Фармацевтические композиции и применения против лизосомных болезней накопления

Изобретение относится к применению ацетиллейцина или его фармацевтически приемлемой соли для лечения лизосомной болезни накопления (ЛБН) или одного или нескольких симптомов, связанных с ЛБН, у субъекта, нуждающегося в этом, причем ЛБН не является болезнью Ниманна-Пика типа С. Предпочтительно ЛБН выбирают из болезни накопления гликогена, мукополисахаридоза, муколипидоза, олигосахаридоза, липидоза, сфинголипидоза, лизосомных болезней переноса, недостатка гидролазы первичной лизосомы, дефекта посттрансляционного процессинга лизосомных ферментов, дефекта переноса лизосомных ферментов, дефекта защиты лизосомных ферментов, недостатка растворимых неферментных лизосомных белков, недостатка трансмембранного (неферментного) белка, неклассифицированного дефекта, болезни Тея-Сакса, варианта AB болезни Тея-Сакса, болезни Сандхоффа, болезни Ниманна-Пика типа A, болезни Ниманна-Пика типа B, болезни Фабри, нейронального цероидного липофусциноза, болезни Краббе, болезни Фарбера, болезни Гоше, метахроматической лейкодистрофии, множественной сульфатазной недостаточности, муколипидоза II, муколипидоза III, MPS III, MPS VII, ганглиозидоза GM1 и аспартилглюкозаминурии. 15 з.п. ф-лы, 15 табл., 10 ил., 7 пр.

 

Область техники, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение относится к лечению лизосомных болезней накопления (ЛБН), включающему введение ацетиллейцина или его фармацевтически приемлемой соли.

Уровень техники

Лизосомные болезни накопления (ЛБН (LSD)) представляют собой группу наследственных метаболических заболеваний, вызванных нарушениями в гомеостазе из-за лизосом. В настоящее время ЛБН включают более 70 заболеваний с общей клинической частотой 1:50000 живорожденных. Эти заболевания можно классифицировать на две основные группы: первичные болезни накопления, являющиеся результатом прямой недостаточности в каскадах деградации (типично болезни из-за недостаточности ферментов лизосом), и вторичные болезни накопления, которые вызываются последующими лизосомными белками с нарушенными функциями или процессами, которые влияют на лизосому (например, дефекты в путях обмена (trafficking pathways)).

Патология ЛБН влияет на многие системы организма, но более всего на нервную систему. Прогрессирующая нейродегенерация, приводящая к инвалидности, и умственная деградация являются обычными симптомами. Такие болезни, как правило, тяжело развиваются и не прекращаются. Они склонны появляться в первые несколько лет жизни, и тяжелое развитие приводит к частой госпитализации. Если не лечить, пациенты часто умирают в возрасте 13-19 лет. Также описаны пациенты, заболевшие взрослыми.

В настоящее время терапевтические подходы к ЛБН ограничены. Существует несколько куративных лечений, если существует, и многие из терапевтических опций только улучшают качество жизни. Например, некоторые ЛБН отвечают на трансплантацию головного мозга или заместительную ферментную терапию. Кроме того, сообщается о некотором благоприятном действии при клиническом испытании субстрат-редуцирующей терапии (SRT) с использованием ингибитора биосинтеза гликосфинголипида (GSL) иминосахаридного лекарственного средства миглустата (Patterson, 2006). Однако на сегодняшний день отсутствует общее неспецифическое лечение, которое благоприятно при всех ЛБН. Поэтому существует потребность в разработке улучшенных способов лечения ЛБН.

Раскрытие изобретения

Настоящее раскрытие направлено на такую потребность и описывает ацетиллейцин для лечения ЛБН или одного или нескольких симптомов ЛБН у субъекта, нуждающегося в этом.

В одном воплощении раскрывается ацетиллейцин или его фармацевтически приемлемая соль для применения в способе лечения ЛБН или одного или нескольких симптомов, связанных с ЛБН, у субъекта, нуждающегося в этом, причем ЛБН не является болезнью Ниманна-Пика типа С.

В одном воплощении настоящего раскрытия ацетиллейцин или его фармацевтически приемлемая соль раскрываются для применения в способе лечения ЛБН у субъекта, нуждающегося в этом, причем субъект является бессимптомным субъектом.

В другом воплощении раскрывается ацетиллейцин или его фармацевтически приемлемая соль для применения в способе задержки появления ЛБН или одного или нескольких симптомов, которые, как можно ожидать в ином случае, проявятся в соответствии с типичным развитием болезни.

В другом воплощении настоящее раскрытие относится к ацетиллейцину или его фармацевтически приемлемой соли для применения в способе лечения ЛБН или одного или нескольких симптомов, связанных с ЛБН, у субъекта, нуждающегося в этом, причем способ включает введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества ацетиллейцина или его фармацевтически приемлемой соли в течение периода, выбранного из по меньшей мере примерно 3 месяцев, по меньшей мере примерно 6 месяцев, по меньшей мере примерно 1 года, по меньшей мере примерно 2 лет и по меньшей мере примерно 5 лет.

В одном воплощении настоящее раскрытие относится к ацетиллейцину или его фармацевтически приемлемой соли для применения в способе задержки развития со временем ЛБН или одного или нескольких симптомов, связанных с ЛБН, по сравнению с типичным развитием болезни, причем способ включает введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества ацетиллейцина или его фармацевтически приемлемой соли в течение периода, выбранного из по меньшей мере примерно 3 месяцев, по меньшей мере примерно 6 месяцев, по меньшей мере примерно 1 года, по меньшей мере примерно 2 лет и по меньшей мере примерно 5 лет.

В другом воплощении раскрывается ацетиллейцин или его фармацевтически приемлемая соль для применения в способе реверсирования развития со временем ЛБН или одного или нескольких симптомов, связанных с ЛБН, причем способ включает введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества ацетиллейцина или его фармацевтически приемлемой соли в течение периода, выбранного из по меньшей мере примерно 3 месяцев, по меньшей мере примерно 6 месяцев, по меньшей мере примерно 1 года, по меньшей мере примерно 2 лет и по меньшей мере примерно 5 лет.

В другом воплощении раскрывается ацетиллейцин или его фармацевтически приемлемая соль для применения в способе улучшения со временем у субъекта, нуждающегося в этом, биохимического маркера ЛБН, причем способ включает введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества ацетиллейцина или его фармацевтически приемлемой соли в течение периода, выбранного из по меньшей мере примерно 3 месяцев, по меньшей мере примерно 6 месяцев, по меньшей мере примерно 1 года, по меньшей мере примерно 2 лет и по меньшей мере примерно 5 лет.

В другом воплощении настоящее раскрытие относится к ацетиллейцину или его фармацевтически приемлемой соли для применения в способе уменьшения тяжести ЛБН или уменьшения тяжести или устранения одного или нескольких симптомов, связанных с ЛБН, у субъекта, нуждающегося в этом, причем ЛБН не является болезнью Ниманна-Пика типа С.

В другом воплощении настоящее раскрытие относится к ацетиллейцину или его фармацевтически приемлемой соли для применения в способе обеспечения нейрозащиты у субъекта, имеющего, с подозрением на наличие или в опасности появления ЛБН, причем способ включает введение субъекту терапевтически эффективного количества ацетиллейцина или его фармацевтически приемлемой соли в течение периода, выбранного из по меньшей мере примерно 3 месяцев, по меньшей мере примерно 6 месяцев, по меньшей мере примерно 1 года, по меньшей мере примерно 2 лет и по меньшей мере примерно 5 лет.

Другие воплощения настоящего раскрытия относятся к ацетиллейцину или его фармацевтически приемлемой соли для применения в способе задержки развития лизосомной болезни накопления (ЛБН) у субъекта, ацетиллейцину или его фармацевтически приемлемой соли для применения в способе обеспечения нейрозащиты у субъекта, имеющего ЛБН. Ацетиллейцин находится в форме рацемата, в энантиомерном избытке L-энантиомера или энантиомерном избытке D-энантиомера. Способы также включают введение ацетиллейцина в дозе от 1,5 г до 10 г в день. Кроме того, способы включают введение ацетиллейцина для лечения в течение периода в две недели или более. Способы также могут включать введение ацетиллейцина или его фармацевтически приемлемой соли до появления симптома ЛБН. Способы также могут включать назначение другой терапии или введение другого средства, предназначенного для предупреждения или лечения ЛБН. Другим воплощением настоящего раскрытия является набор для задержки развития ЛБН у субъекта, причем набор включает средства для диагностики или прогнозирования ЛБН и ацетиллейцин или его фармацевтически приемлемую соль. Набор включает средства для диагностики или прогнозирования ЛБН, и ацетиллейцин или его фармацевтически приемлемую соль. Еще одним воплощением настоящего раскрытия является применение ацетиллейцина или его фармацевтически приемлемой соли в качестве нейропротектора для субъекта, имеющего ЛБН. В другом воплощении способа, набора или применения ЛБН представляет собой болезнь Ниманна-Пика типа С (дефект NPC₁ и/или NPC₂), синдром Смита-Лемли-Опица (SLOS), врожденное нарушение синтеза холестерина, болезнь Танжера, болезнь Пелицеуса-Мерцбахера, нейрональный цероидный липофусциноз, первичный гликосфинголипидоз, болезнь Фарбера или множественную сульфатазную недостаточность. Кроме того, в другом воплощении способа, набора или применения первичный гликосфинголипидоз представляет собой болезнь Гоше, болезнь Фабри, ганглиозидоз GM₁, ганглиозидоз GM₂, болезнь Краббе или метахроматическую лейкодистрофию (MLD). В другом воплощении способа, набора или применения ЛБН представляет собой NPC, болезнь Тея-Сакса, болезнь Сандхоффа, ганглиозидоз GM₁, болезнь Фабри, нейродегенеративный мукополисахаридоз, MPS I, MPS IH, MPS IS, MPS II, MPS III, MPS IIIA, MPS IIIB, MPS IIIC, MPS HID, MPS, IV, MPS IV A, MPS IV B, MPS VI, MPS VII, MPS IX, болезнь с вторичным лизосомным поражением, SLOS или болезнь Танжера. В другом воплощении способа, набора или применения ЛБН представляет собой болезнь Ниманна-Пика, болезнь Ниманна-Пика типа С, болезнь Ниманна-Пика типа А, болезнь Сандхоффа, болезнь Тея-Сакса или муколипидоз типа II.

Эти и другие воплощения и особенности настоящего раскрытия будут очевидны из следующего далее описания и формулы изобретения.

Краткое описание чертежей

Фигура 1 показывает фотографии обработанных (фигура А) и необработанных (фигура В) Npc1^−/− мышей в возрасте девяти недель.

Фигуры 2А и 2В показывают данные о массе для Npc1^−/− мышей в сравнении с мышами дикого типа (Npc1^+/+) с обработкой ацетил-DL-лейцином и без из числа отлученных от матерей.

Фигуры 3А-3G показывают данные анализа походки для Npc1^−/− мышей в сравнении с мышами дикого типа (Npc1^+/+) с обработкой ацетил-DL-лейцином и без из числа отлученных от матерей. Например, данные по поддержке диагонали, ритму и последовательности шагов приводятся на фигурах 3А-3С соответственно. Фигуры 3D и 3Е показывают данные для передних лап (FP) (средняя стойка и шаговый цикл на панели D; рабочий цикл на панели Е). Фигуры 3F и 3G показывают данные для задних лап (НP) (средняя стойка и шаговый цикл на панели F; рабочий цикл на панели G).

Фигуры 4А-4Н показывают данные анализа двигательной функции Npc1^−/− мышей в сравнении с мышами дикого типа (Npc1^+/+) с обработкой ацетил-DL-лейцином и без из числа отлученных от матерей. Сосредоточное вставание (centre rearing), активность вставания и число вперед-назад (FR) показаны на фигурах 4A-4D, соответственно. Активное время, время движения, время вставания и общее число вставаний, подсчитанное вручную, показаны на фигурах 4Е-4Н, соответственно.

Фигура 5 показывает, что обработка ацетил-DL-лейцином (0,1 г/кг от возраста 3 недели) ассоциируется с небольшим, но статистически значимым увеличением продолжительности жизни Npc1^−/− мыши.

Фигуры 6А и 6В показывают уменьшение объема лизосом в ненейрональных NPC клетках после обработки ацетил-DL-лейцином. Фигуры 6С-6Н показывают влияние обработки ацетил-DL-лейцином на объем лизосом в фибробластах пациента с NPA, MLII, MPS IIIB, аспартилглюкозаминурией, MLIIIA и MPS VII, соответственно.

Фигура 7А показывает кривую выживания, представляющую смертность у необработанных ацетиллейцином мышей дикого типа и с болезнью Сандхоффа. Фигура 7В показывает время шагового цикла для необработанных и обработанных ацетиллейцином мышей моделей болезни Сандхоффа, оцененных в возрасте 12 недель.

Фигуры 8А-8С показывают влияние обработки ацетил-DL-лейцином на уровни гликосфинголипида (GSL) в фибробластах пациента с ганглиозидозом GM₂ (болезнь Тея-Сакса, болезнь Сандхоффа и АВ вариант болезни Тея-Сакса, соответственно).

Фигуры 9А и 9В показывают влияние обработки ацетил-DL-лейцином на общую клиническую оценку тяжести (CSS) и общую клиническую оценку увеличения тяжести за год (ASIS), соответственно, у десяти пациентов с NPC.

Фигуры 10А-10J показывают влияние обработки ацетил-DL-лейцином на субоценки CSS для каждого из десяти пациентов с NPC.

Осуществление изобретения

Ацетиллейцин в рацемической форме (ацетил-DL-лейцин) и соответствующие соли эффективны при лечении головокружения различного происхождения, особенно головокружения Меньера и головокружения воспалительного (вестибулярный неврит) или токсического происхождения. Например, ацетиллейцин продается Pierre Fabre Medicament в рацемической форме как лекарство против головокружения под торговым названием танганил®. Клинические результаты по танганилу®, сообщенные различными авторами, показывают улучшение в симптомологии головокружения в более 95% случаев, включая исчезновение приступов головокружения.

Ацетил-DL-лейцин применяется во Франции для лечения острого головокружения с 1957 и имеет превосходный профиль безопасности, но его длительная безопасность при хроническом применении не определялась. Несмотря на многие гипотезы, включая стабилизацию мембранного потенциала, его фармакологические и электрофизиологические типы действия остаются неясными (Vibert et al. (2001), Eur. J. Neurosci., 13(4): 735-48; Ferber-Viart et al. (2009), Audiol. Neurootol., 14(1): 17-25). Исследование FDG-µPET на крысиной модели срочной односторонней лабиринэктомии (Zwergal et al. (2016), Brain Struct. Func., 221(1): 159-70) показало существенное действие L-энантиомера N-ацетил-L-лейцина на постуральную компенсацию путем активации вестибулярного мозжечка и дезактивации постеролатерального таламуса (Gunther et al. (2015), PLoS One; 10(3): e0120891). Симтоматическое улучшение при мозжечковой атаксии при использовании ацетил-DL-лецина видно у ряда пациентов с болезнями мозжечка (Strupp et al. (2013), J. Neurol., 260(10): 2556-61). В другом случае улучшение не наблюдалось (Pelz et al. (2015), J. Neurol., 262(5): 1373-5). Качественный анализ походки показал, что ацетил-DL-лейцин улучшает преходящую изменчивость походки у пациентов с мозжечковой атаксией (Schniepp et al. (2015), Cerebellum, 3:8). Показано симптоматическое улучшение атаксии в одномесячном исследовании с участием 12 пациентов с болезнью Ниманна-Пика типа С (NPC) (Bremova et al. (2015), Neurology, 85(16): 1368-75). Кроме того, исследование методом PET пациентов с атаксией, получавших ацетил-DL-лейцин, показало у них усиленный метаболизм в среднем мозгу и пониженный в мозговом стволе (Becker-Bense et al. (2015), Abstract EAN).

Однако неизвестно, что ацетиллейцин лечит ЛБН, которая развивается на протяжении десятилетий. Настоящее раскрытие неожиданно показывает, что ацетиллейцин или его фармацевтически приемлемую соль можно применять в способе лечения ЛБН у субъекта, нуждающегося в этом, например, путем задержки появления ЛБН или одного или нескольких симптомов ЛБН, которые в ином случае, как ожидается, могут проявиться согласно типичному развитию болезни, и/или путем задержки или реверсии развития ЛБН или одного или нескольких симптомов ЛБН на длительный период по сравнению с типичным развитием болезни. Эти примеры применения согласно настоящему раскрытию, а также другие, описанные в настоящем описании, стали неожиданными, так как на известном уровне техники благоприятное действие не наблюдали и не могли делать выводы. ЛБН являются одной из гетерогенных групп наследственных заболеваний, обычно характеризующихся накоплением непереваренных или частично переваренных макромолекул, приводящих к клеточной дисфункции (например, возросшему объему лизосом по сравнению со здоровыми субъектами), и клиническим анормальностям. Как явствует из примеров, но без связи с какой-либо определенной теорией, авторы настоящего изобретения обнаружили, среди прочего, что у субъектов, пораженных ЛБН, ацетиллейцин может снижать клеточную дисфункцию (например, уменьшая объем лизосом до контрольных величин) и клинические анормальности.

Следовательно настоящее раскрытие относится к ацетиллейцину или его фармацевтически приемлемой соли для применения в способе лечения ЛБН или одного или нескольких симптомов ЛБН у субъекта, нуждающегося в этом.

Аббревиатура «ЛБН», используемая в настоящем описании, относится к любому расстройству, которое включает дисфункцию или нарушение в системе поздние эндосомы/лизососмы и накопление непереваренных или частично переваренных макромолекул. ЛБН может включать повышенное накопление липидов или нелипидов.

«Субъект» при использовании в настоящем описании может представлять собой позвоночное, млекопитающее или домашнее животное. Следовательно, композиции по настоящему раскрытию можно использовать для лечения любого млекопитающего, например, домашнего скота (например, лошадей, коров, овец или свиней), домашних животных (например, кошек, собак, кроликов или морских свинок), лабораторных животных (например, мышей или крыс), или можно использовать в других ветеринарных применениях. Например, субъектом является человек.

Используемые в настоящем описании формы единственного числа включают ссылку и на множественное число.

Термины «приблизительно» и «примерно» обозначают почти одинаковое с приведенным числом или величиной, включая приемлемую степень ошибки для измеренного количества, заданную характером или точностью измерений. Используемые в настоящем описании термины «приблизительно» и «примерно» вообще должны пониматься как охватывающие ±20% конкретного количества, частоты или величины. Численные количества, приведенные в настоящем описании, являются приблизительными, если не указано иное, что означает, что термин «примерно» или «приблизительно» может предполагаться, когда количество не установлено точно.

Термины «вводить», «введение» или «вводимый» при использовании в настоящем описании относятся к (1) обеспечению, подаче, дозированию и/или выписыванию медицинским работником или его уполномоченным представителем или под его руководством композиции согласно раскрытию, и (2) прием внутрь, получение или потребление пациентом или самим человеком композиции согласно раскрытию.

Ссылки на «ацетиллейцин» во всем описании включают его фармацевтически приемлемые соли, если не установлено точно.

Ацетиллейцин может находиться в рацемической форме, что означает, что соединение включает примерно равные количества энантиомеров. С другой стороны, он может присутствовать в энантиомерном избытке или L-энантиомера или D-энантиомера. Ацетиллейцин может находиться в одной энантиомерной форме - или L-энантиомера или D-энантиомера. В одном воплощении одной энантиомерной формой является L-энантиомер. Рацемическую и энантиомерные формы можно получить согласно процедурам, известным в технике.

«Фармацевтически приемлемая соль» в связи с настоящим описанием представляет собой любую соль, которая подходит для использования в фармацевтическом применении. Фармацевтически приемлемые соли включают, но без ограничения, соли аминов, таких как N,N'-дибензилэтилендиамин, хлорпрокаин, холин, аммиак, диэтаноламин и другие гидроксиалкиламины, этилендиамин, N-метилглюкамин, прокаин, N-бензилфенетил, 1-пара-хлорбензил-2-пирролидин-1'-илметилбензимидазол, диэтиламин и другие алкиламины, пиперазин, трис(гидроксиметил) аминометан и т.п.; соли щелочных металлов, таких как литий, калий, натрий и т.п.; соли щелочноземельных металлов, таких как барий, кальций, магний и т.п.; соли переходных металлов, таких как цинк, алюминий и т.п.; другие соли металлов, такие как гидрофосфат натрия, динатрийфрсфат и т.п.; соли неорганических кислот, такие как гидрохлориды, сульфаты и т.п.; и соли органических кислот, такие как ацетаты, лактаты, малаты, тартраты, цитраты, аскорбаты, сукцинаты, бутираты, валераты, фумараты и т.п..

Ацетиллейцин или его фармацевтически приемлемая соль могут быть включены в композиции и введены субъекту согласно указаниям, известным в технике. Например, ацетиллейцин или его фармацевтически приемлемая соль могут быть включены в фармацевтическую композицию. Фармацевтическая композиция может включать ацетиллейцин или его фармацевтически приемлемую соль и фармацевтически приемлемый носитель. Название «фармацевтическая композиция» заключает в себе один активный агент или форму фармацевтической композиции.

Фармацевтическая композиция может принимать любую форму из ряда различных форм в зависимости, в частности, от способа ее использования. Так, например, она может находиться в форме порошка, таблетки, капсулы, жидкости, мази, крема, геля, гидрогеля, аэрозоля, спрея, мицеллярного раствора, трансдермального пэтча, липосомной суспензии или любой другой подходящей форме, которую можно ввести человеку или животному, нуждающемуся в лечении.

«Фармацевтически приемлемый носитель», упоминаемый в настоящем описании, представляет собой любое известное соединение или комбинацию известных соединений, которые известны специалистам в данной области техники как применимые при составлении фармацевтических композиций. Следует иметь в виду, что носитель в фармацевтической композиции должен являться носителем, который переносится субъектом, который его получает.

В одном воплощении фармацевтически приемлемый носитель может представлять собой твердое вещество, и композиция может находиться в форме порошка или таблетки. Указанный фармацевтически приемлемый носитель может включать, но без ограничения, одно или несколько веществ, которые также могут действовать как корригенты, буферы, лубриканты, стабилизаторы, солюбилизаторы, суспендирующие агенты, смачиватели, эмульгаторы, красители, наполнители, глиданты, вспомогательные вещества при прессовании, инертные связующие, подсластители, консерванты, покрытия или агенты, способствующие распадаемости таблетки. Носитель также может представлять собой инкапсулирующий материал. В порошках носитель может представлять собой тонко измельченное твердое вещество, которое находится в смеси с тонко измельченными активными агентами, соответствующими изобретению. В таблетках активный агент может быть в подходящих пропорциях смешан с носителем, имеющим необходимые компрессионные свойства, и спрессован в желательной форме и нужного размера. Порошки и таблетки могут, например, содержать до 99% активных агентов. Подходящие твердые носители включают, например, фосфат кальция, стеарат магния, тальк, сахара, лактозу, декстрин, крахмал, желатин, целлюлозу, поливинилпирролидон, низкоплавкие воски и ионообменные смолы. В другом воплощении фармацевтически приемлемый носитель может представлять собой гель, и композиция может находиться в форме крема или подобной форме.

Носитель может включать, но без ограничения, один или несколько эксципиентов или разбавителей. Примерами таких эксципиентов являются желатин, аравийская камедь, лактоза, микрокристаллическая целлюлоза, крахмал, натрия крахмал гликолят, гидрофосфат кальция, стеарат магния, тальк, коллоидальный диоксид кремния и т.п..

В другом воплощении фармацевтически приемлемый носитель может представлять собой жидкость. В одном воплощении фармацевтическая композиция находится в форме раствора. Жидкие носители используют при получении растворов, суспензий, эмульсий, сиропов, эликсиров и композиций под давлением. Ацетиллейцин может быть растворен или суспендирован в фармацевтически приемлемом жидком носителе, таком как вода, органический растворитель, смесь двух или больше фармацевтически приемлемых масел или жиров. Жидкий носитель может содержать другие подходящие фармацевтические добавки, такие как солюбилизаторы, эмульгаторы, буферы, консерванты, подсластители, корригенты, суспендирующие агенты, загустители, красители, регуляторы вязкости, стабилизаторы или осморегуляторы. Подходящие примеры жидких носителей для перорального и парентерального введения включают воду (частично содержащую добавки, указанные выше, например, производные целлюлозы, например, раствор натрия карбоксиметилцеллюлозы), спирты (включая одноатомные спирты и многоатомные спирты, например, гликоли) и их производные и масла (например, фракционированное кокосовое масло и арахисовое масло). Для парентерального введения носитель также может представлять собой эфир любой жирной кислоты, такой как этилолеат и изопропилмиристат. В стерильных композициях в жидкой форме для парентерального введения применяют стерильные жидкие носители. Жидкий носитель для композиций под давлением может представлять собой галогенированный углеводород или другой фармацевтически приемлемый пропеллент.

Жидкие фармацевтические композиции, которые представляют собой растворы или суспензии, могут использоваться путем, например, внутримышечной, интратекальной, эпидуральной, интраперитонеальной, внутривенной и особенно подкожной инъекции. Активный агент можно получить в виде стерильной твердой композиции, которую можно растворить или суспендировать во время введения, используя стерильную воду, физиологический раствор или другую соответствующую стерильную среду для инъекции.

Композиции можно вводить перорально в форме стерильного раствора или суспензии, содержащей другие растворенные вещества или суспендирующие агенты (например, достаточно соли или глюкозы для придания раствору изотоничности), соли желчных кислот, аравийскую камедь, желатин, моноолеат сорбитана, полисорбат 80 (олеаты сорбитола и его ангидриды, сополимеризованные с этиленоксидом) и т.п.. Композиции также можно вводить перорально в форме или жидкой или твердой композиции. Композиции, подходящие для перорального введения, включают твердые формы, такие как пилюли, капсулы, гранулы, таблетки и порошки, и жидкие формы, такие как растворы, сиропы, эликсиры и суспензии. Формы, применимые для парентерального введения, включают стерильные растворы, эмульсии и суспензии.

С другой стороны, ацетиллейцин и включающие его композиции можно вводить ингаляцией (например, интраназально). Также можно получить композиции для топического применения. Например, кремы и мази можно наносить на кожу.

Ацетиллейцин можно включить в устройство с замедленным или отсроченным высвобождением. Такие устройства можно, например, встроить на или под кожу, и лекарственное средство может высвобождаться в течение недель или даже месяцев. Такие устройства могут быть выгодны, когда требуется применение длительного лечения ацетиллейцином согласно настоящему раскрытию, и которое обычно требует частого введения (например, по меньшей мере ежедневного введения).

В одном воплощении фармацевтическая композиция находится в форме таблетки. В таблетках активный агент может быть смешан в подходящих пропорциях со средой, такой как фармацевтически приемлемый носитель, имеющий необходимые компрессионные свойства, и спрессован в нужную форму и размер. Таблетки могут содержать до 99 мас.% активных агентов.

Например, ацетиллейцин или его фармацевтически приемлемую соль можно предоставить в твердой лекарственной форме, подходящей для перорального введения особенно в форме таблетки.

Фармацевтические композиции в твердой пероральной лекарственной форме, такой как таблетки, можно получить любым способом, известным в фармации. Фармацевтические композиции обычно получают путем смешивания ацетиллейцина или его фармацевтически приемлемой соли с обычными фармацевтически приемлемыми носителями.

Таблетка может быть получена так, как известно в технике. «Танганил®», например, включает пшеничный крахмал, прежелатинизированный маисовый (кукурузный) крахмал, карбонат кальция и стеарат магния в качестве эксципиентов. Такие же или подобные эксципиенты, например, можно использовать в настоящем раскрытии.

Композиция каждой 700-мг таблетки танганила® следующая: 500 мг ацетил-DL-лейцина, 88 мг пшеничного крахмала, 88 мг прежелатинизированного маисового (кукурузного) крахмала, 13 мг карбоната кальция и 11 мг стеарата магния. Такие же таблетки, например, можно использовать в настоящем раскрытии.

В настоящем раскрытии описывается ацетиллейцин, включающие его композиции и способы для лечения ЛБН или одного или нескольких симптомов ЛБН у субъекта, нуждающегося в этом. Субъект, нуждающийся в этом, может иметь генетический, биохимический или другой подобный идентифицируемый маркер ЛБН. Например, маркером ЛБН может быть клеточный маркер. Субъект, нуждающийся в этом, может быть диагностирован как имеющий ЛБН. Например, субъект может иметь диагноз ЛБН в соответствии с генетическим, биохимическим или другим подобным идентифицируемым маркером. У субъекта, нуждающегося в этом, может подозреваться наличие ЛБН или опасность ее наличия. Например, субъект может иметь генетическую предрасположенность к ЛБН (например, у субъекта может быть один или несколько членов семьи с ЛБН). Субъект, нуждающийся в этом, может быть симптоматическим (т.е. иметь один или несколько симптомов, связанных с ЛБН). Субъект, нуждающийся в этом, может быть бессимптомным. Следует иметь в виду, что термины «симптоматический» и «бессимптомный» используются в связи с симптомами ЛБН. Субъекты, имеющие генетический, биохимический или другой подобный идентифицируемый маркер ЛБН, такие как субъекты, которым поставлен диагноз ЛБН на основании генетического, биохимического или другого подобного идентифицируемого маркера, но у которых нет других симптомов болезни, для целей настоящего раскрытия включаются в группу «бессимптомных».

При использовании в настоящем описании выражение «лечение ЛБН или одного или нескольких симптомов ЛБН» и подобные относятся к задержке появления ЛБН или одного или нескольких симптомов ЛБН, которые в ином случае, как ожидается, проявятся согласно типичному развитию заболевания, снижению тяжести или устранению одного или нескольких имеющихся симптомов, связанных с ЛБН, задержке развития ЛБН или одного или нескольких симптомов ЛБН со временем по сравнению с типичным развитием заболевания, и/или реверсии развития ЛБН или одного или нескольких симптомов ЛБН со временем. «Лечение ЛБН или одного или нескольких симптомов ЛБН» также может относиться к биохимическому маркеру ЛБН.

При использовании в настоящем описании выражения «типичное развитие заболевания», «развитие заболевания, которое обычно можно ожидать» и подобные относятся к типичному или ожидаемому развитию ЛБН или одного или нескольких симптомов, связанных с ЛБН, или биохимического маркера ЛБН, если субъекта не лечат. Типичное или ожидаемое развитие заболевания может быть основано, например, на шкале, индексе, рейтинге или оценке или другого подходящего теста для оценки развития ЛБН, одного или нескольких симптомов, связанных с ЛБН, или биохимического маркера ЛБН, таких, как описанные в настоящем описании. Шкала, индекс, рейтинг, оценка или другой подходящий тест могут соответствовать развитию ЛБН в целом или развитию одного или нескольких симптомов, связанных с ЛБН. Например, типичное или ожидаемое развитие заболевания можно оценить на основе типичного или ожидаемого начала или тяжести ЛБН или симптома или набора симптомов, связанных с ЛБН. Типичное или ожидаемое развитие заболевания можно определить на основании сравнения субъектов или на основании того, что типично наблюдают или ощущают большое число субъектов, пораженных ЛБН, такое как популяция или субпопуляция субъектов. Субпопуляции могут включать, например, группы населения одного пола, одного или схожего возраста, одного и того же или схожего времени появления одного или нескольких симптомов и т.д..

В одном воплощении «лечение ЛБН или одного или нескольких симптомов ЛБН» относится к задержке появления ЛБН или одного или нескольких симптомов ЛБН, которые в ином случае, как ожидается, могут проявляться согласно типичному развитию заболевания. При использовании в настоящем описании выражение «задержка появления ЛБН или одного или нескольких симптомов ЛБН» и подобные относятся к увеличению времени до или предотвращению появления ЛБН или одного или нескольких симптомов ЛБН. Например, можно сказать, что появление задержано, когда время до проявления ЛБН или одного или нескольких симптомов ЛБН становится по меньшей мере на 5% более длительным, чем время, наблюдаемое согласно типичному развитию заболевания. Также для примера, наблюдают возрастание времени по меньшей мере на 10%, по меньшей мере на 15%, по меньшей мере на 20%, по меньшей мере на 25%, по меньшей мере на 30%, по меньшей мере на 40%, по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 90% или по меньшей мере на 100%. В одном воплощении субъект является бессимптомным. Введение ацетиллейцина на момент, когда субъект является бессимптомным, может вызвать задержку появления ЛБН или одного или нескольких симптомов ЛБН, которые в ином случае, как ожидается, могут проявиться согласно типичному развитию заболевания. В другом воплощении субъект является симптоматическим. Введение ацетиллейцина можно начинать во время, когда субъект имеет несколько симптомов, для того, чтобы задержать появление одного или нескольких дополнительных симптомов ЛБН, которые в ином случае, как ожидается, могут проявиться согласно типичному развитию заболевания. Субъект, нуждающийся в этом, может продолжать получать лечение ацетиллейцином согласно длительностям лечения, описанным в настоящем описании. В одном воплощении лечение предотвращает появление одного или нескольких симптомов ЛБН, которые в ином случае, как ожидается, могут проявиться согласно типичному развитию заболевания.

В одном воплощении «лечение ЛБН или одного или нескольких симптомов ЛБН» относится к снижению тяжести ЛБН или снижению тяжести или устранению одного или нескольких симптомов, связанных с ЛБН. Тяжесть ЛБН или существующего(их) симптома(ов) можно оценить с использованием известных шкалы, индекса, рейтинга или оценки, таких как в примерах, описанных в настоящем описании ниже, или другого теста, подходящего для оценки тяжести. Например, шкала, индекс, рейтинг, оценка или другой подходящий тест могут соответствовать тяжести ЛБН в целом или тяжести одного или нескольких симптомов, связанных с ЛБН. В одном воплощении лечение улучшает такую оценку от величины или степени, характерной для симптоматического пациента, до величины или степени, характерной для бессимптомного пациента.

В одном воплощении «лечение ЛБН или одного или нескольких симптомов ЛБН» относится к задержке развития со временем ЛБН или одного или нескольких симптомов, связанных с ЛБН, по сравнению с типичным развитием заболевания или реверсии развития со временем ЛБН или одного или нескольких симптомов, связанных с ЛБН. Время, в течение которого лечение задерживает или реверсирует развитие заболевания, может соответствовать длительности лечения, описанной в настоящем описании. Лечение может задержать или реверсировать развитие на протяжении, например, примерно семи дней или дольше, примерно двух недель или дольше, примерно трех недель или дольше, примерно 1 месяца или дольше, примерно шести недель или дольше, примерно семи недель или дольше или примерно двух месяцев или дольше. Например, лечение может задержать или реверсировать развитие на протяжении примерно трех месяцев или дольше, примерно четырех месяцев или дольше, примерно пяти месяцев или дольше или примерно шести месяцев или дольше. Кроме того, например, оно задерживает или реверсирует развитие на протяжении примерно 1 года или дольше, примерно 2 лет или дольше, примерно 3 лет или дольше, примерно 4 лет или дольше, примерно 5 лет или дольше или 10 лет или дольше. Лечение может задержать или реверсировать развитие ЛБН или одного или нескольких симптомов, связанных с ЛБН, на протяжении всей жизни пациента.

В одном воплощении «лечение ЛБН или одного или нескольких симптомов ЛБН» относится к задержке развития со временем ЛБН или одного или нескольких симптомов ЛБН по сравнению с типичным развитием заболевания. Используемое в настоящем описании выражение «задержка развития со временем ЛБН или одного или нескольких симптомов, связанных с ЛБН» и подобные относятся к замедлению и/или прекращению развития ЛБН или одного или нескольких симптомов ЛБН (например, замедлению и/или прекращению усугубления или усиления тяжести ЛБН или одного или нескольких симптомов ЛБН) во временем. Развитие заболевания можно определить, например, с использованием известных шкалы, индекса, рейтинга или оценки, таких как в примерах, описанных в настоящем описании ниже, или другого теста, подходящего для оценки тяжести. Например, шкала, индекс, рейтинг, оценка или другой подходящий тест могут соответствовать развитию ЛБН в целом или развитию одного или нескольких симптомов, связанных с ЛБН. В одном воплощении «задержка развития со временем ЛБН или одного или нескольких симптомов, связанных с ЛБН» означает, что оценка тяжести заболевания у субъекта (например, общей тяжести или тяжести одного или нескольких симптомов), определенная по известной шкале, индексу, рейтингу, оценке и т.д. или другому подходящему тесту для оценки тяжести, возросла несущественно (например, по меньшей мере остается по существу постоянной). В одном воплощении «задержка развития со временем ЛБН или одного или нескольких симптомов ЛБН» означает предотвращение достижения субъектом или возрастание времени для достижения субъектом (например, снижение скорости изменения возрастания тяжести) оценки тяжести по известной шкале, индексу, рейтингу, оценке и т.д. или другому подходящему тесту для оценки развития по сравнению с оценкой, соответствующей типичному развитию заболевания. Например, можно сказать, что развитие задерживается, когда время до достижения оценки тяжести становится по меньшей мере на 5% более длительным, чем время, наблюдаемое согласно типичному развитию заболевания. Также для примера, наблюдают возрастание времени по меньшей мере на 10%, по меньшей мере на 15%, по меньшей мере на 20%, по меньшей мере на 25%, по меньшей мере на 30%, по меньшей мере на 40%, по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 90% или по меньшей мере на 100%. Время, в течение которого лечение задерживает развитие ЛБН или одного или нескольких симптомов ЛБН, может соответствовать длительности лечения, описанной в настоящем описании. В одном воплощении лечение задерживает развитие в течение по меньшей мере примерно трех месяцев, по меньшей мере примерно четырех месяцев, по меньшей мере примерно пяти месяцев или по меньшей мере примерно шести месяцев. В другом воплощении лечение задерживает развитие в течение по меньшей мере примерно 1 года, по меньшей мере примерно 2 лет, по меньшей мере примерно 3 лет, по меньшей мере примерно 4 лет, по меньшей мере примерно 5 лет или по меньшей мере 10 лет. Лечение может задерживать развитие на протяжении всей жизни пациента.

В одном воплощении «лечение ЛБН или одного или нескольких симптомов ЛБН» относится к реверсии развития ЛБН или одного или нескольких симптомов ЛБН со временем. Используемое в настоящем описании выражение «реверсия развития ЛБН или одного или нескольких симптомов ЛБН со временем» и подобные относятся к прекращению развития и снижению тяжести ЛБН или одного или нескольких симптомов ЛБН со временем. Развитие и тяжесть заболевания можно определить, например, с использованием известных шкалы, индекса, рейтинга или оценки, таких как в примерах, описанных в настоящем описании, или другого теста, подходящего для оценки развития и тяжести. Например, шкала, индекс, рейтинг, оценка или другой подходящий тест могут соответствовать развитию и тяжести ЛБН в целом или развитию и тяжести одного или нескольких симптомов, связанных с ЛБН. В одном воплощении «реверсия развития со временем ЛБН или одного или нескольких симптомов ЛБН» означает, что оценка тяжести заболевания у субъекта (например, общей тяжести или тяжести одного или нескольких симптомов), определенная по известной шкале, индексу, рейтингу, оценке и т.д. или другому подходящему тесту для оценки тяжести, улучшается со временем (т.е. показывает снижение тяжести со временем). Время, в течение которого лечение реверсирует развитие ЛБН или одного или нескольких симптомов ЛБН, может соответствовать длительности лечения, описанной в настоящем описании. В одном воплощении лечение реверсирует развитие в течение по меньшей мере примерно трех месяцев, по меньшей мере примерно четырех месяцев, по меньшей мере примерно пяти месяцев или по меньшей мере примерно шести месяцев. В другом воплощении лечение реверсирует развитие в течение по меньшей мере примерно 1 года, по меньшей мере примерно 2 лет, по меньшей мере примерно 3 лет, по меньшей мере примерно 4 лет, по меньшей мере примерно 5 лет или по меньшей мере 10 лет. Лечение может реверсировать развитие на протяжении всей жизни пациента.

В одном воплощении «лечение ЛБН или одного или нескольких симптомов ЛБН» относится к улучшению биохимического маркера ЛБН (например, повышенных уровней накопления метаболита(ов) или вторичных биохимических изменений, являющихся результатом первичного накопления). Биохимический маркер представляет собой сигнал активности заболевания и может предоставить текущие показания тяжести и развития заболевания со временем. В одном воплощении биохимический маркер улучшается с учетом контрольной величины. В одном воплощении биохимический маркер выбирают из повышенного объема лизосом и повышенных уровней гликосфинголипида (GSL). В одном воплощении биохимический маркер представляет собой повышенный объем лизосом, и лечение уменьшает объем лизосом у субъекта. В одном воплощении биохимический маркер представляет собой уровни гликосфинголипида (GSL), и лечение снижает уровни GSL у субъекта. В одном воплощении лечение улучшает биохимический маркер со временем. Например, в одном воплощении улучшение биохимического маркера со временем означает, что лечение улучшает биохимический маркер со временем относительно контрольной величины, предотвращает развитие биохимического маркера со временем и/или задерживает развитие биохимического маркера со временем по сравнению с типичным развитием при заболевании. Время, в течение которого лечение улучшает биохимический маркер, может соответствовать длительности лечения, описанной в настоящем описании. В одном воплощении лечение улучшает биохимический маркер в течение по меньшей мере примерно трех месяцев, по меньшей мере примерно четырех месяцев, по меньшей мере примерно пяти месяцев или по меньшей мере примерно шести месяцев. В другом воплощении лечение улучшает биохимический маркер в течение по меньшей мере примерно 1 года, по меньшей мере примерно 2 лет, по меньшей мере примерно 3 лет, по меньшей мере примерно 4 лет, по меньшей мере примерно 5 лет или по меньшей мере 10 лет. Лечение может улучшать биохимический маркер на протяжении всей жизни пациента.

«Симптом» ЛБН включает любое клиническое или лабораторное проявление, связанное с ЛБН, и не ограничивается тем, что сам пациент может чувствовать или наблюдать. Симптомы, описанные в настоящем описании, включают, но без ограничения, неврологические симптомы и психотические симптомы. Примеры неврологических симптомов включают атаксию, другие нарушения движения, такие как гипокинезия, мышечная ригидность, тремор или дистония, центральные глазодвигательные расстройства, такие как вертикальный и горизантальный надъядерный паралич саккад/взора, и нейропсихологические дефекты, такие как деменция. Примеры психотических симптомов включают депрессию, поведенческие расстройства или психоз. Появление симптомов может колебаться от рождения до взрослого состояния.

Развитие ЛБН или одного или нескольких симптомов ЛБН со временем или в ходе лечения можно контролировать, например, используя один или нескольких тестов в два или больше моментов времени и сравнивая результаты. Развитие и/или тяжесть заболевания можно оценить, например, используя шкалу для оценки и рейтинга атаксии (SARA), функциональный индекс спиноцеребеллярной атаксии (SCAFI), Международную кооперативную рейтинговую шкалу атаксии (ICARS), краткую рейтинговую шкалу атаксии (BARS), модифицированную шкалу оценки инвалидности (mDRS), визуальную аналоговую шкалу (VAS) EuroQol 5Q-5D-5L (EQ-5D-5L), пересмотренную шкалу интеллекта взрослых (WAIS-R), пересмотренную шкалу интеллекта детей-IV (WISC-IV), монреальскую когнитивную оценку (MoCA) или другие подходящие тесты. Для некоторых ЛБН, таких как NPC, разработаны отдельные оценки и утверждены в течение последних десятилетий, например, клиническая оценка тяжести (CSS) и годовая оценка увеличения тяжести (ASIS) (см. Yanjanin et al., “Linear Clinical Progression, Independent of Age of Onset, in Niemann-Pick Disease, Type C,” Am. J. Med. Genet. Part B, 153B:132-140), и модифицированная шкала оценки инвалидности 6-Domain NP-C (оценка mDRS). Например, тяжесть NPC у пациента можно оценить количественно, оценивая CSS, которая оценивает различные параметры заболевания (способность передвигаться, припадки, движение глаз и т.д.), и дает оценку каждого параметра до 5. Более высокая оценка равнозначна большей тяжести. ASIS оценивает количественно степень изменения CSS и вычисляет путем деления CSS на возраст пациента. В этом отношении некоторые оценки в таких тестах являются характеристиками симптоматических пациентов с ЛБН и доказательством развития и/или тяжести заболевания.

Таким образом, «лечение ЛБН или одного или нескольких симптомов ЛБН», например, можно прировнять к достижению улучшенной оценки, такой, какие описаны в настоящем описании, оценке по SARA, SCAFI, ICARS, BARS, mDRS, EQ-5D-5L, VAS, WAIS-R, WISC-IV, CSS и/или MoCA, или результату другого теста, подходящего для характеризации субъекта с ЛБН. Например, в одном воплощении «снижение тяжести ЛБН или снижение тяжести или устранение одного или нескольких существующих симптомов ЛБН» означает улучшение оценки по SARA, SCAFI, ICARS, BARS, mDRS, EQ-5D-5L, VAS, WAIS-R, WISC-IV, CSS и/или MoCA или результату другого теста, подходящего для оценки тяжести, такое как улучшение оценки или результата от оценки тяжести, характерной для симптоматического субъекта, до величины, характерной для бессимптомного субъекта. В другом воплощении «задержка развития ЛБН или одного или нескольких симптомов ЛБН» означает, что оценка субъекта по SARA, SCAFI, ICARS, BARS, mDRS, EQ-5D-5L, VAS, WAIS-R, WISC-IV, CSS и/или MoCA или результату другого теста, подходящего для оценки развития, существенно не возрастает (например, по меньшей мере остается по существу постоянной). В другом воплощении «задержка развития ЛБН или одного или нескольких симптомов ЛБН» означает предотвращение оценки субъекта по SARA, SCAFI, ICARS, BARS, mDRS, EQ-5D-5L, VAS, WAIS-R, WISC-IV, CSS и/или MoCA или результату другого теста, подходящего для оценки развития, от достижения, или возрастание времени, взятого для достижения, величины, сравнимой с величиной при типичном развитии заболевания. В другом воплощении «реверсия развития ЛБН или одного или нескольких симптомов ЛБН со временем» означает, что оценка у субъекта по SARA, SCAFI, ICARS, BARS, mDRS, EQ-5D-5L, VAS, WAIS-R, WISC-IV, CSS и/или MoCA или результату другого теста, подходящего для оценки развития, улучшается со временем (т.е. показывает снижение тяжести со временем).

Например, для того, чтобы оценить общий неврологический статус по mDRS, можно применить четырехпараметрическую шкалу (способность передвигаться, манипуляция, речь и глотание). Функцию мозжечка можно оценить с использованием SARA - восьмипозиционной клинической рейтинговой шкалы (походка, положение стоя, положение сидя, речь, функция мелкой моторики и таксис; интервал 0-40, где 0 - наилучший неврологический статус и 40 наихудший), и SCAFI, включающей 8-m-Walking-Time (8MW; выполняется путем прохождения пациентами настолько быстро, насколько возможно, дважды от одной линии до другой, включая поворот), тестом 9-Hole-Peg-Test (9HPT) и рядом “PATA” повторений в течение 10 с. Субъективное улучшение и качество жизни можно оценить с использованием опросника EQ-5D-5L и VAS. Для того, чтобы оценить глазодвигательную функцию, можно использовать 3-мерную видеоокулографию (EyeSeeCam) для измерения максимальной скорости саккад, улучшения равномерного слежения (smooth pursuit), максимальной скорости медленной фазы вызванного взглядом нистагма (функция удерживания взгляда), максимальной скорости медленной фазы оптокинетического нистагма и улучшения горизонтального вестибулоокулярного рефлекса. Для того чтобы оценить когнитивное состояние, можно использовать WAIS-R или WISC-IV и MoCA, оценивающие различные когнитивные домены, включая внимание и концентрацию, исполнительные функции, память, речь, зрительно-конструктивные навыки, концептуальное мышление, вычисление и ориентацию максимально по 30 точкам и пороговой оценкой 26. Специалисту будет известно, как выполнять эти и другие подобные тесты.

Ацетиллейцин или его фармацевтически приемлемую соль можно вводить, например, в дозе, колеблющейся от примерно 500 мг до примерно 15 г в день, или колеблющейся от примерно 500 мг до примерно 10 г в день, или колеблющейся от примерно 1,5 г до примерно 10 г в день, необязательно, оральным путем в твердом веществе или жидкости. Ацетиллейцин или его фармацевтически приемлемую соль можно вводить, например, в дозе, соответствующей танганилу®, который прописывают взрослым в дозе 1,5 г - 2 г в сутки, 3-4 таблетки в двух дозах утром и вечером.

Если вводят один энантиомер, дозы соответственно могут быть уменьшены. Например, если вводят только один ацетил-L-лейцин, или если вводят только один ацетил-D-лейцин, доза может колебаться от примерно 250 мг до примерно 15 г в день, колебаться от примерно 250 мг до примерно 10 г в день или колебаться от примерно 250 мг до примерно 5 г в день, например, от примерно 0,75 г до примерно 5 г в день.

В одном воплощении вводимая доза колеблется от примерно 1 г до примерно 15 г в день, от примерно 1 г до примерно 10 г в день или от примерно 1.5 г до примерно 7 г в день. Она может составлять от примерно 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 или 14 г до примерно 15 г в день. Она может составлять от примерно 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 или 9 г до примерно 10 г в день. Она может составлять более примерно 1,5 г в день, но меньше примерно 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6 или 5 г в день. В одном воплощении доза колеблется от примерно 4 г до примерно 6 г в день. В другом воплощении доза колеблется от примерно 4 г до примерно 5 г в день. В одном воплощении доза составляет примерно 4,5 г в день. В одном воплощении доза составляет примерно 5 г в день. В одном воплощении такие дозы вводят в твердой пероральной лекарственной форме, особенно в таблетках. В другом воплощении такие дозы являются дозами, когда ацетиллейцин находится в своей рацемической форме. Дозы ацетиллейцина, когда существует энантиомерный избыток, могут быть ниже, чем дозы, указанные в настоящем описании, например, примерно на 50% ниже. Таким образом, вышеуказанные интервалы доз, когда делятся пополам, также недвусмысленно охватываются настоящим раскрытием.

Общая дневная доза может быть распределена на несколько введений, т.е. введение может происходить два или больше раз в день для достижения общей дневной дозы. Как пример, требуемое число таблеток для обеспечения полной дневной дозы ацетиллейцина можно разделить на два введения (например, утром и вечером) или три введения (например, утром, в полдень и вечером). Каждую дозу можно вводить соответственно с пищей или без нее. Например, ацетиллейцин можно принимать примерно за 1 или примерно за 2 часа до еды, например, по меньшей мере примерно за 20 минут, по меньшей мере примерно за 30 минут, по меньшей мере примерно за 40 минут или по меньшей мере примерно за 1 час до еды, или можно принимать через примерно 1, примерно 2 или примерно 3 часа после еды, например, выжидая по меньшей мере примерно 20 минут, по меньшей мере примерно 30 минут, по меньшей мере примерно 1 час, по меньшей мере примерно 1,5 часа, по меньшей мере примерно 2 часа или по меньшей мере примерно 2,5 часа после еды. Например, общую дневную дозу в 4,5 г ацетил-DL-лейцина можно принять в виде трех таблеток танганила^® (или эквивалента) до, с или после завтрака, три другие таблетки до, с или после ланча и три другие таблетки до, с или после обеда.

Введение ацетиллейцина согласно настоящему раскрытию можно начинать до или после того, как найдут, что субъект имеет генетический, биохимический или другой подходящий идентифицируемый маркер ЛБН, например, в первом случае, когда подозревают, что субъект имеет или находится в опасности появления ЛБН. Введение можно начинать во время или примерно во время, когда обнаружат, что у субъекта имеется генетический, биохимический или другой подходящий идентифицируемый маркер ЛБН. Подобным образом, введение можно начинать до или примерно в момент или после того, как у субъекта диагностируют ЛБН, например, до или примерно в момент или после того, как обнаружат, что субъект имеет генетический, биохимический или другой подходящий идентифицируемый маркер ЛБН. Введение ацетиллейцина можно начинать, когда субъект является симптоматическим или бессимптомным. В частности, одним из преимуществ лечения ацетиллейцином согласно настоящему раскрытию является то, что введение ацетиллейцина можно начинать рано в момент после того, как обнаружат, что субъект имеет генетический и/или биохимический маркер ЛБН, но до того, как у субъекта проявятся симптомы ЛБН (другие, чем генетический и/или биохимический маркер ЛБН, т.е. субъект является бессимптомным), или до того, как у субъекта проявятся один или несколько симптомов, считающихся признаками заболевания. Лечение может задержать появление ЛБН или одного или нескольких симптомов, ассоциированных с ЛБН, как описано в настоящем описании. Лечение также может продолжаться длительно, как описано в настоящем описании.

Как обсуждалось в настоящем описании, преимуществом лечения ацетиллейцином согласно настоящему раскрытию является то, что ацетиллейцин можно вводить в течение продолжительного периода времени для того, например, чтобы задержать или даже реверсировать развитие ЛБН или одного или нескольких симптомов ЛБН у субъекта по сравнению с типичным развитием заболевания. Длительность лечения может составлять, например, примерно семь дней или дольше, примерно две недели или дольше, примерно три недели или дольше, примерно один месяц или дольше, примерно шесть недель или дольше, примерно семь недель или дольше или примерно два месяца или дольше. В одном воплощении длительность лечения составляет примерно три месяца или дольше, примерно четыре месяца или дольше, примерно пять месяцев или дольше или примерно шесть месяцев или дольше. Длительность лечения может составлять примерно 1 год или дольше, примерно 2 года или дольше, примерно 4 года или дольше, примерно 5 лет или дольше или примерно 10 лет или дольше. Длительность лечения может составлять всю жизнь пациента.

Любая и все комбинации лекарственной формы, количества дозы, схемы приема и длительности лечения предусмотрены и охватываются изобретением. В одном воплощении доза составляет от примерно 4 г до примерно 10 г в день, принимаемая за одно, два или три введения в день, при длительности лечения примерно два месяца или дольше. В другом воплощении доза составляет больше 4 г, но меньше 5 г в день, принимаемая за одно, два или три введения в день, при длительности лечения примерно шесть месяцев или дольше. Лекарственная форма может представлять собой твердую пероральную лекарственную форму, особенно таблетки.

Фармацевтическую композицию можно использовать как монотерапию (например, применять одно активное вещество) для лечения ЛБН у субъекта. С другой стороны, фармацевтическую композицию можно использовать как вспомогательную или в комбинации с другими известными терапиями, например, для лечения ЛБН у субъекта.

Все ЛБН, которые можно классифицировать различными способами, входят в объем настоящего раскрытия. В одном воплощении ЛБН выбирают из любой болезни накопления гликогена, мукополисахаридоза, муколипидоза, олигосахаридоза, липидоза, сфинголипидоза и лизосомных болезней переноса.

Сфинголипидоз можно выбрать из болезни Ниманна-Пика типа А/В, болезни Гоше типов I, II и III, болезни Краббе, болезни Фабри, болезни Шиндлера, ганглиозидоза GM₁, болезни Моркио В, ганглиозидоза GM₂, метахроматической лейкодистрофии, болезни Фарбера, множественной сульфатазной недостаточности, недостаточности лизосомной кислой липазы и галактосиалидоза. В одном воплощении сфинголипидоз выбирают из болезни Ниманна-Пика типа А, ганглиозидоза GM₁, болезни Тея-Сакса, варианта АВ болезни Тея-Сакса и болезни Сандхоффа.

Муколипидоз можно выбрать из муколипидоза I, муколипидоза II, муколипидоза III и муколипидоза IV. В одном воплощении муколипидоз представляет собой муколипидоз II или муколипидоз III.

Мукополисахаридоз можно выбрать из MPS IH, MPS I H-S, MPS IS, MPS IIA, MPS IIB, MPS IIIA-D, MPS IVA, MPS VI, MPS VII и MPS IX. В одном воплощении мукополисахаридоз представляет собой MPS III или MPS VII. В одном воплощении мукополисахаридоз представляет собой MPS IIIB.

Олигосахаридоз можно выбрать из бета-маннозидоза, альфа-фукозидоза и аспартилглюкозаминурии.

Липозидоз можно выбрать из болезни Ниманна-Пика типа С, болезни Ниманна-Пика типа D, нейронального цероидного липофусциноза (типа I-X включительно) и болезни Вольмана. В одном воплощении липозидоз представляет собой болезнь Ниманна-Пика типа С.

Болезнь накопления гликогена можно выбрать из болезни Помпе с началом в детстве, болезни Помпе с поздним началом и болезни Данона.

Лизосомные болезни переноса можно выбрать из цистиноза, пикнодизостоза, болезни накопления сиаловой кислоты и инфантильной формы болезни накопления свободной сиаловой кислоты.

ЛБН может представлять собой дефект первичной лизосомной гидролазы, дефект посттрансляционного процессинга ферментов лизосом, дефект транспорта для ферментов лизосом, дефект в защите ферментов лизосом, недостаток растворимых неферментных лизосомных белках, недостаток трансмембранных (неферментных) белков или неклассифицированный дефект.

В одном воплощении ЛБН выбирают из дефекта первичной лизосомной гидролазы. Дефекты первичной лизосомной гидролазы включают, но без ограничения, болезнь Тея-Сакса (недостаток β-гексоаминидизы A), болезнь Сандхоффа (недостаток β-гексоаминидизы A+B), болезнь Фабри (недостаток αα-галактозидазы A), болезнь Краббе (недостаток β-галактозилцерамидазы), Ниманна-Пика типа A и B (недостаток сфингомиелиназы), метахроматическую лейкодистрофию (недостаток арилсульфатазы A), MPS IH (синдром Гурлера; недостаток αα-идуронидазы), MPS IS (синдром Шейе; недостаток α-идуронидазы), MPS IH-S (синдром Гурлера-Шейе; недостаток αα-идуронидазы), MPS II (синдром Гюнтера; недостаток идуронатсульфатазы), MPS IIIA (синдром Санфилиппо A; недостаток гепарансульфамидазы), MPS IIIB (синдром Санфилиппо B; недостаток ацетил-α-глюкозаминидазы), MPS IIIC (синдром Санфилиппо C; недостаток ацетил-CoA: α-глюкозаминид-N-ацетилтрансферазы), MPS IIID (синдром Санфилиппо D; недостаток N-ацетилглюкозамин-6-сульфатазы), MPS IV A (болезнь Моркио A; недостаток ацетилгалактозамин-6-сульфатазы), MPS IVB (болезнь Моркио B; недостаток β-галактозидазы), MPS V (переименованную MPS IS), MPS VI (синдром Марото-Лами; недостаток ацетилгалактозамин-4-сульфатазы (арилсульфатаза B)), MPS VII (синдром Слая; недостаток β-глюкуронидазы), MPS IX (недостаток гиалуронидазы), болезнь Воьмана/накопления холестерилэфира (WD; недостаток кислой липазы), болезнь Помпе (типа II; недостаток α-1,4-глюкозидазы), аспартилглюкозаминурия (недостаток гликозиласпарагиназы), фукозидоз (недостаток α-фукозидазы), α-маннозидоз (недостаток α-маннозидазы), β-маннозидоз (недостаток α-маннозидазы), болезнь Шиндлера (недостаток N-ацетилгалактозаминидазы), сиалидоз/ML I (недостаток α-нейраминидазы), инфантильный нейрональный цероидный липофусциноз (CLN1; недостаток пальмитоил-белка тиоэстеразы), поздний инфантильный нейрональный цероидный липофусциноз (CLN2; недостаток карбоксипептидазы), ранний инфантильный ганглиозидоз GM₁, поздний инфантильный ганглиозидоз GM1, юношеский ганглиозидоз GM₁, болезнь Гоше типа 1 (не-нейронопатическую), болезнь Гоше типа 2/3 (нейронопатическую), нейрональный цероидный липофусциноз типа 4 (CLN4; болезнь Куфса; взрослый NCL; недостаточность пальмитоил-белка тиоэстеразы-1 (тип A); недостаточность катепсина F (тип B)), нейрональный цероидный липофусциноз типа 10 (CLN10; врожденная недостаточность катепсина D), пикнодизостоз (недостаток катепсина K), болезнь Помпе с началом в детстве, болезнь Помпе с поздним началом, болезнь Фарбера (липогранулематоз Фарбера; недостаточность церамидазы; фиброцитный дисмукополисахаридоз; липогранулематоз) и галактосиалидоз (недостаток защитного белка катепсина A, недостаток PPCA). В одном воплощении недостаток первичной лизосомной гидролазы выбран из болезни Тея-Сакса, болезни Сандхоффа, Ниманна-Пика типа A, Ниманна-Пика типа B, нейронального цероидного липофусциноза, болезни Гоше, болезни Фабри, болезни Краббе, ганглиозидоза GM₁, ганглиозидоза GM₂, метахроматической лейкодистрофии и болезни Фарбера. В одном воплощении недостаток первичной лизосомной гидролазы выбран из болезни Тея-Сакса, болезни Сандхоффа, Ниманна-Пика типа A, Ниманна-Пика типа B и ганглиозидоза GM₁.

В одном воплощении ЛБН выбирают из дефекта посттрансляционного процессинга ферментов лизосом. Дефекты посттрансляционного процессинга ферментов лизосом включают, но без ограничения, мукосульфатидоз (MSD; множественный дефект сульфатазы), MLII (I-клеточная болезнь; недостаток N-ацетилглюкозамин-фосфорилтрансферазы) и MLIII (псевдополидистрофия Гурлера; недостаток N-ацетилглюкозамин-фосфорилтрансферазы).

В одном воплощении ЛБН выбирают из недостатка ферментов лизосом. Нарушения транспорта ферментов лизосом включают, но без ограничения, муколипидоз типа II (I-клеточная болезнь; недостаток N-ацетилглюкозамин-фосфорилтрансферазы), муколипидоз типа IDA (псевдополидистрофия Гурлера; недостаток N-ацетилглюкозамин-фосфорилтрансферазы) и муколипидоз типа IНС.

В одном воплощении ЛБН представляет собой дефект защиты ферментов лизосом. Дефекты защиты ферментов лизосом включают, но без ограничения, галактосиалидоз (недостаток защитного белка катепсина А (РРСА).

В одном воплощении ЛБН представляет собой недостаток растворимых неферментных лизосомных белков. Недостатки растворимых неферментных лизосомных белков включают, но без ограничения, недостаточность активатора белка GM2 (вариант АВ), болезнь Ниманна-Пика типа С₂ (NPC₂), недостаточность белка активатора сфинголипида (SAP).

В одном воплощении ЛБН представляет собой недостаток трансмембранного (неферментного) белка. Недостатки трансмембранного (неферментного) белка включают, но без ограничения, болезнь Данона (недостаток лизосомассоциированного мембранного белка 2 (LAMP2)), NPC (недостаток NPC₁), цистиноз (недостаток цистинозина), инфантильную форму болезни накопления свободной сиаловой кислоты (ISSD; недостаток сиалина), болезнь Салла (накопление свободной сиаловой кислоты; недостаток сиалина), юношеский нейрональный цероидный липофусциноз (CLN₃, болезнь Баттена), нейрональный цероидный липофусциноз взрослых (болезнь Куфса; взрослый NCL; недостаточность пальмитоил-белка тиоэстеразы-1 (тип A); недостаточность катепсина F (тип B)), нейрональный цероидный липофусциноз (NCL) (CLN₆, CLN7 и CLN₈) и муколипидоз типа IV (недостаток муколипина). В одном воплощении ЛБН представляет собой болезнь Ниманна-Пика типа C₁ или болезнь Ниманна-Пика типа C₂.

В одном воплощении ЛБН представляет собой неклассифицированный дефект. Неклассифицированные дефекты включают, но без ограничения, нейрональные цероидные липофусцинозы (NCL) (CLN₅ и CLN₉).

ЛБН, которую лечат композициями и способами по изобретению, могут представлять собой любое заболевание из нейронального цероидного липофусциноза, первичного гликосфинголипидоза (т.е. болезни Гоше, Фабри, ганглиозидозов GM₁, GM₂, болезни Краббе и метахроматической лейкодистрофии (MLD)), болезни Фарбера и множественной сульфатазной недостаточности. В одном воплощении при ЛБН центральная нервная система (ЦНС) имеет значительное поражение. Например, ЛБН можно выбрать из NPC, болезни Тея-Сакса, болезни Сандхоффа, ганглиозидоза GM₁ или болезни Фабри.

В одном воплощении ЛБН представляет собой болезнь Ниманна-Пика типа А. В другом воплощении ЛБН представляет собой болезнь Ниманна-Пика типа В. В другом воплощении ЛБН представляет собой болезнь Ниманна-Пика типа С (С₁ или С₂). Болезни Ниманна-Пика представляют собой разнородную группу аутосомно-рецессивных ЛБН. Общие клеточные признаки включают анормальное накопление сфингомиелина (SM) в мононуклеарных фагоцитах и паренхимной ткани, а также (гепато)спленомегалию. Среди этих трех основных подгрупп (A-C), NPC (ранее классифицированная как NPC и NPD, а теперь признана как являющаяся одной болезнью) классифицируется как фатальная нейровисцеральная ЛБН, вызванная анормальным внутриклеточным переносом холестерина - вызванная накоплением неэтерифицированного холестерина в полостях поздних эндосом/лизосом. Вне ЦНС клеточные характеристики NPC включают анормальное накопление неэтерифицированного холестерина и других липидов (например, GSL) в ячейках поздних эндосом/лизосом. Напротив, не имеется чистого повышения холестерина в ЦНС (хотя имеется измененное распределение), но имеются сильно повышенные уровни GSL. Прогрессирующая нейродегенерация определенно характеризуется последующей дегенерацией нейронов GABAergic Пуркинье, которая проходит параллельно с началом и развитием мозжечковой атаксии, и другими аспектами неврологических дисфункций, видных в ходе NPC. Генетические исследования показали, что болезнь NPC вызвана мутациями в генах Npc₁ или Npc₂. Точная механистическая связь между этими двумя генами остается неизвестной, и функциональные роли этих белков остаются загадкой. NPC₁ кодирует мультиохватывающий мембранный белок ограничивающей мембраны поздней эндосомы/лизосомы, в то время как NPC₂ представляет собой растворимый связывающий холестерин белок лизосомы. Когда NPC₁ инактивирован, сфингозин является первым липидом для накопления, предполагая, что NPC₁ играет роль в транспорте сфингозина из лизосомы, где он обычно генерируется как часть сфинголипидного катаболизма. Повышенный сфингозин в свою очередь вызывает дефект в поступлении кальция в кислотные резервы, что приводит к существенно заниженному высвобождению кальция из его ячейки. Далее это предотвращает слияние поздней эндосомы-лизосомы, которое является кальцийзависимым процессом, и вызывает вторичное накопление липидов (холестерина, сфингомиелина и гликосфинголипидов), которые являются перевозчиками в транзите через поздний путь эндоцитоза. Другие вторичные последствия ингибирования функции NPC₁ включают несовершенный эндоцитоз и недостаточность четких аутофагических вауколей. Показано, что клеточный путь NPC₁/NPC₂ таргетируется патогенными микобактериями, промотируя их выживание в поздних эндосомах.

Болезнь Тея-Сакса является фатальным наследственным нарушением липидного метаболизма, характеризующимся особенно в ткани ЦНС из-за недостаточности А изозима β-гексозамидазы. Мутации в гене HEXA, который кодирует α-субъединицу β-гексозамидазы, вызывает недостаточность изозима A. Болезнь Тея-Сакса является прототипом группы расстройств ганглиозидозов GM₂, характеризующихся неполным разрушением ганглиозида GM₂. Ганглиозид GM₂ (моносиалилированный ганглиозид 2) накаливается в нейронах, начиная уже с жизни плода.

Болезнь Сандхоффа является результатом недостаточности как А, так и В изозимов β-гексозамидазы. Мутации в гене НЕХЕВ, который кодирует β-субъединицу β-гексозамидазы, вызывает недостаточность изозима В.

Ганглиозидоз GM₁ вызывается недостаточностью β-галактозидазы, которая приводит к лизосомному накоплению ганглиозида GM₁ (моносиалилированного ганглиозида 1).

Болезнь Фабри вызывается недостаточностью α-галактозидазы, которя приводит к лизосомному накоплению церамидтригексозида.

В одном воплощении ЛБН выбирают из болезни Тея-Сакса, варианта AB болезни Тея-Сакса, болезни Сандхоффа, болезни Ниманна-Пика типа A, муколипидоза II, муколипидоза III, MPS III, MPS VII, ганглиозидоза GM₁ и аспартилглюкозаминурии. В одном воплощении ЛБН представляет собой болезнь Сандхоффа. В одном воплощении ЛБН представляет собой болезнь Тея-Сакса. В одном воплощении ЛБН представляет собой вариант AB болезни Тея-Сакса. В одном воплощении ЛБН представляет собой муколипидоз типа II. В одном воплощении ЛБН представляет собой муколипидоз типа III. В одном воплощении ЛБН представляет собой ганглиозидоз GM₁. В одном воплощении ЛБН представляет собой MPS III. В одном воплощении ЛБН представляет собой MPS VII. В одном воплощении ЛБН представляет собой болезнь Ниманна-Пика типа A. В одном воплощении ЛБН представляет собой аспартилглюкозаминурию.

В одном воплощении ЛБН не является болезнью Ниманна-Пика. В одном воплощении ЛБН не является болезнью Ниманна-Пика типа С.

В одном воплощении ацетиллейцином или его фармацевтически приемлемой солью лечат потерю массы, ухудшение походки и/или истощение функций, связанных с болезнью Ниманна-Пика (например, типа С или А) или муколипидозом типа II. Например, ацетиллейцин или его фармацевтически приемлемая соль могут задержать появление, снизить тяжесть или устранить или задержать или реверсировать развитие потери массы, ухудшения походки и/или истощение функций, связанные с болезнью Ниманна-Пика (например, типа С или А) или муколипидозом типа II. В одном воплощении потеря массы, ухудшение походки и/или истощение функций связаны с болезнью Ниманна-Пика типа А или муколипидозом типа II.

В одном воплощении ацетиллейцином или его фармацевтически приемлемой солью лечат ухудшение походки, ухудшение двигательной функции и/или уменьшенную подвижность, связанные с болезнью Сандхоффа. Например, ацетиллейцин или его фармацевтически приемлемая соль могут задержать появление, снизить тяжесть или устранить или задержать или реверсировать развитие ухудшения походки, ухудшения двигательной функции и/или уменьшенной подвижности, связанных с болезнью Сандхоффа.

В одном воплощении ацетиллейцином или его фармацевтически приемлемой солью лечат пониженную координацию, треморы, уменьшенную подвижность, когнитивное ухудшение и/или ухудшение походки, связанные с болезнью Тея-Сакса. Например, ацетиллейцин или его фармацевтически приемлемая соль могут задержать появление, снизить тяжесть или устранить или задержать или реверсировать развитие пониженной координации, треморов, сниженной подвижности, когнитивного ухудшения и/или ухудшения походки, связанных с болезнью Тея-Сакса.

Раскрытие также относится к способу лечения ЛБН или одного или нескольких симптомов ЛБН у субъекта, нуждающегося в этом, причем способ включает введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества ацетиллейцина или его фармацевтически приемлемой соли.

«Терапевтически эффективное количество» средства представляет собой любое количество, которое, когда введено субъекту, является количеством средства, которое необходимо для получения нужного действия, которое, в случае настоящего раскрытия, может быть терапевтическим и/или профилактическим. Дозу можно определить согласно различным параметрам, таким как специфическая форма используемого ацетиллейцина; возраст, масса и состояние пациента, которого лечат; тип заболевания; путь введения и требуемая схема введения. Врач способен определить требуемый путь введения и дозировку для любого определенного пациента. Например, дневная доза может составлять от примерно 10 до примерно 225 мг на кг, от примерно 10 до примерно 150 мг/кг или от примерно 10 до примерно 100 мг на кг массы тела.

Раскрытие также относится к набору для лечения ЛБН у субъекта, нуждающегося в этом (например, субъекта, имеющего, с подозрением на наличие или в опасности появления ЛБН), включающему средства для диагностики или прогнозирования ЛБН и ацетиллейцин или его фармацевтически приемлемую соль.

Средства для диагностики или прогнозирования ЛБН могут включать специфический связывающий агент, зонд, праймер, пару или комбинацию праймеров, фермент или антитело, включая фрагмент антитела, которые способны обнаруживать или способствовать обнаружению ЛБН, определенной в настоящем описании. Набор может включать LysoTracker®, который является флуоресцентным маркером и доступен коммерчески как от Invitrogen, так и от Lonza. LysoTracker® может быть синим, бело-голубым, желтым, зеленым или красным.

Набор также включает ацетиллейцин или его фармацевтически приемлемую соль, определенные в настоящем описании. Набор также может включать буферы или водные растворы. Набор также может включать инструкции по применению ацетиллейцина или его фармацевтически приемлемой соли в способе по изобретению.

В другом воплощении раскрывается ацетиллейцин или его фармацевтически приемлемая соль для применения в способе обеспечения нейрозащиты у субъекта, имеющего, с подозрением на или в опасности появления ЛБН.

«Нейрозащита» и похожие термины, используемые в настоящем описании, относятся к предупреждению, замедлению и/или реверсии развития нейродегенерации, включая, но без ограничения, прогрессирующую потерю структуры нейронов и/или прогрессирующую гибель нейронов. Обеспечение нейрозащиты может привести к задержке появления ЛБН или одного или нескольких симптомов ЛБН, которые в ином случае, как можно ожидать, проявятся согласно типичному развитию заболевания, снижению тяжести ЛБН или снижению тяжести одного или нескольких существующих симптомов, связанных с ЛБН, задержке развития ЛБН или одного или нескольких симптомов ЛБН со временем по сравнению с типичным развитием заболевания, и/или реверсии развития ЛБН или одного или нескольких симптомов ЛБН со временем. Время, в течение которого обеспечена нейрозащита, может совпадать с длительностью лечения. Лечение может обеспечить нейрозащиту в течение периода времени, например, примерно семи дней или дольше, примерно двух недель или дольше, примерно трех недель или дольше, примерно одного месяца или дольше, примерно шести недель или дольше, примерно семи недель или дольше или примерно двух месяцев или дольше. Также, например, лечение обеспечивает нейрозащиту на протяжении примерно трех месяцев или дольше, примерно четырех месяцев или дольше, примерно пяти месяцев или дольше или примерно шести месяцев или дольше. В другом воплощении лечение обеспечивает нейрозащиту на протяжении примерно 1 года или дольше, примерно 2 лет или дольше, примерно 3 лет или дольше, примерно 4 лет или дольше, примерно 5 лет или дольше или примерно 10 лет или дольше. Лечение может обеспечивать нейрозащиту на протяжении всей жизни пациента.

Как следует из примеров, авторы изобретения полагают, что ацетиллейцин действует как нейрозащитный агент и таким образом ингибирует нейродегенерацию, проявление которой следует ожидать в ином случае.

Одно воплощение относится к способу обеспечения нейрозащиты у субъекта, имеющего, с подозрением на или опасностью появления ЛБН, включающему введение субъекту терапевтически эффективного количества ацетиллейцина или его фармацевтически приемлемой соли.

Раскрытие также относится к набору для обеспечения нейрозащиты у субъекта, имеющего, с подозрением на или опасностью появления ЛБН, включающему средства для диагностики или прогнозирования ЛБН и ацетиллейцин или его фармацевтически приемлемую соль.

Настоящее раскрытие также относится к применению ацетиллейцина или его фармацевтически приемлемой соли в качестве нейрозащитного агента для субъекта, имеющего, с подозрением на или опасностью появления ЛБН.

Все особенности, описанные в настоящем описании (включая любые сопутствующие пункты формулы изобретения, реферат и чертежи), и/или все стадии любого способа, раскрытые таким образом, можно объединять с любым из описанных выше аспектов в любой комбинации, за исключением комбинаций, в которых по меньшей мере некоторые из таких особенностей и/или стадий являются взаимоисключающими.

Примеры

Изобретение теперь будет поясняться подробнее в следующих далее примерах, которые демонстрируют полезность ацетиллейцина при лечении ЛБН у субъекта и обеспечении нейрозащиты у указанного субъекта.

Пример 1

Исследование на мышах in vivo - методы

Мышиная модель

В этом исследовании используют аутентичную мышиную модель NPC, мышь Npc1^−/− (BALB/cNctr-Npc1^m1N/J), которая недействительна для белка NPC1 и отображает все клинические признаки заболевания (Loftus, 1997).

Этот мутантный штамм появился спонтанно и имеет время жизни в интервале 10-14 недель, и поэтому имеет ход заболевания более острый, как у огромного числа пациентов. Мутантную мышь успешно используют не только для определения онтогенеза заболевания и лежащих в основе патогенных механизмов, но также для оценки экспериментальных терапий. Анализы с использованием таких мышей приняты для всез животных на клеточных и молекулярных уровнях (Baudry, 2003; Smith, 2009; Cologna, 2014; Cologna, 2012). Наиболее интенсивно исследуют животную модель NPC.

До возраста примерно 4-5 недель Npc1^−/− мыши не имеют заметных поведенческих указаний о заболевании, что отличает их от таких же детенышей дикого типа. Первые указания о поведенческих нарушениях, таких как тремор и атаксическая походка, появляются в 5-6 недель; в 7-8 недель нарушения в двигательной координации становятся более явными, и в 9-11 недель атаксия прогрессирует и сопровождается возросшей потерей массы и плохим состоянием шерстного покрова, когда еда и питье становятся затруднительными (применяют гуманную конечную точку) (Smith, 2009).

Детенышей дикого типа Npc1^+/+ используют в качестве контроля.

Протокол обработки

Группу мышей Npc1^−/− и группу мышей Npc1^+/+, отлученных от матери (возраст три недели), обрабатывают 0,1 г/кг ацетил-DL-лейцина, подмешивая в мышиный корм, Отдельные группы мышей Npc1^−/− и Npc1^+/+ оставляют необработанными в качестве контрольных.

Состояние шерстного покрова

Состояние шерстного покрова мышей Npc1^−/−, обработанных и необработанных ацетил-DL-лейцином, сравнивают путем простого наблюдения мышей в возрасте девяти недель.

Данные о массе

Животных взвешивают дважды в неделю. Массы усредняют (вычисляют среднее) по всем мышам в каждой группе и сравнивают.

Анализ походки

Анализ походки выполняют на мышах в возрасте восьми недель, используя систему CatWalk® 15,0 согласно инструкциям изготовителя (Noldus, Nottingham, UK). Регистрируют пять проходов на животное.

Измеряемыми параметрами CatWalk® являются:

1) средняя стойка (Stand Mean): средняя длительность (с) контакта лап со стеклянной площадкой;

2) шаговый цикл (Step Cycle): длительность (с) между двумя последовательными контактами одной и той же лапы;

3) рабочий цикл (Duty Cycle): процент времени контакта лап с площадкой по сравнению с полным шаговым циклом;

4) последовательность шагов (Step Sequence) (AB): процент времени, затраченного на прогулку по схеме LF-RH-RF-LH (LF: левая передняя; RH: правая задняя; RF: правая передняя; LH левая задняя);

5) ритм (Cadence): шаг на секунды в испытании;

6) поддержка диагонали (Diagonal Support): процент времени одновременного контакта диагональных лап со стеклянной площадкой (RF и LH или RH и LF).

Анализ двигательной функции

Анализ двигательной функции выполняют на мышах в возрасте восьми и девяти недель с использованием монитора Open Field Activity Monitor согласно инструкциям изготовителя (Linton Instruments, программа Amlogger). Каждую мышь помещают в пластиковую клетку с подстилкой, и проводят анализ в течение пяти минут. Вставания подсчитывают вручную.

Измеряемыми параметрами двигательной функции являются:

1) сосредоточенное вставание (Centre Rearing): мыши встают на задние лапы без поддержки;

2) вставание (Rearing): мыши встают на задние лапы, опираясь и не опираясь на стенки клетки;

3) активность: постоянное перемещение животного, включающее ходьбу;

4) число вперед-назад (Front to Back) (FR) count: перемещение животного от передней стенки клетки к задней;

5) активное время: длительность (с/мин) активности независимо от перемещения;

6) мобильное время: длительность (с/мин) подвижности;

7) время вставания (Rearing Time): длительность любого вставания.

Результаты

Состояние шерстного покрова

Фигура 1 В показывает необработанных детенышей Npc1^−/− соответствующего возраста. Мышей Npc1^−/− наблюдают как имеющих плохое состояние шерстного покрова в возрасте девяти недель, когда еда и питье становятся затруднительными (см. фигуру 1B).

С отчетливым контрастом фигура 1A показывает мышь Npc1^−/−, обработанную ацетил-DL-лейцином из числа отнятых от матерей. Мыши Npc1^−/−, обработанные-DL-лейцином, имеют гладкий и блестящий шерстный покров, напоминающий покров детенышей дикого типа (Npc1^+/+) (см. фигуру 1A).

Данные по массе

Как можно видеть из фигуры 2А, мыши дикого типа (Npc1^+/+) постоянно прибавляют в весе на протяжении исследования, т.е. от трехнедельного до 10-недельного возраста. Далее, фигура 2A показывает среднюю массу в группе мышей в каждый момент времени (Npc1^−/− - необработанные, n = 1; Npc1^−/− - ацетил-DL-лейцин 0,1 г/кг, n = 3; Npc1^+/+ - untreated, n = 3; Npc1^+/+ - ацетил-DL-лейцин 0,1 г/кг, n = 2).

Обработка ацетил-DL-лейцином оказывает незначительное действие на этот прирост массы.

Мыши Npc1^−/− сначала прибавляют в весе в значительной степени так же, как контрольные мыши Npc1^+/+. Однако затем мыши Npc1^−/− начинают терять в весе с шестинедельного возраста. В конце исследования (возраст 10 недель) мыши весят почти так же мало, как в возрасте четырех недель.

Обработка ацетил-DL-лейцином задерживает эти симптомы потери массы на две недели по сравнению с необработанной группой.

Сравнение изменений массы у мышей Npc1^−/− с и без обработки ацетил-DL-лейцином показано на фигуре 2. В частности, фигура 2 показывает изменение массы (%) на группу мышей в каждый момент времени только для мышей Npc1^−/−. Благоприятное действие обработки ацетил-DL-лейцином - задержка потери массы явно следует из этой фигуры.

Анализ походки

Результаты анализа походки показаны на фигуре 3. Данные по поддержке диагонали, ритму и последовательности шагов показаны на фигурах 3A-3C, соответственно. Фигуры 3D и 3E показывают данные для передних лап (FP) (средняя стойка и шаговый цикл на фигуре 3D; рабочий цикл на фигуре 3E). Фигуры 3F и 3G показывают данные для задних лап (HP) (средняя стойка и шаговый цикл на фигуре 3F; рабочий цикл на фигуре 3G). данные приводятся как среднее ± SEM; n=3 для необработанных Npc1^+/+, n=2 для обработанных Npc1^+/+, n=1 для необработанных Npc1^−/− (поэтому статистический анализ не выполнялся), n=3 для обработанных Npc1^−/−.

Первый столбик на каждой диаграмме показывает свойства походки мышей дикого типа (Npc1^+/+).

Второй столбик на каждой диаграмме показывает свойства походки мышей дикого типа (Npc1^+/+), обработанных ацетил-DL-лейцином. Не имеется существенного различия в свойствах походки между этими мышами и такими же необработанными детенышами.

Третий столбик на каждой диаграмме показывает свойства походки мыши Npc1^−/−. В целом эта мышь показывает плохую походку по сравнению с мышами Npc1^+/+. Мышь тратит крайне мало времени, если тратит, на поддержку диагонали (фигура 3A) или последовательность шагов (фигура 3C), и функции ее задних лап в средней стойке (фигура 3F) и рабочем цикле (фигура 3G) также радикально затруднены.

Четвертый столбик на каждой диаграмме показывает свойства походки мышей Npc1^−/−, обработанных ацетил-DL-лейцином. Эти мыши демонстрируют существенно улучшенную походку по сравнению с такими же необработанными детенышами. Фактически они показывают свойства походки, схожие с мышами Npc1^+/+.

Анализ двигательной функции

Анализ на восьминедельных мышах не показал различия в свойствах двигательной функции между мышами Npc1^−/− и дикого типа (Npc1^+/+) (данные не приводятся).

Однако в девятинедельном возрасте появились нарушения в двигательной координации.

Результаты анализа двигательной функции в девять недель показаны на фигуре 4. Сосредоточенное вставание, вставание и число взад-вперед (FR) показаны на фигурах 4A-4D, соответственно. Активное время, мобильное время, время вставания, общее число вставаний при подсчете вручную показаны на фигурах 4E-4H, соответственно. Данные представлены как среднее ± SEM; n=3 для необработанных Npc1^+/+, n=2 для обработанных Npc1^+/+, n=1 для необработанных Npc1^−/− (поэтому статистический анализ не выполняли), n=3 для обработанных Npc1^−/−.

Первый столбик на каждой диаграмме показывает свойства двигательной функции мышей дикого типа (Npc1^+/+).

Второй столбик на каждой диаграмме показывает свойства двигательной функции мышей дикого типа (Npc1^+/+), оброаботанных ацетил-DL-лейцином. Не имеется существенного различия в свойствах двигательной функции и такими же необработанными детенышами.

Третий столбик на каждой диаграмме показывает свойства двигательной функции мыши Npc1^−/−. В целом эта мышь показывает плохую двигательную функцию по сравнению с мышами Npc1^+/+. Мышь тратит крайне мало времени, если тратит, на вставание (панель Н) особенно на свои задние лапы без опоры (панель А).

Четвертый столбик на каждой диаграмме показывает свойства двигательной функции мышей Npc1^−/−, обработанных ацетил-DL-лейцином. Эти мыши демонстрируют существенно улучшенную двигательную функцию по сравнению с такими же необработанными детенышами. Фактически они показывают свойства двигательной функции, схожие с мышами Npc1^+/+.

Продолжительность жизни

Также наблюдают, что обработка мышей Npc1-/- ацетил-DL-лейцином (0,1 г/кг от возраста 3 недели) связана со статистически значимым увеличением продолжительности жизни (фигура 5). Эти данные также показывают влияние ацетиллейцина на задержку начала заболевания.

Выводы

Когда мыши Npc1^−/− имеют различимый признак заболевания, который отличает их от таких же мышей дикого типа в возрасте 5-6 недель, детеныши Npc1^−/−, обработанные ацетил-DL-лейцином, из отнятых от матерей, не отображают таких симптомов дольше двух недель или долее. Обработка мышей Npc1^−/− ацетил-DL-лейцином задерживает появление и развитие симптомов NPC и показывает свидетельство нейрозащиты.

Пример 2

Методы

Клеточную линию фибробластов пациента с NPC обрабатывают в течение 3 дней N-ацетил-DL-лейцином (1 мM), и определяют количественно относительный объем лизосом с помощью LysoTracker - флуоресцентного красителя, который накапливается в органеллах с кислым содержимым. Более интенсивная флуоресценция LysoTracker является показателем возрастания размера и/или числа лизосом и является признаком клеток NPC.

Кроме того, фибробласты, полученные от пациентов с болезнью Ниманна-Пика А (NPA), муколипидозом типа II (MLII), мукополисахаридозом типа IIIB (MPS IIIB), аспартилглюкозаминурией, муколипидозом типа IIIA (MLIIIA) и мукополисахаридозом типа VII (MPS VII), обрабатывают ацетил-DL-лейцином (1 мM) в течение 6 дней, и с помощью LysoTracker определяют количественно объем лизосом.

Результаты

Обработка фибробластов, полученных от пациента с NPC средней клинической тяжести, 1 мM N-ацетил-DL-лейцином ассоциируется с существенным снижением интенсивности флуоресценции LysoTracker, показывающим снижение объема лизосом со временем (фигура 6A). Такие данные воспроизводятся в фибробластах, полученных от пациентов с другими NPC различной клинической тяжести, обработанных 1 мM N-ацетил-DL-лейцином в течение 72 часов (фигура 6B).

Наблюдают, что фибробласты, полученные от пациентов с NPA, MLII, MPS IIIB, аспартилглюкозаминурией, MLIIIA и MPS VII, имеют повышенные уровни флуоресценции с LysoTracker относительно соответствующих по возрасту контролей дикого типа (фигуры 6C-6H). Это является показателем увеличенной лизосомы в результате накопления липидов по сравнению с фибробластами от здоровых индивидуумов. Обработка ацетиллейцином ассоциируется со статистически значимым ослаблением флуоресценции LysoTracker относительно контрольного уровня в фибробластах при NPA, MLII и MPS IIIB относительно необработанных фибробластов при NPA, MLII и MPS IIIB, соответственно (фигуры 6C-6E), и ассоциируется со склонностью к ослаблению флуоресценции LysoTracker относительно контрольного уровня в фибробластах при аспартилглюкозаминурии, MLIIIA и MPS VII относительно необработанных фибробластов при аспартилглюкозаминурии, MLIIIA и MPS VII, соответственно (фигуры 6F-6H). Ослабление флуоресценции с LysoTracker является показателем снижения объема лизосом (фигуры 6C-6H). Данные, представленные на фигурах 6A-6D, показывают результаты обработки для каждой клеточной линии, соответственно, по объему лизосом, выраженном в кратном изменении относительно необработанных фибробластов дикого типа. Звездочки (*/****) показывают p-величины (<0,05/0,001) против необработанных фибробластов при заболевании.

Выводы

Обработка N-ацетил-DL-лейцином ассоциируется с очищением от нарушенного лизосомного накопления путем уменьшения объема лизосом и таким образом непосредственно корректирует фенотип таких болезней лизосомного накопления. Такие заболевания представляют различные классы ЛБН, и таким образом, такие результаты также подтверждают полезность действия ацетиллейцина против широкого ряда болезней лизосомного накопления.

Пример 3

Болезнь Сандхоффа представляет собой расстройство, которое может являться результатом аутосомно-рециссивного наследования мутаций в гене НЕХЕВ, который кодирует бета-субъединицу бета-гексозамидазы. В результате этого ганглиозид GM₂ не в состоянии разрушаться и накапливается в лизосомах в клетках периферической и центральной нервной системы (ЦНС).

В этом исследовании используется мышиная модель болезни Сандхоффа мышь Hexb^−/−, как описано в Jeyakumar et al. (Jeyakumar M. et al. (1999), Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 96: 6388-6393).

Мыши дикого типа (Hexb^+/+) используются в качестве контроля.

Продолжительность жизни

Обработка ацетил-DL-лейцином ассоциируется со статистически значимым увеличением продолжительности жизни у мышей с болезнью Сандхоффа (фигура 7А). На фигуре 7А обработанных ацетилейцином мышей обрабатывали 0,1 г/кг ацетилейцина с возраста 3 недели. Звездочка (*) показывает p-величину <0,05 vs необработанных мышей с болезнью Сандхоффа. Данные представляют среднее n=6 мышей на группу. Без обработки среднее время выживания мышей с болезнью Сандхоффа составляет 112 дней. Обработка ацетиллейцином (0,1 г/кг массы тела с возраста 3 недели) увеличивает среднюю продолжительность жизни до 120 дней.

Двигательная функция

Обработка мышей с болезнью Сандхоффа ацетиллейцином приводит к улучшениям двигательной функции, как показывает переход по бруску (bar crossing) и исследования шагового цикла.

Тест переход по бруску

Тест переход по бруску является методом оценки двигательной функции у мышей, в котором мышь подвешивают в центре горизонтального бруска за ее передние конечности. Мышь дикого типа с нормальной двигательной функцией будет способна зацепиться своими задними конечностями и посредством этого двигаться к одной из платформ у любого конца бруска и таким образом завершить испытание.

Необработанная мышь с болезнью Сандхоффа способна выполнять тест до возраста примерно 11 недель. После этой точки двигательная функция и подвижность/зацепление задних конечностей ухудшаются до точки, в которой мышь не может выполнить тест и будет падать с бруска на мягкую подстилку внизу.

Обработка мышиной модели болезни Сандхоффа ацетил-DL-лейцином (0,1 г/кг массы тела с возраста 3 недели) ассоциируется с улучшенной двигательной функцией и подвижностью/зацеплением задних конечностей при оценке тестом переход по бруску (фигура 7B). На фигуре 7B обработка ацетиллейцином при 0,1 г/кг массы тела представлена с возраста 3 недели. Обработанные ацетиллейцином мыши с болезнью Сандхоффа сохраняют способность выполнять тест до возраста 13 недель (включительно). Данные представляют среднее для 6 мышей на группу. Обработанные мыши с болезнью Сандхоффа сохраняют способность выполнять тест до возраста 13 недель (включительно).

Шаговый цикл

Шаговый цикл представляет собой промежуток времени, занимаемый во время локомоции конечностью, от времени, когда она отрывается от земли, до времени, когда она отрывается от земли в следующем случае.

Шаговый цикл оценивают в возрасте 12 недель на необработанной и обработанной ацетиллейцином мышиной модели болезни Сандхоффа. Обработка ацетиллейцином включает 0,1 г ацетиллейцина на кг массы тела с возраста 3 недели.

Обработка ацетиллейцином мышиной модели болезни Сандхоффа ассоциируется со значительно более коротким временем переднего шагового цикла (p<0,05 vs необработанной мыши с SH), со значительно более коротким временем заднего шагового цикла (p<0,01 vs необработанной мыши с SH) и значительно более коротким временем среднего шагового цикла (p<0,001 vs необработанной мыши с SH) (фигура 7C). На фигуре 7C обработку ацетиллейцином при 0,1 г/кг массы тела предоставлена с возраста 3 недели. Термин «передний шаговый цикл» относится к подъему передних конечностей мыши, «задний шаговый цикл» относится к подъему задних конечностей мыши, и средний шаговый цикл учитывает все конечности мыши. Звездочки asterisks (*/**/***) показывают p-величины \<0,05/0,01/0,001 против необработанной мыши с болезнью Сандхоффа. Данные приводятся как среднее ± ст.откл..

Таким образом, обработка ацетиллейцином мышиной модели болезни Сандхоффа ассоциируется с более быстрым шаговым циклом, что может указывать на улучшение в двигательной функции.

Выводы

Эти исследования показывают, что обработка ацетиллейцином мышиной модели болезни Сандхоффа может вызвать улучшения в двигательной функции при оценке двумя независимыми экспериментами, а также существенно увеличивает продолжительность жизни.

Пример 4

Ганглиозидозы GM₂ представляют собой группу лизосомных болезней накопления, возникающих из недостатков в активности β-гексозаминидазы. Группа охватывает болезнь Тея-Сакса, болезнь Сандхоффа и вариант АВ болезни Тея-Сакса.

Фибробласты, полученные от пациентов с GM₂ (болезнью Тея-Сакса, болезнью Сандхоффа и вариантом АВ болезни Тея-Сакса) и контрольных здоровых индивидуумов, обрабатывают ацетил-DL-лейцином (1 мM в течение 6 дней) перед экстрагированием и количественным определением уровней гликосфинголипида (GSL) высокоэффективной жидкостной хроматографией (ВЭЖХ)..

В отсутствие обработки фибробласты, полученные от пациентов со всеми 3 разновидностями ганглиозидоза GM₂, показывают повышенные уровни GSL при сравнении с необработанными контрольными дикого типа. Во всех 3 случаях обработка ацетил-DL-лейцином (1 мM в течение 6 дней) ассоциируется со снижением накопления GSL. В случае болезни Тея-Сакса это снижение является статистически значимым (p<0,05). В случае болезни Сандхоффа и варианта АВ болезни Тея-Сакса имеется тенденция к понижению уровней GSL в связи с обработкой. Данные, представленные на фигурах 8A-8C, показывают результаты обработки каждой клеточной линии, соответственно, с уровнями GSL, отрегулированными для содержания белка, и выражены в кратном изменении относительно уровней необработанных фибробластов дикого типа.

Пример 5

Пациент 1

Пациентом в этом исследовании является 28-летний мужчина, у которого генетически диагностирована болезнь Тея-Сакса, и который показывает дизастрофонию, тремор, атаксию в положении стоя и мышечную атрофию. В частности, пациент не способен стоять или ходить, может сделать отдельные шаги при хорошей поддержке, имеет явную постулярную неустойчивость, нарушение движения глаз, дисфагию и дизартрию и умеренное нарушение когнитивной функции. Первые симптомы наблюдались в возрасте 16 лет.

До начала лечения проверка пациента по шкале оценки и рейтинга атаксии (SARA) показала 15,5/40. Кроме того, для пациента получены результаты анализа функционального индекса спиноцеребеллярной атаксии (SCAFI):

тест средняя 8-meters Walking (8MW): 21.6 с;

тест MW 9-Hole Pegboard Test Dominant (9HPTD) (правые): 48,3 с;

тест MW 9-Hole Pegboard Test Non-Dominant (9HPTND): 44,9 с;

тест MW PATA Word Test: 20;

монреальская когнитивная оценка (MoCA): 18/30.

Также записывается видео пациента для последующего сравнения.

На следующий день после этой проверки пациенту начали терапию ацетиллейцином в дозе 3 г в день в течение первой недели и затем 5 г в день в течение второй недели поступательно.

Через один месяц и четыре месяца соответственно пациента проверяют повторно, продолжая лечение. Через один месяц у пациента улучшилась мелкая моторика и снизился тремор кистей рук, например, во время еды и питья. Ходьба заметно не изменилась. Через четыре месяца у пациента стабильное состояние с несколько улучшенной когнитивной функцией, но нарушениями положения стоя, походки и мелкой моторики. Оценки SARA пациента и результаты анализов SCAFI пациента приводятся ниже в сравнении с базовыми.

Таблица 1. Параметры оценки пациента

	База	Через один месяц с ацетил-DL-лейцином	Через 4 месяцев с ацетил-DL-лейцином
SARA	15,5/40	15,5/40	17/40
8MWT	21,6 с	7 с	25,49 с
9HPTD	48,3 с	45,9 с	48,67 с
9HPTND	44,9 с	40,1 с	47,09 с
PATA	20	22	21
MoCA	18/30	21/30	22/30

В целом пациент показывает улучшение симптомов после лечения ацетиллейцином.

Пациент 2

В этом исследовании пациентом является 32-летняя женщина, у которой генетически диагностирована болезнь Тея-Сакса, и которая показывает атаксию положения стоя и походки, нарушение мелкой моторики, парапарез нижних конечностей и мышечную атрофию. В частности, пациентка не может ходить без поддержки, и пациентка страдает от дисфагии и нарушения речи, нарушения движения глаз и умеренного нарушения когнитивной функции. Первые симптомы наблюдались в возрасте 7 лет.

До начала лечения проверка пациентки по шкале оценки и рейтинга атаксии (SARA) показала 10,5/40. Кроме того, для пациентки получены результаты анализа функционального индекса спиноцеребеллярной атаксии (SCAFI):

тест средняя 8-meters Walking (8MW): 12.5 с;

тест MW 9-Hole Pegboard Test Dominant (9HPTD) (правые): 21,5 с;

тест MW 9-Hole Pegboard Test Non-Dominant (9HPTND): 35,5 с;

тест MW PATA Word Test: 18;

монреальская когнитивная оценка (MoCA): 21/30.

Также записывается видео пациентки для последующего сравнения.

В день проверки пациентке начали терапию ацетиллейцином в дозе 3 г в день в течение первой недели и затем 5 г в день в течение второй недели поступательно.

Через один месяц пациентку проверяют повторно, продолжая лечение, и отмечают улучшенное произношение, улучшенную постуральную устойчивость и улучшенную когнитивную функцию. Положение стоя и ходьба стали возможны без поддержки. Оценки SARA пациентки и результаты анализов SCAFI пациентки приводятся ниже в сравнении с базовыми.

Таблица 2. Параметры оценки пациентки

	База	Через один месяц с ацетил-DL-лейцином
SARA	10,5/40	5/40
8MWT	12,5 с	9,55 с
9HPTD	21.5 с	34,97 с
9HPTND	35,5 с	39,34 с
PATA	18	17
MoCA	21/30	25/30

Пациент 3

В этом исследовании пациентом является 8-летний мальчик, у которого генетически диагностирована болезнь Тея-Сакса, и у которого имеются эпилептические судороги (большие, примерно 10 секунд, самоограниченные) почти каждый день до засыпания, нарушение движения глаз, анартрия, различные проблемы когнитивной функции и концентрирования (неврологическая проверка невозможна), не способный стоять или ходить сам и с очень ограниченными повседневными действиями (еда, умывание или одевание самим невозможно). Первые симптомы наблюдались в возрасте 9 месяцев.

До начала лечения проверка пациента по шкале оценки и рейтинга атаксии (SARA) показала 36/40, оценка по mRDS 18/24, визуальной шкале EQ-5D-5L 50 и 8MWT 18,1 (только при хорошей поддержке).

Пациенту начали терапию ацетиллейцином в дозе 1,5 г в день в течение первой недели и затем 3 г в день в течение второй недели поступательно.

Через один месяц пациента проверяют повторно, продолжая лечение, и отмечают улучшенную мелкую моторику (способен брать мелкие предметы), возросшую подвижность (чаще пытался гулять сам), улучшенную постуральную устойчивость, походку и положение стоя и способность произносить отдельные слова. Оценки пациента по SARA, mRDS, визуальной шкале EQ-5D-5L и 8MWT приводятся ниже в сравнении с базовыми.

Таблица 3. Параметры оценки пациента

	База	Через один месяц на ацетил-DL-лейцине
SARA	36/40	33/40
mRDS	18/24	16/24
Визуальная шкала EQ-5D-5L 8MWT	50	60
18,1 (только при хорошей поддержке)	11,75 (с опорой на одну руку)

Пример 6

В этом исследовании пациентом является 13-летний мальчик, у которого генетически диагностирован ганглиозидоз GM₁, и который не может сам стоять или ходить, и с ограниченными повседневными действиями (еда, умывание или одевание самостоятельно невозможны), и имеет нарушение движения глаз, анартрию и различные проблемы когнитивной функции и концентрирования (неврологическая проверка невозможна). Первые симптомы наблюдались в возрасте 2 лет.

До начала лечения проверка пациента по шкале оценки и рейтинга атаксии (SARA) показала 35/40, оценка по mRDS 15 и визуальной шкале EQ-5D-5L 50.

Пациенту начали терапию ацетиллейцином в дозе 1,5 г в день в течение первой недели и затем 3 г в день в течение второй недели поступательно.

Через один месяц пациента проверяют повторно, продолжая лечение, и отмечают общее стабильное состояние, улучшенную походку (более плавную) и устойчивое положение стоя в естественном позиции. Оценки пациента по SARA, mRDS и визуальной шкале EQ-5D-5L приводятся ниже в сравнении с базовыми.

Таблица 4. Параметры оценки пациента

	База	Через один месяц на ацетил-DL-лейцине
SARA	35/40	35/40
mRDS	15	16
Визуальная шкала EQ-5D-5L	50	60

Пример 7

Тяжесть NPC у пациента можно определить количественно, используя клиническую оценку тяжести (CSS), которая оценивает различные параметры заболевания и дает оценку каждому параметру до 5 (более высокая оценка = более высокая тяжесть). См. Yanjanin et al., “Linear Clinical Progression, Independent of Age of Onset, in Niemann-Pick Disease, Type C,” Am. J. Med. Genet. Part B, 153B: 132-140. Для пациента, которого не лечат, обычно может предсказать, как у индивидуума будет изменяться CSS со временем, так как развитие заболевания оказывается линейным. Например, если пациент А продвигается от CSS 8 до CSS 12 между месяцем 0 и месяцем 12, можно предсказать, что к месяцу 36 у пациента будет CSS 20. Годовая оценка увеличения тяжести (ASIS) количественно определяет годовую скорость изменения CSS, вычисляемую путем деления CSS пациента на возраст пациента. Например, если пациент В, которого не лечат, имел CSS 8 в возрасте два года, ASIS пациента может составить 4. Можно ожидать, что каждый гол у пациента CSS прогрессирует в 4 раза, так что в возрасте 4 лет CSS пациента может стать 16. Если терапевтическое вмешательство замедляет или останавливает развитие заболевания, можно ожидать, что пациент после такой терапии может иметь более низкую оценку ASIS, чем базовая.

Десяти пациентам с NPC вводят ацетиллейцин по 4,5 г/день в течение длительного периода. CSS определяют в начале (база) и в различные моменты времени для движения глаз, амбуляции, речи, глотания, мелкой моторики, познания, памяти и пароксизмам. Вычисляют общую CSS для базы и в каждый момент времени, складывая отдельные величины CSS для каждого параметра (движение глаз, амбуляция и т.д.). Число дней после начала терапии, когда определяют CSS, отличается для каждого пациента, как показано в таблице 5.

Таблица 5. Дни после начала введения ацетиллейцина, в которые оценивали CSS

Пациент, I.D	База (дни)	Момент времени 2 (дни)	Момент времени 3 (дни)	Момент времени 4 (дни)
1	0	126	231
2	0	119	200	297
3	0	91	240
4	0	107	196
5	0	78	238	414
6	0	184	238	414
7	0	81	165
8	0	90	217
9	0	400	644
10	0	83

Каждая из таблиц 6-14 ниже показывает CSS общую, для движения глаз, амбуляции, речи, глотания, мелкой моторики, познания, памяти и пароксизмов соответственно.

Таблица 6. Общая CSS

Клиническая оценка тяжести (CSS)
Пациент, I.D	База	Момент времени 2	Момент времени 3	Момент времени 4
1	11	11	10
2	33	33	33	33
3	13	12	11
4	13	13	10
5	12	12	12	12
6	21	23	21	21
7	19	19	19
8	13	12	11
9	22	22	21
10	14	11

Таблица 7. CSS для движения глаз

Клиническая оценка тяжести (CSS)
Пациент, I.D	База	Момент времени 2	Момент времени 3	Момент времени 4
1	3	3	3
2	3	3	3	3
3	3	3	3
4	2	2	2
5	3	3	3	3
6	3	3	3	3
7	3	3	3
8	3	3	2
9	3	3	3
10	3	3

Таблица 8. CSS для амбуляции

Клиническая оценка тяжести (CSS)
Пациент, I.D	База	Момент времени 2	Момент времени 3	Момент времени 4
1	2	2	1
2	5	5	5	5
3	1	1	1
4	2	2	1
5	1	1	1	1
6	2	4	2	2
7	2	2	2
8	1	1	1
9	2	2	2
10	2	2

Таблица 9. CSS для речи

Клиническая оценка тяжести (CSS)
Пациент, I.D	База	Момент времени 2	Момент времени 3	Момент времени 4
1	1	1	1
2	2	2	2	2
3	1	1	1
4	2	2	1
5	1	1	1	1
6	2	2	2	2
7	1	1	1
8	1	1	1
9	2	2	2
10	1	1

Таблица 10. CSS для глотания

Клиническая оценка тяжести (CSS)
Пациент, I.D	База	Момент времени 2	Момент времени 3	Момент времени 4
1	0	0	0
2	4	4	4	4
3	2	2	2
4	2	2	2
5	2	2	2	2
6	3	3	3	3
7	3	3	3
8	2	2	2
9	3	3	3
10	2	2

Таблица 11. CSS для мелкой моторики

Клиническая оценка тяжести (CSS)
Пациент, I.D	База	Момент времени 2	Момент времени 3	Момент времени 4
1	1	1	1
2	5	5	5	5
3	2	1	1
4	1	1	1
5	1	1	1	1
6	4	4	4	4
7	2	2	2
8	2	1	1
9	4	4	4
10	1	1

Таблица 12. CSS для познания

Клиническая оценка тяжести (CSS)
Пациент, I.D	База	Момент времени 2	Момент времени 3	Момент времени 4
1	3	3	3
2	5	5	5	5
3	3	3	3
4	3	3	3
5	3	3	3	3
6	4	4	4	4
7	4	4	4
8	3	3	3
9	4	4	4
10	3	2

Таблица 13. CSS для памяти

Клиническая оценка тяжести (CSS)
Пациент, I.D	База	Момент времени 2	Момент времени 3	Момент времени 4
1	1	1	1
2	4	4	4	4
3	1	1	0
4	1	1	0
5	1	1	1	1
6	3	3	3	3
7	4	4	4
8	1	1	1
9	4	4	3
10	2	0

Таблица 14. CSS для пароксизмов

Клиническая оценка тяжести (CSS)
Пациент, I.D	База	Момент времени 2	Момент времени 3	Момент времени 4
1	0	0	0
2	5	5	5	5
3	0	0	0
4	0	0	0
5	0	0	0	0
6	0	0	0	0
7	0	0	0
8	0	0	0
9	0	0	0
10	0	0

ASSIS для базы и каждого момента времени вычисляют с использованием каждой CSS пациента и возраста на время оценки. Общая ASIS для каждого пациента в каждый момент времени приводится ниже в таблице 15.

Таблица 15. Общая ASSIS

Годовые оценки увеличения тяжести (ASIS)
База	Момент времени 2	Момент времени 3	Момент времени 4
0,381371618	0,376864272	0,339262493
1,94125463	1,904748736	1,880675612	1,852636028
0,65	0,592617631	0,53250497
0,481909063	0,476731928	0,363469002
0,433188377	0,429874461	0,423232908	0,416160273
0,561964246	0,607297766	0,552333117	0,545420607
0,536675431	0,533334614	0,529913714
0,486750384	0,445200609	0,402903129
0,738624874	0,71243018	0,665646967
0,595597228	0,406038403

Как видно из таблицы 6 и фигуры 9A, ни один из десяти пациентов не показывает общее повышение CSS в ходе эксперимента. Пациент 6 показывает повышенную CSS между базой и моментом времени 2, но возвращается к величине для базы в момент времени 3 и остается с ней на момент времени 4. Четверо из десяти пациентов (пациенты 2, 5, 6 и 7) имеют постоянную CSS в ходе эксперимента, что показывает, что у этих индивидуумов заболевание не прогрессирует. Шестеро из десяти пациентов (пациенты 1, 3, 4, 8, 9 и 10) показывают снижение CSS в ходе эксперимента, что показывает, что заболевание не прогрессирует и фактически становится менее тяжелым. Улучшения видны в различных субоценках: у пациента 1 для амбуляции; у пациента 3 для мелкой моторики; у пациента 4 для амбуляции и речи; у пациента 8 для движения глаз и мелкой моторики; у пациента 9 для памяти; у пациента 10 для познания. Данные, представленные на фигурах 10A-10J, показывают субоценки для каждого пациента соответственно в форме столбиковой диаграммы.

Как видно из таблицы 5 и фигуры 9В, все десять пациентов показывают снижение ASIS во время лечения относительно ASIS для базы. У пациентов 2, 5, 6 и 7 CSS остается такой же с возрастом, что приводит к небольшому снижению ASIS. У пациентов 1, 3, 4, 8, 9 и 10 снижение ASIS больше из-за снижения CSS с возрастом.

1. Применение ацетиллейцина или его фармацевтически приемлемой соли для лечения лизосомной болезни накопления (ЛБН) или одного или нескольких симптомов, связанных с ЛБН, у субъекта, нуждающегося в этом, причем ЛБН не является болезнью Ниманна-Пика типа С.

2. Применение по п. 1, причем ЛБН выбирают из болезни накопления гликогена, мукополисахаридоза, муколипидоза, олигосахаридоза, липидоза, сфинголипидоза и лизосомных болезней переноса.

3. Применение по п. 1, причем ЛБН выбирают из недостатка гидролазы первичной лизосомы, дефекта посттрансляционного процессинга лизосомных ферментов, дефекта переноса лизосомных ферментов, дефекта защиты лизосомных ферментов, недостатка растворимых неферментных лизосомных белков, недостатка трансмембранного (неферментного) белка и неклассифицированного дефекта.

4. Применение по п. 1, причем ЛБН выбирают из болезни Тея-Сакса, варианта AB болезни Тея-Сакса, болезни Сандхоффа, болезни Ниманна-Пика типа A, болезни Ниманна-Пика типа B, болезни Фабри, нейронального цероидного липофусциноза, болезни Краббе, болезни Фарбера, болезни Гоше, метахроматической лейкодистрофии, множественной сульфатазной недостаточности, муколипидоза II, муколипидоза III, MPS III, MPS VII, ганглиозидоза GM1 и аспартилглюкозаминурии.

5. Применение по п. 1 для задержки появления ЛБН или одного или нескольких симптомов ЛБН, которые в ином случае, как можно ожидать, проявятся согласно типичному развитию заболевания.

6. Применение по п. 1 для реверсии развития со временем ЛБН или одного или нескольких симптомов, связанных с ЛБН, причем субъекту, нуждающемуся в этом, вводят терапевтически эффективное количество ацетиллейцина в течение периода, выбранного из по меньшей мере примерно 3 месяцев, по меньшей мере примерно 6 месяцев, по меньшей мере примерно 1 года, по меньшей мере примерно 2 лет и по меньшей мере примерно 5 лет.

7. Применение по п. 1 для улучшения у субъекта, нуждающегося в этом, биохимического маркера ЛБН со временем, причем субъекту, нуждающемуся в этом, вводят терапевтически эффективное количество ацетиллейцина в течение периода, выбранного из по меньшей мере примерно 3 месяцев, по меньшей мере примерно 6 месяцев, по меньшей мере примерно 1 года, по меньшей мере примерно 2 лет и по меньшей мере примерно 5 лет.

8. Применение по п. 7, причем биохимическим маркером является повышенный объем лизосом.

9. Применение по любому из пп. 1-8, причем терапевтически эффективное количество ацетиллейцина вводят субъекту, нуждающемуся в этом, когда субъект является бессимптомным.

10. Применение по п. 9, причем начальное введение происходит после того, как обнаружат, что субъект имеет генетический и/или биохимический маркер ЛБН.

11. Применение по любому из пп. 1-5, причем субъекту, нуждающемуся в этом, вводят терапевтически эффективное количество ацетиллейцина в течение периода, выбранного из по меньшей мере примерно 3 месяцев, по меньшей мере примерно 6 месяцев, по меньшей мере примерно 1 года, по меньшей мере примерно 2 лет и по меньшей мере примерно 5 лет.

12. Применение по любому из пп. 1-11, причем ацетиллейцин представляет собой ацетил-DL-лейцин.

13. Применение по любому из пп. 1-11, причем ацетиллейцин имеет энантиомерный избыток или L-энантиомера, или D-энантиомера.

14. Применение по любому из пп. 1-11, причем ацетиллейцин представляет собой одну энантиомерную форму или L-энантиомера, или D-энантиомера.

15. Применение по любому из пп. 1-11, причем ацетиллейцин вводят субъекту, нуждающемуся в этом, в терапевтически эффективном количестве от примерно 1 г до примерно 15 г в день, от примерно 1 г до примерно 10 г в день, от примерно 1,5 г до примерно 7 г в день, от примерно 4 г до примерно 6 г в день или от примерно 4 г до примерно 5 г в день.

16. Применение по п. 1 для снижения тяжести ЛБН или снижения тяжести или устранения одного или нескольких существующих симптомов, связанных с ЛБН, у субъекта, нуждающегося в этом.