Составы на основе антитела к cd19

Авторы патента:

БРОКС Бодо (DE)

ХЕССЛИНГ Мартин (DE)

ГАРИДЕЛЬ Патрик (DE)

ВАЙНФУРТНЕР Даниел (DE)

ЛАНГЕР Андреас (DE)

C07K16/2803 - Иммуноглобулины, например моноклональные или поликлональные антитела

C07K16/28 - против рецепторов, клеточных поверхностных антигенов или клеточных поверхностных детерминантов

A61P35/00 - Противоопухолевые средства

A61K9/19 - лиофилизированные

A61K47/36 - полисахариды; их производные

A61K47/26 - углеводы

A61K47/12 - карбоновые кислоты; их соли или ангидриды

A61K39/3955 - Лекарственные препараты, содержащие антигены или антитела (материалы для иммунологического анализа G01N 33/53)

A61K39/395 - антитела (агглютинины A61K 38/36); иммуноглобулины; иммунные сыворотки, например антилимфоцитные сыворотки

Владельцы патента RU 2748024:

МОРФОСИС АГ (DE)

Группа изобретений относится к биотехнологии, а именное к фармацевтическому составу на основе антитела к CD19 и его применению для лечения лимфомы или лейкоза, которые экспрессируют CD19. Стабильный лиофилизированный фармацевтический состав содержит антитело к CD19 в концентрации от 20 мг/мл до 125 мг/мл, буфер, полисорбат в концентрации от 0,005% (вес/об.) до 0,06% (вес/об.) и с показателем pH, составляющим 6,0, а также a) трегалозу в концентрации от 180 мМ до 240 мМ или b) маннит в концентрации от 180 мМ до 240 мМ и сахарозу в концентрации от 10 мМ до 50 мМ. Указанное антитело к CD19 содержит область HCDR1 с SEQ ID NO: 1, область HCDR2 с SEQ ID NO: 2, область HCDR3 с SEQ ID NO: 3, область LCDR1 с SEQ ID NO: 4, область LCDR2 с SEQ ID NO: 5 и область LCDR3 с SEQ ID NO: 6, константный домен тяжелой цепи SEQ ID NO: 8 и константный домен легкой цепи с SEQ ID NO: 9. Лиофилизированный фармацевтический состав является стабильным при 2-8°С в течение по меньшей мере 36 месяцев. 5 н. и 38 з.п. ф-лы, 5 табл., 3 пр., 2 ил.

Область техники, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение относится к стабильным лиофилизированным фармацевтическим составам на основе антитела к CD19 и предусматривает способы получения и способы применения таких составов.

Уровень техники изобретения

В-клетки представляют собой лимфоциты, которые играют большую роль в гуморальном иммунном ответе. Они продуцируются в костном мозге большинства млекопитающих и составляют 5-15% циркулирующего лимфоидного пула. Основная функция В-клеток состоит в создании антител к различным антигенам, и они являются неотъемлемым элементом адаптивной иммунной системы.

Вследствие их критической роли в регулировании иммунной системы расстройство регуляции В-клеток связано с различными нарушениями, такими как лимфомы и лейкозы. Среди таких нарушений находятся неходжкинская лимфома (NHL), хронический лимфоцитарный лейкоз (CLL) и острый лимфобластный лейкоз (ALL).

Молекула CD19 человека представляет собой структурно отличающийся рецептор клеточной поверхности, экспрессирующийся на поверхности В-клеток человека, в том числе без ограничения пре-В-клетки, В-клетки в ранней стадии развития (т.е. незрелые В-клетки), зрелые В-клетки через терминальную дифференцировку в плазматические клетки и злокачественные В-клетки. CD19 экспрессируется в большинстве случаев пре-В-клеточных острых лимфобластных лейкозов (ALL), неходжкинских лимфом, В-клеточных хронических лимфоцитарных лейкозов (CLL), пролимфоцитарных лейкозов, лейкозов ворсистых клеток, острых недифференцированных лимфоцитарных лейкозов и некоторых острых лимфобластных лейкозов с нулевым фенотипом (Nadler et al, J. Immunol., 131:244-250 (1983), Loken et al, Blood, 70:1316-1324 (1987), Uckun et al, Blood, 71:13-29 (1988), Anderson et al, 1984. Blood, 63:1424-1433 (1984), Scheuermann, Leuk. Lymphoma, 18:385-397 (1995)). Экспрессия CD19 на плазматических клетках дополнительно предполагает, что он может быть экспрессирован на дифференцированных В-клеточных опухолях, таких как множественная миелома, плазмоцитомы, опухоли Вальденстрема (Grossbard et al., Br. J. Haematol, 102:509-15 (1998); Treon et al, Semin. Oncol, 30:248-52 (2003)).

Следовательно, антиген CD19 представляет собой мишень для иммунотерапии при лечении неходжкинской лимфомы (в том числе каждый из подтипов, описанный в данном документе), хронического лимфоцитарного лейкоза и/или острого лимфобластного лейкоза.

MOR208 (ранее называемое XmAb5574) представляет собой полученное с помощью генной инженерии гуманизированное моноклональное Fc-антитело, которое связывает CD19. Увеличение связывания MOR208 Fc с FcγR, вследствие полученных с помощью генной инженерии мутаций XmAb, в значительной степени усиливает in-vitro антителозависимую клеточно-опосредованную цитотоксичность (ADCC), антителозависимый

клеточно-опосредованный фагоцитоз (ADCP) антителозависимый клеточно-опосредованный фагоцитоз (апоптоз) в отношении опухоли по сравнению с немодифицированным антителом. Не было показано, что MOR208 опосредует комплементзависимую цитотоксичность.

MOR208 проходило и в настоящее время проходит клинические испытания в отношении CLL, ALL и NHL. В частности, завершены фаза I испытания под названием "Безопасность и переносимость XmAb®5574 при хроническом лимфоцитарном лейкозе" и фаза IIa испытания под названием "Исследование Fc-оптимизированного антитела к CD19 (MOR208) для лечения В-клеточного острого лимфобластного лейкоза (B-ALL)". Завершен набор на фазу Па испытания под названием "Исследование Fc-оптимизированного антитела к CD19 (MOR208) для лечения неходжкинской лимфомы (NHL)". Также продолжаются следующие испытания: фаза II/III испытания под названием "Испытание для оценки эффективности и безопасности MOR208 с бендамустином (BEN) по сравнению с ритуксимабом (RTX), с BEN у взрослых пациентов с рецидивирующей или рефрактерной диффузной крупноклеточной В-клеточной лимфомой (DLBCL) (B-MIND)", фаза II фаза II испытания под названием "Исследование для оценки эффективности и безопасности MOR208 с иделалисибом у пациентов с R/R CLL/SLL, предварительно получавших BTKi", фаза II испытания под названием "Исследование для оценки безопасности и эффективности леналидомида с MOR208 у пациентов с R-R DLBCL" и фаза II испытания под названием "Фаза II, MOR208 в комбинации с леналидомидом для пациентов с рецидивирующим или рефрактерным CLL, SLL или PLL или пожилых пациентов с CLL, SLL или PLL без лечения".

Терапевтические антитела и фрагменты антител представляют собой большие и более сложные молекулы, чем небольшие молекулы традиционных органических и неорганических лекарственных средств, так как антитела содержат множество функциональных групп в дополнение к сложным трехмерным структурам, а следовательно состав таких белков создает особые проблемы. Чтобы белок оставался биологически активным, состав должен сохранять конформационную целостность по меньшей мере коровой последовательности аминокислот белка, в то же время защищая множественные функциональные группы белка от распада. Составы на основе антител могут характеризоваться короткими сроками хранения, и составленные антитела могут потерять биологическую активность в результате химической и физической нестабильности во время хранения. Три наиболее распространенных пути распада белка представляют собой агрегацию, дезамидирование и окисление (Cleland et al., Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems 10(4): 307-377 (1993)). В частности, агрегация может потенциально привести к усилению иммунного ответа у пациентов, что приводит к проблемам в отношении безопасности, и ее нужно минимизировать или предотвратить.

Краткое описание изобретения

Целью настоящего изобретения является предоставление составов на основе антител к CD19, и в частности составов на основе антител к CD19, характеризующихся подходящим сроком хранения.

Подходящие составы для терапевтических антител могут представлять собой водную фармацевтическую композицию или лиофилизат, который может быть восстановлен с целью получения раствора для введения пациенту.

В данном документе представлены лиофилизированные фармацевтические составы, содержащие антитело. В одном аспекте состав содержит антитело к CD19, буфер, сахарозу и поверхностно-активное вещество, где состав характеризуется показателем рН, составляющим приблизительно 6,0, где указанное антитело к CD19 содержит константный домен тяжелой цепи с последовательностью

ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPDVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRWSVLTWHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPEEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSL SLSPGK (SEQ ID NO: 8) и константный домен легкой цепи с последовательностью RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 9).

В одном аспекте в данном документе представлен стабильный лиофилизированный фармацевтический состав, при этом состав содержит антитело к CD19 в концентрации, составляющей от приблизительно 20 мг/мл до приблизительно 125 мг/мл, буфер, полисорбат в концентрации, составляющей от приблизительно 0,005% (вес/об.) до приблизительно 0,06% (вес/об.), и с показателем рН, составляющим приблизительно 6,0, где состав дополнительно содержит а) трегалозу в концентрации, составляющей от приблизительно 180 мМ до приблизительно 240 мМ, или

В некоторых вариантах осуществления указанное антитело к CD19 содержит область HCDR1, содержащую последовательность SYVMH (SEQ ID NO: 1), область HCDR2, содержащую последовательность NPYNDG (SEQ ID NO: 2), область HCDR3, содержащую последовательность GTYYYGTRVFDY (SEQ ID NO: 3), область LCDR1, содержащую последовательность RSSKSLQNVNGNTYLY (SEQ ID NO: 4), область LCDR2, содержащую последовательность RMSNLNS (SEQ ID NO: 5), и область LCDR3, содержащую последовательность MQHLEYPIT (SEQ ID NO: 6).

В некоторых вариантах осуществления указанное антитело к CD19 содержит область HCDR1 с последовательностью SYVMH (SEQ ID NO: 1), область HCDR2 с последовательностью NPYNDG (SEQ ID NO: 2), область HCDR3 с последовательностью GTYYYGTRVFDY (SEQ ID NO: 3), область LCDR1 с последовательностью RSSKSLQNVNGNTYLY (SEQ ID NO: 4), область LCDR2 с последовательностью RMSNLNS (SEQ ID NO: 5) и область LCDR3 с последовательностью MQHLEYPIT (SEQ ID NO: 6).

В некоторых вариантах осуществления указанное антитело к CD19 содержит вариабельную область тяжелой цепи с последовательностью

EVQLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGYTFTSYVMHWVRQAPGKGLEWIGYINPYNDGTKYNEKFQGRVTISSDKSISTAYMELSSLRSEDTAMYYCARGTYYYGTRVFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 10) и вариабельную область легкой цепи с последовательностью DIVMTQSPATLSLSPGERATLSCRSSKSLQNVNGNTYLYWFQQKPGQSPQLLIYRMSNLNSGVPDRFSGSGSGTEFTLTISSLEPEDFAVYYCMQHLEYPITFGAGTKLEIK (SEQ ID NO: 11).

В некоторых вариантах осуществления указанное антитело к CD19 содержит константный домен тяжелой цепи с последовательностью

ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPDVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRWSVLTWHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPEEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 8) и константный домен легкой цепи с последовательностью RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 9).

В некоторых вариантах осуществления антитело к CD19 в составе характеризуется концентрацией, составляющей от приблизительно 20 мг/мл до приблизительно 80 мг/мл. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD19 в составе характеризуется концентрацией, составляющей приблизительно 40 мг/мл.

В некоторых вариантах осуществления указанный буфер в составе представляет собой цитратный буфер или фосфатный буфер.

В некоторых вариантах осуществления указанная трегалоза в составе характеризуется концентрацией, составляющей приблизительно 200 мМ. В некоторых вариантах осуществления указанная трегалоза в составе характеризуется концентрацией, составляющей 200 мМ.

В некоторых вариантах осуществления указанный маннит в составе характеризуется концентрацией, составляющей приблизительно 219 мМ, и сахароза в составе характеризуется концентрацией, составляющей приблизительно 29 мМ. В некоторых вариантах осуществления указанный маннит в составе характеризуется концентрацией, составляющей 219 мМ, и сахароза в составе характеризуется концентрацией, составляющей 29 мМ.

В некоторых вариантах осуществления состав характеризуется показателем рН, составляющим приблизительно 6,0. В некоторых вариантах осуществления состав характеризуется показателем рН, составляющим 6,0.

В некоторых вариантах осуществления указанный полисорбат в составе представляет собой полисорбат 20. В некоторых вариантах осуществления указанный полисорбат (например, полисорбат 20) в составе характеризуется концентрацией, составляющей от приблизительно 0,005% (вес/об.) до приблизительно 0,06% (вес/об.). В некоторых вариантах осуществления указанный полисорбат (например, полисорбат 20) в составе характеризуется концентрацией, составляющей приблизительно 0,02% (вес/об.). В некоторых вариантах осуществления указанный полисорбат (например, полисорбат 20) в составе характеризуется концентрацией, составляющей 0,02% (вес/об.).

В дополнительном аспекте в данном документе представлен стабильный лиофилизированный фармацевтический состав, при этом состав содержит антитело к CD19 в концентрации, составляющей приблизительно 40 мг/мл, цитрат в концентрации, составляющей приблизительно 25 мМ, трегалозу в концентрации, составляющей приблизительно 200 мМ, полисорбат в концентрации, составляющей приблизительно 0,02% (вес/об.), и с показателем рН, составляющим приблизительно 6,0.

В дополнительном аспекте в данном документе представлен стабильный лиофилизированный фармацевтический состав, при этом состав содержит антитело к CD19 в концентрации, составляющей 40 мг/мл, цитрат в концентрации, составляющей 25 мМ, трегалозу в концентрации, составляющей 200 мМ, полисорбат в концентрации, составляющей 0,02% (вес/об.), и с показателем рН, составляющим приблизительно 6,0.

В дополнительном аспекте в данном документе представлен стабильный лиофилизированный фармацевтический состав, при этом состав содержит антитело к CD19 в концентрации, составляющей приблизительно 40 мг/мл, цитрат в концентрации, составляющей приблизительно 25 мМ, маннит в концентрации, составляющей приблизительно 219 мМ, сахарозу в концентрации, составляющей приблизительно 29 мМ, полисорбат в концентрации, составляющей приблизительно 0,02% (вес/об.), и с показателем рН, составляющим приблизительно 6,0.

В дополнительном аспекте в данном документе представлен стабильный лиофилизированный фармацевтический состав, при этом состав содержит антитело к CD19 в концентрации, составляющей 40 мг/мл, цитрат в концентрации, составляющей 25 мМ, маннит в концентрации, составляющей 219 мМ, сахарозу в концентрации, составляющей 29 мМ, полисорбат в концентрации, составляющей 0,02% (вес/об.), и с показателем рН, составляющим приблизительно 6,0.

В некоторых вариантах осуществления указанное антитело к CD19 в составе не подвергается предварительной лиофилизации, например, является жидким. В некоторых вариантах осуществления указанное антитело к CD19 в составе представляет собой моноклональное антитело. В некоторых вариантах осуществления указанное антитело к CD19 в составе представляет собой полноразмерное антитело. В некоторых вариантах осуществления указанное антитело к CD19 в составе представляет собой антитело IgG. В некоторых вариантах осуществления указанное антитело к CD19 в составе представляет собой гуманизированное антитело или антитело человека. В некоторых вариантах осуществления указанное антитело к CD19 в составе представляет собой фрагмент антитела, содержащий антигенсвязывающую область. В некоторых вариантах осуществления фрагмент антитела представляет собой фрагмент Fab или фрагмент F(ab')2.

Описание графических материалов

Фигура 1: представлены аминокислотные последовательности MOR208.

Фигура 2: невидимые невооруженным глазом частицы (SVP) MOR208 подсчитывали через 3 месяца при 40°С. Сравнивали состав 3 и состав 9, и при этом состав маннит/сахароза образовывал больше частиц с течением времени, особенно в диапазоне между 2 мкм и 1000 мкм.

Подробное описание изобретения

Термин "антитело" означает моноклональные антитела, в том числе любой изотип, такой как IgG, IgM, IgA, IgD и IgE. Антитело IgG состоит из двух идентичных тяжелых цепей и двух идентичных легких цепей, которые соединены дисульфидными связями. Каждая тяжелая и легкая цепь содержит константную область и вариабельную область. Каждая вариабельная область содержит три сегмента, называемых "областями, определяющими комплементарность" ("CDR") или "гипервариабельными областями", которые в первую очередь отвечают за связывание с эпитопом антигена. На них ссылаются как CDR1, CDR2 и CDR3, нумеруя последовательно от N-конца. Более консервативные фрагменты вариабельных областей за пределами CDR называются "каркасными областями". Термин "фрагмент антитела" означает фрагмент Fv, scFv, dsFv, Fab, Fab', F(ab')2 или другой фрагмент, который содержит по меньшей мере одну вариабельную область тяжелой цепи или вариабельную область легкой цепи, при этом каждая содержит CDR и каркасные области.

"VH" относится к вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина антитела или фрагмента антитела. "VL" относится к вариабельной области легкой цепи иммуноглобулина антитела или фрагмента антитела.

Термин "CD19" относится к белку, известному как CD19, имеющему следующие синонимы: В4, В-лимфоцитарный антиген CD19, В-лимфоцитарный поверхностный антиген В4, CVID3, дифференцировочный антиген CD19, MGC12802 и Т-клеточный поверхностный антиген Leu-12.

Аминокислотная последовательность CD19 человека:

MPPPRLLFFLLFLTPMEVRPEEPLWKVEEGDNAVLQCLKGTSDGPTQQLTWSRESPLKPFLKLSLGLPGLGIHMRPLAIWLFIFNVSQQMGGFYLCQPGPPSEKAWQPGWTVNVEGSGELFRWNVSDLGGLGCGLKNRSSEGPSSPSGKLMSPKLYVWAKDRPEIWEGEPPCLPPRDSLNQSLSQDLTMAPGSTLWLSCGVPPDSVSRGPLSWTHVHPKGPKSLLSLELKDDRPARDMWVMETGLLLPRATAQDAGKYYCHRGNLTMSFHLEITARPVLWHWLLRTGGWKVSAVTLAYLIFCLCSLVGILHLQRALVLRRKRKRMTDPTRRFFKVTPPPGSGPQNQYGNVLSLPTPTSGLGRAQRWAAGLGGTAPSYGNPSSDVQADGALGSRSPPGVGPEEEEGEGYEEPDSEEDSEFYENDSNLGQDQLSQDGSGYENPEDEPLGPEDEDSFSNAESYENEDEELTQPVARTMDFLSPHGSAWDPSREATSLGSQSYEDMRGILYAAPQLRSIRGQPGPNHEEDADSYENMDNPDGPDPAWGGGGRMGTWSTR (SEQ ID NO: 7)

"MOR208" представляет собой антитело к CD19. Аминокислотная последовательность вариабельных доменов представлена на фигуре 1. Аминокислотная последовательность Fc-областей тяжелой и легкой цепи MOR208 представлена на фигуре 1. "MOR208" и "XmAb 5574" используются как синонимы для описания антитела, показанного на фигуре 1. Антитело MOR208 описано в заявке на патент США под порядковым №12/377251, которая включена посредством ссылки в полном своем объеме.

Дополнительные антитела, специфичные KCD19, описаны в патенте США №7109304 (Immunomedics), который включен в данный документ посредством ссылки в полном своем объеме; заявке на патент США под порядковым №11/917750 (Medarex), которая включена в данный документ посредством ссылки в полном своем объеме; заявке на патент США под порядковым №11/852106 (Medimmune), которая включена в данный документ посредством ссылки в полном своем объеме; заявке на патент США под порядковым №11/648505 (Merck Patent GmbH), которая включена в данный документ посредством ссылки в полном своем объеме; патенте США №7968687 (Seattle Genetics), который включен в данный документ посредством ссылки в полном своем объеме; и заявке на патент США под порядковым №12/710442 (Glenmark Pharmaceuticals), которая включена в данный документ посредством ссылки в полном своем объеме.

Кроме того, дополнительные антитела, специфичные в отношении CD19, описаны в WO 2005012493 (US 7109304), WO 2010053716 (US 12/266999) (Immunomedics); WO 2007002223 (US US8097703) (Medarex); WO 2008022152 (12/377251) и WO 2008150494 (Xencor), WO 2008031056 (US 11/852106) (Medimmune); WO 2007076950 (US 11/648505) (Merck Patent GmbH); WO 2009/052431 (US 12/253895) (Seattle Genetics) и WO 2010095031 (12/710442) (Glenmark Pharmaceuticals), WO 2012010562 и WO 2012010561 (International Drug Development), WO 2011147834 (Roche Glycart) и WO 2012/156455 (Sanofi), все из которых включены посредством ссылки в их полном объеме.

Термин "фармацевтический состав" относится к препарату для введения субъектам. Такими субъектами могут быть люди.

"Стабильный" состав представляет собой состав, который может быть введен пациентам после хранения. В аспектах состав практически сохраняет свои физические и химические свойства, а также свою биологическую активность при хранении. Различные аналитические методы для измерения стабильности белка доступны из уровня техники и рассмотрены, например, в Peptide and Protein Drug Delivery, 247-301, Vincent Lee Ed., Marcel Dekker, Inc., Нью-Йорк, Нью-Йорк, Pubs. (1991) и Jones, A. Adv. Drug Delivery Rev. 10: 29-90 (1993).

Стабильность может быть оценена качественно и/или количественно всевозможными способами, включая оценку образования агрегатов (например, с применением эксклюзионной хроматографии, с помощью измерения мутности и/или с помощью визуального осмотра); с помощью оценки гетерогенности заряда с применением ионообменной хроматографии (IEC), эксклюзионной хроматографии (HP-SEC), анализа посредством SDS-PAGE для сравнения восстановленного и интактного антитела; оценки биологической активности или антигенсвязывающей функции антитела и т.д. Неустойчивость может вовлекать любое одно или несколько из: агрегации, дезамидирования (например, дезамидирование Asn), окисления (например, окисление Met), изомеризации (например, изомеризация Asp), отсечения/гидролиза/фрагментации (например, фрагментация шарнирной области), образования сукцинимида, неспаренного цистеина(-ов), удлинения N-конца, обработки С-конца, отличий гликозилирования и т.д.

Используемый в данном документе термин "биологическая активность" моноклонального антитела относится к способности антитела связываться с антигеном. Он может дополнительно включать связывание антитела с антигеном и может приводить к измеряемому биологическому ответу, который может быть измерен in vitro или in vivo.

Используемый в данном документе термин "буфер" относится к забуференному раствору, который противодействует изменениям рН вследствие действия его объединенных компонентов с кислотными и основными свойствами. Буфер по данному изобретению предпочтительно характеризуется показателем рН, находящимся в диапазоне от приблизительно 4,5 до приблизительно 7,0, предпочтительно от приблизительно 5,6 до приблизительно 7,0. В одном варианте осуществления буфер характеризуется показателем рН, составляющим приблизительно 6,0, или рН составляет 6,0. Например, каждый из цитратного буфера или фосфатного буфера являются примерами буферов, которые будут контролировать показатель рН в данном диапазоне.

Используемый в данном документе термин "поверхностно-активное вещество" относится к поверхностно-активному средству. Предпочтительно, поверхностно-активное вещество представляет собой неионное поверхностно-активное вещество. Примеры поверхностно-активных веществ в данном документе включают полисорбат (например, полисорбат 20 и полисорбат 80); полоксамер (например, полоксамер 188); Тритон; додецилсульфат натрия (SDS); лаурилсульфат натрия; октилгликозид натрия; лаурил-миристил-, линолеил- или стеарил-сульфобетаин; лаурил-, миристил-, линолеил- или стеарил-саркозин; линолеил-, миристил- или цетил-бетаин; лауроамидопропил-кокамидопропил-, линолеамидопропил-, миристамидопропил-, пальмидопропил- или изостеарамидопропил-бетаин (например, лауроамидопропил); миристамидопропил-, пальмидопропил- или изостеарамидопропил-диметиламин; метилкокоил натрия- или динатрийметилолеилтаурат и серию MONAQUAT™ (Mona Industries, Inc., Патерсон, Нью-Джерси); полиэтилгликоль, полипропилгликоль и сополимеры этилена и пропиленгликоля (например, плюроники, PF68 и т.д.) и т.д. В одном варианте осуществления поверхностно-активное вещество в данном документе представляет собой полисорбат 20.

"Fc-область" означает константную область антитела, которая у людей может принадлежать к подклассу lgG1, 2, 3, 4 или другим подклассам. Последовательности Fc-областей человека доступны на IMGT, Human IGH C-REGIONs, http://www.imgt.org/IMGTrepertoire/Proteins/protein/human/IGH/IGHC/Hu_IGHCallgenes.html (взяты 16 мая 2011 г.).

"Введенный" или "введение" включает без ограничения доставку с помощью инъецируемой формы, такой как, например, внутривенный, внутримышечный, внутрикожный или подкожный путь доставки или путь доставки через слизистые, например, в виде назального спрея или аэрозоля для ингаляции или в виде проглатываемых раствора, капсулы или таблетки.

"Терапевтически эффективное количество" соединения или комбинации относится к количеству, достаточному для по меньшей мере частичного подавления клинических проявлений данного заболевания или нарушения и его осложнений. Количество, эффективное для конкретной терапевтической цели, будет зависеть от тяжести заболевания или травмы, а также от веса и общего состояния субъекта. Понятно, что подходящую дозу можно определить, используя обычные эксперименты, путем построения таблицы значений и тестирования различных точек в таблице; все из этих приемов являются обычными навыками подготовленного врача или клинического ученого.

"CDR" в данном документе определены либо у Chothia et al, или Kabat et al. См. Chothia С, Lesk AM. (1987) Canonical structures for the hypervariable regions of immunoglobulins. J Mol Biol., 196(4):901-17, которая включена в данный документ посредством ссылки в полном своем объеме. См. публикацию Kabat Е.А, Wu Т.Т., Perry Н.М., Gottesman K.S. and Foeller С. (1991). Sequences of Proteins of Immunological Interest. 5th edit., NIH Publication no. 91-3242, US Dept. of Health and Human Services, Washington, DC, которая включена в данный документ посредством ссылки в полном своем объеме.

"Перекрестно конкурирует" означает способность антитела или других связывающих средств препятствовать связыванию других антител или связывающих средств с CD19 в стандартном анализе конкурентного связывания. Способность или степень, с которой антитело или другое связывающее средство может препятствовать связыванию другого антитела или связывающей молекулы с CD19, а следовательно его способность перекрестно конкурировать в соответствии с настоящим изобретением, могут быть определены с использованием стандартных анализов конкурентного связывания. В одном подходящем анализе используется технология Biacore (например, с применением прибора BIAcore 3000 (Biacore, Уппсала, Швеция)), с помощью которого можно измерить степень взаимодействия, используя технологию на основе поверхностного плазмонного резонанса. В другом анализе для измерения перекрестной конкуренции используется подход на основе ELISA. Процесс с высокой пропускной способностью для "биннинга эпитопов" антител, основанный на их перекрестной конкуренции, описан в Международной патентной заявке № WO 2003/48731.

Термин "эпитоп" включает любую детерминанту белка, способную специфически связываться с антителом или иным образом взаимодействовать с молекулой. Эпитопные детерминанты обычно состоят из химически активных поверхностных группировок молекул, таких как боковые цепи аминокислот, или углеводов, или Сахаров, и могут характеризоваться специфическими свойствами трехмерных структур, а также определенными свойствами, обусловленными наличием электрического заряда. Эпитоп может быть "линейным" или "конформационным". Термин "линейный эпитоп" относится к эпитопу, в котором все точки взаимодействия между белком и молекулой для взаимодействия (такой как антитело) возникают линейно вдоль первичной аминокислотной последовательности белка (непрерывной). Термин "конформационный эпитоп" относится к эпитопу, в котором присутствуют прерывающиеся аминокислоты, которые объединяются вместе в трехмерную конформацию. В конформационном эпитопе точки взаимодействия расположены по аминокислотным остаткам на белке так, что отделены друг от друга.

"Связывает тот же эпитоп, что и" означает, что антитело или другое связывающее средство связывается с CD19 и содержит тот же эпитоп, что и антитело, приведенное в качестве примера. Эпитопы антитела, приведенного в качестве примера, и других антител к CD19 могут быть определены с использованием стандартных методов картирования эпитопов. Методы картирования эпитопов, хорошо известные из уровня техники, включают протоколы картирования эпитопов в Methods in Molecular Biology, Vol. 66 (Glenn E.Morris, Ed., 1996) Humana Press, Totowa, New Jersey. Например, линейные эпитопы могут быть определены с помощью, например, одновременного синтеза большого количества пептидов на твердых подложках, пептидов, соответствующих частям молекулы белка, и взаимодействия пептидов с антителами, в то время как пептиды все еще связаны с подложками. Такие методы известны из уровня техники и описаны, например, в патенте США №4708871; Geysen et al, (1984) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 8:3998-4002; Geysen et al, (1985) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82:78-182; Geysen et al, (1986) Mol. Immunol. 23:709-715. Аналогичным образом, конформационные эпитопы легко идентифицируются с помощью определения пространственной конформации аминокислот, как например, обмен водорода/дейтерия, рентгеновская кристаллография и двухмерный ядерный магнитный резонанс. См., например, Epitope Mapping Protocols выше. Антигенные области белков также могут быть идентифицированы с использованием стандартных графиков антигенности и гидрофобности, таких как рассчитанные с использованием, например, программного обеспечения Omiga версии 1.0, доступного от Oxford Molecular Group.В данной компьютерной программе используется способ Hopp/Woods, Норр et al, (1981) Proc. Natl. Acad. Sci USA 78:3824-3828 для определения профилей антигенности, и метод Kyte-Doolittle, Kyte et al, (1982) J. Mol. Biol. 157: 105-132 для построения графиков гидрофобности.

Варианты осуществления

В другом варианте осуществления в данном документе представлен стабильный лиофилизированный фармацевтический состав, при этом состав содержит антитело к CD19 в концентрации, составляющей от приблизительно 20 мг/мл до приблизительно 125 мг/мл, буфер, полисорбат в концентрации, составляющей от приблизительно 0,005% (вес/об.) до приблизительно 0,06% (вес/об.), и с показателем рН, составляющим приблизительно 6,0, где состав дополнительно содержит а) трегалозу в концентрации, составляющей от приблизительно 180 мМ до приблизительно 240 мМ, или

В другом варианте осуществления в данном документе представлен стабильный лиофилизированный фармацевтический состав, при этом состав содержит антитело к CD19 в концентрации, составляющей от приблизительно 20 мг/мл до приблизительно 125 мг/мл, цитратный буфер или фосфатный буфер, полисорбат в концентрации, составляющей от приблизительно 0,005% (вес/об.) до приблизительно 0,06% (вес/об.), и с показателем рН, составляющим приблизительно 6,0, где состав дополнительно содержит а) трегалозу в концентрации, составляющей от приблизительно 180 мМ до приблизительно 240 мМ, или

В некоторых вариантах осуществления концентрация указанного буфера в составе составляет от 10 до 75 мМ. В некоторых вариантах осуществления концентрация указанного буфера в составе составляет от 20 до 50 мМ. В некоторых вариантах осуществления концентрация указанного буфера в составе составляет от 20 до 40 мМ. В некоторых вариантах осуществления концентрация указанного буфера в составе составляет от 20 до 30 мМ. В некоторых вариантах осуществления концентрация указанного буфера в составе составляет приблизительно 25 мМ. В некоторых вариантах осуществления концентрация указанного буфера в составе составляет 25 мМ. В некоторых вариантах осуществления указанный буфер в составе представляет собой цитратный буфер или фосфатный буфер.

В некоторых вариантах осуществления концентрация указанного цитратного буфера в составе составляет от 10 до 75 мМ. В некоторых вариантах осуществления концентрация указанного цитратного буфера в составе составляет от 20 до 50 мМ. В некоторых вариантах осуществления концентрация указанного цитратного буфера в составе составляет от 20 до 30 мМ. В некоторых вариантах осуществления концентрация указанного цитратного буфера в составе составляет приблизительно 25 мМ. В некоторых вариантах осуществления концентрация указанного цитратного буфера в составе составляет 25 мМ.

В некоторых вариантах осуществления концентрация указанного фосфатного буфера в составе составляет от 10 до 75 мМ. В некоторых вариантах осуществления концентрация указанного фосфатного буфера в составе составляет от 20 до 50 мМ. В некоторых вариантах осуществления концентрация указанного фосфатного буфера в составе составляет от 20 до 30 мМ. В некоторых вариантах осуществления концентрация указанного фосфатного буфера в составе составляет приблизительно 25 мМ. В некоторых вариантах осуществления концентрация указанного фосфатного буфера в составе составляет 25 мМ.

В другом варианте осуществления в данном документе представлен стабильный лиофилизированный фармацевтический состав, при этом состав содержит антитело к CD19 в концентрации, составляющей от приблизительно 20 мг/мл до приблизительно 125 мг/мл, цитратный буфер или фосфатный буфер в концентрации, составляющей от 20 до 50 мМ, полисорбат в концентрации, составляющей от приблизительно 0,005% (вес/об.) до приблизительно 0,06% (вес/об.), и с показателем рН, составляющим приблизительно 6,0, где состав дополнительно содержит а) трегалозу в концентрации, составляющей от приблизительно 180 мМ до приблизительно 240 мМ,

или

В другом варианте осуществления в данном документе представлен стабильный лиофилизированный фармацевтический состав, при этом состав содержит антитело к CD19 в концентрации, составляющей от приблизительно 20 мг/мл до приблизительно 125 мг/мл, цитратный буфер или фосфатный буфер в концентрации, составляющей приблизительно 25 мМ, полисорбат в концентрации, составляющей от приблизительно 0,005% (вес/об.) до приблизительно 0,06% (вес/об.), и с показателем рН, составляющим приблизительно 6,0, где состав дополнительно содержит а) трегалозу в концентрации, составляющей от приблизительно 180 мМ до приблизительно 240 мМ,

или

В другом варианте осуществления в данном документе представлен стабильный лиофилизированный фармацевтический состав, при этом состав содержит антитело к CD19 в концентрации, составляющей от приблизительно 20 мг/мл до приблизительно 125 мг/мл, цитратный буфер в концентрации, составляющей приблизительно 25 мМ, полисорбат в концентрации, составляющей от приблизительно 0,005% (вес/об.) до приблизительно 0,06% (вес/об.), и с показателем рН, составляющим приблизительно 6,0, где состав дополнительно содержит а) трегалозу в концентрации, составляющей от приблизительно 180 мМ до приблизительно 240 мМ,

или

В другом варианте осуществления в данном документе представлен стабильный лиофилизированный фармацевтический состав, при этом состав содержит антитело к CD19 в концентрации, составляющей от приблизительно 20 мг/мл до приблизительно 125 мг/мл, фосфатный буфер в концентрации, составляющей приблизительно 25 мМ, полисорбат в концентрации, составляющей от приблизительно 0,005% (вес/об.) до приблизительно 0,06% (вес/об.), и с показателем рН, составляющим приблизительно 6,0, где состав дополнительно содержит а) трегалозу в концентрации, составляющей от приблизительно 180 мМ до приблизительно 240 мМ,

или

В дополнительном варианте осуществления указанное антитело к CD19 представляет собой полноразмерное антитело. В дополнительном варианте осуществления указанное антитело к CD19 представляет собой антитело IgG1, lgG2, lgG3 или lgG4.

В другом варианте осуществления указанное антитело к CD19 представляет собой гуманизированное антитело или антитело человека. В дополнительном варианте осуществления указанное антитело к CD19 представляет собой фрагмент антитела, содержащий антигенсвязывающую область. В дополнительном варианте осуществления указанный фрагмент антитела представляет собой фрагмент Fab или фрагмент F(ab')2.

В другом варианте осуществления указанный стабильный лиофилизированный фармацевтический состав является стабильным при 2-8°С в течение по меньшей мере 6 месяцев, по меньшей мере 12 месяцев, по меньшей мере 18 месяцев, по меньшей мере 24 месяцев или по меньшей мере 36 месяцев.

В другом варианте осуществления указанный стабильный лиофилизированный фармацевтический состав является стабильным при приблизительно 40°С в течение по меньшей мере приблизительно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16 или больше недель. В некоторых вариантах осуществления указанный стабильный лиофилизированный фармацевтический состав является стабильным при приблизительно 40°С в течение по меньшей мере приблизительно 1, 2, 3, 4, 5 или больше месяцев. В некоторых вариантах осуществления указанный стабильный лиофилизированный фармацевтический состав является стабильным при приблизительно 25°С в течение по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 или больше месяцев. В некоторых вариантах осуществления указанный стабильный лиофилизированный фармацевтический состав является стабильным при приблизительно 5°С в течение по меньшей мере 1, 2, 3,4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48 или больше месяцев. В некоторых вариантах осуществления указанный стабильный лиофилизированный фармацевтический состав является стабильным при приблизительно 5+/-3°С в течение по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48 или больше месяцев. В некоторых вариантах осуществления указанный стабильный лиофилизированный фармацевтический состав является стабильным при приблизительно -20°С в течение по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48 или больше месяцев. В некоторых вариантах осуществления указанный стабильный лиофилизированный фармацевтический состав является стабильным при 5°С или -20°С в течение по меньшей 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48 или больше месяцев.

В дополнительном варианте осуществления антитело к CD19 в составе сохраняет по меньшей мере 60%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95% своей биологической активности после хранения. В некотором варианте осуществления биологическую активность измеряют по связыванию антитела с CD19. В некотором варианте осуществления биологическую активность измеряют по связыванию антитела с CD19 в анализе связывания FACS CD19. В некотором варианте осуществления биологическую активность измеряют по активности ADCC указанного антитела к CD19. В некотором варианте осуществления стабильный лиофилизированный фармацевтический состав является стерильным.

В дополнительном варианте осуществления указанный стабильный лиофилизированный фармацевтический состав является подходящим для введения субъекту. В дополнительном варианте осуществления указанный стабильный лиофилизированный фармацевтический состав является подходящим для внутривенного (IV) введения или подкожного введения.

В другом аспекте в данном документе представлено изделие, содержащее контейнер, в котором содержится стабильный лиофилизированный фармацевтический состав, как раскрыто в данном документе. В одном варианте осуществления указанный контейнер представляет собой стеклянную пробирку или контейнер из металлического сплава. В дополнительном варианте осуществления металлический сплав представляет собой нержавеющую сталь 316L или Хастеллой.

В другом аспекте в данном документе представлен способ лечения заболевания или нарушения у субъекта, включающий введение субъекту эффективного количества состава, раскрытого в данном документе, где заболевание или нарушение представляет собой рак. В другом аспекте в данном документе представлено применение стабильного лиофилизированного фармацевтического состава, как раскрыто в данном документе, для лечения заболевания или нарушения у субъекта, включающее введение субъекту эффективного количества указанного состава, где заболевание или нарушения представляет собой рак. В дополнительном аспекте в данном документе представлено применение стабильного лиофилизированного фармацевтического состава, как раскрыто в данном документе, для изготовления лекарственного препарата для лечения заболевания или нарушения у субъекта, включающее введение субъекту эффективного количества указанного состава, где заболевание или нарушение представляет собой рак. В одном варианте осуществления заболевание или нарушение представляет собой неходжкинекую лимфому (в том числе каждый из подтипов, описанных в данном документе), хронический лимфоцитарный лейкоз и/или острый лимфобластный лейкоз. В вариантах осуществления неходжкинская лимфома выбрана из группы, состоящей из фолликулярной лимфомы, мелкоклеточной лимфоцитарной лимфомы, лимфомы лимфоидной ткани слизистых оболочек, лимфомы маргинальной зоны, диффузной крупноклеточной В-клеточной лимфомы, лимфомы Беркитта и лимфомы из клеток мантийной зоны.

или

где указанное антитело к CD19 содержит область HCDR1 с последовательностью SYVMH (SEQ ID NO: 1), область HCDR2 с последовательностью NPYNDG (SEQ ID NO: 2), область HCDR3 с последовательностью GTYYYGTRVFDY (SEQ ID NO: 3), область LCDR1 с последовательностью RSSKSLQNVNGNTYLY (SEQ ID NO: 4), область LCDR2 с последовательностью RMSNLNS (SEQ ID NO: 5) и область LCDR3 с последовательностью MQHLEYPIT (SEQ ID NO: 6).

или

b) маннит в концентрации, составляющей от приблизительно 180 мМ до приблизительно 240 мМ, и сахарозу в концентрации, составляющей от приблизительно 10 мМ до приблизительно 50 мМ, где указанное антитело к CD19 содержит вариабельную область тяжелой цепи с последовательностью

или

b) маннит в концентрации, составляющей от приблизительно 180 мМ до приблизительно 240 мМ, и сахарозу в концентрации, составляющей от приблизительно 10 мМ до приблизительно 50 мМ, где указанное антитело к CD19 содержит константный домен тяжелой цепи с последовательностью

ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPDVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRWSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPEEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 8) и константный домен легкой цепи с последовательностью RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 9).