Способ количественного определения иммуноглобулинов класса м

 

Изобретение относится к области медицины, в частности к иммунологии. Проводят реакцию агглютинации латекса с инактивированной сывороткой крови с использованием в качестве диагностического препарата латексных микросфер с функциональными альдегидными группами, сенсибилизированных антителами против IgM, в качестве контрольного препарата - латексных микросфер с блокированными глицином функциональными группами, в качестве жидкости для разведения - 1%-ного раствора бычьего альбумина в фосфатном буфере (рН 7,4-7,6) и титрование исследуемой пробы. Способ обеспечивает количественное определение IgM в сыворотке крови в течение 3-4 ч за счет упрощения методики исследования.

Изобретение относится к иммунологии, касается способа определения макроглобулина (JgM) в сыворотке крови и может быть использовано для оценки гуморального статуса, в частности при выявлении внутриутробных инфекций у новорожденных, при диагностике и лечении инфекционных заболеваний, ревматоидного и аллергического артрита, опухолей лимфоидной системы, миелосклероза и других.

Известен способ определения IgM в реакции радиоиммунодиффузии в геле (метод Манчини) (1).

Однако известный способ сложен в осуществлении и отличается длительностью получения результатов из-за многоэтапности.

Наиболее близким по технической сущности к предлагаемому является способ определения IgM в реакции агглютинации с использованием антител к IgM, сорбированных на поверхности полистироловых микропланшет (2). Однако при многоэтапности способа он позволяет выявлять только специфические IgM, что ограничивает возможности его использования для определения гуморального статуса.

Цель изобретения - упрощение способа при расширении возможностей его применения в клинической практике.

Поставленная цель достигается постановкой реакции агглютинации латекса с использованием в качестве лиганда диагностического латексного препарата антител против IgM, в качестве контрольного латексного препарата латекса с блокированными глицином функциональными группами, в качестве жидкости для разведения - 1%-ного раствора бычьего альбумина в фосфатном буфере (рН 7,4-7,6) с титрованием исследуемой пробы.

Способ осуществляется следующим образом.

Исследуемую сыворотку крови инактивируют прогреванием при 56-58^oС в течение 30 мин и используют для постановки реакции агглютинации латекса (РАЛ) в планшетах для иммунологических реакций с V-образным дном. Для разведения диагностикума и исследуемой сыворотки используют 1%-ный раствор бычьего альбумина (BSA) в 0,01 М фосфатном буфере (рН 7,4-7,6). Исследуемую сыворотку разводят двукратно в объеме 25 мкл. К каждому разведению сыворотки добавляют равное количество диагностического латексного препарата - латексные микросферы с функциональными альдегидными группами, сенсибилизированные антителами против IgM. Параллельно проводят постановку РАЛ с контрольным латексным препаратом - латексные микросферы с блокированными глицином функциональными группами. Реакцию считывают через 3-4 ч. Количественное содержание IgM определяют титрованием исследуемой пробы.

Сущность изобретения заключается в агглютинации латексных микросфер с функциональными альдегидными группами, сенсибилизированных антителами против IgM, в присутствии IgM сыворотки крови с использованием в качестве контрольного латексного препарата - латексных микросфер с блокированными глицином функциональными группами и жидкости для разведения -1%-ного раствора BSA в фосфатном буфере (рН 7,4-7,6) и титровании исследуемой пробы.

На основании проведенных исследований по источникам патентной и научно-технической литературы можно сделать вывод, что совокупность существенных признаков является новой и позволяет получать результаты о количественном содержании IgM в сыворотке крови в течение 3-4 ч, что обеспечивает определение значительных отклонений в содержании IgM в сыворотке крови при оценке гуморального статуса.

Технический результат заключается в том, что при простоте осуществления сокращается время получения результатов о количественном содержании макроглобулина в сыворотке крови, а это расширяет возможности его применения в клинической практике по сравнению с прототипом, обеспечивающим определение специфического IgM.

Осуществимость способа поясняется примерами.

Пример 1. Инактивированную сыворотку донора с содержанием IgM 1,5 мг/л (определение по методу Манчини) раститровывают, используя двукратный шаг в рабочем растворе (1%-ный раствор BSA в 0,01 М фосфатном бефере с рН 7,4-7,6 в 96-луночном планшете для иммунологических реакций от 1:200 до 1:12800 в объеме 25 мкл. К каждому разведению добавляют по 25 мкл специфического диагностического латекса (0,2%-ная суспензия в рабочем растворе). Параллельно исследуемую сыворотку испытывают в РАЛ с контрольным латексом. Результат оценивают через 3 ч после постановки РАЛ. Агглютинация диагностического латекса наблюдается до разведения 1: 1600 включительно. Агглютинации контрольного латекса не наблюдается.

Пример 2. Инактивированную сыворотку крови больного СКВ с содержанием IgM по Манчини 3,5 мг/мл раститровывают в объеме 25 мкл вышеописанным способом (см. пример 1) от 1:200 до 1:102400. В результате реакции агглютинация диагностического латекса наблюдается до титра 1:25600. С контрольным латексом результат во всех разведениях сыворотки был отрицательным.

Пример 3. Инактивированную сыворотку крови из пупочной вены новорожденного с отсутствием IgM (данные Манчини) раститровывают в объеме 25 мкл вышеописанным способом (см. пример 1) от 1:20 до 1:200. В результате реакции агглютинация диагностического латекса наблюдается до титра 1:40. РАЛ с контрольным препаратом отрицательная.

Приведенные примеры подтверждают осуществимость и эффективность способа, что позволяет использовать его в клинической практике не только при диагностике, но и для оценки эффективности лечебных мероприятий и прогноза лечения по колебаниям количественного содержания IgM.

Источники информации, принятые во внимание: 1. Иммунологические методы. Под ред. Х. Фримеля - М.: Мир, 1979. -518с.

2. Remington I, Eimstad N, Aranjo F., Detection of immunoglobulin M antibodies with antigen-tagged latex particles in a immunosorbent assay || J.Clin. Microbiolog., - 1983-V. 17.-N. 5. - P. 930-941.

Формула изобретения

Способ количественного определения иммуноглобулинов класса М (IgM), включающий постановку реакции агглютинации латекса (РАЛ) с инактивированной сывороткой крови, отличающийся тем, что используют в качестве диагностического латексного препарата латексные микросферы с функциональными альдегидными группами, сенсибилизированные антителами против IgM, в качестве контрольного латексного препарата - латексные микросферы с функциональными группами, блокированными глицином, в качестве жидкости для разведения 1%-ный раствор бычьего альбумина в фосфатном буфере (рН 7,4-7,6), причем для количественного определения содержания IgM проводят титрование исследуемой пробы.