Применение белков в качестве антиретровирусных агентов

 

Изобретение относится к медицине и касается применения белков в качестве антиретровирусных средств. Изобретение представляет собой средство для лечения инфекций, вызванных ВИЧ, представляющее собой белок, имеющий аминокислотную последовательность, приведенную ниже. Изобретение позволяет повысить эффективность лечения. 2 с. и 1 з.п. ф-лы.

Изобретение относится к применению белка с молекулярным весом около 14 килодальтон, выделенного из органов животных, для получения лекарств с антиретровирусной активностью, в частности против ВИЧ-вируса иммунодефицита человека.

Известны терапевтические проблемы, связанные с ВИЧ-ретровирусной инфекцией. В частности, растущее распространение инфекции и серьезность вызванного вирусом заболевания, известного как синдром приобретенного иммунодефицита человека или СПИД, стимулируют большие исследовательские усилия, которые дают многообещающие результаты по контролю и терапии этой инфекции. Например, ингибиторы протеазы недавно пополнились такими ингибиторами обратной транскриптазы, как азидотимидин. Более того, исследователи продолжают развитие профилактических или терапевтических вакцин, хотя до сих пор их усилия затруднены удивительной способностью ВИЧ избегать воздействия иммунной системы благодаря своим непрерывным мутациям.

С другой стороны, основная проблема фармакологической терапии состоит в основном в резистентности к используемым лекарствам.

Недавно обнаружено, что белки, экстрагированные хлорной кислотой из органов млекопитающих и описанные в WO 92/10197, способны ингибировать in vitro репликацию вируса, индуцировать иммунный и цитотоксический ответ на лимфоциты, инфицированные вирусом, у пациентов, зараженных СПИДом. Белок, обладающий следующей аминокислотной последовательностью 1, приведенной в конце описания, показал себя особенно активным.

Указанный белок, именуемый в дальнейшем р14 и имеющий молекулярный вес около 14 килодальтон, может быть получен экстракцией хлорной кислотой из печени млекопитающих и дальнейшей очисткой с помощью диализа, ВЭЖХ и гидрофобной обменной хроматографии в соответствии с описанием в WO 96/02567.

Изобретение также относится к применению белков, имеющих гомологию по меньшей мере на 80% (предпочтительней 90%), с представленной выше белковой последовательностью. Белки с аминокислотными последовательностями, подобными представленной выше, выделенные из козьей печени, были описаны рядом авторов (например, Levy-Favatier et al., в Eur. J. Biochem. 1903, 212(3), 665-73), происходят из последовательности комплиментарной ДНК, полученной из различных видов животных, в частности, из печени крысы.

АнтиВИЧ активность, индуцированная белком р14, показана путем применения сывороток, полученных из животных или людей, предварительно иммунизированных р14. С этой целью белок вводили подкожно в дозах 1-2 мг каждые семь дней в течение 4-6 недель, до достижения значимого анти-р14 титра антител. Полученные в результате сыворотки инкубировали с клетками линии Е (производными от линии человеческих Т-лимфоцитов НuТ78, хронически инфицированных BИЧ-1SF2) или на нормальных, не инфицированных клетках НuТ78.

Указанные клетки смешивали в отношении 1:1000 (1 клетка линии Е продуцирует вирус в каждой 1000 нормальных клеток НuТ78) и помещали в планшеты с 24 лунками при концентрации 105 клетки на лунку в 1 мл культуральной среды RPMI 1640, содержащей 5% фетальной бычьей сыворотки и антибиотики. Затем в каждую лунку добавляли тестовую сыворотку 5%-ной конечной концентрации так, чтобы достичь 10%-ной конечной общей концентрации сыворотки. Полученные контрольные образцы культуральной среды RPMI 1640 содержали 5% фетальной бычьей сыворотки и 5% нормальной сыворотки человека.

В качестве положительного контроля использовали ВИЧ-1 гипериммунные сыворотки кролика, которые способны ингибировать вирусную инфекцию почти на 3 логарифма.

После 5 дней инкубации культуральную среду центрифугировали и проводили количественное определение вируса путем анализа ВИЧ-1 р24 с помощью метода "антигенной ловушки".

Тестируемые сыворотки показали высокий процент ингибирования, предполагая терапевтическую активность белка р14, который может применяться как иммуногенный антиген. Продуцируемые против этого белка антитела также могут быть использованы.

Такая активность фактически установлена, хотя до сих пор в ограниченном числе случаев, также in vivo для ВИЧ-положительных и клинических больных СПИДом пациентов.

Шесть пациентов лечили в течение 4 недель путем подкожного введения 1 мг препарата р14 каждые 7 дней.

До лечения и после каждой инъекции измеряли следующие параметры: - отношение Т4/Т8; - число розеток рецепторов; - общее число лимфоцитов; - увеличение Т4; - число В клеток; - число гранулоцитов.

В конце лечения серологические параметры имели тенденцию к улучшению и наблюдалась нормализация гематологической картины.

Через несколько лет после лечения пациенты еще живы и их состояние вполне удовлетворительное.

В соответствии с данным изобретением белок р14 может вводиться в удобной форме, обычно в виде инъекций, может, необязательно, дополнительно содержать традиционные адъюванты, такие как гидроокись алюминия, полисахариды, белковые носители и т.д.

Процедуру введения (дозы, частота введения и т.д.) определяют в соответствии с обстоятельствами, зависящими от различных факторов, таких как состояние пациента, стадия заболевания, гематологические и серологические параметры. Титр антител анти-р14 может быть использован для мониторинга проводимой терапии совместно с общими параметрами, используемыми для иммунологичеcкой действенности. В общем, подкожное введение белка в количестве от 0,1 до 10 мг, предпочтительней от 1 до 2 мг, может быть назначено раз в неделю в течение 3-6 недель или, во всяком случае, до получения объективного терапевтического эффекта.

Формула изобретения

1. Средство для лечения инфекций, вызванных ВИЧ, представляющее собой белок, имеющий следующую аминокислотную последовательность (см. графическую часть).

2. Фармацевтическая композиция для лечения инфекций, вызванных ВИЧ, содержащая в качестве активного ингредиента белок, имеющий следующую аминокислотную последовательность (см. графическую часть).

с подходящим адьювантом.

3. Фармацевтическая композиция по п.2, в которой адьювант выбирают из гидроокиси алюминия, полисахаридов или белковых носителей.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3, Рисунок 4, Рисунок 5



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к новым фармацевтическим композициям в форме самоэмульгирующейся композиции, содержащей основной амин, которые обеспечивают высокую концентрацию и высокую пероральную биодоступность для соединений пиранона, которые являются ингибиторами ретровирусной протеазы

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для подавления ВИЧ-инфекции

Изобретение относится к медицине, а именно к вирусологии, и может быть использовано для подавления репродукции вируса иммунодефицита человека 1 типа (ВИЧ-1)

Изобретение относится к фармацевтики

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для ингибирования ВИЧ-протеазы, предупреждения или лечения ВИЧ инфекции или лечения СПИДа

Изобретение относится к фармацевтическим композициям, содержащим два или более соединений, обладающих анти-ВИЧ-активностью

Изобретение относится к области молекулярной биологии, вирусологии и медицины, а именно к новому 2 ,3 -дидезокси-2 ,3 -дидегидротимидина (d4T) - 2',3'-дидегидро-2',3'-дидезоксимитидин -5'[(этоксикарбонил) (этил)фосфонату] в качестве ингибитора ВИЧ

Изобретение относится к новым соединениям формулы (I), обладающим ингибирующими репликацию ВИЧ свойствами

Изобретение относится к пептидам, состоящим из 16-55 аминокислотных остатков, при этом указанные пептиды включают по крайней мере одну из аминокислотных последовательностей: FLCTHIIYS (SEQ ID NO:61), IIYSFANIS (SEQ ID NO: 62), FIKSVPPFL (SEQ ID NO:64), FDGLDLAWL (SEQ ID NO:65), LYPGRRDKQ (SEQ ID NO: 66), YDIAKISQH (SEQ ID NO:67), LDFISIMTY (SEQ ID NO:68), FISIMTYDF (SEQ ID NO: 69), FRGQEDASP (SEQ ID NO: 70), YAVGYMLRL (SEG ID NO:71), MLRLGAPAS (SEQ ID NO:72), LAYYEICDF (SEQ ID NO:73), LRGATVHRT (SEQ ID NO: 74), YLKDRQLAG (SEQ ID NO:75), LAGAMVWAL (SEQ ID NO:76), VWALDLDDF (SEQ ID NO: 77) или LDLDDFQGS (SEQ ID NO:78)

Лиганд notch // 2197262
Изобретение относится к применению терапевтических соединений в модификации Т-клеток взаимодействий, антиген-представляющих клеток с Т-клетками и взаимодействий между патогенными организмами и иммунокомпетентными клетками хозяина

Изобретение относится к медицине, в частности к белкам и применению белков, выделенных с помощью хлорной кислоты из органов животного для приготовления лекарственных препаратов, эффективных против аутоиммунных заболеваний, в частности, эффективных против артрита, атеросклероза, множественного склероза, диабета

Изобретение относится к области биотехнологии, биохимии и медицины, а именно к способам синтеза веществ с бифункциональной и мультифункциональной биологической активностью
Изобретение относится к медицине, к анестезиологии и реаниматологии, и может найти применение при лечении дыхательной недостаточности некардиогенной природы
Изобретение относится к медицине, точнее к фтизиатрии и может найти применение при лечении различных форм туберкулезной инфекции органов дыхания

Изобретение относится к нативным белкам схемы комплемента, модифицированным таким образом, что белок способен образовывать стабильную С3 конвертазу

Изобретение относится к медицине, а именно к педиатрии
Наверх