Способ диагностики хронической скрытой бактериальной инфекции с поражением сосудистой стенки

Изобретение относится к области медицины и касается способа диагностики хронической скрытой бактериальной инфекции с поражением сосудистой стенки. Сущность способа заключается в том, что после предварительного диагноза заболевания сосудов в сыворотке крови пациента определяют антитела к бета2-гликопротеину 1 (атБ2ГП), антитела к эндотелию (АЭат), антитела к Clq фактору комплемента (ат Clq), криглобулины (КГ) в виде криокрита и активности ревматоидного фактора (РФ). При выявлении атБ2ГП больше или равно 5УЕ/мл, АЭат больше или равно 1:10, arClq больше или равно 5 УЕ/мл, КГ в виде криокрита больше 0%, РФ больше или равно 1:20 проводят лечебное воздействие, которое состоит из четырех ежедневных процедур лейкоцитафереза с адсорбцией на аутолейкоцитах клиона в разовой дозе 500 мг в сочетании с пероральным приемом бисептола в разовой дозе 480 мг. Через 4-5 недель от начала лечения проводят контрольное исследование крови для обнаружения инфекционных возбудителей при помощи культурального и генетического методов диагностики. При обнаружении бактериальных возбудителей диагностируют хроническую скрытую бактериальную инфекцию с поражением сосудистой стенки. Использование способа позволяет повысить точность диагностики хронической скрытой бактериальной инфекции с поражением сосудистой стенки. 3 табл.

 

Способ диагностики хронической скрытой бактериальной инфекции с поражением сосудистой стенки относится к области медицины, а именно неврологии, ревматологии, сосудологии и инфектологии, и может быть использован для выявления этиологии инфекционно-воспалительных заболеваний сосудов, а также для оценки эффективности и коррекции тактики проводимой терапии.

При проведении исследований биологических материалов человека, полученных во время хирургических операций и на аутопсии, выявлено, что хламидии инфицируют эндотелиальные, гладко-мышечные и адвентициальные клетки сосудов, их находят в атеромах, стенках аневризм. Аналогичные данные получают при изучении других микроорганизмов с возможностью внутриклеточного существования. Подтверждена роль этих возбудителей в развитии воспалительных поражений кровеносных сосудов (васкулитов и васкулопатий), атеросклероза. Имеющиеся способы диагностики внутриклеточных бактериальных возбудителей часто неэффективны из-за отсутствия патогена в исследуемом материале или невозможности его выявить из-за биологических особенностей его ассоциантов. Различные ассоциации хламидии между собой и с другими микроорганизмами улучшают адаптацию к внутриклеточному существованию и усиливают патогенные свойства всех ассоциантов.

Известны различные лабораторные методы диагностики инфекционных возбудителей, направленные на выявление самих микроорганизмов, или их антигенов, или их антител: морфологические методы с выявлением морфологических структур возбудителя, культуральные методы с выделением возбудителя, иммунологические методы с выявлением антигенов и антител, генетические методы с ДНК-диагностикой. «Золотым стандартом» диагностики считают культуральный метод с выделением возбудителя на культуре клеток, а также генетический метод - полимеразная цепная реакции (ПЦР). Более достоверные результаты лабораторного исследования получают при одновременном параллельном использовании различных методов. Все указанные методы используют для определения хламидий, микоплазм и других скрытых бактериальных возбудителей в различных биологических материалах, взятых у пациентов для исследования.

Опасность для человека представляют три вида семейства Chlamydiaceae: Chlamydia (Ch) trachomatis, Ch. psittaci, Ch. pneumoniae - их биологические свойства и роль в развитии некоторых заболеваний освещены в разных источниках. Но, несмотря на многолетнюю историю изучения хламидийной инфекции, характер и патогенез поражения сосудистой и нервной систем хламидиями изучен недостаточно.

Известен способ диагностики васкулита по выявлению хламидий в атеросклеротической бляшке и смежном фрагменте сосуда методом ПЦР, полученных при эндартериоэктомии каротидных артерий с параллельным выявлением в сыворотке периферической крови антител к Ch. pneumoniae (IgM, IgG) и антител к системным инфекциям, см. Katsenis C. et al. The significance of Chlamydia pneumoniae in symptomatic carotid stenosis. // Angiology. - 2001. - V.52 (9). - P.615-91). Способ позволяет выявить искомого возбудителя в биопсийных участках, однако, он травматичен, высок риск осложнения, не может проводиться без специальных показаний к операциям и, кроме того, биологические свойства возбудителей таковы, что он может не находиться или находиться в недостаточном для его определения количестве в том материале, который был получен при операции. В результате будет получен ложно-отрицательный результат. Выявление антител к возбудителю само по себе не может свидетельствовать о поражении сосудистой стенки, поскольку антитела вырабатываются и затем поступают в кровь из любого очага инфекции в организме.

Известен способ диагностики системного васкулита, ассоциированного с Ch. trachomatis по выявлению антител к этому виду хламидий в сыворотке крови и клинико-лабораторных признаков воспалительного процесса и клинических проявлений системного васкулита с поражением кожи, опорно-двигательой системы и почек, см. Cacoub P. et al. Post-infectious systemic vasculitis: recovery without corticotherapy // J Mal Vase. - 1997. - V.22 (1). - P.29-34. Способ позволяет диагностировать клинически проявляющийся системный воспалительный процесс, ассоциированный с Ch. trachomatis. Но способ не позволяет выявить воспалительное поражение сосудов (васкулит), имеющий хроническое течение, а также другие виды хламидий или другие скрытые возбудители, которые могут быть причиной развития системного воспаления сосудов. Эта диагностика является ошибочной, поскольку антитела к хламидиям могут появляться в сыворотке крови при наличии локализованной хламидийной инфекции в области первичного очага поражения и отсутствовать (или быть меньшими диагностически значимых значений) при иммуносупрессии на фоне васкулита.

Известен способ диагностики хронического васкулита сердечно-сосудистой системы, ассоциированного с Ch. pneumoniae при выявлении в сыворотке крови специфических антител иммуноглобулинов (Ig) A, M, G к хламидиям (к виду Ch. pneumoniae) и IgG к вирусам группы герпеса; при наличии в сыворотке крови клинико-лабораторных признаков воспалительного процесса, определенных показателей степени перекисного окисления липидов; и при определении признаков васкулита крупных сосудов методом ультразвукового дуплексного сканирования, см. Кванталиани Т.Г. «Клинико-лабораторные корреляты повреждения сердечно-сосудистой системы при хроническом бактериально-вирусном инфицировании». Автореферат диссертации докт. мед. наук - Тбилиси - 2006 г., 28 с. Способ позволяет диагностировать воспалительное заболевание сердца и крупных сосудов, ассоциированное с Ch. pneumoniae.

Недостатками этого способа являются: способ не диагностирует воспалительное поражение сосудов (васкулит) других органов и систем, поскольку процесс может быть локальным и затрагивать преимущественно сосуды головного и спинного мозга, почек, легких и др.; не учитывает поражение мелких сосудов; ультразвуковое исследование не всегда достоверно, и лишь косвенно выявляет признаки поражения магистральных сосудов в плохо-лицируемых областях (например, интракраниально), а также мелких резистивных сосудов (предел метода). Наличие антител к Ch. pneumoniae в сыворотке не достоверно указывает на наличие хламидийного поражения сердечно-сосудистой системы, поскольку при любой локализации хламидий в сыворотке выявляют к ним антитела, так, для определяемого вида хламидий вероятна распираторная инфекция; не позволяет диагностировать инфекционно-воспалительный процесс, вызванный другими видами хламидий или их ассоциантами.

Известен способ диагностики хронического скрытого хламидийного васкулита центральной нервной системы, см. Вайншенкер Ю.И., Ивченко И.М., Нуралова И.В., Цинзерлинг В.А., Созина А.В., Куляшова Л.Б., Березина Л.А., Нарвская О.В. «Хроническая хламидийная инфекция как причина демиелинизации и васкулита центральной нервной системы: некоторые аспекты диагностики. //. Вестник Санкт-Петербургского университета. Серия 11, Медицина, 2009 г., выпуск 1, стр.91-98. Данный способ является наиболее близким решением и включает исследование крови на выявление хламидий на фоне лечения от возбудителей-ассоциантов хламидийной инфекции, выявляемых путем проводимых параллельно культурального, генетического методов диагностики возбудителя и реализуемый при выявлении посредством иммунологического метода в сыворотке крови различных маркеров иммуноопосредованного поражения сосудов - антител к бета2-гликопротеину 1 в значении ≥10 U/ml, к эндотелию в значении ≥1:10, к Clq-фактору комплемента в значении ≥10 U/ml, криоглобулинов в виде криокрита в значении >0% и активности ревматоидного фактора в значении ≥1:20 в любом их сочетании или изолированно. Способ устанавливает критерии, указывающие на необходимость проведения контрольного диагностического исследования для выявления скрытой хламидийной инфекции, не определившейся при первичном диагностировании и исследовании. Он позволяет достоверно диагностировать хронический иммунологически-опосредованный воспалительный процесс с поражением сосудов, поскольку антитела к бета2-гликопротеину 1, к эндотелию, к Clq-фактору комплемента и криоглобулины в виде криокрита и активности ревматоидного фактора являются маркерами иммуноопосредованного поражения крупных и мелких сосудов и такой «перекрестный иммунологический синдром» - патогномоничный симптом инфекции. Способ эффективно и достоверно выявляет хламидии в различных биологических материалах при достаточном для реализации лабораторных методов диагностики количестве возбудителя. Параллельное применение «золотых стандартов диагностики» увеличивает точность и чувствительность выявления хламидии. Исследование на фоне лечения возбудителей-ассоциантов хламидийной инфекции увеличивает вероятность выявления скрытых хламидии, количество которых при первичном исследовании было недостаточным для их определения или если возбудители-ассоцианты по своим биологическим свойствам затрудняли выявление хламидии.

Недостатками вышеуказанного способа, взятого за прототип, являются: он не реализуется при отсутствии возбудителей-ассоциантов хламидийной инфекции, а также при выявлении других микроорганизмов, не являющихся ассоциантами хламидийной инфекции; позволяет выявить только хламидии и не определяет другие возможные скрытые возбудители, которые могут либо в комплексе с хламидиями, либо самостоятельно быть причиной иммуноопосредованного васкулита, как, например, микоплазменная инфекция; не захватывает вялотекущего течения иммуноопосредованного процесса, что сужает критерии, указывающие на необходимость выявления всего спектра инфекционных агентов. Кроме того, имеется случайность и неточность полученных результатов, т.к. увеличение количества возбудителя в крови может оказаться как случайным в ходе течения заболевания, так и спровоцированным лечением сочетанной инфекции; не установлены лечебные мероприятия, направленные на элиминацию хламидийно-ассоциированной инфекции (фармакологические препараты, дозы, способы и пути введении, длительность введения); неадекватное лечение от выявленной инфекции может так «перекрестно» воздействовать на внутриклеточные хламидии или другие микроорганизмы, что повысится их резистентность к фармакопрепаратам и усугубится иммунозависимый процесс, а при повторном (контрольном) исследовании хламидии выделены не будут (ложно-отрицательный результат), а прочие внутриклеточные микроорганизмы в способе прототипа вообще в динамике не определяют; не установлены сроки контрольной диагностики скрытой инфекции, что также может привести к ложно-отрицательным результатам диагностики и ошибочному лечению.

Техническим результатом предлагаемого решения является повышение точности и эффективности диагностики хронической скрытой бактериальной инфекции с поражением сосудистой стенки посредством лечебного воздействия, направленного на увеличение возможности выявления различных скрытых бактериальных возбудителей в крови, применяемого при установлении хронического иммунологически-опосредованного воспалительного процесса в различных слоях любых типов сосудов, независимо от их месторасположения, а также вне зависимости от наличия любых инфекционных агентов.

Этот результат достигается тем, что в способе диагностики хронической скрытой бактериальной инфекции с поражением сосудистой стенки, включающем после предварительного диагноза заболевания сосудов с выявлением возбудителей-ассоциантов хламидийной инфекции и с определением иммунологическим методом в сыворотке крови маркеров иммуноопосредованного поражения сосудов проведение в процессе лечения от выявленных возбудителей контрольного исследования посредством культурального и генетического методов в биологических материалах из первичных и вторичных очагов инфекции для обнаружения хламидий, вне зависимости от наличия любых инфекционных агентов и при выявлении среди определяемых иммунологических маркеров антител к бета2-гликопротеину 1 в значении ≥5U/ml осуществляют лечебное воздействие, состоящее из 4-х ежедневных процедур лейкоцитафереза с адсорбцией на аутолейкоцитах клиона в разовой дозе 500 мг в сочетании с пероральным приемом бисептола в разовой дозе 480 мг, через 4-5 недель от начала лечения проводят контрольное исследование крови для обнаружения инфекционных возбудителей путем культурального, генетического методов диагностики и при обнаружении хламидий и/или других ранее не обнаруженных бактериальных возбудителей диагностируют хроническую скрытую бактериальную инфекцию с поражением сосудистой стенки.

Сущность изобретения выражается в совокупности существенных признаков, достаточной для достижения обеспечиваемого изобретением технического результата.

Существенными признаками предложенного способа диагностики, совпадающими с признаками прототипа, являются: А - после предварительного диагноза заболевания сосудов с выявлением возбудителей-ассоциантов хламидийной инфекции и с определением иммунологическим методом в сыворотке крови маркеров иммуноопосредованного поражения сосудов проводят в процессе лечения от выявленных возбудителей контрольное исследование посредством культурального и генетического методов в биологических материалах из первичных и вторичных очагов инфекции для обнаружения хламидий.

Существенными отличительными признаками решения являются: Б - диагностику проводят вне зависимости от наличия любых инфекционных агентов; В - при выявлении среди определяемых иммунологических маркеров антител к бета2-гликопротеину 1 в значении ≥5U/ml осуществляют лечебное воздействие, состоящее из 4-х ежедневных процедур лейкоцитафереза с адсорбцией на аутолейкоцитах клиона в разовой дозе 500 мг в сочетании с пероральным приемом бисептола в дозе 480 мг; Г - через 4-5 недель от начала лечения проводят контрольное исследование крови для обнаружения инфекционных возбудителей путем культурального и генетического методов диагностики и при обнаружении хламидий и/или ранее не обнаруженных бактериальных возбудителей диагностируют хроническую скрытую бактериальную инфекцию с поражением сосудистой стенки.

Способ диагностики скрытой хронической бактериальной инфекции с поражением сосудистой стенки осуществляют следующим образом. После предварительного диагноза заболевания сосудов у больного производят забор крови из вены - 10 мл. 2 мл крови исследуют параллельно культуральным и генетическим методами выявлением возбудителей (хламидий) и возбудителей-ассоциантов хламидийной инфекции. Из оставшейся крови (8 мл) центрифугированием - 1500 об/мин в течение 10 минут получают сыворотку - 4 мл, которую затем путем иммунологического метода по общепринятым действиям и стандартам, используемых иммунологических реакций, исследуют для определения соответствующих маркеров иммуноопосредованных поражений сосудов антител к бета2-гликопротеину 1 класса IgG (атБ2ГП), антител к эндотелию (АЭат), антител к Clq фактору комплемента (arClq) и криоглобулинов в виде криокрита и активности ревматоидного фактора (РФ).

Иммунологический метод исследования основан на специфическом взаимодействии антигенов и антител. В зависимости от их механизма и учета результатов его подразделяют на реакции, основанные на феномене агглютинации (например, реакция непрямой агглютинации на частицах латекса для определения криоглобулинов); реакции с использованием химических и физических методов (например, непрямая иммунофлюоресценция, иммуноферментный анализ).

Диагностические маркеры иммунологически-опосредованных воспалительных процессов в сосудистой стенке с развитием преимущественно ишемических или геморрагических проявлений зависят от типа сосуда и преимущественно пораженного слоя стенки. Сосудистая стенка может быть различна по количеству слоев в сосудах разных типов (артерии, артериолы, капилляры, вены и их клапаны), однако это не зависит от месторасположения сосудов (сосуды центральной нервной системы, почек, печени или любых других органов и систем). Инфекционное поражение сосудистой стенки может развиваться в любых типах сосудов и в любом слое, в результате чего при исследовании выявляют «набор» различных маркеров иммуноопосредованного поражения сосудов в любых сочетаниях или изолированно. Повышенный уровень атБ2ГП является маркером антифосфолипидного синдрома (васкулопатия), при котором развивается поражение преимущественно сосудов большого и среднего калибра, проявляющееся тромбозами и геморрагиями. Для выявления атБ2ГП используют иммуноферментный анализ. Повышенный уровень АЭат - маркер различных васкулитов преимущественно крупного и среднего калибра. Для выявления АЭат используют непрямую реакцию иммунофлюоресценции. Повышенный уровень aтClq - маркер васкулитов мелких сосудов и капилляров, проявляющихся геморрагиями. Для выявления aтClq используют иммуноферментный анализ. Повышенный уровень криоглобулинов - маркер криоглобулинемического васкулита, сопровождающегося поражением мелких сосудов и капилляров. Для выявления криоглобулинов проводят инкубацию сыворотки крови при температуре 4°С в течение 5 суток, при появлении осадка - криокриципитата - определяют криокрит, равный соотношению объема криокриципитата к объему сыворотки. Определение активности РФ осуществляют при исследовании сыворотки с растворенными криоглобулинами (инкубирующиеся при 37°С) и супернатанта (ранее находящегося при 4°С) путем агглютинации на частицах латекса.

Длительность одного курса лечения экстрагенитального хламидиоза не менее 21 дня и требуются повторные курсы со сменой антибиотиков. Противомикробные препараты, к которым определяется чувствительность хламидий или других внутриклеточных бактерий на перевиваемой культуре клеток, часто имеют низкую биодоступность и плохо или вообще не проникают внутрь сосудистой стенки. Клион - противопротозойный и противомикробный препарат, производное 5-нитроимидазола. Механизм действия его заключается в биохимическом восстановлении 5-нитрогруппы внутриклеточными транспортными протеинами анаробных микроорганизмов и простейших. Восстановленная 5-нитрогруппа взаимодействует с ДНК клетки микроорганизмов, ингибируя синтез их нуклеиновых кислот, что ведет к гибели бактерий. Он активен в отношении бактерий-ассоциантов хламидийной инфекции, в том числе к патогенным формам бактероидов, хорошо проникает во все ткани и жидкости организма. Сульфаниламиды усиливают противомикробное действие препарата. Препарат стимулирует репаративные процессы. Разрешен для применения у детей. Бисептол - комбинированный антибактериальный препарат с широким спектром бактерицидного действия, механизм которого обусловлен блокированием биосинтеза фолатов в микробных клетках (сульфаметоксазол нарушает синтез дигидрофолиевой кислоты, а триметоприм препятствует превращению дигидрофолиевой кислоты в тетрагидрофолиевую). Бисептол активен к большинству микроорганизмов, в том числе и к хламидиям, быстро и полностью абсорбируется из желудочно-кишечного тракта, хорошо проникает во все ткани и жидкости организма, разрешен для применения у детей.

Вне зависимости от наличия инфекционных агентов, т.е. хламидийно-ассоциированной или иной инфекции, при выявлении иммуноопосредованных маркеров в значениях атБ2ГП≥5U/ml, АЭат≥1:10, aтClq≥10U/ml, криоглобулины в виде - >0% и/или РФ≥1:20 в любом их сочетании или изолированно проводят лечебное воздействие, состоящее из 4-х ежедневных процедур лейкоцитафереза с адсорбцией на аутолейкоцитах клиона в разовой дозе 500 мг в сочетании с пероральным приемом бисептола в разовой дозе 480 мг. Метод лейкоцитафереза с адсорбцией на лейкоцитах фармакопрепаратов увеличивает биодоступность последних в очаги воспаления. Через 4-5 недель для контроля повторно исследуют для обнаружения хламидий, ассоциированных с ними возбудителей и других внутриклеточных микроорганизмов путем указанных методов диагностики возбудителей, т.е. культуральным, генетическим методами. При обнаружении в контрольном исследовании хламидий и/или других ассоциированных с ними и ранее не обнаруженных бактериальных возбудителей диагностируют хроническую скрытую бактериальную инфекцию с поражением сосудистой стенки.

Предложенный способ диагностики прошел клинические испытания на базе Института мозга человека им. Н.П.Бехтеревой РАН при обследовании 8 больных с хроническим скрытым бактериальным поражением сосудов различных типов и различных сосудистых бассейнов. При обследовании пациентов использовался комплекс из клинико-лабораторного обследования, включающих дуплексное и допплерографическое исследование сосудов, электроэнцефалографию (ЭЭГ), позитронно-эмиссионную томографию (ПЭТ), магнитно-резонансную томографию (МРТ), МРТ - ангиографию, спиральную компьютерную томографию - ангиографию. В ходе клинических испытаний было улучшено качество диагностики и лечения больных с хронической и острой патологией сосудов различных типов и бассейнов (включающих и сосуды центральной нервной системы), у которых предшествующие диагнозы не были связаны с инфекционно-воспалительными процессами (например, хроническая недостаточность мозгового кровообращения, вертебро-базиллярная недостаточность на фоне остеохондроза, мигрень, эпилепсия), с аутоиммунными болезнями (например, системная красная волчанка), а также с другими заболеваниями, поскольку было выявлено не только даже минимально выраженное иммунологически-опосредованное поражение сосудов, но и выделены скрытые бактериальные возбудители, инициирующие и поддерживающие это состояние, что позволило адекватно и точно корректировать лечение пациентов.

Пример 1. Больная Б., 53 года. Предварительный диагноз: хроническая недостаточность мозгового кровообращения с преимущественным поражением вертебро-базиллярного бассейна. Атеросклероз. Гипертоническая болезнь II-III. Хронический пиелонефрит. В анамнезе - невынашивание беременности. В табл. 1 представлены данные исследований.

Таблица 1
	исходно	В динамике согласно способа прототипа	Через 4-5 недель согласно заявл. способу
атБ2ГП (U/ml)	11.1
АЭат	1:80
aтClq (U/ml)	≥10	способ
Криоглобулины (%) в виде криокрита	0	не
Криоглобулины - активн. РФ	≥1:20	применим
Хламидии в крови (культ/ПЦР)	Не обнаружены		Обнаружены (+/+)
Хламидии в других биолог, материалах	Не обнаружены		Не исследуют
Другие возбудители в крови	Не обнаружены		Не обнаружены
Другие возбудители в др. биол. матер.	Не обнаружены		Не исследуют
Возбудители-ассоцианты хламидий (культ./ПЦР) в крови	Не обнаружены		Патогенные формы бактероидов (+/-)
Возбуд.-ассоцииров хламдией в других исслед. биологич. материалах	Не обнаружены		Не исследуют

Другие инфекционные агенты - это инфекционные возбудители, не относящиеся к хламийно-ассоциированным инфекциям.

Согласно способу диагностики прототипа у пациентки выявлены иммунологические маркеры васкулита (атБ2ГП≥10 и АЭат≥1:10), хламидии, а также другие возбудители ассоцианты хламидийной инфекциии не обнаружены, поэтому дальнейшее применение способа невозможно. Согласно заявляемому способу диагностики выявлены иммунологические маркеры васкулита (атБ2ГП≥5, АЭат≥1:10), хламидии, а также другие возбудители-ассоцианты не выявлены, поэтому проводят лечебное воздействие из 4-х ежедневных процедур лейкоцитафереза с адсорбцией на лейкоцитах клиона в разовой дозе 500 мг в сочетании с пероральным приемом бисептола в разовой дозе 480 мг два раза в сутки. Через 4-5 недель при контрольном исследовании крови хламидии были выявлены генетическим и культуральным методами и патогенные формы бактероидов культуральным методом.

В данном примере согласно способу прототипа правильный диагноз не был установлен, поскольку он позволил лишь диагностировать антифосфолипидный синдром (по данным анамнеза и иммунологическим маркерам), но не выявил его скрытую бактериальную причину. В дальнейшем это привело бы к неправильному лечению и, как следствие, к плохому исходу заболевания. Согласно заявляемому способу диагностики была установлена инфекционная природа системного иммуноопосредованного поражения сосудов (церебральных сосудов, сосудов почек и органов малого таза) - в виде комплекса из 2-х инфекционных возбудителей - патогенных бактероидов и хламидии. Дальнейшее комплексное патогенетически обоснованное и поэтапное (с учетом 2-х возбудителей с разной антибиотикочувствительностью) лечение позволило достичь элиминации обоих возбудителей, регресса иммунозависимого синдрома и что сопровождалось значительным улучшением общего состояния, неврологического и соматического статуса пациентки.

Пример. 2. Больной П., 33 года. Предварительный диагноз. Вегето-сосудистая дистония по гипертоническому типу, цефалгический синдром сосудистого типа, эпилептический синдром с частым сенсорным, психо-патологическими и психо-вегетативными феноменами, резистентное течение, хронический пиелонефрит, ремиссия. В табл.2 представлены данные проведенных исследований.

Таблица 2
	исходно	В динамике лечения согласно способу прототипа	Через 4-5 недель согласно заявляем. способу
атБ2ГП (U/ml)	8,2
АЭат	<1:10	способ
aтClq (U/ml)	≤10	не применим
Криоглубулины (%) в виде криокрита	0
Криоглобулины активн. РФ	<1:20
Хламидии в крови (культ./ПЦР)	Не обнаружены		Не обнаруж. (-/-)
Хламидии в др.биол. материалах	Не обнаружены		Не исследуют
Возбудители-ассоц. хламидий (культ/ПЦР) в крови	Патогенные формы бактероидов		1.патог.формы бактероидов (+/-) 2. микоплазма (+/-)
Возбуд.-ассоцианты в других биол. мат.	Не обнаружены		Не исследуют
Др. инфекционные агенты в крови	Не обнаружены	-	Не обнаружены
Др. инфекционные агенты в других биол. материалах	Не обнаружены		Не исследуют

Другие инфекционные агенты - это инфекционные возбудители, не относящиеся к хламидийно-ассоциированным инфекциям.

Согласно способу прототипа поскольку маркеры васкулитов находились в пределах нормальных значений (атБ2ГП=8.2 U/ml (<10 U/ml)), то не смотря на выявленные патогенные формы бактероидов в крови, он не применим. Согласно заявляемому способу атБ2ГП=8.2 U/ml (≥5 U/ml), хламидий в крови и в других биологических материалах не выявлены. В крови определены патогенные формы бактероидов, поэтому проводят лечебное воздействие, состоящее из 4-х ежедневных процедур лейкоцитафереза с адсорбцией на аутолейкоцитах клиона в разовой дозе 500 мг в сочетании с пероральным приемом бисептола в разовой дозе 480 мг. Через 4-5 недель при контрольном исследовании в крови хламидии вновь не выявлены, но обнаружены, кроме патогенных форм бактероидов, микоплазмы.

В данном примере согласно способу прототипа правильный диагноз не был установлен (не установлен иммуноопосредованный васкулит) и поэтому в дальнейшем этот способ был не применим. Однако, даже, если бы способ все-таки применили (исходно выявлены ассоциированные с хламидийной инфекцией патогенные формы бактероидов), то «причинный» возбудитель также не был бы установлен, поскольку способ-прототип предполагает выявление в динамике только хламидии, а в данном наблюдении возбудителем оказалась микоплазма. В любом случае, руководствуясь способом прототипа правильный диагноз не был установлен, что могло бы привести к неблагоприятному исходу заболевания. Согласно заявляемому способу диагноз был установлен. После проведения патогенетически обоснованного поэтапного лечения удалось добиться полной элиминации возбудителей, это сопровождалось клиническим улучшением - нормализовалось артериальное давление, регрессировал цефалгический синдром, уменьшились, а затем полностью регрессировали эпилептические приступы.

Пример 3. Больная Л. 42 года. Предварительный диагноз: неуточненное системное заболевание (в крови выявлен антинуклеарный фактор), ранее проходила курс гормонотерапии с временным и не значительным клиническим улучшением. Цефалгический синдром оболочечно-сосудистого и мигренозного типа, хроническая недостаточность мозгового кровообращения. Гипертоническая болезнь IIIст, лакунарные ишемические инсульты по данным МРТ, участки старых мелких геморрагии. В табл. 3 представлены данные проведенных исследований.

Таблица 3
	исходно	В динамике лечения согласно способу прототипа	Через 4-5 недель согласно заявляем. способу
атБ2ГП (U/ml)	6,2
АЭат	1:20	способ
aтClq (U/ml)	11.5	не
Криоглобулины (%) в виде криокрита	2%	применим
Криоглобулины -активн. РФ	1:40
Хламидии в крови (культ./ПЦР)	Не обнаружены		Обнаружены (-/+)
Хламидии в других биолог. материалах	Не обнаружены		Не исследуют
Возбудители-ассоциан. хламидий (культ./ПЦР) в крови	Не обнаружены		Патогенные формы бактероидов (+/-)
Возбуд.-ассоцианты в других биол. матер.	Не обнаружены		Не исследуют
Другие инфекцион. агенты в крови	Грибы кандида	-	Не обнаружены
Другие инфекцион. агенты в других биолог, материалах	Грибы кандида в носоглотке		Не исследуют

Согласно способу диагностики прототипа у пациентки были выявлены 4 из 5 исследуемых маркеров иммуноопосредованного поражения сосудов, однако, не только хламидий, но и возбудители-ассоцианты хламидийной инфекции обнаружены не были. Выявленные грибы кандида не ассоцианты хламидийной инфекции, они являются проявлением сниженного иммунитета и в связи с этим этот способ диагностики не применим.

Согласно заявляемому способу диагностики выявлены все 5 из 5 исследуемых маркеров иммуноопосредованного поражения сосудов. Ни хламидий, ни их ассоциантов не обнаружено. Определены грибы кандида, поэтому провели лечебное воздействие (фармакологическую пробу), состоящее из 4-х ежедневных процедур лейкоцитафереза с адсорбцией на аутолейкоцитах клиона в разовой дозе 500 мг в сочетании с пероральным приемом бисептола в разовой дозе 480 мг. Через 4-5 недель при контрольном исследовании в крови обнаружены хламидии (методом ПЦР) и их возбудители-ассоцианты - патогенные формы бактероидов (выявлены культуральным методом).

В этом примере согласно способу диагностики прототипа правильный диагноз установлен не был несмотря на выявление «перекрестного иммунологического синдрома», характерного для хламидийной инфекции. В дальнейшем пациентке продолжали бы назначать гормональную и цитостатическую терапию, что привело бы к дальнейшему ухудшению ее состояния (о снижении иммунитета уже свидетельствовали выявленные в крови грибы кандида). Согласно заявляемому способу диагностики выявлен был не только перекрестный иммунологический синдром, но и определена скрытая бактериальная инфекция в виде хламидии и патогенных форм бактероидов. Дальнейшее патогенетически обоснованное этапное лечение, на основе заявленного способа диагностики, направленное на элиминацию выявленных возбудителей, привело к регрессированию выявленных маркеров иммуноопосредованного поражения сосудов, улучшению общего состояния больной (регрессировала головная боль, стабилизировалось артериальное давление), улучшились клинико-лабораторные показатели, показатели общего иммунитета (необходимо отметить, что после проведения лечебного воздействия по заявленному способу диагностики регрессировали грибы кандида, что также говорит о положительной динамике процесса), результаты ЭЭГ, гемодинамики (по дуплексному обследованию).

Таким образом, как показывают приведенные клинические примеры, предлагаемый способ диагностики способствует улучшению качества диагностики хронической скрытой бактериальной инфекции с поражением сосудистой стенки, что приводит к улучшению результатов лечения.

Использование изобретения «Способ диагностики хронической скрытой бактериальной инфекции с поражением сосудистой стенки» по сравнению с известными решениями позволило повысить точность и эффективность диагностики хронических заболеваний сосудов, которые ранее или вообще не связывали с инфекционным и иммунозависимым (иммуноопосредованным) поражением или расценивали как системный аутоиммунный процессе, поскольку инфекционный агент не был определен. Кроме того, определяется не только ведущий возбудитель, но и его ассоцианты, а учитывая, что все эти патогены могут иметь различную антибиотикочувствительность и имеют тенденцию развивать перекрестную резистентность и требуют поэтапного лечения, то определение этих факторов имеют большую значимость. Предложенный способ диагностики был апробирован в Институте мозга человека им. Н.П.Бехтеревой Российской Академии Наук на практике при лечении больных с сосудистыми заболеваниями головного и спинного мозга и с поражениями других органов и может быть рекомендован как способ диагностики заболеваний сосудов различного типа в любых органах и системах организма человека. Способ способствует улучшению качества диагностики и, как следствие, приводит к улучшению результатов лечения хронических иммунологически опосредованных заболеваний сосудов, ассоциированных с группой бактериальных скрытых инфекций. Учитывая, что симптомы этой патологии разнообразны, например, клинические проявления поражения церебральных сосудов имитируют мигрень, эпилепсию, хроническую недостаточность мозгового кровообращения с развитием сосудистой деменции, аутизм, то правильно выявленный этилогический фактор имеет не только клиническое, но и важное социальное значение. Предложенный способ диагностики точен, информативен, поскольку определяет комплекс значимых для установления диагноза критериев.

Способ диагностики хронической скрытой бактериальной инфекции с поражением сосудистой стенки, заключающийся в том, что после предварительного диагноза заболевания сосудов в сыворотке крови пациента определяют антитела к бета2-гликопротеину 1 (атБ2ГП), антитела к эндотелию (АЭат), антитела к Clq фактору комплемента (ат Clq), криглобулины (КГ) в виде криокрита и активности ревматоидного фактора (РФ) и при выявлении атБ2ГП больше или равно 5УЕ/мл, АЭат больше или равно 1:10, arClq больше или равно 5 УЕ/мл, КГ в виде криокрита больше 0%, РФ больше или равно 1:20 в любом их сочетании или изолировано проводят лечебное воздействие, состоящее из четырех ежедневных процедур лейкоцитафереза с адсорбцией на аутолейкоцитах клиона в разовой дозе 500 мг в сочетании с пероральным приемом бисептола в разовой дозе 480 мг, через 4-5 недель от начала лечения проводят контрольное исследование крови для обнаружения инфекционных возбудителей при помощи культурального и генетического методов диагностики и при обнаружении бактериальных возбудителей диагностируют хроническую скрытую бактериальную инфекцию с поражением сосудистой стенки.