Способ приготовления противотуберкулезного лекарственного препарата

Изобретение относится способу приготовления противотуберкулезного лекарственного препарата, содержащего изониазид и наночастицы серебра. Заявленный способ заключается в том, что последовательно растворяется в дистиллированной воде 1-5% мас. хитозана и/или 6-10% мас. изониазида, раствор нагревается до 45-55°С, добавляется стабилизатор, выбранный из полиэтиленгликоля или желатина, в количестве 5-40% мас. и все перемешивается до полного их растворения. Затем добавляется цитрат аммония в количестве 1 г на 1 л раствора при перемешивании, проводится электрохимическое растворение серебряного анода в течение 10-30 мин из расчета выхода наночастиц серебра в водный раствор стабилизаторов 2-15 мг на 1 л и добавляется изониазид, если ранее он не был добавлен. Изобретение обеспечивает получение высокоэффективного препарата для лечения туберкулеза, в котором компоненты препарата проявляют синергетический эффект и снижают резистентность микобактерий туберкулеза к различным антибиотикам. 3 табл., 1 ил., 7 пр.

 

Изобретение относится к медицине, в частности к лекарственным противотуберкулезным средствам, и может быть использовано при получении препаратов на основе изониазида для лечения лекарственно-устойчивых форм туберкулеза.

К основным проблемам лечения туберкулеза относятся ограниченность арсенала противотуберкулезных средств, быстрое развитие устойчивых форм микобактерий туберкулеза (МБТ) на фоне лечения и, как следствие, рост числа больных, инфицированных первично устойчивыми МБТ к основным противотуберкулезным препаратам. Поэтому постоянно идет поиск новых противотуберкулезных препаратов, а также путей повышения эффективности известных.

Для устранения лекарственной устойчивости противотуберкулезные средства применяют в композиции с веществами потенцирующего действия.

Так, известен препарат RU 2003335 С1 («Способ лечения деструктивного туберкулеза легких с массивным бактериовыделением», ЯКУТСКИЙ ФИЛИАЛ НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКОГО ОБЪЕДИНЕНИЯ «ФТИЗИОПУЛЬМОНОЛОГИЯ»), заключающийся в растворении противотуберкулезных препаратов в серебряной воде. Серебряную воду для этого получают электролитическим путем. Следовательно, в процессе электролиза в воду переходят ионы металла, крайне нестабильные во времени, склонные к окислению и химическому взаимодействию с компонентами противотуберкулезной системы.

В CN 101225533 А описан способ получения наноразмерных частиц серебра электрохимическим путем с добавлением стабилизаторов, например цитрата аммония. Способ включает смешивание нитрата серебра с цитратом аммония, погружение в указанную смесь двух серебряных электродов.

При использовании нитрата серебра часть соли остается в продукте - растворе наночастиц серебра. Несмотря на стабильность наноразмерных частиц серебра, получаемых указанным способом, применение нитрата серебра делает невозможным использование таких частиц в составе противотуберкулезного лекарственного средства ввиду токсичности нитрата серебра. В отличие от данного метода предлагаемый нами способ получения противотуберкулезного препарата позволяет не только синтезировать коллоидный раствор наночастиц серебра, не содержащий посторонних примесей, но и добиться его совместимости с изониазидом. Кроме того применение противотуберкулезного препарата, полученного по заявляемому способу, позволяет добиться максимального терапевтического эффекта.

Из WO 2002085385 А2 известно добавление хитозана к антимикробным нанокристаллическим порошкам металла, в частности серебра, которые используются для лечения туберкулеза. В указанном семействе патентов рассматривается ингаляционное применение антимикробных нанокристаллических порошков. В отличие от указанного патента заявляемый способ приготовления противотуберкулезного лекарственного средства позволяет получать продукт, содержащий водный раствор стабилизированных наночастиц серебра и изониазид, допустимый к парентеральному введению (инъекции). Кроме того, как уже указывалось выше, заявляемый способ позволяет получать нетоксичный не содержащий солей металлов препарат.

Ближайшим к заявляемому изобретению является препарат RU 2008142461 А («Комбинированный лекарственный препарат противотуберкулезного действия, ООО «НПО «ЛИКОМ»), заключающийся в совместном применении изониазида и наночастиц серебра. Следует отметить, что для приготовления противотуберкулезного препарата используются наночастицы серебра, полученные из водного раствора путем вакуумирования, что нарушает не только оболочку, сформированную из стабилизатора, но и первоначальные свойства наночастиц серебра.

Целью предлагаемого изобретения является создание высокоэффективного препарата для лечения туберкулеза, содержащего помимо известных химиотерапевтических средств компоненты, оказывающие синергетический эффект и снижающие резистентность микобактерий туберкулеза к различным антибиотикам, а также расширение его спектра действия.

Поставленная цель достигается следующим образом.

В дистиллированной воде растворяются органические стабилизаторы (5-40% мас.), выбранные из желатина, полиэтиленгликолей, и неорганический стабилизатор (цитрат аммония однозамещенный, 0,1% мас.), хитозан (1-5% мас.), затем в полученном растворе проводится электрохимическое растворение серебряного анода. Изониазид в количестве 6-10% мас. вводится либо перед электролиза, либо после него.

Получение водного раствора наночастиц серебра электрохимическим методом в присутствии органических и неорганических стабилизаторов позволяет создать препарат с высокими противомикробными свойствами, оказывающий синергетическое действие при совместном применении с другими лекарственными средствами. Кроме того, наночастицы серебра имеют развитую поверхность массообмена, что дает максимальный эффект подавления микрофлоры. Оболочка из стабилизатора предотвращает окисление и химическое взаимодействие с другими компонентами системы, увеличивая тем самым срок полезного действия препарата.

Введение в систему природного полисахарида хитозана придает ей уникальные свойства. Хитозан - производное хитина, легко растворимое в воде, обладает противомикробными свойствами, значительно сокращает рост бактерий, что позволяет достичь наибольшего лечебного эффекта от применения заявляемой композиции. Кроме того, он и играет роль сорбента, значит, выполняет еще и транспортную функцию, обеспечивая быструю и точную доставку лекарственного средства к органу-мишени.

Пример 1.

В дистиллированной воде при перемешивании растворяют изониазид в количестве 6% мас. и природный полисахарид хитозан в количестве 3% мас. Затем при нагревании до 45-55°С вводят полиэтиленгликоль с молекулярной массой 4000 в количестве 10% и перемешивают до полного растворения. Потом охлаждают до температуры 20-25°С. В полученный раствор при перемешивании добавляют цитрат аммония из расчета 1,0 г на 1 л раствора при перемешивании. Затем в полученную среду помещают электродную систему, где анодом служит пластина из серебра (ГОСТ Р ИСО 9001-2001), а катодом - пластина из нержавеющей стали (ГОСТ 5582-95 марка 12Х18Н10Т). При перемешивании на электроды подают стабилизированный постоянный ток плотностью 10-20 А/кв. м и напряжением 10-20 В. Электрохимическое растворение серебра ведут в течение 10-30 мин из расчета выхода наночастиц серебра в водный раствор стабилизаторов 2-15 мг на 1 л раствора. Размер получаемых частиц составляет 5-60 нм, что подтверждают данные дисперсионного анализа, полученные с помощью анализатора размера частиц Nanotrac (рис.1).

Пример 2.

Способ приготовления противотуберкулезного лекарственного препарата по п.1, отличающийся тем, что изониазид берется в количестве 8% мас., хитозан в количестве 5% мас., а в качестве органического стабилизатора используется желатин в количестве 5% мас.

Пример 3.

Способ приготовления противотуберкулезного лекарственного препарата по п.1, отличающийся тем, что хитозан берется в количестве 2% мас., а изониазид в количестве 10% мас. добавляется по завершении процесса электролиза.

Пример 4.

Способ приготовления противотуберкулезного лекарственного препарата по п.1, отличающийся тем, что хитозан берется в количестве 1% мас., в качестве органического стабилизатора используется желатин в количестве 5% мас., а изониазид в количестве 7% мас. добавляется по завершении процесса электролиза.

Пример 5.

Способ приготовления противотуберкулезного лекарственного препарата по п.1, отличающийся тем, что изониазид берется в количестве 8% мас., хитозан в количестве 2% мас., а в качестве органического стабилизатора используется полиэтиленгликоль с молекулярной массой 400 в количестве 40% мас.

Пример 6.

Способ приготовления противотуберкулезного лекарственного препарата по п.5, отличающийся тем, что изониазид берется в количестве 6% мас., хитозан в количестве 1% мас., а полиэтиленгликоль в количестве 35% мас.

Пример 7. Прототип.

Изучение подавления роста лекарственно-устойчивых изолянтов МБТ проводили методом абсолютных концентраций с использованием плотной питательной среды Левенштейна-Йенсена. Материал для исследования был получен в лаборатории ГУЗ ЯО «Областная туберкулезная больница» от 50 больных различными формами туберкулеза легких. Все выделенные штаммы МБТ (740 шт.) имели лекарственную устойчивость к различным противотуберкулезным препаратам. МБТОценку результатов исследования проводили подсчетом колоний в экспериментальных пробах (примеры 1-4) в сравнении с контрольной (пример 5-прототип), где различали четыре степени подавления роста МБТ (полное, значительное, умеренное подавление и отсутствие подавления).

Результаты исследований приведены в табл.1.

Данные табл.1 подтверждают увеличение положительного эффекта от применения заявляемой композиции при лечении лекарственно устойчивых форм туберкулеза.

Помимо исследования подавляющей способности заявляемого препарата были оценены его противовирусные свойства, в частности его влияние на показатели течения ВИЧ-инфекции. На базе «Ярославского областного центра по профилактике и борьбе со СПИДом» были проведены исследования in vitro, в ходе которых взят анализ крови у 8 больных, состоящих на учете. У 6 из них - сопутствующее заболевание гепатит С. Проба I была взята вначале исследования, пробы II и III - после 2-месячного и 6-месячного применения заявляемого препарата, соответственно.

Результаты исследований отражены в табл.2 и 3.

Согласно табл.2 и 3 после 2 месяцев исследований наблюдается снижение вирусной нагрузки и увеличение количества клеток CD-4-лимфоцитов в крови.

Важно отметить, что применение заявляемого препарата не оказало никаких побочных эффектов на формулу крови и биохимические показатели.

Таблица 1
Результаты испытания подавляющей способности противотуберкулезных препаратов на рост ЛУ МБТ
Степень подавления роста ЛУ штаммов МБТ	Пример 1	Пример 2	Пример 3	Пример 4	Пример 5	Пример 6	Пример 7
Полное, %	82,5	73,8	77,5	81,4	79,4	77,1	37,4
Значительное, %	15	21,2	18,8	15,6	16,8	20,0	30,4
Умеренное, %	2,5	3,7	3,7	2,7	3,3	2,9	9,7
Отсутствие. %	0	1,3	0	0,3	0,5	0	2,5
Всего	100	100	100	100	100	100	100

Таблица 2
Вирусная нагрузка до и после применения препарата
№ пациента	№ пробы	Вирусная нагрузка
пример 1	пример 2	пример 3	пример 4	пример 5	пример 6	пример 7
1	I	16754	16760	16757	16723	16754	16755	16750
	II	15643	14233	15782	16007	15290	15673	16774
III	14712	12651	12227	13514	13741	14111	16723
2	I	5417	5403	5521	5629	5424	5479	5428
	II	5128	5200	5478	5015	5138	5003	5410
III	4380	4456	4901	4781	4500	4289	5400
3	I	10982	10927	10956	10783	10789	10892	10990
	II	9891	10113	9903	9567	9561	9800	10993
III	7562	8251	8560	8014	8001	8236	10981
4	I	8814	8725	8898	8856	8821	8867	8913
	II	8712	8400	8361	8224	8367	8009	8874
III	6065	5814	7511	6996	7006	7159	8870
5	I	50873	50096	51114	50527	50078	51001	50548
	II	45620	42790	46573	43561	46081	47207	50500
III	32081	30098	34219	35800	34200	35692	50481
6	I	21863	21513	21744	21762	21901	21872	21007
	II	18034	18001	19540	18992	18650	18900	20984
III	16590	15300	17016	16003	16520	17007	20900
7	I	30025	30112	30277	30671	31009	30810	30019
	II	28549	29310	28780	29006	28379	27964	29921
III	25800	26755	25555	27953	26300	25019	29956
8	I	78923	78214	79900	78160	79042	78231	78615
	II	73005	65060	72187	71923	73116	72000	78593
III	61290	58116	64253	67500	60067	63214	78550

Таблица 3
Количество CD-4-лейкоцитов до и после применения препарата
№ пациента	№ пробы	Количество CD-4-клеток
пример 1	пример 2	пример 3	пример 4	пример 5	пример 6	пример 7
1	I	321	314	330	319	328	334	315
	II	367	360	378	353	369	357	320
III	450	423	440	468	455	441	324
2	I	532	541	529	538	542	550	533
	II	580	613	687	592	590	601	537
III	670	668	690	667	681	684	550
3	I	333	337	341	346	350	332	337
	II	384	390	378	384	392	379	343
III	449	432	456	449	461	448	351
4	I	478	463	444	435	459	442	430
	II	521	512	498	470	507	515	447
III	584	567	558	555	572	564	479
5	I	200	205	207	221	237	216	214
	II	267	254	267	281	265	254	226
III	312	353	300	378	362	320	250
6	I	316	323	317	311	320	327	315
	II	347	378	389	376	383	367	327
III	479	456	428	420	431	448	349
7	I	298	301	274	293	311	281	285
	II	349	370	338	328	338	348	299
III	401	427	390	411	420	420	307
8	I	187	190	188	191	205	183	201
	II	253	215	227	249	254	240	215
III	302	284	300	305	308	300	229

Способ приготовления противотуберкулезного лекарственного препарата, включающий смешение изониазида и наночастиц серебра, отличающийся тем, что в целях повышения эффективности дополнительно содержит хитозан, наночастицы серебра вводятся в виде их водного раствора, а процесс получения препарата заключается в последовательном растворении в дистиллированной воде изониазида в количестве 6-10 мас.% и хитозана в количестве 1-5 мас.% или хитозана в количестве 1-5 мас.%, нагреве до 45-55°С, добавлении стабилизаторов, выбранных из полиэтиленгликоля или желатина, в количестве 5-40 мас.% и перемешивании до полного их растворения, добавлении цитрата аммония в количестве 1 г на 1 л раствора при перемешивании, проведении электрохимического растворения серебряного анода в течение 10-30 мин из расчета выхода наночастиц серебра в водный раствор стабилизаторов 2-15 мг на 1 л, добавлении изониазида в количестве 6-10% в случае, если ранее он не был добавлен.