Питательная среда для выделения псевдотуберкулезного микроба

 

Изобретение относится к медицинской микробиологии и биотехнологии и может быть использовано для выделения псевдотуберкулезного микроба из инфицированного материала. Питательная среда содержит питательную основу гидролизаты казеина и кормовых дрожжей, агар, натрий фосфорнокислый двузамещенный, калий фосфорнокислый однозамещенный, марганец сернокислый, натрий лимоннокислый, глюкозу, мочевину, желчь, бромтимоловый синий и дистиллированную воду. Питательная среда позволяет получить рост эпидемически значимых рYV⁺ штаммов псевдотуберкулезного микробоа с различным плазмидным спектром в виде колоний диаметром до 1,5 мм через 24 ч инкубации при температуре 28 и 37^oC, обеспечивает рост 5 - 6 колоний при посеве 10 микробных клеток. Использование среды обеспечивает повышение чувствительности и скорости роста культур. 2 табл.

Изобретение относится к медицинской микробиологии и биотехнологии и может быть использовано для выделения псевдотуберкулезного микроба из инфицированного материала.

Совершенствование лабораторной диагностики псевдотуберкулеза связано с применением различных дифференциально-диагностических питательных сред для выделения псевдотуберкулезного микроба. Но сроки роста возбудителя на применяемых средах достаточно длительны, и поэтому существует необходимость в разработке чувствительных питательных сред, на которых наблюдается отчетливо различимый рост возбудителей псевдотуберкулеза с различным плазмидным спектром через 24-26 ч.

Известна питательная среда для выделения возбудителей кишечного иерсиниоза и псевдотуберкулеза, содержащая панкреатический гидролизат рыбной муки, желчь, глюкозу, мочевину, натрий хлористый, натрий углекислый, бромтимоловый синий, агар (патент N 2101342 РФ).

Недостаток известной среды заключается в том, что через 24 ч инкубации при температуре 28^oC на среде отмечается рост псевдотуберкулезного микроба в виде колоний диаметром менее 0,5 мм. Рост колоний диаметром 1,5-2 мм наблюдается только через 48 ч. Кроме того, при 37^oC среда обеспечивает рост не всех эпидемически значимых клонов возбудителя псевдотуберкулеза.

Целью изобретения является повышение чувствительности среды и скорости роста бактерий, культивируемых на ней.

Эта цель достигается тем, что питательная среда для выделения псевдотуберкулезного микроба содержит питательную основу (гидролизаты казеина и кормовых дрожжей), агар, минеральные соли (натрий фосфорнокислый, калий фосфорнокислый, марганец сернокислый), натрий лимоннокислый, глюкозу, мочевину, желчь, бромтимоловый синий и дистиллированную воду при следующем количественном соотношении компонентов, г: Гидролизат казеина (порошок) - 11,0 - 13,0 Гидролизат кормовых дрожжей (порошок) - 1,1 - 1,3 Натрий фосфорнокислый двузамещенный - 7,8 - 8,2 Калий фосфорнокислый однозамещенный - 1,9 - 2,1 Натрий лимоннокислый - 1,9 - 2,1 Марганец сернокислый - 0,018 - 0,022 Глюкоза - 4,8 - 5,2 Мочевина - 2,4 - 2,6 Желчь (порошок) - 4,8 - 5,2
Бромтимоловый синий - 0,126 - 0,130
Агар - 11,0 - 13,0
Вода дистиллированная - До 1 л
Сопоставительный анализ с прототипом показал, что предлагаемая питательная среда отличается от известной тем, что она содержит гидролизаты казеина и кормовых дрожжей, натрий фосфорнокислый двузамещенный, калий фосфорнокислый однозамещенный, натрий лимоннокислый, марганец сернокислый в предлагаемых количественных соотношениях компонентов. Таким образом, данная питательная среда соответствует критерию изобретения "новизна".

Проведенный анализ патентной и научно-технической литературы показал, что предлагаемое техническое решение отличается не только от прототипа, но и других технических решений в данной и смежных отраслях. Так, авторами не найдена питательная среда для выделения псевдотуберкулезного микроба, которая содержала бы предлагаемые ингредиенты в предлагаемом количественном соотношении компонентов. А именно, данный состав среды позволяет повысить ее чувствительность в отношении штаммов псевдотуберкулезного микроба с различным плазмидным спектром и добиться его роста в виде колоний диаметром до 1,5 мм через 24 ч инкубации при температуре 28 и 37^oC.

Данная среда может быть использована в медицинской микробиологии.

Питательную среду готовят смешиванием сухих компонентов в следующем количественном соотношении, г:
Гидролизат казеина (порошок) - 11,0 - 13,0
Гидролизат кормовых дрожжей (порошок) - 1,1 - 1,3
Натрий фосфорнокислый двузамещенный - 7,8 - 8,2
Калий фосфорнокислый однозамещенный - 1,9 - 2,1
Натрий лимоннокислый - 1,9 - 2,1
Марганец сернокислый - 0,018 - 0,022
Глюкоза - 4,8 - 5,2
Мочевина - 2,4 - 2,6
Желчь (порошок) - 4,8 - 5,2
Бромтимоловый синий - 0,126 - 0,130
Агар - 11,0 - 13,0
Вода дистиллированная - До 1 литра
Полученную навеску среды размешивают в 1 л дистиллированной воды, доводят до кипения при перемешивании, кипятят в течение 5-7 мин до полного расплавления агара, охлаждают до температуры 45-50^oC, тщательно взбалтывают и разливают в стерильные чашки Петри.

Засеянные чашки инкубируют при температуре 28 или 37^oC в течение 24 ч.

Пример 1. Питательную среду готовят, как описано выше, при этом используют следующий количественный состав, г:
Гидролизат казеина (порошок) - 11,0
Гидролизат кормовых дрожжей (порошок) - 1,1
Натрий фосфорнокислый двузамещенный - 7,8
Калий фосфорнокислый однозамещенный - 1,9
Натрий лимоннокислый - 1,9
Марганец сернокислый - 0,018
Глюкоза - 4,8
Мочевина - 2,4
Желчь (порошок) - 4,8
Бромтимоловый синий - 0,126
Агар - 11,0
Вода дистиллированная - До 1 литра
Засеянные чашки инкубируют при температуре 28 или 37^oC в течение 24 ч.

Пример 2. Питательную среду готовят, как описано выше, при этом используют следующий количественный состав, г:
Гидролизат казеина (порошок) - 13,0
Гидролизат кормовых дрожжей (порошок) - 1,3
Натрий фосфорнокислый двузамещенный - 8,2
Калий фосфорнокислый однозамещенный - 2,1
Натрий лимоннокислый - 2,1
Марганец сернокислый - 0,022
Глюкоза - 5,2
Мочевина - 2,6
Желчь (порошок) - 5,2
Бромтимоловый синий - 0,130
Агар - 13,0
Вода дистиллированная - До 1 литра
Засеянные чашки инкубируют при температуре 28 или 37^oC в течение 24 ч.

Чувствительность предлагаемой среды и скорость роста возбудителя псевдотуберкулеза оценивали путем посева 10 и 100 микробных клеток суточной агаровой культуры штаммов псевдотуберкулезного микроба с различным плазмидным спектром через 24-48 ч инкубации при температуре 28 и 37^oC.

Результаты роста псевдотуберкулезного микроба на предлагаемой среде приведены в табл. 1 и 2. Среда значительно ускоряет рост возбудителя псевдотуберкулеза: через 24 ч наблюдается рост колоний диаметром до 1,5 мм; на среде-прототипе в эти же сроки размер колоний менее 0,5 мм.

Предлагаемая среда обладает высокой чувствительностью, обеспечивающей рост 5-6 колоний при посеве 10 микробных клеток через 24 ч инкубации.

Среда обеспечивает рост эпидемически значимых pYV⁺ штаммов псевдотуберкулезного микроба при 37^oC через 24 ч инкубации, тогда как на среде-прототипе при этой температуре даже через 48 ч инкубации рост полностью отсутствует.

Формула изобретения

Питательная среда для выделения псевдотуберкулезного микроба, содержащая питательную основу, агар, минеральные соли, глюкозу, мочевину, желчь, бромтимоловый синий и дистиллированную воду, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит натрий лимоннокислый, из питательных основ среда содержит гидролизаты казеина и кормовых дрожжей, а из минеральных солей - натрий фосфорнокислый двузамещенный, калий фосфорнокислый однозамещенный и марганец сернокислый при следующем соотношении компонентов, г/л:
Гидролизат казеина (порошок) - 11,0-13,0
Гидролизат кормовых дрожжей (порошок) - 1,1-1,3
Натрий фосфорнокислый двузамещенный - 7,8-8,2
Калий фосфорнокислый однозамещенный - 1,9-2,1
Натрий лимоннокислый - 1,9-2,1
Марганец сернокислый - 0,018-0,022
Глюкоза - 4,8-5,2
Мочевина - 2,4-2,6
Желчь (порошок) - 4,8-5,2
Бромтимоловый синий - 0,126-0,130
Агар - 11,0-13,0
Вода дистиллированная - До 1 л

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2