Гипериммунная сыворотка для лечения и профилактики некробактериоза животных

 

Изобретение относится к ветеринарной биотехнологии и микробиологии. Сыворотка содержит антитела к Fusobacterium necrophorum в титре не ниже 1:128 в реакции агглютинации (в РА). Она получена гипериммуннизацией волов-продуцентов инактивированным формалином лейкоцидин-экзотоксином. Лейкоцидин-экзотоксин представляет собой высокоочищенный белок с молекулярной массой 18-20 кД и выделен из производственного штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ. Гипериммунная сыворотка обеспечивает создание напряженного пассивного иммунитета против некробактериоза у крупного рогатого скота и северных оленей при однократном введении продолжительностью не менее 14 сут. Эффективность лечения составляет 90%. 2 табл.

Изобретение относится к ветеринарной биотехнологии и микробиологии, в частности к получению сыворотки для профилактики и лечения некробактериоза животных.

Некробактериоз широко распространен во всех странах мира и характеризируется гнойно-некротическим распадом кожи, слизистых оболочек, паренхиматозных органов и конечностей. В процессе переболевания некробактериозом животные теряют 30-40% живой массы тела и до одной тонны молока. Особенно большой экономический ущерб наносит некробактериоз северному оленеводству, где в год заболевает до 50-70 тыс. оленей, при этом погибает, как правило, 30-35% животных.

Известен препарат для лечения некробактериоза, содержащий сульфадиметоксин, хинозол, фурацилин, диметилсульфоксид, ацетон, глицерин, твин 40 или 80 и спирт этиловый (патент RU 1524224, опубл. 27.08.1995, А 61 К 31/00). Однако известный препарат не дает полного лечебного эффекта, имеет узкий спектр действия и сравнительно длительные сроки лечения.

Известен также препарат для профилактики некробактериоза сельскохозяйственных животных, содержащий антибиотик окситетрациклин, активированный иммуностимулятором (патент RU 2112546, опубл. 10.06.98). Однако этот препарат не всегда надежно защищает животных от заболевания.

Наиболее близким аналогом является гипериммунная сыворотка против некробактериоза, полученная из крови или молозива при гипериммунизации коров или волов антигенами из возбудителя некробактериоза. При лечении сыворотку вводят внутримышечно двукратно с интервалом 10-12 дней. Эффективность применения известной сыворотки составляет около 70% (Ю.Д.Караваев и др. Эффективность новых методов и средств специфической профилактики и лечения хламидиоза и некробактериоза животных. //Международный аграрный журнал, 4, 1998, с.49).

Однако известная сыворотка недостаточна эффективна и требует двукратного введения.

Задачей изобретения является разработка высокоэффективной гипериммунной сыворотки против некробактериоза животных.

Технический результат изобретения заключается в получении эффективной гипериммунной сыворотки, обеспечивающей создание напряженного пассивного иммунитета против некробактериоза у крупного рогатого скота и северных оленей при однократном введении продолжительностью не менее 14 суток.

Сущность изобретения: гипериммунная сыворотка против некробактериоза сельскохозяйственных животных содержит антитела к Fusobacterium necrophorum в титре не ниже 1:128 в реакции агглютинации (в РА) и получена гипериммуннизацией волов-продуцентов инактивированным формалином лейкоцидин-экзотоксином, представляющим собой высокоочищенный белок с молекулярной массой 18-20 кД и выделенный из производственного штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ.

Гипериммунная сыворотка представляет собой прозрачную жидкость светло- или темно-соломенного цвета, иногда с красноватым оттенком. Она пригодна для применения в течение 4 лет от даты изготовления.

Гипериммунную сыворотку вводят крупному рогатому скоту и оленям независимо от возраста в дозах, представленных в табл.А.

Сыворотку вводят с соблюдением асептики и антисептики внутримышечно в области крупа или нижней трети шеи перед лопаткой. Место инъекции обрабатывают 70^o спиртом. При применении сыворотки с лечебной целью одновременно с внутримышечным введением делают расчистку копыт, накладывают ватно-марлевый тампон, смоченный сывороткой, и фиксируют его повязкой. При необходимости курс лечения повторяют через 6-8 суток, по истечении 10-14 суток после последнего введения сыворотки животных вакцинируют против некробактериоза.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. Сыворотку получают путем гипериммунизации животных инактивированным формалином лейкоцидин-экзотоксином возбудителя некробактериоза.

Для получения некробактериозного антигена-экзотоксина-лейкоцидина берут производственный штамм Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ, культивируют, отделяют бакмассу от культуральной жидкости центрифугированием, из культуральной жидкости выделяют экзотоксин ультрафильтрацией на полых волокнах с размером пор 1,3-1,7 КД и концентрируют до содержания белка (по Лоури) 5,5-6,0 мг/мл. Одну часть полученного инактивированного формалином лейкоцидин-экзотоксина соединяют с любым известным масляным адъювантом, например маслом "Маркол" и эмульгатором 139.

Далее осуществляют гипериммуннизацию волов-продуцентов. Первое и второе введение с интервалом 4-6 недель проводят инактивированным формалином лейкоцидин-эндотоксином с масляным адъювантом внутрикожно, затем без адъюванта подкожно, через 7 дней - внутримышечно, далее через 7 дней - в правый предлопаточный и левый паховый лимфоузлы и через 7 дней - в левый предлопаточный и правый паховый лимфоузлы. После последнего введения через 7 дней у волов продуцентов берут кровь и получают сыворотку методом отстоя. После получения сыворотки проводят предварительную каскадную фильтрацию на фильтре "Миллипор", используя фильтрующие пластины фирмы "БиоРаП", а затем стерилизующую фильтрацию на фильтре "Миллипор", снабженным мембраной 0,22 фирмы "БиоРаП и предфильтровальной пластиной АР-25, в стерильном боксе под давлением 0,5 атм.

После этого проводят контроль бактериологический, физико-химический и активности сыворотки. Сыворотка содержит антитела к F.necrophorum в титре не ниже 1: 128 (в PA). За период наблюдения в течение 10 дней все животные оставались здоровыми. На месте введения изменений нет. Данные приведены в табл. 1.

Пример 2. Полученную по примеру 1 сыворотку применяют для клинического испытания в хозяйстве.

В опыт берут 46 коров и 2 быка-производителя с различной стадией заболевания. Больных животных делят на две группы, в зависимости от стадии болезни. Первая группа (30 коров) - первая стадия болезни, которая характеризовалась покраснением и отеком области межкопытной щели, венчика и сгибательной поверхности пута, серозным выделением у отдельных животных, которое высыхало, образуя на коже корку. Температура тела повышалась до 40^o и выше. Животные были угнетены, у них прекращалась жвачка, резко снижались удои.

Вторая группа (16 коров и 2 быка) - вторая стадия болезни, при которой патологический процесс увеличен, очаг с мягких тканей переходил на надкостницу, иногда возникал оссифицирующий периостит и остеоартрит копытного сустава. У животных установлена выраженная хромота, пораженная конечность горяча на ощупь и резко болезненна, в местах поражения возникала характерная язва с изрытыми краями.

Перед применением сыворотки производят расчистку и обрезку копыт, туалет раневой поверхности, удаляют омертвевшие ткани. Всем животным на раневую поверхность накладывают ватно-марлевый тампон, пропитанный сывороткой и фиксируют его поддерживающей повязкой. Одновременно с наложением повязки каждому животному в круп вводят по 150 мл гипериммунной сыворотки.

За подопытными животными установлено клиническое наблюдение с двукратным измерением температуры. Через 4-6 суток повязки с конечностей снимают и проводят осмотр раневой поверхности.

У животных первой группы была обнаружена грануляционная ткань, заполняющая всю раневую поверхность. У животных второй группы раны очистились от клеточного дейтрита, на отдельных участках появились очаги грануляционной ткани. Животные первой группы в течение 5-6 последующих дней подвергают симптоматическому лечению. Животным второй группы снова накладывают ватно-марлевые повязки, пропитанные гипериммунной сывороткой против некробактериоза. В результате лечебных мероприятий были излечены 43 животных из 48. Эффективность лечения составляет 90%.

Таким образом, гипериммунная сыворотка против некробактериоза является эффективным препаратом и может быть использована как специфическое лечебное средство с терапевтической и профилактической целью в неблагополучных по некробактериозу животноводческих и оленеводческих хозяйствах. Сыворотка может применяться сочетано с вакцинацией животных, особенно в начальной стадии болезни.

Формула изобретения

Гипериммунная сыворотка против некробактериоза сельскохозяйственных животных, отличающаяся тем, что содержит антитела к Fusobacterium necrophorum в титре не ниже 1: 128 (в РА) и получена гипериммуннизацией волов-продуцентов инактивированным формалином лейкоцидин-экзотоксином, представляющим собой высокоочищенный белок с молекулярной массой 18-20 кД и выделенный из производственного штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2

NF4A Восстановление действия патента Российской Федерации на изобретение

Извещение опубликовано: 10.01.2007        БИ: 01/2007