Производные 3-бензофуранилиндол-2-она, замещенные в положении 3, их получение и их применение в терапии

Изобретение относится к новым производным 3-бензофуранилиндол-2-она, замещенным в положении 3 формулы (I), в которой: R1 обозначает атом водорода; R2, R3, R4, одинаковые или разные, находящиеся в любом из доступных положений фенильного кольца, обозначают независимо атом водорода или атом галогена; R5 обозначает (С1-6) алкильную группу; n обозначает 1; в форме основания или кислотно-аддитивной соли, а также к лекарственному средству и фармацевтической композиции на основе этих соединений, обладающих антагонистической активностью в отношении рецептора грелина, и к применению этих соединений для получения лекарственного средства, предназначенного для профилактики и лечения ожирения, диабета, нарушений аппетита и избыточного веса. 5 н. и 3 з.п. ф-лы, 1 пр.

 

Объектом настоящего изобретения являются производные 3-бензофуранилиндол-2-она, замещенные в положении 3, их получение и применение в терапии.

Грелин представляет собой пептидный гормон, состоящий из 28 аминокислот, продуцируемый главным образом в желудке в результате пост-трансляционного процесса после расщепления прогрелина (Kojima M. et al., Nature 1999; 402:656-60). Грелин представляет собой эндогенный лиганд гипофизарного рецептора секретов гормона роста (GHSR1a).

GHS-R кодирован двумя экзонами: экзон 1 кодирует трансмембранные области (TM) 1-5, и экзон 2 кодирует ТМ 6 и 7 рецептора, связанного с протеином G (GPCR).

Оба транскрипта были идентифицированы в гипофизе и в головном мозге: один - кодирующий GPCR полной длины (GHS-R1a), и другой - кодирующий усеченный рецептор (GHS-R1b), у которого не хватает ТМ 6 и 7. Только подтип GHS-R1a активирован грелином и миметиками грелина. GHS-R1b присутствует в печени и других периферических тканях, но его функция неизвестна (Smith R.G. et al., Trends in Endocrinology and Metabolism, 2005, 16 No. 9).

Это рецептор типа родопсина с семью трансмембранными областями семейства А, связанный с Gq/фосфолипазой. В некоторых тканях рецептор грелина может также быть связан с каналами Gs/протеинкиназы А (Ueno N. et al., Endocrinology, 2004, 145, 4176-4184; Kim M.S. et al., Int. J. Obes. Relat. Metab. Disord., 2004, 28:1264-1271). Интересным образом, рецептор грелина обладает необычным свойством проявлять основную активность, независимую от лиганда (Barazzoni R. et al., Am. J. Phisiol. Endocrinol. Metab., 2004, 288:E228-E235).

Низкие уровни экспрессии грелина были документально подтверждены в разных тканях, таких как кишечник, поджедудочная железа, почки, иммунная система, плацента, яички, гипозизарные ткани, гипоталамус (Horm. Res., 2003; 59 (3):109-17).

Было показано, что грелин вовлечен в чувство голода во время приемов пищи и в инициирование приемов пищи. Циркулирующие уровни уменьшаются при приеме пищи и увеличиваются перед приемами пищи, достигая концентраций, достаточных для стимулирования голода и приема пищи. Приемы грелина внутрь стимулируют прием пищи быстро и преходящим образом, главным образом, увеличивая желание приемов пищи и число приемов пищи. Грелин стимулирует прием пищи за короткое время более эффективно, чем любая другая молекула, за исключением нейропептида Y, в сравнении с которым он обладает приблизительно одинаковой эффективностью (Wren A.M., et al., J. Clin. Endocrinol. Metab., 2001; 86:5992-5). Однако грелин является единственным в своей способности оказывать это воздействие независимо от того, будет он введен периферически или централизованно.

Это также единственное вещество млекопитающего, которое доказывает свою способность увеличивать аппетит и прием пищи, когда его вводят людям (Druce M.R., et al., Int. J. Obes., 2005; 29:1130-6; Wynne K., et al., J. Am. Soc. Nephrol., 2005; 16:2111-8).

Помимо его роли в инициировании приема пищи, грелин удовлетворяет также установленным критериям гормона, связанного с ожирением, вовлеченного в долговременное регулирование массы тела. Содержания грелина изменяются в зависимости от энергетических затрат и демонстрируют компенсирующие изменения в ответ на изменения массы тела.

Грелин преодолевает гематоэнцефалический барьер и стимулирует прием пищи, воздействуя на некоторые классические центры, регулирующие массу тела, такие как гипоталамус, задний головной мозг и компенсаторная мезолимбическая система.

Постоянное введение грелина увеличивает массу тела за счет различных заранее обусловленных воздействий на прием пищи, затрату энергии и использование запасов. Врожденное удаление грелина, или гена рецептора грелина, вызывает устойчивость к ожирению, индуцируемому питанием, и фармакологическое блокирование грелина уменьшает прием пищи и массу тела.

Существующие доказательства, кажется, способствуют роли грелина одновременно в краткосрочном инициировании приемов пищи и в долгосрочном энергетическом гомеостазе, что делает его привлекательной мишенью в качестве лекарственного средства для лечения ожирения и/или расстройств, связанных с исхуданием.

Равным образом, грелин одновременно оказывает психологические и фармакологические воздействия на эндокринную поджелудочную железу. Ацилированный биологически активный грелин продуцируется в ε-клетке, недавно описанной в панкреатических островках (Prado C.L. et al., 2004, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 101:2924-2929), потенциально являющейся локальным источником грелина, который действует на β-клетки островков. Блокирование этой функции эндогенного грелина посредством антагониста для его рецепторов резко уменьшает концентрации глюкозы при голодании, уменьшает гликемическое движение и увеличивает отклики на инсулин во время испытаний на переносимость глюкозы, наводя на мысль об ингибирующей роли грелина в контроле секреции инсулина (Dezaki K. et al., 2004, Diabetes, 53:3142-3151).

Удаление грелина у мышей (мыши грелин -/-) увеличивает инсулинозависимую секрецию глюкозы β-клетками поджелудочной железы за счет уменьшения экспрессии Ucp2 и улучшает чувствительность к периферическому инсулину (Sun Y. et al., 2006, Cell Metabolism, 3:379-386).

Антагонисты рецептора грелина могли бы таким образом регулировать чувство голода, прием пищи и их частоту, а также, в долгосрочной перспективе, вес, в частности увеличение веса, являющегося следствием диетических и терапевтических режимов. Кроме того, в рамках антидиабетического лечения, антагонисты грелина могли бы быть использованы для поддержания равновесия между инсулином и глюкозой и для контроля диабетической гиперфагии. Антагонисты грелина могли бы также быть использованы в качестве анорексических средств и/или средств для борьбы с ожирением, или при лечении диабета и его последствий.

Объектом настоящего изобретения являются соединения, отвечающие формуле (I):

в которой:

R1 обозначает атом водорода или группу (С1-6)алкил, -С(=О)(С1-6)алкил, -С(=О)арил;

R2, R3, R4, одинаковые или разные, находящиеся в любом из доступных положений фенильного кольца, обозначают независимо атом водорода, атом галогена, CN, OH, (С1-6)алкил, необязательно замещенный атомом галогена или группой ОН; пергалоген(С1-3)алкил, (С1-6)алкокси, пергалоген(С1-3) алкокси, аминокарбонил, (С1-6)алкиламинокарбонил, ди(С1-6)алкиламинокарбонил, арил, арилокси; гетероарил; при этом арил, арилоксигруппа или гетероарил необязательно могут быть замещены атомом галогена, CN, OH или (С1-6)алкильной, пергалоген(С1-3)алкильной или (С1-6)алкоксигруппой; разумеется, что по меньшей мере одна из групп R2, R3 и R4 отлична от Н, и что арильная, арилокси или гетероарильная группа необязательно может быть замещена атомом галогена, CN, OH или (С1-6)алкильной, пергалоген(С1-3)алкильной или (С1-6)алкоксигруппой;

R5 обозначает (С1-6)алкильную или (С2-6)алкенильную группу, и

n обозначает 1 или 2.

Соединения формулы (I) содержат один или несколько асимметрических атомов углерода. Следовательно, они могут существовать в форме энантиомеров или диастереоизомеров. Эти энантиомеры, диастереоизомеры, а также их смеси, включая рацемические смеси, являются частью изобретения.

Соединения формулы (I) могут существовать в форме оснований или кислотно-аддитивных солей. Такие аддитивные соли являются частью изобретения.

Эти соли могут быть получены с фармацевтически приемлемыми кислотами, но соли других кислот, используемых, например, для очистки или выделения соединений формулы (I), тоже являются частью изобретения.

В рамках настоящего изобретения подразумевают:

- атом галогена: фтор, хлор, бром или йод;

- алкильная группа: насыщенная, линейная или разветвленная, алифатическая группа; в качестве примеров можно назвать (С1-6)алкильную группу, содержащую от 1 до 6 атомов углерода, в частности (С1-4)алкильную группу, которая может представлять собой метил, этил, пропил, изопропил, бутил, изобутил, трет-бутил;

- алкенильная группа: моно- или полиненасыщенная, линейная или разветвленная, алифатическая группа, содержащая, например, одну или две ненасыщенных групп, содержащих 2-6 атомов углерода;

- галогеналкильная группа: алкильная группа, один или несколько атомов водорода которой были замещены атомом галогена; например, фторалкил: алкильная группа, один или несколько атомов водорода которой были замещены атомом фтора;

- пергалогеналкильная группа: алкильная группа, все атомы водорода которой были замещены атомом галогена; например, перфторалкил - алкильная группа, все атомы водорода которой были замещены атомом фтора;

- алкоксигруппа: радикал -О-алкил, в котором алкильная группа является такой, как определенная выше;

- пергалогеналкоксигруппа: радикал -О-пергалогеналкил, в котором пергалогеналкильная группа является такой, как определенная выше, в качестве примера можно назвать трифторметоксигруппу;

- арильная группа: циклическая ароматическая группа, содержащая от 6 до 10 атомов углерода; в качестве примеров арильных групп можно назвать фенильную или нафтильную группу;

- гетероарильная группа: циклическая ароматическая группа, содержащая от 2 до 10 атомов углерода и содержащая от 1 до 3 гетероатомов, таких как азот, кислород или сера; в качестве примеров гетероарильных групп можно назвать следующие группы: фуранил, пирролил, имидазолил, пиразолил, тиенил, оксадиазолил, оксазолил, изоксазолил, фуразанил, тиадиазолил, тиазолил, изотиазолил, пиридил, пиразинил, пиримидинил, пиридазинил, а также соответствующие группы, образующиеся в результате слияния с фенильной группой, такие как, например, бензотиофеновая, бензофурановая, бензотиазольная группы и т.д.

Среди соединений формулы (I), являющихся объектами изобретения, группа соединений образована соединениями, для которых:

R1 обозначает атом водорода или группу (С1-6)алкил, -С(=О)(С1-6)алкил, -С(=О)арил;

R2, R3, R4, одинаковые или разные, находящиеся в любом из доступных положений фенильного кольца, обозначают независимо атом водорода, атом галогена, CN, OH, (С1-6)алкил, пергалоген(С1-3)алкил, (С1-6)алкокси, пергалоген(С1-3)алкокси, аминокарбонил, (С1-6)алкиламинокарбонил, ди(С1-6)алкиламинокарбонил, арил, арилокси, гетероарил, при этом подразумевается, что по меньшей мере одна из групп R2, R3, R4 отлична от Н;

R5 обозначает (С1-6)алкильную группу;

n обозначает 1 или 2;

в форме основания или кислотно-аддитивной соли.

Среди соединений формулы (I), являющихся объектами изобретения, группа соединений образована соединениями, для которых:

R1 обозначает атом водорода или группу -С(=О)(С1-6)алкил, -С(=О)арил, (С1-6)алкил; и/или

R2, R3, R4, одинаковые или разные, находящиеся в любом из доступных положений фенильного кольца, обозначают независимо атом водорода, атом галогена, в частности хлор или бром, или группу (С1-6)алкил или трифторметил, при этом подразумевается, что по меньшей мере одна из групп R2, R3, R4 отлична от Н; и/или

R5 обозначает (С1-6)алкильную группу; и/или

n обозначает 1 или 2;

в форме основания или кислотно-аддитивной соли.

Среди соединений формулы (I), являющихся объектами изобретения, другая группа соединений образована соединениями, для которых:

R1 обозначает атом водорода или группу -С(=О)метил, -С(=О)фенил, метил; и/или

R2, R3, R4, одинаковые или разные, находящиеся в любом из доступных положений фенильного кольца, обозначают независимо атом водорода, атом галогена, в частности хлор или бром, или метильную или трифторметильную группу, при этом подразумевается, что по меньшей мере одна из групп R2, R3, R4 отлична от Н; и/или

R5 обозначает метил, этил или 2-пропил; и/или

n обозначает 1 или 2;

в форме основания или кислотно-аддитивной соли.

Среди соединений формулы (I), являющихся объектами изобретения, можно, в частности, назвать следующее соединение:

соединение № 1: (+)N-[4,6-дихлор-3-(бензофуран-5-ил)-2-оксо-2,3-дигидро-1Н-индол-3-ил]-2-(4-этилпиперазин-1-ил)ацетамид;

в форме основания или кислотно-аддитивной соли.

В том, что следует ниже, под защитной группой Pg подразумевают группу, которая позволяет, с одной стороны, защитить реакционноспособную функциональную группу, такую как гидроксильная группа или аминогруппа, во время синтеза и, с другой стороны, регенерировать нетронутую реакционно-способную группу в конце синтеза. Примеры защитных групп, а также способы защиты и снятия защиты даны в Protective Groups in Organic Synthesis, Green et al., 2^nd Edition (John Wiley & Sons, Inc., New York).

Под удаляемой группой, в том, что следует ниже, подразумевают группу, которая может быть легко отщеплена от молекулы в результате гетеролитического разрыва связи с переходом электронной пары. Таким образом, эта группа может быть легко заменена другой группой во время реакции замещения, например. Такими удаляемыми группами являются, например, галогены или активированная гидроксильная группа, такая как метансульфонатная, бензолсульфонатная, п-толуолсульфонатная, трифлатная, ацетатная и т.д. Примеры отщепляемых групп, а также ссылки по их получению, даны в Advances in Organic Chemistry, J. March, 3^nd Edition, Wiley Interscience, p.310-316.

Согласно изобретению соединения общей формулы (I) можно получить способом, следующим ниже:

Соединение формулы (I), в которой R1 отлична от Н, R2, R3, R4, R5 и n являются такими, как определенные в общей формуле (I), может быть получено реакцией соединения формулы (I), в которой R1=Н, с соединением формулы (II):

в которой R1 отлична от Н и определена, как в общей формуле (I), и Hal обозначает атом галогена, например хлор, согласно методикам, известным специалистам в данной области, например, в присутствии основания, такого как K₂CO₃, NaH, t-BuO^-K⁺, в растворителе, таком как диметилформамид (ДМФ) (DMF), тетрагидрофуран (ТГФ) (THF), диметоксиэтан, диметилсульфоксид (ДМСО) (DMSO).

Соединение общей формулы (I), в которой R1=Н, может быть получено согласно одному или другому из следующих вариантов.

Реакцией соединения общей формулы (III):

с соединением общей формулы (IV):

в которых R2, R3, R4, R5 и n являются такими, как определенные в общей формуле (I), и Hal^'' обозначает атом галогена, предпочтительно хлор. Эту реакцию обычно осуществляют при помощи основания, органического или неорганического, такого как K₂CO₃, Na₂CO₃, пиридин или 4-диметиламинопиридин, в присутствии NaI или KI, в инертном растворителе, таком как ДМФ, дихлорметан, ТГФ, диметоксиэтан или толуол.

Соединение общей формулы (III) может быть получено исходя из соединения общей формулы (V):

и соединения общей формулы (VI):

в которых R2, R3 и R4 являются такими, как определенные в общей формуле (I), и Hal^' и Hal^'', одинаковые или разные, обозначают независимо атом галогена, предпочтительно хлор.

Эту реакцию обычно осуществляют при помощи пиридина или 4-диметиламинопиридина в растворителе, таком как толуол, бензол или дихлорметан, предпочтительно при температуре, находящейся в интервале от комнатной температуры до температуры кипения растворителя.

Под комнатной температурой подразумевают температуру, находящуюся в интервале от 5 до 25°С.

Соединение общей формулы (I), в которой R1=Н, может быть также получено исходя из соединения общей формулы (V):

и соединения общей формулы (VII):

в которых R2, R3, R4, R5 и n являются такими, как определенные в общей формуле (I). Эту реакцию обычно осуществляют при помощи галогенирующего агента, такого как хлорирующий агент, например хлориды фосфора, в частности PCl₅, или PCl₃, или POCl₃. Обычно реакцию осуществляют в присутствии пиридина или 4-диметиламинопиридина в растворителе, таком как дихлорметан или ДМФ.

Промежуточные соединения общей формулы (V) известны и могут быть получены согласно процессам, представленным на следующей схеме:

на которой R2, R3 и R4 являются такими, как определенные в общей формуле (I), и Hal обозначает атом галогена, например хлор.

На стадии с схемы 2 получают соединение формулы (V) исходя из соединения формулы (VIII) барботированием газообразного аммиака согласно методу, описанному в заявке FR 2714378.

То же самое соединение можно также получить восстановлением соединения формулы (Х) согласно методам, известным специалистам в данной области, например, при помощи цинка в растворителе, таком как метанол. Постадийное получение соединения формулы (Х) описано в заявке FR 2714378.

Оптически чистое соединение формулы (V) может быть синтезировано согласно стадиям d и е схемы 2, таким как описанные в заявке WO 03/008407.

Промежуточные соединения общей формулы (VIII) могут быть получены согласно способу, описанному в заявке WO 03/008407 и иллюстрируемому схемой 3:

на которой R2, R3 и R4 являются такими, как определенные в общей формуле (I), и Hal обозначает атом галогена, например хлор.

Соединение общей формулы (VII) может быть получено согласно следующему способу, иллюстрируемому схемой 4:

Соединение общей формулы (XIII) может быть получено конденсацией соединения общей формулы (IV):

в которой R5 и n определены, как в общей формуле (I), с соответствующим галогенсодержащим соединением, таким как Hal'''CH₂COOAlk, где Hal''' обозначает атом галогена, такой как хлор, и Alk обозначает алкильную группу, такую как этильная.

Предпочтительно эту реакцию осуществляют в растворителе, таком как толуол, или бензол, или диоксан.

Согласно другому варианту осуществления соединения общей формулы (I), в которой R1 обозначает алкильную группу, R2, R3, R4, R5 и n являются такими, как определенные в общей формуле (I), могут быть также получены согласно следующей схеме 5:

Согласно этой схеме соединение формулы (V) вводят в реакцию с защитной группой PG с получением соединения формулы (XIV). В качестве защитной группы амина можно использовать, например, бензимин или трет-бутилкарбамат. Эти последние вводят согласно методикам, известным специалистам в данной области, например, в присутствии основании, такого как K₂CO₃, NaOH, триэтиламин, в растворителе, таком как диоксан, ТГФ или ДМСО.

Соединение общей формулы (XV) может быть получено реакцией соединения формулы (XIV) с соединением ALK-Hal, в котором ALK представляет собой насыщенную алифатическую группу, линейную или разветвленную, содержащую от 1 до 6 атомов углерода, и Hal представляет собой атом галогена, например хлор.

Соединение общей формулы (XVI) получают исходя из соединения формулы (XV) удалением защитной группы согласно хорошо известным методикам, например, в кислой среде при помощи HCl или трифторуксусной кислоты.

Затем полученный продукт вводят в реакцию с соединением общей формулы (VII):

в которой R5 и n являются такими, как определенные в общей формуле (I). Эту реакцию обычно осуществляют при помощи галогенирующего агента, такого как хлорирующий агент, например, хлориды фосфора, в частности PCl₅, или PCl₃, или POCl₃. Реакцию обычно проводят в присутствии пиридина или 4-диметиламинопиридина в растворителе, таком как дихлорметан или ДМФ.

Необязательно, соединение формулы (I) превращают в одну из его кислотно-аддитивных солей.

Способ согласно изобретению может необязательно содержать стадию, заключающуюся в выделении желаемого продукта общей формулы (I).

В схемах 1, 2, 3, 4 и 5 исходные соединения и реагенты, когда способ их получения не описан, являются доступными в торговле или описанными в литературе, или могут быть получены по методикам, которые описаны в литературе или которые известны специалистам в данной области.

Согласно другому из его аспектов объектом изобретения являются также соединения формулы (III). Эти соединения используют в качестве промежуточных продуктов синтеза соединений формулы (I).

Согласно другому из его аспектов объектом изобретения являются также соединения формулы (XVI). Эти соединения используют в качестве промежуточных продуктов синтеза соединений формулы (I).

Следующие примеры описывают получение некоторых соединений согласно изобретению. Примеры не являются ограничивающими и приведены только для иллюстрации настоящего изобретения.

Физико-химические измерения осуществляли следующим образом: температуры плавления измеряли на приборе BUCHI B-540.

Спектры протонного магнитного резонанса (¹Н ЯМР) регистрировали на частоте 500 МГц на приборе Bruker, снабженном пультом управления Avance III. Химические сдвиги приведены в м.д. по отношению к частоте ТМС (TMS).

Все спектры регистрировали при температуре 40°С.

Сокращения, использованные для описания сигналов, следующие: с - синглет, с уш - широкий синглет, м - мультиплет, м уш - широкий мультиплет, д - дублет, д уш - широкий дублет, т - триплет, кв - квадруплет.

* = неинтегрируемый из-за перекрывания с широким пиком, принадлежащим воде.

** = неинтегрируемый из-за перекрывания с пиком, принадлежащим растворителю ЯМР.

*** = читаемый в первую очередь.

**** = наиболее обильный диастереоизомер.

***** = наименее обильный диастереоизомер.

Условия анализа методом хромато-масс-спектрометрии (ЖХ/УФ/МС) (LC/UV/MS) следующие.

Для части жидкостной хроматографии

Метод А

Колонка Kromasil C18 3,5 мкм

- Элюент А = Н₂О+0,01% TFA

- Элюент В = CH₃CN.

- Градиент от 98% А до 95% В за 10 минут, затем элюирование 95% В в течение 5 минут.

- Расход 0,3 мл/минута

- Впрыскивание 2 мкл раствора с концентрацией 0,1 мг/мл в смеси CH₃CN:Н₂О = 9:1.

Метод В

Колонка Xterra MS C18×50 3,5 мкм

- Элюент А = Н₂О+0,01% TFA

- Элюент В = CH₃CN.

- Градиент от 98% А до 95% В за 10 минут, затем элюирование 95% В в течение 5 минут.

- Расход 0,5 мл/минута

- Впрыскивание 2 мкл раствора с концентрацией 0,1 мг/мл в смеси CH₃CN:Н₂О = 9:1.

Продукты детектировали в УФ-области при 220 нм.

Для масс-спектрометрической части

- Способ ионизации: положительный электроспрей (API-ES polarité⁺)

- Развертка от 100 до 1200 а.е.м. (uma)

Тонкослойную хроматографию ТСХ (ССМ) осуществляли на пластинках с силикагелем фирмы Merck. Силикагель для колоночной флэш-хроматографии поставляется в продажу фирмой Biotage.

Все использованные растворители имели квалификацию «химически чистый» или «хроматографически чистый».

Измерения Альфа D осуществляли на поляриметре Perkin Elmer модель PE341, используя кювету с длиной оптического пути 1 дм.

В примерах синтезов:

AcOH и AcOEt обозначают соответственно уксусную кислоту и этилацетат;

MeOH, EtOH, tBuOH обозначают, соответственно, метанол, этанол и трет-бутанол;

ТГФ (THF) обозначает тетрагидрофуран;

Т_пл (Pf) обозначает температуру плавления.

Синтез 1: (4-этилпиперазин-1-ил)уксусная кислота

(i) этил(4-этилпиперазин-1ил)ацетат

В колбу загружали 8,9 мл этилпиперазина в 91,5 мл толуола. Добавляли по каплям раствор 4,1 мл этилбромацетата в 11,6 мл толуола. Оставляли реагировать при кипячении с обратным холодильником при 110°С в течение часа, концентрировали до небольшого объема и оставляли в холодильнике на 3 часа. Образовывался белый осадок, который отфильтровывали и промывали дихлорметаном. Выпаривали фильтрационные воды; получали 7 г желаемого продукта.

ТСХ: AcOEt 1/MeOH 1, Rf=0,45

(ii) (4-этилпиперазин-1-ил)уксусная кислота

Добавляли 7 г продукта, полученного на предыдущей стадии, к 190 мл 6 н. HCl и оставляли реагировать при кипячении с обратным холодильником в течение 4 часов. Выпаривали досуха, промывали смесью AcOEt 1/EtOH 1 и сушили полученное белое вещество. Получали 7 г желаемого продукта.

ТСХ: 100% МеОН, Rf=0,2

Синтез 2:

(+)3-амино-4,6-дихлор-1,3-дигидро-3-(бензофуран-5-ил)индол-2-он

(i) 3-гидрокси-4,6-дихлор-1,3-дигидро-3-(бензофуран-5-ил)индол-2-он

В колбу, снабженную механической мешалкой, в токе азота загружали 2,25 г магния для реакции Гриньяра в 15 мл безводного ТГФ. Затем добавляли смесь 13,6 г 5-бромбензофурана в 35 мл безводного ТГФ. Оставляли при перемешивании в течение часа, затем добавляли раствор 5 г 4,6-дихлор-1Н-индол-2,3-диона в 50 мл безводного ТГФ. Оставляли перемешиваться при комнатной температуре в течение четырех с половиной часов. Добавляли воду и экстрагировали этилацетатом. Отделяли органическую фазу, которую сушили над Na₂SO₄, фильтровали и выпаривали в вакууме. Продукт извлекали этилацетатом и промывали 1 н. раствором гидроксида натрия. Органическую фазу сушили над Na₂SO₄, фильтровали и выпаривали в вакууме. Твердое вещество извлекали простым этиловым эфиром и фильтровали. Получали 4,2 г желаемого продукта.

ТСХ: Гексан/EtOAc 6:4, Rf=0,35

(ii) 3,4,6-трихлор-1,3-дигидро-3-(бензофуран-5-ил)индол-2-он

В колбу, снабженную магнитной мешалкой, в токе азота загружали 4,1 г продукта, полученного на предыдущей стадии, в 40 мл дихлорметана. При 0°С добавляли 1,7 мл пиридина и смесь 1,4 мл SOCl₂ в 30 мл дихлорметана. Оставляли реагировать при комнатной температуре, затем выливали в насыщенный водный раствор NH₄Cl. Отделяли органическую фазу, которую сушили над Na₂SO₄, фильтровали и выпаривали в вакууме.

ТСХ: Гексан 7/EtOEt 3, Rf=0,65

(iii) 4,6-дихлор[[(1S)-2-гидрокси-1-фенилэтил]амино]-1,3-дигидро-3-(бензофуран-5-ил)индол-2-он изомер А и изомер В

В токе азота смешивали 4,1 г соединения, полученного на предыдущей стадии, в 50 мл дихлорметана и 3,1 г S-фенилглицинола. Оставляли реагировать в течение ночи при комнатной температуре. Отфильтровывали образовавшееся твердое вещество, фильтрационные воды выпаривали досуха и очищали на колонке с элюентом гексан/AcOEt 8:2.

Получали 0,64 г менее полярного продукта, изомер А (Т_пл = 135°С), и 1,23 г более полярного изомера.

(iiii) (+)3-амино-5,6-дихлор-1,3-дигидро-3-(4-хлорфенил)индол-2-он

В реакцию вводили 1,21 г продукта, полученного на предыдущей стадии, в смеси 20 мл дихлорметана и 15 мл метанола. Добавляли 1,26 г Pb(OAc)₄ и оставляли реагировать при комнатной температуре в течение 1 часа. Выпаривали досуха и извлекали продукт этилацетатом, затем промывали насыщенным водным раствором NaHCO₃. Органическую фазу сушили, фильтровали и концентрировали. Извлекали смесью 36 мл 3 н. соляной кислоты и 3,7 мл метанола и оставляли при перемешивании в течение ночи. Концентрировали и разбавляли смесью воды и дихлорметана. Органическую фазу промывали раствором 1 н. соляной кислоты. Водные фазы объединяли, доводили до щелочного рН водным раствором NH₃ и экстрагировали дихлорметаном. Органическую фазу сушили, фильтровали и концентрировали с получением 870 мг белого твердого продукта.

Т_пл=215-216°С

ЖХ/МС: (М+Н)⁺ = m/z 333 а.е.м.; t_уд=5,3 минуты.

Пример 1

(+)N-[4,6-Дихлор-3-(бензофуран-5-ил)-2-оксо-2,3-дигидро-1Н-индол-3-ил]-2-(4-этилпиперазин-1-ил)ацетамид и его оксалат

Способ А:

(i) 2-хлор-N-[4,6-дихлор-3-(бензофуран-5-ил)-2-оксо-2,3-дигидро-1Н-индол-3-ил]ацетамид:

В колбу, снабженную магнитной мешалкой, в токе азота загружали 0,87 г продукта, полученного в синтезе 2, 30 мл толуола, 0,21 мл пиридина и 0,21 мл хлорацетилхлорида. Оставляли реагировать при 110°С в течение 4 часов, затем вливали реакционную смесь в воду и экстрагировали этилацетатом. Органическую фазу сушили над Na₂SO₄, фильтровали и выпаривали в вакууме. Получали 900 мг бежевого твердого вещества, очищали на колонке при помощи флэш-хроматографии с использованием смеси циклогексан 8/этилацетат 2 с получением 630 мг желаемого продукта.

ТСХ: Гексан 1/AcOEt 1, Rf=0,5

(ii) (+)N-[4,6-дихлор-3-(бензофуран-2-ил)-2-оксо-2,3-дигидро-1Н-индол-3-ил]-2-(4-этилпиперазин-1-ил)ацетамид:

В колбу, снабженную магнитной мешалкой, загружали 0,61 г продукта, полученного на предыдущей стадии, 0,15 мл N-этилпиперазина (d 0,899), 0,2 г карбоната калия, 0,1 г йодида натрия в 8 мл ДМФ. Оставляли реагировать при 60°С в течение 4 часов, затем вливали реакционную смесь в воду и экстрагировали этилацетатом. Органическую фазу сушили над Na₂SO₄, фильтровали и выпаривали в вакууме. Получали 200 мг масла, соответствующего продукту, указанному в заголовке, в форме свободного основания. Получали оксалат.

Добавляли раствор щавелевой кислоты в ацетоне в раствор продукта в ацетоне. Фильтровали и получали 120 мг продукта, указанного в заголовке, в форме твердого вещества белого цвета.

Т_пл=192-196°С; [α_D]=+160°, с=0,1166% масс. МеОН.

¹Н ЯМР δ (м.д., ДМСО-d₆): 1,16 (т, J=7,1 Гц, 3H), 2,67-2,86 (м уш, 4H), 2,87-3,14 (м уш, 6H), 3,20-3,32 (м, 2H), 6,92 (с, 1H), 7,01 (с, 1H), 7,20 (с, 1H), 7,25 (д, J=9,0 Гц, 1H), 7,53 (с, 1H), 7,64 (д, J=9,0 Гц, 1H), 8,02 (с уш, 1H), 8,92 (с, 1H), 10,07 (с, 1Н).

ЖХ/МС: (М+Н)⁺ = m/z 487 а.е.м.; t_уд=4,7 минут (способ А)

Способ В:

1) В токе азота в 40 мл безводного дихлорметана, охлажденного на ледяной бане, добавляли 1,23 г PCl₅, затем медленно добавляли 430 мг кислоты, полученной в синтезе 1. Реакционную смесь оставляли перемешиваться при 0°С в течение 10 минут, затем при комнатной температуре в течение 3 часов.

2) С другой стороны, в 40 мл дихлорметана в токе азота суспендировали 1 г продукта, полученного в синтезе 2, затем добавляли 1,3 мл пиридина. Охлаждали на ледяной бане. Добавляли по каплям раствор, полученный в 1), и перемешивали при комнатной температуре в течение одного часа.

Выливали реакционную смесь в воду и экстрагировали этилацетатом. Органическую фазу промывали насыщенным раствором NaHCO₃, сушили над Na₂SO₄, фильтровали и выпаривали в вакууме. Получали 700 мг твердого вещества оранжевого цвета, очищали на колонке флэш-хроматографией, элюируя смесью этилацетат 1/метанол 1, с получением 440 мг продукта, который извлекали простым изопропиловым эфиром с получением 350 мг продукта, указанного в заголовке, в форме свободного основания.

Т_пл=146-148°С; [α_D]=+242°, с=0,1052% мас. в МеОН.

¹Н ЯМР δ (м.д., ДМСО-d₆): 0,98 (т, J=7,2 Гц, 3H), 2,29 (кв, J=7,2 Гц, 2H), 2,37 (м уш, 4H), 2,47-2,60 (м, **), 3,03*** (д, J=15 Гц, 1H), 3,09*** (д, J=15 Гц, 1H), 6,92 (д, J=1,7 Гц, 1H), 7,01 (дд, J=2,1 Гц и 0,7 Гц, 1H), 7,20 (д, J=1,7 Гц, 1H), 7,24 (дд, J=8,8 Гц и 2,0 Гц, 1H), 7,50 (д, J=2,0 Гц, 1H), 7,65 (д, J=8,8 Гц, 1H), 8,02 (д, J=2,1 Гц, 1H), 8,64 (с, 1H), 10,71 (с, 1H).

ЖХ/МС: (М+Н)⁺ = m/z 487 а.е.м.; t_уд=4,7 минут (способ В)

Соединения согласно изобретению явились объектом испытаний in vivo.

Испытание in vivo

Самцов крыс Crl CD BR (Charles River, Italie) массой 150-175 г перед их использованием помещали по меньшей мере на 7 дней в камеру с контролируемыми температурой (22±1°С) и влажностью (55±10%) и циклом свет-темнота по 12 часов. Корм и вода были доступны ad libitum. Пищу отнимали за 18 часов до вывода животных из эксперимента. Крыс выводили из эксперимента шейным вывихом, желудок извлекали хирургически, разрезанный вдоль наименьшей кривизны, и помещали в раствор Кребса (Krebs) (состава (мМ): NaCl 118,4; KCl 4,7; CaCl₂ 2,5; NaH₂PO₄ 3,7; MgSO₄ 1,2; NaHCO₃ 25; глюкоза 5,6). Уход за животными и их вывод из эксперимента осуществляли согласно международному этическому кодексу Санофи-Авентиса (Sanofi-Aventis) и международным законам, регламентирующим уход и лечение лабораторных животных (E.E.C Directive 86/609, DJL358, 1, 12 december 1987). Полоски желудочного дна около 1 см (шириной 5 мм) вырезали вдоль продольной оси, подвешивали в 20-мл ванне, заполненной раствором Кребса при 37°С, и обдували газообразной смесью 95% О₂-5% СО₂. Полоски поддерживали под нагрузкой в состоянии покоя 1 г и после промывки в среду добавляли 10 мкМ холина (предшественник ацетилхолина) и 10 мкМ индометацина (ингибитор простогландинсинтетазы), чтобы уменьшить спонтанные фазовые сокращения (Depoortere et al., Eur. J. Pharmacol., 515, 1-3, 160-168, 2003; Dass et al., Neurosciences 120, 443-453, 2003). Изотонические сокращения вызывали стимулированием электрическим полем. Два электрода из платиновой проволоки помещали на поверхность и дно ванны, в которой находился орган, и стимулирование электрическим полем осуществляли при помощи стимулятора Power Lab (AD Instruments Pty Ltd. Castle Hill, Australie), соединенного с многоканальным генератором импульсов (Ugo Basil, Varese, Italie) (Fukuda et al., Scand. J. Gastroenterol. 12, 1209-1214, 2004). Сверхмаксимальное стимулирование применяли для того, чтобы вызвать максимальные сокращения (20 Гц, ширина импульса: 2 миллисекунды; 5 вольт; последовательность импульсов каждые 2 минуты, 150 мА). Затем ток уменьшали, чтобы получить стимулирование меньше максимального (50% уменьшение максимальной способности сокращаться). Сокращения регистрировали при помощи вычислительной машины с системой регистрации и анализа данных (Power Lab, Chart 5), связанной с изотоническими преобразователями (Ugo Basil, Varese, Italie) посредством предварительных усилителей (Octal Bridge Amp). После стабилизации записывали накопленные кривые концентрация-отклик грелина (0,1 нМ-1 мкМ), с инкубацией и без инкубации (время контакта: 30 мин) молекул антагонистов. Сверхмаксимальное стимулирование электрическим полем применяли для каждой полоски в качестве эталона (100%), чтобы дать оценку откликам на тестируемое соединение. Концентрацию агониста, вызывающую 50% максимального эффекта (ЕС50), рассчитывали, используя четырехпараметрическую математическую модель Ратковского и Риди (Ratkovsky et Reedy) (Biometrics, 42, 575-582, 196), с подгонкой методом нелинейной регрессии с использованием алгоритма Левенберга-Маркварда (Levenberg-Marquard) в программной среде Everstat. Величины рКв антагонистов вычисляли по уравнению Ченга-Прусова (Cheng-Prusoff) (Kenakin et al., Competitive Antagonism, Pharmacologic Analysis of Drug-Receptor Interaction, 3^e edition, 331-373, Philadelphie, New York; Raven: Lippincott, 1997).

Соединения формулы (I) показывают антагонистическую активность в отношении рецептора грелина с CI₅₀, которые изменяются в диапазоне от 5^.10^-8 М до 1^.10^-9 М.

Например, соединение примера 1 показало CI₅₀=2,2·10^-8 М.

Таким образом, оказывается, что соединения согласно изобретению обладают антагонистической активностью в отношении рецептора грелина.

Соединения формулы (I) обладают интересными фармакологическими свойствами, такими как биологическая доступность, токсикология, селективность, метаболизм, интересными и для разработки лекарственного средства, в частности лекарственных средств, предназначенных для предупреждения или лечения любых патологий, в которые вовлечен рецептор грелина.

Таким образом, согласно другому из его аспектов объектом изобретения являются лекарственные средства, которые содержат соединение формулы (I) или соль присоединения этого последнего с фармацевтически приемлемой кислотой.

Таким образом, соединения согласно изобретению могут быть использованы для человека или животного при лечении или предупреждении различных грелин-зависимых заболеваний. Следовательно, соединения согласно изобретению могут быть использованы в качестве средств, снижающих аппетит, для регулирования аппетита, приема пищи и их частоты, а также, в долгосрочной перспективе, веса, в частности прибавки в весе, являющейся следствием диетического или терапевтического режимов. Следовательно, соединения согласно изобретению применимы, в частности, для профилактики или лечения ожирения, нарушений аппетита, диабета, избыточного веса и/или их последствий.

Согласно другому из его аспектов настоящее изобретение касается фармацевтических композиций, содержащих в качестве действующего начала соединение согласно изобретению. Эти фармацевтические композиции содержат эффективную дозу по меньшей мере одного соединения согласно изобретению или фармацевтически приемлемой соли, а также, по меньшей мере, один фармацевтически приемлемый эксципиент.

Указанные эксципиенты выбирают сообразно фармацевтической форме и желаемому способу введения среди обычных эксципиентов, которые известны специалистам в данной области.

В фармацевтических композициях согласно настоящему изобретению для перорального, сублингвального, подкожного, внутримышечного, внутривенного, топического, местного, интратрахеального, интраназального, чрескожного или ректального введения указанное действующее начало формулы (I) или его соль могут быть введены в стандартной лекарственной форме, в смеси с классическими фармацевтическими эксципиентами, животным и людям для лечения или профилактики расстройств или заболеваний, указанных выше.

Соответствующие стандартные лекарственные формы включают формы для перорального введения, такие как таблетки, мягкие или твердые желатиновые капсулы, порошки, гранулы и растворы или суспензии для перорального введения, формы для сублингвального, буккального, интратрахеального, внутриглазного, интраназального, ингаляционного введения, формы для топического нанесения, чрескожного, подкожного, внутримышечного или внутривенного введения, формы для ректального введения и имплантаты. Для топического нанесения можно использовать соединения согласно изобретению в форме кремов, гелей, мазей или лосьонов.

В качестве примера стандартная лекарственная форма соединения согласно изобретению в виде таблетки может содержать следующие компоненты:

Соединение согласно изобретению	50,0 мг
Манит	223,75 мг
Натриевая кроскарамеллоза	6,0 мг
Кукурузный крахмал	15,0 мг
Гидроксипропилметилцеллюлоза	2,25 мг
Стеарат магния	3,0 мг

При пероральном приеме прописываемая доза действующего начала в день может достигать от 0,1 до 100 мг/кг за один прием или за несколько приемов. При парентеральном введении она может достигать от 0,01 до 10 мг/кг/день.

Могут быть особые случаи, в которых применяют более высокие или более низкие дозировки; такие дозировки не выходят за рамки изобретения. Согласно обычной практике дозировка, соответствующая каждому пациенту, определяется врачом сообразно способу введения, массе и ответной реакции вышеупомянутого пациента.

Возможные сочетания

Настоящее изобретение касается также комбинаций одного или нескольких соединений согласно изобретению общей формулы (I) с одним или несколькими активными ингредиентами.

В качестве активных ингредиентов, подходящих для указанных комбинаций, можно, в частности, назвать вещества, препятствующие ожирению, и антидиабетические средства, а также римонабант, метформин или сульфонилмочевины.

Согласно другому из его аспектов настоящее изобретение касается также способа лечения патологий, указанных выше, который заключается во введении пациенту эффективной дозы соединения согласно изобретению или одной из его фармацевтически приемлемых солей.

Согласно другому из его аспектов настоящее изобретение касается также соединения формулы (I) или одной из его фармацевтически приемлемых солей для лечения патологий, указанных выше.

1. Соединение, отвечающее формуле (I):
,
в которой R1 обозначает атом водорода;
R2, R3, R4, одинаковые или разные, находящиеся в любом из доступных положений фенильного кольца, обозначают независимо атом водорода или атом галогена;
R5 обозначает (С1-6)алкильную группу;
n обозначает 1,
в форме основания или кислотно-аддитивной соли.

2. Соединение по п.1,
где R5 обозначает метил, этил или 2-пропил,
в форме основания или кислотно-аддитивной соли.

3. Соединение по п.1, представляющее собой Ν-[4,6-дихлор-3-(бензофуран-5-ил)-2-оксо-2,3-дигидро-1Н-индол-3-ил]-2-(4-этилпиперазин-1-ил)ацетамид,
в форме основания или кислотно-аддитивной соли.

4. Соединение формулы (III):

в которой R2, R3 и R4 определены в п.1 и Hal″ обозначает атом галогена.

5. Лекарственное средство, обладающее антагонистической активностью в отношении рецептора грелина, отличающееся тем, что содержит соединение формулы (I) по любому из пп. 1-3 или его аддитивную соль с фармацевтически приемлемой кислотой.

6. Фармацевтическая композиция, обладающая антагонистической активностью в отношении рецептора грелина, отличающаяся тем, что содержит соединение формулы (I) по любому из пп. 1-3 или его фармацевтически приемлемую соль.

7. Применение соединения по любому из пп. 1-3 для получения лекарственного средства, предназначенного для профилактики или лечения ожирения, диабета, нарушений аппетита и избыточного веса.

8. Соединение по любому из пп. 1-3 для профилактики или лечения ожирения, диабета, нарушений аппетита и избыточного веса.