Способ моделирования очагов диссеминированного постспленэктомического спленоза

Изобретение относится к экспериментальной медицине, преимущественно к хирургии, патофизиологии, патанатомии, и может быть использовано при изучении морфогенеза постспленэктомического спленоза, а также при разработке новых методов аутотрансплантации селезеночной ткани, лечения гипоспленизма. Для этого крысам линии Wistar выполняют открытую спленэктомию, удаленную селезенку подвергают деструкции вне брюшной полости и выделившуюся кровь вводят обратно через разрез в свободную брюшную полость. Способ обеспечивает моделирование очагов спленоза, максимально приближеннных по этиологии и морфогенезу к спленозу человека, что дает возможность изучать механизмы развития «неоселезеночной» ткани, ее функциональную активность, степень компенсации иммунной защиты организма при данном процессе. Применение данного способа в экспериментальных условиях несложно и технически удобно. 2 пр., 7 ил.

 

Изобретение относится к экспериментальной медицине, преимущественно к хирургии, патофизиологии, патанатомии, и может быть использовано при изучении морфогенеза постспленэктомического спленоза, а также при разработке новых методов аутотрансплантации селезеночной ткани, лечения гипоспленизма.

Известно, что травмы селезенки сопровождающиеся повреждением ее капсулы и кровотечением, а также оперативные вмешательства связанные с гемостазом этих повреждений и удалением органа без аутотрансплантации ткани в 67-80% случаев приводят к спонтанному развитию очагов постспленэктомического спленоза в брюшной полости. Имеются данные, что в некоторых случаях очаги спленоза могут приводить к развитию острой кишечной непроходимости и внутрибрюшному кровотечению (см. Sikov W.M., Schiffman F.J., Weaver M. et al. Splenosis presenting as occult gastrointestinal bleeding. Am. J. Hematology. 2000. V.65. N1. P.56-61, а также Katz D.S., Moshiri M., Smith G. et all. Spontaneous hemorrhage of abdominal splenosis / // J. Comput. Assist. Tomogr. 1998. V.22. N5. P.725-727), однако большинство авторов считают, что спленоз в некоторой степени приводит к коррекции иммунных нарушений после спленэктомии (см. В.М.Тимербулатов, P.P.Фаязов, А.Г.Хасанов, и др. Спленоз в хирургической практике. Анналы хирургической гепатологии, 2007, том 12, №1, стр.90-95, а также К.А.Апарцин, P.P.Гумеров, Ю.М.Галеев, и др. Диссеминированный спленоз после спленэктомии. - Хирургия. Журнал им. Н.И.Пирогова, 2009, №10, стр.53-55). Последнее послужило основанием для создания экспериментальной модели для детального изучения степени функционирования регенерированной селезеночной ткани.

В литературе предлагается много методов аутотрансплантации селезеночной ткани (см. Морфологическая оценка аутотрансплантации фрагментов селезенки. Скуба Н.Д., Дурдыев М.Д. (Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 1984, №8, с.237), а также Григорьев Е.Г., Апарцин К.А., Матинян Н.С. Органосохраняющая хирургия селезенки. Наука. Новосибирск. 2001 г.). Однако спонтанный постспленэктомический спленоз имеет в своей основе другой морфогенез, так как он не предусматривает пересадки истинной селезеночной такни. Кроме того, известны такие недостатки методов аутотрансплантации, как некроз участка внедряемой ткани или ее лизис.

Наиболее близким к предложенному техническому решению является известный способ моделирования спленоза, описанный в статье J.J. Espert; E. Targarona; E. Bombuy; et all. Evaluation of risk of splenosis during laparoscopic splenectomy in rat model (World Journal of Surgery 2001; Jul. 25(7):882-5.).

Сущность известного способа заключается в том, что создавался ряд моделей спленоза на крысах путем открытых и лапароскопических (с использованием сложной, дорогой аппаратуры) операций. Однако при этом авторы статьи добивались развития диссеминированного постспленэктомического спленоза путем удаления селезенки после разрыва ее внутри брюшной полости, что является достаточно травматичным для экспериментального животного и может уменьшать шансы на его выживание в послеоперационном периоде.

Задачей, на решение которой направлено предложенное техническое решение, является разработка простого, не дорогостоящего и малотравматичного способа моделирования очагов диссеминированного постспленэктомического спленоза в брюшной полости для изучения степени функционирования регенерированной селезеночной ткани.

Техническим результатом, достигаемым при решении настоящей задачи, является получение очагов диссеминированного спленоза.

Указанный технический результат достигается тем, что в способе моделирования очагов диссеминированного постспленэктомического спленоза, согласно изобретению, крысам линии «Wistar» выполняют открытую спленэктомию, удаленную селезенку подвергают деструкции вне брюшной полости и выделившуюся кровь вводят обратно через разрез в свободную брюшную полость.

Изобретение иллюстрируется чертежами, на которых показано: на фиг.1 - фотография очага спленоза на поверхности желудка; на фиг.2 - фотография микропрепарата очага спленоза с большого сальника, где 2.1 - скопление эритроцитов, 2.2 - гемосидерофаги, 2.3 - скопление лимфоцитов, плазмоцитов, единичные сегментоядерные лейкоциты, 2.4 - тонкая фиброзная капсула; на фиг.3 - фотография очага спленоза на большом сальнике; на фиг.4 - фотография очага спленоза на поверхности левого яичника; на фиг.5 - фотография микропрепарата очага спленоза с большого сальника, где 5.1 - две дольки спленоза, разделенные тонкой прослойкой фиброзной ткани, 5.2 - четкая капсула; на фиг.6 - фотография среза микропрепарата на большом увеличении, где 6.1 - мегакариоцитарные клетки в очаге спленоза; на фиг.7 - фотография среза микропрепарата на большом увеличении, где видны кроветворные клетки на разных этапах созревания в очаге спленоза, а именно 7.1 - группа плазмотических клеток, 7.2 - клетки типа миелоцитов, 7.3 - палочкоядерные лейкоциты, 7.4 - группы эритроцитов.

Сущность предлагаемого метода воспроизведения очагов диссеминированного постспленэктомического спленоза заключается в том, что крысам линии «Wistar» выполняют открытую спленэктомию и обсеменение органов брюшной полости кровью из удаленной селезенки. При этом создаются условия, схожие с излитием крови селезенки в брюшную полость при ее повреждении и условия для активации механизмов роста «неоселезеночной» ткани, наиболее приближенные к имеющим место при патологии у человека.

Способ моделирования очагов диссеминированного постспленэктомического спленоза осуществляется следующим образом.

После дачи фторотанового наркоза животных фиксируют в специальном операционном столе на спине и подготавливают операционное поле. Затем осуществляется разрез в подреберье слева длиной около 1 см, выполняют открытую спленэктомию, селезенку подвергают деструкции (измельчают скальпелем). Выделившуюся из нее кровь вводят в свободную брюшную полость. Рана послойно ушивается. В послеоперационном периоде проводится антибактериальная терапия с целью профилактики септических осложнений. Животных выводят из эксперимента гильотинным методом в срок не менее 30 дней после операции, затем проводят аутопсию. Очаги предполагаемого спленоза фиксируют в 10% растворе нейтрального формалина. Затем депарафинированные срезы толщиной 3-5 мкм окрашивают гематоксилином и эозином, заливают кедровым бальзамом и покрывают покровными стеклами.

В результате проведенных нами исследований установлено, что по прошествии 30 дней после оперативного вмешательства в 77% случаев у животных развивается несколько (от 2 до 12) очагов спленоза. На 25 день после операции макроскопических очагов спленоза не обнаружено. Животные выводились нами из опыта на 25, 30, 47 63 79, 85, 99, 128 дни после операции. С помощью созданной модели впервые установлены гистологические особенности очагов спленоза. При оценке гистологических срезов очагов спленоза животных выявлены: отграниченные очаги «неоселезеночной» ткани, диффузный тип их кровоснабжения, наличие фолликулов белой пульпы (с 63 дня после вмешательства), специфичный клеточный состав, гранулы гемосидерина, ретикулярно-сосудистый каркас данных образований, отсутствие синусоидных капилляров. Сопоставляя гистологическую картину в разные дни после операции, можно выделить этапность изменений в ткани от инфильтрированного сгустка крови, отграниченного тонкой фиброзной капсулой, с наличием ретикулярных компонентов вплоть до участка истинного спленоза с признаками кроветворения.

Способ моделирования очагов диссеминированного постспленэктомического спленоза иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. Крысу (самку) массой 280 г подвергали воздействию фторотана. После наступления хирургической стадии наркоза животное фиксировали в операционном столе на спине, область левого подреберья освобождали от волосяного покрова, обрабатывалась растворами антисептиков. Выполняли разрез длиной около 1 см, в рану выводили селезенку - выполняли спленэктомию. Селезенку измельчали скальпелем и кровью из нее проводили орошение органов брюшной полости. Рану послойно ушивали. В послеоперационном периоде проводили антибактериальную терапию тилозином по 0,4 мл 5% раствора в/м в течение пяти дней. Через 30 дней животное забили гильотинным методом. В брюшной полости на большом сальнике и передней поверхности желудка найдены очаги предполагаемого спленоза - взяты для гистологического исследования. Результаты иллюстрируются фотографией очага спленоза на поверхности желудка (фиг.1) и фотографией микропрепарата очага спленоза с большого сальника (фиг.2), где 2.1 - скопление эритроцитов, 2.2 - гемосидерофаги, 2.3 - скопление лимфоцитов, плазмоцитов, единичные сегментоядерные лейкоциты, 2.4 - тонкая фиброзная капсула. При морфологическом исследовании поперечных срезов очагов «неоселезеночной» ткани выявлены специфичный клеточный состав (с большим количеством плазмоцитов) (2.1, 2.3), диффузный тип кровоснабжения, наличие ретикулярного остова, большое количество гранул гемосидерина (2.2), четкая отграниченность очага тонкой фиброзной пластинкой (2.4), однако типичная структура селезенки не сохранялась. Это доказывает, что вновь образовавшийся очаг неоселезеночной ткани не является участком сохранившейся селезенки.

Пример 2. Крыса (самка) массой 260 г подвергалась оперативному вмешательству по описанной методике. По прошествии 63 дней после операции животное выведено из опыта. В брюшной полости при аутопсии на большом сальнике было найдено два очага предполагаемого спленоза, один на поверхности яичника. Результаты иллюстрируются фотографией очага спленоза на большом сальнике (фиг.3), и фотографией очага спленоза на поверхности левого яичника (фиг.4). Гистологическое исследование срезов показало, что очаги спленоза окружены фиброзной капсулой с отходящими от нее трабекулами, клеточный состав полиморфен - типичен для селезенки крысы (имеются также клетки всех типов кроветворных ростков на разных уровнях зрелости). Результаты иллюстрируются фотографией микропрепарата очага спленоза с большого сальника (фиг.5), где 5.1 - две дольки спленоза, разделенные тонкой прослойкой фиброзной ткани, 5.2 - четкая капсула; фотографией среза микропрепарата на большом увеличении (фиг.6), где 6.1 - мегакариоцитарные клетки в очаге спленоза, и фотографией среза микропрепарата на большом увеличении (фиг.7), где видны кроветворные клетки на разных этапах созревания в очаге спленоза, а именно 7.1 - группа плазмотических клеток, 7.2 - клетки типа миелоцитов, 7.3 - палочкоядерные лейкоциты, 7.4 - группы эритроцитов. Наличие очагов кроветворения указывает на более высокую степень дифференцировки селезеночной ткани.

Использование предлагаемого способа моделирования очагов постспленэктомического спленоза обеспечивает максимальное приближение по этиологии и морфогенезу к спленозу человека, дает возможность изучить механизмы развития «неоселезеночной» ткани, ее функциональную активность, степень компенсации иммунной защиты организма при данном процессе. Применение данного способа в экспериментальных условиях несложно и технически удобно.

Способ моделирования очагов диссеминированного постспленэктомического спленоза, отличающийся тем, что крысам линии Wistar выполняют открытую спленэктомию, удаленную селезенку подвергают деструкции вне брюшной полости и выделившуюся кровь вводят обратно через разрез в свободную брюшную полость.