиента.

В случае, если фармацевтический препарат изготовлен в виде мазей, бальзама, крема или геля, то данный наполнитель содержит 0,5-12%, а предпочтительно 3-7% активного ингредиента.

Кроме того, настоящее изобретение относится к использованию компонентов, которые могут быть получены с помощью описанного выше способа экстракции, выделения и сбора, либо отдельно, либо в комбинации в целях получения лекарственных средств для лечения различных заболеваний, но относящихся к злокачественным опухолям.

Таким образом, было приведено описание изобретения в общих чертах. Для более ясного понимания основных особенностей, преимуществ и методов осуществления изобретения ниже с помощью конкретных примеров приводится подробное его описание.

Пример 1. Способ экстракции и очистки активных компонентов.

1 кг нескольких плодов Pittosporum Tobira тонко измельчали и настаивали при комнатной температуре с некоторым количеством этилового спирта (95^o), достаточного для покрытия измельченных плодов (приблизительно 1:1, по объему). Полученную смесь оставляли для замачивания по крайней мере на 30 дней, а затем фильтровали. Полученного 100 мл спиртового экстракта вливали вместе с таким же объемом хлороформа в разделительную воронку. После размешивания в течение некоторого времени начало происходить разделение фаз, которое завершилось через 24 ч после начала размешивания; при этом в нижней части разделительной воронки отделялся раствор спирта-хлороформа интенсивной зеленой окраски, а в верхней части воронки - водный раствор желто-оранжевой окраски (оранжевая растворимая фракция ОРФ), образовавшийся при экстракции водорастворимых веществ из воды, изначально присутствовавшей в плодах. ОРФ присутствует приблизительно в количестве 20% (по объему) и образуется почти исключительно из компонентов, которые имеют РТ (время удерживания) при ЖХВР, равное 1,141 (площадь 3,45%); 1,440 (площадь 24,46%); 1,593 (площадь 61,93%). ОРФ-вещество, составляющее приблизительно 73% по массе сухого вещества от полного спиртового экстракта, образуется в виде желто-белого порошка, который не только не является полностью неактивным в отношении экспериментальных опухолей, но даже способствует их более быстрому развитию. Поэтому указанное вещество удаляли. Оставшийся хлороформ-спиртовой раствор выпаривали при 30^o в роторном испарителе и осушали. Полученное аморфное вещество темно-зеленого цвета, которое после ресолюбилизации в метаноле (1 мг/мл), анализировали с помощью ЖХВР, показало заметную концентрацию активных пиков со временами удерживания в интервале от 1,969 (площадь 7,83%) до 2,296 (площадь 40,12;) и до 2,756 (площадь 1,47%).

Пример 2. Способ очистки активных компонентов Хлороформ-спиртовой раствор, оставшийся после операций, проведенных в примере 1 (состоящий из полного спиртового экстракта минус ОРФ) выпаривали при 45^o в колбе, помещенной в роторный испаритель, до тех пор, пока не был получен концентрированный раствор объемом примерно 30 мл (приблизительно 1/35 от полного исходного спиртового экстракта). На этой стадии в колбу добавляли изопропиловый спирт в количестве равном 30% от полного исходного спиртового экстракта (300 мл). В результате этого получали суспензию в виде части веществ, содержащихся в полном спиртовом экстракте минус ОРФ, которая растворялась в этаноле и в метаноле, но уже не растворялась в изопропаноле.

Полученную таким образом суспензию фильтровали на быстро фильтровальной бумаге. Осадок, осажденный на бумаге, подвергали горячей сушке при температуре 45^oC. После осушки этот осадок тонко измельчали в фарфоровой ступке. Таким образом получали приблизительно 1500 мг желто-зеленоватого порошка. Этот порошок (который в дальнейшем будет обозначаться как CIDI), солюбилизированный в метаноле и проанализированный обычным ЖХВР-методом. показал RT (время удерживания) 1,157 (площадь 78,83%); 1,545 (площадь 16,25%) и 2,264 (площадь 4,91%).

Альтернативно с использованием LC-NH₂-5 мкм-сферической колонки Supelcosil подвижной фазы CH₂CN-H₂O (3:1) со скоростью потока 1,5 мл/м и УФ-детектора при 217 нм получали следующие значения PT: 1,889 (концентрация 53,88); 2,640 (20,89); 3,145 (4,61); 3,420 (5,08); 3,942 (6,16); 4,722 (4,53); 5,255 (3,253); 6,287 (0,90 и 6,982 (0,66).

На PP 18-10 мкм-нерегулярной колонке Chroropack-Lichrosorb (с теми же самыми элюентом, потоком и маркером) были получены следующие пики: 1,460 (концентрация 65,98; 1,965 (20,87); 2,535 (1,86); 2,704 (2,05); 3,097 (1,74); 3,395 (3,38); 4,324 (0,85); 4,609 (0,93); 9,957 (0,88); 10,017 (1,42).

Вещество CIDI дает остаток в 3,17% после кальцинирования. Элементный анализ (не принимая в расчет остаток) для минимальной эмпирической формулы, близкой к C₁₅H₂₅O₈, показал (мас. %): C 54,25; H 7,58; O 38,17; т.пл. (с разл. ) 196-222^oC. ИК-спектр (ИК-спектрофотометр Perkin - Elmer. Мод. 683) в KBr-среде (концентрация 1 мг/100 мг) показал следующие видимые линии: 3400 см^-1 OH-ассоциированное валентное (колебание); 2960 см^-1 валентное CH₃ асимметричное; 1720 см^-1 валентное C=O; 1610 см^-1 валентное C=O COO^- асимметричное; 1460 см^-1 деформационное CH₃; 1360 см ^-1 деформационное CH₃ (типичный OCOCH₃); 1250 см^-1 деформационное CH; 1150, 1080 и 1040 см ^-1 валентное C-O.

УФ-спектр (спектрофотометр УФ-виз. Perkin-Elmer мод. Лямбда 5): 1) Раствор в CH₃OH-H₂O (4:1), концентрация 6· 10^-2 мг/мг: - максимум абсорбции при 202 нм; затем абсорбция снижается вплоть до 260 нм, в диапазоне 260-330 нм она остается постоянной, а затем снова уменьшается;
2) Раствор в CH₃CN-H₂O (3:1), концентрация 6· 10^-2 мг/мл:
- абсорбция быстро снижается от 200 до 260 нм; остается почти постоянной в диапазоне 260 - 330 нм, а затем снова уменьшается.

Порошок CIDI является не растворимым в ацетоне, бензоле, хлороформе, этиловом эфире, петролейном эфире, этиловом спирте, изопропиловом спирте и является растворимым в метаноле и воде.

Водный раствор CIDI имеет pH 6,5.

ID₅₀ для мышей CrI:CD-I (1CR) BR составляет 1274,9 мг/кг (опорные пределы 1041,2-1561,0 мг/кг) при пероральном введении и 25 мг/кг (опорные пределы 23,0-27,2 мг/кг) при внутрибрюшном введении.

Пример 3. Еще один способ очистки активных компонентов.

10 г порошка CIDI, полученного в соответствии с описанием в примерах 1 и 2, солюбилизировали в 1000 мл раствора этилового спирта и воды (4:1), в результате чего получали 1%-ный раствор зеленого цвета. Для эксперимента использовали хроматографическую колонку диаметром 4,5 см, снабженную пористым сепаратором. На этот сепаратор помещали слой хлопчатобумажной ваты, а затем слой песка высотой примерно 3 см. После этого на него выливали суспензию, содержащую 35 г активированного угля в этаноле. После того, как активированный уголь был плотно упакован, через хроматографическую колонку пропускали раствор порошка CIDC (солюбилизированного, как описано выше). Затем после того, как весь CIDC-раствор был пропущен через хроматографическую колонку, эту колонку промывали, пропуская через нее 1000 мл лишь одного растворители (этиловый спирт-вода, 4:1).

В результате этого получали прозрачный бесцветный раствор, который затем концентрировали до его максимального предела в роторном испарителе при температуре 45^oC.

Затем остаток кристаллизовали путем добавления изопропилового спирта. После сушки в роторном испарителе и измельчения в ступке получали белый порошок, который затем был идентифицирован как чистый CIDI (60 мас.%).

Чистый порошок CIDI, солюбилизированный в метаноле и проанализированный с помощью ЖХВР, обнаружил два главных пика с PT равным 1,131 (площадь 87,54%) и 1,551 (площадь 6,16%).

Напротив, ЖХВР с УФ-детектором при 217 нм, подвижной фазой CH₃CN-H₂O (3: 1), скоростью потока 1,5 мл/м показала следующие RT (главные пики):
1) на LC-NH₂-5 мкм-сферической колонке Supercosil: 1,885 (конц. 19,60); 16,259 (конц. 67,51);
2) на PP18-10 мкм-иррегулярной колонке Chrompack-Lichrosork 1,617 (конц. 87,74); 1,985 (3,69) и 2,134 (2,20).

Чистый CIDC представляет собой белое водорастворимое твердое вещество, которое после кальцинирования имеет остаток 3,05%.

Элементный анализ (в мас.%, без учета остатка) дал следующие результаты: C 48,82; H 7,06; O 44 12 (для минимальной эмпирической формулы, близкой к C₆H₁₀O₄) и т.пл. (с разлож.) 205 - 255^oC.

ИК-спектр был практически идентичен вышеописанному спектру продукта CIDI.

УФ-спектр (спектрофотометр УФ-виз. Perkin-Elmer мод. Лямбда 5):
1) Раствор в CH₃OH-H₂O (4:1), концентрация 6· 10^-2 мг/мл:
- максимум абсорбции при 203 нм; затем абсорбция быстро снижается и свыше 260 нм абсорбции практически не наблюдалось;
2) Раствор в CH₃CN-H₂O (3:1), концентрация 6· 10^-2 мг/мл:
- абсорбция быстро снижается в диапазоне от 200 до 260 нм, а затем остается постоянный на уровне, близком к нулю.

Растворимость чистого CIDI является такой же, как и растворимость CIDI, pH водного раствора также имеет аналогичное значение.

LD₅₀ чистого CIDI при внутрибрюшинном введении мышам CrI:CD-I(ICR) BR составляет 20,2 мг/кг (опорные пределы 17,8-22,0 мг/кг).

ЯМР-спектры CIDI и чистого CIDI:
ЯМР-спектроскопию осуществляли на приборе Bruker AC200 при 200 МГц (протон) и 50 МГц (углерод). Образцы получали путем растворения 90 мг продукта в 0,6 мл ДМСО-d₆ с добавлением 10 мг натриевой соли 3-триметилсилил пропансульфоновой кислоты (DSS) в качестве внутреннего стандарта.

Для ¹H-спектра аккумулировали 1000 переходов с использованием импульса 30^o; FID подвергали гауссовой мультипликации для увеличения разрешения. Обмен мобильных протонов проводили путем добавления D₂O+CF₃COOH.

Для ¹³C-спектра аккумулировали 6200 переходов CIDI и 14900 переходов чистого CIDI с использованием импульса 90^o с этеронуклеарным расщеплением в CPD.

В результате оценки ¹H-спектров было установлено присутствие нескольких мобильных протонов в пределах 3-5 ppm. Наблюдалось присутствие ряда протонов алкильного типа, причем при более низких диапазонах наблюдается снижение алкиловых протонов. Возможно присутствует виниловый протон и отсутствуют ароматические протоны. Что касается присутствия большого количества более или менее замещенного алкильного углерода, то ¹³C-спектры подтверждают вышеуказанные данные. Отмечалось наличие некоторых пиков в винильном диапазоне и нескольких пиков в карбониловом диапазоне, причем карбонильные группы принадлежали к кислотному или сложноэфирному типу.

Оценка спектров не обнаружила различия между этими двумя смесями. Однако возможно имеется различие в процентном соотношении различных компонентов.

Пример 4. Способ хроматографического разделения активных компонентов.

Хлороформ-спиртовой раствор, полученный в соответствии с описанием в примере 1, осушали на роторном испарителе и ресолюбилизировали в небольшом количестве метанола (100 мл). Используя указанный раствор, осуществляли хроматографическое разделение как на колонке с силикагелем, так и (с особой тщательностью) на ЖХВР-препаративной колонке. Как было указано выше, полученные таким образом чистые фракции соответствовали пикам 1,157; 1.545; 1,883; 2,051; 2,273; 2,572 и 2,743.

Пример 5. Испытания для иллюстрации противоопухолевой активности in vitro и in vivo
Соединения и/или композиции, полученные в соответствии с описанием в вышеприведенных примерах и являющиеся либо растворимыми, либо солюбилизированными в воде с использованием поверхностно-активных веществ (Полисорбато 80 или Geronol), показали значительную противоопухолевую активность наряду с приемлемыми уровнями токсичности и отсутствием иммуносупрессорной активности. Заметная избирательная противоопухолевая активность в отношении опухолевых клеток была продемонстрирована на гистологическом уровне как in vitro, так и in vivo очевидными изменениями опухолевых клеток, которые выражаются в увеличении объема, конглютинации, выворачивании и разрушении клеточной мембраны, чрезмерной вакуолизации и опустошении цитоплазмы, при этом наблюдается гипохромия ядерного хроматина и чрезмерная бледность ядер. Высокая избирательность этих веществ подтверждается тем фактом, что все перечисленные выше поражения опухолевых клеток плотностью отсутствуют в нормальных клетках, подвергнутых аналогичной обработке.

In vivo - испытания противоопухолевой активности вышеуказанных веществ проводили на мышах (Swiss, Sa 180), используя дозу от 2 до 25 мг/кг (лет) активного вещества, которое вводили внутрибрюшинно в течение 8 дней непрерывно, начиная со следующего дня после трансплантации. По сравнению с контрольными животными, для которых средний коэффициент выживания составлял 25,8 дней, у 90% обработанных животных наблюдалось отторжение опухоли, и на этом основании эти особи рассматривались как явно выжившие.

Для терапевтического применения вещества настоящего изобретения, а также их соли, соединения или комплексы предпочтительно использовать в виде водных растворов для внутримышечных, внутривенных или внутриполостных инъекций.

Формула изобретения

1. Способ получения вещества, обладающего противоопухолевой активностью, включающий экстракцию растительного сырья спиртом, упаривание извлечения, очистку и сушку, отличающийся тем, что в качестве растительного сырья используют незрелые плоды растений семейства Pittosporacea, экстракцию спиртом проводят методом мацерации с получением спиртового экстракта, полученный спиртовой экстракт встряхивают с хлороформом с получением хлороформ-спиртовой и водной фаз и после упаривания хлороформ-спиртовой фазы очистку проводят добавлением к концентрированной хлороформ-спиртовой фазе изопропилового спирта с образованием изопропилспиртовой суспензии, фильтруют изопропилспиртовую суспензию с получением осадка, сушат и измельчают осадок, солюбилизируют его в смеси этиловый спирт вода 4 1 с образованием раствора, очищают раствор активированным углем с последующей элюцией целевого продукта смесью этиловый спирт вода 4 1 с получением прозрачного раствора, добавляют изопропиловый спирт к концентрированному раствору с получением изопропиловой суспензии, ее сушат и измельчают с получением порошка.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанным спиртом на стадии мацерации является этанол.

3. Способ по п.1, отличающийся тем, что объемное отношение указанного спирта и указанных плодов растений семейства Pittosporaceae составляет 1 10 10 1.

4. Способ по п. 1, отличающийся тем, что мацерацию проводят в течение времени экстрагирования от 5 мин до 3 месяцев.

5. Способ по п. 1, отличающийся тем, что мацерацию проводят при 5 - 100^oС.

6. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанный спирт на стадии мацерации является этанолом, и указанный этанольный экстракт встряхивают с хлороформом с получением хлороформ-спиртовой фазы зеленого цвета и водной фазы красно-бордового цвета, причем указанное противоопухолевое вещество находится в указанной водной фазе.

7. Способ по п.6, отличающийся тем, что указанную водную фазу концентрируют упариванием в колбе на роторном испарителе, а указанную остаточную часть указанного осадка упаривают досуха с получением светло-розового порошка, тогда как прозрачную надосадочную часть упаривают с получением аморфного красного вещества.

8. Способ по п.7, отличающийся тем, что указанный светло-розовый порошок и указанное аморфное красное вещество кристаллизуют в виде красного порошка после суспендирования в метиловом спирте и изопропиловом спирте.

9. Способ по п.6, отличающийся тем, что указанную водную фазу концентрируют в колбе для упаривания и указанную остаточную часть указанного обильного хлопьевидного осадка, суспендированного в изопропиловом спирте, сушат с образованием светло-розового порошка.

10. Противоопухолевое вещество, полученное экстракцией растительного сырья спиртом, упариванием экстракта и очисткой, отличающееся тем, что оно представляет собой вещество, полученное из плодов семейства Pittosporaceae очисткой спиртового экстракта хлороформом, упариванием хлороформспиртовой фазы, обработкой ее изопропиловым спиртом, очистки активированным углем и перекристаллизации из изопропилового спирта и представляющее собой водорастворимое вещество эмпирической формулы C₆H₁₀O₄, с температурой плавления 205 255^o и имеющее времена удерживания, соответствующие величинам (мин) 1,131 и 1,551 при проведении анализа с использованием хроматографа Перкин-Элмер 250 с колонной 125 · 4 мм с подвижной фазой, состоящей из метанола, при определении при длине волны 217 нм.

11. Вещество по п.10, отличающееся тем, что его выбирают из группы, состоящей из соли, соединения, комплекса и их комбинации.

12. Фармацевтическая композиция, содержащая противоопухолевое вещество и фармацевтически приемлемый носитель или наполнитель, отличающаяся тем, что противоопухолевым веществом является вещество, полученное способом по п.1.

13. Композиция по п.12, отличающаяся тем, что она представлена в форме водного раствора для парентерального введения.

14. Композиция по п.12, отличающаяся тем, что она представлена в форме капсул для перорального введения.

15. Композиция по п.12, отличающаяся тем, что она представлена в форме суппозиториев для ректального введения.

16. Композиция по п.12, отличающаяся тем, что она представлена в форме овулей для вагинального введения.

17. Композиция по п.12, отличающаяся тем, что она представлена в форме мази, бальзама, крема или геля.

18. Композиция по п.13, отличающаяся тем, что она изготовлена в ампулах, причем каждая ампула содержит 0,5 2,5 г указанного противоопухолевого вещества.

19. Композиция по п.18, отличающаяся тем, что каждая ампула содержит 1,2 1,7 г указанного противоопухолевого вещества.

20. Композиция по п.14, отличающаяся тем, что она получена в форме капсул, и каждая капсула содержит 0,1 2,0 г указанного противоопухолевого вещества.

21. Композиция по п.20, отличающаяся тем, что каждая капсула содержит 0,8 1,2 г указанного противоопухолевого вещества.

22. Композиция по п.15, отличающаяся тем, что она получена в форме суппозиториев для ректального введения, и каждый суппозиторий содержит 0,2 - 2,5 г указанного противоопухолевого вещества.

23. Композиция по п.22, отличающаяся тем, что каждый суппозиторий содержит 0,3 1,0 г указанного противоопухолевого вещества.

24. Композиция по п.16, отличающаяся тем, что она получена в форме вагинальных овулей для введения во влагалище, каждый из которых содержит 0,1 - 2,5 г указанного противоопухолевого вещества.

25. Композиция по п.24, отличающаяся тем, что каждый овуль содержит 0,5
2,5 г указанного противоопухолевого вещества.

26. Композиция по п.17, отличающаяся тем, что она получена в форме мази, бальзама, крема или геля с наполнителем для наружного применения, каждый из которых содержит 0,5 12% указанного противоопухолевого вещества.

27. Композиция по п.26, отличающаяся тем, что указанный наполнитель для наружного применения содержит 3 7% указанного противоопухолевого вещества.