Противоопухолевые комбинации, содержащие производные таксанов

Изобретение относится к медицине и фармацевтической промышленности, а именно к комбинации, содержащей ацетоциклопропил-таксотер и трастузумаб, предназначенной для лечения рака молочной железы, для лечения разновидностей рака, резистентных к таксоидам. 2 н.п. ф-лы, 1 табл.

 

Настоящее изобретение относится к комбинациям ацетилциклопропил-доцетаксела и трастузумаба, известного под торговым наименованием Герцептин (Herceptin), которые являются терапевтически полезными в лечении неопластических (относящихся к новообразованию) заболеваний.

Структура ацетоциклопропил-таксотера представляет собой следующее:

Как правило, используемые дозы, которые зависят от индивидуальных факторов для субъекта, который подлежит лечению, составляют от 1 до 100 мг/кг при внутрибрюшинном введении или от 1 до 100 мг/кг при внутривенном введении.

Моноклональное антитело против ErbB2, также известное как трастузумаб, описано в европейском патенте EP 153114 как мышиное антитело, которое связывает антиген рака молочной железы человека, который также связывается со ссылочным антителом, выбранным из перечня гибридом, включающего в себя ATCC HB 8488 (260F9), ATCC HB 8490 (113F1), ATCC HB 8486 (266B2), ATCC HB 8484 (C11), ATCC HB 8697 (33F8), ATCC HB 8485 (317G5), ATCC HB 8696 (520C9), ATCC HB 8662 (260F9-1C9). Герцептин (Herceptin) продуцируется широкомасштабно культивируемой генно-инженерной клеточной линией яичника китайского хомяка (CHO), секретирующей антитело в культурную среду. Антитело очищают от культуральной среды CHO с использованием стандартных способов хроматографии и фильтрации. Герцептин (Herceptin) представляет собой продукт, который зарегистрирован почти повсюду в мире.

К настоящему моменту было обнаружено, и это касается изобретения, что эффективность ацетилциклопропил-доцетаксела может быть значительно улучшена, если его вводить в сочетании по меньшей мере с одним веществом, терапевтически эффективным в лечении злокачественных заболеваний и имеющим механизм действия, идентичный механизму действия производных таксанов или отличающийся от механизма действия производных таксанов, и которое ограничено в настоящем изобретении трастузумабом или Герцептином (HERCEPTIN).

Кроме того, так как активность продуктов зависит от используемых доз, то можно использовать более низкие дозы и увеличивать активность, наряду с понижением явлений токсичности или с замедлением их проявления посредством комбинирования факторов роста кроветворного типа, таких как G-CSF или GM-CSF, или некоторых интерлейкинов, с ацетилциклопропил-доцетакселом, или их комбинаций с другими терапевтически активными веществами.

Улучшенная эффективность комбинации в соответствии с изобретением может быть продемонстрирована посредством обнаружения терапевтического синергизма. Комбинация проявляет терапевтический синергизм, если она терапевтически превосходит каждую из составляющих, использованную как таковую при ее максимально переносимой дозе.

Для того чтобы продемонстрировать эффективность комбинации, может быть необходимо сравнить максимально переносимую дозу комбинации с максимально переносимой дозой каждой из отдельно взятых составляющих в рассматриваемом исследовании. Такая эффективность может быть оценена количественно, например, посредством десятичного логарифма (log10) убитых клеток, который определяют в соответствии со следующей формулой:

log₁₀ убитых клеток = Т-С (дни)/3,32×T_d,

в которой Т-С отражает замедление роста опухоли, которое представляет собой среднюю продолжительность достижения заданного значения (1 г, например) в днях для опухолей подлежащей лечению группы (Т) и для опухолей подлежащей лечению группы (С), и T_d представляет собой продолжительность в днях, необходимую для удвоения объема опухоли у контрольных животных [T.H. Corbett et al., Cancer, 40, 2660-2680 (1977); F.M. Schabel et al., Cancer Drug Development, Part B, Methods in Cancer Research, 17, 3-51, New York, Academic Press Inc. (1979)]. Продукт считают активным, если log₁₀ убитых клеток больше или равен 0,7. Продукт считают очень активным, если log₁₀ убитых клеток составляет более чем 2,8.

Комбинация, используемая в ее собственной максимально переносимой дозе, в которой каждая из составляющих будет присутствовать в дозе, как правило, не превышающей свою максимально переносимую дозу, будет проявлять терапевтический синергизм в том случае, если значение log₁₀ убитых клеток больше, чем величина log₁₀ убитых клеток наилучшей составляющей при ее индивидуальном введении. Более того, ее считают более синергической, если разность log₁₀ убитых клеток составляет более 1 по сравнению с каждым из индивидуально используемых соединений.

Эффективность комбинаций на солидных опухолях может быть определена экспериментально следующим образом.

Животным, подвергаемым эксперименту, как правило мышам, подкожно трансплантируют с двух сторон по 30-60 мг опухолевого фрагмента в нулевой день. Животных, несущих опухоли, смешивают прежде, чем подвергать различным видам лечения и контроля. В случае лечения запущенных опухолей (опухоли на поздней стадии), опухолям дают развиться до желаемого размера, где животных, имеющих недостаточно развитые опухоли, исключают. Для осуществления лечения и контроля выбранных животных распределяют произвольно. Животные, не несущие опухоли, также могут быть подвергнуты аналогичным видам лечения, что и животные-опухоленосители, с тем, чтобы иметь возможность отделить токсический эффект от специфического эффекта на опухоль. Химиотерапию, как правило, начинают проводить с 3-22 дня после трансплантации, в зависимости от типа опухоли, и за животными наблюдают каждый день. Различные группы животных взвешивают 3 или 4 раза в неделю до тех пор, пока не получат максимальную потерю веса, и затем группы взвешивают по меньшей мере один раз в неделю до завершения испытания.

Опухоли измеряли 2 или 3 раза в неделю, пока опухоли не достигнут приблизительно 2 г или пока животное не умрет, если это происходит до того, как опухоль достигнет 2 г. После умерщвления подопытных животных вскрывают.

Противоопухолевую активность определяют в соответствии с регистрируемыми различными параметрами.

Для испытания действия комбинаций на лейкозах животным трансплантируют (пересаживают) конкретное число клеток, и противоопухолевую активность определяют по увеличению продолжительности выживания мышей, подвергаемых лечению, относительно контрольных мышей. Продукт считают активным, если увеличение продолжительности выживания составляет более 27%, и считают очень активным, если оно составляет более 75% в случае лейкозов Р388.

Результаты, полученные с комбинациями ацетилпропил-доцетаксела и Герцептина (Herceptin), где комбинации используют в их оптимальной дозе, приведены в качестве примера в нижеследующей таблице.

Комбинации ацетоциклопропил-таксотера и Герцептина (Herceptin) оценивают на мышах, несущих подкожно (п/к) трансплантируемые опухоли. Модель опухоли, используемую для оценки каждой лекарственной комбинации, выбирают, как правило, исходя из ее реактивности на каждый из препаратов, когда их используют в качестве монотерапии. С использованием дробных режимов внутривенного (в/в) введения для каждого отдельно взятого препарата и для каждой комбинации проводят испытания по изучению реакции в зависимости от дозы во всем диапазоне доз. В настоящем случае выбранная опухоль представляет собой рак молочной железы человека UISO-BCA-1, полученный из злокачественного плеврального выпота. Первичная опухоль представляет собой высокодифференцированный инфильтрирующий протоковый рак молочной железы. После мастэктомии проводят радиотерапию. Через 3 года делают химиотерапию для лечения оставшегося надключичного образования (10 курсов цитоксана, метотрексата, 5-Fu (5-фторурацил) и Тамоксифена (Tamoxifen)). Во время прогрессирования болезни в течение одного месяца после терапии отбирают пробы клеток опухоли (Mehta et al., 1992). Такую модель опухоли создают у «голых» мышей из клеточного имплантата (2.10⁷ клеток) и поддерживают посредством серийного подкожного (п/к) пассажа в виде фрагмента опухоли. С использованием проточной цитометрии показали, что опухоли UISO-BCA-1 экспрессируют HER-2 (белок HER-2 принадлежит к семейству рецепторов эпидермального фактора роста), а не PgP (Р-гликопротеин) (множественная лекарственная резистентность (mdr)).

Ксенотрансплантат является резистентным к доцетакселу, чувствительным к ацетилциклопропил-доцетакселу и 5-фторурацилу и слабо чувствительным к доксорубицину, циклофосфамиду и винкристину.

Исследование проводили по схеме изучения реакции, в зависимости от дозы, по трем направлениям:

- ацетилциклопропил-доцетаксел как таковой (52,1-12,4 мг/кг/внутривенная инъекция, день 17, 21, 25)

- Герцептин (Herceptin) как таковой (40-2,5 мг/кг/подкожная инъекция, день 17, 21, 25, 29)

- комбинация с одновременной инъекцией обоих препаратов.

Были использованы следующие критерии:

- о токсичности речь шла при дозировках, индуцирующих >20% потери массы тела или >10% смертность от лекарства,

- наивысшую нетоксичную дозу (HNTD) определяли посредством log убитых клеток = (Т-С)/[3,32 × (время удвоения опухоли в днях],

(где Т означает время достижения 1-граммовой опухоли для мышей, подвергнутых лечению, и С означает время (26,2 дня) достижения аналогичного размера опухоли для контрольных мышей). Говорили об отсутствии противоопухолевой активности, когда log убитых клеток <0,7, а об эффективном лечении - когда log убитых клеток >2,8.

- Скорость реакции. Частичная Регрессия (PR) соответствует регрессии >50% от исходной опухолевой массы, а Полная Регрессия (CR) соответствует регрессии ниже предела чувствительности при пальпации.

- Терапевтический Синергизм. Комбинация имеет терапевтический синергизм, если она более активна, чем любой из препаратов отдельно (по меньшей мере на 1, исходя из log убитых клеток).

Комбинация ацетоциклопропил-таксотера и Герцептина в опухоли UISO-BCA-1 молочной железы человека, ксенотрансплантированной «голым» мышам
Дозировка в мг/кг/день (общая доза в мг/кг)	Смерт. исходы от введения лекарст. препар.	% bwl на крайнем упадке сил	(Т-С) дни	log убитых клеток	CR	TFS d121
Внутривенная инъекция ацетоциклопропил-таксотера (день 17, 21, 25)	Подкожная инъекция Герцептина (день 17, 21, 25, 29)
52,1 (156,3) 32,3 (96,9) 20,0 (60,0) 12,4 (37,2)	- - - -	2/8 0/8 0/8 0/8	7,2 5,2 0,5 0,5	- 20,8 6,0 1,8	- 1,3 0,4 0,1	- 0/8 0/8 0/8	- 0/8 0/8 0/8
- - - -	40,0 (160,0) 25,0 (100,0) 10,0 (40,0) 2,5 (10,0)	0/7 0/8 0/8 0/8	0,5 +13,8 +14,4 +11,1	0,6 0,6 0,2 1,4	0,0 0,0 0,0 0,1	0/7 0/8 0/8 0/8	0/7 0/8 0/8 0/8
52,1 (156,3) 32,3 (96,9) 32,3 (96,9) 32,3 (96,9) 32,3 (96,9) 20,0 (60,0) 20,0 (60,0) 20,0 (60,0) 20,0 (60,0) 12,4 (37,2) 12,4 (37,2) 12,4 (37,2) 12,4 (37,2)	40,0 (160,0) 40,0 (160,0) 25,0 (100,0) 10,0 (40,0) 2,5 (10,0) 40,0 (160,0) 25,0 (100,0) 10,0 (40,0) 2,5 (10,0) 40,0 (160,0) 25,0 (100,0) 10,0 (40,0) 2,5 (10,0)	4/8 2/8 0/8 1/8 0/8 0/8 0/8 0/8 0/8 0/8 0/8 0/8 0/8	14,9 4,7 5,9 5,5 3,8 0,5 2,5 2,9 4,7 3,7 0,9 1,3 +5,6	- - 53,9 - 43,8 24,2 34,2 25,4 34,6 21,6 9,5 5,0 3,7	- - 3,3 - 2,6 1,5 2,1 1,5 2,1 1,3 0,6 0,3 0,2	- - 6/8 - 6/8 0/8 0/8 1/8 2/8 0/8 0/8 0/8 0/8	- - 0/8 - 2/8 0/8 0/8 1/8 0/8 0/8 0/8 0/8 0/8
Время удвоения опухоли = 5,0 дней. Средняя опухолевая масса на группу = 125 мг. Время достижения 1-граммовой опухоли у контрольных мышей = 26,2 дня. Используемые сокращения: bwl = потеря массы тела, Т-С = замедление роста опухоли, CR = полная регрессия

Эта комбинация является синергической, с активностью, большей, чем на единицу log убитых клеток, по сравнению с активностью, наблюдаемой для наилучшего отдельно взятого препарата, ацетилциклопропил-доцетаксела. В этом эксперименте важно отметить, что наивысшая нетоксичная доза ацетилциклопропил-доцетаксела (32,3 мг/кг на инъекцию, общая доза 96,9 мг/кг), введенная с наименьшей дозой Герцептина (2,5 мг/кг/день, общая доза 10 мг/кг), является синергической, с log убитых клеток, равным 2,6, по сравнению с 1,3 для ацетилциклопропил-доцетаксела как такового, использованного в его наивысшей нетоксичной дозе. Кроме того, посредством комбинации достигают полной регрессии (у 6/8) и длительного времени выживания свободных от опухоли организмов (у 2/8) по сравнению с отсутствием регрессии для ацетилциклопропил-доцетаксела как такового. Хорошую противоопухолевую активность наблюдали при введении 7 сочетанных доз.

В частности, использование комбинаций может давать преимущества в плане возможности применения составляющих в значительно более низких дозах, чем дозы, в которых их используют при индивидуальном введении.

В таблице выше приведены суммарная реакция на терапию и наивысшая нетоксичная доза для отдельно взятых препаратов и комбинации для каждого направления исследования.

Настоящее изобретение, следовательно, относится также к фармацевтическим композициям, содержащим комбинации в соответствии с изобретением.

Компоненты комбинации могут быть введены одновременно, почти одновременно, отдельно или с разбивкой в течение некоторого периода, с тем, чтобы добиться максимальной эффективности комбинации; где для каждого введения возможно варьирование его длительности, от быстрого введения до непрерывной перфузии.

В результате для целей настоящего изобретения комбинации не должны быть ограничены исключительно комбинациями, которые получают путем физического соединения составляющих, но также и комбинациями, которые допускают отдельное введение, которое может быть одновременным или с разбивкой в течение некоторого периода.

Композиции в соответствии с изобретением представляют собой предпочтительно композиции, которые могут быть введены парентерально. Однако такие композиции могут быть введены перорально, подкожно или интраперитонеально в случае локализованных регионарных видов терапии.

Композиции для парентерального введения, как правило, представляют собой фармацевтически приемлемые стерильные растворы или суспензии, которые необязательно могут быть получены, при необходимости, в момент их применения. Для получения неводных растворов или суспензий могут быть использованы природные растительные масла, такие как оливковое масло, кунжутное масло, или жидкие нефтепродукты или органические сложные эфиры, которые могут быть введены в виде инъекции, такие как этилолеат. Стерильные водные растворы могут состоять из раствора продукта в воде. Водные растворы подходят для внутривенного введения, при условии, если рН надлежащим образом корректируют, и приготавливают изотонический раствор, например, с достаточным количеством хлорида натрия или глюкозы. Стерилизация может быть осуществлена посредством нагревания или с помощью любого другого средства, которое не сказывается отрицательно на композиции. Комбинации могут быть получены также в виде липосом или могут быть ассоциированы с носителями, такими как циклодекстрины или полиэтиленгликоли.

Композиции для перорального, подкожного или внутрибрюшинного введения предпочтительно представляют собой водные суспензии или растворы.

В комбинациях согласно изобретению, составляющие которых могут быть введены одновременно, отдельно или с разбивкой во времени, особенно предпочтительным является содержание производного таксана, соответствующее 10-90% по массе относительно массы комбинации, с возможностью варьирования этого содержания в соответствии с природой ассоциированного вещества, с искомой эффективностью и с природой рака, который подлежит лечению.

Комбинации согласно изобретению особенно эффективны в лечении разновидностей рака молочной железы, яичника или легкого, а также меланомы и лейкоза. Они особенно эффективны при лечении разновидностей рака, резистентных к обычно используемым таксоидам, таким как Таксол (Taxol) или Таксотер (Taxotere). Их более предпочтительно использовать при лечении разновидностей рака молочной железы, резистентных к Таксолу и/или Таксотеру.

1. Фармацевтическая комбинация для лечения рака молочной железы, содержащая соединение формулы 1

и трастузумаб.

2. Применение соединения формулы (1)

для получения фармацевтической комбинации по п.1 для лечения разновидностей рака, резистентных к таксоидам.