Способ оценки уровня резистентности у подростков 12-18 лет по состоянию бактериального и вирусного компонента микробиоты полости рта

Изобретение относится к области медицины, в частности к микробиологии, лабораторной диагностике и педиатрии. Предложен способ оценки уровня резистентности организма подростков 12-18 лет по состоянию бактериального и вирусного компонента микробиоты полости рта, включающий проведение бактериологического исследования с выявлением представителей условно-патогенной микрофлоры и молекулярно-генетического исследования ротовой жидкости на наличие ДНК герпесвирусов: Эпштейна-Барр, цитомегаловируса, герпеса 6 типа, вируса простого герпеса 1 и 2 типа. У подростков 12-18 лет, не имеющих в микробиоте полости рта S.aureus и M.lacunata и герпесвирусов, определяют высокую резистентность организма, среднюю резистентность - при наличии S.aureus или M.lacunata в количестве 1-2 lg КОЕ/мл и одного герпесвируса, низкую резистентность - при выявлении S.aureus или M.lacunata в количестве 3-4 lg КОЕ/мл и наличии двух и более герпесвирусов в ротовой жидкости. Изобретение обеспечивает эффективное определение уровня резистентности организма подростков 12-18 лет по качественным и количественным параметрам бактериального и вирусного компонента микробиоты полости рта и повышение информативности о состоянии резистентности подростков данного возрастного контингента на этапе диспансеризации. 5 табл., 3 пр.

 

Изобретение относится к области медицины, а именно к микробиологии, лабораторной диагностике и педиатрии, и может быть использовано для скрининговой оценки состояния резистентности организма подростков 12-18 лет, ассоциированной с состоянием бактериального и вирусного компонента микробиоты полости рта для формирования групп риска и своевременного назначения персонифицированных корректирующих и профилактических мероприятий.

Формирование здорового поколения является приоритетной задачей нашего государства и современного здравоохранения. Концепция развития здравоохранения РФ до 2020 г. рассматривает обязательства по охране здоровья подрастающего поколения как инвестиции в главный ресурс общественного развития. По определению ВОЗ, подростковый возраст является периодом роста и развития человека, который следует после детства и длится до достижения зрелого возраста, и является критическим периодом, требующим особого внимания к состоянию здоровья в целом [2, 6].

Микробиом является неотъемлемой частью физиологии подростка и состояние микрофлоры пищеварительного тракта, может служить одним из интегральных критериев оценки состояния здоровья, в свою очередь, изменение численности и соотношения микроорганизмов, их биологических свойств могут рассматриваться как показатели индивидуального адаптогенеза [1,2,3,4,7]. Микробиота полости рта, включая бактериальный и вирусный компонент, является входными воротами пищеварительной и бронхолегочной системы и определяет колонизационную локальную резистентность и формирование микробиоты других биотопов и резистентности у подростков в целом. Кроме того, ротовая жидкость является доступной и клинически информативной биологической жидкостью, которая содержит различные биомаркеры, доступные для лабораторного исследования [5,8,9,11,12].

В настоящее время оценка микробиоты пищеварительного тракта с использованием различных подходов (бактериологического, метаболического, молекулярно-генетического) проводится при наличии соответствующих жалоб пациента или клинических проявлений, тогда как на этапе плановой диспансеризации состояние микробиоты пищеварительного тракта не оценивается. Однако следует подчеркнуть, что выявление проблемы на донозологическом этапе более оправдано с точки зрения личных, социальных и экономических аспектов. Кроме того, наличие изменений в бактериальном и вирусном компоненте позволяет в дальнейшем формировать группы риска с последующим проведением превентивной персонифицированной коррекции [10,13,14].

Существует ряд нормативных документов, регламентирующих оказание медицинской помощи подросткам. Так, комплексная оценка состояния здоровья детей в Российской Федерации проводится в соответствии с инструкцией, утвержденной приказом Министерства здравоохранения Российской Федерации №621 от 30.12.2003 года. Однако, оценка уровня резистентности с определением различной степени, проводится катамнестически, в частности, на основании перенесенных в течение года острых заболеваний, тогда как параметры оценки объективных лабораторных критериев и возможность прогнозирования не определены. Профилактические осмотры подростков проводятся согласно приказу Министерства здравоохранения Российской Федерации «О порядке проведения профилактических медицинских осмотров несовершеннолетних» №514н от 10.08.2017 года. Однако состояние микробиоты пищеварительного тракта, отражающей состояние общей резистентности подростков в целом, определяется только на стадии болезни.

Известен «Способ диагностики уровня здоровья в критические периоды постнатального онтогенеза у детей и подростков» (М.А. Борисова, Ю.А. Алексеева, С.М. Кушнир, №2229846), позволяющий определить здоровье ребенка, в различные критические периоды постнатального онтогенеза, включая подростковый возраст. Проводится определение целого ряда диагностических коэффициентов информативных факторов и критериев (отягощенные генеалогический, социально-средовой и биологический анамнез, уровень физического развития, отклонение НПР, уровень резистентности, особенности вегетативной регуляции, ряд биохимических показателей, включая определение кальция, калия, лактата и др.). По результатам различных исследований определяют диагностический коэффициент определенного периода онтогенеза по формуле, вычисляющей площадь трапеции. Способ позволяет повысить точность диагностики и сделать ее более простой. Недостатком данного метода является то, что этот метод не учитывает параметры, определяющие состояние микроэкологии, которое является важным интегральным показателем для оценки резистентности организма в целом.

Известен «Способ определения колонизационной резистентности экологической ниши тела человека» (Бухарин О.В., Забирова Т.М., патент №2175673), заключающийся во взятии исследуемого материала, его посева на селективные питательные среды, выделении чистых культур микроорганизмов и определении их видового и количественного состава. Далее выделенные штаммы автохтонной микрофлоры выращивают в жидкой питательной среде, обрабатывают хлороформом, отделяют супернатант и добавляют последний к взвеси патогенных и/или аллохтонных условно-патогенных микроорганизмов. Параллельно готовят контрольные пробы из взвесей патогенных и/или аллохтонных условно-патогенных микроорганизмов и жидкой питательной среды. Опытные и контрольные пробы инкубируют, затем добавляют во все пробы жидкую питательную среду, вновь инкубируют и замеряют оптические плотности опытных и контрольных проб. О колонизационной резистентности экологической ниши судят по изменению роста патогенных и/или аллохтонных условно-патогенных микроорганизмов в опытных пробах по сравнению с контрольными. Способ позволяет повысить достоверность определения колонизационной резистентности различных экологических ниш тела человека, что способствует повышению эффективности ранней диагностики дисбиотических состояний. Недостатком данного метода является необходимость выделения широкого спектра чистых культур микроорганизмов необходимых для последующего приготовления их супернатантов, что делает процесс трудоемким, затратным, длительным и не позволяет оценить состояние вирусного компонента.

Наиболее близким к заявленному авторами способу является «Способ оценки уровня резистентности организма детей I-II группы здоровья по вирусному компоненту микробиоты полости рта» (A.M. Самоукина, Ю.А. Алексеева, М.А. Демидова, М.А. Горшкова, Т.А. Федотова, №2687574), основанный на проведении молекулярно-генетического исследования ротовой жидкости на наличие ДНК герпесвирусов, включая вирус Эпштейна-Барр, цитомегало-вируса, герпеса 6 типа, вируса простого герпеса 1 и 2 типа, с последующей оценкой уровня резистентности. При отсутствии у детей в микробиоте полости рта ДНК представителей герпесвирусов определяют высокую резистентность, при наличии ДНК одного герпесвируса - среднюю резистентность, при определении ассоциации ДНК двух и более герпесвирусов в ротовой жидкости - низкую резистентность. Недостатками прототипа являются, во-первых, ограничение контингента детей I-II группой здоровья, тогда как оценка резистентности должна проводиться и у подростков с наличием различной хронической патологии. Во-вторых, указанный способ, позволяет определить только вирусный компонент, тогда как микробиота полости рта широко представлена и бактериальной микрофлорой.

При изучении научно-технической патентной информации идентичная совокупность существенных признаков, заявленная в изобретении, позволяющих провести оценку состояния резистентности у подростков по бактериальному и вирусному компоненту микробиоты полости рта, нами не обнаружена.

Заявленный способ решает задачу скрининговой оценки состояния резистентности организма подростков 12-18 лет, ассоциированной с бактериальным и вирусным компонентом микробиоты полости рта и улучшения диагностики на донозологическом этапе для формирования групп риска и своевременного назначения персонифицированных корректирующих и профилактических мероприятий.

Техническим результатом на достижение, которого направлено создание данного изобретения, является определение уровня резистентности организма подростков 12-18 лет по качественным и количественным параметрам бактериального, условно-патогенных бактерий, и вирусного, представителей герпесвирусов, компонента микробиоты полости рта и повышения информативности о состоянии резистентности подростков данного возрастного контингента на этапе диспансеризации.

Осуществление

Для определения бактериального компонента микробиоты полости рта у подростков 12-18 лет ротовая жидкость собирается в стерильные одноразовые пластиковые контейнеры утром, натощак, перед проведением гигиенического ухода за полостью рта и доставляется в бактериологическую лабораторию в течение 1 часа, где готовят разведения 10^-1,10^-3 с последующим посевом на питательные среды. Для культивирования используют питательные среды: Endo Agar (Himedia), Sabouraud Dextrose Agar BBL, Lactobacillus MRS Agar (Himedia), Shaedler Agar BBL, Mannitol Salt Agar (Himedia), Columbia Blood Agar (Himedia). Посевы инкубируют при температуре 37°С в течение 24-48 часов в аэробных, микроаэрофильных и анаэробных условиях с использованием микроанаэростатов (BBL®) и газогенераторных пакетов Gas Pack Plus (BBL). Количество бактерий определяют путем подсчета колониеобразующих единиц на 1 мл ротовой жидкости (lg КОЕ/мл). Для определения вирусного компонента ротовая жидкость собирается также утром, натощак, до проведения гигиенического ухода за полостью рта в стерильные одноразовые пластиковые пробирки с реагентом для транспортировки и хранения клинического материала «Транспортная среда с муколитиком», утвержденным ФГУН

Центральный НИИ эпидемиологии Роспотребнадзора. Процедура взятия и хранения клинического материала проводится в соответствии с методическими рекомендациями «Взятие, транспортировка, хранение клинического материала для ПЦР-диагностики» ФГУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора, М., 2008 г. Ротовая жидкость доставляется в молекулярно-генетическую лабораторию в течение суток. Далее в лаборатории проводится исследование ротовой жидкости методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени. Для амплификации нуклеиновых кислот используют комплекты реагентов "Ам-плиСенс® EBV/CMV/HHV6-cкрин-FL» (набор реагентов для амплификации ДНК вируса Эпштейна-Барр, цитомегаловируса и вируса герпеса человека 6 типа), «АмплиСенс® HSV-typing-FL» (набор реагентов для амплификации ДНК вирусов простого герпеса и генотипирования 1 и 2 типов) с гибридиза-ционно-флуоресцентной детекцией в режиме «реального времени» ФГУН Центральный НИИ эпидемиологии Роспотребнадзора и амплификатор AppliedBioSystem.

В рамках проведения научно-исследовательской работы было обследовано 179 детей в возрасте 12-18 лет, из них 137 подростков были клинически здоровы и относились к I-II группе здоровья, а 42 ребенка имели хроническую патологию ЛОР-органов и были отнесены к III группе здоровья (согласно Приказу Минздрава РФ №514н). Все лица были осмотрены педиатром и узкими специалистами (стоматолог, отоларинголог, хирург, эндокринолог), для верификации состояния здоровья и уровня резистентности организма проведены ряд функциональных исследований (антропометрия, физиометрия, соматоскопия, спирография, УЗИ щитовидной железы и органов брюшной полости, 12-канальная ЭКГ, ВНС-спектрометрия).

Для исследования бактериальной составляющей микробиоты был использован скрининговый метод оценки микробиоты пищеварительного тракта по микрофлоре ротовой жидкости с последующим определением микроэкологического варианта нормомикробиоты, характеризующимся определенным сочетанием индигенной и факультативной микрофлоры, где наиболее оптимальным является первый, а более неблагоприятным - третий вариант нормомикробиоты [15].

Для определения состояния локальной иммунной резистентности были исследованы уровни лизоцима (турбидиметрия), секреторного IgA и авидности антител в ротовой жидкости с использованием иммуноферментного анализа («Вектор-Бест»). Для оценки состояния общей иммунной резистентности было проведено количественное определение IgA, IgM, IgG и IgE методом иммуноферментного анализа («Вектор-Бест») на базе КДЛ КДЦ Тверского ГМУ.

На первом этапе работы у всех здоровых подростков 12-18 лет (I-II группа здоровья) было проведено исследование бактериально-вирусных ассоциаций микробиоты полости рта. При изучении бактериального компонента и определении микроэкологического варианта микробиоты пищеварительного тракта оптимально благоприятно первый вариант выявлен у 31, второй - у 65 и прогностически неблагоприятный третий - у 41 обследованного подростка, что составило 22,6%, 47,5% и 29,9% соответственно.

Сопоставляя результаты молекулярно-генетического исследования вирусного компонента у подростков с различными вариантами бактериальной микрофлоры, выявлено, что вируспозитивные образцы составили 32,3%, 43,1% и 87,8% соответственно для первого, второго и третьего варианта нормомикробиоты. Вирусный компонент микробиоты достоверно чаще определялся у лиц с третьим, прогностически более неблагоприятным, вариантом (р≤0,05), что также характерно и для ассоциации вирусов. Частота встречаемости ДНК вируса Эпштейна-Барр и вируса герпеса 6 типа также была достоверно выше у подростков с третьим вариантом по сравнению с оптимальным первым вариантом микробиоты (р≤0,05). Это показывает, что при нарастании микроэкологических изменений в бактериальном звене, характеризующихся изменением соотношения облигатной и факультативной микрофлоры, происходит достоверное увеличение количественных параметров вирусного компонента (табл. 1).

При анализе спектра вирусного компонента выявлено, что наиболее часто у всех обследованных подростков 12-18 лет обнаружена ДНК вируса герпеса 6 типа, что составило 80%, 100% и 77,8% соответственно для первого, второго и третьего микроэкологического варианта нормомикробиоты. ДНК вируса Эпштейна-Барр выявлена в половине вируспозитивных образцов (53,6%), тогда как ассоциации вирусов достоверно преобладали у лиц со вторым вариантом нормомикробиоты, как по сравнению с благоприятным первым, так и с менее благоприятным третьим микроэкологическим вариантом. Следует отметить, что выявление ДНК вируса простого герпеса у подростков 1-й группы здоровья носило спорадический характер (табл. 1).

При определении показателей локальной иммунной резистентности полости рта у подростков 12-18 лет с различными микроэкологическими вариантами нормомикробиоценоза у лиц с третьим, менее благоприятным, вариантом была выявлена тенденция к увеличению содержания концентрации секреторного IgA в ротовой жидкости по сравнению со вторым, и особенно первым вариантом нормомикробиоты. Однако при этом функциональная активность антител, которая характеризуется показателем авидности, имела обратную зависимость и была выше у подростков с первым, более благоприятным вариантом, кроме того, при нарастании микроэкологических изменений была выявлена тенденция к снижению уровня лизоцима. Следовательно, изменения неспецифической иммунной реактивности в зависимости от микроэкологического варианта нормомикробиоты указывает на тесную динамическую взаимосвязь микроэкологии и локальной резистентности полости рта у здоровых подростков (табл. 2).

Таким образом, в ходе проведенного исследования была выявлена взаимосвязь между бактериально-вирусными ассоциациями микробиоты полости рта, а также параметрами локальной иммунной резистентности у подростков 12-18 лет.

Для более детального анализа результатов первого этапа исследований было проведено определение бактериально-вирусных ассоциаций в совокупности с иммунологическими показателями сыворотки крови (IgA, IgM, IgG и IgE) у 72 подростков II и III групп здоровья. Уровень резистентности организма определялся косвенным методом (Приказ М3 РФ №621 от 30.12.2003 г.) и подтверждался проведением ряда функциональных проб.

Все обследованные подростки 12-18 лет были разделены на две группы в соответствие с уровнем резистентности организма. В основную группу обследования были включены 30 подростков со средним уровнем резистентности организма, перенесших не более 3-х острых заболеваний за год. Вторую группу составили 42 подростка с низкой резистентностью, перенесших 4 и более острых заболеваний за год. По результатам проведенного исследования у детей со средней резистентностью представители герпесвирусов не были выявлены. При изучении бактериального компонента, выявлено доминирование первого и второго варианта, так первый, второй и третий микроэкологический варианты определены в 33,3%, 50% и 16,7% случаев соответственно.

В группе подростков 12-18 лет с низкой резистентностью микроэкологические изменения полости рта встречались в 47,6% случаев и характеризовались изменениями качественных и количественных параметров, как бактериального, так и вирусного компонентов, который был представлен вирусом герпеса 6 типа.

При сравнении количественного содержания иммуноглобулинов различных классов в сыворотке крови у подростков 12-18 лет с низкой и средней резистентностью был выявлен ряд особенностей (табл. 3). Так, у подростков с низкой резистентностью выявлена тенденция к более низкому содержанию иммуноглобулинов, всех определяемых в настоящем исследовании классов, IgA, IgM, IgG и IgE. Однако достоверные различия (t-критерий Стьюдента) получены для IgA и IgM (р=0,028), что вполне закономерно, поскольку эти классы иммуноглобулинов участвуют в первичном иммунном ответе и защите слизистых оболочек, в частности полости рта.

При сопоставлении результатов изучения состояния микроэкологии полости рта и содержания отдельных классов иммуноглобулинов сыворотки крови также выявлен ряд особенностей. Так у подростков 12-18 лет, имеющих вирус герпеса 6 типа в полости рта, наблюдалось снижение уровня иммуноглобулинов всех классов в крови, по сравнению со средними значениями этих показателей в группе подростков со средней резистентностью. Следует отметить на повышенное содержание IgE при втором и третьем микроэкологическом варианте бактериальной флоры, что указывает на состояние микробной сенсибилизации организма.

Кроме того, количественное содержание иммуноглобулинов различных классов в сыворотке крови подростков 12-18 лет имело тенденцию к увеличению при наличии изменений, как в бактериальном, так и в вирусном компоненте микробиоты, выявлении бактериально-вирусных ассоциаций (табл. 4). Исключение составил IgE, количество которого снизилось на 12,3% при наличии ассоциаций вирусов и бактерий, однако следует подчеркнуть нарастание на 32% количества данного класса иммуноглобулинов в сыворотке крови при втором и третьем варианте микробиоты в совокупности с IgM, что позволяет предположить наличие инфекционного процесса и микробной сенсибилизации, как механизмов взаимодействия макро- и микроорганизма. Реакция общей иммунной резистентности, определенной по количественному содержанию иммуноглобулинов различных классов в сыворотке крови, была менее выражена при наличии только вирусного компонента. Так, содержание IgA, IgM, IgG в сыворотке крови при бактериально-вирусных ассоциациях было выше на 24,6%, 27,6% и 10,8% соответственно по сравнению с наличием только вирусного компонента, представленного вирусом герпеса 6 типа. Следует подчеркнуть, что вирусный компонент достоверно чаще встречался у подростков 12-18 лет с низким уровнем резистентности (р=0,02 U-критерий Манна-Уитни). Количественное содержание IgG на 27,3% было выше при оптимальном варианте бактериальной нормомикробиоты по сравнению с наличием только вирусного компонента. Кроме того, основными критериями микроэкологического неблагополучия являются представители условно-патогенной микрофлоры, которые в совокупности с вирусным компонентом, бактериально-вирусные ассоциации полости рта, отражают состояние резистентности организма в целом и могут быть использованы, как «биологические маркеры» и интегральный показатель для оценки состояния здоровья в целом на этапе донозологической диагностики.

Таким образом, в ходе проведенных исследований микробиоты полости рта и иммунной резистентности у подростков 12-18 лет, был выявлен ряд закономерностей. Так, при снижении общей и локальной резистентности организма подростков 12-18 лет происходит уменьшение количества представителей нормомикробиоты, которое сопровождается расширением спектра и увеличением количества различных представителей условно-патогенной микрофлоры. В связи с этим выявление повышенного количества представителей условно-патогенной микрофлоры (бактериальный компонент) может рассматриваться как маркер микроэкологического неблагополучия, отражающий состояние общей резистентности организма на донозологическом этапе.

При отсутствии представителей условно-патогенной микрофлоры и представителей герпесвирусов в микробиоте полости рта у подростков 12-18 лет определяют высокий уровень резистентности.

При наличии представителей условно-патогенной микрофлоры в количестве 1-2 lg КОЕ/мл и ДНК одного представителя герпесвируса у подростков 12-18 лет определяют средний уровень резистентности, что требует более частого диспансерного наблюдения.

Выявление представителей условно-патогенной микрофлоры в количестве 3-4 lg КОЕ/мл и наличие в вирусном компоненте микробиоты полости рта ДНК двух и более герпесвирусов у подростков 12-18 лет соответствует низкому уровню резистентности, что требует использования рациональных методов превентивной коррекции (табл. 5).

Новыми, ранее не известными признаками заявленного способа оценки уровня резистентности у подростков 12-18 лет по бактериальному и вирусному компоненту микробиоты полости рта являются:

1) скрининговая оценка уровня резистентности организма подростков 12-18 лет по бактериальному и вирусному компоненту микробиоты полости рта.

2) описаны диагностически значимые качественные и количественные параметры бактериально-вирусных ассоциаций микробиоты полости рта у подростков 12-18 лет на донозологическом этапе для формирования групп риска и своевременного назначения персонифицированных корректирующих и профилактических мероприятий.

Сущность заявляемого способа поясняется следующими примерами: Пример 1. У подростка 12 лет при профилактическом осмотре был осуществлен забор ротовой жидкости, проведено бактериологическое (выявление условно-патогенной микрофлоры) и молекулярно-генетическое исследование ротовой жидкости, по результатам которого представители условно-патогенной микрофлоры, ДНК вируса Эпштейна-Барр, цитомегаловируса, герпеса 6 типа, вирусов простого герпеса 1 и 2 типов не обнаружены. У подростка выявлен высокий уровень резистентности, диспансерное наблюдение соответственно возрасту, рекомендуется повторить бактериологическое и молекулярно-генетическое исследование ротовой жидкости через 12 месяцев.

Пример 2. У подростка 15 лет при профилактическом осмотре был осуществлен забор ротовой жидкости, проведено бактериологическое (определение микроэкологического варианта) и молекулярно-генетическое исследование ротовой жидкости на наличие ДНК вируса Эпштейна-Барр, цитомегаловируса, герпеса 6 типа, вирусов простого герпеса 1 и 2 типов. В ротовой жидкости выявлено наличие S.aureus в количестве 2 lg КОЕ/мл и ДНК вируса Эпштейна-Барр. Подросток имеет средний уровень резистентности, рекомендуется повторить бактериологическое и молекулярно-генетическое исследование через 6 месяцев, рекомендовать методы поддержания резистентности организма.

Пример 3. У подростка 18 лет при профилактическом осмотре был осуществлен забор ротовой жидкости, проведено бактериологическое (определение микроэкологического варианта) и молекулярно-генетическое исследование ротовой жидкости на наличие ДНК вируса Эпштейна-Барр, цитомегало-вируса, герпеса 6 типа, вирусов простого герпеса 1 и 2 типов. В ротовой жидкости выявлены M.lacunata в количестве 3 lg КОЕ/мл и ДНК вируса Эпштейна-Барр, вируса простого герпеса 1 типа и герпеса 6 типа. Подросток имеет низкий уровень резистентности и относится к группе риска, рекомендуется повторный осмотр педиатра через 3 месяца, повторить бактериологическое и молекулярно-генетическое исследование через 6 месяцев, рекомендовать методы поддержания локальной иммунной и микроэкологической резистентности.

Выявление низкого, среднего и высокого уровня резистентности организма подростков позволяет реализовать персонифицированный подход при проведении диспансеризации, корректирующих и профилактических мероприятий.

Список литературы

1. Бактериально-вирусные ассоциации полости рта у здоровых людей и при новообразованиях челюстно-лицевой области / A.M. Самоукина [и др.] // Лечение и профилактика. Инфекционные болезни. - 2016. - Т. 20, №4. - С. 29-34.

2. Варианты микрофлоры ротовой жидкости у практически здоровых детей и подростков / Б.Н. Давыдов [и др.] // Стоматология. - 2017. - Т. 96, №1. - С. 56-59.

3. Взаимосвязь микробиоты различных биотопов у детей в норме и при патологических состояниях / A.M. Самоукина [и др.] // Современные проблемы науки и образования. - 2018. - №2; URL: http://www.science-education.ru/article/view?id=27537 (дата обращения: 26.04.2018).

4. Дисбиоз (дисбактериоз) кишечника: современное состояние проблемы, комплексная диагностика и лечебная коррекция / М.Д. Ардатская [и др.] // Экспериментальная и клиническая гастроэнтерология. - 2015. - Т. 117, №5. - С. 13-50.

5. Кочурова, Е.В. Диагностические возможности слюны / Е.В. Кочурова, С.В. Козлов//Клиническая лабораторная диагностика. - 2014. - №1. -С. 13-15.

6. Самоукина, A.M. Микробиота пищеварительного тракта как системный фактор оценки здоровья человека и проведения превентивной коррекции / A.M. Самоукина, Е.С.Михайлова, В.В. Чернин, Ю.А. Алексеева // Лечение и профилактика. - 2015. - Т. 15, №3. - С. 23-28.

7. Формирование патомикробиоценоза у новорожденных с внутриутробной инфекцией/ А.С.Новикова [и др.] // материалы конференции Медико-биологические, клинические и социальные вопросы здоровья и патологии человека. - 2018. - С. 39-41.

8. Association between living environment and human oral viral ecology / R. Robles-Sikisaka [et al.] //ISME J. - 2013. -Vol. 7, №9. - P. 1710-1734.

9. Bull, M.J. Part 1: the human gut microbiome in health and disease / M.J. Bull, N.T. Plummer // Integr. Med. A Clinician's J. - 2014. - Vol. 13, №6. P. 17-22.

10. Ding, H.T. Gut Microbiota ad Autism: Key Concepts and Findings / H.T. Ding, Y. Taur, J.T. Walkup // J. Autism Dev. Disord. - 2017. - Vol. 47, №2. - P. 480-489.

11. Herpesvirus in the oral cavity of children with leukaemia and its impact on the oral bacterial community profile / T.M. Bezerra [et al.] // J. Clin. Pathol. - 2015. - Vol. 68, №3. - P. 222-230.

12. Pelzer, E. Review: Maternal health and the placental microbiome / E. Pelzer, L.F. Gomes-Arango, H.L. Barrett, M.D. Nitert // Placenta. - 2017. - Vol. 54. - P. 30-37.

13. Sassone-Corsi M. No vacancy: how beneficial microbes cooperate with immunity to provide colonization resistance to pathogens / M. Sassone-Corsi, M. Raf-fatellu / J. Immunol. -2015. - Vol. 194, №9. - P. 4081-4088.

14. Vuong, H.E. Emerging Roles for the Gut Microbiome in Autism Spectrum Disorder / H.E. Vuong, E.Y. Hsiao // Biol. Psychiatry. - 2017. - Vol. 81, №5. - P. 411-423.

15. Самоукина A.M., Михайлова E.C., Червинец B.M., Чернин B.B., Алексеева Ю.А. Способ оценки состояния микробиоты пищеварительного тракта у подростков 14-18 лет по микрофлоре ротовой жидкости Патент на изобретение №2602697 от 03.03.2015

Способ оценки уровня резистентности организма подростков 12-18 лет по состоянию бактериального и вирусного компонента микробиоты полости рта, включающий проведение бактериологического исследования с выявлением представителей условно-патогенной микрофлоры и молекулярно-генетического исследования ротовой жидкости на наличие ДНК герпесвирусов: Эпштейна-Барр, цитомегаловируса, герпеса 6 типа, вируса простого герпеса 1 и 2 типа, с последующей оценкой уровня резистентности организма: у подростков 12-18 лет, не имеющих в микробиоте полости рта S.aureus и M.lacunata и герпесвирусов, определяют высокую резистентность организма, среднюю резистентность - при наличии S.aureus или M.lacunata в количестве 1-2 lg КОЕ/мл и одного герпесвируса, низкую резистентность - при выявлении S.aureus или M.lacunata в количестве 3-4 lg КОЕ/мл и наличии двух и более герпесвирусов в ротовой жидкости.