Лечение аутоиммунных заболеваний антителами cd154



Лечение аутоиммунных заболеваний антителами cd154
Лечение аутоиммунных заболеваний антителами cd154
Лечение аутоиммунных заболеваний антителами cd154
Лечение аутоиммунных заболеваний антителами cd154
Лечение аутоиммунных заболеваний антителами cd154
Лечение аутоиммунных заболеваний антителами cd154
Лечение аутоиммунных заболеваний антителами cd154
Лечение аутоиммунных заболеваний антителами cd154

Владельцы патента RU 2695443:

БАЙОДЖЕН МА ИНК. (US)
ЮСБ Биофарма СПРЛ (BE)

Изобретение относится к биотехнологии и решает задачу лечения заболеваний, в частности системной красной волчанки, фрагментом антитела, специфически связывающимся с CD154. 8 з.п. ф-лы, 3 пр., 8 ил.

 

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ НАСТОЯЩЕЕ ИЗОБРЕТЕНИЕ

Настоящее изобретение относится к лечению аутоиммунных и воспалительных заболеваний, в частности, к лечению системной красной волчанки антителом или фрагментом антитела, специфически связывающимся с CD154.

ПРЕДПОСЫЛКИ СОЗДАНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Аутоиммунные заболевания классически включают более 80 хронических заболеваний, которые в целом затрагивают около 5-8% населения. За последние десятилетия был достигнут значительный прогресс в понимании иммунной системы, что привело к лучшему пониманию роли костимулирующих молекул, таких как CD40 и его лиганда CD154. Кроме того, также появляется роль для таких молекул в патогенезе наиболее распространенных заболеваний, таких как атеросклероз, что может значительно расширить применимость методов лечения, нацеленных на эту молекулу.

CD154 экспрессируется в активированных T-лимфоцитах и, благодаря взаимодействию с рецептором CD40, играет ключевую роль в регулировании взаимодействия между Т-клетками и другими типами клеток. Известно, что пара CD154/CD40 обеспечивает опосредованную помощь T-клеток для B-клеток, что приводит к увеличению пролиферации и дифференцировки B-клеток, продуцированию антител и переключению класса изотипов. CD154 также способствует образованию зародышевых центров в лимфатических узлах и выживаемости B-клеток. Таким образом, CD154 способствует потенцированию аутоиммунных заболеваний и имеет значительные перспективы в качестве терапевтической мишени при аутоиммунных заболеваниях, таких как системная красная волчанка (СКВ), ревматоидный артрит, анкилозирующий спондилоартрит, волчаночный нефрит, болезнь Гудпасчера, синдром Шегрена, полимиозит, дерматомиозит, псориаз, височный артериит, синдром Шурга-Стросса, рассеянный склероз, синдром Гийена-Барре, поперечный миелит, миастения гравис, болезнь Аддисона, тиреоидит, целиакия, язвенный колит, саркоидоз, гемолитическая анемия, идиопатическая тромбоцитопеническая пурпура, болезнь Бехета, первичный билиарный цирроз и аутоиммунный диабет, и блокада CD154, как было показано, очень эффективна при нескольких воспалительных и аутоиммунных модельных системах. Также было предположено, что CD154 играет роль в воспалительных аспектах атеросклероза и нейродегенеративных заболеваний.

CD154, также известный как лиганд CD40 (CD40L), ранее называемый gp39, TRAP или TBAM, представляет собой 39 кДа мембранный гликопротеин типа II семейства TNF. CD154 - полипептид из 261 аминокислоты, состоящий из 215 аминокислот внеклеточного домена, 24 аминокислот трансмембранной области и 22 аминокислот цитоплазматического хвоста. Как и другие члены семейства TNF, CD154 образует тримерную структуру и способствует, по существу, тримеризации рецептора, а именно CD40. Взаимодействие CD154/CD40 стабилизируется заряженными остатками, а именно основными цепями на CD154 и кислотными на CD40.

Hu5c8 (также известный как BG-9588 или реплизумаб), гуманизированное моноклональное антитело IgG1 против CD154 человека, оценивали в клинических испытаниях для ряда аутоиммунных заболеваний. Результаты исследования фазы 2 у пациентов с системной красной волчанкой (СКВ) были обнадеживающими, со значительным снижением биомаркеров болезни, включая циркулирующие уровни аутоантител, а также значительное увеличение уровней С3. Однако, несмотря на это многообещающее доказательство клинического эффекта, дальнейшее развитие hu5c8 было прекращено из-за увеличения числа случаев возникновения сердечно-сосудистых тромбозов вследствие лечения. Hu5c8 вводили внутривенно в дозе 20 мг/кг каждые 2 недели для трех доз, а затем каждые 4 недели для еще четырех доз (всего семь доз) (Boumpas et al, Arthritis Rheum. 2003 Mar; 48(3):719-27). Механизм, посредством которого hu5c8 индуцирует тромботические эффекты у людей, остается неясным, хотя была продемонстрирована повышенная активация тромбоцитов после воздействия hu5c8 in vitro (Meyer et al., Blood (ASH Annual Meeting Abstracts) 2006 108: Abstract 1516).

Системная красная волчанка (СКВ) была классифицирована как аутоиммунное заболевание, которое может включать многие системы органов, как воспалительное мультисистемное ревматическое заболевание или как коллагеноз сосудов. В Европе и Соединенных Штатах Америки в некоторых исследованиях оценки числа пострадавших лиц варьируются от 24 до 65 случаев на 100 000 населения. Предрасполагающие факторы для волчанки включают Азиатскую или Африканскую расу и женский пол. 90% пациентов с волчанкой являются женщинами, и появление симптомов обычно происходит в возрасте от 15 до 50 лет. Системная красная волчанка, по-видимому, не является однородным заболеванием, а представляет собой группу связанных синдромов с широко варьирующимися проявлениями, степенью вовлечения системы организма и клиническим течением болезни. Клинические особенности, обычно наблюдаемые при СКВ - это заболевания крови и лимфатические болезни (лимфаденопатия), сердечные расстройства (например, кардиомиопатия, перикардиальный выпот, перикардит), нарушения зрения (например, сухой кератоконъюнктивит), желудочно-кишечные расстройства (например, изъязвление рта, панкреатит, перитонит, фарингит), общие расстройства (например, недомогание, усталость, гипертермия, уменьшение веса), расстройства нервной системы (например, нарушение мозгового кровообращения, когнитивное расстройство, мигрень, головная боль, периферическая нейропатия), заболевания костно-мышечной и соединительной ткани (например, артралгия, артрит (не эрозивный или деструктивный), фибромиалгия, перелом, миозит, остеонекроз, остеопороз, остеопения), психические расстройства (например, аффективное расстройство, тревожность, депрессия, психоз, невроз, психическое расстройство из-за общего состояния здоровья, психотическое расстройство), почечные и мочевые нарушения (например, волчаночный нефрит, нефротический синдром), респираторные, грудные и средостенные нарушения (например, плеврит, пневмонит, легочная гипертензия), нарушениях кожи и подкожной ткани (например, алопеция, кожная красная волчанка, дерматит, генерализованная эритема, гроздевидная кожа, панникулит, макулопапулезная сыпь, системная красная волчанка, крапивница) и сосудистые расстройства (например, гипертония, феномен Рейно, телеангиэктазия, тромбоцитопения, тромбофлебит, васкулит). Кроме того, у большинства пациентов с СКВ наблюдаются атипичные особенности антител, в том числе наличие антител к ядерным антигенам (ANA) и антител к двуцепопечной ДНК (анти-dsDNA).

Клиническое течение СКВ является эпизодическим, со вспышками, повторяющимися при увеличении нарушения функций и повреждении органа. Кортикостероиды являются основой лечения, но связаны с большим количеством побочных эффектов, наиболее часто наблюдаемых во время длительного использования. Другие лекарственные средства, используемые для установления активности более низкого уровня, включают анальгетики, нестероидные противовоспалительные препараты (НПВП), местные стероиды и противомалярийные лекарства (например, хлорохин или гидроксихлорохин) с общепринятыми вспомогательными препаратами, включая вазодилататоры (блокаторы кальциевых канальцев, ингибиторы ангиотензинпревращающего фермента [АПФ]) для почечной гипертензии или синдрома Рейно, местные лечения сыпи или сухого кератоконъюнктивита, трансфузии, внутривенный (i.v.) глобулин для цитопений, противосудорожные препараты, противомигренозные препараты, антикоагулянты для рецидивирующих тромбозов и антидепрессанты. Высокие дозы кортикостероидов, например, от 0,5 до 1,0 мг/кг/день перорального преднизона (или эквивалента) или от 500 мг до 1 г суточной внутривенной пульс-терапии метилпреднизолоном, используются для борьбы с острыми вспышками СКВ с применением иммунодепрессантов (например, азатиоприна, циклофосфамида, метотрексата, микофенолатмофетила, лефлуномида), обычно применяемых в умеренных и тяжелых случаях, когда другие методы лечения неэффективны, или для ограничения, или предотвращения долгосрочного повреждения основных органов от заболевания, или использования кортикостероидов («стероид-щадящие»). Настоящий терапевтический арсенал является недостаточным из-за ограниченной эффективности и/или неблагоприятных событий профиля. Несмотря на высокую медицинскую потребность в новых эффективных методах лечения СКВ с хорошим профилем безопасности, разработка таких методов лечения оказалась особенно сложной, и многие терапевтические кандидаты потерпели неудачу (Eisenberg, 2009).

Костимулирующий путь CD40/CD154 также вовлечен в патогенез нейродегенеративных и нервно-мышечных расстройств, и лечение соединениями, которые препятствуют пути, представляется полезным для лечения нейродегенеративных и нервно-мышечных расстройств (патентный документ WO 2010/065819, содержание которого включено в данном документе полностью).

Нейродегенеративные и нервно-мышечные расстройства включают Болезнь Альцгеймера, Болезнь Паркинсона, Боковой амиотрофический склероз, Миастению гравис, Мультифокальную моторную нейропатию, Первичный боковой склероз, Спинальную мышечную атрофию, болезнь Кеннеди и Спиноцеребеллярную атаксию.

Боковой амиотрофический склероз (БАС), иногда называемый Болезнью Лу Герига, является прогрессирующим, фатальным, неврологическим расстройством, характеризующимся атрофией мышечных волокон в результате дегенерации моторных нейронов в позвоночнике и головном мозге. БАС затрагивает примерно 30 000 граждан США, причем только около 10% случаев классифицируется как наследственная форма БАС. Хотя БАС характеризуется потерей моторных нейронов в спинном мозге, что приводит к атрофии мышц, заболевание также проявляется в изменениях аксонного транспорта, агрегации белков, экситотоксичности, астроцитозе, дисфункции митохондрий, микроглиальной активации и синаптическом ремоделировании. Были хорошо описаны микроглиальная активация, астроцитоз и наличие инфильтрации воспалительных клеток с периферии. В спинном мозге пациентов с БАС происходит накопление lgG-иммунореактивных отложений, инфильтрация лимфоцитов, дендритных клеток, моноцитов и макрофагов в спинной мозг при БАС. Хотя роль инфильтрирующих иммунных клеток плохо понята, недавняя работа предполагает, что инфильтрирующие популяции T-клеток являются нейропротекторными, а не цитотоксическими. Хотя БАС обладает иммунным компонентом, опосредованным активацией микроглий и астроцитов, это не считается аутоиммунным расстройством. В отличие от таких заболеваний, как ревматоидный артрит или системная красная волчанка, в которых описано участие специфических иммуномодулирующих путей (например, костимулирующий путь), участие таких путей не было описано для БАС.

В данной области техники существует потребность в новых эффективных способах лечения аутоиммунных, воспалительных, нейродегенеративных и нервно-мышечных расстройств. Было показано, что путь взаимодействия CD40-CD40L(CD154) имеет отношение к патофизиологическим аутоиммунным, воспалительным, нейродегенеративным и нервно-мышечным расстройствам. Существует необходимость в новых методах лечения аутоиммунных, воспалительных, нейродегенеративных и нервно-мышечных расстройств антителами или фрагментами антител, специфически связывающимися с CD154, вводимыми в безопасной и эффективной дозе.

СУЩНОСТЬ НАСТОЯЩЕГО ИЗОБРЕТЕНИЯ

Следующая сущность не предназначена для определения каждого аспекта изобретения, а дополнительные аспекты описаны в других разделах, таких как Подробное описание. Весь документ должен быть связан как единое раскрытие, и следует понимать, что рассматриваются все сочетания отличительных признаков, описанных в данном документе, даже если комбинация отличительных признаков не найдена вместе в одном предложении или параграфе, или разделе данного документа. Что касается аспектов изобретения, описанных или заявленных с помощью «a» или «an», следует понимать, что эти термины означают «один или несколько», если контекст четко требует более ограниченного значения. Термин «или» следует понимать, как охватывающие элементы в альтернативе или совместно, если контекст однозначно не требует иного. Если аспекты изобретения описываются как «содержащие» отличительный признак, варианты осуществления изобретения также предполагаются «состоящими из» или «состоящими в основном из» отличительного признака. В тех случаях, когда используется термин «о», приложение также раскрывает использование указанного точного значения. В тех случаях, когда упоминаются значения точек, приложение также раскрывает, что такие значения используются, то же самое относится к конечным точкам диапазонов.

Проводились рандомизированные клинические фазы I, двойные слепые, плацебо-контролируемые исследования безопасности и переносимости моновалентного ПЭГилированного Fab', специфически связывающегося с CD154 (CDP7657), у пациентов с серологически положительными результатами, вызванными системной красной волчанкой (СКВ). Моновалентный ПЭГилированный Fab', специфически связывающийся с CD154, хорошо переносился, и не наблюдалось никаких тромбоэмболических побочных эффектов.

В результате данного исследования был обнаружен новый режим дозирования для антитела или фрагмента антитела, специфически связывающегося с CD154, при лечении аутоиммунных и воспалительных заболеваний, таких как СКВ, или нейродегенеративных, или нейромышечных заболеваний.

В одном варианте осуществления изобретение обеспечивает антитело или фрагмент антитела, специфически связывающийся с CD154, для использования в способе лечения аутоиммунного, воспалительного, нейродегенеративного или нервно-мышечного расстройства у субъекта, относящегося к млекопитающим, причем этот способ включает введение начальной нагрузочной дозы около 20-60 мг/кг антитела или фрагмента антитела, специфически связывающегося с CD154, субъекту, нуждающемуся в таком лечении; и примерно через 2 недели после начальной нагрузочной дозы, введение дополнительной дозы или дозы в размере примерно половины начальной нагрузочной дозы с частотой примерно раз в две недели антитела или фрагмента антитела, специфически связывающегося с CD154, субъекту, нуждающемуся в таком лечении.

В другом варианте осуществления изобретения антитело или фрагмент антитела, специфически связывающийся с CD154, вводят пациенту, нуждающемуся в этом, по меньшей мере, в течение 12 недель.

В другом варианте осуществления изобретения антитело или фрагмент антитела, специфически связывающийся с CD154, представляет собой нейтрализующее антитело или фрагмент антитела. Антитело или фрагмент антитела, специфически связывающийся с CD154, в соответствии с первым, вторым или третьим вариантом осуществления изобретения, предпочтительно, имеет константу диссоциации для моновалентного связывания с CD40 равную KD≤4,55 пМ, как определено поверхностным плазмонным резонансом.

В другом варианте осуществления изобретения антитело или фрагмент антитела, специфически связывающийся с CD154, содержит вариабельный участок легкой цепи (LCVR), имеющий CDR1, CDR2 и CDR3, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:1, 2 и 3, соответственно, и вариабельный участок тяжелой цепи (HCVR), имеющий CDR1, CDR2 и CDR3, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:4, 5 и 6, соответственно.

В дальнейших вариантах осуществления изобретения антитело или фрагмент антитела, специфически связывающийся с CD154, содержит последовательность цепи VL, показанную в SEQ ID NO:7, и последовательность цепи VH, показанную в SEQ ID NO:8, или антитело или фрагмент антитела, специфически связывающийся с CD154, имеет последовательность легкой цепи, показанную в SEQ ID NO:9, и последовательности тяжелой цепи, показанные в SEQ ID NO:10.

В других вариантах осуществления изобретения антитело или фрагмент антитела, специфически связывающийся с CD154, по любому из вариантов осуществления изобретения, представляет собой моновалентный Fab', имеющий последовательность легкой цепи, показанную в SEQ ID NO:9, и последовательности тяжелой цепи, показанные в SEQ ID NO:10, который ПЭГилируется в цистеине в модифицированной шарнирной области. Предпочтительно, моновалентный Fab', имеющий последовательность легкой цепи, показанную в SEQ ID NO:9, и последовательности тяжелой цепи, показанные в SEQ ID NO:10, по одиннадцатому варианту осуществления изобретения, имеют малеимидную группу, ковалентно связанную с одной тиольной группой в модифицированной шарнирной области; лизиновый остаток, ковалентно связанный с малеимидной группой; и к каждой из аминогрупп лизинового остатка присоединен полимер метоксиполил(этиленгликоль), имеющий молекулярную массу приблизительно 20 кДа. Таким образом, общая молекулярная масса всего ПЭГ, ковалентно связанного с моновалентным Fab', составляет приблизительно 40 кДа.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ

На Фигуре 1 показана сфера действия антител к лекарственному препарату у пациентов с СКВ. Очень слабые реакции антител к лекарственному препарату (то есть очень близкие к точке отсечки) наблюдались во всех дозах для субъектов с СКВ. Наибольший ответ в группе доз 60 мг/кг, где измеряются ADA, увеличивается по мере удаления лекарственного средства. Точка отсечки анализа составляет 0,0063 ед/мл (где 1 ед/мл соответствует 1 мкг/мл калибратора). Было обнаружено, что совокупные антитела к лекарственному препарату, которые развивались на очень низком уровне у пациентов с СКВ, не влияли на фармакокинетику моновалентного ПЭГилированного Fab', специфически связывающегося с CD154.

На Фигуре 2 показан режим дозирования, которому следовали во время первоначального доказательства правильности концепции клинического исследования CDP7657 (Исследование SL0014), в котором был установлен принцип использования более крупной нагрузочной дозы с регулярными равными поддерживающими дозами.

На Фигуре 3 показаны результаты Исследования SL0014, в котором два ключевых результата эффективности

минимальное улучшение на 4 пункта индекса активности СКВ 2000 пациента с терапевтическим эффектом (SRI-4) и

ответ в соответствии с общей оценкой системной красной волчанки (BICLA) Британской группы по изучению системной красной волчанки (BILAG)

оба демонстрируют последовательные и значительно более высокие частоты ответа для субъектов, получающих CDP7657, в соответствии с описанным режимом дозирования, чем у тех, кто получает лечение плацебо.

На Фигуре 4 показан значительный клинический ответ на CDP7657, который наблюдался в течение одного месяца после начала лечения, который продолжал расти до конца лечения через 3 месяца, и поддерживался в течение 3 месяцев после этого.

На Фигуре 5 показаны различные профили содержания вещества в плазме для субъектов, которым вводили одну дозу CDP7657 в количестве 60 мг, по сравнению с режимом дозирования, используемым в Исследовании SL0014. Последний обеспечивает быстрое достижение, а затем последовательное поддержание уровней плазмы выше указанной мишени в 100 мкг/мл, в то время как продолжается дозирование.

На Фигуре 6 показаны фармакокинетические данные двух схем дозирования, показанных на Фигуре 5, и подтверждается успешность режима исследования SL0014 в поддержании уровней экспозиции выше 100 мкг/мл в течение, по меньшей мере, 90% времени.

На Фигуре 7 показаны базовые демографические характеристики субъектов, рандомизированных для активных и плацебо групп лечения, а также демонстрируется, что была достигнута хорошо сбалансированная рандомизация.

На Фигуре 8 показана частота и характер побочных эффектов, наблюдаемых во время исследования SL0014, которые указывают на небольшую существенную разницу между активными и плацебо группами лечения. Не было эффектов или указаний на тромбоэмболии.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Данное изобретение относится к способам лечения аутоиммунного или воспалительного заболевания, или нейродегенеративного заболевания, при котором введение антитела или фрагмента антитела, специфически связывающегося с CD154, является полезным. Различные варианты осуществления изобретения относятся к лечению аутоиммунного или воспалительного заболевания, или нейродегенеративного заболевания антителом или фрагментом антитела, специфичным к CD154, в частности CDP7657.

Для того чтобы настоящее изобретение было более понятным, сначала определяются некоторые термины.

Используемый здесь термин «антитело» или «антитела» относится к молекулам иммуноглобулина, состоящим из четырех полипептидных цепей, двух тяжелых (H) цепей и двух легких (L) цепей, связанных между собой дисульфидными связями. Каждая тяжелая цепь состоит из вариабельного участка тяжелой цепи (сокращенно обозначаемого здесь как HCVR или VH) и константного участка тяжелой цепи. Константный участок тяжелой цепи состоит из трех доменов: CH1, CH2 и CH3. Константный участок тяжелой цепи может также иметь четвертый константный домен, CH4. Каждая легкая цепь состоит из вариабельного участка легкой цепи (сокращенно обозначенной здесь как LCVR или VL) и константного участка легкой цепи. Константный участок легкой цепи состоит из одного домена, CL. Участки VH и VL могут далее подразделиться на участки гипервариабельности, которые называются участками определения комплементарности (CDR), чередующимися с участками, которые более консервативны, называющимися каркасными участками (FR). Каждая VH и VL состоит из трех CDR и четырех FR, расположенных от аминоконца до карбоксиконца в следующем порядке: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. Точные границы данных CDR были определены по-разному в зависимости от разных систем. Система, описанная Kabat, не только обеспечивает однозначную систему нумерации остатков, применимую к любому вариабельному участку антитела, но и обеспечивает точные границы остатков, определяющих три CDR. Эти CDR могут упоминаться как Kabat CDR. Chothia и др. обнаружили, что некоторые субъединицы в Kabat CDR принимают почти идентичные конформации пептидных скелетов, несмотря на большое разнообразие на уровне аминокислотной последовательности (Chothia et al. (1987) Mol. Biol. 196:901-917; Chothia et al. (1989) Nature 342:877- 883). Эти участки, которые имеют границы, пересекающиеся с Kabat CDR, могут быть названы Chothia CDR. Другие границы, определяющие CDR, пересекающиеся с Kabat CDR, описаны Padlan (1995) FASEB J. 9:133-139 and MacCallum (1996) J. Mol. Biol. 262(5):732-45. Другие определения границ CDR не могут строго следовать одной из описанных здесь систем, но тем не менее будут пересекаться с Kabat CDR, хотя они могут быть укорочены или удлинены с учетом расчета или экспериментальных данных о том, что определенные остатки или группы остатков, или даже целые CDR не оказывают существенного влияния на связывание антигена. Используемые здесь способы могут использовать CDR, определенные в соответствии с любой из этих систем, хотя в некоторых вариантах осуществления используют CDR по Kabat или Chothia. Термин иммуноглобулин или иммуноглобулины используют синонимично с «антителом» или «антителами», соответственно. Используемый здесь термин «антитело» или «антитела» включает, но не ограничивается ими, рекомбинантные антитела, которые генерируются рекомбинантными технологиями, как известно в данной области техники. «Антитело» или «антитела» могут быть любого происхождения, в том числе таких видов млекопитающих, как человек, примат, отличный от человека (например, человек, так же, как и шимпанзе, бабуин, резус или яванский макак), грызун (например, мышь, крыса, кролик или морская свинка), коза, крупный рогатый скот или лошадь; или виды птиц, такие как куриные антитела, или виды рыб, такие как антитела акул. «Антитело» или «антитела» включают антитела любого изотипа, включая изотипы человека IgA1, IgA2, IgD, IgG1, IgG2a, IgG2b, IgG3, IgG4, IgE и IgM и их модифицированные варианты. Антитело в данном описании направлено против «антигена», представляющего интерес. Предпочтительно, антиген является биологически важным полипептидом, и введение антитела млекопитающему, страдающему заболеванием или расстройством, может приводить к терапевтическому действию у этого млекопитающего. Однако также рассматриваются антитела, направленные против непептидных антигенов. Если антиген представляет собой полипептид, он может представлять собой трансмембранную молекулу (например, рецептор) или лиганд, такой как фактор роста или цитокин. Предпочтительные молекулярные мишени для антител, охватываемых настоящим изобретением, включают CD-полипептиды, такие как CD3, CD4, CD8, CD19, CD20, CD22, CD34, CD38, CD40 и CD154; FcRN; OX40; члены семейства рецепторов HER, такие как рецептор EGF, рецептор HER2, HER3 или HER4; молекулы клеточной адгезии, такие как LFA-1, Mac1, p150,95, VLA-4, ICAM-1, VCAM и интегрин av/b3, включая α или β субъединицы (например, анти-CD11a, анти-CD18 или анти-CD11b антитела); хемокины и цитокины или их рецепторы, такие как IL-1 α и β, IL-2, IL-6, рецептор IL-6, IL-7, IL-12, IL-13, IL-17, IL-18, IL-21, IL-23, TNFα и TNFβ; факторы роста, такие как VEGF; IgE; антигены группы крови; рецептор flk2/flt3; рецептор ожирения (OB); рецептор mpl; CTLA-4; полипептид С; и т.п.

Термин «фрагмент антитела» или «фрагменты антитела» в контексте данного документа относится к антителу природного происхождения, в котором отсутствует один или несколько доменов, или одна или более аминокислот. Как правило, фрагмент антитела содержит весь антигенсвязывающий или вариабельный участок такого антитела природного происхождения. Примеры фрагментов антител включают любое антитело, в котором отсутствует или не имеет участка Fc. Примеры фрагментов антител включают также Fab, Fab', F(ab')2, Fv и scFv фрагменты; димеры; триатела; тетратела; миниантитела; антитела, состоящие по существу из одного, двух или трех доменов иммуноглобулина, таких как Domain AntibodiesTM; одноцепочечные антитела; биспецифические, триспецифические, тетраспецифические или мультиспецифические варианты любого из указанных выше. Термин «фрагмент антитела» или «фрагменты антител» в контексте данного документа также относится к камелоидным антителам (например, верблюдов или лам, такие как NanobodiesTM) и их производным. Фрагменты антител хорошо известны в данной области техники (Holliger and Hudson, 2005). Разработаны различные способы получения фрагментов антител, также известные в данной области техники (Glover and Humphreys, 2004). Термин «фрагмент антитела» или «фрагменты антител» в контексте данного документа содержит человеческие, гуманизированные, приматизированные и фрагменты химерных антител.

Используемый здесь термин «оценка BILAG» или «BILAG» относится к оценке и индексу Британской группы по изучению волчанки, соответственно (Symmons DP et al. Q J Med. 1988 Nov;69(259):927-37). Индекс BILAG использовался для оценки эффективности лечения пациентов с СКВ в исследовании SL0007. Это комплексный показатель для измерения активности болезни СКВ. Для исследований использовалась версия индекса BILAG 2004 года. Эта версия состоит из 86 вопросов по 8 системах организма (общая, слизистая, неврологическая, костно-мышечная, сердечно-сосудистая и дыхательная, васкулярная, почечная и гематологическая). Некоторые из вопросов были основаны на истории пациента, некоторые - на результатах обследования, а другие - на результатах лабораторных исследований. Каждая оценка системы организма варьируется в диапазоне от E до A, причем A является самой высокой активностью заболевания. Интерпретация показателей системы организма заключается в следующем: A («Активная»)=высокоактивная болезнь (для симптом-модифицирующей терапии достаточно, например, более 20 мг/сут преднизона, иммунодепрессантов, цитокинов); B («Внимание»)=умеренно активная болезнь (требуется только симптоматическая терапия, например, меньше или равная 20 мг/день преднизона или противомалярийных препаратов; C («Удовлетворительно»)=умеренная стабильная болезнь (нет показаний для изменения в лечении); D=ранее активная болезнь, но в настоящее время - нет, E=отсутствие предшествующей активности болезни. Когда буквенная оценка системы органов BILAG преобразуются в числовые значения и суммируются (используя правило, в котором каждый BILAG A=9, каждый BILAG B=3, каждый BILAG C=1, и каждый BILAG D или E стоит 0), это называется Итоговой оценкой BILAG.

Используемый здесь термин «CDP7657» относится к моновалентному ПЭГилированному Fab', специфически связывающемуся с CD154, который раскрыт в патентном документе WO 2008/118356 (включенном в данный документ полностью). CDP7657 имеет вариабельный участок легкой цепи (LCVR) с CDR1, CDR2 и CDR3, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:1, 2 и 3, соответственно, и вариабельный участок тяжелой цепи (HCVR) с CDR1, CDR2 и CDR3, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:4, 5 и 6, соответственно. CDP7657 имеет последовательность VL цепи, показанную в SEQ ID NO:7, и последовательность VH цепи, показанную в SEQ ID NO:8. CDP7657 имеет последовательность легкой цепи, показанную в SEQ ID NO:9, и последовательности тяжелой цепи, показанные в SEQ ID NO:10. CDP7657 ПЭГилируется в цистеине в модифицированной шарнирной области, как описано в патентном документе WO 2008/118356.

Используемый здесь термин «комбинированная терапия» относится к введению двух или более терапевтических веществ, например, антитела или фрагмента антитела, специфически связывающихся с CD154 и кортизолом. Кортизол можно вводить одновременно с или перед введением антитела или фрагмента антитела, специфически связывающегося с CD154.

Используемый здесь термин «раз в две недели» в связи с лечением, введением или дозированием антитела или фрагмента антитела, специфически связывающегося с CD154, согласно изобретению, или композиция, содержащая то же самое, относится к введению антитела или фрагмента антитела, специфически связывающегося с CD154, в соответствии с изобретением или указанной композицией каждые 9-19 дней, более предпочтительно, каждые 11-17 дней, еще более предпочтительней, каждые 13-15 дней и, наиболее предпочтительно, каждые 14 дней.

Используемый здесь термин «KD» предназначен для обозначения константы диссоциации конкретного взаимодействия антитело-антиген. Константа диссоциации может относиться к моновалентному связыванию или двухвалентному связыванию. Предпочтительно, константу диссоциации определяют поверхностным плазмонным резонансом.

Используемый здесь термин «нейтрализующее антитело» (или «антитело, которое нейтрализует активность CD154») относится к антителу, связывание которого с CD154 приводит к ингибированию биологической активности CD154. Это ингибирование биологической активности CD154 можно оценить, измеряя один или несколько показателей биологической активности CD154. Эти показатели биологической активности CD154 можно оценить одним или несколькими из различных стандартных анализов in vitro или in vivo, известных в данной области техники. Например, анализы in vitro могут измерять способность антител ингибировать связывание очищенного белка CD40 с CD40L-экспрессирующими клетками или клеточными линиями, или анализ зависимой от Т-клеток активации В-клеток, включающий совместное культивирование CD40L-экспрессирующих Т-клеток, или линии Т-клеток с В-клетками, или В-клеточной линии, и мониторинг экспрессии межклеточной адгезивной молекулы 1 (ICAM-1) в последних клетках. Анализы in vivo могут включать исследование иммунного ответа на антиген, такой как столбнячный токсоид или гемоцианин лимфы улитки, в подходящих видах, таких как примат, отличный от человека, если антитело распознает этот вид, или на мышах, если антитело распознает этот вид. Если антитело распознает CD40L мыши, тогда его можно оценить в мышиной модели СКВ, такой как мыши линии NZB/W или MRL/lpr.

Термин «ПЭГилирование», «полиэтиленгликоль» или «ПЭГ» в контексте данного документа относится к присоединению, например, путем ковалентного связывания соединения полиалкиленгликоля или его производного с или без связующих агентов, или дериватизации со связывающими или активирующими фрагментами (например, с тиолом, трифлатом, тризилатом, азирдином, оксираном или, предпочтительно, с малеимидным фрагментом, например, ПЭГ-малеимид). Другие подходящие соединения полиалкиленгликоля включают, но не ограничиваются ими, малеимидо-монометокси-ПЭГ, активированный ПЭГ-полипропиленгликоль, но также заряженные или нейтральные полимеры следующих типов: декстран, коломиновые кислоты или другие полимеры на основе углеводов, полимеры аминокислот и биотин, и другие аффинные реагенты.

Термин «Расчет индекса активности СКВ» или «индекс активности СКВ (SLEDAI)» относится к оценке/индексу активности системной красной волчанки Erythematosus, соответственно (Hawker et al., J Rheumatol. 1993).

Термин «оценка SRI» или индекс «SRI» относится к оценке индекса/индексу системной красной волчанки Erythematosus пациента с лечебным эффектом (Furie RA et al., Arthritis Rheum. 2009).

Используемый здесь термин «поверхностный плазмонный резонанс» относится к оптическому явлению, которое позволяет анализировать биоспецифические взаимодействия в реальном времени путем обнаружения изменений концентраций белка в матрице биосенсора, например, с использованием системы BIAcore (Pharmacia Biosensor AB, Uppsala, Sweden and Piscataway, NJ). Дальнейшие описания смотри в Примере 1 и Jönsson, U., et al. (1993) Ann. Biol. Clin. 51:19-26; Jönsson, U., et al. (1991) Biotechniques 11:620-627; Johnsson, B., et al. (1995) J. Mol. Recognit. 8:125-131; and Johnnson, B., et al. (1991) Anal. Biochem. 198:268-277.

В первом варианте осуществления изобретение обеспечивает антитело или фрагмент антитела, специфически связывающийся с CD154, для использования в способе лечения аутоиммунного, воспалительного, нейродегенеративного или нервно-мышечного расстройства у субъекта, относящегося к млекопитающим, который включает:

(a) введение начальной нагрузочной дозы приблизительно 20-60 мг/кг антитела или фрагмента антитела, специфически связывающегося с CD154, субъекту, нуждающемуся в таком лечении; и

(b) примерно через 2 недели после начальной нагрузочной дозы, введение дополнительной дозы или дозы равной примерно половине начальной нагрузочной дозы с частотой примерно раз в две недели антитела или фрагмента антитела, специфически связывающегося с CD154, субъекту, нуждающемуся в таком лечении. Начальная нагрузочная доза может составлять примерно 20 мг/кг, 25 мг/кг, 30 мг/кг, 35 мг/кг, 40 мг/кг, 45 мг/кг, 50 мг/кг, 55 мг/кг или 60 мг/кг. Дальнейшая доза может составлять примерно 10 мг/кг, 12,5 мг/кг, 15 мг/кг, 17,5 мг/кг, 20 мг/кг, 22,5 мг/кг, 25 мг/кг, 27,5 мг/кг или 30 мг/кг.

Во втором варианте осуществления изобретения антитело или фрагмент антитела, специфически связывающийся с CD154, в соответствии с первым вариантом осуществления изобретения, вводят пациенту, нуждающемуся в этом, по меньшей мере, в течение 12 недель.

В третьем варианте осуществления изобретения антитело или фрагмент антитела, специфически связывающийся с CD154, в соответствии с первым или вторым вариантом осуществления изобретения, представляет собой нейтрализующее антитело или фрагмент антитела.

В четвертом варианте осуществления изобретения антитело или фрагмент антитела, специфически связывающийся с CD154, в соответствии с первым, вторым или третьим вариантом осуществления изобретения, имеет константу диссоциации для моновалентного связывания с CD40 равную KD≤4,55 пМ, как определено поверхностным плазмонным резонансом.

В пятом варианте осуществления изобретения антитело или фрагмент антитела, специфически связывающийся с CD154, в соответствии с первым, вторым, третьим или четвертым вариантом осуществления изобретения, содержит вариабельный участок легкой цепи (LCVR), имеющий CDR1, CDR2 и CDR3, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:1, 2 и 3, соответственно, и вариабельный участок тяжелой цепи (HCVR), имеющий CDR1, CDR2 и CDR3, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:4, 5 и 6, соответственно.

В шестом варианте осуществления изобретения антитело или фрагмент антитела, специфически связывающийся с CD154, в соответствии с первым, вторым, третьим, четвертым или пятым вариантами осуществления изобретения, содержит каркасные участки для вариабельной области легкой цепи (VL), предпочтительно, из Vκ1 семейства зародышевых линий человека, более предпочтительно, из V-области Vκ1 2-1-(1) O12 и, наиболее предпочтительно, из каркасных последовательностей VL-цепи, показанных в SEQ ID NO:7. Каркасные участки для вариабельной области тяжелой (VH) цепи, предпочтительно, состоят из цепи VH4 семейства зародышевых линий, более предпочтительно, из последовательности VH4 1-1 4-59, и, наиболее предпочтительно, из каркасных последовательностей VH, показанных в SEQ ID NO:8.

В седьмом варианте осуществления изобретения антитело или фрагмент антитела, специфически связывающийся с CD154, в соответствии с первым, вторым, третьим, четвертым, пятым или шестым вариантами осуществления изобретения, проявляет моновалентное связывание с CD40 и, предпочтительно, имеет только один сайт связывания, который специфически связывается CD154. Предпочтительно, чтобы антитело или фрагмент антитела, специфически связывающийся с CD154, представлял собой домен VH или доменное антитело (dAb), Fab, Fab', Fv, Fab-Fv, Fab-dsFv, Fab-Fv-Fv, Fd, HL, dsHL, LH, DsLH, одноцепочечное антитело (например, scFv, scFab и scFabΔC) или другой моновалентной фрагмент, или производное антитела, или биспецифичное или мультиспецифичное антитело, проявляющее специфическое и моновалентное связывание с CD154, такие как DVD-Ig, TriomabTM, F(Ab)2, F(ab')2, F(ab')3, (Fab-Fv)2-Fc или триотело.

В восьмом варианте осуществления изобретения антитело или фрагмент антитела, специфически связывающийся с CD154, в соответствии с первым, вторым, третьим, четвертым, пятым, шестым или седьмым вариантами осуществления изобретения, представляет собой конъюгат, содержащий любое антитело или фрагмент антитела, который специфически связывает CD154, конъюгированный ковалентно или нековалентно, или прямо, или опосредованно к функциональному фрагменту, такому как белок-носитель, токсин или другая эффекторная молекула, например, ПЭГ. Антитело или фрагмент антитела, специфически связывающийся с CD154, может быть ПЭГилированным, например, при одном или нескольких остатках цистеина или лизина. В некоторых вариантах осуществления фрагмент антитела, специфически связывающийся с CD154, представляет собой Fab или Fab' фрагмент, ПЭГилированный посредством малеимидного линкера. В других вариантах осуществления изобретения фрагмент антитела, специфически связывающийся с CD154, конъюгирован с функциональным фрагментом, который представляет собой блокирующий фрагмент, детектируемый фрагмент (например, флуоресцентный фрагмент, радиоизотопный фрагмент, рентгеноконтрастный фрагмент и т. д., включая диагностический фрагмент) и/или терапевтический фрагмент (например, цитотоксический агент, противовоспалительный агент, иммуномодулирующий агент, противоинфекционный агент, противораковый агент, антинейродегенеративный агент, радионуклид и т. д.).

В девятом варианте осуществления изобретения антитело или фрагмент антитела, специфически связывающийся с CD154, в соответствии с первым, вторым, третьим, четвертым, пятым, шестым, седьмым или восьмым вариантами осуществления изобретения, антитело содержит последовательность цепи VL, показанную в SEQ ID NO:7, и последовательность цепи VH, показанную в SEQ ID NO:8.

В десятом варианте осуществления изобретения антитело или фрагмент антитела, специфически связывающийся с CD154, в соответствии с первым, вторым, третьим, четвертым, пятым, шестым, седьмым, восьмым или девятым вариантами осуществления изобретения, антитело имеет последовательность легкой цепи, показанную в SEQ ID NO:9, и последовательности тяжелой цепи, показанные в SEQ ID NO:10.

В одиннадцатом варианте осуществления изобретения антитело или фрагмент антитела, специфически связывающийся с CD154, для использования в способе лечения аутоиммунного, воспалительного, нейродегенеративного или нервно-мышечного расстройства у субъекта, относящегося к млекопитающему, в соответствии с первым, вторым, третьим, четвертым, пятым, шестым, седьмым, восьмым, девятым или десятым вариантом осуществления изобретения фрагмент антитела представляет собой моновалентный Fab', имеющий последовательность легкой цепи, показанную в SEQ ID NO:9, и последовательности тяжелой цепи, показанные в SEQ ID NO:10.

В двенадцатом варианте осуществления изобретения моновалентный Fab', имеющий последовательность легкой цепи, показанную в SEQ ID NO:9, и последовательности тяжелой цепи, показанные в SEQ ID NO:10, в соответствии с одиннадцатым вариантом осуществления изобретения, ПЭГилируется в цистеине в модифицированной шарнирной области. Предпочтительно, моновалентный Fab', имеющий последовательность легкой цепи, показанную в SEQ ID NO:9, и последовательности тяжелой цепи, показанные в SEQ ID NO:10, в соответствии с одиннадцатым вариантом осуществления изобретения, имеет малеимидную группу, ковалентно связанную с одной тиольной группой в модифицированной шарнирной области; лизиновый остаток ковалентно связан с малеимидной группой; и к каждой из аминогрупп лизинового остатка присоединен полимер метоксиполи(этиленгликоль), имеющий молекулярную массу приблизительно 20 кДа. Таким образом, общая молекулярная масса всего ПЭГ, ковалентно связанного с моновалентным Fab', составляет приблизительно 40 кДа.

В других вариантах осуществления антитело или фрагмент антитела, специфически связывающийся с CD154, для использования в способе лечения аутоиммунного, воспалительного, нейродегенеративного или нервно-мышечного расстройства у субъекта, относящегося к млекопитающим, в соответствии с любым из вариантов осуществления изобретения, представляют собой антитела, фрагменты или производные антител, как описано в патентном документе WO 2008/118356 и WO 2006/030220 (содержание каждого из которых включено здесь полностью).

Тринадцатый вариант осуществления изобретения представляет собой антитело или фрагмент антитела, специфически связывающийся с CD154, для использования в способе лечения аутоиммунного, воспалительного, нейродегенеративного или нервно-мышечного расстройства у субъекта, относящегося к млекопитающим, в соответствии с первым, вторым, третьим, четвертым, пятым, шестым, седьмым, восьмым, девятым, десятым, одиннадцатым или двенадцатым вариантом осуществления способов лечения аутоиммунного, воспалительного, нейродегенеративного или нейромышечного заболевания, при котором аутоиммунным, воспалительным, нейродегенеративным или нервно-мышечным заболеванием является системная красная волчанка (СКВ), волчаночный нефрит, ревматоидный артрит, серонегативные спондилоартропатии, псориаз, псориатический артрит, склеродермия, синдром Шегрена, рассеянный склероз, диабет типа I, аутоиммунный увеит и нефротический синдром или васкулит.

В другом варианте осуществления антитело или фрагмент антитела, специфически связывающийся с CD154, в соответствии с любым из вариантов осуществления изобретения, предназначен для использования в способе лечения системной красной волчанки (СКВ), где субъект, получающий лечение антителом или фрагментом антитела, специфически связывающимся с CD154, достигает улучшения по сравнению с исходным уровнем одного или нескольких показателей, выбранных из индекса активности СКВ (SLEDAI), индекса Британской группы по изучению волчанки (BILAG) и глобальной оценки врача. Таким образом, в одном варианте осуществления изобретение относится к способам лечения субъекта, имеющего СКВ, с использованием способов, описанных здесь, в которых субъект достигает улучшения по одному из данных показателей.

В другом варианте осуществления антитело или фрагмент антитела, специфически связывающийся с CD154, в соответствии с любым из вариантов осуществления изобретения, предназначен для использования в способе лечения системной красной волчанки (СКВ), где субъект, лечащийся антителом или фрагментом антитела, специфически связывающимся с CD154, достигает индекса SLEDAI 4 пациента с терапевтическим эффектом (SRI-4). Таким образом, в одном варианте осуществления изобретение относится к способам лечения субъекта, имеющего СКВ, с использованием способов, описанных здесь, в которых субъект достигает индекса SLEDAI 4 пациента с терапевтическим эффектом.

В другом варианте осуществления антитело или фрагмент антитела, специфически связывающийся с CD154, в соответствии с любым из вариантов осуществления изобретения, предназначен для использования в способе лечения системной красной волчанки (СКВ), где субъект, лечащийся антителом или фрагментом антитела, специфически связывающимся с CD154, достигает 50% улучшения по сравнению с исходным уровнем индекса SRI-50. Таким образом, в одном варианте осуществления изобретение относится к способам лечения субъекта, имеющего СКВ, с использованием способов, описанных здесь, где субъект достигает 50% улучшения от исходного уровня индекса SRI-50.

В другом варианте осуществления антитело или фрагмент антитела, специфически связывающийся с CD154, в соответствии с любым из вариантов осуществления изобретения, предназначен для использования в способе лечения системной красной волчанки (СКВ), где субъект, лечащийся антителом или фрагментом антитела, специфически связывающимся с CD154, достигает увеличения на 20%, 30%, 40%, 50%, 75% или 90% от исходного уровня или нормализации концентраций комплементов C3 и C4, или уменьшения на 20%, 30%, 40%, 50%, 75% или 90% титра антител к двуспиральной ДНК в сыворотке. Таким образом, в одном варианте осуществления изобретение относится к способам лечения субъекта, имеющего СКВ, с использованием способов, описанных здесь, где субъект достигает увеличения на 20%, 30%, 40%, 50%, 75% или 90% от исходного уровня или нормализации концентрации комплементов C3 и C4, или уменьшения на 20%, 30%, 40%, 50%, 75% или 90% титра антител к двуспиральной ДНК в сыворотке.

В другом варианте осуществления антитело или фрагмент антитела, специфически связывающийся с CD154, в соответствии с любым из вариантов осуществления изобретения, предназначен для использования в способе лечения системной красной волчанки (СКВ), где субъект, лечащийся антителом или фрагментом антитела, специфически связывающимся с CD154, возвращается от серопозитивного к серонегативному результату для антител к двуспиральной ДНК. Таким образом, в одном варианте осуществления изобретение относится к способам лечения субъекта, имеющего СКВ, с использованием способов, описанных здесь, в которых субъект возвращается от серопозитивного к серонегативному результату для антител к двуспиральной ДНК.

В другом варианте осуществления антитело или фрагмент антитела, специфически связывающийся с CD154, в соответствии с любым из вариантов осуществления изобретения, ковалентно связан с ПЭГ через тиольную группу, по меньшей мере, одного цистеинового остатка, расположенного в антителе или фрагменте антитела по настоящему изобретению. Каждая молекула ПЭГ, присоединенная к антителу или фрагменту антитела, может быть ковалентно связана с атомом серы цистеинового остатка, расположенного в антителе или фрагменте антитела. Ковалентная связь обычно будет представлять собой дисульфидную связь или, в частности, сероуглеродную связь. Если тиольная группа используется в качестве точки прикрепления соответственно активированных функциональных фрагментов, например, могут быть использованы тиолоселективные производные, такие как малеимиды и производные цистеина. Активированный ПЭГ можно использовать в качестве исходного материала для получения фрагментов антител, модифицированных ПЭГ, как описано выше. Активированным ПЭГ может быть любой ПЭГ, содержащий реакционноспособную тиольную группу, такую как галогенкарбоновая кислота или сложный эфир, например, иодацетамид, имид, например, малеимид, винилсульфон или дисульфид. В другом варианте осуществления конъюгат фрагмента антитела может содержать две молекулы ПЭГ с двумя молекулами малеимида. Исходные материалы могут быть получены коммерчески (например, в компании Nektar, ранее Shearwater Polymers Inc., Huntsville, AL, USA) или могут быть получены из коммерчески доступных исходных материалов с использованием обычных химических методик. Конкретные молекулы ПЭГ включают метокси-ПЭГ-амин с молекулярной массой 20 кДа (доступны в компании Nektar, ранее Shearwater; Rapp Polymere; и SunBio) и M-PEG-SPA (доступны в компании Nektar, ранее Shearwater).

В другом варианте осуществления антитело или фрагмент антитела, специфически связывающийся с CD154, представляет собой модифицированный Fab'-фрагмент, который является ПЭГилированным, то есть имеет ПЭГ (поли(этиленгликоль)), ковалентно к нему прикрепленный, например, в соответствии со способом, описанным в патентном документе EP0948544 (смотри также ʺPoly(ethyleneglycol) Chemistry, Biotechnical and Biomedical Applications», 1992, J. Milton Harris (ed), Plenum Press, New York, ʺPoly(ethyleneglycol) Chemistry and Biological Applicationsʺ, 1997, J. Milton Harris and S. Zalipsky (eds), American Chemical Society, Washington DC and ʺBioconjugation Protein Coupling Techniques for the Biomedical Sciencesʺ, 1998, M. Aslam and A. Dent, Grove Publishers, New York; Chapman, A. 2002, Advanced Drug Delivery Reviews 2002, 54:531-545). В одном примере ПЭГ прикрепляется к цистеину в шарнирной области. В другом примере фрагмент Fab', модифицированный PEG, имеет малеимидную группу, ковалентно связанную с одной тиольной группой в модифицированной области шарнира. Лизиновый остаток может быть ковалентно связан с малеимидной группой, и к каждой из аминогрупп по остатку лизина может быть присоединен полимер метоксиполи(этиленгликоля), имеющий молекулярную массу приблизительно 20 кДа. Таким образом, общая молекулярная масса ПЭГ, присоединенного к фрагменту Fab', может составлять приблизительно 40 кДа.

В другом варианте осуществления антитело или фрагмент антитела, специфически связывающийся с CD154, в соответствии с любым из вариантов осуществления изобретения функциональный фрагмент ПЭГ присоединен с использованием способов, описанных в патентном документе WO 98/25971 (содержание которого включено здесь полностью) и патентном документе WO 04/72116 (содержание которого включено здесь полностью), в результате чего лизил-малеимидная группа присоединена к цистеиновому остатку на С-конце тяжелой цепи, и каждая аминогруппа лизилового остатка имеет ковалентно привязанный метоксиполи(этиленгликоль), имеющий молекулярную массу около 20 кДа. Таким образом, общая молекулярная масса ПЭГ, присоединенного к антителу, составляет около 40 кДа.

Другим вариантом осуществления изобретения является антитело или фрагмент антитела, специфически связывающийся с CD154, для использования в способе лечения аутоиммунного, воспалительного, нейродегенеративного или нервно-мышечного расстройства у субъекта, относящегося к млекопитающим, в соответствии с любым из вариантов осуществления изобретения, где способ включает внутривенное введение, подкожное или внутримышечное введение антитела или фрагмента антитела индивидууму, нуждающемуся в этом. Подкожное введение является предпочтительным, поскольку пациент может самостоятельно вводить терапевтическое вещество, например, антитело или фрагмент антитела, специфически связывающийся с CD154, что удобно как для пациента, так и для лечащего врача.

В некоторых вариантах осуществления антитело или фрагмент антитела, специфически связывающийся с CD154, содержит константный участок тяжелой цепи, такой как IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA, IgE, IgM или константный участок IgD. Предпочтительно, константный участок тяжелой цепи сконструирован таким образом, что он не гликозилирован. Кроме того, антитело может содержать константный участок легкой цепи, либо константный участок легкой цепи каппа, либо константный участок легкой цепи ламбда. Предпочтительно, антитело содержит константный участок легкой цепи каппа.

Антитело или фрагмент антитела, специфически связывающийся с CD154, по изобретению может быть введен в фармацевтические композиции, подходящие для введения субъекту внутривенно, подкожно или внутримышечно раз в две недели. Как правило, фармацевтическая композиция содержит антитело или фрагмент антитела, специфически связывающийся с CD154, по изобретению, и/или фармацевтически приемлемый носитель, и/или другой активный ингредиент, такой как метотрексат или кортизол.

Другим вариантом осуществления изобретения является фармацевтическая композиция, содержащая антитело или фрагмент антитела, специфически связывающийся с CD154, в соответствии с любым из вариантов осуществления изобретения, и фармацевтически приемлемый носитель, где композицию готовят для внутривенного, подкожного или внутримышечного введения индивидууму, нуждающемуся в этом. В другом варианте осуществления композиция является частью набора с инструкциями по применению, включая инструкции и, необязательно, устройство для внутривенного, подкожного или внутримышечного введения индивидууму, нуждающемуся в этом.

Используемый здесь термин «фармацевтически приемлемый носитель» включает любые и всевозможные растворители, дисперсионные среды, эмульгаторы, антибактериальные и противогрибковые агенты, изотонические и замедляющие абсорбцию агенты, и тому подобное, которые физиологически совместимы и приемлемы для введения субъекту для способов, описанных здесь. Примеры фармацевтически приемлемых носителей включают один или более из: воды, солевого раствора, фосфатно-буферного солевого раствора, декстрозы, глицерина, этанола и тому подобного, а также их комбинаций. Во многих случаях предпочтительно включать изотонические агенты, например, сахара, полиспирты, такие как маннит, сорбит или хлорид натрия в композиции. Фармацевтически приемлемые носители могут дополнительно содержать незначительные количества вспомогательных веществ, таких как смачивающие или эмульгирующие агенты, консерванты или буферы, которые увеличивают срок годности или эффективность антитела, или части антитела. Композиции настоящего изобретения могут быть в различных формах. К ним относятся, например, жидкие растворы (например, инъекционные и невоспламеняющиеся растворы), дисперсии или суспензии, порошки и липосомы.

Предпочтительная форма зависит от предполагаемого способа введения и терапевтического применения. Типичные предпочтительные композиции находятся в форме инъекционных или невоспламеняющихся растворов, таких как композиции, аналогичные композициям, используемым для пассивной иммунизации людей другими антителами.

Терапевтические композиции обычно должны быть стерильными и стабильными в условиях производства и хранения. Композицию можно приготовить в виде раствора, микроэмульсии, дисперсии, липосомы или другой упорядоченной структуры, подходящей для высокой концентрации лекарственного средства. Стерильные растворы для инъекций могут быть получены путем включения активного соединения (например, антитела или части антитела) в требуемом количестве в подходящем растворителе с использованием одного или комбинации ингредиентов, перечисленных выше, с последующей стерилизацией фильтрованием. Как правило, дисперсии получают путем включения активного соединения в стерильный носитель, который содержит основную дисперсионную среду и другие требуемые ингредиенты из перечисленных выше. В случае стерильных порошков, для приготовления стерильных растворов для инъекций предпочтительными способами получения являются вакуумная сушка и лиофильная сушка, которая дает порошок активного ингредиента плюс любой дополнительный желаемый ингредиент из ранее стерилизованного фильтрованием раствора. Надлежащую текучесть раствора можно поддерживать, например, путем использования эмульгатора, такого как лецитин, путем поддержания требуемого размера частиц в случае дисперсии, и путем использования поверхностно-активных веществ. Пролонгированное всасывание инъекционных композиций может быть обеспечено путем включения в состав агента, который задерживает абсорбцию, например, моностеаратные соли и желатин. В некоторых вариантах осуществления активное соединение может быть получено с носителем, который защитит соединение от быстрого высвобождения, такое как композиция с контролируемым высвобождением. [0078] Могут быть использованы биодеградируемые, биосовместимые полимеры, такие как этиленвинилацетат, полиэтиленгликоль (ПЭГ), полиангидриды, полигликолевая кислота, коллаген, полиортоэфиры и полимолочная кислота. Многие способы изготовления таких составов запатентованы или известны специалистам в данной области техники. Смотри, например, Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems, J.R. Robinson, ed., Marcel Dekker, Inc., New York, 1978.

В следующем варианте осуществления дополнительные активные ингредиенты включены в фармацевтическую композицию, содержащую антитело или фрагмент антитела, специфически связывающийся с CD154, в соответствии с изобретением. В некоторых вариантах осуществления антитело или фрагмент антитела, специфически связывающийся с CD154, совместно формулируется с и/или совместно вводится с одним или несколькими дополнительными терапевтическими агентами. Например, антитело или фрагмент антитела, специфически связывающийся с CD154, может быть совместно сформулирован и/или введен совместно с кортикостероидом, нестероидным противовоспалительным лекарственным средством (NSAID) или терапиями, нацеленными на многие провоспалительные цитокины, которые, как известно, участвуют в патогенезе иммуно-опосредованных нарушений, такие как TNF, IL-1, IL-6, CTLA-4, IFN или те, которые нацелены на активность B-клеток, такие как CD19, CD20 (например, ритуксимаб), CD22 (например, эпратузумаб), BAFF (например, белимумаб) и BLyS/APRIL (например, атацицепт), которые сами могут или не могут быть составлены с полиэтиленгликолевыми (ПЭГ) фрагментами.

В следующем варианте осуществления антитело или фрагмент антитела, специфически связывающийся с CD154, в соответствии с изобретением, или композиция, содержащая то же самое, могут быть использованы в соответствии с вариантами осуществления изобретения в сочетании с одним или несколькими из вышеперечисленных терапевтических агентов. Такая комбинированная терапия может преимущественно использовать более низкие дозы вводимых терапевтических агентов, что позволяет избежать возможных токсических эффектов или осложнений, связанных с различными монотерапиями.

Аутоиммунное заболевание (заболевания) или «воспалительное заболевание (заболевания), которые могут лечиться антителом или фрагментом антитела, специфически связывающимся с CD154, в соответствии с методом или использованием изобретения, включает, но не ограничивается ими, системную красную волчанку (СКВ), ревматоидный артрит, анкилозирующий спондилоартрит, волчаночный нефрит, синдром Шегрена, полимиозит, дерматомиозит, височный артериит, АНЦА-ассоциированный васкулит, синдром Черджа-Стросса, антифосфолипидный синдром, мембранную гломерулонефропатию, болезнь Гудпасчера, IgA-нефропатию, болезнь Шенлейн-Геноха, хроническое отторжение трансплантата, атонический дерматит, вульгарную пузырчатку, псориаз, астму, аллергию, системный склероз, рассеянный склероз, синдром Гийена-Барре, поперечный миелит, хроническую иммунную полинейропатию, миастению гравис, болезнь Аддисона, тиреоидит, аутоиммунный гастрит, пернициозную анемию, целиакию, язвенный колит, саркоидоз, гемолитическую анемию, идиопатическую тромбоцитопеническую пурпуру, синдром Бехчета, первичный билиарный цирроз, аутоиммунный диабет, нейроборрелиоз Лайма, интерстициальное заболевание легких.

В дополнение к вышеуказанным условиям - для которых в качестве первичного патологического процесса установлено аутоиммунное или перекрестное реактивное иммуно-опосредованное воспаление - воспаление также рассматривается как одно из сочетаний, способствующих процессам многих заболеваний.

Среди них нейродегенеративное заболевание (заболевания), которое можно лечить антителом или фрагментом антитела, специфически связывающимся с CD154, в соответствии со способом или применением изобретения являются наследственными или спорадическими условиями, которые характеризуются прогрессирующей дисфункцией нервной системы. Эти расстройства часто связаны с атрофией пораженных центральных или периферических структур нервной системы. Например, нейродегенеративные заболевания включают, но не ограничиваются ими, болезнь Альцгеймера, болезнь Паркинсона, наследственную атаксию Фридрейха, болезнь Хантингтона, боковой амиотрофический склероз, миастению гравис, многофокальную моторную нейропатию, первичный латеральный склероз, спинальную мышечную атрофию, болезнь Кеннеди и спинально-церебеллярную атаксию.

Аналогичным образом, такие состояния, как атеросклероз, сердечная недостаточность, остеоартрит, неалкогольный стеатогепатит, синдром раздраженной толстой кишки, болезнь Крона, диабетические осложнения (нефропатия, невропатия, артериопатия, ретинопатия), астма, кистозный фиброз, хроническая обструктивная болезнь дыхательных путей, эпилепсия, глаукома, возрастная дегенерация желтого пятна, психические расстройства (тревожность, депрессия, психоз), синдром хронической усталости, энтезиопатия/тендинопатии, невынашивание/внутриуробная инфекция, ожирение/метаболический синдром, кожные заболевания (угри обыкновенные, розовые угри, солнечный кератоз), аномальное заживление ран (келоидное рубцевание), заболевания урогенитальных органов (простатизм/простатит, синдром сверхактивного мочевого пузыря) и развитие рака - все поддаются лечению антителом или фрагментом антитела, специфически связывающимся с CD154, в соответствии со способом или применением изобретения.

Антитело или фрагмент антитела, специфически связывающийся с CD154, в соответствии с изобретением может быть получен методом рекомбинантной экспрессии генов легкой и тяжелой цепи иммуноглобулина в клетке-хозяина. Чтобы экспрессировать антитело рекомбинантно, клетку-хозяина трансфицируют одним или несколькими рекомбинантными экспрессирующими векторами, несущими фрагменты ДНК, кодирующие легкие и тяжелые цепи иммуноглобулина антитела, так что легкая и тяжелая цепи экспрессируются в клетке-хозяина и, предпочтительно, секретируются в среду, в которой культивируют клетки-хозяина, из которой можно выделить антитела. Стандартные методики рекомбинантной ДНК, которые используются для получения генов тяжелой и легкой цепи антитела, включают эти гены в рекомбинантные экспрессирующие векторы и вводят векторы в клетки-хозяина, такие как описанные в Sambrook, Fritsch and Maniatis (eds), Molecular Cloning; A Laboratory Manual, Second Edition, Cold Spring Harbor, N.Y., (1989), Ausubel, F. M. et al. (eds.) Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Associates, (1989) and in US Patent No. 4,816,397.

Для экспрессии антитела или фрагмента антитела, специфически связывающегося с CD154, согласно изобретению ДНК, кодирующие легкие и тяжелые цепи, полученные методами рекомбинантной ДНК, известными в данной области техники, вставляют в векторы экспрессии, так что гены оперативно связаны с транскрипционными и трансляционными контрольными последовательностями. В данном контексте термин «оперативно связанный» означает, что ген антитела лигируются в вектор, так что транскрипционные и трансляционные контрольные последовательности внутри вектора выполняют свою предполагаемую функцию регулирования транскрипции и трансляции генов, кодирующих тяжелую и легкую цепь антитела или фрагмента антитела, специфически связывающегося с CD154, в соответствии с изобретением. Экспрессирующие векторы и последовательности регулирования экспрессии выбирают так, чтобы они были совместимы с используемой экспрессией клетки-хозяина. Ген легкой цепи и ген тяжелой цепи могут быть вставлены в отдельный вектор или, более типично, оба гена вставляются в один и тот же вектор экспрессии. Гены антитела вводят в экспрессирующий вектор стандартными способами (например, лигирование комплементарных сайтов рестрикции на фрагменте гена и вектора или тупого конца лиганда, если сайты рестрикции отсутствуют). Рекомбинантный вектор экспрессии может кодировать сигнальный пептид, который облегчает секрецию цепи антитела из клетки-хозяина. Ген цепи антитела может быть клонирован в вектор, так что сигнальный пептид связан в рамке с аминоконцом геном цепи антитела. Сигнальный пептид может представлять собой сигнальный пептид иммуноглобулина или гетерологичный сигнальный пептид (то есть сигнальный пептид из неиммуноглобулинового белка).

В дополнение к антителу, генам цепи антитела или фрагмента антитела, специфически связывающегося с CD154, в соответствии с изобретением рекомбинантные экспрессирующие векторы по изобретению несут регуляторные последовательности, которые контролируют экспрессию генов цепи антитела в клетке-хозяина. Термин «регуляторная последовательность» предназначен для включения промоторов, энхансеров и других элементов управления экспрессией (например, сигналов полиаденилирования), которые контролируют транскрипцию или трансляцию генов цепи антитела. Такие регуляторные последовательности описаны, например, Goeddel; Gene Expression Technology: Methods in Enzymology 185, Academic Press, San Diego, Calif. (1990). Специалистам в данной области техники будет понятно, что конструкция вектора экспрессии, включая выбор регуляторных последовательностей, может зависеть от таких факторов, как выбор трансформирующей клетки-хозяина, уровень экспрессии желаемого белка и т. д. Предпочтительные регуляторные последовательности для экспрессии клетки-хозяина млекопитающих включают вирусные элементы, которые направляют высокие уровни экспрессии белка в клетках млекопитающих, такие как промоторы и/или энхансеры, полученные из цитомегаловируса (CMV) (такие как промотор/энхансер CMV), вирус обезьян 40 (SV40) (такие как промотор/энхансер SV40), аденовирус, [например, основной поздний промотор аденовируса (AdMLP)] и полиома.

В дополнение к генам цепи антитела и регуляторным последовательностям рекомбинантные экспрессирующие векторы могут нести дополнительные последовательности, такие как последовательности, которые регулируют репликацию вектора в клетках-хозяина (например, точка начала репликации) и селектируемые маркерные гены. Селектируемый маркерный ген облегчает выбор клеток-хозяина, в которые был введен вектор (смотри, например, Патент U.S. № 5,179,017).

Для экспрессии легкой и тяжелой цепей вектор (векторы) экспрессии, кодирующий тяжелую и легкую цепи, трансфицируют в клетку-хозяина стандартными методами. Различные формы термина «трансфекция» предназначены для охвата широкого спектра методов, обычно используемых для введения экзогенной ДНК в прокариотическую или эукариотическую клетку-хозяина, например, электропорация, осаждение кальций-фосфатом, диэтиламиноэтилдекстран-опосредованная трансфекция и тому подобное. Хотя теоретически возможно экспрессировать антитела по изобретению в прокариотических или эукариотических клетках-хозяина, экспрессия антител в эукариотических клетках и, наиболее предпочтительно, клетках-хозяина млекопитающих является наиболее предпочтительной, поскольку такие эукариотические клетки и, в частности, клетки млекопитающих, являются более подходящими, чем прокариотические клетки для сборки и секреции должным образом сложенного и иммунологически активного антитела.

Предпочтительные клетки-хозяина млекопитающих для экспрессии антитела или фрагмента антитела, специфически связывающегося с CD154, в соответствии с изобретением для использования в соответствии со способами по изобретению включают клетки яичника китайского хомячка (клетки СНО), клетки миеломы NSO, клетки COS и клетки SP2. Когда рекомбинантные экспрессирующие векторы, кодирующие гены антитела, вводят в клетки-хозяина млекопитающих, антитела получают путем культивирования клеток-хозяина в течение периода времени, достаточного для того, чтобы допускать экспрессию антитела в клетках-хозяина или, более предпочтительно, секрецию антитела в культуральную среду, в которой выращивают клетки-хозяина. Антитела могут быть выделены из культуральной среды с использованием стандартных методов очистки белка.

В предпочтительной системе для рекомбинантной экспрессии антитела или фрагмента антитела, специфически связывающегося с CD154, согласно изобретению рекомбинантный вектор экспрессии, кодирующий как тяжелую цепь антитела, так и легкую цепь антитела, вводится в клетки dhfr-CHO посредством кальций-фосфатной трансфекции. В рекомбинантном экспрессирующем векторе гены тяжелой и легкой цепи антитела функционально связаны с регуляторными элементами энхансера CMV/AdMLP для обеспечения высокого уровня транскрипции генов. Рекомбинантный экспрессирующий вектор также несет ген DHFR, который позволяет выбирать клетки CHO, которые были трансфицированы вектором, с использованием селекции/амплификации метотрексата. Выбранный трансформант клетки-хозяина являются культурой, допускающий экспрессию тяжелых и легких цепей антител, и интактное антитело выделяется из культуральной среды. Стандартные методы молекулярной биологии используются для получения рекомбинантного экспрессирующего вектора, трансфекции клеток-хозяина, отбора трансформантов, культивирования клеток-хозяина и извлечения антитела из культуральной среды.

Предпочтительные композиции, подходящие для введения обследуемому человеку, для способов согласно вариантам осуществления изобретения, содержат антитело или фрагмент антитела, специфически связывающийся с CD154, в соответствии с изобретением, и фармацевтически приемлемый носитель, эксципиент или стабилизатор. Используемый здесь термин «фармацевтически приемлемый носитель» включает любые и всевозможные растворители, дисперсионные среды, эмульгаторы, антибактериальные и противогрибковые агенты, изотонические и замедляющие абсорбцию агенты, и тому подобное, которые физиологически совместимы и приемлемы для введения субъекту для способов, описанных здесь. Приемлемые носители, эксципиенты или стабилизаторы являются нетоксичными для реципиентов при используемых дозировках и концентрациях, и включают буферы, такие как фосфат, цитрат и другие органические кислоты; антиоксиданты, включая аскорбиновую кислоту и метионин; консерванты (такие как октадецилдиметилбензил аммоний хлорид; хлорид гексаметония; хлорид бензалкония, бензетоний хлорид; фенол, бутил или бензиловый спирт; алкилпарабены, такие как метил- или пропил-парабен; катехол; резорцин; циклогексанол; 3-пентанол и м-крезол ); низкомолекулярные (не более чем примерно 10 аминокислотных остатков) пептиды; белки, такие как сывороточный альбумин, желатин или иммуноглобулины; гидрофильные полимеры, такие как поливинилпирролидон; аминокислоты, такие как глицин, глутамин, аспарагин, гистидин, аргинин или лизин; моносахариды, дисахариды, и другие углеводы, включая глюкозу, маннозу или декстрины; хелатирующие агенты, такие как ЭДТА; сахара, такие как сахароза, маннит, трегалоза или сорбит; солеобразующие противоионы, такие как натрий; комплексы металлов (например, Zn-протеиновые комплексы); и/или неионные поверхностно-активные вещества, такие как TWEEN, PLURONICS или полиэтиленгликоль.

Терапевтические композиции обычно должны быть стерильными и стабильными в условиях производства и хранения. Композицию можно приготовить в виде раствора или лиофилизированной формы.

Содержащий в контексте настоящей спецификации предназначено для обозначения включающий.

Там, где технически целесообразно, варианты осуществления изобретения могут быть объединены.

Далее изобретение будет описано со ссылкой на следующие примеры, которые являются просто иллюстративными и никоим образом не должны истолковываться как ограничивающие объем настоящего изобретения.

ПРИМЕРЫ

Пример 1

Определение аффинности связывания.

Анализ биамолекулярного взаимодействия (BIA) проводили с использованием прибора BIAcore 3000. Аффинно очищенный козлиный фрагмент F(ab')2, специфичный к человеческому IgG, фрагмент F(ab')2 иммобилизуется на чипе CM5 Sensor Chip с помощью химического состава аминного связывания до уровня захвата приблизительно 4000 единиц ответа (RU). Буфер HBS-EP (10 мМ HEPES pH 7,4, 0,15 М NaCl, 3 мМ ЭДТА, 0,005% (объемная доля)) Surfactant P20) использовали в качестве рабочего буфера со скоростью потока 10 мкл/минута (мин). 10 мкл инъекции тестового антитела CD154 или Fab в количестве 10 мкг/мл использовали для захвата иммобилизованным IgG-F(ab')2 против человека. Человеческий CD154 титровали по захваченному антителу CD154 или Fab при различных концентрациях (1 нМ или ниже) при скорости потока 3 мкл/мин. Поверхность была регенерирована 2×10 мкл инъекциями 40 мМ HCl с последующей 5 мкл инъекцией 5 мМ NaOH при скорости потока 10 мкл/мин.

Пример 2

Исследование SL0013: клиническое исследование состояло двух частей, в которых во время первой части оценивали возрастающие однократные внутривенные дозы CDP7657 для оценки безопасности, переносимости и фармакокинетических профилей при 0,004 мг/кг, 0,02 мг/кг, 0,1 мг/кг, 0,5 мг/кг и 1,7 мг/кг в 5 группах, каждая из 3 здоровых мужчин добровольцев, а затем дозу 5 мг/кг в двух других группах из 3 здоровых мужчин добровольцев и 3 здоровых женщин добровольцев. После установления приемлемых профилей, вторая часть исследования оценивала однократные внутривенные дозы при 5 мг/кг, 15 мг/кг, 30 мг/кг и 60 мг/кг в 4 группах из 3 пациентов добровольцев (у которых был установлен диагноз системная красная волчанка, СКВ). В дополнение к дальнейшим оценкам безопасности, переносимости и фармакокинетики, также были исследованы фармакодинамические эффекты с использованием различных маркеров заболевания.

При проведении этого исследования были установлены основные характеристики как для антитела против CD154/фрагмента антитела, так и его ПЭГ-компонента.

Пример 3

Исследование SL0014: клиническое исследование, в котором пациенты с установленным диагнозом СКВ были рандомизированы двойным слепым способом, для получения шести внутривенных доз CDP7657 (n=16) или соответствующего плацебо (n=8) в течение 10 недель. Испытуемый режим дозирования (у тех, кто принимал активный препарат) включал одну нагрузочную дозу 30 мг/кг, а затем поддерживающую дозу 15 мг/кг каждые 2 недели после этого, в общей сложности 6 доз CDP7657. В дополнение к оценке безопасности, переносимости и фармакокинетических профилей CDP7657 по сравнению с плацебо, в исследовании изучалась иммуногенность (как антигена CD154, так и ПЭГ-компонентов), воздействие на различные маркеры болезни и влияние на параметры во время клинических заболеваний и в течение 18 недель после лечения. Таким образом, была установлена безопасность, переносимость и способность режима дозирования производить модифицирующие заболевание эффекты.

1. Способ лечения аутоиммунного расстройства у пациента-млекопитающего, который включает:

a) введение начальной нагрузочной дозы 20-60 мг/кг моновалентного Fab’-фрагмента антитела, специфически связывающегося с CD154, указанному пациенту; и

b) через 2 недели после введения начальной нагрузочной дозы, введение дополнительной дозы или дозы в размере половины от начальной нагрузочной дозы с частотой раз в две недели указанного фрагмента антитела указанному пациенту,

где указанный фрагмент антитела имеет легкую цепь с последовательностью SEQ ID NO:9 и тяжелую цепь с последовательностью SEQ ID NO:10, и

где указанный фрагмент антитела имеет

i) малеимидную группу, ковалентно связанную с одной группой тиола в модифицированной области шарнира; остаток лизина, ковалентно связанный с малеимидной группой; и

ii) метоксиполи(этиленгликолевый) полимер с молекулярной массой приблизительно 20 кДа, присоединенной к каждой аминогруппе остатка лизина.

2. Способ по п.1, в котором начальная нагрузочная доза составляет 30 мг/кг, а последующая доза составляет 15 мг/кг.

3. Способ по п.1 или 2, в котором указанный фрагмент антитела вводят пациенту по крайней мере в течение 12 недель.

4. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором заболеванием является системная красная волчанка (SLE), волчаночный нефрит, ревматоидный артрит, серонегативная спондилоартропатия, псориаз, псориатический артрит, склеродермия, синдром Шегрена, рассеянный склероз, диабет I типа, аутоиммунный увеит и нефротический синдром или васкулит.

5. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором указанное заболевание представляет собой системную красную волчанку (SLE) и у получающего лечение пациента наблюдается улучшение по сравнению с исходным одним или несколькими показателями, выбранными из SLEDAI, BILAG и общей оценки врача.

6. Способ по любому из предшествующих пунктов, где указанное заболевание представляет собой системную красную волчанку (SLE) и получающий лечение пациент достигает индекса SLEDAI 4 (SRI-4).

7. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором указанное заболевание представляет собой системную красную волчанку (SLE) и у получающего лечение пациента наблюдается 50% улучшение по сравнению с исходным индексом SRI-4.

8. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором указанное заболевание представляет собой системную красную волчанку (SLE) и у получающего лечение пациента наблюдается увеличение на 20%, 30%, 40%, 50%, 75% или 90% от исходного значения или нормализации концентрации комплемента С3 и С4, или уменьшение на 20%, 30%, 40%, 50%, 75% или 90% титра двух-цепочечной ДНК в сыворотке.

9. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором указанное заболевание представляет собой системную красную волчанку (SLE) и получающий лечение серопозитивный пациент становится серонегативным по антителам против двух-цепочечной ДНК.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к способу получения конъюгатов терапевтического соединения с пролонгированным периодом полувыведения, и может быть использовано в медицине.

Изобретение относится к области биохимии, в частности к рекомбинантной нуклеиновой кислоте легкой цепи иммуноглобулина, содержащей по меньшей мере два нереаранжированных генных сегмента VL человека и по меньшей мере один нереаранжированный генный сегмент JL человека, функционально связанный с последовательностью константной области легкой цепи иммуноглобулина.

Настоящая группа изобретений относится к области биотехнологии. Предложено гуманизированное анти-CD79b антитело.

Настоящее изобретение относится к области иммунологии. Предложены антитело и его антигенсвязывающий объект, способные к специфическому связыванию с участком бета-цепи семейства TRBV9 Т-клеточного рецептора человека.

Изобретение относится к циклическому пептиду, который обладает свойствами связывания антитела и улучшенной устойчивостью к химическому воздействию, а также к подложке для аффинной хроматографии, содержащей циклический пептид.

Настоящее изобретение относится к области иммунологии. Предложены анти-PDL-1 моноклональные антитела или их антигенсвязывающие фрагменты.

Изобретение относится к биотехнологии. Предложен промышленный способ получения биологически активного препарата рекомбинантной экзо-бета-N-ацетилглюкозаминидазы StrH (β-N-GlcNAcase StrH), продуцированного в соответствии с правилами GMP.

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к генетической конструкции pA21/Fab. Изобретение решает задачу получения рекомбинантного одноцепочечного антитела человека, стереоселктивно взаимодействующего с фосфорорганическими соединениями.

Настоящее изобретение относится к биотехнологии. Предложен конъюгат и его применение для целевой доставки гаптенилированного фармацевтически активного груза через гематоэнцефалический барьер.

Изобретение относится к области биотехнологии и касается способа получения энтеровирусоподобной частицы (EVLP) в растении. В растение, часть растения или клетку растения вводят первую нуклеиновую кислоту и вторую нуклеиновую кислоту.

Изобретение относится к области биохимии, в частности к рекомбинантной нуклеиновой кислоте легкой цепи иммуноглобулина, содержащей по меньшей мере два нереаранжированных генных сегмента VL человека и по меньшей мере один нереаранжированный генный сегмент JL человека, функционально связанный с последовательностью константной области легкой цепи иммуноглобулина.

Настоящая группа изобретений относится к области биотехнологии. Предложено гуманизированное анти-CD79b антитело.

Настоящая группа изобретений относится к области биотехнологии. Предложено гуманизированное анти-CD79b антитело.

Предложен модуль-переносчик через гематоэнцефалический барьер, содержащий молекулу, подлежащую транспортировке в мозг через гематоэнцефалический барьер, возможно линкер и ровно одно (одновалентное) антитело против рецептора трансферрина или его фрагмент, связывающий рецептор трансферрина, где линкер, если он присутствует, соединяет молекулу, подлежащую транспортировке в мозг через гематоэнцефалический барьер, с одновалентным антителом против рецептора трансферрина или его фрагментом, связывающим рецептор трансферрина, а также фармацевтическая композиция и применение модуля-переносчика.

Настоящее изобретение относится к области иммунологии. Предложены антитело и его антигенсвязывающий объект, способные к специфическому связыванию с участком бета-цепи семейства TRBV9 Т-клеточного рецептора человека.

Настоящее изобретение относится к области иммунологии. Предложены анти-PDL-1 моноклональные антитела или их антигенсвязывающие фрагменты.

Настоящее изобретение относится к области иммунологии. Предложены анти-PDL-1 моноклональные антитела или их антигенсвязывающие фрагменты.

Данное изобретение относится к биотехнологии. Предложен набор, содержащий молекулу биспецифического антитела и материал, необходимый для генетической трансдукции CD8+Т-клеток, причем молекула биспецифического антитела содержит домен, связывающий антиген, трансдуцированный в CD8+Т-клетки, и домен, связывающий опухолеспецифический антиген.

Настоящее изобретение относится к иммунологии. Предложено биспецифическое антитело, которое связывает CD47 и CD19.

Изобретение относится к области биохимии, в частности к конъюгату антитела с лекарственным средством для лечения IGF-lR-экспрессирующего рака, а также к композиции для лечения IGF-1R-экспрессирующего рака, содержащей эффективное количество, по меньшей мере, одного вышеуказанного конъюгата антитела с лекарственным средством.

Настоящее изобретение относится к соединению формулы (I) или к его фармацевтически приемлемой соли, или к его энантиомерам, или к его диастереоизомерам, или к их смеси, обладающему способность ингибировать фосфоинозитид-3-киназу (PI3K), а также к фармацевтической композиции, содержащей соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль.

Изобретение относится к биотехнологии и решает задачу лечения заболеваний, в частности системной красной волчанки, фрагментом антитела, специфически связывающимся с CD154. 8 з.п. ф-лы, 3 пр., 8 ил.

Наверх