Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и гинекологии, микроэкологии, инфекционной патологии и иммунологии, может быть использовано при ведении беременности. Способ оценки течения урогенитальных инфекций у беременных характеризуется тем, что исследуют экспрессию гена рецепторов врожденного иммунитета TLR-8 и при установлении уровня его экспрессии 26 ОЕ и ниже определяют хроническое течение урогенитальной инфекции, а при уровне экспрессии гена выше 26 ОЕ определяют острое течение урогенитальной инфекции. 1 з.п. ф-лы, 8 пр.

Основой формирования различных гестационных осложнений является влияние неблагоприятных факторов, среди которых наибольшее значение имеют факторы инфекционной природы, генетическая составляющая и изменения иммунологической реактивности организма. Воспалительные заболевания органов репродуктивной системы широко распространены в структуре инфекционной патологии человека и являются значительной медицинской, социальной и демографической проблемой, т.к. служат причиной нарушений генеративной функции и бесплодия. С инфекционной патологией женских половых органов тесно связаны воспалительные заболевания гениталий, хронические тазовые боли, осложненное течение беременности, в т.ч. привычное невынашивание, преждевременные роды, плацентарная недостаточность, задержка развития плода, внутриутробная инфекция плода и новорожденного [1].

Беременность в ряде случаев является триггером патологических процессов (в частности урогенитальных инфекций), обусловливая угнетение общего и местного иммунитета, тем самым, профилактируя возможное отторжение плода. Прогноз осложняется установлением сочетанного влияния на организм одномоментно нескольких неблагоприятных факторов. Однако при наличии одних и тех же факторов риска развитие патологических состояний реализуется не во всех случаях однотипно и их выраженность в значительной степени варьирует.

При беременности довольно часто одновременно выявляются отклонения (нарушения) местной и системной (организменной) иммунологической реактивности организма, гестационные осложнения и инфекции урогенитального тракта, выступающие как единый функциональный патогенетический комплекс с превалированием патогенетической роли урогенитальных инфекций, требующий персонализированного комплексного подхода к его верификации с целью принятия и проведения соответствующих лечебно-профилактических мероприятий. Единый функциональный патогенетический комплекс при беременности развиваются не только у женщин группы высокого риска (при наличии отягощенного соматического или акушерско-гинекологического анамнеза), но и у практически здоровых женщин.

В связи с этим своевременная верификация урогенитальных инфекций с учетом характера их развития (острое или хроническое течение) является одной из кардинальных задач в акушерской практике.

В качестве прототипа нами выбран способ диагностики хронического урогенитального хламидиоза, предполагающий определение уровней экспрессии TL-рецептора-2 и TL-рецептора-4 [2].

Однако известный способ касается диагностики только хронического урогенитального хламидиоза и предполагает исследование экспрессии двух генов.

Нами поставлена задача - разработать способ оценки течения урогенитальных инфекций у беременных, ускоряющий и оптимизирующий их верификацию.

Технический результат, достигаемый при осуществлении изобретения, заключается в уточнении характера течения урогенитальных инфекций у беременных за счет объективной дифференциации острого и хронического их течения, а также за счет своевременной профилактики осложнений при них.

Нами предложен способ верификации острого или хронического течения инфекционного процесса у беременных с урогенитальными инфекциями.

Иммунологическая система беременных с урогенитальными инфекциями обеспечивает одновременное развитие гестационного процесса и реакцию макроорганизма на инфекционный процесс, вызванный полиинфицированием. Она обеспечивает физиологическое развитие беременности на фоне противодействия инфекционным агентам. Плод при этом также является для организма чужеродным агентом. Определение уровней экспрессии генов TLR позволяет верифицировать течение инфекционного процесса при урогенитальных инфекциях беременных с учетом особенностей их иммунологической реакции на одновременное развитие беременности и инфекционного процесса (1, 3).

Нами предложен оригинальный критерий, позволяющий оптимизировать ведение беременных на основе достоверного определения хронического или острого течения инфекционной патологи урогенитального тракта.

Сущность изобретения заключается в следующем.

Для определения течения урогенитальной инфекции у беременной исследуют экспрессию гена рецепторов врожденного иммунитета TLR-8. При установлении уровня его экспрессии 26 ОЕ и ниже определяют хроническое течение урогенитальной инфекции. При уровне экспрессии гена выше 26 ОЕ определяют острое течение урогенитальной инфекции.

Дополнительно уровень экспрессии гена TLR-8 выше 28 ОЕ определяют как предиктор прерывания беременности, обусловленного урогенитальной инфекцией.

Способ осуществляется следующим образом.

У беременных с инфекционной патологией урогенитального тракта исследуют экспрессию генов рецепторов врожденного иммунитета - TLR. Предлагаемый перечень TLR позволяет в каждом конкретном случае проводить одновременную индикацию вирусного или бактериального возбудителя и его роли в развитие инфекционного процесса.

Для количественного определения экспрессии гена TLR-8 использовали метод полимеразной цепной реакции в режиме реального времени с обратной транскрипцией (OT-Real-Time PCR), выполняемый с помощью амплификатора iCycler IQ5 («Bio-Rad», США) [4].

Уровни экспрессии гена TLR стандартизировали по гену GAPDH. Полученный материал суспендировали в растворе EverFresh RNA (ЗАО "Силекс" г. Санкт-Петербург) в соотношении 1:5 относительно объема клеточной суспензии. Уровень экспрессии генов TLR определялись ПНР в реальном времени (РВ), совмещенной с обратной транскрипцией. Конструирование олигонуклеотидных праймеров к генам TLR-2, TLR-3, TLR-4 и TLR-8 проводили с применением биоинформационного анализа комплексом компьютерных программ: Vector NTI Advance 9.0 (PC) (http://www.invitrogen.com/site/us/en/home.html), DNASTAR, BLAST (http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi/). Уровень экспрессии мРНК генов TLR определяли с использованием специфических праймеров:

Праймеры были синтезированы на базе ЗАО «Синтол» (Москва). Уровни экспрессии мРНК TLR контролировали (стандартизоровали) по гену GAPTAH-F за счет сходной экспрессии этого гена среди тканей человеческого ротоглоточного и репродуктивного трактов.

Из исследуемого материала выделяли тотальную РНК согласно протоколу к наборам для выделения тотальной РНК на магнитных частицах SiO₂ - бесфенольное выделение для микроанализа (ЗАО "Силекс", г. Санкт-Петербург).

Синтез первой цепи кДНК проводили, согласно указаниям инструкции набора для синтеза первой цепи кДНК (базовый) (ЗАО "Силекс" г. Санкт-Петербург).

Амплификацию с последующим определением уровня экспрессии TLR проводили методом ПНР с детекцией накопления продуктов реакции "в режиме реального времени" (Real-Time PCR, USA) с помощью детектирующего амплификатора АМК-32 («Синтол», Россия) и специфических праймеров к TLR-8.

Количество исследуемых кДНК в образцах рассчитывали путем определения пороговых циклов ПЦР в РВ на образцах серийных разведений очищенного ПЦР-продукта в качестве матрицы.

Нормализация количества изучаемых транскриптов к общему количеству кДНК в пробе проводится с помощью отношения TLR8/GAPDH.

Для определения уровня экспрессии мРНК TLR возможно использовать сравнительный СТ-метод (уровень СТ-номер цикла, при котором флуоресцентный сигнал превышает пороговое значение термоциклера). В сравнительном СТ-методе для относительного определения уровня экспрессии мРНК TLR использовали следующую арифметическую формулу: 2^-ΔΔСт. Для расчета величины ΔΔСТ: - определяли величину ΔCT путем вычитания средней величины СТ эндогенного контроля (GAPDH) из средней величины СТ мишени: мРНК TLR; - определяли величину ΔΔСТ путем вычитания величины ΔCT калибратора (TLR здоровых пациентов) из величины ΔСТ исследуемого образца (TLR пациентов с патологией) [2]. Экспрессию генов TLR оценивали в относительных единицах (ОЕ).

При установлении уровня экспрессии гена TLR-8 26 ОЕ и ниже верифицировали хроническое течение урогенитальных инфекций, а при уровне экспрессии гена TLR-8 выше 26 ОЕ верифицировали острое течение урогенитальных инфекций. Уровень экспрессии гена TLR-8 выше 28 ОЕ является предиктором преждевременных родов и развития прерывания беременности.

В качестве доказательств возможности реализации заявленного назначения и достижения указанного технического результата приводим следующие данные.

Клинический пример 1.

Беременность 12 недель. Клиника невынашивания беременности: жалобы на схваткообразные боли внизу живота, на выделения из половых путей - бели, неразвивающаяся беременность. Урогенитальная инфекция: Высев: streptococcus parvulus - 4; ПЦР - соскоб - gardnerella vaginalis+; ИФА-Herpes simplex virus IgM I-II типов - 0,91; Herpes simplex virus IgG I типа - 1,2; Herpes simplex virus IgG II типоа - 0,98; Cytomegalovirus IgM-82; Cytomegalovirus IgG - 276. Клиника генитального герпеса; ОРВИ во время беременности. Экспрессия генов толл-подобных рецепторов клетками цервикального канала: TLR-8 - 61,3 ОЕ. Острое течение урогенитальных инфекций. Лечение не проводилось. Исход: самопроизвольный аборт, прерывание беременности, инструментальное удаление остатков плодного яйца.

Клинический пример 2.

Беременность 7-8 недель. Клиника невынашивания беременности: жалобы на тянущие боли внизу живота, бели, неразвивающаяся беременность. Клиника ОРВИ во время беременности. Урогенитальная инфекция: Высев: Enterococcus sp. - 6; Е. Coli - 3; ПЦР - соскоб - mycoplasma genitalium - +; gardnerella vaginalis +; кровь - ДНК Cytomegalovirus (CMV) (ПЦР)+; ИФА-Cytomegalovirus IgM-70; Cytomegalovirus IgG - 217; Anti - Epstein-Barr virus IgM к VCA - 33; Anti - Epstein-Barr virus IgG к VCA - 89. Экспрессия генов толл-подобцных рецепторов клетками цервикального канала: TLR-8- 31,1 ОЕ. Острое течение урогенитальных инфекций. Лечение не проводилось. Исход: самопроизвольный аборт, прерывание беременности, инструментальное удаление остатков плодного яйца.

Клинический пример 3.

Беременность 7-8 недель. Клиника невынашивания беременности: неразвивающаяся беременность. Клиника лабиального герпеса во время беременности. Урогенитальная инфекция: ПЦР - соскоб - Ureaplasma urealiticum\ parvum +; кровь - ДНК Cytomegalovirus (CMV) - +; ДНК Epstein-Barr virus (EBV) - +; ИФА - Herpes simplex virus IgM I-II типов - 1,2; Herpes simplex virus IgG I типа - 3,5; Herpes simplex virus IgG II типоа - 0,95; Cytomegalovirus IgM - 0; Cytomegalovirus IgG - 94; Anti - Epstein-Barr virus IgM к VCA - 24; Anti - Epstein-Barr virus IgG к VCA - 32; Anti - Epstein-Barr virus IgG к EBNA - 1,8. Экспрессия генов толл-подобцных рецепторов клетками цервикального канала: TLR-8 - 29,8 ОЕ. Острое течение урогенитальных инфекций. Лечение не проводилось. Исход: самопроизвольный аборт, прерывание беременности, инструментальное удаление остатков плодного яйца.

Клинический пример 4.

Беременность 10-11 недель. Клиника невынашивания беременности: жалобы на тянущие боли внизу живота, бели, угроза прерывания беременности. Клиника проявлений ОРВИ во время беременности. Урогенитальная инфекция: ПЦР - соскоб - gardnerella vaginalis +; ИФА-Cytomegalovirus IgM-61; Cytomegalovirus IgG - 82; Anti - Epstein-Barr virus IgG к VCA - 160; Anti - Epstein-Barr virus IgG к EBNA - 1,2; Экспрессия генов толл-подобцных рецепторов клетками цервикального канала: TLR-8 - 26 ОЕ. Хроническое течение урогенитальной инфекции. Проводилось лечение: витаминотерапия; сохранная - прогестерон, спазмолитики, магнезиальный токолидз. Исход: срочные роды. Апгар 8-9.

Клинический пример 5.

Беременность 12-13 недель. Клиники невынашивания нет. Клиника проявлений ОРВИ во время беременности. Урогенитальная инфекция: ПЦР-соскоб - gardnerella vaginalis - +; ИФА - Herpes simplex virus IgG II типа - 9,3; Cytomegalovirus IgG - 46; Anti - Epstein-Barr virus IgG к VCA - 160; Anti - Epstein-Barr virus IgG к EBNA - 3,5. Экспрессия генов толл-подобцных рецепторов клетками цервикального канала: TLR-8 - 12,2 ОЕ. Хроническое течение урогенитальной инфекции. Проводилась витаминотерапия. Исход: срочные роды. Апгар 8-9.

Клинический пример 6.

Беременность 13-14 недель. Клиники невынашивания нет. Клиника проявлений ОРВИ во время беременности. Урогенитальная инфекция: Высев: staphylococcus sp. - 7; ИФА - Cytomegalovirus IgG - 70; Anti - Epstein-Barr virus IgG к VCA - 160; Anti - Epstein-Barr virus IgG к EBNA - 1,3. Экспрессия генов толл-подобных рецепторов клетками цервикального канала: TLR-8 - 24,9 ОЕ. Хроническое течение урогенитальной инфекции. Исход: срочные роды. Апгар 8-9.

Клинический пример 7.

Беременность 13-14 недель. Клиники невынашивания нет. Клинических проявлений урогенитальных инфекций нет. Урогенитальная инфекция: ПЦР-соскоб - Ureaplasma urealiticum\ parvum- +; gardnerella vaginalis- +; Ureaplasma urealiticum\ parvum- +; gardnerella vaginalis- +; ИФА- Herpes simplex virus IgG I типа- 1,7; Cytomegalovirus IgG - 177; Anti - Epstein-Barr virus IgG к VCA - 98; Anti - Epstein-Barr virus IgG к EBNA - 2,4; Экспрессия генов толл-подобцных рецепторов клетками цервикального канала: TLR-8 - 23,3 ОЕ. Хроническое течение урогенитальной инфекции. Лечение: витаминотерапия, Кипферон. Исход: срочные роды. Апгар 8-9.

Клинический пример 8.

Беременность 10-11 недель. Клиники невынашивания нет. Клиники проявлений урогенитальных инфекций нет. Урогенитальная инфекция: ПЦР-соскоб - Ureaplasma urealiticum\ parvum- +; ИФА - Herpes simplex virus IgG I типа - 7,3; Herpes simplex virus IgG II типа - 1,7; Cytomegalovirus IgG - 80; Anti-Epstein-Barr virus IgG к VCA - 124; Anti - Epstein-Barr virus IgG к EBNA - 1,5. Экспрессия генов толл-подобцных рецепторов клетками цервикального канала: TLR-8 - 8,4 ОЕ. Хроническое течение урогенитальной инфекции. Лечение не проводилось Исход: срочные роды, хроническая гипоксия плода. Апгар 8-9.

Предлагаемый способ был использован при ведении беременности у 89 пациенток с инфекционной патологией урогенитального тракта I, II триместров гестации в возрасте от 18 до 35 лет (средний возраст 27,5±5,6 лет). Во всех случаях при ведении беременных в соответствии с течением урогенитальной инфекции, определенной предлагаемым способом, беременность закончилась срочными родами. Определение течения урогенитальной инфекции в соответствии с предлагаемым способом позволило адекватно скорректировать ведение беременности.

Литература

1. Микробиоценозы и здоровье человека / Под ред. В.А. Алешкина, С.С. Афанасьева, А.В. Караулова. М., Издательство «Династия»; 2015.

2. RU 2327995.

3. Новое в физиологии мукозального иммунитета / Под редакцией А.В. Караулова, В.А. Алешкина, С.С. Афанасьева, Ю.В. Несвижского. - М., Издательство Первого Московского государственного медицинского университета им. И.М. Сеченова, 2015.

4. Livak K.J., Schmittgen T.D. 2001. Analysis of Relative Gene Expression Data Using Real-Time Quantitative PCR and the 2~" cT Method. - Methods. -Vol. 25. - P. 402-408.

5. Мукозальный иммунитет и колонизационная резистентность слизистых открытых полостей человека в норме и при патологических состояниях: учебное пособие для системы послевузовского профессионального образования врачей. Регистрационный номер рецензии: №048 ЭКУ от 15 декабря 2016 г. / А.В. Караулов, С.С. Афанасьев, Ю.В. Несвижский, В.А. Алешкин и др.; под ред. А.В. Караулова; Первый МГМУ имени И.М. Сеченова. - М.: Изд-во Первого МГМУ имени И.М. Сеченова, 2017. - 78 с.

1. Способ оценки течения урогенитальных инфекций у беременных, характеризующийся тем, что исследуют экспрессию гена рецепторов врожденного иммунитета TLR-8 и при установлении уровня его экспрессии 26 ОЕ и ниже определяют хроническое течение урогенитальной инфекции, а при уровне экспрессии гена выше 26 ОЕ определяют острое течение урогенитальной инфекции.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что дополнительно уровень экспрессии гена TLR-8 выше 28 ОЕ определяют как предиктор прерывания беременности, обусловленного урогенитальной инфекцией.

Изобретение относится к медицине, в частности к педиатрии, и касается диагностики остеомиелита у детей. Способ основан на использовании лабораторных и лучевых диагностических критериев.

Композиция и способ для обнаружения биопленок на жизнеспособных тканях // 2650803

Группа изобретений относится к биотехнологии и медицине. Предложены композиция, набор и способ для обнаружения присутствия биопленки в жизнеспособных тканях.

Штамм о n 2212/приморский/2014 вируса ящура aphtae epizooticae типа о для контроля антигенной и иммуногенной активности противоящурных вакцин и для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики ящура типа о // 2650768

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии и касается штамма вируса ящура. Представлен штамм вируса ящура Aphtae epizooticae типа О сем.

Способ определения показаний к проведению противогерпетической терапии при инфекции вгч-6 у детей с острыми респираторными заболеваниями // 2641609

Изобретение относится к области медицины, в частности к педиатрии. Предложен способ определения показаний к проведению противогерпетической терапии при инфекции ВГЧ-6 у детей с острыми респираторными заболеваниями.

Тест-система ифа для серологической диагностики нодулярного дерматита крупного рогатого скота - dermatitis nodularis bovum // 2640192

Изобретение относится к ветеринарной вирусологии и биотехнологии, в частности к созданию тест-системы ИФА с использованием вируса нодулярного дерматита крупного рогатого скота при разработке и производстве средств диагностики.

Способ профилактики инфекционных осложнений бактериальной природы после операции на сердце, проведенной в условиях искусственного кровообращения // 2638814

Изобретение относится к медицине, а именно к трансплантологии и иммунологии, и может быть использовано для ведения больных в раннем послеоперационном периоде после трансплантации сердца, других хирургических вмешательствах на сердце, выполняемых в условиях искусственного кровообращения.

Способ и система для клеточного анализа с помощью массовой цитометрии // 2636352

Группа изобретений относится к области биохимии. Предложены способ и система для клеточного анализа.

Способ повышения адгезивной активности лактобацилл, используемых в производстве пробиотиков и кисломолочных продуктов // 2633067

Изобретение относится к области микробиологии и биотехнологии, а именно к способу повышения адгезивной активности культур лактобацилл. Способ повышения адгезивной активности культур лактобацилл, включающий в себя выращивание на плотной питательной среде MRS лактобактерий при температуре 36-38°C в течение 24-48 ч, подготовку суспензии лактобактерий до концентрации 1 OD и суспензии эритроцитов до концентрации 1012 кл./мл в физиологическом растворе хлорида натрия при рН, равном 7,2-7,4, инкубирование смеси суспензий бактерий 2,5 мл и эритроцитов 1 мл в шейкер-инкубаторе в течение 30 мин при 36-38°C, центрифугирование смеси в течение 5 мин при 1000 об./мин, декантирование надосадочной жидкости, ресуспендирование осадка в физиологическом растворе хлорида натрия при рН равном 7,2-7,4, фильтрацию ресуспендированного осадка через мембранный фильтр с диаметром пор 1,2 мкм для освобождения от неприкрепившихся к эритроцитам бактерий, пересев лактобактерий с поверхности фильтра на плотную питательную среду MRS и выращивание культуры при температуре 36-38°C в течение 24-48 часов.

Способ диагностики остеомиелита у детей // 2651091

Способ дифференциальной диагностики красного плоского лишая и лейкоплакии слизистой оболочки полости рта // 2651050

Изобретение относится к области медицины и касается дифференциальной диагностики красного плоского лишая и лейкоплакии слизистой оболочки полости рта. Способ включает иммуногастохимическое исследование биоптата очага поражения.

Способ экспресс-диагностики нарушений биоценоза влагалища методом аппаратной топографической рн-метрии // 2651037

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и гинекологии, и может быть использовано для диагностики нарушений биоценоза влагалища. Для этого проводят измерение влагалищной рН эндоскопическим рН-зондом с использованием цифрового рН-метра в шести точках по циферблату на 12:00, 13:30, 16:30, 18:00, 19:30, 22:30 часах, которые условно обозначают рН-1 рН-2 рН-3 рН-4 рН-5 рН-6.

Способ прогнозирования риска развития генитального эндометриоза // 2650994

Изобретение относится к области медицины и предназначено для прогнозирования риска развития генитального эндометриоза. Из периферической венозной крови выделяют ДНК.

Способ прогнозирования риска развития миомы матки // 2650990

Изобретение относится к области медицины и предназначено для прогнозирования риска развития миомы матки у женщин русской национальности, уроженок Центрального Черноземья.

Способ прогнозирования риска развития гиперпластических процессов эндометрия на основе генетических данных // 2650988

Изобретение относится к области медицины и предназначено для прогнозирования риска развития гиперпластических процессов эндометрия у женщин русской национальности, уроженок Центрального Черноземья.

Способ количественного определения амантадина в плазме крови // 2650968

Изобретение относится к области медицины, а именно к клинической фармакологии, и предназначено для количественного определения амантадина в плазме крови. Для количественного определения амантадина в плазме крови осуществляют анализ крови методом хромато-масс-спектрометрии.

Устройства и наборы инструментов для производства персонализированных, концентрированных смесей грудного молока, методы производства и использования // 2650382

Изобретение относится к питанию грудных детей. Набор инструментов для производства персонализированной концентрированной смеси грудного молока для ребенка состоит из: как минимум одного анализатора для определения концентрации, по крайней мере одного питательного вещества и/или микроэлемента в сцеженном материнском молоке, как минимум одного устройства для селективного концентрирования по крайней мере одного питательного вещества и/или микроэлемента в сцеженном материнском молоке и как минимум одной градуированной емкости для сцеженного грудного молока и для измерения его объема, как минимум одной градуированной емкости, совместимой с устройством для селективного концентрирования грудного молока, в которую можно налить молоко, из которого будет изготовлена персонализированная концентрированная смесь.

Набор синтетических олигонуклеотидов для определения последовательности 1 интрона, примыкающей ко 2 экзону, генов системы hla i и ii классов (hla-a и hla-drb1) // 2649064

Изобретение относится к области биохимии и молекулярной биологии, в частности к набору синтетических олигонуклеотидов. Указанный набор предназначен для определения последовательности 1 интрона, примыкающей ко 2 экзону, генов системы HLA I и II классов (HLA-A и HLA-DRB1) методом ПЦР и состоит из следующих праймеров: dr1in6s 5’-GGATCCTCCTCCAGCTCCTG-3’, dr1in2a 5’-CCGCTCCGTCCCATTGAAGA-3’, A1in1s 5’-CTCCGAACCCTCCTCCTGCTA-3’, A1in2a 5’-GCTGTCGAACCGCACGGACTG-3’.

Способ раннего прогнозирования развития преэклампсии // 2648872

Изобретение относится к области медицины, а именно к акушерству и гинекологии, для прогнозирования развития преэклампсии на ранней стадии беременности на сроке 11-14 недель проводят сбор анамнестических данных.

Способ определения окислительной модификации тиоредоксина // 2651765

Изобретение относится к области медицины, к биохимической лабораторной диагностике, а именно к способу определения карбонилированного тиоредоксина. Способ включает инкубацию 0,25 мл лизированных 1% раствором тритона Х-100 клеток с 0,5 мл 10 мМ раствора 2,4-динитрофенилгидразина в 2 М НСl, связывающегося с карбонильными группами белков, инкубацию пробы при комнатной температуре в течение 1 ч, добавление 0,5 мл 20% ТХУ и центрифугирование при 11000 g 10 минут, промывание осадка 3 раза 1 мл раствора этанол: этилацетат (1:1) для экстракции избытка 2,4-динитрофенилгидразина, не прореагировавшего с карбонильными группами окисленных белков, высушивание осадка и ресуспендирование, дальнейшее инкубирование клеточного лизата с 0,5 мл магнитных частиц, нагруженных антителами к 2,4-динитрофенолу, в течение 3 ч при 25°С и непрерывном перемешивании. Магнитные частицы со связавшимся комплексом антиген-антитело собирают с помощью магнитного штатива и трижды отмывают 0,5 мл 0,01 М натрий-фосфатным буфером, инкубируют в термостате 10 мин при 95°С, после чего перемешивают, далее магнитные частицы собирают в магнитном штативе, а надосадок используют для проведения вестерн-блоттинга с антителами к тиоредоксину.