Питательная среда для культивирования и выделения бифидобактерий

 

Изобретение относится к медицине, а именно к клинической микробиологии, и может быть использовано для выращивания бифидобактерий и количественного определения их при диагностике дисбактериоза кишечника. Среда содержит при заданном соотношении компонентов в качестве источника азотистого питания микробов питательный бульон сухой, в качестве источника витаминов группы В экстракт кормовых или хлебных дрожжей, в качестве растворителя белковых компонентов среды трехзамещенный цитрат натрия, D(+) глюкозу, соду кальцинированную, в качестве оксиданта и прооксиданта сернокислое железо, цистеин, а также воду дистиллированную и агар микробиологический. Изобретение обеспечивает улучшение ростовых свойств питательной среды и упрощение способа ее получения. 1 табл.

Изобретение относится к медицине, а именно микробиологии, и может быть использовано для выращивания бифидобактерий и количественного определения их при диагностике дисбактериоза кишечника.

Известно использование для выращивания бифидобактерий казеиново-дрожжевой среды и гидролизованного молока (1, 2), среды Блаурокка (в модификации Гончаровой) (3).

Недостатком этих сред является трудоемкость в их приготовлении в лабораторных условиях.

Наиболее близким решением задачи того же назначения к заявляемому изобретению по совокупности признаков является питательная среда для накопления биомассы, содержащая источник азотистого питания - ферментативный гидролизат обезжиренного молока, глюкозу, источник витаминов группы В - кормовой концентрат витаминов группы В, кукурузный экстракт, натрий лимоннокислый трехзамещенный, железо сернокислое 7-водное, трилон Б, маннит, агар-агар (4).

Задача предлагаемого изобретения - повышение вегетирующих свойств среды и упрощение технологии ее изготовления.

Указанный технический результат при осуществлении изобретения достигается тем, что предлагаемая среда дополнительно содержит воду дистиллированную, соду кальцинированную, в качестве источника азотистого питания - питательный бульон сухой, в качестве источника витаминов группы В - экстракт кормовых или хлебных дрожжей, при следующем соотношении компонентов, г/л дистиллированной воды: Питательный бульон сухой - 20,0-30,0 Д (+) глюкоза - 15,0-25,0 Экстракт кормовых или хлебных дрожжей, сухой - 5,0-8,0 Цистеин - 0,45-0,7 Железо сернокислое 7-водное - 0,13-0,18 Агар микробиологический - 1,5-2,0 Натрий лимоннокислый трехзамещенный - 0,8-1,2 Сода кальцинированная - 0,8-1,2 Среду получают следующим образом.

Пример 1. В 1 л дистиллированной воды последовательно растворяют 20,0 г питательного бульона, 15,0 г Д (+) глюкозы, 5,0 г экстракта кормовых дрожжей, 0,45 г цистеина, 0,13 г железа сернокислого 7-водного, 0,8 г натрия лимоннокислого трехзамещенного, 1,5 г агара микробиологического, 0,8 г соды кальцинированной. Смесь нагревают, кипятят 2 мин до полного расплавления агара, фильтруют через ватный фильтр, разливают по 9 мл в стерильные пробирки и во флаконы по 50,0 мл, 100 мл, стерилизуют 30 мин при 112^oС.

Перед употреблением среду регенерируют (кипятят на водяной бане в течение 45 мин).

Перед употреблением среду регинирируют (кипятят на водяной бане в течение 10 мин и остужают под струей холодной воды).

Для контроля качества среды использовали культуру второй генерации лиофилизированного тест-штамма Bifidobacterium bifidum-I, полученного из ГИСК им. Л. А. Тарасевича.

При получении первой генерации маточной культуры тест-штамм стерильно вскрывали и в ампулу пастерованной пипеткой вносили 5 мл стерильного 0,85 % раствора хлористого натрия.

По 1,0 мл микробной взвеси пересевали в пробирки с 9 мл предлагаемой и контрольной средами и титровали каждую среду до разведения 10^-5 для определения жизнеспособности культуры В.bifidum- 1. Пипетку с культурой опускали на дно пробирки со средой и постепенно освобождали культуру, перемешивая содержимое пробирки, не аэрируя. В процессе разведения перенос микробной взвеси в следующую пробирку производили новой стерильной пипеткой вместимостью 1 мл.

Через 48-72 ч инкубации при (37±1)^oС учитывали рост культуры по 4-бальной системе. Затем производили титрование каждой культуры до разведения 10^-5 из первых пробирок в соответствующих средах. Дополнительно выращивали культуры (2-я генерация) при той же температуре при инкубации (48±1) ч. После инкубации определяли визуально характер роста культуры В. bifidum-1, учитывали их количество в разведениях с изолированным ростом колоний.

Для культуры бифидобактерий характерен рост колоний в полужидкой среде в виде штрихов размером от 3 и более мм.

Пример 2. Отличается от примера 1 тем, что в 1 л воды растворяют экстракт хлебных дрожжей в таком же (5,0) г количестве вместо экстракта кормовых дрожжей. Далее согласно примеру 1.

Пример 3. Отличается от примера 1,2 тем, что в 1,0 л воды растворяют 25,0 г питательного бульона, 20,0 Д (+) глюкозы, 6,5 г экстракта кормовых дрожжей, 0,55 г цистеина, 0,15 г железа сернокислого 7-водного, 1,7 г агара микробиологического, 1,0 г натрия лимоннокислого трехзамещенного, 1,0 г соды кальцинированной. Далее согласно примеру 1.

Пример 4. Отличается от примера 3 тем, что в 1,0 л воды растворяют экстракт хлебных дрожжей в таком же (6,5 г) количестве вместо экстракта кормовых дрожжей. Далее согласно примеру 1.

Пример 5. Отличается от примера 1 и 3 тем, что в 1,0 л воды растворяют 30,0 г питательного бульона, 25,0 г Д (+) глюкозы, 8,0 г экстракта кормовых дрожжей, 0,7 г цистеина, 0,18 г железа сернокислого 7-водного, 2,0 г агара микробиологического, 1,2 г натрия лимоннокислого трехзамещенного, 1,2 г соды кальцинированной. Далее согласно примеру 1.

Пример 6. Отличается от примера 5 тем, что в 1 л воды растворяют экстракт хлебных дрожжей в таком же (8,0) г количестве вместо экстракта кормовых дрожжей. Далее согласно примеру 1.

Результаты биологического контроля предлагаемой и контрольной сред представлены в таблице.

Из таблицы видно, что предлагаемая среда обеспечивала типичный рост маточной культуры В. bifidum-1 и обладала лучшими вегетирующими свойствами по сравнению с контрольной средой.

Предлагаемая среда экономически выгодна, проста в приготовлении, не требует дополнительных затрат в приготовлении. Использование ее в практике здравоохранения будет способствовать улучшению диагностики дисбактериоза кишечника и правильной тактики его лечения.

БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЕ ДАННЫЕ
1. Калина Т.Э. Автореферат (Ростов-на-Дону), 1995 г.

2. Богданов В.М. Микробиология молока и молочных продуктов. - М.: Пищевая промышленность, 1969 г., с. 296.

3. Эпштейн-Литвак Р. В. Методические рекомендации. Вильшанская Ф.Л. (Бактериологическая диагностика дисбактериоза кишечника). - М., 1977 г.

4. Эрвольд Т.М., Перфильев Г.Д., Гудков А.В., Белова Г.А. Автор.свид-во 789580, кл. С 12 N 1/20, 23.12.80.0

Формула изобретения

Питательная среда для культивирования и выделения бифидобактерий, содержащая источник азотистого питания, источник витаминов группы В, Д(+) глюкозу, цистеин, натрий лимоннокислый трехзамещенный, железо сернокислое 7-водное, агар микробиологический, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит воду дистиллированную, соду кальцинированную, в качестве источника азотистого питания - питательный бульон сухой, в качестве источника витаминов группы В - экстракт кормовых или хлебных дрожжей при следующем соотношении компонентов, г/л дистиллированной воды:
Питательный бульон сухой - 20,0-30,0
Д(+) глюкоза - 15,0-25,0
Экстракт кормовых или хлебных дрожжей сухой - 5,0-8,0
Цистеин - 0,45-0,7
Железо сернокислое 7-водное - 0,13-0,18
Натрий лимоннокислый трехзамещенный - 0,8-1,2
Агар микробиологический - 1,5-2,0
Сода кальцинированная - 0,8-1,2

РИСУНКИ

Рисунок 1

PD4A - Изменение наименования обладателя патента Российской Федерации на изобретение

(73) Новое наименование патентообладателя:
Федеральное государственное унитарное предприятие “Научно-производственное объединение по медицинским иммунобиологическим препаратам “Микроген”

Извещение опубликовано: 27.10.2004        БИ: 30/2004

---