Питательная среда для выращивания лактобактерий

 

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в микробиологической, медицинской и ветеринарной промышленности, в частности при производстве лечебных бакпрепаратов. Питательная среда для выращивания лактобактерий содержит следующие компоненты, г/л: глюкоза 15,0-25,0; панкреатический гидролизат казеина с аминным азотом 350 мг% 10,0-20,0, сульфат марганца 0,02-0,03, сульфат магния 0,05-0,15, автолизат пекарских дрожжей 15,0-97,5, фосфат калия двузамещенный 0,5-1,5, ацетат натрия 2,0-3,0, цитрат аммония 0,5-1,5, вода дистиллированная до 1 л. Изобретение обеспечивает повышение стандартности и технологичности среды и снижение ее стоимости. 1 табл.

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в микробиологической, медицинской и ветеринарной промышленности, в частности при производстве лечебных биопрепаратов.

Наиболее близкой к заявляемой по технической сущности и достигаемому результату, выбранной в качестве прототипа, является питательная среда МРС-1 (среда Rogosa) (ФС 42-252 ВС-89 "Лактобактерин сухой"). Среда содержит глюкозу, автолизат пекарских дрожжей, фосфат калия двузамещенный, цистеин солянокислый, сульфат марганца, сульфат магния, раствор пептона с твином-80, гидролизованное молоко по Богданову и воду дистиллированную.

Недостатком известной среды являются: высокая стоимость из-за наличия дорогостоящего импортного вещества - цистеина солянокислого, нестандартность из-за наличия в составе среды в качестве источника азота гидролизованного молока по Богданову, сложность технологии приготовления среды из-за операции суспендирования в горячей воде пептона перед внесением в среду.

Задача, решаемая предлагаемым изобретением - совершенствование питательной среды.

Технический результат от использования изобретения заключается в повышении стандартности и технологичности среды и снижении ее стоимости.

Указанный результат достигается тем, что питательная среда для выращивания лактобактерий, содержащая источник азота, глюкозу, автолизат пекарских дрожжей, фосфат калия двузамещенный, сульфат марганца, сулфат магния, воду дистиллированную, дополнительно содержит ацетат натрия и цитрат аммония, а в качестве источника азота - панкреатический гидролизат казеина с аминным азотом 350 мг% при следующем соотношении компонентов, г/л: Глюкоза - 15,0-25,0 Панкреатический гидролизат казеина с аминным азотом 350 мг% - 10,0-20,0 Сульфат марганца - 0,02-0,03 Сульфат магния - 0,05-0,15 Автолизат пекарских дрожжей - 15,0-97,5 Фосфат калия двузамещенный - 0,5-1,5 Ацетат натрия - 2,0-3,0 Цитрат аммония - 0,5-1,5 Вода дистиллированная - до 1 л
Питательную среду готовят следующим образом.

Для приготовления используют сульфат марганца по ГОСТ 435-77, сульфат магния по ГОСТ 4523-77, фосфат калия двузамещенный по ГОСТ 2493-75, ацетат натрия по ГОСТ 199-78, цитрат аммония по ТУ 6-09-01766-90. Очищенную воду готовят по ФС 42-2619-97.

Для приготовления панкреатического гидролизата казеина замороженную поджелудочную железу крупного рогатого скота оттаивают, измельчают в мясорубке и помещают в металлические бачки. Казеин, соответствующий ГОСТ 17626-81, взвешивают на весах и загружают в реактор, заливают питьевой водой при температуре (42±1)^oС. Смесь оставляют на 2 ч для набухания. Затем при включенной мешалке дробно вносят раствор натрия гидроокиси 20%-ный до рН (7,8-8,0).

В реактор с подготовленным казеином добавляют промолотую поджелудочную железу, включают мешалку, перемешивают, 20%-ным раствором натрия гидроокиси коррегируют рН до (7,8-8,0), добавляют хлороформ. Реактор закрывают и проводят гидролиз при температуре (42±1)^oС в течении 5-7 суток с периодическим перемешиванием автоматической мешалкой (каждые 2 ч по 3-5 мин), поддерживая в гидролизате первоначально установленное значение рН.

Процесс гидролиза контролируют по нарастанию аминного азота в первые, третьи, пятые сутки. Об окончании процесса гидролиза судят по прекращению нарастания аминного азота. В готовом гидролизате содержание аминного азота - (0,48-0,60)%, пептидов - (1,8-2,4)%, триптофана - (110-120) мг%, хлоридов - (0,18-0,24)%. Определение всех показателей проводят по "Методическим указаниям по физико-химическому контролю питательных сред" и ФС 42-3874-99 "Физико-химические, химические, физические и иммунохимические методы контроля медицинских иммунобиологических препаратов".

Для приготовления автолизата пекарских дрожжей дрожжи пекарские измельчают на куски, заливают теплой питьевой водой, выдерживают при температуре 46±2^oС в течении 22±2 ч. Затем смесь кипятят и отделяют осадок от раствора. Содержание аминного азота 140 мг%.

Панкреатический гидролизат казеина с аминным азотом 350 мг% в количестве 0,1-0,2 л соединяют с автолизатом пекарских дрожжей (0,1-0,65 л), перемешивают и добавляют остальные компоненты: глюкозу в количестве 0,015-0,025 кг; сульфат марганца - 0,02-0,03 г; сульфат магния - 0,05-0,15 г; фосфат калия двузамещенный - 0,5-1,5 г; ацетат натрия - 2,0-3,0 г; цитрат аммония - 0,5-1,5 г и доводят объем раствора до 1 л очищенной водой. рН раствора коррегируют 20% раствором натрия гидроокиси до 7,1±0,1. Смесь перемешивают.

Выращивают лактобактерии в предлагаемой питательной среде следующим образом.

В начале выращивают штамм L. plantarum (8P-A3) на среде Мозэра-Рогоза-Шарпа в течение 16±2 ч при 37±1^oС. Полученный инокулят засевают в предлагаемую среду в количестве 10% от объема среды. Выращивают лактобактерии в течение 16±2 ч в термостате при 37±1^oС.

Показатели среды определяли по ФС 42-3874-99 "Физико-химические, химические и иммунохимические методы контроля медицинских иммунобиологических препаратов".

Рост культуры лактобактерии определяли по показателям оптической плотности и содержанию живых микробных клеток.

Пример 1.

0,1 л панкреатическогo гидролизата казеина с аминным азотом 350 мг% соединяют с 0,65 л автолизата пекарских дрожжей, перемешивают и добавляют глюкозу 0,015 кг, сульфат марганца 0,02 г, сульфат магния 0,15 г, фосфат калия двузамещенный 0,5 г, ацетат натрия 2,0 г, цитрат аммония 0,5 г и доводят объем раствора до 1 л очищенной водой. рН раствора коррегируют 20% раствором натрия гидроксида до 7,1 ±0,1. Смесь перемешивают.

Пример 2 проведен аналогично примеру 1. Данные сведены в таблицу.

Уменьшение количеств глюкозы менее 0,015 кг/л, так же как и увеличение более 0,025 кг/л, приводит к снижению роста культуры.

Уменьшение количеств панкреатического гидролизата казеина менее 0,1/л и автолизата пекарских дрожжей менее 0,10 л/л снижает ростовые свойства среды, а увеличение их количеств более 0,40 л/л и 0,65 л/л соответственно технологически нецелесообразно.

Уменьшение количеств всех солей, кроме ацетата натрия, входящих в состав питательной среды, ниже их нижних пределов приводит к снижению ростовых свойств среды, а увеличение выше верхних пределов технологически нецелесообразно.

Уменьшение количества ацетата натрия менее 2,0 г/л, так же как и увеличение более 3,0 г/л, приводит к нарушению буферных свойств среды.

Предлагаемая питательная среда для выращивания лактобактерий имеет следующие преимущества по сравнению с прототипом:
- улучшаются ростовые свойства среды;
- при сохранении достаточно высокого количества живых микробных клеток снижается стоимость среды за счет исключения импортного химического реактива.

Формула изобретения

Питательная среда для выращивания лактобактерий, содержащая источник азота, глюкозу, автолизат пекарских дрожжей, сульфаты марганца и магния, фосфат калия двузамещенный, воду дистиллированную, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит ацетат натрия и цитрат аммония, а в качестве источника азота - панкреатический гидролизат казеина с аминным азотом 350 мг% при следующем соотношении компонентов, г/л:
Глюкоза - 15,0-25,0
Панкреатический гидролизат казеина с аминным азотом 350 мг% - 10,0-20,0
Сульфат марганца - 0,02-0,03
Сульфат магния - 0,05-0,15
Автолизат пекарских дрожжей - 15,0-97,5
Фосфат калия двузамещенный - 0,5-1,5
Ацетат натрия - 2,0-3,0
Цитрат аммония - 0,5-1,5
Вода дистиллированная - До 1 л

РИСУНКИ

Рисунок 1