Способ определения фагоцитарной активности периферической крови

 

Способ может быть использован в области медицины, в частности в иммунологии. Способ не требует дорогостоящей аппаратуры, дефицитных химреактивов, доступен в практике, особенно при массовых обследованиях детей. Осуществляют забор крови, в которую добавляют индикаторные частицы, проводят инкубацию и затем учет результатов, при этом реакцию фагоцитоза проводят в цельной крови (капле), а в качестве индикаторных частиц использую частицы латекса.

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использовано при проведении комплексного иммунологического исследования в качестве скрининга.

Оценка иммунного статуса человека необходима клиницисту для диагностирования и прогнозирования течения самых разнообразных заболеваний человека.

В настоящее время в клинической иммунологии имеются сотни различных методов и их модификаций для определения клеточных и гуморальных компонентов иммунной системы, однако уже достаточно длительное время в практике здравоохранения нашей страны используется лишь их небольшое число. Но выполнение даже широко известных тестов не используется в качестве скрининга за счет того, что кровь для их выполнения необходимо заготовить из вены, требуется определенная квалификация врача и очень часто дополнительное оборудование. Кроме того, оценка иммунного статуса на основании этих тестов дается гуморальным фактором защиты и долгоживущим ИКК.

Тест фагоцитоза широко используется для оценки функциональной активности нейтрофилов периферической крови. В качестве объектов фагоцитоза используют живые или убитые клетки микроорганизмов (микробов, дрожжевые клетки), ядросодержащие эритроциты птиц, формалинизированные эритроциты животных, различные твердые частицы полистирола, латекса, угля, крахмала и др.

Известен способ прижизненного определения количества фагоцитирующих клеток методом цитофлюорометрии крови, взятой из пальца с использованием частиц латекса. Недостатком известного способа является обязательное наличие флюоресцентного микроскопа, получение только общего количества фагоцитирующих клеток, без определения их функциональной активности, длительность постановки реакции (в течение 1 ч), в течение которой происходит фиксация сгустка на предметном стекле. В результате этого не представляется возможным получить монослой фагоцитирующих клеток. Этот способ взят нами за прототип ("Оценка клеточного иммунитета в клинической практике. Методические рекомендации. Барнаул, 1983).

Цель изобретения повышение точности постановки реакции фагоцитоза для более широкого применения в практике.

Цель достигается за счет сокращения времени оседания нейтрофилов на предметном стекле и времени контакта их с частицами латекса с момента взятия капиллярной крови, что обеспечивает максимальную жизнеспособность клетки нейтрофила.

Способ осуществляется следующим образом.

На тщательно обезжиренное предметное стекло наносят 1 каплю капиллярной крови, тут же добавляют 0,01 взвеси частиц латекса и перемешивают стеклянной палочкой до диаметра не более 2 см. Затем помещают во влажную камеру на 30 мин при 37^oC, затем удаляют сгусток скользящим движением сверху вниз, промывают фиксированные клетки 2 3 каплями забуференного физиологического раствора, сушат на воздухе, фиксируют 96^o этанолом, красят по Романовскому-Гимза. Подсчет количества нейтрофилов с частицами латекса производят на 100 клеток с объективом x90, в иммерсии, учитывают количество частиц латекса в каждом нейтрофиле, для определения среднего количества частиц на один фагоцит.

При такой последовательности установлено, что за счет сокращения времени оседания нейтрофилов на предметное стекло и времени контакта их с частицами латекса с момента взятия крови из пальца возможно максимально использовать жизнеспособность ИКК до ее фиксации на стекле, до введения реактивов и красителей, т. е. фагоцитоз совершается в условиях максимально приближенных к условиям ин виво.

Получение данных фагоцитарной активности нейтрофилов из капиллярной крови соответствует данным получения из венозной крови. Это особенно важно отметить, так как это позволяет использовать этот способ в детской практике как скрининг при массовых обследованиях. Способ также не требует дорогостоящей аппаратуры, дефицитных химреактивов, сокращает и упрощает время определения и расширяет полученную информацию.

Формула изобретения

Способ определения фагоцитарной активности периферической крови, включающий забор крови, добавление индикаторных частиц, инкубацию и учет результатов, отличающийся тем, что реакцию фагоцитоза проводят в цельной капле крови и в качестве индикаторных частиц используются частицы латекса.