Способ прогнозирования течения послеоперационных гнойных ран

Предложен способ прогнозирования течения послеоперационных гнойных ран путем исследования раневого экссудата, отличающийся тем, что собирают раневой экссудатом в течение одних суток, определяют в нем уровень цитокинов иммуноферментным твердофазным методом и при возрастании уровня фактора некроза опухоли-α с 7,4-8,5 до 22,6-24,8 пг/мл и интерлейкина-1β с 65,2-67,5 до 180,2-195,6 пг/мл констатируют переход раневого процесса из фазы хронического в острое воспаление при назначении/лечения антисептиками. Технический результат - повышение надежности способа за счет его упрощения. 2 пр.

 

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано в качестве способа прогнозирования течения послеоперационных гнойных ран.

Известен способ оценки отделяемого раны с исследованием в поляризованном свете анизотропных текстур высушенного биологического материала, смешанного с 0,1-0,25 мл физиологического раствора хлорида натрия и высушиванием в форме капли на открытой поверхности при 20-30°, с образованием стекловидного края по периметру капли и при наличии вторичных текстур прогнозируют положительный исход заживления раны, а при наличии атипичных - прогнозируют осложнение заживления раневого процесса (1 - Патент РФ №2142635, 1998). Данный способ принят за аналог.

Известен также способ раннего прогнозирования течения послеоперационных гнойных ран (2 - по патенту РФ №2596866, 2015), когда ежедневно, начиная с первого послеоперационного дня, определяют паравульнарное парциальное давление кислорода кожи и паравульнарную температуру. Кроме того, в раневом мазке-отпечатке выявляют содержание нейтрофильных лейкоцитов, макрофагов и фибробластов. При условии отсутствия тенденции снижения паравульнарной температуры, нарастания парциального давления кислорода кожи вблизи раны, при повышении уровня нейтрофильных лейкоцитов, снижении уровня макрофагов, задержке появления или снижении числа фибробластов определяют риск возникновения нагноения раны за один-два дня до появления клинических признаков. Данный патент принят за прототип.

Однако прототип не обеспечивает достоверности определения и сложен.

Целью изобретения является повышение его надежности за счет его упрощения.

Технический результат обеспечивается тем, что исследуют раневой экссудат, путем его сбора при помощи стерильного гигроскопического материала в течение одних суток, полученный элюат центрифугируют, производят количественное определение цитокинов - фактора некроза опухоли-α и интерлейкина-1β иммуноферментным твердофазным методом и при возрастании уровня фактора некроза опухоли-α с 7,4-8,5 до 22,6-24,8 пг/мл и интерлейкина-1β с 65,2-67,5 до 180,2-195,6 пг/мл на пятый день исследования констатируют переход раневого процесса из фазы хронического в острое воспаление при назначении лечения антисептиками.

Сущность изобретения поясняется следующим. По данным многих исследователей, у 1-2% взрослого населения имеются открытые или зажившие язвы нижних конечностей, большинство которых связаны с заболеванием вен нижних конечностей, осложненной хронической венозной недостаточностью (ХВН). Многие пациенты месяцами, а иногда и годами ходят лишь с повязкой над язвой. Анализируя качество жизни больных, все специалисты приходят к выводу, что трофические язвы нижних конечностей значительно снижают показатели качества жизни: физические, психологические, материальные, а также социальные. ХВН представляется нестабильным патологическим состоянием, характеризующееся застоем и (или) искажением кровообращения кровеносной системы нижних конечностей, связанным с затруднением венозного оттока, что ведет к патологическому состоянию как венозной, так и артериальной и лимфатической систем, и микроциркуляторного русла, приводя в последствие к необратимым анатомическим изменениям, провоцируя образование трофических язв. Для заживления язвы в стационаре требуется в среднем 3-4 мес. Социальная значимость проблемы обусловлена малой тенденцией трофических язв к заживлению, частыми рецидивами, приводящими к снижению качества жизни и стойкой инвалидизации больных.

Клинический симптомокомплекс ХВН: варикозно-расширенные подкожные вены, симптом «тяжелых ног», судороги мышц по ночам, отеки стоп и голеней к концу дня, боль по ходу варикозно-расширенной вены, боль в виде распирания конечности, гиперпигментация кожи в дистальных отделах, липодермосклероз, трофическая язва с локализацией у медиальной лодыжки.

Существуют прямо противоположные мнения о выборе тактики лечения. Ряд авторов считают, что открытые язвы необходимо лечить консервативно до их полного закрытия, в то же время упускается тот факт, что не все язвы можно закрыть консервативными методами. Чрезвычайно сложно прогнозировать возможность и сроки заживления трофических венозных язв, в результате чего окажутся бесполезными физические и финансовые затраты, увеличится время выключения пациента из активной жизни. Некоторые специалисты настаивают на необходимости активного хирургического лечения во всех случаях, мотивируя это тем, что только операция позволяет воздействовать на главные звенья патогенеза и создать гемодинамические условия для закрытия язв. В то же время имеются разногласия в подходах к терапии, в частности - выборе метода оперативного вмешательства, определения его срока и объема, и в основном зависят от предпочтений и опыта хирурга.

Консервативные методы терапии (лечебный компрессионный трикотаж, медикаментозные повязки, системная фармакотерапия, методы физиотерапии), имеющиеся в арсенале современного специалиста, оказывают достаточно существенный лечебный эффект при трофических язвах на фоне ХВН. Лечебные мероприятия должны быть направлены на очищение язв от некротических тканей, подавление патогенной микрофлоры, ускорение процессов регенерации. Кроме того, необходимо влиять на ликвидацию системных расстройств (улучшение гемореологии, процессов микроциркуляции, корригирующее влияние на венозный отток и лимфодренажную функцию). Для местного консервативного лечения трофических язв предложено и применяется большое количество химических и биологических препаратов и их комбинаций, а также механических и физических методов терапии. XX век ознаменовался эрой развития ультразвуковой и квантовой технологий. Многими исследователями предложены методики воздействия на инфицированные раневые поверхности УФ-лучами, ультразвуком, для улучшения микроциркуляции и репаративных свойств организма предложено воздействие низкоэнергетического лазерного излучения, воздушно-плазменного потока-NO, крио-воздействие на раны и другие. Несмотря на большой выбор методов воздействия на репаративный процесс при трофической язве, не всегда удается добиться желаемого эффекта лечения, в то время как для наибольшей части пациентов старше 60-лет с венозными трофическими язвами комплексное консервативное лечение остается основным и самостоятельно значимым.

Характер местного лечения зависит от фазы раневого процесса. В настоящее время широко используются различные влажные повязки и антисептики, которые способствуют очищению язв, направлены на борьбу с имеющейся инфекцией в язве и улучшают репаративные процессы на язвенной поверхности.

Недостаточная эффективность применяемых в настоящее время средств и методов местного лечения трофических язв обусловлена, в частности, хаотичностью их использования без учета стадии раневого процесса, применением индифферентных препаратов, не влияющих на естественное течение раневого процесса, или препаратов, угнетающих естественные физиологические процессы, и без того сниженные в результате нарушения трофики тканей. Применение препаратов для местного лечения трофических язв должно быть строго регламентировано стадией раневого процесса.

На сегодняшний день среди многих классификаций раневого процесса, имеющих и клиническую, и морфологическую основы является классификация Стручкова В.И. и соавт. (1975). Эта классификация выделяет следующие фазы: 1 - воспаление, 2 - образование и созревание грануляций, 3 - эпителизация. Данная классификация используется для ран, явившигся результатом одномоментного внешнего воздействия повреждающего фактора, при хронических ранах воспалительный процесс в ране не имеет острого течения, и выражается длительно существующим воспалением, что приводит к хаотичности и запущенности течения воспаления и регенерации. Для подобных патологических состояний характерно наличие признаков сразу всех 3 фаз раневого процесса. Дно хронической раны одновременно покрыто фибрином и грануляциями, возможно наличие участков некроза и гнойного отделяемого; грануляции обычно вялые и бледные, края раны и ткани вокруг уплотнены; часто имеет место краевая эпителизация.

Патофизиология хронических ран сложна и разнообразна, но все они имеют одну общую особенность - длительно протекающее воспаление, которое приводит к обширному повреждению ткани и препятствует заживлению.

Согласно определению специального заседания Европейского общества репарации тканей (Cardiff, Wales, сентябрь 1996), «хронической следует считать рану, не заживающую в течение периода, который является нормальным для ран подобного типа или локализации». Также существует мнение, что длительно незаживающая рана - это рана, репарация которой нарушена из-за неблагоприятных фоновых состояний.

В связи со сложностью патофизиологического и морфологического течения хронических ран, лечение их также является сложной задачей для врачей, что диктует особый подход к терапии подобного рода ран. Лечение хронических ран заключается в переводе их в острые с последующей терапией как острых ран.

На сегодняшний день имеются много объективных методов оценки результатов лечения ран и течения раневого процесса, таких как измерение размеров и площади ран (планиметрия), микробиологический метод оценки бактериальной обсемененности раны, цито-морфологический и электрофоретический метод выявления деградации ДНК.

Электрофоретический метод выявления деградации ДНК погибших клеток как способ оценки течения раневого процесса и эффективности лечения кожных ран различного генеза (Патент на изобретение RU 2478963 С1) безусловно является одним из современных методов диагностики и характеристики раневого процесса, но по результатам очевидно, что методология необходима для ран имеющих определенные фазы раневого процесса, когда при хронических ранах наслаиваются практически все фазы раневого процесса, что является недостатком метода, а также методология дает оценку фаз, но не дает прогнозирования перевода хронической раны в острую.

Морфологический метод исследования краев и дна раны, несомненно, является самым достоверным для оценки морфологической оценки и характеристики раневого процесса, но в тоже время является в некотором роде инвазивным методом, т.к. необходимо для исследования удалить кусочек ткани краев или дна раны, что является недостатком данного метода.

Таким образом, в доступной нам литературе мало данных о возможности оценки результатов местного лечения трофических язв, и прогнозирования положительного результата на основании перехода раны из фазы хронического воспаления в острую. Также в современной литературе практически отсутствуют данные об исследовании показателей провоспалительных цитокинов в раневом экссудате. Нет информации о динамике показателей провоспалительных цитокинов в процессе местного лечения, что может играть важную роль в патогенетическом лечении данной патологии. В связи с этим исследование показателей провоспалительных цитокинов в раневом экссудате и оценка перехода раны из фазы хронического воспаления в острое, и возможность прогнозирования положительных результатов местного лечения трофических язв у больных с ХВН представляет важную задачу. Результатом является возможность прогнозирования перевода хронических ран в стадию острого воспаления при топической терапии различными антисептическими препаратами. Кроме того, заявленный способ обеспечивает возможность контроля раневого процесса при местном лечении хронических ран различными антисептиками, что улучшает точность диагностики, является простым, доступным, безопасным, и не инвазивным.

Цель - прогнозировать перевод хронических ран в стадию острого воспаления при топической терапии.

Технический результат достигается тем, что в способе прогнозирования течения послеоперационных гнойных ран путем исследования раневого экссудата собирают раневой экссудат в течение одних суток определяют в нем уровень цитокинов иммуноферментным твердофазным методом и при возрастании уровня фактора некроза опухоли-α с 7,4-8,5 до 22,6-24,8 пг/мл и интерлейкина-1β с 65,2-67,5 до 180,2-195,6 пг/мл констатируют переход раневого процесса из фазы хронического в острое воспаление при назначении лечения антисептиками.

Способ осуществляется следующим образом. Проводят сбор биологического материала (раневого экссудата) в динамике и его исследование. На этапе перевязки раны в нескольких участках раневого поля на сутки размещали квадратные пластинки из стерильного гигроскопического материала площадью 1 см². До этапа помещения пластинки в рану и после ее пропитывания экссудатом проводилось взвешивание на электронных весах «Ohaus» для определения количества физиологического раствора для элюирования. Каждую пластинку, пропитанную раневым экссудатом, помещали в отдельную стерильную пластиковую пробирку типа Эппендорф. Растворимые белки элюировали стеклянным шпателем в 0,9% растворе NaCl в соотношении 1 мкг веса пластинки на 100 мкл раствора. Полученный элюат центрифугировали при 3000 об/мин в течение 15 минут. Количественное определение цитокинов - фактора некроза опухоли-α (ФНО-α) и интерлейкина-1α (ИЛ-1β) - в образцах проводили иммуноферментным твердофазным методом с помощью коммерческой тест-системы, поставляемой фирмой-изготовителем ООО «Вектор-Бест» (Россия). Принцип метода основан на ферментной визуализации иммунологической реакции антиген-антитело. Интенсивность окраски образцов измеряли спектрофотометрически при длине волны 450 нм. Величину оптической плотности бланка вычитали из значений оптической плотности других образцов. Концентрацию ИЛ-1β и ФНО-α определяли с помощью калибровочной кривой, построенной по результатам измерения оптической плотности растворов, получаемых последовательным разведением стандарта. Чувствительность данного метода составляет 1,0 пг/мл. Содержание ИЛ-1β и ФНО-α в образце выражали в пг/мл. Вычисляли среднее значение для одного пациента из всех исследованных образцов тканевой пластинки.

По результатам исследований показателей цитокинов до начала лечения и в пятый день, производят соотношение показателей цитокинов между пятым днем и до начала лечения.- фактора некроза опухоли-α и интерлейкина-1β - иммуноферментным твердофазным методом и при возрастании уровня фактора некроза опухоли-α с 7,4-8,5 до 22,6-24,8 пг/мл и интерлейкина-1β с 65,2-67,5 до 180,2-195,6 пг/мл на пятый день исследования констатируют переход раневого процесса из фазы хронического в острое воспаление при назначении лечения антисептиками.

На этапе перевязки раны в нескольких участках раневого поля на сутки размещали квадратные пластинки из стерильного гигроскопического материала площадью 1 см². До этапа помещения пластинки в рану и после ее пропитывания экссудатом проводилось взвешивание на электронных весах «Ohaus» для определения количества физиологического раствора для элюирования. Каждую пластинку, пропитанную раневым экссудатом, помещали в отдельную стерильную пластиковую пробирку типа Эппендорф. Растворимые белки элюировали стеклянным шпателем в 0,9% растворе NaCl в соотношении 1 мкг веса пластинки на 100 мкл раствора. Полученный элюат центрифугировали при 3000 об/мин в течение 15 минут. Количественное определение цитокинов - фактора некроза опухоли-α (ФНО-α) и интерлейкина-1β (ИЛ-1β) в образцах проводили иммуноферментным твердофазным методом с помощью коммерческой тест-системы, поставляемой фирмой-изготовителем ООО «Вектор-Бест» (Россия). Принцип метода основан на ферментной визуализации иммунологической реакции антиген-антитело. Интенсивность окраски образцов измеряли спектрофотометрически при длине волны 450 нм. Величину оптической плотности бланка вычитали из значений оптической плотности других образцов. Концентрацию ИЛ-1β и ФНО-α определяли с помощью калибровочной кривой, построенной по результатам измерения оптической плотности растворов, получаемых последовательным разведением стандарта. Чувствительность данного метода составляет 1,0 пг/мл. Содержание ИЛ-1β и ФНО-α в образце выражали в пг/мл. Вычисляли среднее значение для одного пациента из всех исследованных образцов тканевой пластинки.

В изученной нами патентной и научной литературе отсутствуют сведения об аналогичном способе, обладающем такой же совокупностью признаков.

При развитии воспаления в местном иммунитете играют определенную роль цитокины, действующие как биохимические мессенджеры. Они регулируют воспалительные реакции, инициируют иммунный ответ, и продуцируются при контакте с микроорганизмами, лимфоцитами и макрофагами, расположенными в тканях рядом с очагом воспаления. Одними из таких цитокинов являются фактор некроза опухоли-α (ФНО-α) и интерлейкин-1β (ИЛ-1β), которые вырабатываются активированными макрофагами и нейтрофилами. Они совместно активируют Т-лимфоциты и играют основную роль в разрушении окружающих тканей. Местная продукция данных цитокинов в очаге воспаления обеспечивает усиление фагоцитоза и микробицидности фагоцитов. Известно исследование показателей данных цитокинов в биологических жидкостях, таких как плазма крови и слюна, но в доступной нам литературе мы не встречали исследование показателей цитокинов в раневом экссудате, что могло бы показать местную реакцию тканей в зоне воспаления.

Таким образом, совокупность существенных признаков изобретения позволяет получить новый технический результат, заключающийся в качественном и объективном прогнозировании перехода хронического в острое воспаление и оценку результатов.

Местного лечения хронических ран, в результате чего можно проводить в ранние сроки лечения коррекцию проводимого лечения, что существенно позволяет уменьшить сроки лечения длительно незаживающих хронических ран.

Способ реализуется следующим образом.

Собирается биологический материал следующим образом. На этапе перевязки раны в нескольких участках раневого поля на сутки размещали квадратные пластинки из стерильного гигроскопического материала площадью 1 см². До этапа помещения пластинки в рану и после ее пропитывания экссудатом проводилось взвешивание на электронных весах «Ohaus» для определения количества физиологического раствора для элюирования. Каждую пластинку, пропитанную раневым экссудатом, помещали в отдельную стерильную пластиковую пробирку типа Эппендорф. Растворимые белки элюировали стеклянным шпателем в 0,9% растворе NaCl в соотношении 1 мкг веса пластинки на 100 мкл раствора. Полученный элюат центрифугировали при 3000 об/мин в течение 15 минут. Количественное определение цитокинов - фактора некроза опухоли-α (ФНО-α) и интерлейкина-1β (ИЛ-1β) в образцах проводили иммуноферментным твердофазным методом с помощью коммерческой тест-системы, поставляемой фирмой-изготовителем ООО «Вектор-Бест» (Россия). Принцип метода основан на ферментной визуализации иммунологической реакции антиген-антитело. Интенсивность окраски образцов измеряли спектрофотометрически при длине волны 450 нм. Величину оптической плотности бланка вычитали из значений оптической плотности других образцов. Концентрацию ИЛ-1β и ФНО-α определяли с помощью калибровочной кривой, построенной по результатам измерения оптической плотности растворов, получаемых последовательным разведением стандарта. Чувствительность данного метода составляет 1,0 пг/мл. Содержание ИЛ-1β и ФНО-α в образце выражали в пг/мл. Вычисляли среднее значение для одного пациента из всех исследованных образцов тканевой пластинки.

При этом в день до начала лечения, для объективизации исследуемого материала, на рану накладывали повязку с физиологическим раствором, в последующие дни с определенными антисептиками для оценки и прогнозирования перехода раны из фазы хронического в острое воспаление.

Проводят анализ полученных результатов. При подъеме показателей цитокинов в -фактора некроза опухоли-α и интерлейкина-1β иммуноферментным твердофазным методом и при возрастании уровня фактора некроза опухоли-α с 7,4-8,5 до 22,6-24,8 пг/мл и интерлейкина-1β с 65,2-67,5 до 180,2-195,6 пг/мл на пятый день исследования констатируют переход раневого процесса из фазы хронического в острое воспаление при назначении лечения антисептиками.

При практической реализации способа было исследовано 80 пациентов, 19 мужчин (23,75%) и 61 женщины (76,25%). Средний возраст пациентов составил 68±13 лет.

У 65,0% пациентов (52 человек) была выявлена варикозная болезнь вен нижних конечностей, 35,0% (28 человек) - посттромботическая болезнь. Медиана длительности основного заболевания составила на момент лечения 28 [12-48] лет. Длительность трофической язвы составила 27 [20-38] месяцев. При поступлении у всех пациентов была оценена площадь липодерматосклероза в зоне трофических нарушений. Медиана значений площади таких пораженных тканей составила 128,0 [43,0-210,0] см².

Перед началом лечения все пациенты отмечали болевые ощущения, связанные с трофической язвой: 64,4% пациентов отмечали очень сильную боль (4 балла), 15,6% больных - сильную боль (3 балла), 17,8% - умеренную (2 балла), 2,2% - слабую (1 балл).

До начала лечения 78% пациентов имели признаки гиперпигментации кожи с наличием трофической язвы.

Анализировали интенсивность экссудации, оценивали с помощью шкалы от 0 до 4 баллов, где 0 баллов - отсутствие экссудата, 4 балла - очень сильная экссудация. До начала лечения у всех пациентов наблюдалась достаточно выраженная экссудация: в 24,4% случаев выраженность симптома была оценена в 4 балла, в 37,8% случаев - в 3 балла, в 37,8% случаев - в 2 балла.

Интенсивность фибринозного налета на язве оценивали с помощью шкалы от 0 до 4 баллов, где 0 баллов - отсутствие фибринового налета, 4 балла - крайне выраженный фибриновый налет. До лечения фибриновый налет на язве полностью отсутствовал у 6,7% больных, слабо выраженный фибриновый налет (1 балл) отмечали у 8,9% больных, умеренно выраженный (2 балла) - у 11,1% больных, сильный (3 балла) - у 44,4% больных, крайне сильный (4 балла) - у 28,9%.

Медиана значения площади язвенного дефекта до лечения составила 42,0 [16,0-86,0] см².

Среднее значение уровня ФНО-α в раневом экссудате до лечения составило с 7,4-8,5 пг/мл, показатели ИЛ-1β были равны с 65,2-67,5 пг/мл.

Пациенты были разделены на две клинические группы. Первую группу составили 35 пациентов, которым для местного лечения в фазу хронического воспаления использовали антисептический препарат хлоргексидин (0,5% раствор), и вторую группу составили 45 пациентов, для местного лечения которым использовали препарат Пронтосан. При динамике фактора некроза опухоли-α и интерлейкина-1β иммуноферментным твердофазным методом и при возрастании уровня фактора некроза опухоли-α с 7,4-8,5 до 22,6-24,8 пг/мл и интерлейкина-1β с 65,2-67,5 до 180,2-195,6 пг/мл констатируют переход раневого процесса из фазы хронического в острое воспаление и прогнозируют благоприятное течение раневого процесса.

Использовали местное применение антисептического препарата «Хлоргексидин» или «Пронтосан», положительный результат достигнут у 21 (60,0%) пациента, наблюдали увеличение показателей ФНО-α с исходных 7,4-8,5 до 22,6-24,8 пг/мл на 5-е сутки, значения ИЛ-1β с исходных с 65,2-67,5 до 180,2-195,6 пг/мл на 5 сутки. Среди 14 пациентов таких изменений не выявили и на 5-е сутки лечения наблюдали незначительное повышение показателей цитокинов, что свидетельствовало об прогностически отрицательных результатах и отсутствие перехода хронического в острое воспаление.

Положительный результат среди пациентов на пятые сутки наблюдали и клинически, у всех пациентов с достоверной разницей в лабораторных данных, отмечено уменьшение болевого синдрома, увеличение интенсивности экссудации, очищение язвенных поверхностей от налета фибрина, появление свежей ярко-розовой грануляционной ткани на поверхности язв.

Больным, у которых не наблюдали на 5-е сутки положительных сдвигов по показателям цитокинов, изменяли тактику лечения заменой препарата для местного лечения или добавлением дополнительных методов лечения.

Таким образом, установлено, что предложенный метод прогнозирования перехода хронической длительно незаживающей раны в острую рану, позволяет в короткие сроки установить выбор правильной тактики лечения, определить препараты и методы местного лечения хронических ран для перевода ее в острую рану с последующим адекватной терапией антисептиками.

При подъеме показателей цитокинов в указанных пределах на пятые сутки лечения по отношению к исходным показателям интерпретируют как положительный результат, т.е. переход раны из фазы хронического в острое воспаление, при этом проводят стандартную терапию в зависимости от фаз раневого процесса.

Способ подтверждается следующими примерами.

Пример 1.

Больной К. 46 лет поступил с жалобами на болевые ощущения в нижних конечностях, судороги. При объективном исследовании отмечается отек голеней и на медиальной поверхности правой лодыжки - трофическую язву размером 1,8×2,3 см. На этапе перевязки раны в нескольких участках раневого поля на сутки размещали квадратные пластинки из стерильного гигроскопического материала площадью 1 см². До этапа помещения пластинки в рану и после ее пропитывания экссудатом проводилось взвешивание на электронных весах «Ohaus» для определения количества физиологического раствора для элюирования. Каждую пластинку, пропитанную раневым экссудатом, помещали в отдельную стерильную пластиковую пробирку типа Эппендорф. Растворимые белки элюировали стеклянным шпателем в 0,9% растворе NaCl в соотношении 1 мкг веса пластинки на 100 мкл раствора. Полученный элюат центрифугировали при 3000 об/мин в течение 15 минут. Количественное определение цитокинов - фактора некроза опухоли-α (ФНО-α) и интерлейкина-1β (ИЛ-1β) в образцах проводили иммуноферментным твердофазным методом с помощью коммерческой тест-системы, поставляемой фирмой-изготовителем ООО «Вектор-Бест» (Россия). Принцип метода основан на ферментной визуализации иммунологической реакции антиген-антитело. Интенсивность окраски образцов измеряли спектрофотометрически при длине волны 450 нм. Величину оптической плотности бланка вычитали из значений оптической плотности других образцов. Концентрацию ИЛ-1β и ФНО-α определяли с помощью калибровочной кривой, построенной по результатам измерения оптической плотности растворов, получаемых последовательным разведением стандарта. Чувствительность данного метода составляет 1,0 пг/мл. Содержание ИЛ-1β и ФНО-α в образце выражали в пг/мл. Вычисляли среднее значение для одного пациента из всех исследованных образцов тканевой пластинки.

При этом в день до начала лечения, для объективизации исследуемого материала, на рану накладывали повязку с физиологическим раствором, в последующие дни с определенными антисептиками для оценки и прогнозирования перехода раны из фазы хронического в острое воспаление.

Проводят анализ полученных результатов. При подъеме показателей цитокинов в - фактора некроза опухоли-α и интерлейкина-1β иммуноферментным твердофазным методом и при возрастании уровня фактора некроза опухоли-α с 7,4-8,5 до 22,6-24,8 пг/мл и интерлейкина-1β с 65,2-67,5 до 180,2-195,6 пг/мл на пятый день исследования констатируют переход раневого процесса из фазы хронического в острое воспаление при назначении лечения антисептиками.

Перед началом лечения пациент отмечал болевые ощущения, связанные с трофической язвой - очень сильную боль (4 балла), имелись признаки гиперпигментации кожи с наличием трофической язвы площадью 42 см², интенсивность экссудации оценивали 4 балла - очень сильная экссудация, интенсивность фибринозного налета на язве оценивали как 4 балла - крайне выраженный фибриновый налет.

Среднее значение уровня ФНО-α в раневом экссудате до лечения составило с 7,4-8,5 пг/мл, показатели ИЛ-1β были равны с 65,2-67,5 пг/мл. Для местного лечения в фазу хронического воспаления использовали антисептический препарат хлоргексидин (0,5% раствор), и вторую группу составили 45 пациентов, для местного лечения которым использовали препарат Пронтосан. При динамике фактора некроза опухоли-α и интерлейкина-1β иммуноферментным твердофазным методом и при возрастании уровня фактора некроза опухоли-α с 7,4-8,5 до 22,6-24,8 пг/мл и интерлейкина-1β с 65,2-67,5 до 180,2-195,6 пг/мл констатируют переход раневого процесса из фазы хронического в острое воспаление и прогнозируют благоприятное течение раневого процесса.

При использовании антисептического препарата «Хлоргексидин» или «Пронтосан», положительный результат достигнут у 21 (60,0%) пациента, наблюдали увеличение показателей ФНО-α с исходных 7,4-8,5 до 22,6-24,8 пг/мл на 5-е сутки, значения ИЛ-1β с исходных с 65,2-67,5 до 180,2-195,6 пг/мл на 5 сутки. Положительный результат среди пациентов на пятые сутки наблюдали и клинически, у всех пациентов с достоверной разницей в лабораторных данных, отмечено уменьшение болевого синдрома, увеличение интенсивности экссудации, очищение язвенных поверхностей от налета фибрина, появление свежей ярко-розовой грануляционной ткани на поверхности язв.

Таким образом, установлено, что предложенный метод прогнозирования перехода хронической длительно незаживающей раны в острую рану, позволяет в короткие сроки установить выбор правильной тактики лечения, определить препараты и методы местного лечения хронических ран для перевода ее в острую рану с последующим адекватной терапией антисептиками.

Пример 2.

Больной Т. 72 лет поступил с жалобами на болевые ощущения в нижних конечностях, судороги. При объективном исследовании отмечается отек голеней и на медиальной поверхности правой лодыжки - трофическую язву размером 1,8×2,3 см. На этапе перевязки раны в нескольких участках раневого поля на сутки размещали квадратные пластинки из стерильного гигроскопического материала площадью 1 см². До этапа помещения пластинки в рану и после ее пропитывания экссудатом проводилось взвешивание на электронных весах «Ohaus» для определения количества физиологического раствора для элюирования. Каждую пластинку, пропитанную раневым экссудатом, помещали в отдельную стерильную пластиковую пробирку типа Эппендорф. Растворимые белки элюировали стеклянным шпателем в 0,9% растворе NaCl в соотношении 1 мкг веса пластинки на 100 мкл раствора. Полученный элюат центрифугировали при 3000 об/мин в течение 15 минут. Количественное определение цитокинов - фактора некроза опухоли-α (ФНО-α) и интерлейкина-1β (ИЛ-1β) в образцах проводили иммуноферментным твердофазным методом с помощью коммерческой тест-системы, поставляемой фирмой-изготовителем ООО «Вектор-Бест» (Россия). Принцип метода основан на ферментной визуализации иммунологической реакции антиген-антитело. Интенсивность окраски образцов измеряли спектрофотометрически при длине волны 450 нм. Величину оптической плотности бланка вычитали из значений оптической плотности других образцов. Концентрацию ИЛ-1β и ФНО-α определяли с помощью калибровочной кривой, построенной по результатам измерения оптической плотности растворов, получаемых последовательным разведением стандарта. Чувствительность данного метода составляет 1,0 пг/мл. Содержание ИЛ-1β и ФНО-α в образце выражали в пг/мл. Вычисляли среднее значение для одного пациента из всех исследованных образцов тканевой пластинки.

При этом в день до начала лечения, для объективизации исследуемого материала, на рану накладывали повязку с физиологическим раствором, в последующие дни с определенными антисептиками для оценки и прогнозирования перехода раны из фазы хронического в острое воспаление.

Проводят анализ полученных результатов. При подъеме показателей цитокинов в -фактора некроза опухоли-α и интерлейкина-1β иммуноферментным твердофазным методом и при возрастании уровня фактора некроза опухоли-α с 7,4-8,5 до 22,6-24,8 пг/мл и интерлейкина-1β с 65,2-67,5 до 180,2-195,6 пг/мл на пятый день исследования констатируют переход раневого процесса из фазы хронического в острое воспаление при назначении лечения антисептиками.

Перед началом лечения пациент отмечал болевые ощущения, связанные с трофической язвой - очень сильную боль (4 балла), имелись признаки гиперпигментации кожи с наличием трофической язвы площадью 42 см², интенсивность экссудации оценивали 4 балла - очень сильная экссудация, интенсивность фибринозного налета на язве оценивали как 4 балла - крайне выраженный фибриновый налет.

Среднее значение уровня ФНО-α в раневом экссудате до лечения составило с 7,4-8,5 пг/мл, показатели ИЛ-1β были равные 65,2-67,5 пг/мл. Для местного лечения в фазу хронического воспаления использовали антисептический препарат хлоргексидин (0,5% раствор), и вторую группу составили 45 пациентов, для местного лечения которым использовали препарат Пронтосан. При динамике фактора некроза опухоли-α и интерлейкина-1β иммуноферментным твердофазным методом и при возрастании уровня фактора некроза опухоли-α с 7,4-8,5 до 22,6-24,8 пг/мл и интерлейкина-1β с 65,2-67,5 до 180,2-195,6 пг/мл констатируют переход раневого процесса из фазы хронического в острое воспаление и прогнозируют благоприятное течение раневого процесса.

При использовании антисептического препарата «Хлоргексидин» или «Пронтосан», положительный результат достигнут у 21 (60,0%) пациента, наблюдали увеличение показателей ФНО-α с исходных 7,4-8,5 до 22,6-24,8 пг/мл на 5-е сутки, значения ИЛ-1β с исходных с 65,2-67,5 до 180,2-195,6 пг/мл на 5 сутки. Положительный результат среди пациентов на пятые сутки наблюдали и клинически, у всех пациентов с достоверной разницей в лабораторных данных, отмечено уменьшение болевого синдрома, увеличение интенсивности экссудации, очищение язвенных поверхностей от налета фибрина, появление свежей ярко-розовой грануляционной ткани на поверхности язв.

Таким образом, установлено, что предложенный метод прогнозирования перехода хронической длительно незаживающей раны в острую рану, позволяет в короткие сроки установить выбор правильной тактики лечения, определить препараты и методы местного лечения хронических ран для перевода ее в острую рану с последующим адекватной терапией антисептиками.

Источники информации

1 - Патент РФ №2142635, 1998.

2 - Патент РФ №2596866, 2015.

Способ прогнозирования течения послеоперационных гнойных ран путем исследования раневого экссудата, отличающийся тем, что собирают раневой экссудатом в течение одних суток, определяют в нем уровень цитокинов иммуноферментным твердофазным методом и при возрастании уровня фактора некроза опухоли-α с 7,4-8,5 до 22,6-24,8 пг/мл и интерлейкина-1β с 65,2-67,5 до 180,2-195,6 пг/мл констатируют переход раневого процесса из фазы хронического в острое воспаление при назначении лечения антисептиками.