Лечение злокачественного новообразования с использованием гуманизированного химерного антигенного рецептора против всма

Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к выделенной молекуле нуклеиновой кислоты, кодирующей химерный антигенный рецептор (CAR), а также к содержащим ее вектору и клетке. Также раскрыт выделенный полипептид химерного антигенного рецептора (CAR), который связывается с BCMA, а также выделенный связывающий домен против B-клеточного антигена созревания (BCMA), который связывается с BCMA. Изобретение также относится к способу получения иммунной эффекторной клетки, а также к способу получения популяции РНК-сконструированных клеток, предусматривающим использование вышеуказанной молекулы нуклеиновой кислоты. Изобретение эффективно для лечения млекопитающего, имеющего заболевание, ассоциированное с экспрессией BCMA, а также для достижения противоопухолевого иммунитета у млекопитающего, имеющего заболевание, ассоциированное с экспрессией BCMA. 10 н. и 43 з.п. ф-лы, 47 ил., 27 табл., 17 пр.

 

По настоящей заявке испрашивается приоритет по заявке PCT № PCT/CN2014/090501, зарегистрированной 6 ноября 2014 года, и заявке PCT № PCT/CN2014/082586, зарегистрированной 21 июля 2014 года. Полное содержание этих заявок включено в настоящее описание в качестве ссылок.

СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

Настоящая заявка содержит список последовательностей, поданный в электронном виде в формате ASCII и включенный, таким образом, в качестве ссылки в полном объеме. Указанная копия ASCII, созданная 15 июля 2015 года, названа N2067-7045WO3_SL.txt и имеет размер 771026 байтов.

ОБЛАСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение, в основном, относится к применению иммунных эффекторных клеток (например, T-клеток, NK-клеток), сконструированных для экспрессии химерного антигенного рецептора (CAR), для лечения заболевания, ассоциированного с экспрессией B-клеточного антигена созревания (BCMA).

ПРЕДПОСЫЛКИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

B-клеточный антиген созревания (BCMA) является членом семейства рецепторов фактора некроза опухолей (TNFR), экспрессируемым клетками B-клеточной линии. Экспрессия BCMA является наиболее высокой на окончательно дифференцированных B-клетках. BCMA участвует в опосредовании выживания плазматических клеток для поддержания длительного гуморального иммунитета. В последнее время экспрессию BCMA связывают с рядом злокачественных новообразований, аутоиммунных нарушений и инфекционных заболеваний. Злокачественные новообразования с повышенной экспрессией BCMA включают некоторые гемобластозы, такие как множественная миелома, лимфома Ходжкина и неходжкинская лимфома, различные лейкозы и глиобластома.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

В первом аспекте изобретение относится к выделенной молекуле нуклеиновой кислоты, кодирующей химерный антигенный рецептор (CAR), где CAR содержит антитело или фрагмент антитела, включающий связывающий домен человека против BCMA или гуманизированный связывающий домен против BCMA, трансмембранный домен и внутриклеточный сигнальный домен (например, внутриклеточный сигнальный домен, содержащий костимуляторный домен и/или первичный сигнальный домен). В одном из вариантов осуществления CAR содержит антитело или фрагмент антитела, включающий связывающий домен человека против BCMA, представленный в настоящем описании, или гуманизированный связывающий домен против BCMA, представленный в настоящем описании, трансмембранный домен, представленный в настоящем описании, и внутриклеточный сигнальный домен, представленный в настоящем описании (например, внутриклеточный сигнальный домен, содержащий костимуляторный домен и/или первичный сигнальный домен).

В одном из вариантов осуществления кодируемый BCMA-связывающий домен (например, человеческий или гуманизированный связывающий домен против BCMA) содержит одну или более (например, все три) из определяющей комплементарность области легкой цепи 1 (CDR1 LC), определяющей комплементарность области легкой цепи 2 (CDR2 LC) и определяющей комплементарность области легкой цепи 3 (CDR3 LC) человеческого или гуманизированного связывающего домена против BCMA, представленного в настоящем описании, и/или одну или более (например, все три) из определяющей комплементарность области тяжелой цепи 1 (CDR1 HC), определяющей комплементарность области тяжелой цепи 2 (CDR2 HC) и определяющей комплементарность области тяжелой цепи 3 (CDR3 HC) связывающего домена против BCMA, представленного в настоящем описании, например, человеческого или гуманизированного связывающего домена против BCMA, содержащего одну или более, например, все три, CDR LC и одну или более, например, все три, CDR HC. В одном из вариантов осуществления кодируемый связывающий домен человека против BCMA содержит вариабельную область легкой цепи, представленную в настоящем описании (например, в таблице 1), и/или вариабельную область тяжелой цепи, представленную в настоящем описании (например, в таблице 1). В одном из вариантов осуществления кодируемый гуманизированный связывающий домен против BCMA содержит вариабельную область легкой цепи, приведенную в SEQ ID NO: 271 или 273, и/или вариабельную область тяжелой цепи, приведенную в SEQ ID NO: 271 или 273. В одном из вариантов осуществления кодируемый связывающий домен человека против BCMA является scFv, содержащим легкую цепь и тяжелую цепь с аминокислотной последовательностью из таблицы 1. В одном из вариантов осуществления кодируемый гуманизированный связывающий домен против BCMA является scFv, содержащим легкую цепь и тяжелую цепь с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 271 или 273. В варианте осуществления человеческий или гуманизированный связывающий домен против BCMA (например, scFv) содержит: вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере одну, две или три модификации (например, замены, например, консервативные замены), но не более 30, 20 или 10 модификаций (например, замен, например, консервативных замен) аминокислотной последовательности вариабельной области легкой цепи, представленной в таблице 1 или SEQ ID NO: 271 или 273, или последовательность с 95-99% идентичности по отношению к аминокислотной последовательности из таблицы 1 или SEQ ID NO: 271 или 273, и/или вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере одну, две или три модификации (например, замены, например, консервативные замены), но не более 30, 20 или 10 модификаций (например, замен, например, консервативных замен) аминокислотной последовательности вариабельной области тяжелой цепи, представленной в таблице 1 или SEQ ID NO: 271 или 273, или последовательность с 95-99% идентичности по отношению к аминокислотной последовательности из таблицы 1. В одном из вариантов осуществления кодируемый связывающий домен человека против BCMA содержит последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 39, SEQ ID NO: 40, SEQ ID NO: 41, SEQ ID NO: 42, SEQ ID NO: 43, SEQ ID NO: 44, SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 47, SEQ ID NO: 48, SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 129, SEQ ID NO: 130, SEQ ID NO: 131, SEQ ID NO: 132, SEQ ID NO: 133, SEQ ID NO: 134, SEQ ID NO: 135, SEQ ID NO: 136, SEQ ID NO: 137, SEQ ID NO: 138, SEQ ID NO: 139, SEQ ID NO: 140, SEQ ID NO: 141, SEQ ID NO: 142, SEQ ID NO: 143, SEQ ID NO: 144, SEQ ID NO: 145, SEQ ID NO: 146, SEQ ID NO: 147, SEQ ID NO: 148, и SEQ ID NO: 149, или последовательность с 95-99% идентичности по отношению к ним. В одном из вариантов осуществления кодируемый гуманизированный связывающий домен против BCMA содержит последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 271 или SEQ ID NO: 273, или последовательность с 95-99% идентичности по отношению к ним. В одном из вариантов осуществления кодируемый человеческий или гуманизированный связывающий домен против BCMA включает линкер (Gly4-Ser)n, где n является 1, 2, 3, 4, 5 или 6, предпочтительно - 3 или 4 (SEQ ID NO: 26). Вариабельная область легкой цепи и вариабельная область тяжелой цепи scFv могут находиться, например, в любой из следующих ориентаций: вариабельная область легкой цепи-линкер-вариабельная область тяжелой цепи или вариабельная область тяжелой цепи-линкер-вариабельная область легкой цепи.

В других вариантах осуществления кодируемый BCMA-связывающий домен содержит CDR1 HC, CDR2 HC и CDR3 HC из любых аминокислотных последовательностей тяжелой цепи BCMA-связывающего домена, представленных в таблице 1 или 16. В вариантах осуществления BCMA-связывающий домен дополнительно содержит CDR1 LC, CDR2 LC и CDR3 LC. В вариантах осуществления BCMA-связывающий домен содержит CDR1 LC, CDR2 LC и CDR3 LC из любых аминокислотных последовательностей легкой цепи BCMA-связывающего домена, представленных в таблице 1 или 16.

В некоторых вариантах осуществления кодируемый BCMA-связывающий домен содержит одну, две или все из CDR1 LC, CDR2 LC и CDR3 LC из любых аминокислотных последовательностей легкой цепи BCMA-связывающего домена, представленных в таблице 1 или 16, и одну, две или все из CDR1 HC, CDR2 HC и CDR3 HC из любых аминокислотных последовательностей тяжелой цепи BCMA-связывающего домена, представленных в таблице 1 или 16.

В одном из вариантов осуществления кодируемый связывающий домен против BCMA содержит вариабельную область легкой цепи, представленную в настоящем описании (например, в таблице 16), и/или вариабельную область тяжелой цепи, представленную в настоящем описании (например, в таблице 16). В одном из вариантов осуществления кодируемый гуманизированный связывающий домен против BCMA содержит вариабельную область легкой цепи, приведенную в SEQ ID NO: 259, SEQ ID NO: 260, SEQ ID NO: 261, SEQ ID NO: 262, и/или вариабельную область тяжелой цепи, приведенную в SEQ ID NO: 255, SEQ ID NO: 256, SEQ ID NO: 257, SEQ ID NO: 258. В одном из вариантов осуществления кодируемый связывающий домен против BCMA является scFv, содержащим легкую цепь и тяжелую цепь с аминокислотной последовательностью из таблицы 16. В варианте осуществления человеческий или гуманизированный связывающий домен против BCMA (например, scFv) содержит: вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере одну, две или три модификации (например, замены, например, консервативные замены), но не более 30, 20 или 10 модификаций (например, замен, например, консервативных замен) аминокислотной последовательности вариабельной области легкой цепи, приведенной в SEQ ID NO: 259, SEQ ID NO: 260, SEQ ID NO: 261, SEQ ID NO: 262, или последовательности с 95-99% идентичности по отношению к ним, и/или вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере одну, две или три модификации (например, замены, например, консервативные замены), но не более 30, 20 или 10 модификаций (например, замен, например, консервативных замен) аминокислотной последовательности вариабельной области тяжелой цепи, приведенной в SEQ ID NO: 255, SEQ ID NO: 256, SEQ ID NO: 257, SEQ ID NO: 258, или последовательности с 95-99% идентичности по отношению к ним. В одном из вариантов осуществления кодируемый связывающий домен против BCMA включает (Gly4-Ser)n линкер, где n является 1, 2, 3, 4, 5 или 6, предпочтительно - 3 или 4 (SEQ ID NO: 26). Вариабельная область легкой цепи и вариабельная область тяжелой цепи scFv может находиться, например, в любой из следующих ориентаций: вариабельная область легкой цепи-линкер-вариабельная область тяжелой цепи или вариабельная область тяжелой цепи-линкер-вариабельная область легкой цепи.

В одном из вариантов осуществления кодируемый связывающий домен человека против BCMA содержит последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 263, SEQ ID NO: 264, SEQ ID NO: 265 и SEQ ID NO: 266, или последовательность с 95-99% идентичности по отношению к ним.

В одном из вариантов осуществления кодируемый CAR включает трансмембранный домен, содержащий трансмембранный домен белка, например, представленный в настоящем описании, например, выбранный из группы, состоящей из альфа-, бета- или дзета-цепи T-клеточного рецептора, CD28, CD3 эпсилон, CD45, CD4, CD5, CD8, CD9, CD16, CD22, CD33, CD37, CD64, CD80, CD86, CD134, CD137 и CD154. В одном из вариантов осуществления кодируемый трансмембранный домен содержит последовательность SEQ ID NO: 6. В одном из вариантов осуществления кодируемый трансмембранный домен содержит аминокислотную последовательность, содержащую, по меньшей мере, одну, две или три модификации, но не более 20, 10 или 5 модификаций аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 6, или последовательность с 95-99% идентичности по отношению к аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 6. В одном из вариантов осуществления последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая трансмембранный домен, содержит последовательность SEQ ID NO: 17 или последовательность с 95-99% идентичности по отношению к ней.

В одном из вариантов осуществления кодируемый связывающий домен против BCMA соединяют с трансмембранным доменом посредством шарнирной области, например, шарнирной области, представленной в настоящем описании. В одном из вариантов осуществления кодируемая шарнирная область содержит SEQ ID NO: 2 или последовательность с 95-99% идентичности по отношению к ней. В одном из вариантов осуществления последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая шарнирную область, содержит последовательность SEQ ID NO: 13 или последовательность с 95-99% идентичности по отношению к ней.

В одном из вариантов осуществления выделенная молекула нуклеиновой кислоты дополнительно содержит последовательность, кодирующую костимуляторный домен, например, костимуляторный домен, представленный в настоящем описании. В вариантах осуществления внутриклеточный сигнальный домен содержит костимуляторный домен. В вариантах осуществления внутриклеточный сигнальный домен содержит первичный сигнальный домен. В вариантах осуществления внутриклеточный сигнальный домен содержит один или более (например, один или более, два или более, или три или более) из костимуляторного домена и первичного сигнального домена.

В одном из вариантов осуществления кодируемый костимуляторный домен является функциональным сигнальным доменом, полученным из белка, например, представленного в настоящем описании, например, выбранного из группы, состоящей из молекулы MHC класса I, белков рецепторов ФНО, иммуноглобулин-подобных белков, рецепторов цитокинов, интегринов, сигнальных молекул активации лимфоцитов (белков SLAM), активирующих рецепторов NK-клеток, BTLA, рецептора Толл-лиганда, OX40, CD2, CD7, CD27, CD28, CD30, CD40, CDS, ICAM-1, LFA-1 (CD11a/CD18), 4-1BB (CD137), B7-H3, CDS, ICAM-1, ICOS (CD278), GITR, BAFFR, LIGHT, HVEM (LIGHTR), KIRDS2, SLAMF7, NKp80 (KLRF1), NKp44, NKp30, NKp46, CD19, CD4, CD8 альфа, CD8 бета, IL2R бета, IL2R гамма, IL7R альфа, ITGA4, VLA1, CD49a, ITGA4, IA4, CD49D, ITGA6, VLA-6, CD49f, ITGAD, CD11d, ITGAE, CD103, ITGAL, CD11a, LFA-1, ITGAM, CD11b, ITGAX, CD11c, ITGB1, CD29, ITGB2, CD18, LFA-1, ITGB7, NKG2D, NKG2C, TNFR2, TRANCE/RANKL, DNAM1 (CD226), SLAMF4 (CD244, 2B4), CD84, CD96 (Tactile), CEACAM1, CRTAM, Ly9 (CD229), CD160 (BY55), PSGL1, CD100 (SEMA4D), CD69, SLAMF6 (NTB-A, Ly108), SLAM (SLAMF1, CD150, IPO-3), BLAME (SLAMF8), SELPLG (CD162), LTBR, LAT, GADS, SLP-76, PAG/Cbp, CD19a и лиганда, специфически связывающегося с CD83. В вариантах осуществления кодируемый костимуляторный домен содержит 4-1BB, CD27, CD28 или ICOS.

В одном из вариантов осуществления кодируемый костимуляторный домен 4-1BB содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7. В одном из вариантов осуществления кодируемый костимуляторный домен содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере одну, две или три модификации, но не более 20, 10 или 5 модификаций аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 7, или последовательность с 95-99% идентичности по отношению к аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 7. В одном из вариантов осуществления последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая костимуляторный домен, содержит нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 18 или последовательность с 95-99% идентичности по отношению к ней. В другом варианте осуществления кодируемый костимуляторный домен CD28 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1104. В одном из вариантов осуществления кодируемый костимуляторный домен содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере одну, две или три модификации, но не более 20, 10 или 5 модификаций аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1104, или последовательность с 95-99% идентичности по отношению к аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1104. В одном из вариантов осуществления последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая костимуляторный домен CD28, содержит нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 1105 или последовательность с 95-99% идентичности по отношению к ней. В другом варианте осуществления кодируемый костимуляторный домен CD27 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8. В одном из вариантов осуществления кодируемый костимуляторный домен содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере одну, две или три модификации, но не более 20, 10 или 5 модификаций аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 8, или последовательность с 95-99% идентичности по отношению к аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 8. В одном из вариантов осуществления последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая костимуляторный домен CD27, содержит нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 19 или последовательность с 95-99% идентичности по отношению к ней. В другом варианте осуществления кодируемый костимуляторный домен ICOS содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1106. В одном из вариантов осуществления кодируемый костимуляторный домен содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере одну, две или три модификации, но не более 20, 10 или 5 модификаций аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1106, или последовательность с 95-99% идентичности по отношению к аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1106. В одном из вариантов осуществления последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая костимуляторный домен ICOS, содержит нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 1107 или последовательность с 95-99% идентичности по отношению к ней.

В вариантах осуществления кодируемый первичный сигнальный домен содержит функциональный сигнальный домен CD3 дзета. В вариантах осуществления функциональный сигнальный домен CD3 дзета содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9 (мутантный CD3 дзета) или SEQ ID NO: 10 (CD3 дзета человека дикого типа) или последовательность с 95-99% идентичности по отношению к ним.

В одном из вариантов осуществления кодируемый внутриклеточный сигнальный домен содержит функциональный сигнальный домен 4-1BB и/или функциональный сигнальный домен CD3 дзета. В одном из вариантов осуществления кодируемый внутриклеточный сигнальный домен 4-1BB содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7 и/или аминокислотную последовательность CD3 дзета SEQ ID NO: 9 или SEQ ID NO: 10. В одном из вариантов осуществления внутриклеточный сигнальный домен содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере одну, две или три модификации, но не более 20, 10 или 5 модификаций аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 7 и/или аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 9 или SEQ ID NO: 10, или последовательность с 95-99% идентичности по отношению к аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 7 и/или аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 9 или SEQ ID NO: 10. В одном из вариантов осуществления кодируемый внутриклеточный сигнальный домен содержит последовательность SEQ ID NO: 7 и последовательность SEQ ID NO: 9 или SEQ ID NO: 10, где последовательности, содержащие внутриклеточный сигнальный домен экспрессируются в одной и той же рамке считывания и в виде единой полипептидной цепи. В одном из вариантов осуществления последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая внутриклеточный сигнальный домен 4-1BB, содержит нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 18, или последовательность с 95-99% идентичности по отношению к ней, и/или нуклеотидную последовательность CD3 дзета SEQ ID NO: 20 или SEQ ID NO: 21, или последовательность с 95-99% идентичности по отношению к ним.

В одном из вариантов осуществления кодируемый внутриклеточный сигнальный домен содержит функциональный сигнальный домен CD27 и/или функциональный сигнальный домен CD3 дзета. В одном из вариантов осуществления кодируемый внутриклеточный сигнальный домен CD27 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8 и/или аминокислотную последовательность CD3 дзета SEQ ID NO: 9 или SEQ ID NO: 10. В одном из вариантов осуществления внутриклеточный сигнальный домен содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере одну, две или три модификации, но не более 20, 10 или 5 модификаций аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 8 и/или аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 9 или SEQ ID NO: 10, или последовательность с 95-99% идентичности по отношению к аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 8 и/или аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 9 или SEQ ID NO: 10. В одном из вариантов осуществления кодируемый внутриклеточный сигнальный домен содержит последовательность SEQ ID NO: 8 и последовательность SEQ ID NO: 9 или SEQ ID NO: 10, где последовательности, содержащие внутриклеточный сигнальный домен, экспрессируются в одной и той же рамке считывания и в виде единой полипептидной цепи. В одном из вариантов осуществления последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая внутриклеточный сигнальный домен CD27, содержит нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 19, или последовательность с 95-99% идентичности по отношению к ней, и/или нуклеотидную последовательность CD3 дзета SEQ ID NO: 20 или SEQ ID NO: 21, или последовательность с 95-99% идентичности по отношению к ним.

В одном из вариантов осуществления кодируемый внутриклеточный сигнальный домен содержит функциональный сигнальный домен CD28 и/или функциональный сигнальный домен CD3 дзета. В одном из вариантов осуществления кодируемый внутриклеточный сигнальный домен CD28 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1104 и/или аминокислотную последовательность CD3 дзета SEQ ID NO: 9 или SEQ ID NO: 10. В одном из вариантов осуществления внутриклеточный сигнальный домен содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере одну, две или три модификации, но не более 20, 10 или 5 модификаций аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1104 и/или аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 9 или SEQ ID NO: 10, или последовательность с 95-99% идентичности по отношению к аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1104 и/или аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 9 или SEQ ID NO: 10. В одном из вариантов осуществления кодируемый внутриклеточный сигнальный домен содержит последовательность SEQ ID NO: 1104 и последовательность SEQ ID NO: 9 или SEQ ID NO: 10, где последовательности, содержащие внутриклеточный сигнальный домен, экспрессируются в одной и той же рамке считывания и в виде единой полипептидной цепи. В одном из вариантов осуществления последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая внутриклеточный сигнальный домен CD28, содержит нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 1105, или последовательность с 95-99% идентичности по отношению к ним, и/или нуклеотидную последовательность CD3 дзета SEQ ID NO: 20 или SEQ ID NO: 21, или последовательность с 95-99% идентичности по отношению к ним.

В одном из вариантов осуществления кодируемый внутриклеточный сигнальный домен содержит функциональный сигнальный домен ICOS и/или функциональный сигнальный домен CD3 дзета. В одном из вариантов осуществления кодируемый внутриклеточный сигнальный домен ICOS содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1106 и/или аминокислотную последовательность CD3 дзета SEQ ID NO: 9 или SEQ ID NO: 10. В одном из вариантов осуществления внутриклеточный сигнальный домен содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере одну, две или три модификации, но не более 20, 10 или 5 модификаций аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1106 и/или аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 9 или SEQ ID NO: 10, или последовательность с 95-99% идентичности по отношению к аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1106 и/или аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 9 или SEQ ID NO: 10. В одном из вариантов осуществления кодируемый внутриклеточный сигнальный домен содержит последовательность SEQ ID NO: 1106 и последовательность SEQ ID NO: 9 или SEQ ID NO: 10, где последовательности, содержащие внутриклеточный сигнальный домен, экспрессируются в одной и той же рамке считывания и в виде единой полипептидной цепи. В одном из вариантов осуществления последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая внутриклеточный сигнальный домен ICOS, содержит нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 1107, или последовательность с 95-99% идентичности по отношению к ним, и/или нуклеотидную последовательность CD3 дзета SEQ ID NO: 20 или SEQ ID NO: 21, или последовательность с 95-99% идентичности по отношению к ним.

В другом аспекте изобретение относится к выделенной молекуле нуклеиновой кислоты, кодирующей конструкцию CAR, содержащую лидерную последовательность, например, лидерную последовательность, представленную в настоящем описании, например, аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1, связывающий домен против BCMA, представленный в настоящем описании, например, связывающий домен человека против BCMA, содержащий CDR1 LC, CDR2 LC, CDR3 LC, CDR1 HC, CDR2 HC и CDR3 HC, представленный в настоящем описании (например, связывающий домен человека против BCMA, описываемый в таблице 1 или 16), или последовательность с 95-99% идентичности по отношению к нему, шарнирную область, представленную в настоящем описании, например, аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2, трансмембранный домен, представленный в настоящем описании, например, имеющий последовательность SEQ ID NO: 6, и внутриклеточный сигнальный домен, например, внутриклеточный сигнальный домен, представленный в настоящем описании. В одном из вариантов осуществления кодируемый внутриклеточный сигнальный домен содержит костимуляторный домен, например, костимуляторный домен, представленный в настоящем описании (например, костимуляторный домен 4-1BB, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7, или костимуляторный домен CD27, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8), и/или первичный сигнальный домен, например, первичный сигнальный домен, представленный в настоящем описании, (например, стимуляторный домен CD3 дзета, имеющий последовательность SEQ ID NO: 9 или SEQ ID NO: 10). В одном из вариантов осуществления выделенная молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая конструкцию CAR, включает лидерную последовательность, кодируемую последовательностью нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 1, или последовательностью с 95-99% идентичности по отношению к ней.

В другом аспекте изобретение относится к выделенной молекуле нуклеиновой кислоты, кодирующей конструкцию CAR, содержащую лидерную последовательность, например, лидерную последовательность, представленную в настоящем описании, например, аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1, связывающий домен против BCMA, представленный в настоящем описании (например, гуманизированный связывающий домен против BCMA, содержащий CDR1 LC, CDR2 LC, CDR3 LC, CDR1 HC, CDR2 HC и/или CDR3 HC, представленный в настоящем описании, например, гуманизированный связывающий домен против BCMA, представленный в настоящем описании (например, гуманизированный связывающий домен против BCMA, содержащий последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 271 или SEQ ID NO: 273), или последовательность с 95-99% идентичности по отношению к нему), шарнирную область, представленную в настоящем описании, например, аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2, трансмембранный домен, представленный в настоящем описании, например, имеющий последовательность SEQ ID NO: 6, и внутриклеточный сигнальный домен, например, внутриклеточный сигнальный домен, представленный в настоящем описании. В одном из вариантов осуществления кодируемый внутриклеточный сигнальный домен содержит костимуляторный домен, например, костимуляторный домен, представленный в настоящем описании (например, костимуляторный домен 4-1BB, имеющий последовательность SEQ ID NO: 7), и/или первичный сигнальный домен, например, первичный сигнальный домен, представленный в настоящем описании (например, стимуляторный домен CD3 дзета, имеющий последовательность SEQ ID NO: 9 или SEQ ID NO: 10). В одном из вариантов осуществления выделенная молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая конструкцию CAR, включает лидерную последовательность, кодируемую последовательностью нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 1 или последовательностью с 95-99% идентичности по отношению к ней.

В одном из вариантов осуществления выделенная молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая конструкцию CAR, включает последовательность связывающего домена человека против BCMA, кодируемую последовательностью нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 56, SEQ ID NO: 57, SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 59, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 61, SEQ ID NO: 62, SEQ ID NO: 63, SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 67, SEQ ID NO: 68, SEQ ID NO: 150, SEQ ID NO: 151, SEQ ID NO: 152, SEQ ID NO: 153, SEQ ID NO: 154, SEQ ID NO: 155, SEQ ID NO: 156, SEQ ID NO: 157, SEQ ID NO: 158, SEQ ID NO: 159, SEQ ID NO: 160, SEQ ID NO: 161, SEQ ID NO: 162, SEQ ID NO: 163, SEQ ID NO: 164, SEQ ID NO: 165, SEQ ID NO: 166, SEQ ID NO: 167, SEQ ID NO: 168, SEQ ID NO: 169 или SEQ ID NO: 170, или последовательностью с 95-99% идентичности по отношению к ним. В одном из вариантов осуществления выделенная молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая конструкцию CAR, включает последовательность гуманизированного связывающего домена против BCMA, кодируемую последовательностью нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 272, SEQ ID NO: 274 или последовательностью с 95-99% идентичности по отношению к ним.

В одном из вариантов осуществления выделенная молекула нуклеиновой кислоты содержит (например, состоит из) нуклеиновую кислота, кодирующую аминокислотную последовательность CAR SEQ ID NO: 99, SEQ ID NO: 100, SEQ ID NO: 101, SEQ ID NO: 102, SEQ ID NO: 103, SEQ ID NO: 104, SEQ ID NO: 105, SEQ ID NO: 106, SEQ ID NO: 107, SEQ ID NO: 108, SEQ ID NO: 109, SEQ ID NO: 110, SEQ ID NO: 111, SEQ ID NO: 112, SEQ ID NO: 113, SEQ ID NO: 213, SEQ ID NO: 214, SEQ ID NO: 215, SEQ ID NO: 216, SEQ ID NO: 217, SEQ ID NO: 218, SEQ ID NO: 219, SEQ ID NO: 220, SEQ ID NO: 221, SEQ ID NO: 222, SEQ ID NO: 223, SEQ ID NO: 224, SEQ ID NO: 225, SEQ ID NO: 226, SEQ ID NO: 227, SEQ ID NO: 228, SEQ ID NO: 229, SEQ ID NO: 230, SEQ ID NO: 231, SEQ ID NO: 232 или SEQ ID NO: 233, или аминокислотную последовательность, имеющую 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичности или имеющую одну, две или три модификации (например, замены, например, консервативные замены), но не более 30, 20 или 10 модификаций (например, замен, например, консервативных замен) аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 99, SEQ ID NO: 100, SEQ ID NO: 101, SEQ ID NO: 102, SEQ ID NO: 103, SEQ ID NO: 104, SEQ ID NO: 105, SEQ ID NO: 106, SEQ ID NO: 107, SEQ ID NO: 108, SEQ ID NO: 109, SEQ ID NO: 110, SEQ ID NO: 111, SEQ ID NO: 112, SEQ ID NO: 113, SEQ ID NO: 213, SEQ ID NO: 214, SEQ ID NO: 215, SEQ ID NO: 216, SEQ ID NO: 217, SEQ ID NO: 218, SEQ ID NO: 219, SEQ ID NO: 220, SEQ ID NO: 221, SEQ ID NO: 222, SEQ ID NO: 223, SEQ ID NO: 224, SEQ ID NO: 225, SEQ ID NO: 226, SEQ ID NO: 227, SEQ ID NO: 228, SEQ ID NO: 229, SEQ ID NO: 230, SEQ ID NO: 231, SEQ ID NO: 232 или SEQ ID NO: 233.

В одном из вариантов осуществления выделенная молекула нуклеиновой кислоты содержит (например, состоит из) последовательность нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 114, SEQ ID NO: 115, SEQ ID NO: 116, SEQ ID NO: 117, SEQ ID NO: 118, SEQ ID NO: 119, SEQ ID NO: 120, SEQ ID NO: 121, SEQ ID NO: 122, SEQ ID NO: 123, SEQ ID NO: 124, SEQ ID NO: 125, SEQ ID NO: 126, SEQ ID NO: 127, SEQ ID NO: 128, SEQ ID NO: 234, SEQ ID NO: 235, SEQ ID NO: 236, SEQ ID NO: 237, SEQ ID NO: 238, SEQ ID NO: 239, SEQ ID NO: 240, SEQ ID NO: 241, SEQ ID NO: 242, SEQ ID NO: 243, SEQ ID NO: 244, SEQ ID NO: 245, SEQ ID NO: 246, SEQ ID NO: 247, SEQ ID NO: 248, SEQ ID NO: 249, SEQ ID NO: 250, SEQ ID NO: 251, SEQ ID NO: 252, SEQ ID NO: 253 или SEQ ID NO: 254, или последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичности или имеющую одну, две или три модификации (например, замены, например, консервативные замены), но не более 30, 20 или 10 модификаций (например, замен, например, консервативных замен) аминокислотной последовательности в последовательности нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 114, SEQ ID NO: 115, SEQ ID NO: 116, SEQ ID NO: 117, SEQ ID NO: 118, SEQ ID NO: 119, SEQ ID NO: 120, SEQ ID NO: 121, SEQ ID NO: 122, SEQ ID NO: 123, SEQ ID NO: 124, SEQ ID NO: 125, SEQ ID NO: 126, SEQ ID NO: 127, SEQ ID NO: 128, SEQ ID NO: 234, SEQ ID NO: 235, SEQ ID NO: 236, SEQ ID NO: 237, SEQ ID NO: 238, SEQ ID NO: 239, SEQ ID NO: 240, SEQ ID NO: 241, SEQ ID NO: 242, SEQ ID NO: 243, SEQ ID NO: 244, SEQ ID NO: 245, SEQ ID NO: 246, SEQ ID NO: 247, SEQ ID NO: 248, SEQ ID NO: 249, SEQ ID NO: 250, SEQ ID NO: 251, SEQ ID NO: 252, SEQ ID NO: 253 или SEQ ID NO: 254.

В одном из аспектов изобретение относится к выделенной молекуле нуклеиновой кислоты, кодирующей связывающий домен против BCMA, где связывающий домен против BCMA содержит одну или более (например, все три) из определяющей комплементарность области легкой цепи 1 (CDR1 LC), определяющей комплементарность области легкой цепи 2 (CDR2 LC) и/или определяющей комплементарность области легкой цепи 3 (CDR3 LC) связывающего домена против BCMA, представленного в настоящем описании, и одну или более (например, все три) из определяющей комплементарность области тяжелой цепи 1 (CDR1 HC), определяющей комплементарность области тяжелой цепи 2 (CDR2 HC) и/или определяющей комплементарность области тяжелой цепи 3 (CDR3 HC) связывающего домена против BCMA, представленного в настоящем описании, например, связывающего домена человека против BCMA, содержащего одну или более, например, все три, CDR LC и одну или более, например, все три, CDR HC. В одном из вариантов осуществления кодируемый связывающий домен против BCMA содержит вариабельную область легкой цепи, представленную в настоящем описании (например, в SEQ ID NO: 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 192, 193, 194, 195, 196, 197, 198, 199, 200, 201, 202, 203, 204, 205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 259, 260, 261 или 262), и/или вариабельную область тяжелой цепи, представленную в настоящем описании (например, в SEQ ID NO: 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 81, 82, 83, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 255, 256, 257 или 258). В одном из вариантов осуществления кодируемый связывающий домен против BCMA является scFv, содержащим легкую цепь и тяжелую цепь с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 39, SEQ ID NO: 40, SEQ ID NO: 41, SEQ ID NO: 42, SEQ ID NO: 43, SEQ ID NO: 44, SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 47, SEQ ID NO: 48, SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 129, SEQ ID NO: 130, SEQ ID NO: 131, SEQ ID NO: 132, SEQ ID NO: 133, SEQ ID NO: 134, SEQ ID NO: 135, SEQ ID NO: 136, SEQ ID NO: 137, SEQ ID NO: 138, SEQ ID NO: 139, SEQ ID NO: 140, SEQ ID NO: 141, SEQ ID NO: 142, SEQ ID NO: 143, SEQ ID NO: 144, SEQ ID NO: 145, SEQ ID NO: 146, SEQ ID NO: 147, SEQ ID NO: 148, SEQ ID NO: 149, SEQ ID NO: 263, SEQ ID NO: 264, SEQ ID NO: 265 или SEQ ID NO: 266, или последовательности с 95-99% идентичности по отношению к ним. В варианте осуществления связывающий домен против BCMA (например, scFv) содержит: вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере одну, две или три модификации (например, замены, например, консервативные замены), но не более 30, 20 или 10 модификаций (например, замен, например, консервативных замен) аминокислотной последовательности вариабельной области легкой цепи, приведенной в SEQ ID NO: 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 192, 193, 194, 195, 196, 197, 198, 199, 200, 201, 202, 203, 204, 205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 259, 260, 261 или 262, или последовательность с 95-99% идентичности по отношению к аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 192, 193, 194, 195, 196, 197, 198, 199, 200, 201, 202, 203, 204, 205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 259, 260, 261 или 262, и/или вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере одну, две или три модификации (например, замены, например, консервативные замены), но не более 30, 20 или 10 модификаций (например, замен, например, консервативных замен) аминокислотной последовательности вариабельной области тяжелой цепи, приведенной в SEQ ID NO: 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 81, 82, 83, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 255, 256, 257 или 258, или последовательность с 95-99% идентичности по отношению к аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 81, 82, 83, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 255, 256, 257 или 258. В одном из вариантов осуществления связывающий домен против BCMA содержит последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 39, SEQ ID NO: 40, SEQ ID NO: 41, SEQ ID NO: 42, SEQ ID NO: 43, SEQ ID NO: 44, SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 47, SEQ ID NO: 48, SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 129, SEQ ID NO: 130, SEQ ID NO: 131, SEQ ID NO: 132, SEQ ID NO: 133, SEQ ID NO: 134, SEQ ID NO: 135, SEQ ID NO: 136, SEQ ID NO: 137, SEQ ID NO: 138, SEQ ID NO: 139, SEQ ID NO: 140, SEQ ID NO: 141, SEQ ID NO: 142, SEQ ID NO: 143, SEQ ID NO: 144, SEQ ID NO: 145, SEQ ID NO: 146, SEQ ID NO: 147, SEQ ID NO: 148, и SEQ ID NO: 149, SEQ ID NO: 263, SEQ ID NO: 264, SEQ ID NO: 265 или SEQ ID NO: 266, или последовательность с 95-99% идентичности по отношению к ним. В одном из вариантов осуществления кодируемый связывающий домен против BCMA является scFv, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, представленную в настоящем описании, например, в таблице 1 или 16, соединяют с вариабельной областью тяжелой цепи, содержащей аминокислотную последовательность, представленную в настоящем описании, например, в таблице 1 или 16, с помощью линкера, например, линкера, представленного в настоящем описании. В одном из вариантов осуществления кодируемый связывающий домен против BCMA включает линкер (Gly₄-Ser)n, где n является 1, 2, 3, 4, 5 или 6, предпочтительно - 4 (SEQ ID NO: 26). Вариабельная область легкой цепи и вариабельная область тяжелой цепи scFv могут находиться, например, в любой из следующих ориентаций: вариабельная область легкой цепи-линкер-вариабельная область тяжелой цепи или вариабельная область тяжелой цепи-линкер-вариабельная область легкой цепи. В одном из вариантов осуществления выделенная последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая связывающий домен человека против BCMA, содержит последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 56, SEQ ID NO: 57, SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 59, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 61, SEQ ID NO: 62, SEQ ID NO: 63, SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 67, SEQ ID NO: 68, SEQ ID NO: 150, SEQ ID NO: 151, SEQ ID NO: 152, SEQ ID NO: 153, SEQ ID NO: 154, SEQ ID NO: 155, SEQ ID NO: 156, SEQ ID NO: 157, SEQ ID NO: 158, SEQ ID NO: 159, SEQ ID NO: 160, SEQ ID NO: 161, SEQ ID NO: 162, SEQ ID NO: 163, SEQ ID NO: 164, SEQ ID NO: 165, SEQ ID NO: 166, SEQ ID NO: 167, SEQ ID NO: 168, SEQ ID NO: 169 и SEQ ID NO: 170, или последовательность с 95-99% идентичности по отношению к ним.

В других вариантах осуществления кодируемый BCMA-связывающий домен содержит CDR1 HC, CDR2 HC и CDR3 HC любых аминокислотных последовательностей тяжелой цепи BCMA-связывающего домена, представленных в таблице 1 или 16. В вариантах осуществления BCMA-связывающий домен дополнительно содержит CDR1 LC, CDR2 LC и CDR3 LC. В вариантах осуществления BCMA-связывающий домен содержит CDR1 LC, CDR2 LC и CDR3 LC любых аминокислотных последовательностей легкой цепи BCMA-связывающего домена, представленных в таблице 1 или 16.

В некоторых вариантах осуществления кодируемый BCMA-связывающий домен содержит одну, две или все из CDR1 LC, CDR2 LC и CDR3 LC любых аминокислотных последовательностей легкой цепи BCMA-связывающего домена, представленных в таблице 1 или 16, и одну, две или все из CDR1 HC, CDR2 HC, и CDR3 HC любых аминокислотных последовательностей тяжелой цепи BCMA-связывающего домена, представленных в таблице 1 или 16.

В варианте осуществления связывающий домен против BCMA (например, scFv) содержит: вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, содержащую (или состоящую из) вариабельную область легкой цепи SEQ ID NO: 271 или 273, и аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере одну, две или три модификации (например, замены, например, консервативные замены), но не более 30, 20 или 10 модификаций (например, замен, например, консервативных замен) аминокислотной последовательности вариабельной области легкой цепи, приведенной в SEQ ID NO: 271 или 273, или последовательность с 95-99% идентичности по отношению к ним, и/или вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, содержащую (или состоящую из) вариабельную область тяжелой цепи SEQ ID NO: 271 или 273, и аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере одну, две или три модификации (например, замены, например, консервативные замены), но не более 30, 20 или 10 модификаций (например, замен, например, консервативных замен) аминокислотной последовательности вариабельной области тяжелой цепи, приведенной в SEQ ID NO: 271 или 273, или последовательность с 95-99% идентичности по отношению к ней. В одном из вариантов осуществления кодируемый гуманизированный связывающий домен против BCMA является scFv, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, представленную в настоящем описании, например, приведенную в SEQ ID NO: 271 или 273, соединяют с вариабельной областью тяжелой цепи, содержащей аминокислотную последовательность, представленную в настоящем описании, например, приведенную в SEQ ID NO: 271 или 273, с помощью линкера, например, линкера, представленного в настоящем описании. В одном из вариантов осуществления кодируемый связывающий домен против BCMA включает линкер (Gly₄-Ser)n, где n является 1, 2, 3, 4, 5 или 6, предпочтительно - 4 (SEQ ID NO: 26).

В другом аспекте изобретение относится к выделенной полипептидной молекуле, например, выделенной молекуле химерного антигенного рецептора (CAR), кодируемой молекулой нуклеиновой кислоты. В одном из вариантов осуществления выделенная полипептидная молекула содержит последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 99, SEQ ID NO: 100, SEQ ID NO: 101, SEQ ID NO: 102, SEQ ID NO: 103, SEQ ID NO: 104, SEQ ID NO: 105, SEQ ID NO: 106, SEQ ID NO: 107, SEQ ID NO: 108, SEQ ID NO: 109, SEQ ID NO: 110, SEQ ID NO: 111, SEQ ID NO: 112, SEQ ID NO: 113, SEQ ID NO: 213, SEQ ID NO: 214, SEQ ID NO: 215, SEQ ID NO: 216, SEQ ID NO: 217, SEQ ID NO: 218, SEQ ID NO: 219, SEQ ID NO: 220, SEQ ID NO: 221, SEQ ID NO: 222, SEQ ID NO: 223, SEQ ID NO: 224, SEQ ID NO: 225, SEQ ID NO: 226, SEQ ID NO: 227, SEQ ID NO: 228, SEQ ID NO: 229, SEQ ID NO: 230, SEQ ID NO: 231, SEQ ID NO: 232 и SEQ ID NO: 233, или последовательность с 95-99% идентичности по отношению к ним.

В другом аспекте изобретение относится к выделенной молекуле химерного антигенного рецептора (CAR) (например, полипептиду), содержащей связывающий домен против BCMA (например, человеческое или гуманизированное антитело или фрагмент антитела, специфически связывающееся с BCMA), трансмембранный домен и внутриклеточный сигнальный домен (например, внутриклеточный сигнальный домен, содержащий костимуляторный домен и/или первичный сигнальный домен). В одном из вариантов осуществления CAR содержит антитело или фрагмент антитела, включающее связывающий домен против BCMA, представленный в настоящем описании (например, антитело человека или фрагмент антитела, специфически связывающееся с BCMA, как представлено в настоящем описании), трансмембранный домен, представленный в настоящем описании, и внутриклеточный сигнальный домен, представленный в настоящем описании (например, внутриклеточный сигнальный домен, содержащий костимуляторный домен и/или первичный сигнальный домен, представленный в настоящем описании).

В одном из вариантов осуществления связывающий домен против BCMA содержит одну или более (например, все три) из определяющей комплементарность области легкой цепи 1 (CDR1 LC), определяющей комплементарность области легкой цепи 2 (CDR2 LC) и определяющей комплементарность области легкой цепи 3 (CDR3 LC) связывающего домена против BCMA, представленного в настоящем описании, и одну или более (например, все три) из определяющей комплементарность области тяжелой цепи 1 (CDR1 HC), определяющей комплементарность области тяжелой цепи 2 (CDR2 HC) и определяющей комплементарность области тяжелой цепи 3 (CDR3 HC) связывающего домена против BCMA, представленного в настоящем описании, например, человеческого или гуманизированного связывающего домена против BCMA, содержащего одну или более, например, все три, CDR LC и одну или более, например, все три, CDR HC. В одном из вариантов осуществления связывающий домен против BCMA содержит вариабельную область легкой цепи, представленную в настоящем описании (например, в таблице 1 или SEQ ID NO: 271 или 273), и/или вариабельную область тяжелой цепи, представленную в настоящем описании (например, в таблице 1 или SEQ ID NO: 271 или 273). В одном из вариантов осуществления связывающий домен против BCMA является scFv, содержащим легкую цепь и тяжелую цепь с аминокислотной последовательностью, представленной в таблице 1, SEQ ID NO: 271 или 273. В варианте осуществления связывающий домен против BCMA (например, scFv) содержит: вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере одну, две или три модификации (например, замены, например, консервативные замены), но не более 30, 20 или 10 модификаций (например, замен, например, консервативных замен) аминокислотной последовательности вариабельной области легкой цепи, представленной в таблице 1 или SEQ ID NO: 271 или 273, или последовательность с 95-99% идентичности по отношению к аминокислотной последовательности, представленной в таблице 1 или SEQ ID NO: 271 или 273, и/или вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере одну, две или три модификации (например, замены, например, консервативные замены), но не более 30, 20 или 10 модификаций (например, замен, например, консервативных замен) аминокислотной последовательности вариабельной области тяжелой цепи, представленной в таблице 1 или SEQ ID NO: 271 или 273, или последовательность с 95-99% идентичности по отношению к аминокислотной последовательности, представленной в таблице 1 или SEQ ID NO: 271 или 273. В одном из вариантов осуществления связывающий домен против BCMA содержит последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 39, SEQ ID NO: 40, SEQ ID NO: 41, SEQ ID NO: 42, SEQ ID NO: 43, SEQ ID NO: 44, SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 47, SEQ ID NO: 48, SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 129, SEQ ID NO: 130, SEQ ID NO: 131, SEQ ID NO: 132, SEQ ID NO: 133, SEQ ID NO: 134, SEQ ID NO: 135, SEQ ID NO: 136, SEQ ID NO: 137, SEQ ID NO: 138, SEQ ID NO: 139, SEQ ID NO: 140, SEQ ID NO: 141, SEQ ID NO: 142, SEQ ID NO: 143, SEQ ID NO: 144, SEQ ID NO: 145, SEQ ID NO: 146, SEQ ID NO: 147, SEQ ID NO: 148, SEQ ID NO: 149, SEQ ID NO: 263, SEQ ID NO: 264, SEQ ID NO: 265 или SEQ ID NO: 266, или аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере одну, две или три модификации (например, замены, например, консервативные замены), но не более 30, 20 или 10 модификаций (например, замен, например, консервативных замен) в любой из указанных выше последовательностей, или последовательность с 95-99% идентичности по отношению к любой из указанных выше последовательностей. В одном из вариантов осуществления связывающий домен против BCMA содержит последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 271 или SEQ ID NO: 273, или последовательность с 95-99% идентичности по отношению к ней. В одном из вариантов осуществления связывающий домен против BCMA является scFv, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, представленную в настоящем описании, например, в таблице 1 или 16, SEQ ID NO: 271 или SEQ ID NO: 273, соединяют с вариабельной областью тяжелой цепи, содержащей аминокислотную последовательность, представленную в настоящем описании, например, в таблице 1 или 16, SEQ ID NO: 271 или SEQ ID NO: 273, с помощью линкера, например, линкера, представленного в настоящем описании. В одном из вариантов осуществления связывающий домен против BCMA включает линкер (Gly₄-Ser)n, где n является 1, 2, 3, 4, 5 или 6, предпочтительно - 4 (SEQ ID NO: 26). Вариабельная область легкой цепи и вариабельная область тяжелой цепи scFv могут находиться, например, в любой из следующих ориентаций: вариабельная область легкой цепи-линкер-вариабельная область тяжелой цепи или вариабельная область тяжелой цепи-линкер-вариабельная область легкой цепи.

В других вариантах осуществления BCMA-связывающий домен содержит CDR1 HC, CDR2 HC и CDR3 HC любых аминокислотных последовательностей тяжелой цепи BCMA-связывающего домена, представленных в таблице 1 или 16. В вариантах осуществления BCMA-связывающий домен дополнительно содержит CDR1 LC, CDR2 LC и CDR3 LC. В вариантах осуществления BCMA-связывающий домен содержит CDR1 LC, CDR2 LC и CDR3 LC любых аминокислотных последовательностей легкой цепи BCMA-связывающего домена, представленных в таблице 1 или 16.

В некоторых вариантах осуществления BCMA-связывающий домен содержит одну, две или все из CDR1 LC, CDR2 LC и CDR3 LC любых аминокислотных последовательностей легкой цепи BCMA-связывающего домена, представленных в таблице 1 или 16, и одну, две или все из CDR1 HC, CDR2 HC и CDR3 HC любых аминокислотных последовательностей тяжелой цепи BCMA-связывающего домена, представленных в таблице 1 или 16.

В одном из вариантов осуществления выделенная молекула CAR содержит трансмембранный домен белка, например, представленный в настоящем описании, например, выбранный из группы, состоящей из альфа-, бета- или дзета-цепи T-клеточного рецептора, CD28, CD3 эпсилон, CD45, CD4, CD5, CD8, CD9, CD16, CD22, CD33, CD37, CD64, CD80, CD86, CD134, CD137 и CD154. В одном из вариантов осуществления трансмембранный домен содержит последовательность SEQ ID NO: 6. В одном из вариантов осуществления трансмембранный домен содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере одну, две или три модификации (например, замены, например, консервативные замены), но не более 20, 10 или 5 модификаций (например, замен, например, консервативных замен) аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 6, или последовательность с 95-99% идентичности по отношению к аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 6.

В одном из вариантов осуществления связывающий домен против BCMA соединяют с трансмембранным доменом посредством шарнирной области, например, шарнирной области, представленной в настоящем описании. В одном из вариантов осуществления кодируемая шарнирная область содержит SEQ ID NO: 2 или последовательность с 95-99% идентичности по отношению к ней.

В одном из вариантов осуществления выделенная молекула CAR дополнительно содержит последовательность, кодирующую костимуляторный домен, например, костимуляторный домен, представленный в настоящем описании. В вариантах осуществления внутриклеточный сигнальный домен выделенной молекулы CAR содержит костимуляторный домен. В вариантах осуществления внутриклеточный сигнальный домен выделенной молекулы CAR содержит первичный сигнальный домен. В вариантах осуществления внутриклеточный сигнальный домен выделенной молекулы CAR содержит костимуляторный домен и первичный сигнальный домен.

В одном из вариантов осуществления костимуляторный домен содержит функциональный сигнальный домен белка, выбранного из группы, состоящей из молекулы MHC класса I, белков рецепторов ФНО, иммуноглобулин-подобных белков, рецепторов цитокинов, интегринов, сигнальных молекул активации лимфоцитов (белков SLAM), активирующих рецепторов NK-клеток, BTLA, рецептора Толл-лиганда, OX40, CD2, CD7, CD27, CD28, CD30, CD40, CDS, ICAM-1, LFA-1 (CD11a/CD18), 4-1BB (CD137), B7-H3, CDS, ICAM-1, ICOS (CD278), GITR, BAFFR, LIGHT, HVEM (LIGHTR), KIRDS2, SLAMF7, NKp80 (KLRF1), NKp44, NKp30, NKp46, CD19, CD4, CD8 альфа, CD8 бета, IL2R бета, IL2R гамма, IL7R альфа, ITGA4, VLA1, CD49a, ITGA4, IA4, CD49D, ITGA6, VLA-6, CD49f, ITGAD, CD11d, ITGAE, CD103, ITGAL, CD11a, LFA-1, ITGAM, CD11b, ITGAX, CD11c, ITGB1, CD29, ITGB2, CD18, LFA-1, ITGB7, NKG2D, NKG2C, TNFR2, TRANCE/RANKL, DNAM1 (CD226), SLAMF4 (CD244, 2B4), CD84, CD96 (Tactile), CEACAM1, CRTAM, Ly9 (CD229), CD160 (BY55), PSGL1, CD100 (SEMA4D), CD69, SLAMF6 (NTB-A, Ly108), SLAM (SLAMF1, CD150, IPO-3), BLAME (SLAMF8), SELPLG (CD162), LTBR, LAT, GADS, SLP-76, PAG/Cbp, CD19a и лиганда, специфически связывающегося с CD83.

В одном из вариантов осуществления костимуляторный домен содержит последовательность SEQ ID NO: 7. В одном из вариантов осуществления костимуляторный домен содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере одну, две или три модификации (например, замены, например, консервативные замены), но не более 20, 10 или 5 модификаций (например, замен, например, консервативных замен) аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 7, или последовательность с 95-99% идентичности по отношению к аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 7. В другом варианте осуществления костимуляторный домен CD28 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1104. В одном из вариантов осуществления костимуляторный домен содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере одну, две или три модификации, но не более 20, 10 или 5 модификаций аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1104, или последовательность с 95-99% идентичности по отношению к аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1104. В другом варианте осуществления костимуляторный домен CD27 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8. В одном из вариантов осуществления костимуляторный домен содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере одну, две или три модификации, но не более 20, 10 или 5 модификаций аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 8, или последовательность с 95-99% идентичности по отношению к аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 8. В другом варианте осуществления костимуляторный домен ICOS содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1106. В одном из вариантов осуществления костимуляторный домен содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере одну, две или три модификации, но не более 20, 10 или 5 модификаций аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1106, или последовательность с 95-99% идентичности по отношению к аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1106.

В вариантах осуществления первичный сигнальный домен содержит сигнальный домен или CD3 дзета. В вариантах осуществления функциональный сигнальный домен CD3 дзета содержит SEQ ID NO: 9 (мутантный CD3 дзета) или SEQ ID NO: 10 (CD3 дзета человека дикого типа), или последовательность с 95-99% идентичности по отношению к ним.

В одном из вариантов осуществления внутриклеточный сигнальный домен содержит функциональный сигнальный домен 4-1BB и/или функциональный сигнальный домен CD3 дзета. В одном из вариантов осуществления внутриклеточный сигнальный домен содержит последовательность SEQ ID NO: 7 и/или последовательность SEQ ID NO: 9 или SEQ ID NO: 10. В одном из вариантов осуществления внутриклеточный сигнальный домен содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере одну, две или три модификации (например, замены, например, консервативные замены), но не более 20, 10 или 5 модификаций (например, замен, например, консервативных замен) аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 7 и/или последовательности SEQ ID NO: 9 или SEQ ID NO: 10, или последовательность с 95-99% идентичности по отношению к аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 7 и/или последовательности SEQ ID NO: 9 или SEQ ID NO: 10. В одном из вариантов осуществления внутриклеточный сигнальный домен содержит последовательность SEQ ID NO: 7 и/или последовательность SEQ ID NO: 9 или SEQ ID NO: 10, где последовательности, содержащие внутриклеточный сигнальный домен, экспрессируются в одной и той же рамке считывания и в виде единой полипептидной цепи.

В одном из вариантов осуществления внутриклеточный сигнальный домен содержит функциональный сигнальный домен CD27 и/или функциональный сигнальный домен CD3 дзета. В одном из вариантов осуществления внутриклеточный сигнальный домен CD27 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8 и/или аминокислотную последовательность CD3 дзета SEQ ID NO: 9 или SEQ ID NO: 10. В одном из вариантов осуществления внутриклеточный сигнальный домен содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере одну, две или три модификации, но не более 20, 10 или 5 модификаций аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 8 и/или аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 9 или SEQ ID NO: 10, или последовательность с 95-99% идентичности по отношению к аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 8 и/или аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 9 или SEQ ID NO: 10. В одном из вариантов осуществления внутриклеточный сигнальный домен содержит последовательность SEQ ID NO: 8 и последовательность SEQ ID NO: 9 или SEQ ID NO: 10, где последовательности, содержащие внутриклеточный сигнальный домен, экспрессируются в одной и той же рамке считывания и в виде единой полипептидной цепи.

В одном из вариантов осуществления внутриклеточный сигнальный домен содержит функциональный сигнальный домен CD28 и/или функциональный сигнальный домен CD3 дзета. В одном из вариантов осуществления кодируемый внутриклеточный сигнальный домен CD28 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1104 и/или аминокислотную последовательность CD3 дзета SEQ ID NO: 9 или SEQ ID NO: 10. В одном из вариантов осуществления внутриклеточный сигнальный домен содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере одну, две или три модификации, но не более 20, 10 или 5 модификаций аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1104 и/или аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 9 или SEQ ID NO: 10, или последовательность с 95-99% идентичности по отношению к аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 379 и/или аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 9 или SEQ ID NO: 10. В одном из вариантов осуществления внутриклеточный сигнальный домен содержит последовательность SEQ ID NO: 1104 и последовательность SEQ ID NO: 9 или SEQ ID NO: 10, где последовательности, содержащие внутриклеточный сигнальный домен, экспрессируются в одной и той же рамке считывания и в виде единой полипептидной цепи.

В одном из вариантов осуществления внутриклеточный сигнальный домен содержит функциональный сигнальный домен ICOS и/или функциональный сигнальный домен CD3 дзета. В одном из вариантов осуществления внутриклеточный сигнальный домен ICOS содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1106 и/или аминокислотную последовательность CD3 дзета SEQ ID NO: 9 или SEQ ID NO: 10. В одном из вариантов осуществления внутриклеточный сигнальный домен содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере одну, две или три модификации, но не более 20, 10 или 5 модификаций аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1106 и/или аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 9 или SEQ ID NO: 10, или последовательность с 95-99% идентичности по отношению к аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1106 и/или аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 9 или SEQ ID NO: 10. В одном из вариантов осуществления кодируемый внутриклеточный сигнальный домен содержит последовательность SEQ ID NO: 1106 и последовательность SEQ ID NO: 9 или SEQ ID NO: 10, где последовательности, содержащие внутриклеточный сигнальный домен, экспрессируются в одной и той же рамке считывания и в виде единой полипептидной цепи.

В одном из вариантов осуществления выделенная молекула CAR дополнительно содержит лидерную последовательность, например, лидерную последовательность, представленную в настоящем описании. В одном из вариантов осуществления лидерная последовательность содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1 или последовательность с 95-99% идентичности по отношению к аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1.

В другом аспекте изобретение относится к выделенной молекуле CAR, содержащей лидерную последовательность, например, лидерную последовательность, представленную в настоящем описании, например, лидерную последовательность SEQ ID NO: 1, или имеющую 95-99% идентичности по отношению к ней, связывающий домен против BCMA, представленный в настоящем описании, например, связывающий домен против BCMA, содержащий CDR1 LC, CDR2 LC, CDR3 LC, CDR1 HC, CDR2 HC и CDR3 HC, представленный в настоящем описании, например, связывающий домен против BCMA, описываемый в таблице 1 или 16, SEQ ID NO: 271 или SEQ ID NO: 273 или последовательность с 95-99% идентичности по отношению к ним, шарнирную область, например, шарнирную область, представленную в настоящем описании, например, шарнирную область SEQ ID NO: 2, или имеющую 95-99% идентичности по отношению к ней, трансмембранный домен, например, трансмембранный домен, представленный в настоящем описании, например, трансмембранный домен, имеющий последовательность SEQ ID NO: 6 или последовательность, имеющую 95-99% идентичности по отношению к ней, внутриклеточный сигнальный домен, например, внутриклеточный сигнальный домен, представленный в настоящем описании (например, внутриклеточный сигнальный домен, содержащий костимуляторный домен и/или первичный сигнальный домен). В одном из вариантов осуществления внутриклеточный сигнальный домен содержит костимуляторный домен, например, костимуляторный домен, представленный в настоящем описании, например, костимуляторный домен 4-1BB, имеющий последовательность SEQ ID NO: 7 или имеющий 95-99% идентичности по отношению к ней, и/или первичный сигнальный домен, например, первичный сигнальный домен, представленный в настоящем описании, например, стимуляторный домен CD3 дзета, имеющий последовательность SEQ ID NO: 9 или SEQ ID NO: 10 или имеющий 95-99% идентичности по отношению к ней. В одном из вариантов осуществления внутриклеточный сигнальный домен содержит костимуляторный домен, например, костимуляторный домен, представленный в настоящем описании, например, костимуляторный домен 4-1BB, имеющий последовательность SEQ ID NO: 7, и/или первичный сигнальный домен, например, первичный сигнальный домен, представленный в настоящем описании, например, стимуляторный домен CD3 дзета, имеющий последовательность SEQ ID NO: 9 или SEQ ID NO: 10.

В одном из вариантов осуществления выделенная молекула CAR содержит (например, состоит из) аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 99, SEQ ID NO: 100, SEQ ID NO: 101, SEQ ID NO: 102, SEQ ID NO: 103, SEQ ID NO: 104, SEQ ID NO: 105, SEQ ID NO: 106, SEQ ID NO: 107, SEQ ID NO: 108, SEQ ID NO: 109, SEQ ID NO: 110, SEQ ID NO: 111, SEQ ID NO: 112, SEQ ID NO: 113, SEQ ID NO: 213, SEQ ID NO: 214, SEQ ID NO: 215, SEQ ID NO: 216, SEQ ID NO: 217, SEQ ID NO: 218, SEQ ID NO: 219, SEQ ID NO: 220, SEQ ID NO: 221, SEQ ID NO: 222, SEQ ID NO: 223, SEQ ID NO: 224, SEQ ID NO: 225, SEQ ID NO: 226, SEQ ID NO: 227, SEQ ID NO: 228, SEQ ID NO: 229, SEQ ID NO: 230, SEQ ID NO: 231, SEQ ID NO: 232 или SEQ ID NO: 233, или аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять, 10, 15, 20 или 30 модификаций (например, замен, например, консервативных замен), но не более 60, 50 или 40 модификаций (например, замен, например, консервативных замен) аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 99, SEQ ID NO: 100, SEQ ID NO: 101, SEQ ID NO: 102, SEQ ID NO: 103, SEQ ID NO: 104, SEQ ID NO: 105, SEQ ID NO: 106, SEQ ID NO: 107, SEQ ID NO: 108, SEQ ID NO: 109, SEQ ID NO: 110, SEQ ID NO: 111, SEQ ID NO: 112, SEQ ID NO: 113, SEQ ID NO: 213, SEQ ID NO: 214, SEQ ID NO: 215, SEQ ID NO: 216, SEQ ID NO: 217, SEQ ID NO: 218, SEQ ID NO: 219, SEQ ID NO: 220, SEQ ID NO: 221, SEQ ID NO: 222, SEQ ID NO: 223, SEQ ID NO: 224, SEQ ID NO: 225, SEQ ID NO: 226, SEQ ID NO: 227, SEQ ID NO: 228, SEQ ID NO: 229, SEQ ID NO: 230, SEQ ID NO: 231, SEQ ID NO: 232 или SEQ ID NO: 233, или аминокислотную последовательность, имеющую 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичности по отношению к аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 99, SEQ ID NO: 100, SEQ ID NO: 101, SEQ ID NO: 102, SEQ ID NO: 103, SEQ ID NO: 104, SEQ ID NO: 105, SEQ ID NO: 106, SEQ ID NO: 107, SEQ ID NO: 108, SEQ ID NO: 109, SEQ ID NO: 110, SEQ ID NO: 111, SEQ ID NO: 112, SEQ ID NO: 113, SEQ ID NO: 213, SEQ ID NO: 214, SEQ ID NO: 215, SEQ ID NO: 216, SEQ ID NO: 217, SEQ ID NO: 218, SEQ ID NO: 219, SEQ ID NO: 220, SEQ ID NO: 221, SEQ ID NO: 222, SEQ ID NO: 223, SEQ ID NO: 224, SEQ ID NO: 225, SEQ ID NO: 226, SEQ ID NO: 227, SEQ ID NO: 228, SEQ ID NO: 229, SEQ ID NO: 230, SEQ ID NO: 231, SEQ ID NO: 232 или SEQ ID NO: 233.

В других вариантах осуществления связывающий домен против BCMA содержит CDR1 HC, CDR2 HC и CDR3 HC любых аминокислотных последовательностей тяжелой цепи BCMA-связывающего домена, представленного в таблице 1 или 16. В вариантах осуществления BCMA-связывающий домен дополнительно содержит CDR1 LC, CDR2 LC и CDR3 LC. В вариантах осуществления BCMA-связывающий домен содержит CDR1 LC, CDR2 LC и CDR3 LC любых аминокислотных последовательностей легкой цепи BCMA-связывающего домена, представленного в таблице 1 или 16.

В некоторых вариантах осуществления связывающий домен против BCMA содержит одну, две или все из CDR1 LC, CDR2 LC и CDR3 LC любых аминокислотных последовательностей легкой цепи BCMA-связывающего домена, представленного в таблице 1 или 16, и одну, две или все из CDR1 HC, CDR2 HC и CDR3 HC любых аминокислотных последовательностей тяжелой цепи BCMA-связывающего домена, представленного в таблице 1 или 16.

В одном из аспектов изобретение относится к BCMA-связывающему домену, содержащему одну или более (например, все три) из определяющей комплементарность области легкой цепи 1 (CDR1 LC), определяющей комплементарность области легкой цепи 2 (CDR2 LC) и определяющей комплементарность области легкой цепи 3 (CDR3 LC) BCMA-связывающего домена, представленного в настоящем описании, и/или одну или более (например, все три) из определяющей комплементарность области тяжелой цепи 1 (CDR1 HC), определяющей комплементарность области тяжелой цепи 2 (CDR2 HC) и определяющей комплементарность области тяжелой цепи 3 (CDR3 HC) BCMA-связывающего домена, представленного в настоящем описании, например, BCMA-связывающего домена, содержащего одну или более, например, все три, CDR LC и одну или более, например, все три, CDR HC.

В других вариантах осуществления BCMA-связывающий домен содержит CDR1 HC, CDR2 HC и CDR3 HC любых аминокислотных последовательностей тяжелой цепи BCMA-связывающего домена, представленного в таблице 1 или 16. В вариантах осуществления BCMA-связывающий домен дополнительно содержит CDR1 LC, CDR2 LC и CDR3 LC. В вариантах осуществления BCMA-связывающий домен содержит CDR1 LC, CDR2 LC и CDR3 LC любых аминокислотных последовательностей легкой цепи BCMA-связывающего домена, представленного в таблице 1 или 16.

В некоторых вариантах осуществления BCMA-связывающий домен содержит одну, две или все из CDR1 LC, CDR2 LC и CDR3 LC любых аминокислотных последовательностей легкой цепи BCMA-связывающего домена, представленного в таблице 1 или 16, и одну, две или все из CDR1 HC, CDR2 HC и CDR3 HC любых аминокислотных последовательностей тяжелой цепи BCMA-связывающего домена, представленных в таблице 1 или 16.

В одном из вариантов осуществления BCMA-связывающий домен содержит одну или более (например, все три) из определяющей комплементарность области легкой цепи 1 (CDR1 LC), определяющей комплементарность области легкой цепи 2 (CDR2 LC) и определяющей комплементарность области легкой цепи 3 (CDR3 LC) BCMA-связывающего домена, представленного в настоящем описании, и одну или более (например, все три) из определяющей комплементарность области тяжелой цепи 1 (CDR1 HC), определяющей комплементарность области тяжелой цепи 2 (CDR2 HC) и определяющей комплементарность области тяжелой цепи 3 (CDR3 HC) BCMA-связывающего домена, представленного в настоящем описании, например, человеческого или гуманизированного связывающего домена против BCMA, содержащего одну или более, например, все три, CDR LC и одну или более, например, все три, CDR HC. В одном из вариантов осуществления BCMA-связывающий домен содержит вариабельную область легкой цепи, представленную в настоящем описании (например, в таблице 1 или SEQ ID NO: 271 или 273), и/или вариабельную область тяжелой цепи, представленную в настоящем описании (например, в таблице 1 или SEQ ID NO: 271 или 273). В одном из вариантов осуществления BCMA-связывающий домен является scFv, содержащим легкую цепь и тяжелую цепь с аминокислотной последовательностью, представленной в таблице 1, SEQ ID NO: 271 или 273. В варианте осуществления BCMA-связывающий домен (например, scFv) содержит: вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере одну, две или три модификации (например, замены, например, консервативные замены), но не более 30, 20 или 10 модификаций (например, замен, например, консервативных замен) аминокислотной последовательности вариабельной области легкой цепи, представленной в таблице 1 или SEQ ID NO: 271 или 273, или последовательность с 95-99% идентичности по отношению к аминокислотной последовательности, представленной в таблице 1 или SEQ ID NO: 271 или 273, и/или вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере одну, две или три модификации (например, замены, например, консервативные замены), но не более 30, 20 или 10 модификаций (например, замен, например, консервативных замен) аминокислотной последовательности вариабельной области тяжелой цепи, представленной в таблице 1 или SEQ ID NO: 271 или 273, или последовательность с 95-99% идентичности по отношению к аминокислотной последовательности, представленной в таблице 1 или SEQ ID NO: 271 или 273. В одном из вариантов осуществления BCMA-связывающий домен содержит последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 39, SEQ ID NO: 40, SEQ ID NO: 41, SEQ ID NO: 42, SEQ ID NO: 43, SEQ ID NO: 44, SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 47, SEQ ID NO: 48, SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 129, SEQ ID NO: 130, SEQ ID NO: 131, SEQ ID NO: 132, SEQ ID NO: 133, SEQ ID NO: 134, SEQ ID NO: 135, SEQ ID NO: 136, SEQ ID NO: 137, SEQ ID NO: 138, SEQ ID NO: 139, SEQ ID NO: 140, SEQ ID NO: 141, SEQ ID NO: 142, SEQ ID NO: 143, SEQ ID NO: 144, SEQ ID NO: 145, SEQ ID NO: 146, SEQ ID NO: 147, SEQ ID NO: 148, SEQ ID NO: 149, SEQ ID NO: 263, SEQ ID NO: 264, SEQ ID NO: 265 или SEQ ID NO: 266, или аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере одну, две или три модификации (например, замены, например, консервативные замены), но не более 30, 20 или 10 модификаций (например, замен, например, консервативных замен) в любой из указанных выше последовательностей, или последовательность с 95-99% идентичности по отношению к любой из указанных выше последовательностей. В одном из вариантов осуществления BCMA-связывающий домен содержит последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 271 или SEQ ID NO: 273, или последовательность с 95-99% идентичности по отношению к ним. В одном из вариантов осуществления связывающий домен против BCMA является scFv, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, представленную в настоящем описании, например, в таблице 1 или 16, SEQ ID NO: 271 или SEQ ID NO: 273, соединяют с вариабельной областью тяжелой цепи, содержащей аминокислотную последовательность, представленную в настоящем описании, например, в таблице 1 или 16, SEQ ID NO: 271 или SEQ ID NO: 273, с помощью линкера, например, линкера, представленного в настоящем описании. В одном из вариантов осуществления BCMA-связывающий домен включает линкер (Gly₄-Ser)n, где n является 1, 2, 3, 4, 5 или 6, предпочтительно - 4 (SEQ ID NO: 26). Вариабельная область легкой цепи и вариабельная область тяжелой цепи scFv могут находиться, например, в любой из следующих ориентаций: вариабельная область легкой цепи-линкер-вариабельная область тяжелой цепи или вариабельная область тяжелой цепи-линкер-вариабельная область легкой цепи.

В другом аспекте изобретение относится к вектору, содержащему молекулу нуклеиновой кислоты, представленную в настоящем описании, например, молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую CAR, представленный в настоящем описании. В одном из вариантов осуществления вектор выбран из группы, состоящей из ДНК, РНК, плазмиды, лентивирусного вектора, аденовирусного вектора или ретровирусного вектора.

В одном из вариантов осуществления вектор является лентивирусным вектором. В одном из вариантов осуществления вектор дополнительно содержит промотор. В одном из вариантов осуществления промотор является промотором EF-1. В одном из вариантов осуществления промотор EF-1 содержит последовательность SEQ ID NO: 11. В другом варианте осуществления промотор является промотором PGK, например, укороченным промотором PGK, как представлено в настоящем описании.

В одном из вариантов осуществления вектор является транскрибируемым in vitro вектором, например, вектором, транскрибирующим РНК молекулы нуклеиновой кислоты, представленной в настоящем описании. В одном из вариантов осуществления последовательность нуклеиновой кислоты в векторе дополнительно содержит поли(A)-хвост, например, поли(A)-хвост, представленный в настоящем описании, например, содержащий приблизительно 150 аденозиновых оснований (SEQ ID NO: 382). В одном из вариантов осуществления последовательность нуклеиновой кислоты в векторе дополнительно содержит 3'-UTR, например, 3'-UTR, представленную в настоящем описании, например, содержащую по меньшей мере один повтор 3'-UTR, полученный из бета-глобулина человека. В одном из вариантов осуществления последовательность нуклеиновой кислоты в векторе дополнительно содержит промотор, например, промотор T2A.

В другом аспекте изобретение относится к клетке, содержащей вектор, представленный в настоящем описании. В одном из вариантов осуществления клетка является клеткой, представленной в настоящем описании, например, иммунной эффекторной клеткой, например, T-клеткой человека или NK-клеткой человека, например, T-клеткой человека, представленной в настоящем описании, или NK-клеткой человека, представленной в настоящем описании. В одном из вариантов осуществления человек T-клетка является CD8+ T-клеткой.

В другом варианте осуществления CAR-экспрессирующая клетка, представленная в настоящем описании, может дополнительно экспрессировать другое средство, например, средство, повышающее активность CAR-экспрессирующей клетки. Например, в одном из вариантов осуществления средство может являться средством, ингибирующим ингибиторную молекулу. Примеры ингибиторных молекул включают PD1, PD-L1, PD-L2, CTLA4, TIM3, CEACAM (например, CEACAM-1, CEACAM-3 и/или CEACAM-5), LAG3, VISTA, BTLA, TIGIT, LAIR1, CD160, 2B4, CD80, CD86, B7-H3 (CD276), B7-H4 (VTCN1), HVEM (TNFRSF14 или CD270), KIR, A2aR, MHC класса I, MHC класса II, GAL9, аденозин и TGFR бета. В вариантах осуществления средство является средством, ингибирующим PD1. В вариантах осуществления средство является средством, ингибирующим PD-L1. В одном из вариантов осуществления средство, ингибирующее ингибиторную молекулу, может являться средством, представленным в настоящем описании, таким как, например, средство, содержащее первый полипептид, например, ингибиторную молекулу, связанную со вторым полипептидом, обеспечивающим положительный сигнал для клетки, например, внутриклеточный сигнальный домен, представленный в настоящем описании. В одном из вариантов осуществления средство содержит первый полипептид, например, из ингибиторной молекулы, такой как PD1, PD-L1, PD-L2, LAG3, CEACAM (например, CEACAM-1, CEACAM-3 и/или CEACAM-5), CTLA4, VISTA, CD160, BTLA, LAIR1, TIM3, 2B4, TGFR бета, CD80, CD86, B7-H3 (CD276), B7-H4 (VTCN1), HVEM (TNFRSF14 или CD270), KIR, A2aR, MHC класса I, MHC класса II, GAL9, аденозин и TIGIT, или фрагмент любого из них (например, по меньшей мере, часть внеклеточного домена любого из них), и второй полипептид, являющийся внутриклеточным сигнальным доменом, представленным в настоящем описании (например, содержащим костимуляторный домен (например, 41BB, CD27 или CD28, например, как представлено в настоящем описании), и/или первичным сигнальным доменом (например, сигнальным доменом CD3 дзета, представленным в настоящем описании). В одном из вариантов осуществления средство содержит первый полипептид PD1 или его фрагмент (например, по меньшей мере, часть внеклеточного домена PD1) и второй полипептид из внутриклеточного сигнального домена, представленного в настоящем описании (например, сигнального домена CD28, представленного в настоящем описании, и/или сигнального домена CD3 дзета, представленного в настоящем описании).

В другом аспекте изобретение относится к способу получения клетки, включающему трансдукцию клетки, представленной в настоящем описании, например, иммунной эффекторной клетки, представленной в настоящем описании, например, T-клетки или NK-клетки, представленной в настоящем описании, с использованием вектора, содержащего нуклеиновую кислоту, кодирующую CAR, например, CAR, представленный в настоящем описании.

Настоящее изобретение также относится к способу получения популяции РНК-сконструированных клеток, например, клеток, представленных в настоящем описании, например, иммунных эффекторных клеток, например, T-клеток или NK-клеток, транзиторно экспрессирующих экзогенную РНК. Способ включает встраивание транскрибируемой in vitro РНК или синтетической РНК в клетку, где РНК содержит нуклеиновую кислоту, кодирующую молекулу CAR, представленную в настоящем описании.

В другом аспекте изобретение относится к способу обеспечения противоопухолевого иммунитета у млекопитающего, включающему введение млекопитающему эффективного количества клеток, экспрессирующих молекулу CAR, например, клеток, экспрессирующих молекулу CAR, представленную в настоящем описании. В одном из вариантов осуществления клетка является аутологичной иммунной эффекторной клеткой, например, T-клеткой или аутологичной NK-клеткой. В одном из вариантов осуществления клетка является иммунной эффекторной клеткой, например, аллогенной T-клеткой или аллогенной NK-клеткой. В одном из вариантов осуществления млекопитающее является человеком, например, пациентом с гемобластозом.

В другом аспекте изобретение относится к способу лечения млекопитающего, имеющего заболевание, ассоциированное с экспрессией BCMA (например, пролиферативное заболевание, предраковое состояние и несвязанное со злокачественным новообразованием показание, ассоциированное с экспрессией BCMA) включающему введение млекопитающему эффективного количества клеток, экспрессирующих молекулу CAR, например, молекулу CAR, представленную в настоящем описании. В одном из вариантов осуществления млекопитающее является человеком, например, пациентом с гемобластозом.

В одном из вариантов осуществления заболевание является заболеванием, представленным в настоящем описании. В одном из вариантов осуществления заболевание, ассоциированное с экспрессией BCMA, выбрано из гемобластоза, такого как острые лейкозы, включая, в качестве неограничивающих примеров, острый миелолейкоз (AML), миелодиспластический синдром, миелопролиферативные неоплазии, хронический миелолейкоз (CML), неоплазию из бластных плазмацитоидных дендритных клеток, и заболевания, ассоциированного с экспрессией BCMA, включая, в качестве неограничивающих примеров, атипичные и/или неклассические злокачественные новообразования, злокачественные новообразования, предраковые состояния или пролиферативные заболевания с экспрессией BCMA, и их комбинации. В одном из вариантов осуществления заболевание, ассоциированное с экспрессией BCMA, является гемобластозом, выбранным из группы, состоящей из одного или более острых лейкозов, включая, в качестве неограничивающих примеров, острый B-клеточный лимфоидный лейкоз ("BALL"), острый T-клеточный лимфоидный лейкоз ("TALL"), острый лимфоидный лейкоз (ALL), один или более хронических лейкозов, включая, в качестве неограничивающих примеров, хронический миелогенный лейкоз (CML), хронический лимфоцитарный лейкоз (CLL), дополнительные гемобластозы или гематологические состояния, включая, в качестве неограничивающих примеров, B-клеточный пролимфоцитарный лейкоз, неоплазию из бластных плазмацитоидных дендритных клеток, лимфому Беркитта, диффузную крупноклеточную B-клеточную лимфому, фолликулярную лимфому, волосатоклеточный лейкоз, мелкоклеточную или крупноклеточную фолликулярную лимфому, злокачественные лимфопролиферативные состояния, MALT-лимфому, лимфому из клеток мантийной зоны, лимфому из клеток маргинальной зоны, множественную миелому, миелодисплазию и миелодиспластический синдром, неходжкинскую лимфому, плазмобластную лимфому, неоплазию из плазмацитоидных дендритных клеток, макроглобулинемию Вальденстрема и "предлейкоз", представляющий собой широкий спектр гематологических состояний, объединенных неэффективной продукцией (или дисплазией) миелоидных клеток крови, и заболевание, ассоциированное с экспрессией BCMA, включает, в качестве неограничивающих примеров, атипичные и/или неклассические злокачественные новообразования, злокачественные новообразования, предраковые состояния или пролиферативные заболевания с экспрессией BCMA и их комбинации.

В вариантах осуществления заболевание, ассоциированное с экспрессией BCMA, включает пролиферативное нарушение плазматических клеток, например, бессимптомную миелому (вялотекущую множественную миелому или индолентную миелому), моноклональную гаммапатию неустановленной этиологии (MGUS), макроглобулинемию Вальденстрема, плазмоцитомы (например, плазмоклеточную дискразию, солитарную миелому, солитарную плазмоцитому, экстрамедуллярную плазмоцитому и множественную плазмоцитому), системный амилоидоз легких цепей и POEMS-синдром (также известный как синдром Кроу-Фуказа, болезнь Такацуки и PEP-синдром).

В вариантах осуществления заболевание, ассоциированное с экспрессией BCMA, включает злокачественное новообразование, например, злокачественное новообразование, представленное в настоящем описании, например, рак предстательной железы (например, кастрационно-резистентный или резистентный к терапии рак предстательной железы или метастазирующий рак предстательной железы), рак поджелудочной железы или рак легких.

В одном из вариантов осуществления терапевтических способов клетку, экспрессирующую молекулу CAR, представленную в настоящем описании (например, молекула CAR BCMA), вводят в комбинации с клеткой, содержащей молекулу CAR CD19. В одном из вариантов осуществления клетку, экспрессирующую молекулу CAR BCMA вводят до, после или одновременно с введением клетки, экспрессирующей CAR CD19. В одном из вариантов осуществления клетка, экспрессирующая молекулу CAR BCMA, и клетка, экспрессирующая молекулу CAR CD19, являются частью единой композиции, и в других вариантах осуществления клетка, экспрессирующая молекулу CAR BCMA, и клетка, экспрессирующая молекулу CAR CD19, являются частью отдельных композиций. В одном из вариантов осуществления клетка, экспрессирующая молекулу CAR, представленную в настоящем описании (например, молекулу CAR BCMA), также экспрессирует молекулу CAR CD19. В одном из вариантов осуществления заболевание, ассоциированное с BCMA, является множественной миеломой, например, CD19-отрицательной множественной миеломой. В одном из вариантов осуществления заболевание, ассоциированное с экспрессией BCMA, является множественной миеломой например, множественной миеломой, являющейся CD19-отрицательной, например, имеющей подавляющее большинство (например, 99,95%) неопластических плазматических клеток с CD19-отрицательным фенотипом, например, как определяют посредством проточной цитометрии и RT-ПЦР.

В одном из вариантов осуществления клетки, экспрессирующие молекулу CAR, например, молекулу CAR, представленную в настоящем описании, вводят в комбинации со средством, повышающим эффективность клетки, экспрессирующей молекулу CAR, например, средством, представленным в настоящем описании.

В одном из вариантов осуществления клетки, экспрессирующие молекулу CAR, например, молекулу CAR, представленную в настоящем описании, вводят в комбинации с низкой усиливающей иммунитет дозой ингибитора mTOR. Не желая быть связанными какой-либо теорией, полагают, что лечение низкой, усиливающей иммунитет дозой (например, дозой, недостаточной для полной супрессии иммунной системы, но достаточной для улучшения иммунной функции) сопровождается снижением PD-1-положительных иммунных эффекторных клеток, например, T-клеток или NK-клеток, или повышением PD-1-отрицательных клеток. PD-1-положительные иммунные эффекторные клетки, например, T-клетки или NK-клетки, но не PD-1-отрицательыне иммунные эффекторные клетки (например, T-клетки или NK-клетки), можно подвергать истощению посредством вовлечения клеток, экспрессирующих лиганд PD-1, например, PD-L1 или PD-L2.

В варианте осуществления этот подход можно использовать для оптимизации свойств клеток CAR, представленных в настоящем описании, у индивидуума. Не желая быть связанными какой-либо теорией, полагают, что в варианте осуществления улучшают свойства эндогенных, немодифицированных иммунных эффекторных клеток, например, T-клеток или NK-клеток. Не желая быть связанными какой-либо теорией, полагают, что в варианте осуществления улучшают свойства клетки, экспрессирующей CAR BCMA. В других вариантах осуществления клетки, например, иммунные эффекторные клетки (например, T-клетки или NK-клетки), имеющие или конструируемые для экспрессии CAR, можно обрабатывать ex vivo посредством приведения в контакт с количеством ингибитора mTOR, повышающим количество PD1-отрицательных иммунных эффекторных клеток, например, T-клеток или NK-клеток, или повышающим соотношение PD1-отрицательных иммунных эффекторных клеток, например, T-клеток или NK-клеток/PD1-положительных иммунных эффекторных клеток, например, T-клеток или NK-клеток.

В варианте осуществления введение низкой, усиливающей иммунитет дозы ингибитора mTOR, например, аллостерического ингибитора, например, RAD001, или каталитического ингибитора, начинают перед введением CAR-экспрессирующей клетки, представленной в настоящем описании, например, иммунных эффекторных клеток (например, T-клеток или NK-клеток). В варианте осуществления клетки CAR вводят после достаточного периода времени, или достаточного введения доз ингибитора mTOR, таким образом, что уровень PD1-отрицательных иммунных эффекторных клеток, например, T-клеток или NK-клеток, или соотношение PD1-отрицательных иммунных эффекторных клеток, например, T-клеток или NK-клеток/PD1-положительных иммунных эффекторных клеток, например, T-клеток или NK-клеток, по меньшей мере транзиторно, повышается.

В варианте осуществления клетку, например, иммунную эффекторную клетку (например, T-клетку или NK-клетку), подлежащую конструированию для экспрессии CAR, собирают после достаточного периода времени или после достаточного введения низкой, усиливающей иммунитет дозы ингибитора mTOR, таким образом, что уровень PD1-отрицательных иммунных эффекторных клеток, например, T-клеток или NK-клеток, или соотношение PD1-отрицательных иммунных эффекторных клеток, например, T-клеток или NK-клеток/PD1-положительных иммунных эффекторных клеток, например, T-клеток или NK-клеток, у индивидуума, или собранных из индивидуума, по меньшей мере, транзиторно, повышается.

В варианте осуществления изобретение относится к ингибитору mTOR для применения в лечении индивидуума, где указанный ингибитор mTOR повышает иммунный ответ указанного индивидуума, и где указанному индивидууму вводят или собираются вводить иммунную эффекторную клетку, экспрессирующую CAR BCMA, как представлено в настоящем описании. В одном из вариантов осуществления клетки, экспрессирующие молекулу CAR, например, молекулу CAR, представленную в настоящем описании, вводят в комбинации со средством, улучшающим один или более побочных эффектов, ассоциированных с введением клетки, экспрессирующей молекулу CAR, например, средством, представленным в настоящем описании.

В одном из вариантов осуществления клетки, экспрессирующие молекулу CAR, например, молекулу CAR, представленную в настоящем описании, вводят в комбинации со средством, с помощью которого лечат заболевание, ассоциированное с BCMA, например, средством, представленным в настоящем описании.

В определенных вариантах осуществления заболевание, ассоциированное с BCMA, является пролиферативным заболеванием, таким как злокачественное новообразование или предраковое состояние, такое как миелодисплазия, миелодиспластический синдром или предлейкоз, или является несвязанным со злокачественным новообразованием показанием, ассоциированным с экспрессией BCMA.

В определенных вариантах осуществления заболевание, ассоциированное с BCMA, является гемобластозом, выбранным из группы, состоящей из одного или более острых лейкозов, включая, в качестве неограничивающих примеров, острый миелолейкоз (AML), миелодиспластический синдром, миелопролиферативные неоплазии, хронический миелолейкоз (CML), неоплазию из бластных плазмацитоидных дендритных клеток, множественную миелому, и заболеванием, ассоциированным с экспрессией BMCA, включая, в качестве неограничивающих примеров, атипичные и/или неклассические злокачественные новообразования, злокачественные новообразования, предраковые состояния или пролиферативные заболевания с экспрессией BCMA, и их комбинациями. В одном из вариантов осуществления заболевание, ассоциированное с BCMA, является множественной миеломой. В вариантах осуществления заболевание, ассоциированное с экспрессией BCMA, включает пролиферативное нарушение из плазматических клеток, например, бессимптомную миелому (вялотекущую множественную миелому или индолентную миелому), моноклональную гаммапатию неустановленной этиологии (MGUS), макроглобулинемию Вальденстрема, плазмоцитомы (например, плазмоклеточную дискразию, солитарную миелому, солитарную плазмоцитому, экстрамедуллярную плазмоцитому, и множественную плазмоцитому), системный амилоидоз легких цепей и POEMS-синдром (также известный как синдром Кроу-Фуказа, болезнь Такацуки и PEP-синдром). В вариантах осуществления заболевание, ассоциированное с экспрессией BCMA, включает злокачественное новообразование, например, злокачественное новообразование, представленное в настоящем описании, например, рак предстательной железы (например, кастрационно-резистентный или резистентный к терапии рак предстательной железы или метастазирующий рак предстательной железы), рак поджелудочной железы или рак легких.

В вариантах осуществления CAR BCMA-экспрессирующую клетку, например, CAR BCMA-экспрессирующую клетку, представленную в настоящем описании, используют для лечения индивидуума, имеющего множественную миелому. В вариантах осуществления CAR BCMA-экспрессирующую клетку, например, CAR BCMA-экспрессирующую клетку, представленную в настоящем описании, используют для лечения индивидуума, имеющего пролиферативное нарушение из плазматических клеток, например, бессимптомную миелому (вялотекущую множественную миелому или индолентную миелому), моноклональную гаммапатию неустановленной этиологии (MGUS), макроглобулинемию Вальденстрема, плазмоцитомы (например, плазмоклеточную дискразию, солитарную миелому, солитарную плазмоцитому, экстрамедуллярную плазмоцитому, и множественную плазмоцитому), системный амилоидоз легких цепей и POEMS-синдром (также известный как синдром Кроу-Фуказа, болезнь Такацуки и PEP-синдром). В вариантах осуществления CAR BCMA-экспрессирующую клетку, например, CAR BCMA-экспрессирующую клетку, представленную в настоящем описании, используют для лечения индивидуума, имеющего злокачественное новообразование, например, злокачественное новообразование, представленное в настоящем описании, например, рак предстательной железы (например, кастрационно-резистентный или резистентный к терапии рак предстательной железы или метастазирующий рак предстательной железы), рак поджелудочной железы или рак легких.

В вариантах осуществления CAR BCMA-экспрессирующую клетку, например, CAR BCMA-экспрессирующую клетку, представленную в настоящем описании, вводят индивидууму в соответствии со схемой введения, включающей общую дозу клеток, вводимых индивидууму, посредством фракционирования дозы, например, одного, двух, трех или больше отдельных введений частичной дозы. В вариантах осуществления первую процентную долю общей дозы вводят в первый день лечения, вторую процентную долю общей дозы вводят в последующий (например, второй, третий, четвертый, пятый, шестой, седьмой или более поздний) день лечения и, необязательно, третью процентную долю (например, оставшуюся процентную долю) общей дозы вводят в более поздний (например, третий, четвертый, пятый, шестой, седьмой, восьмой, девятый, десятый или более поздний) день лечения. Например, 10% общей дозы клеток вводят в первый день, 30% общей дозы клеток вводят во второй день и оставшиеся 60% общей дозы клеток вводят в третий день лечения. Например, общая доза клеток включает от 1 до 5×10⁷ или 1 до 5×10⁸ клеток BCMA-CART.

В вариантах осуществления перед введением CAR-экспрессирующих клеток индивидууму проводят терапию с истощением лимфоцитов (например, с использованием цитоксана, например, в дозе 1,5 г/м²). В вариантах осуществления перед введением CAR-экспрессирующих клеток индивидууму не проводят терапию с истощением лимфоцитов (например, с использованием цитоксана).

В вариантах осуществления не проводят химиотерапию с истощением лимфоцитов и вводят общую дозу клеток BCMA-CART от 1 до 5×10⁷ (например, посредством инфузии), при этом вводят 10% дозы клеток в день 1 лечения, 30% в день 2 лечения и 60% в день 3 лечения. В другом варианте осуществления не проводят химиотерапию с истощением лимфоцитов и вводят общую дозу клеток BCMA-CART от 1 до 5×10⁸ (например, посредством инфузии), при этом вводят 10% дозы клеток в день 1 лечения, 30% в день 2 лечения и 60% в день 3 лечения. В вариантах осуществления химиотерапию с истощением лимфоцитов (цитоксан в дозе 1,5 г/м²) проводят за три дня до введения клеток BCMA-CART, а затем вводят общую дозу клеток BCMA-CART от 1 до 5×10⁷ (например, посредством инфузии), при этом вводят 10% дозы клеток в день 1 лечения, 30% в день 2 лечения и 60% в день 3 лечения. В вариантах осуществления химиотерапию с истощением лимфоцитов (цитоксан в дозе 1,5 г/м²) проводят за три дня до введения клеток BCMA-CART, а затем вводят общую дозу клеток BCMA-CART от 1 до 5×10⁸ (например, посредством инфузии), при этом вводят 10% дозы клеток в день 1 лечения, 30% в день 2 лечения и 60% в день 3 лечения.

В другом аспекте изобретение относится к способу кондиционирования индивидуума перед трансплантацией клеток, включающему введение индивидууму эффективного количества клеток, содержащих молекулу CAR, представленную в настоящем описании. В одном из вариантов осуществления трансплантация клеток является трансплантацией стволовых клеток. Трансплантация стволовых клеток является трансплантацией гематопоэтических стволовых клеток или трансплантацией костного мозга. В одном из вариантов осуществления трансплантация клеток является аллогенной или аутологичной.

В одном из вариантов осуществления кондиционирование индивидуума перед трансплантацией клеток включает снижение количества BCMA-экспрессирующих клеток у индивидуума. BCMA-экспрессирующие клетки у индивидуума являются BCMA-экспрессирующими нормальными клетками или BCMA-экспрессирующими злокачественными клетками, и в некоторых случаях при кондиционировании индивидуума перед трансплантацией клеток будут снижать BCMA-экспрессирующие нормальные и злокачественные клетки.

В другом аспекте изобретение относится к выделенной молекуле нуклеиновой кислоты, кодирующей CAR по изобретению, выделенной полипептидной молекуле CAR по изобретению, вектору, содержащему CAR по изобретению, и клетке, содержащей CAR по изобретению, для применения в качестве лекарственного средства, например, как представлено в настоящем описании.

В другом аспекте изобретение относится к выделенной молекуле нуклеиновой кислоты, кодирующей CAR по изобретению, выделенной полипептидной молекуле CAR по изобретению, вектору, содержащему CAR по изобретению, и клетке, содержащей CAR по изобретению, для применения в лечении заболевания с экспрессией BCMA, например, заболевания с экспрессией BCMA, как представлено в настоящем описании.

Дополнительные признаки и варианты осуществления указанных выше композиций и способов включают одно или более из следующего:

В определенных вариантах осуществления молекула CAR BCMA (например, нуклеиновая кислота CAR BCMA или полипептид CAR BCMA, как представлено в настоящем описании) или BCMA-связывающий домен, как представлено в настоящем описании, включает одну, две или три CDR из вариабельной области тяжелой цепи (например, CDR1 HC, CDR2 HC и/или CDR3 HC), представленной в таблице 20, и/или одну, две или три CDR из вариабельной области легкой цепи (например, CDR1 LC, CDR2 LC и/или CDR3 LC) BCMA-1, BCMA-2, BCMA-3, BCMA-4, BCMA-5, BCMA-6, BCMA-7, BCMA-8, BCMA-9, BCMA-10, BCMA-11, BCMA-12, BCMA-13, BCMA-14, BCMA-15, 149362, 149363, 149364, 149365, 149366, 149367, 149368, 149369, BCMA_EBB-C1978-A4, BCMA_EBB-C1978-G1, BCMA_EBB-C1979-C1, BCMA_EBB-C1978-C7, BCMA_EBB-C1978-D10, BCMA_EBB-C1979-C12, BCMA_EBB-C1980-G4, BCMA_EBB-C1980-D2, BCMA_EBB-C1978-A10, BCMA_EBB-C1978-D4, BCMA_EBB-C1980-A2, BCMA_EBB-C1981-C3, BCMA_EBB-C1978-G4, A7D12.2, C11D5.3, C12A3.2, C13F12.1, представленной в таблице 21, или последовательность, по существу, идентичную (например, на 95-99% идентичную или с до 5, 4, 3, 2 или 1 замены аминокислот, например, замены (например, консервативной замены)) любой из указанных выше последовательностей.

В определенных вариантах осуществления молекула CAR BCMA (например, нуклеиновая кислота CAR BCMA или полипептид CAR BCMA, как представлено в настоящем описании) или антигенсвязывающий домен против BCMA, как представлено в настоящем описании, включает одну, две или три CDR из вариабельной области тяжелой цепи (например, CDR1 HC, CDR2 HC и/или CDR3 HC), представленной в таблице 22, и/или одну, две или три CDR из вариабельной области легкой цепи (например, CDR1 LC, CDR2 LC и/или CDR3 LC) BCMA-1, BCMA-2, BCMA-3, BCMA-4, BCMA-5, BCMA-6, BCMA-7, BCMA-8, BCMA-9, BCMA-10, BCMA-11, BCMA-12, BCMA-13, BCMA-14, BCMA-15, 149362, 149363, 149364, 149365, 149366, 149367, 149368, 149369, BCMA_EBB-C1978-A4, BCMA_EBB-C1978-G1, BCMA_EBB-C1979-C1, BCMA_EBB-C1978-C7, BCMA_EBB-C1978-D10, BCMA_EBB-C1979-C12, BCMA_EBB-C1980-G4, BCMA_EBB-C1980-D2, BCMA_EBB-C1978-A10, BCMA_EBB-C1978-D4, BCMA_EBB-C1980-A2, BCMA_EBB-C1981-C3, BCMA_EBB-C1978-G4, A7D12.2, C11D5.3, C12A3.2, C13F12.1, представленной в таблице 23, или последовательность, по существу, идентичную (например, на 95-99% идентичную или с до 5, 4, 3, 2 или 1 замены аминокислоты, например, замены (например, консервативной замены)) любой из указанных выше последовательностей. В определенных вариантах осуществления молекула CAR BCMA или антигенсвязывающий домен против BCMA включает одну, две или три CDR из вариабельной области тяжелой цепи (например, HCDR1, HCDR2 и/или HCDR3), представленной в таблице 24, и/или одну, две или три CDR из вариабельной области легкой цепи (например, CDR1 LC, CDR2 LC и/или CDR3 LC) BCMA-1, BCMA-2, BCMA-3, BCMA-4, BCMA-5, BCMA-6, BCMA-7, BCMA-8, BCMA-9, BCMA-10, BCMA-11, BCMA-12, BCMA-13, BCMA-14, BCMA-15, 149362, 149363, 149364, 149365, 149366, 149367, 149368, 149369, BCMA_EBB-C1978-A4, BCMA_EBB-C1978-G1, BCMA_EBB-C1979-C1, BCMA_EBB-C1978-C7, BCMA_EBB-C1978-D10, BCMA_EBB-C1979-C12, BCMA_EBB-C1980-G4, BCMA_EBB-C1980-D2, BCMA_EBB-C1978-A10, BCMA_EBB-C1978-D4, BCMA_EBB-C1980-A2, BCMA_EBB-C1981-C3, BCMA_EBB-C1978-G4, A7D12.2, C11D5.3, C12A3.2, C13F12.1, представленной в таблице 25, или последовательность, по существу, идентичную (например, на 95-99% идентичную или с до 5, 4, 3, 2 или 1 замены аминокислоты, например, замены (например, консервативной замены)) любой из указанных выше последовательностей.

В определенных вариантах осуществления молекула CAR BCMA или антигенсвязывающий домен против BCMA включает

(i) CDR1 LC, CDR2 LC и CDR3 LC любых аминокислотных последовательностей легкой цепи BCMA-связывающего домена, представленных в таблице 1 или 16, в SEQ ID NO: 271 или 273 или в CDR LC в таблице 21, 23 или 25; и/или,

(ii) CDR1 HC, CDR2 HC и CDR3 HC любых аминокислотных последовательностей тяжелой цепи BCMA-связывающего домена, представленных в таблице 1 или 16, в SEQ ID NO: 271 или 273 или в CDR HC в таблице 20, 22 или 24.

В определенных вариантах осуществления молекула BCMA (например, нуклеиновая кислота CAR BCMA или полипептид CAR BCMA, как представлено в настоящем описании) или антигенсвязывающий домен против BCMA, как представлено в настоящем описании, включает:

(1) три CDR легкой цепи (LC), выбранные из одного из следующего:

(i) CDR1 LC SEQ ID NO: 504, CDR2 LC SEQ ID NO: 544 и CDR3 LC SEQ ID NO: 584 BCMA-4 CAR (139103);

(ii) CDR1 LC SEQ ID NO: 514, CDR2 LC SEQ ID NO: 554 и CDR3 LC SEQ ID NO: 594 BCMA-10 CAR (139109);

(iii) CDR1 LC SEQ ID NO: 516, CDR2 LC SEQ ID NO: 556 и CDR3 LC SEQ ID NO: 596 BCMA-13 CAR (139112); или

(iv) CDR1 LC SEQ ID NO: 518, CDR2 LC SEQ ID NO: 558 и CDR3 LC SEQ ID NO: 598 BCMA-15 CAR (139114); и/или

(2) три CDR тяжелой цепи (HC), выбранные из одного из следующего:

(i) CDR1 HC SEQ ID NO: 384, CDR2 HC SEQ ID NO: 424 и CDR3 HC SEQ ID NO: 464 BCMA-4 CAR (139103);

(ii) CDR1 HC SEQ ID NO: 394, CDR2 HC SEQ ID NO: 434 и CDR3 HC SEQ ID NO: 474 BCMA-10 CAR (139109);

(iii) CDR1 HC SEQ ID NO: 396, CDR2 HC SEQ ID NO: 436 и CDR3 HC SEQ ID NO: 476 BCMA-13 CAR (139112); или

(iv) CDR1 HC SEQ ID NO: 398, CDR2 HC SEQ ID NO: 438 и CDR3 HC SEQ ID NO: 478 BCMA-15 (139114).

В определенных вариантах осуществления молекула CAR BCMA (например, нуклеиновая кислота CAR BCMA или полипептид CAR BCMA как представлено в настоящем описании) или антигенсвязывающий домен против BCMA, как представлено в настоящем описании, включает:

(1) три CDR легкой цепи (LC), выбранные из одного из следующего:

(i) CDR1 LC SEQ ID NO: 744, CDR2 LC SEQ ID NO: 784 и CDR3 LC SEQ ID NO: 824 BCMA-4 CAR (139103);

(ii) CDR1 LC SEQ ID NO: 754, CDR2 LC SEQ ID NO: 794 и CDR3 LC SEQ ID NO: 834 BCMA-10 CAR (139109);

(iii) CDR1 LC SEQ ID NO: 756, CDR2 LC SEQ ID NO: 796 и CDR3 LC SEQ ID NO: 836 BCMA-13 CAR (139112); или

(iv) CDR1 LC SEQ ID NO: 758, CDR2 LC SEQ ID NO: 798 и CDR3 LC SEQ ID NO: 838 BCMA-15 CAR (139114); и/или

(2) три CDR тяжелой цепи (HC), выбранные из одного из следующего:

(i) CDR1 HC SEQ ID NO: 624, CDR2 HC SEQ ID NO: 664 и CDR3 HC SEQ ID NO: 704 BCMA-4 CAR (139103);

(ii) CDR1 HC SEQ ID NO: 634, CDR2 HC SEQ ID NO: 674 и CDR3 HC SEQ ID NO: 714 BCMA-10 CAR (139109);

(iii) CDR1 HC SEQ ID NO: 636, CDR2 HC SEQ ID NO: 676 и CDR3 HC SEQ ID NO: 716 BCMA-13 CAR (139112); или

(iv) CDR1 HC SEQ ID NO: 638, CDR2 HC SEQ ID NO: 678 и CDR3 HC SEQ ID NO: 718 BCMA-15 CAR (139114).

В определенных вариантах осуществления молекула CAR BCMA (например, нуклеиновая кислота CAR BCMA или полипептид CAR BCMA, как представлено в настоящем описании) или антигенсвязывающий домен против BCMA, как представлено в настоящем описании, включает:

(1) три CDR легкой цепи (LC), выбранные из одного из следующего:

(i) CDR1 LC SEQ ID NO: 984 CDR2 LC SEQ ID NO: 1024 и CDR3 LC SEQ ID NO: 1064 BCMA-4 CAR (139103);

(ii) CDR1 LC SEQ ID NO: 994, CDR2 LC SEQ ID NO: 1034 и CDR3 LC SEQ ID NO: 1074 BCMA-10 CAR (139109);

(iii) CDR1 LC SEQ ID NO: 996, CDR2 LC SEQ ID NO: 1036 и CDR3 LC SEQ ID NO: 1076 BCMA-13 CAR (139112); или

(iv) CDR1 LC SEQ ID NO: 998, CDR2 LC SEQ ID NO: 1038 и CDR3 LC SEQ ID NO: 1078 BCMA-15 CAR (139114); и/или

(2) три CDR тяжелой цепи (HC), выбранные из одного из следующего:

(i) CDR1 HC SEQ ID NO: 864, CDR2 HC SEQ ID NO: 904 и CDR3 HC SEQ ID NO: 944 BCMA-4 CAR (139103);

(ii) CDR1 HC SEQ ID NO: 874, CDR2 HC SEQ ID NO: 914 и CDR3 HC SEQ ID NO: 954 BCMA-10 CAR (139109);

(iii) CDR1 HC SEQ ID NO: 876, CDR2 HC SEQ ID NO: 916 и CDR3 HC SEQ ID NO: 956 BCMA-13 CAR (139112);

(iv) CDR1 HC SEQ ID NO: 878, CDR2 HC SEQ ID NO: 918 и CDR3 HC SEQ ID NO: 958 BCMA-15 CAR (139114).

В определенных вариантах осуществления молекула CAR BCMA (например, нуклеиновая кислота CAR BCMA или полипептид CAR BCMA, как представлено в настоящем описании) или антигенсвязывающий домен против BCMA, как представлено в настоящем описании, включает аминокислотную последовательность гуманизированного scFv SEQ ID NO: 271 или 273 или нуклеотидную последовательность, кодирующую scFv (SEQ ID NO: 272 или 274), или его антигенсвязывающий домен (например, VH, VL или одну или более их CDR).

Если не указано иначе, все технические и научные термины, используемые в настоящем описании, обладают тем же значением, которое общепринято понятно специалисту в области, к которой принадлежит изобретение. Хотя в практическом осуществлении или тестировании настоящего изобретения можно использовать способы и материалы, схожие или эквивалентные представленным в настоящем описании, подходящие способы и материалы описаны ниже. Все публикации, патентные заявки, патенты и другие ссылки, упомянутые в настоящем описании, включены в настоящее описание в качестве ссылок в полном объеме. Кроме того, материалы, способы и примеры являются исключительно иллюстративными и не предназначены для ограничения. Заголовки, подзаголовки или пронумерованные или обозначенные буквами элементы, например, (a), (b), (i) и т.д., представлены исключительно для простоты чтения. Использование заголовков или пронумерованных или обозначенных буквами элементов в настоящем описании не требует того, чтобы этапы или элементы осуществляли в алфавитном порядке, или того, чтобы этапы или элементы обязательно отделяли друг от друга. Другие признаки, объекты и преимущества изобретения будут очевидны из описания, чертежей и формулы изобретения.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ

Фигура 1, содержащая фигуры 1A и 1B, является двумя графическими представлениями экспрессии BCMA в образцах миеломы, которую определяют посредством количественной ПЦР. Экспрессию BCMA определяли в различных линиях клеток миеломы (фиг. 1A). Сравнивали экспрессию BCMA в нормальных плазматических клетках и образцах от пациентов с миеломой (фиг. 1B).

Фигура 2, содержащая фигуры 2A, 2B, 2C, 2D и 2E, является серией графических представлений экспрессии BCMA в линиях клеток множественной миеломы и первичных образцах посредством проточной цитометрии. BCMA определяли на поверхности клеток линий U266 (фиг. 2A), H929 (фиг. 2B) и 8226 (фиг. 2C). BCMA также однородно экспрессировался на большинстве клональных плазматических клеток у 9 из 10 анализируемых пациентов с множественной миеломой (фиг. 2D и 2E).

Фигура 3, содержащая фигуры 3A и 3B, является серией графических представлений, где показано отсутствие экспрессии BCMA в нормальных клетках периферической крови и после экспансии CD3/CD28 (фиг. 3A) и на нормальных клетках костного мозга (фиг. 3B).

Фигура 4, содержащая фигуры 4A, 4B, 4C, 4D, 4E,и 4F, является серией изображений и графиком, где показана экспрессия BCMA в нормальных тканях. Ткани, положительно окрашенные на экспрессию BCMA при иммуногистохимическом анализе, являлись лимфоузлом (фиг. 4A) и миндалиной (фиг. 4B). Типичные ткани, не окрашивающиеся на экспрессию BCMA (BCMA-отрицательные), включали легкое (фиг. 4C), поджелудочную железу (фиг. 4D) и щитовидную железу (фиг. 4E). Также осуществляли анализ гибридизации РНК in situ в различных тканях (фиг. 4F).

Фигура 5 является схематическим представлением четырех конструкций CAR, содержащих гуманизированные scFv мыши против BCMA, обозначенные как pBCMA1, pBCMA2, pBCMA3 и pBCMA4.

Фигура 6 является серией графиков проточной цитометрии, на которых показана эффективность трансдукции и экспрессия конструкций BMCA-CAR на T-клетках. SS1-BBz представляет собой CAR против мезотелина, служащий в качестве отрицательного контроля.

Фигура 7, содержащая фигуру 7A и фигуру 7B, является двумя графиками, на которых показана антиген-специфическая продукция цитокинов BCMA-CART, измеряемая посредством анализов ELISA. Оценивали продукцию ИЛ-2 (фиг. 7A) и интерферона-гамма (ИФНγ) (фиг. 7B).

Фигура 8, содержащая фигуру 8A, фигуру 8B, фигуру 8C и фигуру 8D, является серией графиков, на которых показана цитотоксическая активность BCMA-CART в отношении указанных линий клеток миеломы: K562, экспрессирующей BCMA (фиг. 8A), 8226 (фиг. 8B), NCI H929 (фиг. 8C) и OPM2 (фиг. 8D).

Фигура 9, содержащая фигуру 9A и фигуру 9B, является графиком и серией изображений, на которых показана противоопухолевая активность BCMA-CART в доклинической модели множественной миеломы на животных. На фигуре 9A показано количественное определение средней биолюминесценции, представляющей опухолевую массу у целого животного животное (представленное в фотонах/секунду). На фигуре 9B представлены изображения биолюминесценции, определяемой у исследуемых мышей на 5, 15 и 20 день после обработки.

Фигура 10, содержащая фигуры 10A и 10B, является серией схематических представлений рабочих конструкций CAR BCMA, содержащих гуманизированные scFv мыши против BCMA.

Фигура 11 является серией графиков, на которых показана мишене-специфическая активация рабочих конструкций BCMA CAR, трансдуцируемых в репортерную линию клеток, посредством анализа репортерного гена люциферазы.

Фигура 12 является графиком проточной цитометрии, на котором показано распределение популяций CD4+ и CD8+ T-клеток после экспансии CD3/CD28 перед трансдукцией с использованием рабочих конструкций BCMA CAR.

Фигура 13 является серией графиков, на которых показаны эффективность трансдукции CART посредством детекции антигена BCMA-Fc через 10 дней после трансдукции посредством проточной цитометрии и соответствующие гистограммы.

Фигура 14 является серией гистограмм, на которых показана пролиферация рабочих клеток BCMA CART посредством окрашивания CFSE после стимуляции с использованием указанных клеток-мишеней (например, K562, K562, экспрессирующей BCMA, KMS11-luc, MM1-S-luc, NCI-H929, KMs26, RPMI 8226 и бус с CD3/CD28).

Фигура 15, содержащая фигуры 15A и 15B, представляет собой два графика, на которых показана пролиферация рабочих клеток BCMA CART посредством количества клеток (измеряемого посредством проточной цитометрии) в случае CART-экспрессирующих клеток (фиг. 15A) и общего количества клеток (фиг. 15B) после стимуляции с использованием указанных клеток-мишеней.

Фигура 16 является графиком, на котором показано цитолиз рабочих BCMA CART в ответ на BCMA-экспрессирующие клетки-мишени, клетки KMS11-люцифераза (слева) и клетки MM1-S-люцифераза (справа), в анализе люциферазы.

Фигура 17 является серией графиков, на которых показано цитолиз рабочих BCMA CART в ответ на BCMA-экспрессирующие клетки-мишени в анализе цитолиза клеток CFSE.

Фигура 18 является серией графиков, на которых показана мишене-специфическая активация CAR BCMA, содержащих scFv человека против BCMA, трансдуцированных в репортерную линию клеток в анализе репортерного гена люциферазы.

Фигура 19 является графиком проточной цитометрии, на котором показано распределение популяций CD4+ и CD8+ T-клеток после экспансии CD3/CD28 и перед трансдукцией CAR.

Фигура 20 является серией графиков проточной цитометрии и соответствующих гистограмм, на которых показана эффективность трансдукции посредством оценки экспрессии CAR на трансдуцированных T-клетках.

Фигура 21 является серией гистограмм, на которых показана пролиферация клеток BCMA CART в ответ на стимуляцию с использованием указанных клеток-мишеней (K562, K562, экспрессирующих BCMA, RPMI 8226, KM11-luc и NCI-H929), измеряемая посредством окрашивания CFSE.

Фигура 22, содержащая фигуру 22A, фигуру 22B и фигуру 22C, является серией графиков, на которых показана пролиферация клеток BCMA CART в ответ на стимуляцию с использованием указанных клеток-мишеней (K562, K562, экспрессирующих BCMA, RPMI 8226, KMS11-luc и NCI-H929), измеряемая посредством проточной цитометрии. Пролиферацию CART-клеток анализировали независимо для каждой популяции T-клеток, экспрессирующих CD3 (фиг. 22A), CD4 (фиг. 22B) и CD8 (фиг. 22C).

Фигура 23, содержащая фигуры 23A, 23B и 23C, является серией графиков, на которых показан цитолиз BCMA CART в ответ на BCMA-экспрессирующие клетки-мишени KMS11-люцифераза в анализе люциферазы. Мощность цитолиза (процент убитых клеток-мишеней) каждой конструкции CAR BCMA сравнивают с BCMA-3NP и BCMA-4NP на каждом графике на фигуре 23A. На фигуре 23B выбранные конструкции BCMA CAR сравнивали друг с другом. На фигуре 23C соотношение эффектор:мишень нормализовали по CAR-экспрессирующим клеткам. Ось X представляет собой процент убитых клеток-мишеней, ось Y представляет собой соотношение эффектор:мишень (E:T).

Фигура 24 является графиком, на котором показано, что лечение с использованием BCMA CART приводит к контролю прогрессирования заболевания в ксенотрансплантате множественной миеломы человека KMS-11-luc у мышей NSG. Средняя биолюминесценция (+/- SEM) опухолевых клеток представляет опухолевую массу у целого животного, как представлено на графике в фотонах/секунду (ф/с) ROI (интересующей области, например, целой мыши). Значимость вычисляли с помощью ANOVA относительно наполнителя, * означает P<0,01.

Фигура 25, содержащая фигуры 25A и 25B, является двумя графиками, на которых показана противоопухолевая активность T-клеток с CAR BCMA в модели множественной миеломы человека KMS-11 в двух независимых экспериментах. Средняя биолюминесценция (+/- SEM) опухолевых клеток представляет опухолевую массу у целого животного, представленное на графиках в фотонах/секунду (ф/с) (или суммарный поток или BLI) целой мыши. Значимость вычисляли с помощью ANOVA относительно наполнителя в день 28, на фигуре 25A * означает P<0,01. На фигуре 25B BCMA-4NP* означает результаты первого эксперимента для BCMA-4NP (результаты представлены на фигуре 25A).

Фигура 26, содержащая фигуры 26A, 26B, 26C и 26D, является графиками, на которых показана пролиферация клеток BCMA-CART при количественном анализе клеток BCMA-CART в периферической крови мышей, несущих опухоль KMS-11-luc. T-клетки периферической крови анализировали в дни 1, 3, 7, 10, 14 и еженедельно впоследствии после лечения CAR T-клетками. Что касается первого эксперимента с опухолями (результаты представлены на фигуре 25A), оценка популяции CD4+ CART представлена на фигуре 26A и оценка популяции CD8+ CART представлена на фигуре 26B. Что касается второго эксперимента с опухолями (результаты представлены на фигуре 25B), оценка популяции CD4+ CART представлена на фигуре 26C и оценка популяции CD8+ CART представлена на фигуре 26D.

Фигура 27, содержащая фигуры 27A, 27B, 27C и 27D, является графиками, на которых показана экспансия CAR BCMA-экспрессирующих T-клеток в костном мозге и селезенке в конце первого эксперимента с опухолями (результаты представлены на фигуре 25A). Вычисляли среднее количество CD4+ CAR BCMA-экспрессирующих T-клеток в костном мозге (фиг. 27A) и селезенке (фиг. 27B). Вычисляли среднее количество CD4=8+ CAR BCMA-экспрессирующих T-клеток в костном мозге (фиг. 27C) и селезенке (фиг. 27D). Образец J6MO представляет собой CAR T-клетки, экспрессирующие конструкцию CAR BCMA-4NP.

Фигура 28, содержащая фигуры 28A и 28B, является графиками, на которых представлен титр лентивируса для выбранных конструкций BCMA CAR в двух независимых экспериментах с лентивирусом. При первом тестировании тестировали два разных препарата ДНК конструкций BCMA CAR (A и B) (фиг. 28A). При втором тестировании тестировали три различных препарата ДНК конструкций BCMA CAR (A, B и C) (фиг. 28B).

Фигура 29 является графиком, на котором показан конкурентный анализ BCMA-4NP и выбранных конструкций BCMA CAR, BCMA-4 (B4), BCMA-10 (B10), BCMA-13 (B13) и BCMA-15 (B15).

Фигура 30, содержащая фигуры 30A, 30B, 30C, 30D и 30E, является графиками, на которых показаны результаты анализов аффинности выбранных конструкций BCMA: BMCA-10 (фиг. 30A), BCMA-13 (фиг. 30B), BCMA-15 (фиг. 30C), BCMA-4 (фиг. 30D) и BCMA-4NP (фиг. 30E).

Фигура 31 является графиком, на котором показано селективное связывание выбранных CAR BCMA-экспрессирующих T-клеток в случае рекомбинантного BCMA. Рекомбинантные формы BCMA и близкородственных членов семейств BAFFR и TACI, содержащих белки, слитые с Fc-доменами, инкубировали с T-клетками, экспрессирующими BCMA-4, BCMA-10, BCMA-13 и BCMA-15. Определяли процентную долю клеток, связавшихся с рекомбинантными белками (% положительных клеток).

Фигура 32, содержащая фигуры 32A, 32B, 32C, 32D, 32E и 32F, является серией изображений, на которых показано иммуногистохимическое окрашивание BCMA в ткани головного мозга. Окрашивание на BCMA в лазящих волокнах мозжечка яванского макака (фиг. 32A). Окрашивание на BCMA в тельцах нервных клеток в нижнем оливном ядре яванского макака (фиг. 32B). Окрашивание на BCMA (фиг. 32C) и Ig-окрашивание (контроль) (фиг. 32E) в продолговатом мозге яванского макака. Окрашивание BCMA (фиг. 32D) и Ig-окрашивание (контроль) (фиг. 32F) в продолговатом мозге человека.

Фигура 33, содержащая фигуры 33A, 33B, 33C, 33D и 33E, является серией изображений и графиком, на котором изображен РНК-анализ экспрессии BCMA в ткани головного мозга. Гибридизация РНК BCMA, DAPB и PPIB in situ в мозжечке не являющегося человеком примата (фиг. 33A). Гибридизация РНК BCMA, DAPB и PPIB in situ в продолговатом мозге не являющегося человеком примата (фиг. 33B). Анализ количественной ПЦР BCMA в мозжечке, продолговатом мозге, желудке и почке человека (фиг. 33C). Анализ количественной ПЦР BCMA в белом веществе, сером веществе, продолговатом мозге, желудке и почке яванского макака (фиг. 33D). Анализ RNAseq нормальной ткани человека (фиг. 33E), рамкой показана экспрессия BCMA в мозжечке.

Фигура 34 является схематической диаграммой, на которой показана хронология исследования для оценки безопасности и осуществимости терапии клетками BCMA CART при рецидивирующей и/или рефрактерной миеломе.

Фигуры 35A и 35B являются графиками, на которых показана концентрация цитокинов, секретируемых BCMA-10 CART при сокультивировании с клетками-мишенями. Фигура 35A является графиком, на котором показана концентрация интерлейкина-2 (ИЛ-2) и интерферона-гамма (ИФНγ), секретируемых BCMA-10 CART. Фигура 35B является графиком, на котором показана концентрация фактора некроза опухоли (ФНО), секретируемого BCMA-10 CART.

Фигуры 36A и 36B являются графиками, на которых показана кривая роста и эффективность лентивирусной трансдукции huBCMA-BBz T-клеток. Фигура 36A является графиком, на котором показано количество T-клеток, трансдуцированных с использованием вектора huBCMA-BBz, через несколько дней после экспансии. Фигура 36B является панелью графиков проточной цитометрии, на которых показана экспрессия в день 6 при экспансии ex vivo BCMA на клетках CART-BCMA (T-клетках, трансдуцированных с использованием вектора huBCMA-BBz) по сравнению с нетрансдуцированными клетками NTD.

Фигура 37 является панелью гистограмм проточной цитометрии, на которых показана поверхностная экспрессия BCMA на различных линиях клеток, включая клетки K562-BCMA и линии клеток множественной миеломы NCI H929, U266, RPMI 8226, OPM2 и MM1S. На всех графиках оранжевый сплошной пик представляет изотипический контроль, и синий сплошной пик представляет окрашивание с использованием антитела против BCMA.

Фигуры 38A и 38B являются графиками, на которых показана концентрация цитокинов, продуцируемых клетками CART-BCMA в ответ на линии клеток миеломы. На фигуре 38A показана концентрация продуцируемого ИЛ-2, и на фигуре 38B показана концентрация продуцируемого ИФНγ. Значения представляют собой концентрацию цитокина в пг/мл.

Фигуры 39A, 39B и 39C являются графиками, на которых показано антиген-специфический цитолиз BCMA⁺ линий клеток множественной миеломы клетками CART-BCMA. На фигуре 39A показано антиген-специфический цитолиз клеток K562-BCMA, на фигуре 39B показано антиген-специфический цитолиз клеток RPMI 8226 и на фигуре 39C показано антиген-специфический цитолиз клеток MM1S.

Фигуры 40A, 40B и 4°C являются графиками, на которых показано, что клетки CART-BCMA демонстрируют эффективную противомиеломную активность in vivo. Фигура 40A является графиком, на котором показана общая интенсивность излучения у мышей, которым вводили нетрансдуцированные клетки, и фигура 40B является графиком, на котором показана общая интенсивность излучения у мышей с CART-BCMA. Фигура 4°C является графиком, на котором показан процент выживаемости мышей NTD или CART-BCMA после инъекции T-клеток. Представлено дорзальное испускание фотонов из опухолей RPMI 8226 CBG+, при этом отдельные животные изображены серым, и средняя общая интенсивность излучения представлена красным. n=10 для каждой группы. Время представлено в неделях после инъекции T-клеток.

На фигуре 41A-41D показаны различные конфигурации в отдельном векторе, например, где U6-регулируемая shRNA находится выше или ниже EF1 альфа-регулируемых CAR-кодирующих элементов. В примерах конструкций, изображенных на фиг. 41A и 41B, транскрипция происходит с помощью промоторов U6 и EF1 альфа в одном направлении. В примерах конструкций, изображенных на фиг. 41C и 41D, транскрипция происходит с помощью промоторов U6 и EF1 альфа в разных направлениях. На фигуре 41E, shRNA (и соответствующий промотор U6) находится на первом векторе, и CAR (и соответствующий промотор EF1 альфа) находится на втором векторе.

На фигуре 42 изображены структуры двух примеров конфигураций RCAR. Антигенсвязывающие члены содержат антигенсвязывающий домен, трансмембранный домен и домен-переключатель. Внутриклеточные связывающие члены содержат домен-переключатель, костимуляторный сигнальный домен и первичный сигнальный домен. Две конфигурации свидетельствуют о том, что первый и второй домены-переключатели, представленные в настоящем описании, могут находиться в разных ориентациях в отношении антигенсвязывающего члена и внутриклеточного связывающего члена. Другие конфигурации RCAR дополнительно представлены в настоящем описании.

На фигуре 43 показано, что пролиферацию CAR-экспрессирующих, трансдуцированных T-клеток повышают низкими дозами RAD001 в системе культивирования клеток. CART сокультивировали с клетками Nalm-6 в присутствие различных концентраций RAD001. Количество CAR-положительных CD3-положительных T-клеток (черный) и общее количество T-клеток (серый) оценивали через 4 дня сокультивирования.

На фигуре 44 изображены измерения роста опухоли клеток NALM6-luc с ежедневным введением дозы RAD001 0,3, 1, 3 и 10 мг/кг (мг/кг) или дозы наполнителя. Кругами обозначен наполнитель, квадратами обозначена доза 10 мг/кг RAD001, треугольниками обозначена доза 3 мг/кг RAD001, перевернутыми треугольниками обозначена доза 1 мг/кг RAD001 и ромбами обозначена доза 0,3 мг/кг RAD001.

На фигурах 45A и 45B показаны фармакокинетические кривые, на которых показано количество RAD001 в крови мышей NSG с опухолями NALM6. На фиг. 45A показана PK в день 0 после первой дозы RAD001. На фиг. 45B показана PK в день 14 после последней дозы RAD001. Ромбами обозначена доза 10 мг/кг RAD001, квадратами обозначена доза 1 мг/кг RAD001, треугольниками обозначена доза 3 мг/кг RAD001 и X обозначена доза 10 мг/кг RAD001.

На фигурах 46A и 46B показана пролиферация in vivo клеток с гуманизированным CD19 CART с введением дозы RAD001 и без него. Низкие ежедневные дозы RAD001 (0,003 мг/кг) приводят к повышению пролиферации CAR T-клеток выше нормального уровня пролиферации huCAR19. На фигурах 46A показаны CD4⁺ CAR T-клетки, на фиг. 46B показаны CD8⁺ CAR T-клетки. Кругами обозначен PBS, квадратами обозначен huCTL019, треугольниками обозначен huCTL019 с 3 мг/кг RAD001, перевернутыми треугольниками обозначен huCTL019 с 0,3 мг/кг RAD001, ромбами обозначен huCTL019 с 0,03 мг/кг RAD001 и кругами обозначен huCTL019 с 0,003 мг/кг RAD001.

На фиг. 47 изображена экспрессия CD19 в опухолевых клетках пациента. Опухолевые клетки CD138⁺ CD45^dim окрашивали на CD19 (ось x) и CD38 (ось y). Приблизительно 1-2% опухолевых клеток экспрессировали антиген CD19.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ

Определения

Если не указано иначе, все технические и научные термины, используемые в настоящем описании, имеют то же значение, которое общепринято понятно специалисту в области, к которой принадлежит изобретение.

Термин в единственном числе относится к одному или более (т.е. по меньшей мере одному) грамматическому объекту в описании. В качестве примера, термин "элемент" относится к одному элементу или более элементам.

Термин "приблизительно" в отношении измеримого значения, такого как количество, длительность времени и т.п., предназначен для включения вариантов ±20%, или в некоторых случаях ±10%, или в некоторых случаях ±5%, или в некоторых случаях ±1%, или в некоторых случаях ±0,1% указанного значения, т.к. такие варианты подходят для осуществления описываемых способов.

Термин "химерный антигенный рецептор" или, альтернативно, "CAR" относится к рекомбинантной полипептидной конструкции, содержащей, по меньшей мере, внеклеточный антигенсвязывающий домен, трансмембранный домен и цитоплазматический сигнальный домен (также обозначаемый в настоящем описании как "внутриклеточный сигнальный домен"), содержащий функциональный сигнальный домен, полученный из стимуляторной молекулы, описываемой ниже. В некоторых вариантах осуществления домены в полипептидной конструкции CAR находятся в одной полипептидной цепи, например, содержат химерный слитый белок. В некоторых вариантах осуществления домены в полипептидной конструкции CAR не являются смежными друг с другом, например, находятся в разных полипептидных цепях, например, как в RCAR, как представлено в настоящем описании.

В одном из аспектов стимуляторная молекула CAR является дзета-цепью, ассоциированной с T-клеточным рецепторным комплексом. В одном из аспектов цитоплазматический сигнальный домен содержит первичный сигнальный домен (например, первичный сигнальный домен CD3 дзета). В одном из аспектов цитоплазматический сигнальный домен дополнительно содержит один или более функциональных сигнальных доменов, полученных по меньшей мере из одной костимуляторной молекулы, описываемой ниже. В одном из аспектов костимуляторная молекула выбрана из 4-1BB (т.е. CD137), CD27, ICOS и/или CD28. В одном из аспектов CAR содержит химерный слитый белок, содержащий внеклеточный антиген-распознающий домен, трансмембранный домен и внутриклеточный сигнальный домен, содержащий функциональный сигнальный домен, полученный из стимуляторной молекулы. В одном из аспектов CAR содержит химерный слитый белок, содержащий внеклеточный антиген-распознающий домен, трансмембранный домен и внутриклеточный сигнальный домен, содержащий функциональный сигнальный домен, полученный из костимуляторной молекулы, и функциональный сигнальный домен, полученный из стимуляторной молекулы. В одном из аспектов CAR содержит химерный слитый белок, содержащий внеклеточный антиген-распознающий домен, трансмембранный домен и внутриклеточный сигнальный домен, содержащий два функциональных сигнальных домена, полученных из одной или более костимуляторных молекул, и функциональный сигнальный домен, полученный из стимуляторной молекулы. В одном из аспектов CAR содержит химерный слитый белок, содержащий внеклеточный антиген-распознающий домен, трансмембранный домен и внутриклеточный сигнальный домен, содержащий по меньшей мере два функциональных сигнальных домена, полученных из одной или более костимуляторных молекул, и функциональный сигнальный домен, полученный из стимуляторной молекулы. В одном из аспектов CAR содержит необязательную лидерную последовательность на амино-конце (N-конце) слитого белка CAR. В одном из аспектов CAR дополнительно содержит лидерную последовательность на N-конце внеклеточного антиген-распознающего домена, где лидерная последовательность, необязательно, отщепляется от антиген-распознающего домена (например, scFv) при клеточном процессинге и транспорте CAR к клеточной мембране.

CAR, содержащий антигенсвязывающий домен (например, scFv, однодоменное антитело или TCR (например, связывающий домен TCR альфа или связывающий домен TCR бета)), воздействующий на конкретный опухолевый маркер X, где X может являться опухолевым маркером, представленным в настоящем описании, также обозначают как XCAR. Например, CAR, содержащий антигенсвязывающий домен, воздействующий на BCMA, обозначают как CAR BCMA. CAR можно экспрессировать в любой клетке, например, иммунной эффекторной клетке, как представлено в настоящем описании (например, T-клетке или NK-клетке).

Термин "сигнальный домен" относится к функциональной части белка, действующей, передавая информацию внутри клетки для регуляции клеточной активности посредством определенных путей передачи сигнала посредством образования вторичных мессенджеров или функционирования в качестве эффекторов, отвечающих на такие мессенджеры.

Как применяют в настоящем описании, термин "BCMA" относится к B-клеточному антигену созревания. BCMA (также известный как TNFRSF17, BCM или CD269) является членом семейства рецепторов фактора некроза опухоли (TNFR) и, главным образом, экспрессируется на окончательно дифференцированных B-клетках, например, B-клетках памяти и плазматических клетках. Его лиганд назван B-клеточным активатором семейства ФНО (BAFF) и индуцирующим пролиферацию лигандом (APRIL). BCMA участвует в опосредовании выживаемости плазматических клеток для поддержания длительного гуморального иммунитета. Ген BCMA расположен на хромосоме 16, приводя к образованию первичного транскрипта мРНК длиной 994 нуклеотидов (регистрационный номер NCBI NM_001192.2), кодирующего белок из 184 аминокислот (NP_001183.2). Описан второй антисмысловой транскрипт, полученный из локуса BCMA, который может играть роль в регуляции экспрессии BCMA. (Laabi Y. et al., Nucleic Acids Res., 1994, 22:1147-1154). Описаны дополнительные варианты транскрипции с неизвестным значением (Smirnova AS et al. Mol Immunol., 2008, 45(4):1179-1183. Идентифицирована вторая изоформа, также известная как TV4 (идентификатор Uniprot Q02223-2). Как применяют в настоящем описании, термин "BCMA" включает белки, содержащие мутации, например, точечные мутации, фрагменты, инсерции, делеции и варианты сплайсинга полноразмерного BCMA дикого типа.

Как применяют в настоящем описании, термин "антитело" относится к последовательности белка или полипептида, полученной из молекулы иммуноглобулина, специфически связывающейся с антигеном. Антитела могут являться поликлональными или моноклональными, много- или одноцепочечными или интактными иммуноглобулинами, и их можно получать из природных источников или рекомбинантных источников. Антитела могут являться тетрамерами молекул иммуноглобулинов.

Термин "фрагмент антитела" относится по меньшей мере к одной части интактного антитела или его рекомбинантным вариантам и относится к антигенсвязывающему домену, например, антигенраспознающей вариабельной области интактного антитела, достаточной для придания способности к распознаванию и специфическому связыванию фрагмента антитела с мишенью, такой как антиген. Неограничивающие примеры фрагментов антител включают Fab, Fab'-, F(ab')_2- и Fv-фрагменты, scFv-фрагменты антител, линейные антитела, однодоменные антитела, такие как sdAb (VL или VH), домены VHH верблюжьих и полиспецифические молекулы, образованные из фрагментов антител, таких как бивалентный фрагмент, содержащий два или более, например, два, Fab-фрагмента, связанных дисульфидным мостиком в шарнирной области, или две или более, например, две, связанные выделенных CDR или другие эпитоп-связывающие фрагменты антител. Фрагмент антитела также можно встраивать в однодоменные антитела, макситела, минитела, нанотела, интратела, диатела, триатела, тетратела, v-NAR и бис-scFv (см., например, Hollinger and Hudson, Nature Biotechnology 23:1126-1136, 2005). Фрагменты антител также можно пересаживать на каркасы на основе полипептидов, таких как фибронектин типа III (Fn3) (см. патент США №: 6703199, в котором описывают минитела на основе полипептида фибронектина).

Термин "scFv" относится к слитому белку, содержащему по меньшей мере один фрагмент антитела, содержащий вариабельную область легкой цепи, и по меньшей мере один фрагмент антитела, содержащий вариабельную область тяжелой цепи, где вариабельные области легкой и тяжелой цепи смежно связывают с помощью короткого гибкого полипептидного линкера, и они способны экспрессироваться в виде одноцепочечного полипептида, и где scFv сохраняет специфичность интактного антитела, из которого его получают. Как применяют в настоящем описании, если не указано иначе, scFv может содержать вариабельные области VL и VH в любом порядке, например, относительно N-конца и C-конца полипептида scFv может содержать VL-линкер-VH или может содержать VH-линкер-VL.

Как применяют в настоящем описании, термины "определяющая комплементарность область" или "CDR" относятся к аминокислотным последовательностям в вариабельных областях антитела, придающим специфичность в отношении антигена и аффинность связывания. Например, в основном, существует три CDR в каждой вариабельной области тяжелой цепи (например, HCDR1, HCDR2 и HCDR3) и три CDR в каждой вариабельной области легкой цепи (LCDR1, LCDR2, и LCDR3). Точные границы аминокислотной последовательности указанной CDR можно определять с использованием любой из ряда хорошо известных схем, включая описываемые Kabat et al. (1991), "Sequences of Proteins of Immunological Interest", 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (схема нумерации по "Kabat"), Al-Lazikani et al., (1997) JMB 273.927-948 (схема нумерации по "Chothia") или их комбинации. В случае схемы нумерации по Kabat в некоторых вариантах осуществления аминокислотные остатки CDR в вариабельном домене тяжелой цепи (VH) нумеруют как 31-35 (HCDR1), 50-65 (HCDR2) и 95-102 (HCDR3), а аминокислотные остатки CDR в вариабельном домене легкой цепи (VL) нумеруют 24-34 (LCDR1), 50-56 (LCDR2) и 89-97 (LCDR3). В случае схемы нумерации по Chothia в некоторых вариантах осуществления аминокислоты CDR в VH нумеруют как 26-32 (HCDR1), 52-56 (HCDR2) и 95-102 (HCDR3), а аминокислотные остатки CDR в VL нумеруют как 26-32 (LCDR1), 50-52 (LCDR2) и 91-96 (LCDR3). В комбинированной схеме нумерации по Kabat и Chothia в некоторых вариантах осуществления CDR соответствуют аминокислотным остаткам, являющимся частью CDR по Kabat, CDR по Chothia, или и той, и другой. Например, в некоторых вариантах осуществления CDR соответствуют аминокислотным остаткам 26-35 (HCDR1), 50-65 (HCDR2) и 95-102 (HCDR3) в VH, например, VH млекопитающего, например, VH человека, и аминокислотным остаткам 24-34 (LCDR1), 50-56 (LCDR2) и 89-97 (LCDR3) в VL, например, VL млекопитающего, например, VL человека.

Часть композиции CAR по изобретению, содержащей антитело или фрагмент антитела, может существовать во множестве форм, например, где антигенсвязывающий домен экспрессируется в виде части полипептидной цепи, включая, например, фрагмент однодоменного антитела (sdAb), одноцепочечное антитело (scFv) или, например, гуманизированное антитело (Harlow et al., 1999, в: Using Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, NY; Harlow et al., 1989, в: Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor, New York; Houston et al., 1988, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883; Bird et al., 1988, Science 242:423-426). В одном из аспектов антигенсвязывающий домен композиции CAR по изобретению содержит фрагмент антитела. В дополнительном аспекте CAR содержит фрагмент антитела, содержащий scFv.

Как применяют в настоящем описании, термин "связывающий домен" или "молекула антитела" (также обозначаемый в настоящем описании как "связывающий домен против мишени (например, BCMA)") относится к белку, например, цепи иммуноглобулина или его фрагмента, содержащему по меньшей мере одну последовательность вариабельного домена иммуноглобулина. Термин "связывающий домен" или "молекула антитела" включает антитела и фрагменты антител. В варианте осуществления молекула антитела является полиспецифической молекулой антитела, например, она содержит множество последовательностей вариабельных доменов иммуноглобулина, где первая последовательность вариабельного домена иммуноглобулина из множества имеет специфичность связывания для первого эпитопа, и вторая последовательность вариабельного домена иммуноглобулина из множества имеет специфичность связывания для второго эпитопа. В варианте осуществления молекула полиспецифического антитела является молекулой биспецифического антитела. Биспецифическое антитело имеет специфичность не более чем для двух антигенов. Молекула биспецифического антитела отличается первой последовательностью вариабельного домена иммуноглобулина, имеющей специфичность связывания для первого эпитопа, и второй последовательностью вариабельного домена иммуноглобулина, имеющей специфичность связывания для второго эпитопа. Термин "тяжелая цепь антитела" относится к более крупной из двух типов полипептидных цепей, присутствующих в молекулах антител в их природных конформациях, и, как правило, определяющей класс, к которому принадлежит антитело.

Термин "легкая цепь антитела" относится к меньшей из двух типов полипептидных цепей, присутствующих в молекулах антител в их природных конформациях. Каппа- (κ) и лямбда- (λ) легкие цепи относятся к двум основным изотипам легких цепей антител.

Термин "рекомбинантное антитело" относится к антителу, получаемому с использованием технологии рекомбинантных ДНК, такому как, например, антитело, экспрессируемое бактериофагом или дрожжевой системой экспрессии. Термин также следует истолковывать в значении антитела, получаемого посредством синтеза молекулы ДНК, кодирующей антитело, и где с молекулы ДНК экспрессируется белок антитела, или аминокислотной последовательности, определяющей антитело, где ДНК или аминокислотную последовательность получают с использованием технологии рекомбинантной ДНК, или аминокислотной последовательности, доступной и хорошо известной в этой области.

Термин "антиген" или "Ag" относится к молекуле, вызывающей иммунный ответ. Этот иммунный ответ может включать продукцию антител, или активацию специфичных иммунокомпетентных клеток, или и то, и другое. Специалистам в этой области будет понятно, что любая макромолекула, включая практически все белки или пептиды, может служить в качестве антигена. Кроме того, антигены можно получать из рекомбинантной или геномной ДНК. Специалистам в этой области будет понятно, что любая ДНК, содержащая нуклеотидные последовательности, или частичная нуклеотидная последовательность, кодирующая белок, вызывающий иммунный ответ, таким образом, кодирует "антиген" в том смысле, в котором этот термин используют в настоящем описании. Кроме того, специалисту в этой области будет понятно, что антиген может кодироваться не только полноразмерной нуклеотидной последовательностью гена. Очевидно, что настоящее изобретение, в качестве неограничивающих примеров, относится к применению частичных нуклеотидных последовательностей нескольких генов, и что эти нуклеотидные последовательности расположены в различных комбинациях так, что они кодируют полипептиды, вызывающие желаемый иммунный ответ. Кроме того, специалистам в этой области будет понятно, что антиген вообще может не кодироваться "геном". Очевидно, что антиген можно получать синтезированным, или его можно получать из биологического образца, или он может являться макромолекулой помимо полипептида. Такой биологический образец может включать, в качестве неограничивающих примеров, образец ткани, образец опухоли, клетку или жидкость с другими биологическими компонентами.

Термин "противоопухолевый эффект" относится к биологическому эффекту, который может проявляться различными способами, включая, в качестве неограничивающих примеров, например, снижение объема опухоли, снижение количества опухолевых клеток, снижение количества метастазов, повышение предполагаемой продолжительности жизни, снижение пролиферации опухолевых клеток, снижение выживаемости опухолевых клеток или улучшение различных физиологических симптомов, ассоциированных со злокачественным состоянием. "Противоопухолевый эффект" также может проявляться как способность пептидов, полинуклеотидов, клеток и антител по изобретению предотвращать появление опухолей в первом участке.

Термин "противораковый эффект" относится к биологическому эффекту, который может проявляться различными способами, включая, в качестве неограничивающих примеров, например, снижение объема опухоли, снижение количества злокачественных клеток, снижение количества метастазов, повышение предполагаемой продолжительности жизни, снижение пролиферации злокачественных клеток, снижение выживаемости злокачественных клеток или улучшение различных физиологических симптомов, ассоциированных со злокачественным состоянием. "Противораковый эффект" также может проявляться как способность пептидов, полинуклеотидов, клеток и антител по изобретению предотвращать появление опухоли в первом участке. Термин "противоопухолевый эффект" относится к биологическому эффекту, который может проявляться различными способами, включая, в качестве неограничивающих примеров, например, снижение объема опухоли, снижение количества опухолевых клеток, снижение пролиферации опухолевых клеток или снижение выживаемости опухолевых клеток. Термин "аутологичный" относится к любому материалу, полученному из одного индивидуума, которому его позднее вводят.

Термин "аллогенный" относится к любому материалу, полученному из другого животного того же вида, что и индивидуум, которому материал вводят. Указывают, что два или более индивидуума являются аллогенными по отношению друг к другу, если гены в одном или более локусах не являются идентичными. В некоторых аспектах аллогенный материал из индивидуумов одного вида может в достаточной степени являться генетически непохожим, чтобы взаимодействовать антигенно.

Термин "ксеногенный" относится к трансплантату, полученному из животного другого вида.

Как применяют в настоящем описании, термин "аферез" относится к известному в этой области экстракорпоральному способу, посредством которого кровь донора или пациента удаляют из донора или пациента и пропускают через аппарат, с помощью которого отделяют выбранные конкретные составляющие и возвращают оставшуюся часть в кровоток донора или пациента, например, посредством обратного переливания крови. Таким образом, термин "аферезный образец" относится к образцу, полученному с использованием афереза.

Термин "комбинация" относится к фиксированной комбинации в одной стандартной лекарственной форме или комбинированному введению, где соединение по настоящему изобретению и партнера по комбинации (например, другое лекарственное средство, как описано ниже, также обозначаемое как "терапевтическое средство" или "ко-средство") можно вводить независимо одновременно или раздельно через временные интервалы, особенно когда эти временные интервалы делают возможной демонстрацию партнерами по комбинации кооперативного, например, синергического, действия. Отдельные компоненты можно упаковывать в набор или раздельно. Один или оба компонента (например, порошки или жидкости) можно восстанавливать или разводить до желаемой дозы перед введением. Как применяют в настоящем описании, термины "совместное введение" или "комбинированное введение" или т.п. предназначены для включения введения выбранного партнера по комбинации отдельному нуждающемуся в этом индивидууму (например, пациенту) и предназначены для включения схем лечения, в которых средства не обязательно вводить одним путем введения или одновременно. Как применяют в настоящем описании, термин "фармацевтическая комбинация" означает продукт, являющийся результатом смешивания или комбинирования нескольких активных ингредиентов, и включает фиксированные и нефиксированные комбинации активных ингредиентов. Термин "фиксированная комбинация" означает, что активные ингредиенты, например, соединение по настоящему изобретению и партнера по комбинации, вводят пациенту одновременно в форме единого объекта или дозы. Термин "нефиксированная комбинация" означает, что активные ингредиенты, например, соединение по настоящему изобретению и партнера по комбинации, вводят пациенту в виде отдельных объектов одновременно, параллельно или последовательно без конкретных временных пределов, где такое введение обеспечивает терапевтически эффективные уровни двух соединений в организме пациента. Последнее также применимо к терапии смесью соединений, например, введению трех или более активных ингредиентов.

Термин "злокачественное новообразование" относится к заболеванию, отличающемуся быстрым и неконтролируемым ростом аномальных клеток. Злокачественные клетки могут распространяться локально или через кровоток и лимфатическую систему в другие части тела. Неограничивающие примеры различных злокачественных новообразований представлены в настоящем описании и включают рак молочной железы, рак предстательной железы, рак яичников, рак шейки матки, рак кожи, рак поджелудочной железы, колоректальный рак, злокачественную опухоль почки, рак печени, рак головного мозга, лимфому, лейкоз, рак легких и т.п. Предпочтительные злокачественные новообразования, подвергаемые лечению способами, представленными в настоящем описании, включают множественную миелому, лимфому Ходжкина или неходжкинскую лимфому.

Термины "опухоль" и "злокачественное новообразование" в настоящем описании используют взаимозаменяемо, например, оба термина включают солидные и несолидные, например, диффузные или циркулирующие, опухоли. Как применяют в настоящем описании, термин "злокачественное новообразование" или "опухоль" включает предраковые, а также злокачественные новообразования и опухоли.

Как применяют в настоящем описании, термин "полученный из" означает взаимосвязь между первой и второй молекулой. Как правило, он относится к структурному сходству между первой молекулой и второй молекулой и не означает или не включает ограничение способа или источника в отношении первой молекулы, полученной из второй молекулы. Например, в случае внутриклеточного сигнального домена, полученного из молекулы CD3 дзета, внутриклеточный сигнальный домен сохраняет достаточную структуру CD3 дзета таким образом, что он обладает необходимой функцией, а именно, способностью генерировать сигнал в соответствующих условиях. Он не означает или не включает ограничение в отношении конкретного способа получения внутриклеточного сигнального домена, например, он не означает, что для получения внутриклеточного сигнального домена необходимо начинать с последовательности CD3 дзета и подвергать делеции нежелательную последовательность или включать мутации для получения внутриклеточного сигнального домена.

Фраза "заболевание, ассоциированное с экспрессией BCMA" включает, в качестве неограничивающих примеров, заболевание, ассоциированное с клетками, экспрессирующими BCMA (например, BCMA дикого типа или мутантный BCMA), или состояние, ассоциированное с клетками, экспрессирующими BCMA (например, BCMA дикого типа или мутантный BCMA), включая, например, пролиферативные заболевания, такие как злокачественное новообразование или предраковое состояние, такое как миелодисплазия, миелодиспластический синдром или предлейкоз, или несвязанное со злокачественным новообразованием показание, ассоциированное с клетками, экспрессирующими BCMA (например, BCMA дикого типа или мутантный BCMA). Чтобы избежать сомнений, заболевание, ассоциированное с экспрессией BCMA, может включать состояние, ассоциированное с клеткой, в настоящее время не экспрессирующей BCMA, например, т.к. экспрессия BCMA подвергнута отрицательной регуляции, например, в результате лечения молекулой против BCMA, например, ингибитором BCMA, представленным в настоящем описании, но в какое-то время экспрессирующей BCMA. В одном из аспектов злокачественное новообразование, ассоциированное с экспрессией BCMA (например, BCMA дикого типа или мутантного BCMA), является гемобластозом. В одном из аспектов гемобластоз является лейкозом или лимфомой. В одном из аспектов злокачественное новообразование, ассоциированное с экспрессией BCMA (например, BCMA дикого типа или мутантного BCMA), является злокачественным новообразованием из дифференцированных плазматических B-клеток. В одном из аспектов злокачественное новообразование, ассоциированное с экспрессией BCMA (например, BCMA дикого типа или мутантного BCMA), включает злокачественные новообразования, включая, в качестве неограничивающих примеров, например, один или более острых лейкозов, включая, в качестве неограничивающих примеров, например, острый B-клеточный лимфоидный лейкоз ("BALL"), острый T-клеточный лимфоидный лейкоз ("TALL"), острый лимфоидный лейкоз (ALL), один или более хронических лейкозов, включая, в качестве неограничивающих примеров, например, хронический миелогенный лейкоз (CML), хронический лимфоидный лейкоз (CLL). Дополнительные злокачественные образования или гематологические состояния, ассоциированные с экспрессией BMCA (например, BCMA дикого типа или мутантного BCMA), включают, в качестве неограничивающих примеров, например, B-клеточный пролимфоцитарный лейкоз, неоплазию из бластных плазмацитоидных дендритных клеток, лимфому Беркитта, диффузную крупноклеточную B-клеточную лимфому, фолликулярную лимфому, волосатоклеточный лейкоз, мелкоклеточную или крупноклеточную фолликулярную лимфому, злокачественные лимфопролиферативные состояния, MALT-лимфому, лимфому из клеток мантийной зоны, лимфому из клеток маргинальной зоны, множественную миелому, миелодисплазию и миелодиспластический синдром, неходжкинскую лимфому, плазмобластную лимфому, неоплазию из плазмацитоидных дендритных клеток, макроглобулинемию Вальденстрема и "предлейкоз", представляющий собой широкий спектр гематологических состояний, объединенных неэффективной продукцией (или дисплазией) миелоидных клеток крови, и т.п. В некоторых вариантах осуществления злокачественное новообразование является множественной миеломой, лимфомой Ходжкина, неходжкинской лимфомой или глиобластомой. В вариантах осуществления заболевание, ассоциированное с экспрессией BCMA, включает пролиферативное нарушение из плазматических клеток, например, бессимптомную миелому (вялотекущую множественную миелому или индолентную миелому), моноклональную гаммапатию неустановленной этиологии (MGUS), макроглобулинемию Вальденстрема, плазмоцитомы (например, плазмоклеточную дискразию, солитарную миелому, солитарную плазмоцитому, экстрамедуллярную плазмоцитому и множественную плазмоцитому), системный амилоидоз легких цепей и POEMS-синдром (также известный как синдром Кроу-Фуказа, болезнь Такацуки и PEP-синдром). Дополнительные заболевания, ассоциированные с экспрессией BCMA (например, BCMA дикого типа или мутантного BCMA) включают, в качестве неограничивающих примеров, например, атипичные и/или неклассические злокачественные новообразования, злокачественные новообразования, предраковые состояния или пролиферативные заболевания, ассоциированные с экспрессией BCMA (например, BCMA дикого типа или мутантного BCMA), например, злокачественное новообразование, представленное в настоящем описании, например, рак предстательной железы (например, кастрационно-резистентный или резистентный к терапии рак предстательной железы или метастазирующий рак предстательной железы), рак поджелудочной железы или рак легких.

Несвязанные со злокачественным новообразованием показания, ассоциированные с BCMA (например, BCMA дикого типа или мутантным BCMA), включают вирусные инфекции, например, ВИЧ, грибковые инфекции, например, C. neoformans, аутоиммунное заболевание, например ревматоидный артрит, системную красную волчанку (SLE), обыкновенную пузырчатку и синдром Шегрена, воспалительное заболевание кишечника, язвенный колит, связанные с трансплантацией аллоспецифические нарушения иммунитета, связанные со слизистым иммунитетом, и нежелательные иммунные ответы на биологические средства (например, фактор VIII), когда важен гуморальный иммунитет. В вариантах осуществления несвязанное со злокачественным новообразованием показание, ассоциированное с экспрессией BCMA, включает, в качестве неограничивающих примеров, например, аутоиммунное заболевание, (например, системную красную волчанку), воспалительные нарушения (аллергию и астму) и трансплантацию. В некоторых вариантах осуществления опухолевая антиген-экспрессирующая клетка экспрессирует, или в какое-либо время экспрессировала, мРНК, кодирующую опухолевый антиген. В варианте осуществления опухолевая антиген-экспрессирующая клетка продуцирует опухолевый антигенный белок (например, дикого типа или мутантный), и опухолевый антигенный белок может присутствовать на нормальных уровнях или сниженных уровнях. В варианте осуществления опухолевая антиген-экспрессирующая клетка продуцировала детектируемые уровни опухолевого антигенного белка в одно время, а затем продуцировала, по существу, недетектируемый опухолевый антигенный белок.

Термин "консервативные модификации последовательности" относится к модификациям аминокислот, которые значимо не влияют или не изменяют характеристики связывания антитела или фрагмента антитела, содержащего аминокислотную последовательность. Такие консервативные модификации включают замены аминокислот, инсерции и делеции. Модификации можно включать в антитело или фрагмент антитела по изобретению стандартными способами, известными в этой области, такими как сайт-специфический мутагенез и ПЦР-опосредованный мутагенез. Консервативные замены являются заменами, при которых аминокислотный остаток заменяют аминокислотным остатком, имеющим схожую боковую цепь. В этой области определены семейства аминокислотных остатков, имеющих схожие боковые цепи. Эти семейства включают аминокислоты с основными боковыми цепями (например, лизин, аргинин, гистидин), кислыми боковыми цепями (например, аспарагиновую кислоту, глутаминовую кислоту), незаряженными полярными боковыми цепями (например, глицин, аспарагин, глутамин, серин, треонин, тирозин, цистеин, триптофан), неполярными боковыми цепями (например, аланин, валин, лейцин, изолейцин, пролин, фенилаланин, метионин), бета-разветвленными боковыми цепями (например, треонин, валин, изолейцин) и ароматическими боковыми цепями (например, тирозин, фенилаланин, триптофан, гистидин). Таким образом, один или более аминокислотных остатков в CAR по изобретению можно заменять другими аминокислотными остатками из одного семейства боковых цепей и измененный CAR можно тестировать с использованием функциональных анализов, представленных в настоящем описании.

Термин "стимуляция" относится к первичному ответу, индуцируемому связыванием стимуляторной молекулы (например, комплекса TCR/CD3) с ее когнатным лигандом, таким образом, опосредующим передачу сигнала, в качестве неограничивающих примеров, такую как передача сигнала через комплекс TCR/CD3. Стимуляция может опосредовать измененную экспрессию конкретных молекул, такую как отрицательная регуляция TGF-β, и/или реорганизацию структур цитоскелета и т.п.

Термин "стимуляторная молекула" относится к молекуле, экспрессируемой T-клеткой, из которой получают первичные цитоплазматические сигнальные последовательности, регулирующие первичную активацию комплекса TCR стимулирующим образом в случае, по меньшей мере, некоторых аспектов T-клеточного пути передачи сигнала. В некоторых вариантах осуществления ITAM-содержащий домен в CAR повторяет передачу сигнала первичного TCR независимо от эндогенных комплексов TCR. В одном из аспектов первичный сигнал инициируется, например, связыванием комплекса TCR/CD3 с молекулой MHC, нагруженной пептидом, что приводит к опосредованию T-клеточного ответа, включая, в качестве неограничивающих примеров, пролиферацию, активацию, дифференцировку и т.п. Первичная цитоплазматическая сигнальная последовательность (также обозначаемая как "первичный сигнальный домен"), действующая стимуляторным образом, может содержать сигнальный мотив, известный в качестве иммунорецепторного тирозинового активирующего мотива или ITAM. Неограничивающие примеры ITAM, содержащего первичную цитоплазматическую сигнальную последовательность, особенно применимую в настоящем изобретении, включают полученные из TCR дзета, FcR гамма, FcR бета, CD3 гамма, CD3 дельта, CD3 эпсилон, CD5, CD22, CD79a, CD79b, CD278 (также известный как "ICOS"), FcεRI и CD66d, DAP10 и DAP12. В конкретном CAR по изобретению внутриклеточный сигнальный домен в любом одном или более CAR по изобретению содержит внутриклеточную сигнальную последовательность, например, первичную сигнальную последовательность CD3 дзета. В конкретном CAR по изобретению первичная сигнальная последовательность CD3 дзета является последовательностью, приведенной как SEQ ID NO: 9, или эквивалентными остатками не являющихся человеком видов, например, мыши, грызуна, обезьяны, примата и т.п. В конкретном CAR по изобретению первичная сигнальная последовательность CD3 дзета является последовательностью, приведенной в SEQ ID NO: 10, или эквивалентными остатками не являющихся человеком видов, например, мыши, грызуна, обезьяны, примата и т.п. Термин "антигенпредставляющая клетка" или "APC" относится к клетке иммунной системы, такой как вспомогательная клетка (например, B-клетка, дендритная клетка и т.п.), презентирующей чужеродный антиген в комплексе с главным комплексом гистосовместимости (MHC) на своей поверхности. T-клетки могут распознавать эти комплексы с помощью своих T-клеточных рецепторов (TCR). APC процессируют антигены и презентируют их T-клеткам.

Как применяют в настоящем описании, термин "внутриклеточный сигнальный домен" относится к внутриклеточной части молекулы. В вариантах осуществления внутриклеточный сигнальный домен передает сигнал эффекторной функции и заставляет клетку осуществлять специализированную функцию. Хотя можно использовать целый внутриклеточный сигнальный домен, во многих случаях не является необходимым использовать целую цепь. В той степени, в которой используют укороченную часть внутриклеточного сигнального домена, такую укороченную часть можно использовать вместо интактной цепи при условии, что она передает сигнал эффекторной функции. Таким образом, термин "внутриклеточный сигнальный домен" предназначен для включения любой укороченной части внутриклеточного сигнального домена, достаточной для передачи сигнала эффекторной функции.

Внутриклеточный сигнальный домен генерирует сигнал, стимулирующий иммунную эффекторную функцию клетки, содержащей CAR, например, CART-клетки. Примеры иммунной эффекторной функции, например, в CART-клетке, включают цитолитическую активность и хелперную активность, включая секрецию цитокинов.

В варианте осуществления внутриклеточный сигнальный домен может содержать первичный внутриклеточный сигнальный домен. Примеры первичных внутриклеточных сигнальных доменов включают полученные из молекул, отвечающих за первичную стимуляцию или антигензависимую стимуляцию. В варианте осуществления внутриклеточный сигнальный домен может содержать костимуляторный внутриклеточный домен. Примеры костимуляторных внутриклеточных сигнальных доменов включают полученные из молекул, отвечающих за костимуляторные сигналы или антиген-независимую стимуляцию. Например, в случае CART первичный внутриклеточный сигнальный домен может содержать цитоплазматическую последовательность T-клеточного рецептора, и костимуляторный внутриклеточный сигнальный домен может содержать цитоплазматическую последовательность из корецептора или костимуляторной молекулы.

Первичный внутриклеточный сигнальный домен может содержать сигнальный мотив, известный в качестве иммунорецепторного тирозинового активирующего мотива или ITAM. Неограничивающие примеры содержащих ITAM первичных цитоплазматических сигнальных последовательностей включают полученные из CD3 дзета, FcR гамма, FcR бета, CD3 гамма, CD3 дельта, CD3 эпсилон, CD5, CD22, CD79a, CD79b, CD278 (также известный как "ICOS"), FcεRI, CD66d, DAP10 и DAP12.

Термин "дзета" или, альтернативно, "дзета-цепь", "CD3 дзета" или "TCR-дзета" определяют как белок, представленный в GenBank под регистрационным номером BAG36664.1, или эквивалентные остатки не являющихся человеком видов, например, мыши, грызуна, обезьяны, примата и т.п., и термин "стимуляторный домен дзета" или, альтернативно, "стимуляторный домен CD3 дзета" или "стимуляторный домен TCR-дзета" определяют как аминокислотные остатки из цитоплазматического домена дзета-цепи, достаточные для функциональной передачи исходного сигнала, необходимого для активации T-клеток. В одном из аспектов цитоплазматический домен дзета содержит остатки 52-164 из записи GenBank под регистрационным номером BAG36664.1 или эквивалентные остатки не являющихся человеком видов, например, мыши, грызуна, обезьяны, примата и т.п., являющиеся их функциональными ортологами. В одном из аспектов "стимуляторный домен" или "стимуляторный домен CD3 дзета" является последовательностью, приведенной как SEQ ID NO: 9. В одном из аспектов "стимуляторный домен дзета" или "стимуляторный домен CD3 дзета" является последовательностью, приведенной как SEQ ID NO: 10.

Термин "костимуляторная молекула" относится к когнатному партнеру по связыванию на T-клетке, специфически связывающемуся с костимуляторным лигандом, таким образом, опосредуя костимуляторный ответ T-клетки, в качестве неограничивающих примеров, такой как пролиферация. Костимуляторные молекулы являются молекулами поверхности клетки, иными, чем антигенные рецепторы или их лиганды, необходимыми для эффективного иммунного ответа. Костимуляторные молекулы включают, в качестве неограничивающих примеров, молекулу MHC класса I, белки рецепторов ФНО, иммуноглобулин-подобные белки, рецепторы цитокинов, интегрины, сигнальные молекулы активации лимфоцитов (белки SLAM), активирующие рецепторы NK-клеток, BTLA, рецептор Толл-лигандов, OX40, CD2, CD7, CD27, CD28, CD30, CD40, CDS, ICAM-1, LFA-1 (CD11a/CD18), 4-1BB (CD137), B7-H3, CDS, ICAM-1, ICOS (CD278), GITR, BAFFR, LIGHT, HVEM (LIGHTR), KIRDS2, SLAMF7, NKp80 (KLRF1), NKp44, NKp30, NKp46, CD19, CD4, CD8 альфа, CD8 бета, IL2R бета, IL2R гамма, IL7R альфа, ITGA4, VLA1, CD49a, ITGA4, IA4, CD49D, ITGA6, VLA-6, CD49f, ITGAD, CD11d, ITGAE, CD103, ITGAL, CD11a, LFA-1, ITGAM, CD11b, ITGAX, CD11c, ITGB1, CD29, ITGB2, CD18, LFA-1, ITGB7, NKG2D, NKG2C, TNFR2, TRANCE/RANKL, DNAM1 (CD226), SLAMF4 (CD244, 2B4), CD84, CD96 (Tactile), CEACAM1, CRTAM, Ly9 (CD229), CD160 (BY55), PSGL1, CD100 (SEMA4D), CD69, SLAMF6 (NTB-A, Ly108), SLAM (SLAMF1, CD150, IPO-3), BLAME (SLAMF8), SELPLG (CD162), LTBR, LAT, GADS, SLP-76, PAG/Cbp, CD19a и лиганд, специфически связывающийся с CD83.

Костимуляторный внутриклеточный сигнальный домен относится к внутриклеточной части костимуляторной молекулы.

Внутриклеточный сигнальный домен может содержать целую внутриклеточную часть или целый нативный внутриклеточный сигнальный домен молекулы, из которой его получают, или его функциональный фрагмент.

Термин "4-1BB" относится к члену суперсемейства TNFR с аминокислотной последовательностью, представленной в GenBank под регистрационным номером AAA62478.2, или эквивалентными остатками не являющихся человеком видов, например, мыши, грызуна, обезьяны, примата и т.п., и "костимуляторный домен 4-1BB" определяют как аминокислотные остатки 214-255 из записи GenBank под регистрационным номером AAA62478.2 или эквивалентные остатки не являющихся человеком видов, например, мыши, грызуна, обезьяны, примата и т.п. В одном из аспектов "костимуляторный домен 4-1BB" является последовательностью, приведенной как SEQ ID NO: 7, или эквивалентными остатками не являющихся человеком видов, например, мыши, грызуна, обезьяны, примата и т.п.

Как применяют в настоящем описании, термин "иммунная эффекторная клетка" относится к клетке, участвующей в иммунном ответе, например, в стимуляции эффекторного иммунного ответа. Примеры иммунных эффекторных клеток включают T-клетки, например, альфа/бета T-клетки и гамма/дельта T-клетки, B-клетки, естественные киллеры (NK-клетки), естественные киллерные T-клетки (NKT), тучные клетки и фагоциты миелоидного происхождения.

Как применяют в настоящем описании, термин "иммунная эффекторная функция или эффекторный иммунный ответ" относится к функции или ответу, например, иммунной эффекторной клетки, усиливающему или стимулирующему иммунную атаку клетки-мишени. Например, иммунная эффекторная функция или ответ относится к свойству T- или NK-клетки, стимулирующей цитолиз или ингибирование роста или пролиферации клетки-мишени. В случае T-клетки первичная стимуляция и костимуляция являются примерами иммунной эффекторной функции или ответа.

Термин "эффекторная функция" относится к специализированной функции клетки. Эффекторная функция T-клетки, например, может являться цитолитической активностью или хелперной активностью, включая секрецию цитокинов.

Термин "кодирующий" относится к внутреннему свойству конкретных последовательностей нуклеотидов в полинуклеотиде, таком как ген, кДНК или мРНК, служить в качестве матриц для синтеза других полимеров и макромолекул в биологических процессах, имеющих определенную последовательность нуклеотидов (например, рРНК, тРНК и мРНК) или определенную последовательность аминокислот и биологические свойства, являющиеся их результатом. Таким образом, ген, кДНК или РНК кодирует белок, если транскрипция и трансляция мРНК, соответствующей этому гену, приводит к образованию белка в клетке или другой биологической системе. И кодирующую цепь, нуклеотидная последовательность которой идентична последовательности мРНК, и которую, как правило, предоставляют в списках последовательностей, и некодирующую цепь, используемую в качестве матрицы для транскрипции гена или кДНК, можно обозначать как кодирующую белок или другой продукт этого гена или кДНК.

Если не указано иначе, "нуклеотидная последовательность, кодирующая аминокислотную последовательность" включает все нуклеотидные последовательности, являющиеся вырожденными версиями друг друга и кодирующими одну и ту же аминокислотную последовательность. Фраза "нуклеотидная последовательность, кодирующая белок или РНК" также может включать интроны до той степени, что нуклеотидная последовательность, кодирующая белок, в некоторой версии может содержать интроны.

Термины "эффективное количество" или "терапевтически эффективное количество" в настоящем описании используют взаимозаменяемо, и они относятся к количеству соединения, состава, материала или композиции, как представлено в настоящем описании, эффективному для достижения конкретного биологического результата.

Термин "эндогенный" относится к любому материалу из организма, клетки, ткани или системы или продуцирующемуся внутри организма, клетки, ткани или системы.

Термин "экзогенный" относится к любому материалу, вводимому или продуцирующемуся вне организма, клетки, ткани или системы.

Термин "экспрессия" относится к транскрипции и/или трансляции конкретной нуклеотидной последовательности, запускаемой промотором.

Термин "вектор для переноса" относится к композиции по настоящему изобретению, содержащей выделенную нуклеиновую кислоту, которую можно использовать для доставки выделенной нуклеиновой кислоты внутрь клетки. В этой области известны многочисленные векторы, включая, в качестве неограничивающих примеров, линейные полинуклеотиды, полинуклеотиды, связанные с ионными или амфифильными соединениями, плазмиды и вирусы. Таким образом, термин "вектор для переноса" включает автономно реплицирующуюся плазмиду или вирус. Термин также следует истолковывать как дополнительно включающий неплазмидные и невирусные соединения, облегчающие перенос нуклеиновой кислоты в клетки, такие как, например, полилизиновое соединение, липосома и т.п. Неограничивающие примеры вирусных векторов для переноса включают аденовирусные векторы, аденоассоциированные вирусные векторы, ретровирусные векторы, лентивирусные векторы и т.п.

Термин "экспрессирующий вектор" относится к вектору, содержащему рекомбинантный полинуклеотид, содержащий последовательности контроля экспрессии, функционально связанные с нуклеотидной последовательностью, подлежащей экспрессии. Экспрессирующий вектор содержит достаточные цис-элементы для экспрессии, другие элементы для экспрессии могут находиться в клетке-хозяине или системе экспрессии in vitro. Экспрессирующие векторы включают все известные в этой области векторы, включая космиды, плазмиды (например, безоболочечные или содержащиеся в липосомах) и вирусы (например, лентивирусы, ретровирусы, аденовирусы и аденоассоциированные вирусы), включающие рекомбинантный полинуклеотид.

Термин "лентивирус" относится к роду из семейства Retroviridae. Лентивирусы являются уникальными среди ретровирусов своей способностью инфицировать неделящиеся клетки, с помощью них можно доставлять значительное количество генетической информации в ДНК клетки-хозяина, таким образом, что они представляют собой один из наиболее эффективных способов доставки генов посредством вектора. ВИЧ, SIV и FIV являются примерами лентивирусов.

Термин "лентивирусный вектор" относится к вектору, полученному, по меньшей мере, из части генома лентивируса, включая, в частности, само-инактивирующийся лентивирусный вектор, как представлено в Milone et al., Mol. Ther. 17(8): 1453-1464 (2009). Другие неограничивающие примеры лентивирусных векторов, которые можно использовать в клинических условиях, включают, например, технологию доставки генов LENTIVECTOR® от Oxford BioMedica, векторную систему LENTIMAX™ от Lentigen и т.п. Неклинические типы лентивирусных векторов также доступны и известны специалисту в этой области.

Термин "гомологичный" или "идентичность" относится к идентичности последовательности субъединиц между двумя полимерными молекулами, например, между двумя молекулами нуклеиновой кислоты, такими как две молекулы ДНК или две молекулы РНК, или между двумя полипептидными молекулами. Если положение субъединицы в обеих молекулах занято одной и той же мономерной субъединицей, например, если положение в каждой из двух молекул ДНК занято аденином, то они являются гомологичными или идентичными в этом положении. Гомология между двумя последовательностями является прямой функцией количества совпадений или гомологичных положений, например, если половина (например, пять положений в полимере длиной десять субъединиц) положений в двух последовательностях является гомологичной, две последовательности являются на 50% гомологичными, если 90% положений (например, 9 из 10) совпадают или являются гомологичными, две последовательности являются на 90% гомологичными.

"Гуманизированные" формы не принадлежащих человеку антител (например, мыши) являются химерными иммуноглобулинами, цепями иммуноглобулинов или их фрагментами (такими как Fv, Fab, Fab', F(ab')2 или другие антигенсвязывающие подпоследовательности антител), содержащие минимальную последовательность, полученную из не принадлежащего человеку иммуноглобулина. Преимущественно, гуманизированные антитела и фрагменты антител являются иммуноглобулинами человека (реципиентным антителом или фрагментом антитела), в которых остатки из определяющей комплементарность области (CDR) реципиента заменяют остатками из CDR не являющихся человеком видов (донорного антитела), таких как мышь, крыса или кролик, имеющими желаемую специфичность, аффинность и активность. В некоторых случаях остатки каркасной области (FR) Fv иммуноглобулина человека заменяют соответствующими не принадлежащими человеку остатками. Кроме того, гуманизированное антитело/фрагмент антитела может содержать остатки, не обнаруживаемые ни в реципиентном антителе, ни в заимствованных последовательностях CDR или каркаса. Можно дополнительно уточнять эти модификации и оптимизировать свойства антитела или фрагмента антитела. В основном, гуманизированное антитело или фрагмент антитела будет содержать, по существу, все из по меньшей мере одного и, как правило, двух вариабельных доменов, в которых все или, по существу, все области CDR соответствуют областям CDR из не принадлежащего человеку иммуноглобулина, и все или значительная часть областей FR являются областями FR из последовательности иммуноглобулина человека. Гуманизированное антитело или фрагмент антитела также может содержать, по меньшей мере, часть константной области иммуноглобулина (Fc), как правило, иммуноглобулина человека. Более подробно, см. Jones et al., Nature, 321: 522-525, 1986; Reichmann et al., Nature, 332: 323-329, 1988; Presta, Curr. Op. Struct. Biol., 2: 593-596, 1992.

Термин "полностью человеческий" относится к иммуноглобулину, такому как антитело или фрагмент антитела, где целая молекула имеет человеческое происхождение или состоит из аминокислотной последовательности, идентичной человеческой форме антитела или иммуноглобулина.

Термин "выделенный" означает измененный или удаленный из природного состояния. Например, нуклеиновая кислота или пептид, в природе находящиеся в живом животное, не являются "выделенными", но та же нуклеиновая кислота или пептид, частично или полностью отделенная от сосуществующих материалов в его природном состоянии, является "выделенной". Выделенная нуклеиновая кислота или белок могут существовать в значительной степени в очищенной форме или в неприродном окружении, таком как, например, клетка-хозяин.

В контексте настоящего описания, используют следующие сокращения для общераспространенных оснований нуклеиновой кислоты. "A" относится к аденозину, "C" относится к цитозину, "G" относится к гуанозину, "T" относится к тимидину и "U" относится к уридину.

Термин "функционально связанный" или "транскрипционный контроль" относится к функциональной связи между регуляторной последовательностью и гетерологичной последовательностью нуклеиновой кислоты, приводящей к экспрессии последней. Например, первая последовательность нуклеиновой кислоты функционально связана со второй последовательностью нуклеиновой кислоты, если первая последовательность нуклеиновой кислоты находится в функциональной взаимосвязи со второй последовательностью нуклеиновой кислоты. Например, промотор функционально связан с кодирующей последовательностью, если промотор влияет на транскрипцию или экспрессию кодирующей последовательности. Функционально связанные последовательности ДНК могут являться смежными друг с другом, и, например, если необходимо соединять две кодирующие белок области, они находятся в одной рамке считывания.

Термин "парентеральное" введение иммуногенной композиции включает, например, подкожную (s.c.), внутривенную (i.v.), внутримышечную (i.m.) или интрастернальную инъекцию, внутриопухолевые или инфузионные способы.

Термин "нуклеиновая кислота" или "полинуклеотид" относится к дезоксирибонуклеиновым кислотам (ДНК) или рибонуклеиновым кислотам (РНК) и их полимерам в одно- или двухцепочечной форме. Если нет конкретных ограничений, термин включает нуклеиновые кислоты, содержащие известные аналоги природных нуклеотидов, имеющие схожие связывающие свойства с референсной нуклеиновой кислотой и метаболизируемые схожим образом с природными нуклеотидами. Если не указано иначе, конкретная последовательность нуклеиновой кислоты также косвенно включает ее консервативно модифицированные варианты (например, замены вырожденных кодонов, например, консервативные замены), аллели, ортологи, SNP и комплементарные последовательности, а также конкретно указанную последовательность. В частности, замены вырожденных кодонов, например, консервативные замены можно осуществлять, получая последовательности, в которых третье положение одного или более выбранных (или всех) кодонов замещают смешанными основаниями и/или дезоксиинозиновыми остатками (Batzer et al., Nucleic Acid Res 19:5081 (1991); Ohtsuka et al., J. Biol. Chem. 260:2605-2608 (1985) и Rossolini et al., Mol. Cell. Probes 8:91-98 (1994)).

Термины "пептид", "полипептид" и "белок" используют взаимозаменяемо, и они относятся к соединению, состоящему из аминокислотных остатков, ковалентно связанных пептидными связями. Белок или пептид должен содержать по меньшей мере две аминокислоты, и нет ограничений в отношении максимального количества аминокислот, которое может содержать последовательность белка или пептида. Полипептиды включают любой пептид или белок, содержащий две или более аминокислоты, соединенные друг с другом пептидными связями. Как применяют в настоящем описании, термин относится к коротким цепям, общепринято обозначаемым в этой области как пептиды, олигопептиды и олигомеры, например, и к более длинным цепям, как правило, обозначаемым в этой области как белки, существует множество типов которых. "Полипептиды" включают, помимо прочего, например, биологически активные фрагменты, по существу, гомологичные полипептиды, олигопептиды, гомодимеры, гетеродимеры, варианты полипептидов, модифицированные полипептиды, производные, аналоги, слитые белки. Полипептид включает природный пептид, рекомбинантный пептид или их комбинацию.

Термин "промотор" относится к последовательности ДНК, распознаваемой синтетическим аппаратом клетки или встраиваемым синтетическим аппаратом, необходимой для инициации специфической транскрипции полинуклеотидной последовательности.

Термин "промотор/регуляторная последовательность" относится к последовательности нуклеиновой кислоты, необходимой для экспрессии продукта гена, функционально связанного с промотором/регуляторной последовательностью. В некоторых случаях, эта последовательность может являться коровой последовательностью промотора, а в других случаях эта последовательность также может включать энхансерную последовательность и другие регуляторные элементы, необходимые для экспрессии продукта гена. Промотор/регуляторная последовательность, например, может являться последовательностью, экспрессирующей продукт гена тканеспецифическим образом.

Термин "конститутивный" промотор относится к нуклеотидной последовательности, которая в случае функциональной связи с полинуклеотидом, кодирующим или определяющим продукт гена, вызывает продукцию продукта гена в клетке в большинстве или всех физиологических условиях клетки.

Термин "индуцибельный" промотор относится к нуклеотидной последовательности, которая в случае функциональной связи с полинуклеотидом, кодирующим или определяющим продукт гена, вызывает продукцию продукта гена в клетке, по существу, только при наличии в клетке индуктора, соответствующего промотору.

Термин "тканеспецифический" промотор относится к нуклеотидной последовательности, которая в случае функциональной связи с полинуклеотидом, кодирующим или определяющим продукт гена, вызывает продукцию продукта гена в клетке, по существу, только если клетка является клеткой типа ткани, соответствующего промотору.

Термины "ассоциированный со злокачественным новообразованием антиген" или "опухолевый антиген", используемые взаимозаменяемо, относятся к молекуле (как правило, белку, углеводу или липиду), экспрессирующемуся на поверхности злокачественной клетки, целиком или в виде фрагмента (например, MHC/пептид), и применимому для избирательного таргетинга фармакологического средства к злокачественной клетке. В некоторых вариантах осуществления опухолевый антиген является маркером, экспрессирующимся нормальными клетками и злокачественными клетками, например, линейным маркером, например, CD19 на B-клетках. В некоторых вариантах осуществления опухолевый антиген является молекулой поверхности клетки, гиперэкспрессированной в злокачественной клетке по сравнению с нормальной клеткой, например, с 1-кратной гиперэкспрессией, 2-кратной гиперэкспрессией, 3-кратной гиперэкспрессией или более по сравнению с нормальной клеткой. В некоторых вариантах осуществления опухолевый антиген является молекулой поверхности клетки, неправильно синтезирующейся в злокачественной клетке, например, молекулой, содержащей делеции, инсерции или мутации по сравнению с молекулой, экспрессируемой на нормальной клетке. В некоторых вариантах осуществления опухолевый антиген будет экспрессироваться исключительно на поверхности злокачественной клетки, целиком или в виде фрагмента (например, MHC/пептид), и не будет синтезироваться или экспрессироваться на поверхности нормальной клетки. В некоторых вариантах осуществления CAR по настоящему изобретению относятся к CAR, содержащим антигенсвязывающий домен (например, антитело или фрагмент антитела), связывающийся с MHC-презентированным пептидом. Как правило, пептиды, полученные из эндогенных белков, наполняют карманы молекул главного комплекса гистосовместимости (MHC) класса I и распознаются T-клеточными рецепторами (TCR) на CD8+T-лимфоцитах. Комплексы MHC класса I конститутивно экспрессируются всеми ядросодержащими клетками. При злокачественном новообразовании вирус-специфичные и/или опухолеспецифичные комплексы пептид/MHC представляют уникальный класс мишеней для иммунотерапии, расположенных на поверхности клетки. Описаны TCR-подобные антитела, направленные против пептидов, полученных из вирусных или опухолевых антигенов в контексте лейкоцитарного антигена человека (HLA)-A1 или HLA-A2 (см., например, Sastry et al., J Virol. 2011 85(5):1935-1942; Sergeeva et al., Blood, 2011 117(16):4262-4272; Verma et al., J Immunol 2010 184(4):2156-2165; Willemsen et al., Gene Ther 2001 8(21):1601-1608; Dao et al., Sci Transl Med 2013 5(176):176ra33; Tassev et al., Cancer Gene Ther 2012 19(2):84-100). Например, TCR-подобное антитело можно идентифицировать при скрининге библиотеки, такой как библиотека фагового дисплея scFv человека.

Термины "опухоль-поддерживающий антиген" или "поддерживающий злокачественное новообразование антиген" используют взаимозаменяемо, и они относятся к молекуле (как правило, белку, углеводу или липиду), экспрессирующемуся на поверхности клетки, самому по себе не являющемуся злокачественным, но поддерживающим злокачественные клетки, например, стимулируя их рост или выживаемость, например, резистентность к иммунным клеткам. Примеры клеток этого типа включают стромальные клетки и супрессорные клетки миелоидного происхождения (MDSC). Самому опухоле-поддерживающему антигену нет необходимости играть роль в поддержании опухолевых клеток при условии, что антиген присутствует на клетке, поддерживающей злокачественные клетки.

Термин "гибкий полипептидный линкер" или "линкер", как применяют в отношении scFv, относится к пептидному линкеру, состоящему из аминокислот, таких как остатки глицина и/или серина, используемые в отдельности или в комбинации для связывания вариабельных областей тяжелой и легкой цепи. В одном из вариантов осуществления гибкий полипептидный линкер является линкером Gly/Ser и содержит аминокислотную последовательность (Gly-Gly-Gly-Ser)n (SEQ ID NO: 38), где n является положительным целым числом, равным 1 или более. Например, n=1, n=2, n=3. n=4, n=5 и n=6, n=7, n=8, n=9 и n=10. В одном из вариантов осуществления гибкие полипептидные линкеры включают, в качестве неограничивающих примеров, (Gly4 Ser)4 (SEQ ID NO: 27) или (Gly4 Ser)3 (SEQ ID NO: 28). В другом варианте осуществления линкеры включают множественные повторы (Gly2Ser), (GlySer) или (Gly3Ser) (SEQ ID NO: 29). Кроме того, в объем изобретения включены линкеры, описываемые в WO2012/138475, включенном в настоящее описание в качестве ссылки).

Как применяют в настоящем описании, 5'-кэп (также обозначаемый как РНК-кэп, 7-метилгуанозиновый РНК-кэп или РНК m⁷G-кэп) является модифицированным гуаниновым нуклеотидом, добавляемым "вперед" или на 5'-конец эукариотической матричной РНК вскоре после начала транскрипции. 5'-кэп состоит из концевой группы, связанной с первым транскрибируемым нуклеотидом. Его наличие является критическим для распознавания рибосомой и защиты от РНКаз. Добавление кэпа сопряжено с транскрипцией и происходит котранскрипционно, таким образом, что одно влияет на другое. Вскоре после начала транскрипции 5'-конец синтезируемой мРНК связывается кэп-синтезирующим комплексом, ассоциированным с РНК-полимеразой. Этот ферментативный комплекс катализирует химические реакции, необходимые для кэпирования мРНК. Синтез происходит как многоэтапная биохимическая реакция. Кэпирующий остаток можно модифицировать для модуляции функциональности мРНК, такой как ее стабильность или эффективность трансляции.

Как применяют в настоящем описании, "транскрибируемая in vitro РНК" относится к РНК, предпочтительно мРНК, синтезируемой in vitro. Как правило, транскрибируемая in vitro РНК образуется из транскрибирующегося in vitro вектора. Транскрибирующийся in vitro вектор содержит матрицу, используемую для получения транскрибируемой in vitro РНК.

Как применяют в настоящем описании, "поли(A)" является серией аденозинов, прикрепляемых к мРНК посредством полиаденилирования. В предпочтительном варианте осуществления конструкции для транзиторной экспрессии поли(A) составляет от 50 до 5000 (SEQ ID NO: 30), предпочтительно - более 64, более предпочтительно - более 100, наиболее предпочтительно - более 300 или 400. Поли(A)-последовательности можно модифицировать химически или ферментативно для модуляции функциональности мРНК, такой как локализация, стабильность или эффективность трансляции.

Как применяют в настоящем описании, "полиаденилирование" относится к ковалентному соединению полиаденилилового остатка или его модифицированного варианта с молекулой матричной РНК. В эукариотических организмах большинство молекул матричной РНК (мРНК) являются полиаденилированными на 3'-конце. 3'-поли(A)-хвост является длинной последовательностью адениновых нуклеотидов (зачастую несколько сотен), добавляемых к пре-мРНК под действием фермента полиаденилатполимеразы. У высших эукариот поли(A)-хвост добавляется к транскриптам, содержащим конкретную последовательность, сигнал полиаденилирования. Поли(A)-хвост и белок, связанный с ним, способствуют защите мРНК от деградации экзонуклеазами. Полиаденилирование также важно для терминации транскрипции, экспорту мРНК из ядра и трансляции. Полиаденилирование происходит в ядре непосредственно после транскрипции ДНК в РНК, но дополнительно может происходить позднее в цитоплазме. После терминации транскрипции цепь мРНК расщепляется под действием эндонуклеазного комплекса, ассоциированного с РНК-полимеразой. Участок расщепления, как правило, отличается наличием последовательности оснований AAUAAA вблизи участка расщепления. После расщепления мРНК остатки аденозина добавляются к свободному 3'-концу в участке расщепления.

Как применяют в настоящем описании, термин "транзиторный" относится к экспрессии невстроенного трансгена в течение часов, дней или недель, где период времени экспрессии является меньшим, чем период времени экспрессии гена, встроенного в геном или содержащегося в стабильном репликоне плазмиды в клетке-хозяине.

Как применяют в настоящем описании, термины "лечить" и "лечение" относятся к снижению или улучшению прогрессирования, тяжести и/или длительности пролиферативного нарушения или улучшению одного или более симптомов (предпочтительно, одного или более заметных симптомов) пролиферативного нарушения, являющемуся результатом введения одного или более терапевтических средств (например, одного или более терапевтических средств, таких как CAR по изобретению). В конкретных вариантах осуществления термины "лечить" и "лечение" относятся к улучшению по меньшей мере одного измеримого физического параметра пролиферативного нарушения, такого как рост опухоли, не обязательно заметного для пациента. В других вариантах осуществления термины "лечить" и "лечение" относятся к ингибированию прогрессирования пролиферативного нарушения физически, например, посредством стабилизации заметного симптома, физиологически, например, посредством стабилизации физического параметра, или и тому, и другому. В других вариантах осуществления термины "лечить" и "лечение" относятся к снижению или стабилизации размера опухоли или количества злокачественных клеток.

Термин "путь передачи сигнала" относится к биохимической взаимосвязи между множеством молекул передачи сигнала, играющих роль в передаче сигнала от одной части клетки другой части клетки. Фраза "рецептор поверхности клетки" включает молекулы и комплексы молекул, способные получать сигнал и передавать сигнал через мембрану клетки.

Термин "индивидуум" предназначен для включения живых организмов, в которых можно вызывать иммунный ответ (например, млекопитающих, человека).

Термин "в значительной степени очищенная" клетка относится к клетке, по существу, не содержащей другие типы клеток. Термин "в значительной степени очищенная клетка" также относится к клетке, отделенной от других типов клеток, в которыми она, как правило, ассоциирована в его природном состоянии. В некоторых случаях популяция, в значительной степени, очищенных клеток относится к гомогенной популяции клеток. В других случаях этот термин просто относится к клетке, отделенной от клеток, с которыми она, как правило, ассоциирована в их природном состоянии. В некоторых аспектах клетки культивируют in vitro. В других аспектах клетки не культивируют in vitro.

Как применяют в настоящем описании, термин "терапевтический" означает лечение. Терапевтического эффекта достигают посредством снижения, супрессии, ремиссии или эрадикации заболевания.

Как применяют в настоящем описании, термин "профилактика" означает предотвращение или протективное лечение в случае заболевания.

В контексте настоящего описания, "опухолевый антиген" или "антиген гиперпролиферативного нарушения" или "антиген, ассоциированный с гиперпролиферативным нарушением" относится к антигенам, общим для конкретных гиперпролиферативных нарушений. В определенных аспектах антигены гиперпролиферативного нарушения по настоящему изобретению получают из злокачественных новообразований, включая, в качестве неограничивающих примеров, первичную или метастазирующую меланому, тимому, лимфому, саркому, рак легких, рак печени, неходжкинскую лимфому, лимфому Ходжкина, лейкозы, рак матки, рак шейки матки, рак мочевого пузыря, рак почки и аденокарциномы, такие как рак молочной железы, рак предстательной железы (например, кастрационно-резистентный или резистентный к терапии рак предстательной железы или метастазирующий рак предстательной железы), рак яичников, рак поджелудочной железы и т.п., или пролиферативное нарушение из плазматических клеток, например, бессимптомную миелому (вялотекущую множественную миелому или индолентную миелому), моноклональную гаммапатию неустановленной этиологии (MGUS), макроглобулинемию Вальденстрема, плазмоцитомы (например, плазмоклеточную дискразию, солитарную миелому, солитарную плазмоцитому, экстрамедуллярную плазмоцитому и множественную плазмоцитому), системный амилоидоз легких цепей и POEMS-синдром (также известный как синдром Кроу-Фуказа, болезнь Такацуки и PEP-синдром).

Термин "трансфицированный", или "трансформированный", или "трансдуцированный" относится к способу, посредством которого экзогенную нуклеиновую кислоту переносят или встраивают в клетку-хозяина. "Трансфицированная", или "трансформированная", или "трансдуцированная" клетка является клеткой, трансфицированной, трансформированной или трансдуцированной с использованием экзогенной нуклеиновой кислоты. Клетка включает первичную клетку и ее потомство.

Термин "специфически связывается" относится к антителу или лиганду, распознающему и связывающемуся с когнатным белком-партнером по связыванию (например, стимуляторной и/или костимуляторной молекулой, присутствующей на T-клетке), присутствующим в образце, но где антитело или лиганд, по существу, не распознают или не связываются с другими молекулами в образце.

Как применяют в настоящем описании, термин "регулируемый химерный антигенный рецептор (RCAR)" относится к набору полипептидов, как правило, двум в самых простых вариантах осуществления, которые при их наличии в иммунной эффекторной клетке обеспечивают специфичность клетки для клетки-мишени, как правило, злокачественной клетки, и генерирование внутриклеточного сигнала. В некоторых вариантах осуществления RCAR содержит, по меньшей мере, внеклеточный антигенсвязывающий домен, трансмембранный домен и цитоплазматический сигнальный домен (также обозначаемый в настоящем описании как "внутриклеточный сигнальный домен"), содержащий функциональный сигнальный домен, полученный из стимуляторной молекулы и/или костимуляторной молекулы, как определено в настоящем описании в отношении молекулы CAR. В некоторых вариантах осуществления полипептиды в наборе в RCAR не являются смежными друг с другом, например, они находятся в разных полипептидных цепях. В некоторых вариантах осуществления RCAR включает переключатель димеризации, который при наличии молекулы димеризации, может соединять полипептиды друг с другом, например, может соединять антигенсвязывающий домен с внутриклеточным сигнальным доменом. В некоторых вариантах осуществления RCAR экспрессируется в клетке (например, иммунной эффекторной клетке), как представлено в настоящем описании, например, RCAR-экспрессирующей клетке (также обозначаемой в настоящем описании как "клетка RCARX"). В варианте осуществления клетка RCARX является T-клеткой, и ее обозначают как клетку RCART. В варианте осуществления клетка RCARX является NK-клеткой, и ее обозначают как клетку RCARN. RCAR может обеспечивать RCAR-экспрессирующую клетку специфичностью для клетки-мишени, как правило, злокачественной клетки, и генерированием регулируемого внутриклеточного сигнала или пролиферацией, которые могут оптимизировать иммунные эффекторные свойства RCAR-экспрессирующей клетки. В вариантах осуществления клетка RCAR, по меньшей мере, частично, обусловлена антигенсвязывающим доменом в том, что касается специфичности для клетки-мишени, содержащей антиген, связанный антигенсвязывающим доменом.

Как применяют в настоящем описании, термины "мембранный якорь" или "мембраносвязывающий домен" относятся к полипептиду или остатку, например, миристоильной группе, достаточной для заякоривания внеклеточного или внутриклеточного домена в плазматической мембране.

Как применяют в настоящем описании, термин "домен-переключатель", например, в отношении RCAR, относится к веществу, как правило, основанному на полипептиде веществу, которое в присутствие молекулы димеризации связывается с другим доменом-переключателем. Связывание приводит к функциональному соединению первого вещества, связанного, например, слитого, с первым доменом-переключателем, и второго вещества, связанного, например, слитого, со вторым доменом-переключателем. Первый и второй домен-переключатель в совокупности обозначают как переключатель димеризации. В вариантах осуществления первый и второй домены-переключатели являются одинаковыми, например, они являются полипептидами, имеющими одинаковую первичную аминокислотную последовательность, и их в совокупности обозначают как переключатель гомодимеризации. В вариантах осуществления первый и второй домены-переключатели отличаются друг от друга, например, они являются полипептидами, имеющими разные первичные аминокислотные последовательности, и их в совокупности обозначают как переключатель гетеродимеризации. В вариантах осуществления переключатель является внутриклеточным. В вариантах осуществления переключатель является внеклеточным. В вариантах осуществления домен-переключатель является веществом на основе полипептида, например, на основе FKBP или FRB, и молекула димеризации является низкомолекулярным соединением, например, рапалогом. В вариантах осуществления домен-переключатель является веществом на основе полипептида, например, scFv, связывающимся с пептидом myc, и молекула димеризации является полипептидом, его фрагментом или мультимером полипептида, например, лигандом myc или мультимерами лиганда myc, связывающимися с одним или более scFv против myc. В вариантах осуществления домен-переключатель является веществом на основе полипептида, например, рецептором myc, и молекула димеризации является антителом или его фрагментами, например, антителом против myc.

Как применяют в настоящем описании, термин "Молекула димеризации", например, в отношении RCAR, относится к молекуле, стимулирующей связывание первого домена-переключателя со вторым доменом-переключателем. В вариантах осуществления молекула димеризации в природе не встречается у индивидуума или не встречается в концентрациях, которые будут приводить к значительной димеризации. В вариантах осуществления молекула димеризации является низкомолекулярным соединением, например, рапамицином или рапалогом, например, RAD001.

Термин "биоэквивалент" относится к количеству средства, иного, чем референсное соединение (например, RAD001), необходимое для достижения эффекта, эквивалентного эффекту, достигаемому посредством референсной дозы или референсного количества референсного соединения (например, RAD001). В варианте осуществления эффект является уровнем ингибирования mTOR, например, измеряемым по ингибированию киназы P70 S6, например, оцениваемому в анализе in vivo или in vitro, например, измеряемому посредством анализа, представленного в настоящем описании, например, анализа Boulay, или измерения уровней фосфорилированного S6 посредством вестерн-блоттинга. В варианте осуществления эффект является изменением соотношения PD-1-положительных/PD-1-отрицательных T-клеток, измеряемого посредством сортинга клеток. В варианте осуществления биоэквивалентное количество или доза ингибитора mTOR является количеством или дозой, при которой достигают того же уровня ингибирования киназы P70 S6, что и при референсной дозе или референсном количестве референсного соединения. В варианте осуществления биоэквивалентное количество или доза ингибитора mTOR является количеством или дозой, при которой достигают того же уровня изменения соотношения PD-1-положительных/PD-1-отрицательных T-клеток, что и при референсной дозе или референсном количестве референсного соединения.

Термин "низкая, усиливающая иммунитет доза" при использовании в комбинации с ингибитором mTOR, например, аллостерическим ингибитором mTOR, например, RAD001 или рапамицином, или каталитическим ингибитором mTOR, относится к дозе ингибитора mTOR, которая частично, а не полностью, ингибирует активность mTOR, например, измеряемую по ингибированию киназной активности P70 S6. Способы оценки активности mTOR, например, посредством ингибирования киназы P70 S6, представлены в настоящем описании. Доза является недостаточной, чтобы приводить к полной иммуносупрессии, но достаточной для усиления иммунного ответа. В варианте осуществления низкая, усиливающая иммунитет доза ингибитора mTOR приводит к снижению количеств PD-1-положительных иммунных эффекторных клеток, например, T-клеток или NK-клеток, и/или повышению количества PD-1-отрицательных иммунных эффекторных клеток, например, T-клеток или NK-клеток, или повышению соотношения PD-1-отрицательных иммунных эффекторных клеток (например, T-клеток или NK-клеток)/PD-1-положительных иммунных эффекторных клеток (например, T-клеток или NK-клеток).

В варианте осуществления низкая, усиливающая иммунитет доза ингибитора mTOR приводит к повышению количества наивных T-клеток. В варианте осуществления низкая, усиливающая иммунитет доза ингибитора mTOR приводит к одному или более из следующего:

повышению экспрессии одного или более из следующих маркеров: CD62L^high, CD127^high, CD27⁺ и BCL2, например, на T-клетках памяти, например, предшественниках T-клеток памяти;

снижению экспрессии KLRG1, например, на T-клетках памяти, например, предшественниках T-клеток памяти; и

повышению количества предшественников T-клеток памяти, например, клеток с любой из следующих характеристик или их комбинацией: повышенным CD62L^high, повышенным CD127^high, повышенным CD27⁺, сниженным KLRG1 и повышенным BCL2;

где любое из описываемых выше изменений происходит, например, по меньшей мере, транзиторно, например, по сравнению с неподвергнутым лечению индивидуумом.

Как применяют в настоящем описании, термин "рефрактерный" относится к заболеванию, например, злокачественному новообразованию, не отвечающему на лечение. В вариантах осуществления рефрактерное злокачественное новообразование может являться резистентным к лечению до лечения или в его начале. В других вариантах осуществления рефрактерное злокачественное новообразование может становиться резистентным в течение лечения. Рефрактерное злокачественное новообразование также называют резистентным злокачественным новообразованием.

Как применяют в настоящем описании, термины "рецидивирующий" или "рецидив" относится к повторному появлению заболевания (например, злокачественного новообразования) или признаков и симптомов заболевания, такого как злокачественное новообразование, после периода улучшения или отвечаемости, например, после предшествующего лечения, например, терапии злокачественного новообразования. Например, период отвечаемости может включать уровень злокачественных клеток ниже конкретного порогового значения, например, ниже 20%, 1%, 10%, 5%, 4%, 3%, 2% или 1%. Повторное появление может включать уровень злокачественных клеток, повышающийся выше конкретного порогового значения, например, выше 20%, 1%, 10%, 5%, 4%, 3%, 2% или 1%.

Диапазоны: на всем протяжении настоящего описания различные аспекты изобретения могут быть представлены в формате диапазона. Следует понимать, что описание в формате диапазона представлено исключительно для удобства и краткости, и его не следует истолковывать в качестве жесткого ограничения объема изобретения. Таким образом, описание диапазона следует считать конкретно описывающим все возможные поддиапазоны, а также отдельные числовые значения в этом диапазоне. Например, описание диапазона, такого как от 1 до 6, следует считать конкретно описывающим поддиапазоны, такие как от 1 до 3, от 1 до 4, от 1 до 5, от 2 до 4, от 2 до 6, от 3 до 6 и т.д., а также отдельные числа в этом диапазоне, например, 1, 2, 2,7, 3, 4, 5, 5,3 и 6. В качестве другого примера, диапазон, такой как 95-99% идентичности, включает что-либо с 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичности, и включает поддиапазоны, такие как 96-99%, 96-98%, 96-97%, 97-99%, 97-98% и 98-99% идентичности. Это применимо независимо от широты диапазона.

Описание

Настоящее изобретение относится к композициям по настоящему изобретению и способам применения для лечения заболевания, такого как злокачественное новообразование, с использованием клеток, экспрессирующих химерные антигенные рецепторы (CAR) BCMA, например, CART-BCMA.

В одном из аспектов изобретение относится к ряду химерных антигенных рецепторов (CAR), содержащих антитело или фрагмент антитела, сконструированное для повышенного связывания с белком BCMA. В одном из аспектов изобретение относится к клетке (например, иммунной эффекторной клетке, например, T-клетке или NK-клетке), сконструированной для экспрессии CAR, где CAR T-клетка ("CART") или CAR NK-клетка проявляет противоопухолевые свойства. В одном из аспектов клетку трансформируют с использованием CAR, и CAR экспрессируется на поверхности клетки. В некоторых вариантах осуществления клетку (например, иммунную эффекторную клетку, например, T-клетку или NK-клетку) трансдуцируют с использованием вирусного вектора, кодирующего CAR. В некоторых вариантах осуществления вирусный вектор является ретровирусным вектором. В некоторых вариантах осуществления вирусный вектор является лентивирусными векторами. В некоторых таких вариантах осуществления клетка может стабильно экспрессировать CAR. В другом варианте осуществления клетку (например, иммунную эффекторную клетку, например, T-клетку или NK-клетку) трансфицируют с использованием нуклеиновой кислотой, например, мРНК, кДНК, ДНК, кодирующей CAR. В некоторых таких вариантах осуществления клетка может транзиторно экспрессировать CAR.

В одном из аспектов антигенсвязывающая часть CAR против BCMA является scFv-фрагментом антитела. В одном из аспектов такие фрагменты антител являются функциональными таким образом, что они сохраняют эквивалентную аффинность связывания, например, они связывают со сравнимой эффективностью тот же антиген, что и антитело IgG, из которого его получают. В других вариантах осуществления фрагмент антитела имеет более низкую аффинность связывания, например, он связывает тот же антиген с более низкой аффинностью связывания, чем антитело, из которого его получают, но он является функциональным таким образом, что он обеспечивает биологический ответ, представленный в настоящем описании. В одном из вариантов осуществления молекула CAR содержит фрагмент антитела, имеющий аффинность связывания KD от 10^-4 M до 10^-8 M, например, от 10^-5 M до 10^-7 M, например, 10^-6 M или 10^-7 M, для антигена-мишени. В одном из вариантов осуществления фрагмент антитела имеет аффинность связывания, являющуюся по меньшей мере в пять раз, в 10 раз, в 20 раз, в 30 раз, в 50 раз, в 100 раз или в 1000 раз меньшую, чем у референсного антитела, например, антитела, представленного в настоящем описании.

В одном из аспектов такие фрагменты антител являются функциональными таким образом, что они обеспечивают биологический ответ, который может включать, в качестве неограничивающих примеров, активацию иммунного ответа, ингибирование источника передачи сигнала от антигена-мишени, ингибирование киназной активности и т.п., как будет понятно специалистам в этой области. В одном из аспектов антигенсвязывающий домен CAR против BCMA является scFv-фрагментом антитела, являющимся гуманизированным по сравнению с последовательностью scFv мыши, из которого его получают. В одном из вариантов осуществления антигенсвязывающий домен против BCMA является антигенсвязывающим доменом человека против BCMA. В одном из вариантов осуществления антигенсвязывающий домен против BCMA является гуманизированным антигенсвязывающим доменом против BCMA.

В некоторых аспектах антитела по изобретению встраивают с химерный антигенный рецептор (CAR). В одном из аспектов CAR содержит BCMA-связывающий домен, содержащий последовательность SEQ ID NO: 39, SEQ ID NO: 40, SEQ ID NO: 41, SEQ ID NO: 42, SEQ ID NO: 43, SEQ ID NO: 44, SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 47, SEQ ID NO: 48, SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 129, SEQ ID NO: 130, SEQ ID NO: 131, SEQ ID NO: 132, SEQ ID NO: 133, SEQ ID NO: 134, SEQ ID NO: 135, SEQ ID NO: 136, SEQ ID NO: 137, SEQ ID NO: 138, SEQ ID NO: 139, SEQ ID NO: 140, SEQ ID NO: 141, SEQ ID NO: 142, SEQ ID NO: 143, SEQ ID NO: 144, SEQ ID NO: 145, SEQ ID NO: 146, SEQ ID NO: 147, SEQ ID NO: 148, SEQ ID NO: 149, SEQ ID NO: 263, SEQ ID NO: 264, SEQ ID NO: 265 или SEQ ID NO: 266. В одном из аспектов scFV-домены являются человеческими. В другом аспекте scFV-домены являются гуманизированными вариантами scFV-домена антител или фрагментов антител, описываемых в публикации PCT № WO2012/163805, патенте США № 7083785, патенте EP № 1975231 B1 или публикации PCT № WO13/154760 (содержание каждого из которых, таким образом, включено в настоящее описание в качестве ссылки в полном объеме), в которых описывают антитела или scFv-фрагменты мышиного происхождения, специфически связывающиеся с BCMA человека. Гуманизация этих антител и/или scFv мыши может являться желательной для клинических условий, где специфичные для мыши остатки могут индуцировать ответ человека против антигена мыши (HAMA) у пациентов, которым проводили лечение CART-BCMA, например, лечение с использованием иммунных эффекторных клеток, например, T-клеток или NK-клеток, трансдуцированных с использованием конструкции CAR против BCMA.

В одном из аспектов связывающий домен против BCMA, например, человеческий или гуманизированный scFv, часть CAR по изобретению кодируется трансгеном, последовательность которого кодон-оптимизирована для экспрессии в клетке млекопитающего. В одном из аспектов целая конструкция CAR по изобретению кодируется трансгеном, целая последовательность которого кодон-оптимизирована для экспрессии в клетке млекопитающего. Оптимизация кодонов относится к открытию того, что частота возникновения синонимичных кодонов (т.е. кодонов, кодирующих одну аминокислоту) в кодирующей ДНК различается у различных видов. Такая вырожденность кодонов позволяет идентичному полипептиду кодироваться множеством нуклеотидных последовательностей. В этой области известен ряд способов оптимизации кодонов, и они включают, например, способы, описываемые, по меньшей мере, в патентах США №№ 5786464 и 6114148.

В одном из аспектов связывающий домен человека против BCMA содержит scFv-часть, приведенную в SEQ ID NO: 39. В одном из аспектов CAR человека против BCMA содержит scFv-часть, приведенную в SEQ ID NO: 40. В одном из аспектов связывающий домен человека против BCMA содержит scFv-часть, приведенную в SEQ ID NO: 41. В одном из аспектов связывающий домен человека против BCMA содержит scFv-часть, приведенную в SEQ ID NO: 42. В одном из аспектов связывающий домен человека против BCMA содержит scFv-часть, приведенную в SEQ ID NO: 43. В одном из аспектов связывающий домен человека против BCMA содержит scFv-часть, приведенную в SEQ ID NO: 44. В одном из аспектов связывающий домен человека против BCMA содержит scFv-часть, приведенную в SEQ ID NO: 45. В одном из аспектов связывающий домен человека против BCMA содержит scFv-часть, приведенную в SEQ ID NO: 46. В одном из аспектов связывающий домен человека против BCMA содержит scFv-часть, приведенную в SEQ ID NO: 47. В одном из аспектов связывающий домен человека против BCMA содержит scFv-часть, приведенную в SEQ ID NO: 48. В одном из аспектов связывающий домен человека против BCMA содержит scFv-часть, приведенную в SEQ ID NO: 49. В одном из аспектов связывающий домен человека против BCMA содержит scFv-часть, приведенную в SEQ ID NO: 50. В одном из аспектов связывающий домен человека против BCMA содержит scFv-часть, приведенную в SEQ ID NO: 51. В одном из аспектов связывающий домен человека против BCMA содержит scFv-часть, приведенную в SEQ ID NO: 52. В одном из аспектов связывающий домен человека против BCMA содержит scFv-часть, приведенную в SEQ ID NO: 53. В одном из аспектов связывающий домен человека против BCMA содержит scFv-часть, приведенную в SEQ ID NO: 129. В одном из аспектов связывающий домен человека против BCMA содержит scFv-часть, приведенную в SEQ ID NO: 130. В одном из аспектов CAR человека против BCMA содержит scFv-часть, приведенную в SEQ ID NO: 131. В одном из аспектов связывающий домен человека против BCMA содержит scFv-часть, приведенную в SEQ ID NO: 132. В одном из аспектов связывающий домен человека против BCMA содержит scFv-часть, приведенную в SEQ ID NO: 133. В одном из аспектов связывающий домен человека против BCMA содержит scFv-часть, приведенную в SEQ ID NO: 134. В одном из аспектов связывающий домен человека против BCMA содержит scFv-часть, приведенную в SEQ ID NO: 135. В одном из аспектов связывающий домен человека против BCMA содержит scFv-часть, приведенную в SEQ ID NO: 136. В одном из аспектов связывающий домен человека против BCMA содержит scFv-часть, приведенную в SEQ ID NO: 137. В одном из аспектов связывающий домен человека против BCMA содержит scFv-часть, приведенную в SEQ ID NO: 138. В одном из аспектов связывающий домен человека против BCMA содержит scFv-часть, приведенную в SEQ ID NO: 139. В одном из аспектов связывающий домен человека против BCMA содержит scFv-часть, приведенную в SEQ ID NO: 140. В одном из аспектов связывающий домен человека против BCMA содержит scFv-часть, приведенную в SEQ ID NO: 141. В одном из аспектов CAR человека против BCMA содержит scFv-часть, приведенную в SEQ ID NO: 142. В одном из аспектов CAR человека против BCMA содержит scFv-часть, приведенную в SEQ ID NO: 143. В одном из аспектов CAR человека против BCMA содержит scFv-часть, приведенную в SEQ ID NO: 144. В одном из аспектов CAR человека против BCMA содержит scFv-часть, приведенную в SEQ ID NO: 145. В одном из аспектов CAR человека против BCMA содержит scFv-часть, приведенную в SEQ ID NO: 146. В одном из аспектов CAR человека против BCMA содержит scFv-часть, приведенную в SEQ ID NO: 147. В одном из аспектов CAR человека против BCMA содержит scFv-часть, приведенную в SEQ ID NO: 148. В одном из аспектов CAR человека против BCMA содержит scFv-часть, приведенную в SEQ ID NO: 149. В одном из аспектов гуманизированный связывающий домен против BCMA содержит scFv-часть, приведенную в SEQ ID NO: 255. В одном из аспектов гуманизированный CAR против BCMA содержит scFv-часть, приведенную в SEQ ID NO: 257.

В одном из аспектов CAR человека против BCMA содержит scFv-часть, приведенную в SEQ ID NO: 263. В одном из аспектов CAR человека против BCMA содержит scFv-часть, приведенную в SEQ ID NO: 264. В одном из аспектов CAR человека против BCMA содержит scFv-часть, приведенную в SEQ ID NO: 265. В одном из аспектов CAR человека против BCMA содержит scFv-часть, приведенную в SEQ ID NO: 266.

В одном из аспектов в CAR по изобретению комбинируют антигенсвязывающий домен конкретного антитела с внутриклеточной сигнальной молекулой. Например, в некоторых аспектах внутриклеточная сигнальная молекула включает, в качестве неограничивающих примеров, сигнальные модули дзета-цепи CD3, 4-1BB и CD28 и их комбинации. В одном из аспектов антигенсвязывающий домен связывается с BCMA. В одном из аспектов CAR BCMA содержит CAR, выбранный из последовательности, представленной в одной или более из SEQ ID NO: 99, SEQ ID NO: 100, SEQ ID NO: 101, SEQ ID NO: 102, SEQ ID NO: 103, SEQ ID NO: 104, SEQ ID NO: 105, SEQ ID NO: 106, SEQ ID NO: 107, SEQ ID NO: 108, SEQ ID NO: 109, SEQ ID NO: 110, SEQ ID NO: 111, SEQ ID NO: 112, SEQ ID NO: 113, SEQ ID NO: 213, SEQ ID NO: 214, SEQ ID NO: 215, SEQ ID NO: 216, SEQ ID NO: 217, SEQ ID NO: 218, SEQ ID NO: 219, SEQ ID NO: 220, SEQ ID NO: 221, SEQ ID NO: 222, SEQ ID NO: 223, SEQ ID NO: 224, SEQ ID NO: 225, SEQ ID NO: 226, SEQ ID NO: 227, SEQ ID NO: 228, SEQ ID NO: 229, SEQ ID NO: 230, SEQ ID NO: 231, SEQ ID NO: 232 и SEQ ID NO: 233. В одном из аспектов CAR BCMA содержит последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 99. В одном из аспектов CAR BCMA содержит последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 100. В одном из аспектов CAR BCMA содержит последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 101. В одном из аспектов CAR BCMA содержит последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 102. В одном из аспектов CAR BCMA содержит последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 103. В одном из аспектов CAR BCMA содержит последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 104. В одном из аспектов CAR BCMA содержит последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 105. В одном из аспектов CAR BCMA содержит последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 106. В одном из аспектов CAR BCMA содержит последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 107. В одном из аспектов CAR BCMA содержит последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 108. В одном из аспектов CAR BCMA содержит последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 109. В одном из аспектов CAR BCMA содержит последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 110. В одном из аспектов CAR BCMA содержит последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 111. В одном из аспектов CAR BCMA содержит последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 112. В одном из аспектов CAR BCMA содержит последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 213. В одном из аспектов CAR BCMA содержит последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 214. В одном из аспектов CAR BCMA содержит последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 215. В одном из аспектов CAR BCMA содержит последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 216. В одном из аспектов CAR BCMA содержит последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 217. В одном из аспектов CAR BCMA содержит последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 218. В одном из аспектов CAR BCMA содержит последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 219. В одном из аспектов CAR BCMA содержит последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 220. В одном из аспектов CAR BCMA содержит последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 221. В одном из аспектов CAR BCMA содержит последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 222. В одном из аспектов CAR BCMA содержит последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 223. В одном из аспектов CAR BCMA содержит последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 224. В одном из аспектов CAR BCMA содержит последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 225. В одном из аспектов CAR BCMA содержит последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 226. В одном из аспектов CAR BCMA содержит последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 227. В одном из аспектов CAR BCMA содержит последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 228. В одном из аспектов CAR BCMA содержит последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 229. В одном из аспектов CAR BCMA содержит последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 230. В одном из аспектов CAR BCMA содержит последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 231. В одном из аспектов CAR BCMA содержит последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 232. В одном из аспектов CAR BCMA содержит последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 233.

Кроме того, настоящее изобретение относится к композициям CAR BCMA и их применению в лекарственных веществах или способах лечения, среди прочих заболеваний, злокачественного новообразования или аутоиммунных заболеваний, включающих клетки или ткани, экспрессирующие BCMA.

В одном из аспектов CAR по изобретению можно использовать для эрадикации BCMA-экспрессирующих нормальных клеток, таким образом, он подходит для применения в качестве клеточного кондиционирования перед трансплантацией клеток. В одном из аспектов BCMA-экспрессирующая нормальная клетка является BCMA-экспрессирующей нормальной стволовой клеткой, и трансплантация клеток является трансплантацией стволовых клеток.

В одном из аспектов изобретение относится к клетке (например, T-клетке или NK-клетке), сконструированной для экспрессии химерного антигенного рецептора (CAR), где CAR T-клетка ("CART") или CAR NK-клетка проявляет противоопухолевые свойства. Предпочтительным антигеном является BCMA. В одном из аспектов антигенсвязывающий домен CAR содержит фрагмент антитела человека против BCMA или частично гуманизированный фрагмент антитела против BCMA. В одном из аспектов антигенсвязывающий домен CAR содержит фрагмент антитела человека против BCMA или частично гуманизированный фрагмент антитела против BCMA, содержащий scFv. Таким образом, изобретение относится к BCMA-CAR, содержащему гуманизированный связывающий домен против BCMA и сконструированному в клетке, например, T-клетке или NK-клетке, и способам их применения для адоптивной терапии.

В одном из аспектов BCMA-CAR содержит по меньшей мере один внутриклеточный домен, выбранный из группы сигнального домена CD137 (4-1BB), сигнального домена CD28, сигнального домена CD3 дзета и любой их комбинации. В одном из аспектов BCMA-CAR содержит по меньшей мере один внутриклеточный сигнальный домен из одной или более костимуляторных молекул, иных, чем CD137 (4-1BB) или CD28.

Химерный антигенный рецептор (CAR)

Настоящее изобретение относится к CAR (например, полипептиду CAR), содержащему связывающий домен против BCMA (например, человеческий или гуманизированный BCMA-связывающий домен, как представлено в настоящем описании), трансмембранный домен и внутриклеточный сигнальный домен, и где указанный связывающий домен против BCMA содержит определяющую комплементарность область тяжелой цепи 1 (CDR1 HC), определяющую комплементарность область тяжелой цепи 2 (CDR2 HC) и определяющую комплементарность область тяжелой цепи 3 (CDR3 HC) из любых аминокислотных последовательностей связывающего домена тяжелой цепи против BMCA, представленных в таблице 1 или 16. Связывающий домен против BCMA CAR может дополнительно содержать определяющую комплементарность область легкой цепи 1 (CDR1 LC), определяющую комплементарность область легкой цепи 2 (CDR2 LC) и определяющую комплементарность область легкой цепи 3 (CDR3 LC) из любых аминокислотных последовательностей связывающего домена тяжелой цепи против BMCA, представленных в таблице 1 или 16.

Настоящее изобретение также относится к молекулам нуклеиновой кислоты, кодирующим CAR, как представлено в настоящем описании, например, кодирующим CAR, содержащий связывающий домен против BCMA (например, человеческий или гуманизированный BCMA-связывающий домен, как представлено в настоящем описании), трансмембранный домен и внутриклеточный сигнальный домен, и где указанный связывающий домен против BCMA содержит определяющую комплементарность область тяжелой цепи 1 (CDR1 HC), определяющую комплементарность область тяжелой цепи 2 (CDR2 HC) и определяющую комплементарность область тяжелой цепи 3 (CDR3 HC) из любых аминокислотных последовательностей связывающего домена тяжелой цепи против BMCA, представленных в таблице 1 или 16. В одном из вариантов осуществления кодируемый связывающий домен против BCMA CAR может дополнительно содержать определяющую комплементарность область легкой цепи 1 (CDR1 LC), определяющую комплементарность область легкой цепи 2 (CDR2 LC) и определяющую комплементарность область легкой цепи 3 (CDR3 LC) из любых аминокислотных последовательностей связывающего домена тяжелой цепи против BMCA, представленных в таблице 1 или 16.

В конкретных аспектах конструкция CAR по изобретению содержит scFV-домен, выбранный из группы, состоящей из SEQ ID NO: 39, SEQ ID NO: 40, SEQ ID NO: 41, SEQ ID NO: 42, SEQ ID NO: 43, SEQ ID NO: 44, SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 47, SEQ ID NO: 48, SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 129, SEQ ID NO: 130, SEQ ID NO: 131, SEQ ID NO: 132, SEQ ID NO: 133, SEQ ID NO: 134, SEQ ID NO: 135, SEQ ID NO: 136, SEQ ID NO: 137, SEQ ID NO: 138, SEQ ID NO: 139, SEQ ID NO: 140, SEQ ID NO: 141, SEQ ID NO: 142, SEQ ID NO: 143, SEQ ID NO: 144, SEQ ID NO: 145, SEQ ID NO: 146, SEQ ID NO: 147, SEQ ID NO: 148, SEQ ID NO: 149, SEQ ID NO: 263, SEQ ID NO: 264, SEQ ID NO: 265, и SEQ ID NO: 266, где scFv может предшествовать необязательная лидерная последовательность, такая, как приведено в SEQ ID NO: 1, и после нее может следовать необязательная шарнирная последовательность, такая, как приведено в SEQ ID NO: 2 или SEQ ID NO: 3 или SEQ ID NO: 4 или SEQ ID NO: 5, трансмембранная область, такая, как приведено в SEQ ID NO: 6, внутриклеточный сигнальный домен, включающий SEQ ID NO: 7 или SEQ ID NO: 8, и последовательность CD3 дзета, включающую SEQ ID NO: 9 или SEQ ID NO: 10, где домены являются смежными и находятся в одной рамке считывания для образования единого слитого белка. В настоящее изобретение также включена нуклеотидная последовательность, кодирующая полипептид каждого из scFv-фрагментов, выбранных из группы, состоящей из SEQ ID NO: 39, SEQ ID NO: 40, SEQ ID NO: 41, SEQ ID NO: 42, SEQ ID NO: 43, SEQ ID NO: 44, SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 47, SEQ ID NO: 48, SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 129, SEQ ID NO: 130, SEQ ID NO: 131, SEQ ID NO: 132, SEQ ID NO: 133, SEQ ID NO: 134, SEQ ID NO: 135, SEQ ID NO: 136, SEQ ID NO: 137, SEQ ID NO: 138, SEQ ID NO: 139, SEQ ID NO: 140, SEQ ID NO: 141, SEQ ID NO: 142, SEQ ID NO: 143, SEQ ID NO: 144, SEQ ID NO: 145, SEQ ID NO: 146, SEQ ID NO: 147, SEQ ID NO: 148, SEQ ID NO: 149, SEQ ID NO: 263, SEQ ID NO: 264, SEQ ID NO: 265 и SEQ ID NO: 266.

В настоящее изобретение также включена нуклеотидная последовательность, кодирующая полипептид каждого из scFv-фрагментов, выбранных из группы, состоящей из SEQ ID NO: 39, SEQ ID NO: 40, SEQ ID NO: 41, SEQ ID NO: 42, SEQ ID NO: 43, SEQ ID NO: 44, SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 47, SEQ ID NO: 48, SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 129, SEQ ID NO: 130, SEQ ID NO: 131, SEQ ID NO: 132, SEQ ID NO: 133, SEQ ID NO: 134, SEQ ID NO: 135, SEQ ID NO: 136, SEQ ID NO: 137, SEQ ID NO: 138, SEQ ID NO: 139, SEQ ID NO: 140, SEQ ID NO: 141, SEQ ID NO: 142, SEQ ID NO: 143, SEQ ID NO: 144, SEQ ID NO: 145, SEQ ID NO: 146, SEQ ID NO: 147, SEQ ID NO: 148, SEQ ID NO: 149, SEQ ID NO: 263, SEQ ID NO: 264, SEQ ID NO: 265 и SEQ ID NO: 266, и каждый из доменов SEQ ID NO: 1, 2 и 6-9, и кодируемый слитый белок CAR BCMA по изобретению.

В одном из аспектов примеры конструкций BCMA CAR содержат необязательную лидерную последовательность, внеклеточный антигенсвязывающий домен, шарнирный, трансмембранный домен и внутриклеточный стимуляторный домен. В одном из аспектов пример конструкции CAR BCMA содержит необязательную лидерную последовательность, внеклеточный антигенсвязывающий домен, шарнирный, трансмембранный домен, внутриклеточный костимуляторный домен и внутриклеточный стимуляторный домен. Конкретные конструкции BCMA CAR, содержащие scFV-домены человека по изобретению, приведены как SEQ ID NO: 39, SEQ ID NO: 40, SEQ ID NO: 41, SEQ ID NO: 42, SEQ ID NO: 43, SEQ ID NO: 44, SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 47, SEQ ID NO: 48, SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 129, SEQ ID NO: 130, SEQ ID NO: 131, SEQ ID NO: 132, SEQ ID NO: 133, SEQ ID NO: 134, SEQ ID NO: 135, SEQ ID NO: 136, SEQ ID NO: 137, SEQ ID NO: 138, SEQ ID NO: 139, SEQ ID NO: 140, SEQ ID NO: 141, SEQ ID NO: 142, SEQ ID NO: 143, SEQ ID NO: 144, SEQ ID NO: 145, SEQ ID NO: 146, SEQ ID NO: 147, SEQ ID NO: 148 и SEQ ID NO: 149. Полноразмерные последовательности CAR также представлены в настоящем описании как SEQ ID NO: 39, SEQ ID NO: 40, SEQ ID NO: 41, SEQ ID NO: 42, SEQ ID NO: 43, SEQ ID NO: 44, SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 47, SEQ ID NO: 48, SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 129, SEQ ID NO: 130, SEQ ID NO: 131, SEQ ID NO: 132, SEQ ID NO: 133, SEQ ID NO: 134, SEQ ID NO: 135, SEQ ID NO: 136, SEQ ID NO: 137, SEQ ID NO: 138, SEQ ID NO: 139, SEQ ID NO: 140, SEQ ID NO: 141, SEQ ID NO: 142, SEQ ID NO: 143, SEQ ID NO: 144, SEQ ID NO: 145, SEQ ID NO: 146, SEQ ID NO: 147, SEQ ID NO: 148 и SEQ ID NO: 149, как представлено в таблице 1.

Пример лидерной последовательности приведен как SEQ ID NO: 1. Пример шарнирной/спейсерной последовательности приведен как SEQ ID NO: 2, или SEQ ID NO: 3, или SEQ ID NO: 4, или SEQ ID NO: 5. Пример последовательности трансмембранного домена приведен как SEQ ID NO: 6. Пример последовательности внутриклеточного сигнального домена белка 4-1BB приведен как SEQ ID NO: 7. Пример последовательности внутриклеточного сигнального домена CD27 приведен как SEQ ID NO: 8. Пример последовательности домена CD3 дзета приведен как SEQ ID NO: 9 или SEQ ID NO: 10.

В одном из аспектов настоящее изобретение относится к рекомбинантной конструкции нуклеиновой кислоты, содержащей молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую CAR, где молекула нуклеиновой кислоты содержит последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую связывающий домен против BCMA, например, представленный в настоящем описании, являющийся смежным и находящийся в той же рамке считывания, что и последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая внутриклеточный сигнальный домен. В одном из аспектов связывающий домен против BCMA выбран из одной или более из SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 56, SEQ ID NO: 57, SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 59, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 61, SEQ ID NO: 62, SEQ ID NO: 63, SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 67, SEQ ID NO: 68, SEQ ID NO: 150, SEQ ID NO: 151, SEQ ID NO: 152, SEQ ID NO: 153, SEQ ID NO: 154, SEQ ID NO: 155, SEQ ID NO: 156, SEQ ID NO: 157, SEQ ID NO: 158, SEQ ID NO: 159, SEQ ID NO: 160, SEQ ID NO: 161, SEQ ID NO: 162, SEQ ID NO: 163, SEQ ID NO: 164, SEQ ID NO: 165, SEQ ID NO: 166, SEQ ID NO: 167, SEQ ID NO: 168, SEQ ID NO: 169 и SEQ ID NO: 170. В одном из аспектов связывающий домен против BCMA содержит SEQ ID NO: 54.В одном из аспектов связывающий домен против BCMA содержит SEQ ID NO: 55. В одном из аспектов связывающий домен против BCMA содержит SEQ ID NO: 56. В одном из аспектов связывающий домен против BCMA содержит SEQ ID NO: 57. В одном из аспектов связывающий домен против BCMA содержит SEQ ID NO: 58. В одном из аспектов связывающий домен против BCMA содержит SEQ ID NO: 59. В одном из аспектов связывающий домен против BCMA содержит SEQ ID NO: 60. В одном из аспектов связывающий домен против BCMA содержит SEQ ID NO: 61. В одном из аспектов связывающий домен против BCMA содержит SEQ ID NO: 62. В одном из аспектов связывающий домен против BCMA содержит SEQ ID NO: 63. В одном из аспектов связывающий домен против BCMA содержит SEQ ID NO: 64. В одном из аспектов связывающий домен против BCMA содержит SEQ ID NO: 65. В одном из аспектов связывающий домен против BCMA содержит SEQ ID NO: 66. В одном из аспектов связывающий домен против BCMA содержит SEQ ID NO: 67. В одном из аспектов связывающий домен против BCMA содержит SEQ ID NO: 68. В одном из аспектов связывающий домен против BCMA содержит SEQ ID NO: 150. В одном из аспектов связывающий домен против BCMA содержит SEQ ID NO: 151. В одном из аспектов связывающий домен против BCMA содержит SEQ ID NO: 152. В одном из аспектов связывающий домен против BCMA содержит SEQ ID NO: 153. В одном из аспектов связывающий домен против BCMA содержит SEQ ID NO: 154. В одном из аспектов связывающий домен против BCMA содержит SEQ ID NO: 155. В одном из аспектов связывающий домен против BCMA содержит SEQ ID NO: 156. В одном из аспектов связывающий домен против BCMA содержит SEQ ID NO: 157. В одном из аспектов связывающий домен против BCMA содержит SEQ ID NO: 158. В одном из аспектов связывающий домен против BCMA содержит SEQ ID NO: 159. В одном из аспектов связывающий домен против BCMA содержит SEQ ID NO: 160. В одном из аспектов связывающий домен против BCMA содержит SEQ ID NO: 161. В одном из аспектов связывающий домен против BCMA содержит SEQ ID NO: 162. В одном из аспектов связывающий домен против BCMA содержит SEQ ID NO: 163. В одном из аспектов связывающий домен против BCMA содержит SEQ ID NO: 164. В одном из аспектов связывающий домен против BCMA содержит SEQ ID NO: 165. В одном из аспектов связывающий домен против BCMA содержит SEQ ID NO: 166. В одном из аспектов связывающий домен против BCMA содержит SEQ ID NO: 167. В одном из аспектов связывающий домен против BCMA содержит SEQ ID NO: 168. В одном из аспектов связывающий домен против BCMA содержит SEQ ID NO: 169. В одном из аспектов связывающий домен против BCMA содержит SEQ ID NO: 170.

В одном из аспектов настоящее изобретение относится к рекомбинантной конструкции нуклеиновой кислоты, содержащей молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую CAR, где молекула нуклеиновой кислоты содержит последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую связывающий домен против BCMA, выбранный из одного или более из SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 56, SEQ ID NO: 57, SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 59, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 61, SEQ ID NO: 62, SEQ ID NO: 63, SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 67, SEQ ID NO: 68, SEQ ID NO: 150, SEQ ID NO: 151, SEQ ID NO: 152, SEQ ID NO: 153, SEQ ID NO: 154, SEQ ID NO: 155, SEQ ID NO: 156, SEQ ID NO: 157, SEQ ID NO: 158, SEQ ID NO: 159, SEQ ID NO: 160, SEQ ID NO: 161, SEQ ID NO: 162, SEQ ID NO: 163, SEQ ID NO: 164, SEQ ID NO: 165, SEQ ID NO: 166, SEQ ID NO: 167, SEQ ID NO: 168, SEQ ID NO: 169 и SEQ ID NO: 170, например, где последовательность является смежной и находится в той же рамке считывания, что и последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая внутриклеточный сигнальный домен. Неограничивающий пример внутриклеточного сигнального домена, который можно использовать в CAR, включает один или более внутриклеточных сигнальных доменов, например, из CD3 дзета, CD28, 4-1BB и т.п. В некоторых случаях CAR может содержать любую комбинацию CD3 дзета, CD28, 4-1BB и т.п. В одном из аспектов последовательность нуклеиновой кислоты конструкции CAR по изобретению выбрана из одной или более из SEQ ID NO: 114, SEQ ID NO: 115, SEQ ID NO: 116, SEQ ID NO: 117, SEQ ID NO: 118, SEQ ID NO: 119, SEQ ID NO: 120, SEQ ID NO: 121, SEQ ID NO: 122, SEQ ID NO: 123, SEQ ID NO: 124, SEQ ID NO: 125, SEQ ID NO: 126, SEQ ID NO: 127, SEQ ID NO: 128, SEQ ID NO: 234, SEQ ID NO: 235, SEQ ID NO: 236, SEQ ID NO: 237, SEQ ID NO: 238, SEQ ID NO: 239, SEQ ID NO: 240, SEQ ID NO: 241, SEQ ID NO: 242, SEQ ID NO: 243, SEQ ID NO: 244, SEQ ID NO: 245, SEQ ID NO: 246, SEQ ID NO: 247, SEQ ID NO: 248, SEQ ID NO: 249, SEQ ID NO: 250, SEQ ID NO: 251, SEQ ID NO: 252, SEQ ID NO: 253 или SEQ ID NO: 254. В одном из аспектов последовательность нуклеиновой кислоты конструкции CAR является SEQ ID NO: 114. В одном из аспектов последовательность нуклеиновой кислоты конструкции CAR является SEQ ID NO: 115. В одном из аспектов последовательность нуклеиновой кислоты конструкции CAR является SEQ ID NO: 116. В одном из аспектов последовательность нуклеиновой кислоты конструкции CAR является SEQ ID NO: 117. В одном из аспектов последовательность нуклеиновой кислоты конструкции CAR является SEQ ID NO: 118. В одном из аспектов последовательность нуклеиновой кислоты конструкции CAR является SEQ ID NO: 119. В одном из аспектов последовательность нуклеиновой кислоты конструкции CAR является SEQ ID NO: 120. В одном из аспектов последовательность нуклеиновой кислоты конструкции CAR является SEQ ID NO: 121. В одном из аспектов последовательность нуклеиновой кислоты конструкции CAR является SEQ ID NO: 122. В одном из аспектов последовательность нуклеиновой кислоты конструкции CAR является SEQ ID NO: 123. В одном из аспектов последовательность нуклеиновой кислоты конструкции CAR является SEQ ID NO: 124. В одном из аспектов последовательность нуклеиновой кислоты конструкции CAR является SEQ ID NO: 125. В одном из аспектов последовательность нуклеиновой кислоты конструкции CAR является SEQ ID NO: 126. В одном из аспектов последовательность нуклеиновой кислоты конструкции CAR является SEQ ID NO: 127. В одном из аспектов последовательность нуклеиновой кислоты конструкции CAR является SEQ ID NO: 128. В одном из аспектов последовательность нуклеиновой кислоты конструкции CAR является SEQ ID NO: 234. В одном из аспектов последовательность нуклеиновой кислоты конструкции CAR является SEQ ID NO: 235. В одном из аспектов последовательность нуклеиновой кислоты конструкции CAR является SEQ ID NO: 236. В одном из аспектов последовательность нуклеиновой кислоты конструкции CAR является SEQ ID NO: 237. В одном из аспектов последовательность нуклеиновой кислоты конструкции CAR является SEQ ID NO: 238. В одном из аспектов последовательность нуклеиновой кислоты конструкции CAR является SEQ ID NO: 239. В одном из аспектов последовательность нуклеиновой кислоты конструкции CAR является SEQ ID NO: 240. В одном из аспектов последовательность нуклеиновой кислоты конструкции CAR является SEQ ID NO: 241. В одном из аспектов последовательность нуклеиновой кислоты конструкции CAR является SEQ ID NO: 242. В одном из аспектов последовательность нуклеиновой кислоты конструкции CAR является SEQ ID NO: 243. В одном из аспектов последовательность нуклеиновой кислоты конструкции CAR является SEQ ID NO: 244. В одном из аспектов последовательность нуклеиновой кислоты конструкции CAR является SEQ ID NO: 245. В одном из аспектов последовательность нуклеиновой кислоты конструкции CAR является SEQ ID NO: 246. В одном из аспектов последовательность нуклеиновой кислоты конструкции CAR является SEQ ID NO: 247. В одном из аспектов последовательность нуклеиновой кислоты конструкции CAR является SEQ ID NO: 248. В одном из аспектов последовательность нуклеиновой кислоты конструкции CAR является SEQ ID NO: 249. В одном из аспектов последовательность нуклеиновой кислоты конструкции CAR является SEQ ID NO: 250. В одном из аспектов последовательность нуклеиновой кислоты конструкции CAR является SEQ ID NO: 251. В одном из аспектов последовательность нуклеиновой кислоты конструкции CAR является SEQ ID NO: 252. В одном из аспектов последовательность нуклеиновой кислоты конструкции CAR является SEQ ID NO: 253. В одном из аспектов последовательность нуклеиновой кислоты конструкции CAR является SEQ ID NO: 254.

Последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующие желаемые молекулы, можно получать известными в этой области рекомбинантными способами, такими как, например, скрининг библиотек из клеток, экспрессирующих ген, получая ген из вектора, о котором известно, что он его включает, или выделяя его непосредственно из клеток и тканей, содержащих его, стандартными способами. Альтернативно, интересующую нуклеиновую кислоту можно получать синтетически, а не клонировать.

Настоящее изобретение относится к конструкциям ретровирусных и лентивирусных векторов, экспрессирующих CAR, которые можно напрямую трансдуцировать в клетку.

Настоящее изобретение также относится к конструкции РНК, которую можно напрямую трансфицировать в клетку. Способ получения мРНК для использования в трансфекции включает транскрипцию in vitro (IVT) матрицы с использованием специально сконструированных праймеров с последующим добавлением поли-A для получения конструкции, содержащей 3'- и 5'-нетранслируемую последовательность ("UTR"), 5'-кэп и/или внутренний участок связывания рибосомы (IRES), нуклеиновую кислоту, подлежащую экспрессии, и поли(A)-хвост, как правило, длиной 50-2000 оснований (SEQ ID NO: 35). Получаемую таким образом РНК можно эффективно трансфицировать в различные типы клеток. В одном из вариантов осуществления матрица включает последовательности CAR. В варианте осуществления вектор РНК CAR трансдуцируют в клетку, например, T-клетку или NK-клетку, посредством электропорации.

Антигенсвязывающий домен

CAR по настоящему изобретению содержат мишене-специфический связывающий домен. Выбор остатка зависит от типа и количества лигандов, определяющих поверхность клетки-мишени. Например, можно выбирать антигенсвязывающий домен, распознающий антиген, действующий в качестве поверхностного клеточного маркера на клетках-мишенях, ассоциированных с конкретным заболеванием.

В одном из аспектов CAR-опосредованный T-клеточный ответ можно направлять против интересующего антигена посредством конструирования антигенсвязывающего домена, специфически связывающегося с желаемым антигеном, в CAR.

В одном из аспектов CAR по настоящему изобретению содержит связывающий домен, специфически связывающийся с BCMA. В одном из аспектов CAR по настоящему изобретению содержит антигенсвязывающий домен, специфически связывающийся с BCMA человека.

Антигенсвязывающий домен может являться любым белком, связывающимся с антигеном, включая, в качестве неограничивающих примеров, моноклональное антитело, поликлональное антитело, рекомбинантное антитело, антитело человека, гуманизированное антитело и его функциональный фрагмент, включая, в качестве неограничивающих примеров, однодоменное антитело, такое как вариабельный домен тяжелой цепи (VH), вариабельный домен легкой цепи (VL) и вариабельный домен (VHH) нанотела верблюжьего происхождения, и альтернативный каркас, о котором в этой области известно, что он функционирует как антигенсвязывающий домен, такой как рекомбинантный фибронектиновый домен, и т.п. В некоторых случаях полезно получать антигенсвязывающий домен из того же вида, в котором CAR будут, в конечном итоге, использовать. Например, для применения у людей может быть полезным, чтобы антигенсвязывающий домен CAR содержал человеческие или гуманизированные остатки для антигенсвязывающего домена антитела или фрагмента антитела.

Таким образом, в одном из аспектов антигенсвязывающий домен содержит человеческое или гуманизированное антитело или фрагмент антитела. В одном из вариантов осуществления связывающий домен человека против BCMA содержит одну или более (например, все три) из определяющей комплементарность области легкой цепи 1 (CDR1 LC), определяющей комплементарность области легкой цепи 2 (CDR2 LC) и определяющей комплементарность области легкой цепи 3 (CDR3 LC) связывающего домена человека против BCMA, представленного в настоящем описании, и/или одну или более (например, все три) из определяющей комплементарность области тяжелой цепи 1 (CDR1 HC), определяющей комплементарность области тяжелой цепи 2 (CDR2 HC) и определяющей комплементарность области тяжелой цепи 3 (CDR3 HC) связывающего домена человека против BCMA, представленного в настоящем описании, например, связывающего домена человека против BCMA, содержащего одну или более, например, все три, CDR LC и одну или более, например, все три, CDR HC. В одном из вариантов осуществления связывающий домен человека против BCMA содержит одну или более (например, все три) из определяющей комплементарность области тяжелой цепи 1 (CDR1 HC), определяющей комплементарность области тяжелой цепи 2 (CDR2 HC) и определяющей комплементарность области тяжелой цепи 3 (CDR3 HC) связывающего домена человека против BCMA, представленного в настоящем описании, например, связывающий домен человека против BCMA содержит две вариабельные области тяжелой цепи, каждая из которых содержит CDR1 HC, CDR2 HC и CDR3 HC, представленные в настоящем описании. В одном из вариантов осуществления связывающий домен человека против BCMA содержит вариабельную область легкой цепи человека, представленную в настоящем описании (например, в таблице 1), и/или вариабельную область тяжелой цепи человека, представленную в настоящем описании (например, в таблице 1). В одном из вариантов осуществления связывающий домен человека против BCMA содержит вариабельную область тяжелой цепи человека, представленную в настоящем описании (например, в таблице 1), например, по меньшей мере две вариабельные области тяжелой цепи человека, представленные в настоящем описании (например, в таблице 1). В одном из вариантов осуществления связывающий домен против BCMA является scFv, содержащим легкую цепь и тяжелую цепь с аминокислотной последовательностью из таблицы 1. В варианте осуществления связывающий домен против BCMA (например, scFv) содержит: вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере одну, две или три модификации (например, замены, например, консервативные замены), но не более 30, 20 или 10 модификаций (например, замен, например, консервативных замен) аминокислотной последовательности вариабельной области легкой цепи, представленной в таблице 1, или последовательности с 95-99% идентичности по отношению к аминокислотной последовательности из таблицы 11, и/или вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере одну, две или три модификации (например, замены, например, консервативные замены), но не более 30, 20 или 10 модификаций (например, замен, например, консервативных замен) аминокислотной последовательности вариабельной области тяжелой цепи, представленной в таблице 1, или последовательность с 95-99% идентичности по отношению к аминокислотной последовательности из таблицы 1.

В одном из вариантов осуществления связывающий домен человека против BCMA содержит последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 39, SEQ ID NO: 40, SEQ ID NO: 41, SEQ ID NO: 42, SEQ ID NO: 43, SEQ ID NO: 44, SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 47, SEQ ID NO: 48, SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 129, SEQ ID NO: 130, SEQ ID NO: 131, SEQ ID NO: 132, SEQ ID NO: 133, SEQ ID NO: 134, SEQ ID NO: 135, SEQ ID NO: 136, SEQ ID NO: 137, SEQ ID NO: 138, SEQ ID NO: 139, SEQ ID NO: 140, SEQ ID NO: 141, SEQ ID NO: 142, SEQ ID NO: 143, SEQ ID NO: 144, SEQ ID NO: 145, SEQ ID NO: 146, SEQ ID NO: 147, SEQ ID NO: 148 и SEQ ID NO: 149, или последовательность с 95-99% идентичности по отношению к ней. В одном из вариантов осуществления последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая связывающий домен человека против BCMA, содержит последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 56, SEQ ID NO: 57, SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 59, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 61, SEQ ID NO: 62, SEQ ID NO: 63, SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 67, SEQ ID NO: 68, SEQ ID NO: 150, SEQ ID NO: 151, SEQ ID NO: 152, SEQ ID NO: 153, SEQ ID NO: 154, SEQ ID NO: 155, SEQ ID NO: 156, SEQ ID NO: 157, SEQ ID NO: 158, SEQ ID NO: 159, SEQ ID NO: 160, SEQ ID NO: 161, SEQ ID NO: 162, SEQ ID NO: 163, SEQ ID NO: 164, SEQ ID NO: 165, SEQ ID NO: 166, SEQ ID NO: 167, SEQ ID NO: 168, SEQ ID NO: 169 и SEQ ID NO: 170, или последовательность с 95-99% идентичности по отношению к ней. В одном из вариантов осуществления связывающий домен человека против BCMA является scFv, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, представленную в настоящем описании, например, в таблице 1, соединяют с вариабельной областью тяжелой цепи, содержащей аминокислотную последовательность, представленную в настоящем описании, например, в таблице 1, с помощью линкера, например, линкера, представленного в настоящем описании. В одном из вариантов осуществления связывающий домен человека против BCMA включает линкер (Gly₄-Ser)n, где n является 1, 2, 3, 4, 5 или 6, предпочтительно - 3 или 4 (SEQ ID NO: 26). Вариабельная область легкой цепи и вариабельная область тяжелой цепи scFv могут находиться, например, в любой из следующих ориентаций: вариабельная область легкой цепи-линкер-вариабельная область тяжелой цепи или вариабельная область тяжелой цепи-линкер-вариабельная область легкой цепи. В одном из аспектов часть антигенсвязывающего домена содержит одну или более последовательностей, выбранных из SEQ ID NO: 39, SEQ ID NO: 40, SEQ ID NO: 41, SEQ ID NO: 42, SEQ ID NO: 43, SEQ ID NO: 44, SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 47, SEQ ID NO: 48, SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 129, SEQ ID NO: 130, SEQ ID NO: 131, SEQ ID NO: 132, SEQ ID NO: 133, SEQ ID NO: 134, SEQ ID NO: 135, SEQ ID NO: 136, SEQ ID NO: 137, SEQ ID NO: 138, SEQ ID NO: 139, SEQ ID NO: 140, SEQ ID NO: 141, SEQ ID NO: 142, SEQ ID NO: 143, SEQ ID NO: 144, SEQ ID NO: 145, SEQ ID NO: 146, SEQ ID NO: 147, SEQ ID NO: 148, и SEQ ID NO: 149. В одном из аспектов CAR выбран из одной или более последовательностей, выбранных из SEQ ID NO: 99, SEQ ID NO: 100, SEQ ID NO: 101, SEQ ID NO: 102, SEQ ID NO: 103, SEQ ID NO: 104, SEQ ID NO: 105, SEQ ID NO: 106, SEQ ID NO: 107, SEQ ID NO: 108, SEQ ID NO: 109, SEQ ID NO: 110, SEQ ID NO: 111, SEQ ID NO: 112, SEQ ID NO: 113, SEQ ID NO: 213, SEQ ID NO: 214, SEQ ID NO: 215, SEQ ID NO: 216, SEQ ID NO: 217, SEQ ID NO: 218, SEQ ID NO: 219, SEQ ID NO: 220, SEQ ID NO: 221, SEQ ID NO: 222, SEQ ID NO: 223, SEQ ID NO: 224, SEQ ID NO: 225, SEQ ID NO: 226, SEQ ID NO: 227, SEQ ID NO: 228, SEQ ID NO: 229, SEQ ID NO: 230, SEQ ID NO: 231, SEQ ID NO: 232 и SEQ ID NO: 233.

В одном из вариантов осуществления связывающий домен против BCMA содержит вариабельную область легкой цепи, представленную в настоящем описании (например, в таблице 16), и/или вариабельную область тяжелой цепи, представленную в настоящем описании (например, в таблице 16). В одном из вариантов осуществления кодируемый гуманизированный связывающий домен против BCMA содержит вариабельную область легкой цепи, приведенную в SEQ ID NO: 259, SEQ ID NO: 260, SEQ ID NO: 261, SEQ ID NO: 262, и/или вариабельную область тяжелой цепи, приведенную в SEQ ID NO: 255, SEQ ID NO: 256, SEQ ID NO: 257, SEQ ID NO: 258. В одном из вариантов осуществления кодируемый связывающий домен против BCMA является scFv, содержащим легкую цепь и тяжелую цепь с аминокислотной последовательностью из таблицы 16. В варианте осуществления человеческий или гуманизированный связывающий домен против BCMA (например, scFv) содержит: вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере одну, две или три модификации (например, замены, например, консервативные замены), но не более 30, 20 или 10 модификаций (например, замен, например, консервативных замен) аминокислотной последовательности вариабельной области легкой цепи, приведенной в SEQ ID NO: 259, SEQ ID NO: 260, SEQ ID NO: 261, SEQ ID NO: 262, или последовательность с 95-99% идентичности по отношению к ним, и/или вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере одну, две или три модификации (например, замены, например, консервативные замены), но не более 30, 20 или 10 модификаций (например, замен, например, консервативных замен) аминокислотной последовательности вариабельной области тяжелой цепи, приведенной в SEQ ID NO: 255, SEQ ID NO: 256, SEQ ID NO: 257, SEQ ID NO: 258, или последовательность с 95-99% идентичности по отношению к ним. В одном из вариантов осуществления кодируемый связывающий домен против BCMA включает линкер (Gly4-Ser)n, где n является 1, 2, 3, 4, 5 или 6, предпочтительно - 3 или 4 (SEQ ID NO: 26). Вариабельная область легкой цепи и вариабельная область тяжелой цепи scFv могут находиться, например, в любой из следующих ориентаций: вариабельная область легкой цепи-линкер-вариабельная область тяжелой цепи или вариабельная область тяжелой цепи-линкер-вариабельная область легкой цепи.

В одном из вариантов осуществления связывающий домен человека против BCMA содержит последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 263, SEQ ID NO: 264, SEQ ID NO: 265, и SEQ ID NO: 266, или последовательность с 95-99% идентичности по отношению к ним.

В некоторых аспектах не принадлежащее человеку антитело является гуманизированным, где конкретные последовательности или области антитела модифицируют для повышения сходства с антителом, в природе продуцирующимся у человека, или его фрагментом. В одном из аспектов антигенсвязывающий домен является гуманизированным.

Гуманизированное антитело можно получать с использованием ряда способов, известных в этой области, включая, в качестве неограничивающих примеров, пересадку CDR (см., например, европейский патент № EP 239400, международную публикацию № WO91/09967 и патенты США №№ 5225539, 5530101 и 5585089, каждый из которых включен в настоящее описание в качестве ссылки в полном объеме), рекомбинацию поверхностных остатков или изменение поверхностных остатков (см., например, европейские патенты №№ EP 592106 и EP 519596; Padlan, 1991, Molecular Immunology, 28(4/5):489-498; Studnicka et al., 1994, Protein Engineering, 7(6):805-814 и Roguska et al., 1994, PNAS, 91:969-973, каждый из которых включен в настоящее описание в качестве ссылки в полном объеме), перестановку цепей (см., например, патент США № 5565332, включенный в настоящее описание в качестве ссылки в полном объеме) и способы, описываемые, например, в публикации патентной заявки США № US2005/0042664, публикации патентной заявки США № US2005/0048617, патенте США № 6407213, патенте США № 5766886, международной публикации № WO9317105, Tan et al., J. Immunol., 169:1119-25 (2002), Caldas et al., Protein Eng., 13(5):353-60 (2000), Morea et al., Methods, 20(3):267-79 (2000), Baca et al., J. Biol. Chem., 272(16):10678-84 (1997), Roguska et al., Protein Eng., 9(10):895-904 (1996), Couto et al., Cancer Res., 55 (23 Supp):5973s-5977s (1995), Couto et al., Cancer Res., 55(8):1717-22 (1995), Sandhu J S, Gene, 150(2):409-10 (1994), и Pedersen et al., J. Mol. Biol., 235(3):959-73 (1994), каждый из которых включен в настоящее описание в качестве ссылки в полном объеме. Зачастую каркасные остатки в каркасных областях будут заменять соответствующим остатком из CDR-донорного антитела для изменения, например, улучшения, связывания антигена. Эти замены каркаса, например консервативные замены, идентифицируют способами, хорошо известными в этой области, например, посредством моделирования взаимодействий CDR и каркасных остатков для идентификации каркасных остатков, важных для связывания антигена, и сравнения последовательности для идентификации необычных каркасных остатков в конкретных положениях (см., например, Queen et al., патент США № 5585089 и Riechmann et al., 1988, Nature, 332:323, включенные в настоящее описание в качестве ссылки в полном объеме).

Гуманизированное антитело или фрагмент антитела содержит один или более аминокислотных остатков, оставшихся в нем, из источника, не принадлежащего человеку. Эти не принадлежащие человеку аминокислотные остатки часто обозначают как "импортированные" остатки, как правило, взятые из "импортированного" вариабельного домена. Как представлено в настоящем описании, гуманизированные антитела или фрагменты антител содержат одну или более CDR из не принадлежащих человеку молекул иммуноглобулина и каркасные области, где аминокислотные остатки, содержащие каркас, получают полностью или в основном из зародышевой линии человека. В этой области хорошо известно множество способов гуманизации антител или фрагментов антител, и ее можно осуществлять, по существу, способом Winter и соавторов (Jones et al., Nature, 321:522-525 (1986); Riechmann et al., Nature, 332:323-327 (1988); Verhoeyen et al., Science, 239:1534-1536 (1988)), посредством замены CDR грызуна или последовательностей CDR соответствующими последовательностями антитела человека, т.е. пересадки CDR (EP 239400, публикация PCT № WO91/09967 и патенты США №№ 4816567, 6331415, 5225539, 5530101, 5585089, 6548640, содержание которых включено в настоящее описание в качестве ссылки в полном объеме). В таких гуманизированных антителах и фрагментах антител, по существу, менее чем интактный вариабельный домен человека заменяют соответствующей последовательностью не являющихся человеком видов. Гуманизированные антитела часто являются антителами человека, в которых некоторые остатки CDR и, возможно, некоторые каркасные (FR) остатки заменяют остатками из аналогичных участков в антителах грызуна. Гуманизацию антител и фрагментов антител также можно осуществлять посредством ремоделирования поверхностных остатков, или изменения поверхностных остатков (EP 592106, EP 519596; Padlan, 1991, Molecular Immunology, 28(4/5):489-498; Studnicka et al., Protein Engineering, 7(6):805-814 (1994) и Roguska et al., PNAS, 91:969-973 (1994)), или перестановки цепей (патент США № 5565332, содержание которого включено в настоящее описание в качестве ссылки в полном объеме).

Выбор вариабельных доменов человека и легких, и тяжелых цепей для использования в получении гуманизированных антител основан на снижении антигенности. В соответствии с так называемым способом "лучшего совпадения" последовательность вариабельного домена антитела грызуна подвергают скринингу относительно целой библиотеки известных последовательностей вариабельного домена человека. Затем последовательность человека, наиболее близкую к последовательности грызуна, принимают в качестве каркаса человека (FR) для гуманизированного антитела (Sims et al., J. Immunol., 151:2296 (1993); Chothia et al., J. Mol. Biol., 196:901 (1987), содержание которых включено в настоящее описание в качестве ссылок в полном объеме). В другом способе используют конкретный каркас, полученный из консенсусной последовательности всех антител человека из конкретной подгруппы легких или тяжелых цепей. Тот же каркас можно использовать для нескольких других гуманизированных антител (см., например, Nicholson et al. Mol. Immun. 34 (16-17): 1157-1165 (1997); Carter et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:4285 (1992); Presta et al., J. Immunol., 151:2623 (1993), содержание которых включено в настоящее описание в качестве ссылок в полном объеме). В некоторых вариантах осуществления каркасную область, например, все четыре каркасные области, вариабельной области тяжелой цепи получают из последовательности зародышевой линии VH4_4-59. В одном из вариантов осуществления каркасная область может содержать одну, две, три, четыре или пять модификаций, например, замен, например, консервативных замен, например, аминокислоты в соответствующей последовательности мыши. В одном из вариантов осуществления каркасную область, например, все четыре каркасные области вариабельной области легкой цепи получают из последовательности зародышевой линии VK3_1.25. В одном из вариантов осуществления каркасная область может содержать одну, две, три, четыре или пять модификаций, например, замен, например, консервативных замен, например, аминокислот в соответствующей последовательности мыши.

В некоторых аспектах часть композиции CAR по изобретению, содержащей фрагмент антитела, является гуманизированной с сохранением высокой аффинности к антигену-мишени и других предпочтительных биологических свойств. По одному из аспектов изобретения гуманизированные антитела и фрагменты антител получают способом анализа родительских последовательностей и различных концептуальных гуманизированных продуктов с использованием трехмерных моделей родительских и гуманизированных последовательностей. Трехмерные модели иммуноглобулинов широкодоступны и хорошо известны специалистам в этой области. Доступны компьютерные программы, иллюстрирующие и демонстрирующие возможные трехмерные конформационные структуры выбранных иммуноглобулиновых последовательностей-кандидатов. Изучение этих отображенных данных делает возможным анализ вероятной роли остатков в функционировании иммуноглобулиновой последовательности-кандидата, например, анализ остатков, влияющих на способность иммуноглобулина-кандидата связываться с антигеном-мишенью. Таким образом, остатки FR можно выбирать и комбинировать с последовательностями реципиента и импортированными последовательностями таким образом, что достигают желаемой характеристики антитела или фрагмента антитела, такой как повышенная аффинность к антигену-мишени. В основном, остатки CDR напрямую и наиболее существенно влияют на связывание антигена.

Гуманизированное антитело или фрагмент антитела может сохранять антигенную специфичность, схожую с исходным антителом, например, в настоящем изобретении способность связываться с BCMA человека. В некоторых вариантах осуществления гуманизированное антитело или фрагмент антитела может иметь улучшенную аффинность и/или специфичность связывания с BCMA человека.

В одном из вариантов осуществления гуманизированный связывающий домен CAR против BCMA содержит одну или более (например, все три) из определяющей комплементарность области легкой цепи 1 (CDR1 LC), определяющей комплементарность области легкой цепи 2 (CDR2 LC) и определяющей комплементарность области легкой цепи 3 (CDR3 LC) гуманизированного связывающего домена против BCMA, представленного в настоящем описании, и/или одну или более (например, все три) из определяющей комплементарность области тяжелой цепи 1 (CDR1 HC), определяющей комплементарность области тяжелой цепи 2 (CDR2 HC) и определяющей комплементарность области тяжелой цепи 3 (CDR3 HC) гуманизированного связывающего домена против BCMA, представленного в настоящем описании, например, гуманизированного связывающего домена против BCMA, содержащего одну или более, например, все три, CDR LC и одну или более, например, все три, CDR HC. В одном из вариантов осуществления гуманизированный связывающий домен против BCMA содержит одну или более (например, все три) из определяющей комплементарность области тяжелой цепи 1 (CDR1 HC), определяющей комплементарность области тяжелой цепи 2 (CDR2 HC) и определяющей комплементарность области тяжелой цепи 3 (CDR3 HC) гуманизированного связывающего домена против BCMA, представленного в настоящем описании, например, гуманизированный связывающий домен против BCMA содержит две вариабельные области тяжелой цепи, каждая из которых содержит CDR1 HC, CDR2 HC и CDR3 HC, представленные в настоящем описании. В одном из вариантов осуществления гуманизированный связывающий домен против BCMA содержит гуманизированную вариабельную область легкой цепи, представленную в настоящем описании (например, SEQ ID NO: 255 или 257), и/или вариабельную область тяжелой цепи человека, представленную в настоящем описании (например, SEQ ID NO: 255 или 257).

В одном из аспектов связывающий домен против BCMA отличается конкретными функциональными признаками или свойствами антитела или фрагмента антитела. Например, в одном из аспектов часть композиции CAR по изобретению, содержащей антигенсвязывающий домен, специфически связывается с BCMA человека.

В одном из аспектов антигенсвязывающий домен имеет ту же или схожую специфичность связывания с BCMA человека, что и с BCMA мыши. В одном из аспектов изобретение относится к антигенсвязывающему домену, содержащему антитело или фрагмент антитела, где связывающий домен антитела специфически связывается с белком BCMA или его фрагментом, где антитело или фрагмент антитела содержит вариабельную область легкой цепи и/или вариабельную область тяжелой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 39, SEQ ID NO: 40, SEQ ID NO: 41, SEQ ID NO: 42, SEQ ID NO: 43, SEQ ID NO: 44, SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 47, SEQ ID NO: 48, SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 129, SEQ ID NO: 130, SEQ ID NO: 131, SEQ ID NO: 132, SEQ ID NO: 133, SEQ ID NO: 134, SEQ ID NO: 135, SEQ ID NO: 136, SEQ ID NO: 137, SEQ ID NO: 138, SEQ ID NO: 139, SEQ ID NO: 140, SEQ ID NO: 141, SEQ ID NO: 142, SEQ ID NO: 143, SEQ ID NO: 144, SEQ ID NO: 145, SEQ ID NO: 146, SEQ ID NO: 147, SEQ ID NO: 148 или SEQ ID NO: 149. В одном из аспектов антигенсвязывающий домен содержит аминокислотную последовательность scFv, выбранную из SEQ ID NO: 39, SEQ ID NO: 40, SEQ ID NO: 41, SEQ ID NO: 42, SEQ ID NO: 43, SEQ ID NO: 44, SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 47, SEQ ID NO: 48, SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 129, SEQ ID NO: 130, SEQ ID NO: 131, SEQ ID NO: 132, SEQ ID NO: 133, SEQ ID NO: 134, SEQ ID NO: 135, SEQ ID NO: 136, SEQ ID NO: 137, SEQ ID NO: 138, SEQ ID NO: 139, SEQ ID NO: 140, SEQ ID NO: 141, SEQ ID NO: 142, SEQ ID NO: 143, SEQ ID NO: 144, SEQ ID NO: 145, SEQ ID NO: 146, SEQ ID NO: 147, SEQ ID NO: 148 или SEQ ID NO: 149. В определенных аспектах scFv является смежным и находится в той же рамке считывания, что и лидерная последовательность. В одном из аспектов лидерная последовательность является полипептидной последовательностью, приведенной как SEQ ID NO: 1.

В одном из аспектов связывающий домен против BCMA является фрагментом, например, одноцепочечным вариабельным фрагментом (scFv). В одном из аспектов связывающий домен против BCMA является Fv, Fab, (Fab')2 или бифункциональным (например, биспецифическим) гибридным антителом (например, Lanzavecchia et al., Eur. J. Immunol. 17, 105 (1987)). В одном из аспектов антитела и их фрагменты по изобретению связываются с белком BCMA с аффинностью антитела дикого типа или повышенной аффинностью.

В некоторых случаях scFv можно получать известным в этой области способом (см., например, Bird et al., (1988) Science 242:423-426 и Huston et al., (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883). Молекулы scFv можно получать, связывая области VH и VL с использованием гибких полипептидных линкеров. Молекулы scFv содержат линкер (например, линкер Ser-Gly) с оптимизированной длиной и/или аминокислотной композицией. Длина линкера может значительно влиять на то, как сворачиваются и взаимодействуют вариабельные области scFv. Фактически, при использовании короткого полипептидного линкера (например, 5-10 аминокислот) предотвращают внутрицепочечный фолдинг. Межцепочечный фолдинг также необходим для удержания двух вариабельных областей вместе для образования функционального эпитоп-связывающего участка. Примеры ориентации и размера линкера см., например, в Hollinger et al. 1993 Proc Natl Acad. Sci. U.S.A. 90:6444-6448, публикациях патентных заявок США №№ 2005/0100543, 2005/0175606, 2007/0014794 и публикациях PCT №№ WO2006/020258 и WO2007/024715, включенных в настоящее описание в качестве ссылок.

ScFv может содержать линкер из по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50 или более аминокислотных остатков между его областями VL и VH. Последовательность линкера может содержать любую природную аминокислоту. В некоторых вариантах осуществления последовательность линкера содержит аминокислоты глицин и серин. В другом варианте осуществления последовательность линкера содержит наборы глициновых и сериновых повторов, такие как (Gly₄Ser)n, где n является положительным целым числом, равным 1 или более 1 (SEQ ID NO: 25). В одном из вариантов осуществления линкер может являться (Gly₄Ser)₄ (SEQ ID NO: 27) или (Gly₄Ser)₃(SEQ ID NO: 28). Изменение длины линкера может приводить к сохранению или повышению активности, приводя к превосходящей эффективности в исследованиях активности.

Примеры конструкций BCMA CAR человека и антигенсвязывающих доменов

Примеры конструкций BCMA CAR, представленные в настоящем описании, содержат scFv (например, scFv описываемый в таблицах 1 или 16, которому, необязательно, предшествует необязательная лидерная последовательность (например, SEQ ID NO: 1 и SEQ ID NO: 12 в качестве примера лидерных аминокислотных и нуклеотидных последовательностей, соответственно). Последовательности scFv-фрагментов (SEQ ID NO: 39-53, 129-149 или 263-266, не включая необязательную лидерную последовательность) представлены в настоящем описании в таблицах 1 или 16. Конструкция CAR BCMA может дополнительно включать необязательный шарнирный домен, например, шарнирный домен CD8 (например, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2 или кодируемый последовательностью нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 13), трансмембранный домен, например, трансмембранный домен CD8 (например, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6 или кодируемый нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO: 17), внутриклеточный домен, например, внутриклеточный домен 4-1BB (например, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7 или кодируемый нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO: 18), и функциональный сигнальный домен, например, домен CD3 дзета (например, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9 или 10 или кодируемый нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO: 20 или 21). В определенных вариантах осуществления домены являются смежными и находятся в одной рамке считывания для образования единого слитого белка. В других вариантах осуществления домены находятся в отдельных полипептидах, например, как в молекуле RCAR, как представлено в настоящем описании.

В определенных вариантах осуществления полноразмерная молекула CAR BCMA включает аминокислотную последовательность или кодируется нуклеотидной последовательностью BCMA-1, BCMA-2, BCMA-3, BCMA-4, BCMA-5, BCMA-6, BCMA-7, BCMA-8, BCMA-9, BCMA-10, BCMA-11, BCMA-12, BCMA-13, BCMA-14, BCMA-15, 149362, 149363, 149364, 149365, 149366, 149367, 149368, 149369, BCMA_EBB-C1978-A4, BCMA_EBB-C1978-G1, BCMA_EBB-C1979-C1, BCMA_EBB-C1978-C7, BCMA_EBB-C1978-D10, BCMA_EBB-C1979-C12, BCMA_EBB-C1980-G4, BCMA_EBB-C1980-D2, BCMA_EBB-C1978-A10, BCMA_EBB-C1978-D4, BCMA_EBB-C1980-A2, BCMA_EBB-C1981-C3, BCMA_EBB-C1978-G4, A7D12.2, C11D5.3, C12A3.2 или C13F12.1, представленными в таблице 1 или 16, или последовательностью, по существу, (например, на 95-99%) идентичной ей.

В определенных вариантах осуществления молекула CAR BCMA или антигенсвязывающий домен против BCMA включает аминокислотную последовательность scFv BCMA-1, BCMA-2, BCMA-3, BCMA-4, BCMA-5, BCMA-6, BCMA-7, BCMA-8, BCMA-9, BCMA-10, BCMA-11, BCMA-12, BCMA-13, BCMA-14, BCMA-15, 149362, 149363, 149364, 149365, 149366, 149367, 149368, 149369, BCMA_EBB-C1978-A4, BCMA_EBB-C1978-G1, BCMA_EBB-C1979-C1, BCMA_EBB-C1978-C7, BCMA_EBB-C1978-D10, BCMA_EBB-C1979-C12, BCMA_EBB-C1980-G4, BCMA_EBB-C1980-D2, BCMA_EBB-C1978-A10, BCMA_EBB-C1978-D4, BCMA_EBB-C1980-A2, BCMA_EBB-C1981-C3, BCMA_EBB-C1978-G4, A7D12.2, C11D5.3, C12A3.2 или C13F12.1, представленную в таблице 1 или 16 (с лидерной последовательностью или без нее), или последовательность, по существу, идентичную (например, на 95-99% идентичную или с до 20, 15, 10, 8, 6, 5, 4, 3, 2 или 1 заменой аминокислоты, например, заменами (например, консервативными заменами)) любой из указанных выше последовательностей.

В определенных вариантах осуществления молекула CAR BCMA или антигенсвязывающий домен против BCMA включает вариабельную область тяжелой цепи и/или вариабельную область легкой цепи BCMA-1, BCMA-2, BCMA-3, BCMA-4, BCMA-5, BCMA-6, BCMA-7, BCMA-8, BCMA-9, BCMA-10, BCMA-11, BCMA-12, BCMA-13, BCMA-14, BCMA-15, 149362, 149363, 149364, 149365, 149366, 149367, 149368, 149369, BCMA_EBB-C1978-A4, BCMA_EBB-C1978-G1, BCMA_EBB-C1979-C1, BCMA_EBB-C1978-C7, BCMA_EBB-C1978-D10, BCMA_EBB-C1979-C12, BCMA_EBB-C1980-G4, BCMA_EBB-C1980-D2, BCMA_EBB-C1978-A10, BCMA_EBB-C1978-D4, BCMA_EBB-C1980-A2, BCMA_EBB-C1981-C3, BCMA_EBB-C1978-G4, A7D12.2, C11D5.3, C12A3.2 или C13F12.1, представленную в таблице 1 или 16, или последовательность, по существу, идентичную (например, на 95-99% идентичную или с до 20, 15, 10, 8, 6, 5, 4, 3, 2 или 1 заменой аминокислоты, например, заменами (например, консервативными заменами)) любой из указанных выше последовательностей.

В определенных вариантах осуществления молекула CAR BCMA или антигенсвязывающий домен против BCMA включает одну, две или три CDR из вариабельной области тяжелой цепи (например, HCDR1, HCDR2 и/или HCDR3), представленной в таблице 20, и/или одну, две или три CDR из вариабельной области легкой цепи (например, LCDR1, LCDR2 и/или LCDR3) BCMA-1, BCMA-2, BCMA-3, BCMA-4, BCMA-5, BCMA-6, BCMA-7, BCMA-8, BCMA-9, BCMA-10, BCMA-11, BCMA-12, BCMA-13, BCMA-14, BCMA-15, 149362, 149363, 149364, 149365, 149366, 149367, 149368, 149369, BCMA_EBB-C1978-A4, BCMA_EBB-C1978-G1, BCMA_EBB-C1979-C1, BCMA_EBB-C1978-C7, BCMA_EBB-C1978-D10, BCMA_EBB-C1979-C12, BCMA_EBB-C1980-G4, BCMA_EBB-C1980-D2, BCMA_EBB-C1978-A10, BCMA_EBB-C1978-D4, BCMA_EBB-C1980-A2, BCMA_EBB-C1981-C3, BCMA_EBB-C1978-G4, A7D12.2, C11D5.3, C12A3.2 или C13F12.1, представленной в таблице 21, или последовательность, по существу, идентичную (например, на 95-99% идентичную или с до 20, 15, 10, 8, 6, 5, 4, 3, 2 или 1 заменой аминокислоты, например, заменами (например, консервативными заменами)) любой из указанных выше последовательностей.

В определенных вариантах осуществления молекула CAR BCMA или антигенсвязывающий домен против BCMA включает одну, две или три CDR из вариабельной области тяжелой цепи (например, HCDR1, HCDR2 и/или HCDR3), представленной в таблице 22, и/или одну, две или три CDR из вариабельной области легкой цепи (например, LCDR1, LCDR2 и/или LCDR3) BCMA-1, BCMA-2, BCMA-3, BCMA-4, BCMA-5, BCMA-6, BCMA-7, BCMA-8, BCMA-9, BCMA-10, BCMA-11, BCMA-12, BCMA-13, BCMA-14, BCMA-15, 149362, 149363, 149364, 149365, 149366, 149367, 149368, 149369, BCMA_EBB-C1978-A4, BCMA_EBB-C1978-G1, BCMA_EBB-C1979-C1, BCMA_EBB-C1978-C7, BCMA_EBB-C1978-D10, BCMA_EBB-C1979-C12, BCMA_EBB-C1980-G4, BCMA_EBB-C1980-D2, BCMA_EBB-C1978-A10, BCMA_EBB-C1978-D4, BCMA_EBB-C1980-A2, BCMA_EBB-C1981-C3, BCMA_EBB-C1978-G4, A7D12.2, C11D5.3, C12A3.2 или C13F12.1, представленной в таблице 23, или последовательность, по существу, идентичную (например, на 95-99% идентичную или с до 20, 15, 10, 8, 6, 5, 4, 3, 2 или 1 заменой аминокислоты, например, заменами (например, консервативными заменами)) любой из указанных выше последовательностей.

В определенных вариантах осуществления молекула CAR BCMA или антигенсвязывающий домен против BCMA включает одну, две или три CDR из вариабельной области тяжелой цепи (например, HCDR1, HCDR2 и/или HCDR3), представленной в таблице 24, и/или одну, две или три CDR из вариабельной области легкой цепи (например, LCDR1, LCDR2 и/или LCDR3) BCMA-1, BCMA-2, BCMA-3, BCMA-4, BCMA-5, BCMA-6, BCMA-7, BCMA-8, BCMA-9, BCMA-10, BCMA-11, BCMA-12, BCMA-13, BCMA-14, BCMA-15, 149362, 149363, 149364, 149365, 149366, 149367, 149368, 149369, BCMA_EBB-C1978-A4, BCMA_EBB-C1978-G1, BCMA_EBB-C1979-C1, BCMA_EBB-C1978-C7, BCMA_EBB-C1978-D10, BCMA_EBB-C1979-C12, BCMA_EBB-C1980-G4, BCMA_EBB-C1980-D2, BCMA_EBB-C1978-A10, BCMA_EBB-C1978-D4, BCMA_EBB-C1980-A2, BCMA_EBB-C1981-C3, BCMA_EBB-C1978-G4, A7D12.2, C11D5.3, C12A3.2 или C13F12.1, представленной в таблице 25, или последовательность, по существу, идентичную (например, на 95-99% идентичную или с до 20, 15, 10, 8, 6, 5, 4, 3, 2 или 1 заменой аминокислоты, например, заменами (например, консервативными заменами)) любой из указанных выше последовательностей.

Последовательности CDR человека scFV-доменов представлены в таблицах 20, 22 и 24 в случае вариабельных доменов тяжелой цепи и в таблицах 21, 23 и 25 в случае вариабельных доменов легких цепей. "ID" означает соответствующую SEQ ID NO для каждой CDR.

Таблица 20: CDR вариабельного домена тяжелой цепи в соответствии со схемой нумерации по Kabat (Kabat et al. (1991), "Sequences of Proteins of Immunological Interest," 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD)

Кандидат	HCDR1	ID	HCDR2	ID	HCDR3	ID
139109	NHGMS	394	GIVYSGSTYYAASVKG	434	HGGESDV	474
139103	NYAMS	384	GISRSGENTYYADSVKG	424	SPAHYYGGMDV	464
139105	DYAMH	385	GISWNSGSIGYADSVKG	425	HSFLAY	465
139111	NHGMS	386	GIVYSGSTYYAASVKG	426	HGGESDV	466
139100	NFGIN	387	WINPKNNNTNYAQKFQG	427	GPYYYQSYMDV	467
139101	SDAMT	388	VISGSGGTTYYADSVKG	428	LDSSGYYYARGPRY	468
139102	NYGIT	389	WISAYNGNTNYAQKFQG	429	GPYYYYMDV	469
139104	NHGMS	390	GIVYSGSTYYAASVKG	430	HGGESDV	470
139106	NHGMS	391	GIVYSGSTYYAASVKG	431	HGGESDV	471
139107	NHGMS	392	GIVYSGSTYYAASVKG	432	HGGESDV	472
139108	DYYMS	393	YISSSGSTIYYADSVKG	433	ESGDGMDV	473
139110	DYYMS	395	YISSSGNTIYYADSVKG	435	STMVREDY	475
139112	NHGMS	396	GIVYSGSTYYAASVKG	436	HGGESDV	476
139113	NHGMS	397	GIVYSGSTYYAASVKG	437	HGGESDV	477
139114	NHGMS	398	GIVYSGSTYYAASVKG	438	HGGESDV	478
149362	SSYYYWG	399	SIYYSGSAYYNPSLKS	439	HWQEWPDAFDI	479
149363	TSGMCVS	400	RIDWDEDKFYSTSLKT	440	SGAGGTSATAFDI	480
149364	SYSMN	401	SISSSSSYIYYADSVKG	441	TIAAVYAFDI	481
149365	DYYMS	402	YISSSGSTIYYADSVKG	442	DLRGAFDI	482
149366	SHYIH	403	MINPSGGVTAYSQTLQG	443	EGSGSGWYFDF	483
149367	SGGYYWS	404	YIYYSGSTYYNPSLKS	444	AGIAARLRGAFDI	484
149368	SYAIS	405	GIIPIFGTANYAQKFQG	445	RGGYQLLRWDVGLLRSAFDI	485
149369	SNSAAWN	406	RTYYRSKWYSFYAISLKS	446	SSPEGLFLYWFDP	486
BCMA_EBB-C1978-A4	SYAMS	407	AISGSGGSTYYADSVKG	447	VEGSGSLDY	487
BCMA_EBB-C1978-G1	RYPMS	408	GISDSGVSTYYADSAKG	448	RAGSEASDI	488
BCMA_EBB-C1979-C1	SYAMS	409	AISGSGGSTYYADSVKG	449	ATYKRELRYYYGMDV	489
BCMA_EBB-C1978-C7	SYAMS	410	AISGSGGSTYYADSVKG	450	ATYKRELRYYYGMDV	490
BCMA_EBB-C1978-D10	DYAMH	411	GISWNSGSIGYADSVKG	451	VGKAVPDV	491
BCMA_EBB-C1979-C12	DYAMH	412	SINWKGNSLAYGDSVKG	452	HQGVAYYNYAMDV	492
BCMA_EBB-C1980-G4	SYAMS	413	AISGSGGSTYYADSVKG	453	VVRDGMDV	493
BCMA_EBB-C1980-D2	SYAMS	414	AISGSGGSTYYADSVKG	454	IPQTGTFDY	494
BCMA_EBB-C1978-A10	SYAMS	415	AISGSGGSTYYADSVKG	455	ANYKRELRYYYGMDV	495
BCMA_EBB-C1978-D4	SYAMS	416	AISGSGGSTYYADSVKG	456	ALVGATGAFDI	496
BCMA_EBB-C1980-A2	SYAMS	417	AISGSGGSTYYADSVKG	457	WFGEGFDP	497
BCMA_EBB-C1981-C3	SYAMS	418	AISGSGGSTYYADSVKG	458	VGYDSSGYYRDYYGMDV	498
BCMA_EBB-C1978-G4	SYAMS	419	AISGSGGSTYYADSVKG	459	MGWSSGYLGAFDI	499
A7D12.2	NFGMN	420	WINTYTGESYFADDFKG	460	GEIYYGYDGGFAY	500
C11D5.3	DYSIN	421	WINTETREPAYAYDFRG	461	DYSYAMDY	501
C12A3.2	HYSMN	422	RINTESGVPIYADDFKG	462	DYLYSLDF	502
C13F12.1	HYSMN	423	RINTETGEPLYADDFKG	463	DYLYSCDY	503

Таблица 21: CDR вариабельного домена легкой цепи в соответствии со схемой нумерации по Kabat (Kabat et al. (1991), "Sequences of Proteins of Immunological Interest," 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD)

Кандидат	LCDR1	ID	LCDR2	ID	LCDR3	ID
139109	RASQSISSYLN	514	AASSLQS	554	QQSYSTPYT	594
139103	RASQSISSSFLA	504	GASRRAT	544	QQYHSSPSWT	584
139105	RSSQSLLHSNGYNYLD	505	LGSNRAS	545	MQALQTPYT	585
139111	KSSQSLLRNDGKTPLY	506	EVSNRFS	546	MQNIQFPS	586
139100	RSSQSLLHSNGYNYLN	507	LGSKRAS	547	MQALQTPYT	587
139101	RASQSISSYLN	508	GASTLAS	548	QQSYKRAS	588
139102	RSSQSLLYSNGYNYVD	509	LGSNRAS	549	MQGRQFPYS	589
139104	RASQSVSSNLA	510	GASTRAS	550	QQYGSSLT	590
139106	RASQSVSSKLA	511	GASIRAT	551	QQYGSSSWT	591
139107	RASQSVGSTNLA	512	DASNRAT	552	QQYGSSPPWT	592
139108	RASQSISSYLN	513	AASSLQS	553	QQSYTLA	593
139110	KSSESLVHNSGKTYLN	515	EVSNRDS	555	MQGTHWPGT	595
139112	QASEDINKFLN	516	DASTLQT	556	QQYESLPLT	596
139113	RASQSVGSNLA	517	GASTRAT	557	QQYNDWLPVT	597
139114	RASQSIGSSSLA	518	GASSRAS	558	QQYAGSPPFT	598
149362	KASQDIDDAMN	519	SATSPVP	559	LQHDNFPLT	599
149363	RASQDIYNNLA	520	AANKSQS	560	QHYYRFPYS	600
149364	RSSQSLLHSNGYNYLD	521	LGSNRAS	561	MQALQTPYT	601
149365	GGNNIGTKSVH	522	DDSVRPS	562	QVWDSDSEHVV	602
149366	SGDGLSKKYVS	523	RDKERPS	563	QAWDDTTVV	603
149367	RASQGIRNWLA	524	AASNLQS	564	QKYNSAPFT	604
149368	GGNNIGSKSVH	525	GKNNRPS	565	SSRDSSGDHLRV	605
149369	QGDSLGNYYAT	526	GTNNRPS	566	NSRDSSGHHLL	606
BCMA_EBB-C1978-A4	RASQSVSSAYLA	527	GASTRAT	567	QHYGSSFNGSSLFT	607
BCMA_EBB-C1978-G1	RASQSVSNSLA	528	DASSRAT	568	QQFGTSSGLT	608
BCMA_EBB-C1979-C1	RASQSVSSSFLA	529	GASSRAT	569	QQYHSSPSWT	609
BCMA_EBB-C1978-C7	RASQSVSTTFLA	530	GSSNRAT	570	QQYHSSPSWT	610
BCMA_EBB-C1978-D10	RASQSISSYLN	531	AASSLQS	571	QQSYSTPYS	611
BCMA_EBB-C1979-C12	RATQSIGSSFLA	532	GASQRAT	572	QHYESSPSWT	612
BCMA_EBB-C1980-G4	RASQSVSSSYLA	533	GASSRAT	573	QQYGSPPRFT	613
BCMA_EBB-C1980-D2	RASQSVSSSYLA	534	GASSRAT	574	QHYGSSPSWT	614
BCMA_EBB-C1978-A10	RASQRVASNYLA	535	GASSRAT	575	QHYDSSPSWT	615
BCMA_EBB-C1978-D4	RASQSLSSNFLA	536	GASNWAT	576	QYYGTSPMYT	616
BCMA_EBB-C1980-A2	RSSQSLLHSNGYNYLD	537	LGSNRAS	577	MQALQTPLT	617
BCMA_EBB-C1981-C3	RASQSVSSSYLA	538	GTSSRAT	578	QHYGNSPPKFT	618
BCMA_EBB-C1978-G4	RASQSVASSFLA	539	GASGRAT	579	QHYGGSPRLT	619
A7D12.2	RASQDVNTAVS	540	SASYRYT	580	QQHYSTPWT	620
C11D5.3	RASESVSVIGAHLIH	541	LASNLET	581	LQSRIFPRT	621
C12A3.2	RASESVTILGSHLIY	542	LASNVQT	582	LQSRTIPRT	622
C13F12.1	RASESVTILGSHLIY	543	LASNVQT	583	LQSRTIPRT	623

Таблица 22: CDR вариабельного домена тяжелой цепи в соответствии со схемой нумерации по Chothia (Al-Lazikani et al., (1997) JMB 273, 927-948)

Кандидат	HCDR1	ID	HCDR2	ID	HCDR3	ID
139109	GFALSNH	634	VYSGS	674	HGGESDV	714
139103	GFTFSNY	624	SRSGEN	664	SPAHYYGGMDV	704
139105	GFTFDDY	625	SWNSGS	665	HSFLAY	705
139111	GFALSNH	626	VYSGS	666	HGGESDV	706
139100	GYIFDNF	627	NPKNNN	667	GPYYYQSYMDV	707
139101	GFTFSSD	628	SGSGGT	668	LDSSGYYYARGPRY	708
139102	GYTFSNY	629	SAYNGN	669	GPYYYYMDV	709
139104	GFALSNH	630	VYSGS	670	HGGESDV	710
139106	GFALSNH	631	VYSGS	671	HGGESDV	711
139107	GFALSNH	632	VYSGS	672	HGGESDV	712
139108	GFTFSDY	633	SSSGST	673	ESGDGMDV	713
139110	GFTFSDY	635	SSSGNT	675	STMVREDY	715
139112	GFALSNH	636	VYSGS	676	HGGESDV	716
139113	GFALSNH	637	VYSGS	677	HGGESDV	717
139114	GFALSNH	638	VYSGS	678	HGGESDV	718
149362	GGSISSSYY	639	YYSGS	679	HWQEWPDAFDI	719
149363	GFSLRTSGM	640	DWDED	680	SGAGGTSATAFDI	720
149364	GFTFSSY	641	SSSSSY	681	TIAAVYAFDI	721
149365	GFTFSDY	642	SSSGST	682	DLRGAFDI	722
149366	GYTVTSH	643	NPSGGV	683	EGSGSGWYFDF	723
149367	GGSISSGGY	644	YYSGS	684	AGIAARLRGAFDI	724
149368	GGTFSSY	645	IPIFGT	685	RGGYQLLRWDVGLLRSAFDI	725
149369	GDSVSSNSA	646	YYRSKWY	686	SSPEGLFLYWFDP	726
BCMA_EBB-C1978-A4	GFTFSSY	647	SGSGGS	687	VEGSGSLDY	727
BCMA_EBB-C1978-G1	GITFSRY	648	SDSGVS	688	RAGSEASDI	728
BCMA_EBB-C1979-C1	GFTFSSY	649	SGSGGS	689	ATYKRELRYYYGMDV	729
BCMA_EBB-C1978-C7	GFTFSSY	650	SGSGGS	690	ATYKRELRYYYGMDV	730
BCMA_EBB-C1978-D10	GFTFDDY	651	SWNSGS	691	VGKAVPDV	731
BCMA_EBB-C1979-C12	GFTFDDY	652	NWKGNS	692	HQGVAYYNYAMDV	732
BCMA_EBB-C1980-G4	GFTFSSY	653	SGSGGS	693	VVRDGMDV	733
BCMA_EBB-C1980-D2	GFTFSSY	654	SGSGGS	694	IPQTGTFDY	734
BCMA_EBB-C1978-A10	GFTFSSY	655	SGSGGS	695	ANYKRELRYYYGMDV	735
BCMA_EBB-C1978-D4	GFSFSSY	656	SGSGGS	696	ALVGATGAFDI	736
BCMA_EBB-C1980-A2	GFTFSSY	657	SGSGGS	697	WFGEGFDP	737
BCMA_EBB-C1981-C3	GFTFSSY	658	SGSGGS	698	VGYDSSGYYRDYYGMDV	738
BCMA_EBB-C1978-G4	GFTFSSY	659	SGSGGS	699	MGWSSGYLGAFDI	739
A7D12.2	GYTFTNF	660	NTYTGE	700	GEIYYGYDGGFAY	740
C11D5.3	GYTFTDY	661	NTETRE	701	DYSYAMDY	741
C12A3.2	GYTFRHY	662	NTESGV	702	DYLYSLDF	742
C13F12.1	GYTFTHY	663	NTETGE	703	DYLYSCDY	743

Таблица 23: CDR вариабельного домена легкой цепи в соответствии со схемой нумерации по Chothia (Al-Lazikani et al., (1997) JMB 273, 927-948)

Кандидат	LCDR1	ID	LCDR2	ID	LCDR3	ID
139109	SQSISSY	754	AAS	794	SYSTPY	834
139103	SQSISSSF	744	GAS	784	YHSSPSW	824
139105	SQSLLHSNGYNY	745	LGS	785	ALQTPY	825
139111	SQSLLRNDGKTP	746	EVS	786	NIQFP	826
139100	SQSLLHSNGYNY	747	LGS	787	ALQTPY	827
139101	SQSISSY	748	GAS	788	SYKRA	828
139102	SQSLLYSNGYNY	749	LGS	789	GRQFPY	829
139104	SQSVSSN	750	GAS	790	YGSSL	830
139106	SQSVSSK	751	GAS	791	YGSSSW	831
139107	SQSVGSTN	752	DAS	792	YGSSPPW	832
139108	SQSISSY	753	AAS	793	SYTL	833
139110	SESLVHNSGKTY	755	EVS	795	GTHWPG	835
139112	SEDINKF	756	DAS	796	YESLPL	836
139113	SQSVGSN	757	GAS	797	YNDWLPV	837
139114	SQSIGSSS	758	GAS	798	YAGSPPF	838
149362	SQDIDDA	759	SAT	799	HDNFPL	839
149363	SQDIYNN	760	AAN	800	YYRFPY	840
149364	SQSLLHSNGYNY	761	LGS	801	ALQTPY	841
149365	NNIGTKS	762	DDS	802	WDSDSEHV	842
149366	DGLSKKY	763	RDK	803	WDDTTV	843
149367	SQGIRNW	764	AAS	804	YNSAPF	844
149368	NNIGSKS	765	GKN	805	RDSSGDHLR	845
149369	DSLGNYY	766	GTN	806	RDSSGHHL	846
BCMA_EBB-C1978-A4	SQSVSSAY	767	GAS	807	YGSSFNGSSLF	847
BCMA_EBB-C1978-G1	SQSVSNS	768	DAS	808	FGTSSGL	848
BCMA_EBB-C1979-C1	SQSVSSSF	769	GAS	809	YHSSPSW	849
BCMA_EBB-C1978-C7	SQSVSTTF	770	GSS	810	YHSSPSW	850
BCMA_EBB-C1978-D10	SQSISSY	771	AAS	811	SYSTPY	851
BCMA_EBB-C1979-C12	TQSIGSSF	772	GAS	812	YESSPSW	852
BCMA_EBB-C1980-G4	SQSVSSSY	773	GAS	813	YGSPPRF	853
BCMA_EBB-C1980-D2	SQSVSSSY	774	GAS	814	YGSSPSW	854
BCMA_EBB-C1978-A10	SQRVASNY	775	GAS	815	YDSSPSW	855
BCMA_EBB-C1978-D4	SQSLSSNF	776	GAS	816	YGTSPMY	856
BCMA_EBB-C1980-A2	SQSLLHSNGYNY	777	LGS	817	ALQTPL	857
BCMA_EBB-C1981-C3	SQSVSSSY	778	GTS	818	YGNSPPKF	858
BCMA_EBB-C1978-G4	SQSVASSF	779	GAS	819	YGGSPRL	859
A7D12.2	SQDVNTA	780	SAS	820	HYSTPW	860
C11D5.3	SESVSVIGAHL	781	LAS	821	SRIFPR	861
C12A3.2	SESVTILGSHL	782	LAS	822	SRTIPR	862
C13F12.1	SESVTILGSHL	783	LAS	823	SRTIPR	863

Таблица 24. CDR вариабельного домена тяжелой цепи в соответствии с комбинацией схемы нумерации по Kabat (Kabat et al. (1991), "Sequences of Proteins of Immunological Interest," 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD) и схемы нумерации по Chothia (Al-Lazikani et al., (1997) JMB 273, 927-948).

Кандидат	HCDR1	ID	HCDR2	ID	HCDR3	ID
139109	GFALSNHGMS	874	GIVYSGSTYYAASVKG	914	HGGESDV	954
139103	GFTFSNYAMS	864	GISRSGENTYYADSVKG	904	SPAHYYGGMDV	944
139105	GFTFDDYAMH	865	GISWNSGSIGYADSVKG	905	HSFLAY	945
139111	GFALSNHGMS	866	GIVYSGSTYYAASVKG	906	HGGESDV	946
139100	GYIFDNFGIN	867	WINPKNNNTNYAQKFQG	907	GPYYYQSYMDV	947
139101	GFTFSSDAMT	868	VISGSGGTTYYADSVKG	908	LDSSGYYYARGPRY	948
139102	GYTFSNYGIT	869	WISAYNGNTNYAQKFQG	909	GPYYYYMDV	949
139104	GFALSNHGMS	870	GIVYSGSTYYAASVKG	910	HGGESDV	950
139106	GFALSNHGMS	871	GIVYSGSTYYAASVKG	911	HGGESDV	951
139107	GFALSNHGMS	872	GIVYSGSTYYAASVKG	912	HGGESDV	952
139108	GFTFSDYYMS	873	YISSSGSTIYYADSVKG	913	ESGDGMDV	953
139110	GFTFSDYYMS	875	YISSSGNTIYYADSVKG	915	STMVREDY	955
139112	GFALSNHGMS	876	GIVYSGSTYYAASVKG	916	HGGESDV	956
139113	GFALSNHGMS	877	GIVYSGSTYYAASVKG	917	HGGESDV	957
139114	GFALSNHGMS	878	GIVYSGSTYYAASVKG	918	HGGESDV	958
149362	GGSISSSYYYWG	879	SIYYSGSAYYNPSLKS	919	HWQEWPDAFDI	959
149363	GFSLRTSGMCVS	880	RIDWDEDKFYSTSLKT	920	SGAGGTSATAFDI	960
149364	GFTFSSYSMN	881	SISSSSSYIYYADSVKG	921	TIAAVYAFDI	961
149365	GFTFSDYYMS	882	YISSSGSTIYYADSVKG	922	DLRGAFDI	962
149366	GYTVTSHYIH	883	MINPSGGVTAYSQTLQG	923	EGSGSGWYFDF	963
149367	GGSISSGGYYWS	884	YIYYSGSTYYNPSLKS	924	AGIAARLRGAFDI	964
149368	GGTFSSYAIS	885	GIIPIFGTANYAQKFQG	925	RGGYQLLRWDVGLLRSAFDI	965
149369	GDSVSSNSAAWN	886	RTYYRSKWYSFYAISLKS	926	SSPEGLFLYWFDP	966
BCMA_EBB-C1978-A4	GFTFSSYAMS	887	AISGSGGSTYYADSVKG	927	VEGSGSLDY	967
BCMA_EBB-C1978-G1	GITFSRYPMS	888	GISDSGVSTYYADSAKG	928	RAGSEASDI	968
BCMA_EBB-C1979-C1	GFTFSSYAMS	889	AISGSGGSTYYADSVKG	929	ATYKRELRYYYGMDV	969
BCMA_EBB-C1978-C7	GFTFSSYAMS	890	AISGSGGSTYYADSVKG	930	ATYKRELRYYYGMDV	970
BCMA_EBB-C1978-D10	GFTFDDYAMH	891	GISWNSGSIGYADSVKG	931	VGKAVPDV	971
BCMA_EBB-C1979-C12	GFTFDDYAMH	892	SINWKGNSLAYGDSVKG	932	HQGVAYYNYAMDV	972
BCMA_EBB-C1980-G4	GFTFSSYAMS	893	AISGSGGSTYYADSVKG	933	VVRDGMDV	973
BCMA_EBB-C1980-D2	GFTFSSYAMS	894	AISGSGGSTYYADSVKG	934	IPQTGTFDY	974
BCMA_EBB-C1978-A10	GFTFSSYAMS	895	AISGSGGSTYYADSVKG	935	ANYKRELRYYYGMDV	975
BCMA_EBB-C1978-D4	GFSFSSYAMS	896	AISGSGGSTYYADSVKG	936	ALVGATGAFDI	976
BCMA_EBB-C1980-A2	GFTFSSYAMS	897	AISGSGGSTYYADSVKG	937	WFGEGFDP	977
BCMA_EBB-C1981-C3	GFTFSSYAMS	898	AISGSGGSTYYADSVKG	938	VGYDSSGYYRDYYGMDV	978
BCMA_EBB-C1978-G4	GFTFSSYAMS	899	AISGSGGSTYYADSVKG	939	MGWSSGYLGAFDI	979
A7D12.2	GYTFTNFGMN	900	WINTYTGESYFADDFKG	940	GEIYYGYDGGFAY	980
C11D5.3	GYTFTDYSIN	901	WINTETREPAYAYDFRG	941	DYSYAMDY	981
C12A3.2	GYTFRHYSMN	902	RINTESGVPIYADDFKG	942	DYLYSLDF	982
C13F12.1	GYTFTHYSMN	903	RINTETGEPLYADDFKG	943	DYLYSCDY	983

Таблица 25. CDR вариабельного домена легкой цепи в соответствии с комбинацией схемы нумерации по Kabat (Kabat et al. (1991), "Sequences of Proteins of Immunological Interest," 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD) и схемы нумерации по Chothia (Al-Lazikani et al., (1997) JMB 273, 927-948).

Кандидат	LCDR1	ID	LCDR2	ID	LCDR3	ID
139109	RASQSISSYLN	994	AASSLQS	1034	QQSYSTPYT	1074
139103	RASQSISSSFLA	984	GASRRAT	1024	QQYHSSPSWT	1064
139105	RSSQSLLHSNGYNYLD	985	LGSNRAS	1025	MQALQTPYT	1065
139111	KSSQSLLRNDGKTPLY	986	EVSNRFS	1026	MQNIQFPS	1066
139100	RSSQSLLHSNGYNYLN	987	LGSKRAS	1027	MQALQTPYT	1067
139101	RASQSISSYLN	988	GASTLAS	1028	QQSYKRAS	1068
139102	RSSQSLLYSNGYNYVD	989	LGSNRAS	1029	MQGRQFPYS	1069
139104	RASQSVSSNLA	990	GASTRAS	1030	QQYGSSLT	1070
139106	RASQSVSSKLA	991	GASIRAT	1031	QQYGSSSWT	1071
139107	RASQSVGSTNLA	992	DASNRAT	1032	QQYGSSPPWT	1072
139108	RASQSISSYLN	993	AASSLQS	1033	QQSYTLA	1073
139110	KSSESLVHNSGKTYLN	995	EVSNRDS	1035	MQGTHWPGT	1075
139112	QASEDINKFLN	996	DASTLQT	1036	QQYESLPLT	1076
139113	RASQSVGSNLA	997	GASTRAT	1037	QQYNDWLPVT	1077
139114	RASQSIGSSSLA	998	GASSRAS	1038	QQYAGSPPFT	1078
149362	KASQDIDDAMN	999	SATSPVP	1039	LQHDNFPLT	1079
149363	RASQDIYNNLA	1000	AANKSQS	1040	QHYYRFPYS	1080
149364	RSSQSLLHSNGYNYLD	1001	LGSNRAS	1041	MQALQTPYT	1081
149365	GGNNIGTKSVH	1002	DDSVRPS	1042	QVWDSDSEHVV	1082
149366	SGDGLSKKYVS	1003	RDKERPS	1043	QAWDDTTVV	1083
149367	RASQGIRNWLA	1004	AASNLQS	1044	QKYNSAPFT	1084
149368	GGNNIGSKSVH	1005	GKNNRPS	1045	SSRDSSGDHLRV	1085
149369	QGDSLGNYYAT	1006	GTNNRPS	1046	NSRDSSGHHLL	1086
BCMA_EBB-C1978-A4	RASQSVSSAYLA	1007	GASTRAT	1047	QHYGSSFNGSSLFT	1087
BCMA_EBB-C1978-G1	RASQSVSNSLA	1008	DASSRAT	1048	QQFGTSSGLT	1088
BCMA_EBB-C1979-C1	RASQSVSSSFLA	1009	GASSRAT	1049	QQYHSSPSWT	1089
BCMA_EBB-C1978-C7	RASQSVSTTFLA	1010	GSSNRAT	1050	QQYHSSPSWT	1090
BCMA_EBB-C1978-D10	RASQSISSYLN	1011	AASSLQS	1051	QQSYSTPYS	1091
BCMA_EBB-C1979-C12	RATQSIGSSFLA	1012	GASQRAT	1052	QHYESSPSWT	1092
BCMA_EBB-C1980-G4	RASQSVSSSYLA	1013	GASSRAT	1053	QQYGSPPRFT	1093
BCMA_EBB-C1980-D2	RASQSVSSSYLA	1014	GASSRAT	1054	QHYGSSPSWT	1094
BCMA_EBB-C1978-A10	RASQRVASNYLA	1015	GASSRAT	1055	QHYDSSPSWT	1095
BCMA_EBB-C1978-D4	RASQSLSSNFLA	1016	GASNWAT	1056	QYYGTSPMYT	1096
BCMA_EBB-C1980-A2	RSSQSLLHSNGYNYLD	1017	LGSNRAS	1057	MQALQTPLT	1097
BCMA_EBB-C1981-C3	RASQSVSSSYLA	1018	GTSSRAT	1058	QHYGNSPPKFT	1098
BCMA_EBB-C1978-G4	RASQSVASSFLA	1019	GASGRAT	1059	QHYGGSPRLT	1099
A7D12.2	RASQDVNTAVS	1020	SASYRYT	1060	QQHYSTPWT	1100
C11D5.3	RASESVSVIGAHLIH	1021	LASNLET	1061	LQSRIFPRT	1101
C12A3.2	RASESVTILGSHLIY	1022	LASNVQT	1062	LQSRTIPRT	1102
C13F12.1	RASESVTILGSHLIY	1023	LASNVQT	1063	LQSRTIPRT	1103

В определенных вариантах осуществления молекула CAR, представленная в настоящем описании (например, нуклеиновая кислота CAR или полипептид CAR), или BCMA-связывающий домен включает:

(1) одну, две или три CDR легкой цепи (LC), выбранные из одного из следующего:

(i) CDR1 LC SEQ ID NO: 504, CDR2 LC SEQ ID NO: 544 и CDR3 LC SEQ ID NO: 584 BCMA-4 CAR (139103);

(ii) CDR1 LC SEQ ID NO: 514, CDR2 LC SEQ ID NO: 554 и CDR3 LC SEQ ID NO: 594 BCMA-10 CAR (139109);

(iii) CDR1 LC SEQ ID NO: 516, CDR2 LC SEQ ID NO: 556 и CDR3 LC SEQ ID NO: 596 BCMA-13 CAR (139112); или

(iv) CDR1 LC SEQ ID NO: 518, CDR2 LC SEQ ID NO: 558 и CDR3 LC SEQ ID NO: 598 BCMA-15 CAR (139114), и/или

(2) одну, две или три CDR тяжелой цепи (HC) из одного из следующего:

(i) CDR1 HC SEQ ID NO: 384, CDR2 HC SEQ ID NO: 424 и CDR3 HC SEQ ID NO: 464 BCMA-4 CAR (139103);

(ii) CDR1 HC SEQ ID NO: 394, CDR2 HC SEQ ID NO: 434 и CDR3 HC SEQ ID NO: 474 BCMA-10 CAR (139109);

(iii) CDR1 HC SEQ ID NO: 396, CDR2 HC SEQ ID NO: 436 и CDR3 HC SEQ ID NO: 476 BCMA-13 CAR (139112); или

(iv) CDR1 HC SEQ ID NO: 398, CDR2 HC SEQ ID NO: 438 и CDR3 HC SEQ ID NO: 478 BCMA-15 (139114).

В определенных вариантах осуществления молекула CAR, представленная в настоящем описании (например, нуклеиновая кислота CAR или полипептид CAR) включает:

(1) одну, две или три CDR легкой цепи (LC), выбранные из одного из следующего:

(i) CDR1 LC SEQ ID NO: 744, CDR2 LC SEQ ID NO: 784 и CDR3 LC SEQ ID NO: 824 BCMA-4 CAR (139103);

(ii) CDR1 LC SEQ ID NO: 754, CDR2 LC SEQ ID NO: 794 и CDR3 LC SEQ ID NO: 834 BCMA-10 CAR (139109);

(iii) CDR1 LC SEQ ID NO: 756, CDR2 LC SEQ ID NO: 796 и CDR3 LC SEQ ID NO: 836 BCMA-13 CAR (139112); или

(iv) CDR1 LC SEQ ID NO: 758, CDR2 LC SEQ ID NO: 798 и CDR3 LC SEQ ID NO: 838 BCMA-15 CAR (139114); и/или

(2) одну, две или три CDR тяжелой цепи (HC), выбранные из одного из следующего:

(i) CDR1 HC SEQ ID NO: 624, CDR2 HC SEQ ID NO: 664 и CDR3 HC SEQ ID NO: 704 BCMA-4 CAR (139103);

(ii) CDR1 HC SEQ ID NO: 634, CDR2 HC SEQ ID NO: 674 и CDR3 HC SEQ ID NO: 714 BCMA-10 CAR (139109);

(iii) CDR1 HC SEQ ID NO: 636, CDR2 HC SEQ ID NO: 676 и CDR3 HC SEQ ID NO: 716 BCMA-13 CAR (139112); или

(iv) CDR1 HC SEQ ID NO: 638, CDR2 HC SEQ ID NO: 678 и CDR3 HC SEQ ID NO: 718 BCMA-15 CAR (139114).

В определенных вариантах осуществления молекула CAR, представленная в настоящем описании (например, нуклеиновая кислота CAR или полипептид CAR), включает:

(1) одну, две или три CDR легкой цепи (LC), выбранные из одного из следующего:

(i) CDR1 LC SEQ ID NO: 984 CDR2 LC SEQ ID NO: 1024 и CDR3 LC SEQ ID NO: 1064 BCMA-4 CAR (139103);

(ii) CDR1 LC SEQ ID NO: 994, CDR2 LC SEQ ID NO: 1034 и CDR3 LC SEQ ID NO: 1074 BCMA-10 CAR (139109);

(iii) CDR1 LC SEQ ID NO: 996, CDR2 LC SEQ ID NO: 1036 и CDR3 LC SEQ ID NO: 1076 BCMA-13 CAR (139112); или

(iv) CDR1 LC SEQ ID NO: 998, CDR2 LC SEQ ID NO: 1038 и CDR3 LC SEQ ID NO: 1078 BCMA-15 CAR (139114); и/или

(2) одну, две или три CDR тяжелой цепи (HC), выбранные из одного из следующего:

(i) CDR1 HC SEQ ID NO: 864, CDR2 HC SEQ ID NO: 904 и CDR3 HC SEQ ID NO: 944 BCMA-4 CAR (139103);

(ii) CDR1 HC SEQ ID NO: 874, CDR2 HC SEQ ID NO: 914 и CDR3 HC SEQ ID NO: 954 BCMA-10 CAR (139109);

(iii) CDR1 HC SEQ ID NO: 876, CDR2 HC SEQ ID NO: 916 и CDR3 HC SEQ ID NO: 956 BCMA-13 CAR (139112);

(iv) CDR1 HC SEQ ID NO: 878, CDR2 HC SEQ ID NO: 918 и CDR3 HC SEQ ID NO: 958 BCMA-15 CAR (139114).

В вариантах осуществления конструкции CAR против BCMA, например, человеческие или гуманизированные конструкции CAR против BCMA, получают способом, представленным в настоящем описании, например, как описано в примере 4. Неограничивающие примеры scFv против BCMA включают BCMA-1, BCMA-2, BCMA-3, BCMA-4, BCMA-5, BCMA-6, BCMA-7, BCMA-8, BCMA-9, BCMA-10, BCMA-11, BCMA-12, BCMA-13, BCMA-14 и BCMA-15. Последовательности scFv-фрагментов человека против BCMA (SEQ ID NO: 39-52) представлены в таблице 1 (и их обозначения представлены в таблице 2).

В вариантах осуществления полные конструкции BCMA CAR (например, SEQ ID NO: 99-113) получают с использованием scFv-фрагментов, например, scFv-фрагментов человека (например, SEQ ID NO: 39-52), в комбинации с дополнительными последовательностями, такими как представленные ниже.

Необходимо отметить, что scFv-фрагменты, представленные в настоящем описании, например, в таблицах 1 и 16 или в SEQ ID NO: 39-53, 129-149, 263-266, 271 или 273, без лидерной последовательности (например, без аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1 или нуклеотидной последовательности SEQ ID NO: 12), находятся в объеме настоящего изобретения. В других вариантах осуществления scFv-фрагменты, представленные в настоящем описании, например, в таблицах 1 и 16 или в SEQ ID NO: 39-53, 129-149, 263-266, 271 или 273 с лидерной последовательностью (например, без аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1 или нуклеотидной последовательности SEQ ID NO: 12), также находятся в объеме настоящего изобретения.

Лидерная последовательность (аминокислотная последовательность) (SEQ ID NO: 1)

MALPVTALLLPLALLLHAARP

Лидерная последовательность (последовательность нуклеиновой кислоты) (SEQ ID NO: 12)

ATGGCCCTGCCTGTGACAGCCCTGCTGCTGCCTCTGGCTCTGCTGCTGCATGCCGCTAGACCC

Шарнирная область CD8 (аминокислотная последовательность) (SEQ ID NO: 2)

TTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACD

Шарнирная область CD8 (последовательность нуклеиновой кислоты) (SEQ ID NO: 13)

ACCACGACGCCAGCGCCGCGACCACCAACACCGGCGCCCACCATCGCGTCGCAGCCCCTGTCCCTGCGCCCAGAGGCGTGCCGGCCAGCGGCGGGGGGCGCAGTGCACACGAGGGGGCTGGACTTCGCCTGTGAT

Трансмембранный домен CD8 (аминокислотная последовательность) (SEQ ID NO: 6)

IYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYC

Трансмембранный домен CD8 (последовательность нуклеиновой кислоты) (SEQ ID NO: 17)

ATCTACATCTGGGCGCCCTTGGCCGGGACTTGTGGGGTCCTTCTCCTGTCACTGGTTATCACCCTTTACTGC

Внутриклеточный домен 4-1BB (аминокислотная последовательность) (SEQ ID NO: 7)

KRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCEL

Внутриклеточный домен 4-1BB (последовательность нуклеиновой кислоты) (SEQ ID NO: 18)

AAACGGGGCAGAAAGAAACTCCTGTATATATTCAAACAACCATTTATGAGACCAGTACAAACTACTCAAGAGGAAGATGGCTGTAGCTGCCGATTTCCAGAAGAAGAAGAAGGAGGATGTGAACTG

Внутриклеточный домен CD28 (аминокислотная последовательность) (SEQ ID NO: 1104)

RSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRS (SEQ ID NO: 1104)

Внутриклеточный домен CD28 (нуклеотидная последовательность) (SEQ ID NO: 1105)

AGGAGTAAGAGGAGCAGGCTCCTGCACAGTGACTACATGAACATGACTCCCCGCCGCCCCGGGCCCACCCGCAAGCATTACCAGCCCTATGCCCCACCACGCGACTTCGCAGCCTATCGCTCC (SEQ ID NO: 1105)

Внутриклеточный домен ICOS (аминокислотная последовательность) (SEQ ID NO: 1106)

T K K K Y S S S V H D P N G E Y M F M R A V N T A K K S R L T D V T L (SEQ ID NO: 1106)

Внутриклеточный домен ICOS (нуклеотидная последовательность) (SEQ ID NO: 1107)

ACAAAAAAGAAGTATTCATCCAGTGTGCACGACCCTAACGGTGAATACATGTTCATGAGAGCAGTGAACACAGCCAAAAAATCCAGACTCACAGATGTGACCCTA (SEQ ID NO: 1107)

Домен CD3 дзета (аминокислотная последовательность) (SEQ ID NO: 9)

RVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR

CD3 дзета (последовательность нуклеиновой кислоты) (SEQ ID NO: 20)

AGAGTGAAGTTCAGCAGGAGCGCAGACGCCCCCGCGTACAAGCAGGGCCAGAACCAGCTCTATAACGAGCTCAATCTAGGACGAAGAGAGGAGTACGATGTTTTGGACAAGAGACGTGGCCGGGACCCTGAGATGGGGGGAAAGCCGAGAAGGAAGAACCCTCAGGAAGGCCTGTACAATGAACTGCAGAAAGATAAGATGGCGGAGGCCTACAGTGAGATTGGGATGAAAGGCGAGCGCCGGAGGGGCAAGGGGCACGATGGCCTTTACCAGGGTCTCAGTACAGCCACCAAGGACACCTACGACGCCCTTCACATGCAGGCCCTGCCCCCTCGC

Домен CD3 дзета (аминокислотная последовательность, референсная последовательность NCBI NM_000734.3) (SEQ ID NO: 10)

RVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR

CD3 дзета (последовательность нуклеиновой кислоты, референсная последовательность NCBI NM_000734.3), (SEQ ID NO: 21)

agagtgaagttcagcaggagcgcagacgcccccgcgtaccagcagggccag

aaccagctctataacgagctcaatctaggacgaagagaggagtacgatgttt

tggacaagagacgtggccgggaccctgagatggggggaaagccgagaagga

agaaccctcaggaaggcctgtacaatgaactgcagaaagataagatggcgg

aggcctacagtgagattgggatgaaaggcgagcgccggaggggcaaggggc

acgatggcctttaccagggtctcagtacagccaccaaggacacctacgacgc

ccttcacatgcaggccctgccccctcgc

Шарнирная область IgG4 (аминокислотная последовательность) (SEQ ID NO: 36)

ESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGKM

Шарнирная область IgG4 (нуклеотидная последовательность) (SEQ ID NO: 37)

GAGAGCAAGTACGGCCCTCCCTGCCCCCCTTGCCCTGCCCCCGAGTTCCTGGGCGGACCCAGCGTGTTCCTGTTCCCCCCCAAGCCCAAGGACACCCTGATGATCAGCCGGACCCCCGAGGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCAGGAGGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCCCGGGAGGAGCAGTTCAATAGCACCTACCGGGTGGTGTCCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAATACAAGTGTAAGGTGTCCAACAAGGGCCTGCCCAGCAGCATCGAGAAAACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCTCGGGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCCAAGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGCCTGGTGAAGGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCTGTGCTGGACAGCGACGGCAGCTTCTTCCTGTACAGCCGGCTGACCGTGGACAAGAGCCGGTGGCAGGAGGGCAACGTCTTTAGCTGCTCCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAACCACTACACCCAGAAGAGCCTGAGCCTGTCCCTGGGCAAGATG

В вариантах осуществления scFv-фрагменты CAR клонируют в лентивирусный вектор для получения полноразмерной конструкции CAR в одной кодирующей рамке считывания и с использованием промотора, например, промотора EF1 альфа, для экспрессии (SEQ ID NO: 11).

Промотор EF1 альфа

CGTGAGGCTCCGGTGCCCGTCAGTGGGCAGAGCGCACATCGCCCACAGTCCCCGAGAAGTTGGGGGGAGGGGTCGGCAATTGAACCGGTGCCTAGAGAAGGTGGCGCGGGGTAAACTGGGAAAGTGATGTCGTGTACTGGCTCCGCCTTTTTCCCGAGGGTGGGGGAGAACCGTATATAAGTGCAGTAGTCGCCGTGAACGTTCTTTTTCGCAACGGGTTTGCCGCCAGAACACAGGTAAGTGCCGTGTGTGGTTCCCGCGGGCCTGGCCTCTTTACGGGTTATGGCCCTTGCGTGCCTTGAATTACTTCCACCTGGCTGCAGTACGTGATTCTTGATCCCGAGCTTCGGGTTGGAAGTGGGTGGGAGAGTTCGAGGCCTTGCGCTTAAGGAGCCCCTTCGCCTCGTGCTTGAGTTGAGGCCTGGCCTGGGCGCTGGGGCCGCCGCGTGCGAATCTGGTGGCACCTTCGCGCCTGTCTCGCTGCTTTCGATAAGTCTCTAGCCATTTAAAATTTTTGATGACCTGCTGCGACGCTTTTTTTCTGGCAAGATAGTCTTGTAAATGCGGGCCAAGATCTGCACACTGGTATTTCGGTTTTTGGGGCCGCGGGCGGCGACGGGGCCCGTGCGTCCCAGCGCACATGTTCGGCGAGGCGGGGCCTGCGAGCGCGGCCACCGAGAATCGGACGGGGGTAGTCTCAAGCTGGCCGGCCTGCTCTGGTGCCTGGCCTCGCGCCGCCGTGTATCGCCCCGCCCTGGGCGGCAAGGCTGGCCCGGTCGGCACCAGTTGCGTGAGCGGAAAGATGGCCGCTTCCCGGCCCTGCTGCAGGGAGCTCAAAATGGAGGACGCGGCGCTCGGGAGAGCGGGCGGGTGAGTCACCCACACAAAGGAAAAGGGCCTTTCCGTCCTCAGCCGTCGCTTCATGTGACTCCACGGAGTACCGGGCGCCGTCCAGGCACCTCGATTAGTTCTCGAGCTTTTGGAGTACGTCGTCTTTAGGTTGGGGGGAGGGGTTTTATGCGATGGAGTTTCCCCACACTGAGTGGGTGGAGACTGAAGTTAGGCCAGCTTGGCACTTGATGTAATTCTCCTTGGAATTTGCCCTTTTTGAGTTTGGATCTTGGTTCATTCTCAAGCCTCAGACAGTGGTTCAAAGTTTTTTTCTTCCATTTCAGGTGTCGTGA (SEQ ID NO: 11).

Gly/Ser (SEQ ID NO: 25)

GGGGS

Gly/Ser (SEQ ID NO: 26): Эта последовательность может включать 1-6 повторов "Gly Gly Gly Gly Ser"

GGGGSGGGGS GGGGSGGGGS GGGGSGGGGS

Gly/Ser (SEQ ID NO: 27)

GGGGSGGGGS GGGGSGGGGS

Gly/Ser (SEQ ID NO: 28)

GGGGSGGGGS GGGGS

Gly/Ser (SEQ ID NO: 29)

GGGS

ПолиA: (A)₅₀₀₀ (SEQ ID NO: 30)

ПолиA: (T)₁₀₀ (SEQ ID NO: 31)

ПолиA: (T)₅₀₀₀ (SEQ ID NO: 32)

ПолиA: (A)₅₀₀₀ (SEQ ID NO: 33)

ПолиA: (A)₄₀₀ (SEQ ID NO: 34)

ПолиA: (A)₂₀₀₀ (SEQ ID NO: 35)

Gly/Ser (SEQ ID NO: 38): Эта последовательность может включать 1-10 повторов "Gly Gly Gly Ser"

GGGSGGGSGG GSGGGSGGGS GGGSGGGSGG GSGGGSGGGS

Аминокислотные последовательности и последовательности нуклеиновой кислоты примеров scFV-доменов против BCMA и примеров молекул CAR BCMA представлены в таблице 1.

В таблице 2 ниже представлены обозначения конструкций BCMA CAR в отношении ID ДНК, также представленных в таблице 1.

Таблица 2: ID конструкций CAR

Название	Novartis ID	DNA2.0 ID
BCMA-1	ER95-03VA	139100
BCMA-2	UR96-08PA	139101
BCMA-3	KR98-03KA	139102
BCMA-4	JF32-78IB	139103
BCMA-5	AR99-08FA	139104
BCMA-6	ZF34-73CB	139105
BCMA-7	QR91-12ZA	139106
BCMA-8	GR92-17UA	139107
BCMA-9	OG62-93QB	139108
BCMA-10	EG63-98LB	139109
BCMA-11	UG65-93FB	139110
BCMA-12	HU13-58ZB	139111
BCMA-13	KG66-98AB	139112
BCMA-14	HJ64-62PB	139113
BCMA-15	PY43-48LB	139114

Таблица 1. Аминокислотные последовательности и последовательности нуклеиновой кислоты примеров scFV-доменов против BCMA и молекул CAR BCMA

Также представлены аминокислотные последовательности вариабельной области тяжелой цепи и вариабельной области легкой цепи для каждого scFv. В таблице 2 приведены названия и ID конструкций CAR для нескольких CAR BCMA.

Название/Описание	SEQ ID NO:	Последовательность
139109
Аминокислотная последовательность 139109 ScFV-домен	49	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFALSNHGMSWVRRAPGKGLEWVSGIVYSGSTYYAASVKGRFTISRDNSRNTLYLQMNSLRPEDTAIYYCSAHGGESDVWGQGTTVTVSSASGGGGSGGRASGGGGSDIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTPYTFGQGTKVEIK
Последовательность нуклеиновой кислоты 139109 ScFV-домен	64	GAAGTGCAATTGGTGGAATCAGGGGGAGGACTTGTGCAGCCTGGAGGATCGCTGAGACTGTCATGTGCCGTGTCCGGCTTTGCCCTGTCCAACCACGGGATGTCCTGGGTCCGCCGCGCGCCTGGAAAGGGCCTCGAATGGGTGTCGGGTATTGTGTACAGCGGTAGCACCTACTATGCCGCATCCGTGAAGGGGAGATTCACCATCAGCCGGGACAACTCCAGGAACACTCTGTACCTCCAAATGAATTCGCTGAGGCCAGAGGACACTGCCATCTACTACTGCTCCGCGCATGGCGGAGAGTCCGACGTCTGGGGACAGGGGACCACCGTGACCGTGTCTAGCGCGTCCGGCGGAGGCGGCAGCGGGGGTCGGGCATCAGGGGGCGGCGGATCGGACATCCAGCTCACCCAGTCCCCGAGCTCGCTGTCCGCCTCCGTGGGAGATCGGGTCACCATCACGTGCCGCGCCAGCCAGTCGATTTCCTCCTACCTGAACTGGTACCAACAGAAGCCCGGAAAAGCCCCGAAGCTTCTCATCTACGCCGCCTCGAGCCTGCAGTCAGGAGTGCCCTCACGGTTCTCCGGCTCCGGTTCCGGTACTGATTTCACCCTGACCATTTCCTCCCTGCAACCGGAGGACTTCGCTACTTACTACTGCCAGCAGTCGTACTCCACCCCCTACACTTTCGGACAAGGCACCAAGGTCGAAATCAAG
Аминокислотная последовательность 139109 VH	79	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFALSNHGMSWVRRAPGKGLEWVSGIVYSGSTYYAASVKGRFTISRDNSRNTLYLQMNSLRPEDTAIYYCSAHGGESDVWGQGTTVTVSS
Аминокислотная последовательность 139109 VL	94	DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTPYTFGQGTKVEIK
Аминокислотная последовательность 139109 Полный CAR	109	MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFALSNHGMSWVRRAPGKGLEWVSGIVYSGSTYYAASVKGRFTISRDNSRNTLYLQMNSLRPEDTAIYYCSAHGGESDVWGQGTTVTVSSASGGGGSGGRASGGGGSDIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTPYTFGQGTKVEIKTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
Последовательность нуклеиновой кислоты 139109 Полный CAR	124	ATGGCCCTCCCTGTCACCGCCCTGCTGCTTCCGCTGGCTCTTCTGCTCCACGCCGCTCGGCCCGAAGTGCAATTGGTGGAATCAGGGGGAGGACTTGTGCAGCCTGGAGGATCGCTGAGACTGTCATGTGCCGTGTCCGGCTTTGCCCTGTCCAACCACGGGATGTCCTGGGTCCGCCGCGCGCCTGGAAAGGGCCTCGAATGGGTGTCGGGTATTGTGTACAGCGGTAGCACCTACTATGCCGCATCCGTGAAGGGGAGATTCACCATCAGCCGGGACAACTCCAGGAACACTCTGTACCTCCAAATGAATTCGCTGAGGCCAGAGGACACTGCCATCTACTACTGCTCCGCGCATGGCGGAGAGTCCGACGTCTGGGGACAGGGGACCACCGTGACCGTGTCTAGCGCGTCCGGCGGAGGCGGCAGCGGGGGTCGGGCATCAGGGGGCGGCGGATCGGACATCCAGCTCACCCAGTCCCCGAGCTCGCTGTCCGCCTCCGTGGGAGATCGGGTCACCATCACGTGCCGCGCCAGCCAGTCGATTTCCTCCTACCTGAACTGGTACCAACAGAAGCCCGGAAAAGCCCCGAAGCTTCTCATCTACGCCGCCTCGAGCCTGCAGTCAGGAGTGCCCTCACGGTTCTCCGGCTCCGGTTCCGGTACTGATTTCACCCTGACCATTTCCTCCCTGCAACCGGAGGACTTCGCTACTTACTACTGCCAGCAGTCGTACTCCACCCCCTACACTTTCGGACAAGGCACCAAGGTCGAAATCAAGACCACTACCCCAGCACCGAGGCCACCCACCCCGGCTCCTACCATCGCCTCCCAGCCTCTGTCCCTGCGTCCGGAGGCATGTAGACCCGCAGCTGGTGGGGCCGTGCATACCCGGGGTCTTGACTTCGCCTGCGATATCTACATTTGGGCCCCTCTGGCTGGTACTTGCGGGGTCCTGCTGCTTTCACTCGTGATCACTCTTTACTGTAAGCGCGGTCGGAAGAAGCTGCTGTACATCTTTAAGCAACCCTTCATGAGGCCTGTGCAGACTACTCAAGAGGAGGACGGCTGTTCATGCCGGTTCCCAGAGGAGGAGGAAGGCGGCTGCGAACTGCGCGTGAAATTCAGCCGCAGCGCAGATGCTCCAGCCTACAAGCAGGGGCAGAACCAGCTCTACAACGAACTCAATCTTGGTCGGAGAGAGGAGTACGACGTGCTGGACAAGCGGAGAGGACGGGACCCAGAAATGGGCGGGAAGCCGCGCAGAAAGAATCCCCAAGAGGGCCTGTACAACGAGCTCCAAAAGGATAAGATGGCAGAAGCCTATAGCGAGATTGGTATGAAAGGGGAACGCAGAAGAGGCAAAGGCCACGACGGACTGTACCAGGGACTCAGCACCGCCACCAAGGACACCTATGACGCTCTTCACATGCAGGCCCTGCCGCCTCGG
139103
Аминокислотная последовательность 139103 ScFV-домен	39	QVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFSNYAMSWVRQAPGKGLGWVSGISRSGENTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRDEDTAVYYCARSPAHYYGGMDVWGQGTTVTVSSASGGGGSGGRASGGGGSDIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSISSSFLAWYQQKPGQAPRLLIYGASRRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDSAVYYCQQYHSSPSWTFGQGTKLEIK
Последовательность нуклеиновой кислоты 139103 ScFV-домен	54	CAAGTGCAACTCGTGGAATCTGGTGGAGGACTCGTGCAACCCGGAAGATCGCTTAGACTGTCGTGTGCCGCCAGCGGGTTCACTTTCTCGAACTACGCGATGTCCTGGGTCCGCCAGGCACCCGGAAAGGGACTCGGTTGGGTGTCCGGCATTTCCCGGTCCGGCGAAAATACCTACTACGCCGACTCCGTGAAGGGCCGCTTCACCATCTCAAGGGACAACAGCAAAAACACCCTGTACTTGCAAATGAACTCCCTGCGGGATGAAGATACAGCCGTGTACTATTGCGCCCGGTCGCCTGCCCATTACTACGGCGGAATGGACGTCTGGGGACAGGGAACCACTGTGACTGTCAGCAGCGCGTCGGGTGGCGGCGGCTCAGGGGGTCGGGCCTCCGGGGGGGGAGGGTCCGACATCGTGCTGACCCAGTCCCCGGGAACCCTGAGCCTGAGCCCGGGAGAGCGCGCGACCCTGTCATGCCGGGCATCCCAGAGCATTAGCTCCTCCTTTCTCGCCTGGTATCAGCAGAAGCCCGGACAGGCCCCGAGGCTGCTGATCTACGGCGCTAGCAGAAGGGCTACCGGAATCCCAGACCGGTTCTCCGGCTCCGGTTCCGGGACCGATTTCACCCTTACTATCTCGCGCCTGGAACCTGAGGACTCCGCCGTCTACTACTGCCAGCAGTACCACTCATCCCCGTCGTGGACGTTCGGACAGGGCACCAAGCTGGAGATTAAG
Аминокислотная последовательность 139103 VH	69	QVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFSNYAMSWVRQAPGKGLGWVSGISRSGENTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRDEDTAVYYCARSPAHYYGGMDVWGQGTTVTVSS
Аминокислотная последовательность 139103 VL	84	DIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSISSSFLAWYQQKPGQAPRLLIYGASRRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDSAVYYCQQYHSSPSWTFGQGTKLEIK
Аминокислотная последовательность 139103 Полный CAR	99	MALPVTALLLPLALLLHAARPQVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFSNYAMSWVRQAPGKGLGWVSGISRSGENTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRDEDTAVYYCARSPAHYYGGMDVWGQGTTVTVSSASGGGGSGGRASGGGGSDIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSISSSFLAWYQQKPGQAPRLLIYGASRRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDSAVYYCQQYHSSPSWTFGQGTKLEIKTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
Последовательность нуклеиновой кислоты 139103 Полный CAR	114	ATGGCCCTCCCTGTCACCGCCCTGCTGCTTCCGCTGGCTCTTCTGCTCCACGCCGCTCGGCCCCAAGTGCAACTCGTGGAATCTGGTGGAGGACTCGTGCAACCCGGAAGATCGCTTAGACTGTCGTGTGCCGCCAGCGGGTTCACTTTCTCGAACTACGCGATGTCCTGGGTCCGCCAGGCACCCGGAAAGGGACTCGGTTGGGTGTCCGGCATTTCCCGGTCCGGCGAAAATACCTACTACGCCGACTCCGTGAAGGGCCGCTTCACCATCTCAAGGGACAACAGCAAAAACACCCTGTACTTGCAAATGAACTCCCTGCGGGATGAAGATACAGCCGTGTACTATTGCGCCCGGTCGCCTGCCCATTACTACGGCGGAATGGACGTCTGGGGACAGGGAACCACTGTGACTGTCAGCAGCGCGTCGGGTGGCGGCGGCTCAGGGGGTCGGGCCTCCGGGGGGGGAGGGTCCGACATCGTGCTGACCCAGTCCCCGGGAACCCTGAGCCTGAGCCCGGGAGAGCGCGCGACCCTGTCATGCCGGGCATCCCAGAGCATTAGCTCCTCCTTTCTCGCCTGGTATCAGCAGAAGCCCGGACAGGCCCCGAGGCTGCTGATCTACGGCGCTAGCAGAAGGGCTACCGGAATCCCAGACCGGTTCTCCGGCTCCGGTTCCGGGACCGATTTCACCCTTACTATCTCGCGCCTGGAACCTGAGGACTCCGCCGTCTACTACTGCCAGCAGTACCACTCATCCCCGTCGTGGACGTTCGGACAGGGCACCAAGCTGGAGATTAAGACCACTACCCCAGCACCGAGGCCACCCACCCCGGCTCCTACCATCGCCTCCCAGCCTCTGTCCCTGCGTCCGGAGGCATGTAGACCCGCAGCTGGTGGGGCCGTGCATACCCGGGGTCTTGACTTCGCCTGCGATATCTACATTTGGGCCCCTCTGGCTGGTACTTGCGGGGTCCTGCTGCTTTCACTCGTGATCACTCTTTACTGTAAGCGCGGTCGGAAGAAGCTGCTGTACATCTTTAAGCAACCCTTCATGAGGCCTGTGCAGACTACTCAAGAGGAGGACGGCTGTTCATGCCGGTTCCCAGAGGAGGAGGAAGGCGGCTGCGAACTGCGCGTGAAATTCAGCCGCAGCGCAGATGCTCCAGCCTACAAGCAGGGGCAGAACCAGCTCTACAACGAACTCAATCTTGGTCGGAGAGAGGAGTACGACGTGCTGGACAAGCGGAGAGGACGGGACCCAGAAATGGGCGGGAAGCCGCGCAGAAAGAATCCCCAAGAGGGCCTGTACAACGAGCTCCAAAAGGATAAGATGGCAGAAGCCTATAGCGAGATTGGTATGAAAGGGGAACGCAGAAGAGGCAAAGGCCACGACGGACTGTACCAGGGACTCAGCACCGCCACCAAGGACACCTATGACGCTCTTCACATGCAGGCCCTGCCGCCTCGG
139105
Аминокислотная последовательность 139105 ScFV-домен	40	QVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGISWNSGSIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCSVHSFLAYWGQGTLVTVSSASGGGGSGGRASGGGGSDIVMTQTPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPYTFGQGTKVEIK
Последовательность нуклеиновой кислоты 139105 ScFV-домен	55	CAAGTGCAACTCGTCGAATCCGGTGGAGGTCTGGTCCAACCTGGTAGAAGCCTGAGACTGTCGTGTGCGGCCAGCGGATTCACCTTTGATGACTATGCTATGCACTGGGTGCGGCAGGCCCCAGGAAAGGGCCTGGAATGGGTGTCGGGAATTAGCTGGAACTCCGGGTCCATTGGCTACGCCGACTCCGTGAAGGGCCGCTTCACCATCTCCCGCGACAACGCAAAGAACTCCCTGTACTTGCAAATGAACTCGCTCAGGGCTGAGGATACCGCGCTGTACTACTGCTCCGTGCATTCCTTCCTGGCCTACTGGGGACAGGGAACTCTGGTCACCGTGTCGAGCGCCTCCGGCGGCGGGGGCTCGGGTGGACGGGCCTCGGGCGGAGGGGGGTCCGACATCGTGATGACCCAGACCCCGCTGAGCTTGCCCGTGACTCCCGGAGAGCCTGCATCCATCTCCTGCCGGTCATCCCAGTCCCTTCTCCACTCCAACGGATACAACTACCTCGACTGGTACCTCCAGAAGCCGGGACAGAGCCCTCAGCTTCTGATCTACCTGGGGTCAAATAGAGCCTCAGGAGTGCCGGATCGGTTCAGCGGATCTGGTTCGGGAACTGATTTCACTCTGAAGATTTCCCGCGTGGAAGCCGAGGACGTGGGCGTCTACTACTGTATGCAGGCGCTGCAGACCCCCTATACCTTCGGCCAAGGGACGAAAGTGGAGATCAAG
Аминокислотная последовательность 139105 VH	70	QVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGISWNSGSIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCSVHSFLAYWGQGTLVTVSS
Аминокислотная последовательность 139105 VL	85	DIVMTQTPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPYTFGQGTKVEIK
Аминокислотная последовательность 139105 Полный CAR	100	MALPVTALLLPLALLLHAARPQVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGISWNSGSIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCSVHSFLAYWGQGTLVTVSSASGGGGSGGRASGGGGSDIVMTQTPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPYTFGQGTKVEIKTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
Последовательность нуклеиновой кислоты 139105 Полный CAR	115	ATGGCCCTCCCTGTCACCGCCCTGCTGCTTCCGCTGGCTCTTCTGCTCCACGCCGCTCGGCCCCAAGTGCAACTCGTCGAATCCGGTGGAGGTCTGGTCCAACCTGGTAGAAGCCTGAGACTGTCGTGTGCGGCCAGCGGATTCACCTTTGATGACTATGCTATGCACTGGGTGCGGCAGGCCCCAGGAAAGGGCCTGGAATGGGTGTCGGGAATTAGCTGGAACTCCGGGTCCATTGGCTACGCCGACTCCGTGAAGGGCCGCTTCACCATCTCCCGCGACAACGCAAAGAACTCCCTGTACTTGCAAATGAACTCGCTCAGGGCTGAGGATACCGCGCTGTACTACTGCTCCGTGCATTCCTTCCTGGCCTACTGGGGACAGGGAACTCTGGTCACCGTGTCGAGCGCCTCCGGCGGCGGGGGCTCGGGTGGACGGGCCTCGGGCGGAGGGGGGTCCGACATCGTGATGACCCAGACCCCGCTGAGCTTGCCCGTGACTCCCGGAGAGCCTGCATCCATCTCCTGCCGGTCATCCCAGTCCCTTCTCCACTCCAACGGATACAACTACCTCGACTGGTACCTCCAGAAGCCGGGACAGAGCCCTCAGCTTCTGATCTACCTGGGGTCAAATAGAGCCTCAGGAGTGCCGGATCGGTTCAGCGGATCTGGTTCGGGAACTGATTTCACTCTGAAGATTTCCCGCGTGGAAGCCGAGGACGTGGGCGTCTACTACTGTATGCAGGCGCTGCAGACCCCCTATACCTTCGGCCAAGGGACGAAAGTGGAGATCAAGACCACTACCCCAGCACCGAGGCCACCCACCCCGGCTCCTACCATCGCCTCCCAGCCTCTGTCCCTGCGTCCGGAGGCATGTAGACCCGCAGCTGGTGGGGCCGTGCATACCCGGGGTCTTGACTTCGCCTGCGATATCTACATTTGGGCCCCTCTGGCTGGTACTTGCGGGGTCCTGCTGCTTTCACTCGTGATCACTCTTTACTGTAAGCGCGGTCGGAAGAAGCTGCTGTACATCTTTAAGCAACCCTTCATGAGGCCTGTGCAGACTACTCAAGAGGAGGACGGCTGTTCATGCCGGTTCCCAGAGGAGGAGGAAGGCGGCTGCGAACTGCGCGTGAAATTCAGCCGCAGCGCAGATGCTCCAGCCTACAAGCAGGGGCAGAACCAGCTCTACAACGAACTCAATCTTGGTCGGAGAGAGGAGTACGACGTGCTGGACAAGCGGAGAGGACGGGACCCAGAAATGGGCGGGAAGCCGCGCAGAAAGAATCCCCAAGAGGGCCTGTACAACGAGCTCCAAAAGGATAAGATGGCAGAAGCCTATAGCGAGATTGGTATGAAAGGGGAACGCAGAAGAGGCAAAGGCCACGACGGACTGTACCAGGGACTCAGCACCGCCACCAAGGACACCTATGACGCTCTTCACATGCAGGCCCTGCCGCCTCGG
139111
Аминокислотная последовательность 139111 ScFV-домен	41	EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFALSNHGMSWVRRAPGKGLEWVSGIVYSGSTYYAASVKGRFTISRDNSRNTLYLQMNSLRPEDTAIYYCSAHGGESDVWGQGTTVTVSSASGGGGSGGRASGGGGSDIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCKSSQSLLRNDGKTPLYWYLQKAGQPPQLLIYEVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGAYYCMQNIQFPSFGGGTKLEIK
Последовательности нуклеиновой кислоты 139111 ScFV-домен	56	GAAGTGCAATTGTTGGAATCTGGAGGAGGACTTGTGCAGCCTGGAGGATCACTGAGACTTTCGTGTGCGGTGTCAGGCTTCGCCCTGAGCAACCACGGCATGAGCTGGGTGCGGAGAGCCCCGGGGAAGGGTCTGGAATGGGTGTCCGGGATCGTCTACTCCGGTTCAACTTACTACGCCGCAAGCGTGAAGGGTCGCTTCACCATTTCCCGCGATAACTCCCGGAACACCCTGTACCTCCAAATGAACTCCCTGCGGCCCGAGGACACCGCCATCTACTACTGTTCCGCGCATGGAGGAGAGTCCGATGTCTGGGGACAGGGCACTACCGTGACCGTGTCGAGCGCCTCGGGGGGAGGAGGCTCCGGCGGTCGCGCCTCCGGGGGGGGTGGCAGCGACATTGTGATGACGCAGACTCCACTCTCGCTGTCCGTGACCCCGGGACAGCCCGCGTCCATCTCGTGCAAGAGCTCCCAGAGCCTGCTGAGGAACGACGGAAAGACTCCTCTGTATTGGTACCTCCAGAAGGCTGGACAGCCCCCGCAACTGCTCATCTACGAAGTGTCAAATCGCTTCTCCGGGGTGCCGGATCGGTTTTCCGGCTCGGGATCGGGCACCGACTTCACCCTGAAAATCTCCAGGGTCGAGGCCGAGGACGTGGGAGCCTACTACTGCATGCAAAACATCCAGTTCCCTTCCTTCGGCGGCGGCACAAAGCTGGAGATTAAG
Аминокислотная последовательность 139111 VH	71	EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFALSNHGMSWVRRAPGKGLEWVSGIVYSGSTYYAASVKGRFTISRDNSRNTLYLQMNSLRPEDTAIYYCSAHGGESDVWGQGTTVTVSS
Аминокислотная последовательность 139111 VL	86	DIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCKSSQSLLRNDGKTPLYWYLQKAGQPPQLLIYEVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGAYYCMQNIQFPSFGGGTKLEIK
Аминокислотная последовательность 139111 Полный CAR	101	MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFALSNHGMSWVRRAPGKGLEWVSGIVYSGSTYYAASVKGRFTISRDNSRNTLYLQMNSLRPEDTAIYYCSAHGGESDVWGQGTTVTVSSASGGGGSGGRASGGGGSDIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCKSSQSLLRNDGKTPLYWYLQKAGQPPQLLIYEVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGAYYCMQNIQFPSFGGGTKLEIKTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
Последовательность нуклеиновой кислоты 139111 Полный CAR	116	ATGGCCCTCCCTGTCACCGCCCTGCTGCTTCCGCTGGCTCTTCTGCTCCACGCCGCTCGGCCCGAAGTGCAATTGTTGGAATCTGGAGGAGGACTTGTGCAGCCTGGAGGATCACTGAGACTTTCGTGTGCGGTGTCAGGCTTCGCCCTGAGCAACCACGGCATGAGCTGGGTGCGGAGAGCCCCGGGGAAGGGTCTGGAATGGGTGTCCGGGATCGTCTACTCCGGTTCAACTTACTACGCCGCAAGCGTGAAGGGTCGCTTCACCATTTCCCGCGATAACTCCCGGAACACCCTGTACCTCCAAATGAACTCCCTGCGGCCCGAGGACACCGCCATCTACTACTGTTCCGCGCATGGAGGAGAGTCCGATGTCTGGGGACAGGGCACTACCGTGACCGTGTCGAGCGCCTCGGGGGGAGGAGGCTCCGGCGGTCGCGCCTCCGGGGGGGGTGGCAGCGACATTGTGATGACGCAGACTCCACTCTCGCTGTCCGTGACCCCGGGACAGCCCGCGTCCATCTCGTGCAAGAGCTCCCAGAGCCTGCTGAGGAACGACGGAAAGACTCCTCTGTATTGGTACCTCCAGAAGGCTGGACAGCCCCCGCAACTGCTCATCTACGAAGTGTCAAATCGCTTCTCCGGGGTGCCGGATCGGTTTTCCGGCTCGGGATCGGGCACCGACTTCACCCTGAAAATCTCCAGGGTCGAGGCCGAGGACGTGGGAGCCTACTACTGCATGCAAAACATCCAGTTCCCTTCCTTCGGCGGCGGCACAAAGCTGGAGATTAAGACCACTACCCCAGCACCGAGGCCACCCACCCCGGCTCCTACCATCGCCTCCCAGCCTCTGTCCCTGCGTCCGGAGGCATGTAGACCCGCAGCTGGTGGGGCCGTGCATACCCGGGGTCTTGACTTCGCCTGCGATATCTACATTTGGGCCCCTCTGGCTGGTACTTGCGGGGTCCTGCTGCTTTCACTCGTGATCACTCTTTACTGTAAGCGCGGTCGGAAGAAGCTGCTGTACATCTTTAAGCAACCCTTCATGAGGCCTGTGCAGACTACTCAAGAGGAGGACGGCTGTTCATGCCGGTTCCCAGAGGAGGAGGAAGGCGGCTGCGAACTGCGCGTGAAATTCAGCCGCAGCGCAGATGCTCCAGCCTACAAGCAGGGGCAGAACCAGCTCTACAACGAACTCAATCTTGGTCGGAGAGAGGAGTACGACGTGCTGGACAAGCGGAGAGGACGGGACCCAGAAATGGGCGGGAAGCCGCGCAGAAAGAATCCCCAAGAGGGCCTGTACAACGAGCTCCAAAAGGATAAGATGGCAGAAGCCTATAGCGAGATTGGTATGAAAGGGGAACGCAGAAGAGGCAAAGGCCACGACGGACTGTACCAGGGACTCAGCACCGCCACCAAGGACACCTATGACGCTCTTCACATGCAGGCCCTGCCGCCTCGG
139100
Аминокислотная последовательность 139100 ScFV-домен	42	QVQLVQSGAEVRKTGASVKVSCKASGYIFDNFGINWVRQAPGQGLEWMGWINPKNNNTNYAQKFQGRVTITADESTNTAYMEVSSLRSEDTAVYYCARGPYYYQSYMDVWGQGTMVTVSSASGGGGSGGRASGGGGSDIVMTQTPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLNWYLQKPGQSPQLLIYLGSKRASGVPDRFSGSGSGTDFTLHITRVGAEDVGVYYCMQALQTPYTFGQGTKLEIK
Последовательность нуклеиновой кислоты 139100 ScFV-домен	57	CAAGTCCAACTCGTCCAGTCCGGCGCAGAAGTCAGAAAAACCGGTGCTAGCGTGAAAGTGTCCTGCAAGGCCTCCGGCTACATTTTCGATAACTTCGGAATCAACTGGGTCAGACAGGCCCCGGGCCAGGGGCTGGAATGGATGGGATGGATCAACCCCAAGAACAACAACACCAACTACGCACAGAAGTTCCAGGGCCGCGTGACTATCACCGCCGATGAATCGACCAATACCGCCTACATGGAGGTGTCCTCCCTGCGGTCGGAGGACACTGCCGTGTATTACTGCGCGAGGGGCCCATACTACTACCAAAGCTACATGGACGTCTGGGGACAGGGAACCATGGTGACCGTGTCATCCGCCTCCGGTGGTGGAGGCTCCGGGGGGCGGGCTTCAGGAGGCGGAGGAAGCGATATTGTGATGACCCAGACTCCGCTTAGCCTGCCCGTGACTCCTGGAGAACCGGCCTCCATTTCCTGCCGGTCCTCGCAATCACTCCTGCATTCCAACGGTTACAACTACCTGAATTGGTACCTCCAGAAGCCTGGCCAGTCGCCCCAGTTGCTGATCTATCTGGGCTCGAAGCGCGCCTCCGGGGTGCCTGACCGGTTTAGCGGATCTGGGAGCGGCACGGACTTCACTCTCCACATCACCCGCGTGGGAGCGGAGGACGTGGGAGTGTACTACTGTATGCAGGCGCTGCAGACTCCGTACACATTCGGACAGGGCACCAAGCTGGAGATCAAG
Аминокислотная последовательность139100 VH	72	QVQLVQSGAEVRKTGASVKVSCKASGYIFDNFGINWVRQAPGQGLEWMGWINPKNNNTNYAQKFQGRVTITADESTNTAYMEVSSLRSEDTAVYYCARGPYYYQSYMDVWGQGTMVTVSS
Аминокислотная последовательность139100 VL	87	DIVMTQTPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLNWYLQKPGQSPQLLIYLGSKRASGVPDRFSGSGSGTDFTLHITRVGAEDVGVYYCMQALQTPYTFGQGTKLEIK
Аминокислотная последовательность139100 Полный CAR	102	MALPVTALLLPLALLLHAARPQVQLVQSGAEVRKTGASVKVSCKASGYIFDNFGINWVRQAPGQGLEWMGWINPKNNNTNYAQKFQGRVTITADESTNTAYMEVSSLRSEDTAVYYCARGPYYYQSYMDVWGQGTMVTVSSASGGGGSGGRASGGGGSDIVMTQTPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLNWYLQKPGQSPQLLIYLGSKRASGVPDRFSGSGSGTDFTLHITRVGAEDVGVYYCMQALQTPYTFGQGTKLEIKTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
Последовательность нуклеиновой кислоты 139100 Полный CAR	117	ATGGCCCTCCCTGTCACCGCCCTGCTGCTTCCGCTGGCTCTTCTGCTCCACGCCGCTCGGCCCCAAGTCCAACTCGTCCAGTCCGGCGCAGAAGTCAGAAAAACCGGTGCTAGCGTGAAAGTGTCCTGCAAGGCCTCCGGCTACATTTTCGATAACTTCGGAATCAACTGGGTCAGACAGGCCCCGGGCCAGGGGCTGGAATGGATGGGATGGATCAACCCCAAGAACAACAACACCAACTACGCACAGAAGTTCCAGGGCCGCGTGACTATCACCGCCGATGAATCGACCAATACCGCCTACATGGAGGTGTCCTCCCTGCGGTCGGAGGACACTGCCGTGTATTACTGCGCGAGGGGCCCATACTACTACCAAAGCTACATGGACGTCTGGGGACAGGGAACCATGGTGACCGTGTCATCCGCCTCCGGTGGTGGAGGCTCCGGGGGGCGGGCTTCAGGAGGCGGAGGAAGCGATATTGTGATGACCCAGACTCCGCTTAGCCTGCCCGTGACTCCTGGAGAACCGGCCTCCATTTCCTGCCGGTCCTCGCAATCACTCCTGCATTCCAACGGTTACAACTACCTGAATTGGTACCTCCAGAAGCCTGGCCAGTCGCCCCAGTTGCTGATCTATCTGGGCTCGAAGCGCGCCTCCGGGGTGCCTGACCGGTTTAGCGGATCTGGGAGCGGCACGGACTTCACTCTCCACATCACCCGCGTGGGAGCGGAGGACGTGGGAGTGTACTACTGTATGCAGGCGCTGCAGACTCCGTACACATTCGGACAGGGCACCAAGCTGGAGATCAAGACCACTACCCCAGCACCGAGGCCACCCACCCCGGCTCCTACCATCGCCTCCCAGCCTCTGTCCCTGCGTCCGGAGGCATGTAGACCCGCAGCTGGTGGGGCCGTGCATACCCGGGGTCTTGACTTCGCCTGCGATATCTACATTTGGGCCCCTCTGGCTGGTACTTGCGGGGTCCTGCTGCTTTCACTCGTGATCACTCTTTACTGTAAGCGCGGTCGGAAGAAGCTGCTGTACATCTTTAAGCAACCCTTCATGAGGCCTGTGCAGACTACTCAAGAGGAGGACGGCTGTTCATGCCGGTTCCCAGAGGAGGAGGAAGGCGGCTGCGAACTGCGCGTGAAATTCAGCCGCAGCGCAGATGCTCCAGCCTACAAGCAGGGGCAGAACCAGCTCTACAACGAACTCAATCTTGGTCGGAGAGAGGAGTACGACGTGCTGGACAAGCGGAGAGGACGGGACCCAGAAATGGGCGGGAAGCCGCGCAGAAAGAATCCCCAAGAGGGCCTGTACAACGAGCTCCAAAAGGATAAGATGGCAGAAGCCTATAGCGAGATTGGTATGAAAGGGGAACGCAGAAGAGGCAAAGGCCACGACGGACTGTACCAGGGACTCAGCACCGCCACCAAGGACACCTATGACGCTCTTCACATGCAGGCCCTGCCGCCTCGG
139101
Аминокислотная последовательность 139101 ScFV-домен	43	QVQLQESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSDAMTWVRQAPGKGLEWVSVISGSGGTTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKLDSSGYYYARGPRYWGQGTLVTVSSASGGGGSGGRASGGGGSDIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYGASTLASGVPARFSGSGSGTHFTLTINSLQSEDSATYYCQQSYKRASFGQGTKVEIK
Последовательность нуклеиновой кислоты 139101 ScFV-домен	58	CAAGTGCAACTTCAAGAATCAGGCGGAGGACTCGTGCAGCCCGGAGGATCATTGCGGCTCTCGTGCGCCGCCTCGGGCTTCACCTTCTCGAGCGACGCCATGACCTGGGTCCGCCAGGCCCCGGGGAAGGGGCTGGAATGGGTGTCTGTGATTTCCGGCTCCGGGGGAACTACGTACTACGCCGATTCCGTGAAAGGTCGCTTCACTATCTCCCGGGACAACAGCAAGAACACCCTTTATCTGCAAATGAATTCCCTCCGCGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAAGCTGGACTCCTCGGGCTACTACTATGCCCGGGGTCCGAGATACTGGGGACAGGGAACCCTCGTGACCGTGTCCTCCGCGTCCGGCGGAGGAGGGTCGGGAGGGCGGGCCTCCGGCGGCGGCGGTTCGGACATCCAGCTGACCCAGTCCCCATCCTCACTGAGCGCAAGCGTGGGCGACAGAGTCACCATTACATGCAGGGCGTCCCAGAGCATCAGCTCCTACCTGAACTGGTACCAACAGAAGCCTGGAAAGGCTCCTAAGCTGTTGATCTACGGGGCTTCGACCCTGGCATCCGGGGTGCCCGCGAGGTTTAGCGGAAGCGGTAGCGGCACTCACTTCACTCTGACCATTAACAGCCTCCAGTCCGAGGATTCAGCCACTTACTACTGTCAGCAGTCCTACAAGCGGGCCAGCTTCGGACAGGGCACTAAGGTCGAGATCAAG
Аминокислотная последовательность139101 VH	73	QVQLQESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSDAMTWVRQAPGKGLEWVSVISGSGGTTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKLDSSGYYYARGPRYWGQGTLVTVSS
Аминокислотная последовательность139101 VL	88	DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYGASTLASGVPARFSGSGSGTHFTLTINSLQSEDSATYYCQQSYKRASFGQGTKVEIK
Аминокислотная последовательность139101 Полный CAR	103	MALPVTALLLPLALLLHAARPQVQLQESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSDAMTWVRQAPGKGLEWVSVISGSGGTTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKLDSSGYYYARGPRYWGQGTLVTVSSASGGGGSGGRASGGGGSDIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYGASTLASGVPARFSGSGSGTHFTLTINSLQSEDSATYYCQQSYKRASFGQGTKVEIKTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
Последовательность нуклеиновой кислоты 139101 Полный CAR	118	ATGGCCCTCCCTGTCACCGCCCTGCTGCTTCCGCTGGCTCTTCTGCTCCACGCCGCTCGGCCCCAAGTGCAACTTCAAGAATCAGGCGGAGGACTCGTGCAGCCCGGAGGATCATTGCGGCTCTCGTGCGCCGCCTCGGGCTTCACCTTCTCGAGCGACGCCATGACCTGGGTCCGCCAGGCCCCGGGGAAGGGGCTGGAATGGGTGTCTGTGATTTCCGGCTCCGGGGGAACTACGTACTACGCCGATTCCGTGAAAGGTCGCTTCACTATCTCCCGGGACAACAGCAAGAACACCCTTTATCTGCAAATGAATTCCCTCCGCGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAAGCTGGACTCCTCGGGCTACTACTATGCCCGGGGTCCGAGATACTGGGGACAGGGAACCCTCGTGACCGTGTCCTCCGCGTCCGGCGGAGGAGGGTCGGGAGGGCGGGCCTCCGGCGGCGGCGGTTCGGACATCCAGCTGACCCAGTCCCCATCCTCACTGAGCGCAAGCGTGGGCGACAGAGTCACCATTACATGCAGGGCGTCCCAGAGCATCAGCTCCTACCTGAACTGGTACCAACAGAAGCCTGGAAAGGCTCCTAAGCTGTTGATCTACGGGGCTTCGACCCTGGCATCCGGGGTGCCCGCGAGGTTTAGCGGAAGCGGTAGCGGCACTCACTTCACTCTGACCATTAACAGCCTCCAGTCCGAGGATTCAGCCACTTACTACTGTCAGCAGTCCTACAAGCGGGCCAGCTTCGGACAGGGCACTAAGGTCGAGATCAAGACCACTACCCCAGCACCGAGGCCACCCACCCCGGCTCCTACCATCGCCTCCCAGCCTCTGTCCCTGCGTCCGGAGGCATGTAGACCCGCAGCTGGTGGGGCCGTGCATACCCGGGGTCTTGACTTCGCCTGCGATATCTACATTTGGGCCCCTCTGGCTGGTACTTGCGGGGTCCTGCTGCTTTCACTCGTGATCACTCTTTACTGTAAGCGCGGTCGGAAGAAGCTGCTGTACATCTTTAAGCAACCCTTCATGAGGCCTGTGCAGACTACTCAAGAGGAGGACGGCTGTTCATGCCGGTTCCCAGAGGAGGAGGAAGGCGGCTGCGAACTGCGCGTGAAATTCAGCCGCAGCGCAGATGCTCCAGCCTACAAGCAGGGGCAGAACCAGCTCTACAACGAACTCAATCTTGGTCGGAGAGAGGAGTACGACGTGCTGGACAAGCGGAGAGGACGGGACCCAGAAATGGGCGGGAAGCCGCGCAGAAAGAATCCCCAAGAGGGCCTGTACAACGAGCTCCAAAAGGATAAGATGGCAGAAGCCTATAGCGAGATTGGTATGAAAGGGGAACGCAGAAGAGGCAAAGGCCACGACGGACTGTACCAGGGACTCAGCACCGCCACCAAGGACACCTATGACGCTCTTCACATGCAGGCCCTGCCGCCTCGG
139102
Аминокислотная последовательность 139102 ScFV-домен	44	QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFSNYGITWVRQAPGQGLEWMGWISAYNGNTNYAQKFQGRVTMTRNTSISTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGPYYYYMDVWGKGTMVTVSSASGGGGSGGRASGGGGSEIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLYSNGYNYVDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFKLQISRVEAEDVGIYYCMQGRQFPYSFGQGTKVEIK
Последовательность нуклеиновой кислоты 139102 ScFV-домен	59	CAAGTCCAACTGGTCCAGAGCGGTGCAGAAGTGAAGAAGCCCGGAGCGAGCGTGAAAGTGTCCTGCAAGGCTTCCGGGTACACCTTCTCCAACTACGGCATCACTTGGGTGCGCCAGGCCCCGGGACAGGGCCTGGAATGGATGGGGTGGATTTCCGCGTACAACGGCAATACGAACTACGCTCAGAAGTTCCAGGGTAGAGTGACCATGACTAGGAACACCTCCATTTCCACCGCCTACATGGAACTGTCCTCCCTGCGGAGCGAGGACACCGCCGTGTACTATTGCGCCCGGGGACCATACTACTACTACATGGATGTCTGGGGGAAGGGGACTATGGTCACCGTGTCATCCGCCTCGGGAGGCGGCGGATCAGGAGGACGCGCCTCTGGTGGTGGAGGATCGGAGATCGTGATGACCCAGAGCCCTCTCTCCTTGCCCGTGACTCCTGGGGAGCCCGCATCCATTTCATGCCGGAGCTCCCAGTCACTTCTCTACTCCAACGGCTATAACTACGTGGATTGGTACCTCCAAAAGCCGGGCCAGAGCCCGCAGCTGCTGATCTACCTGGGCTCGAACAGGGCCAGCGGAGTGCCTGACCGGTTCTCCGGGTCGGGAAGCGGGACCGACTTCAAGCTGCAAATCTCGAGAGTGGAGGCCGAGGACGTGGGAATCTACTACTGTATGCAGGGCCGCCAGTTTCCGTACTCGTTCGGACAGGGCACCAAAGTGGAAATCAAG
Аминокислотная последовательность139102 VH	74	QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFSNYGITWVRQAPGQGLEWMGWISAYNGNTNYAQKFQGRVTMTRNTSISTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGPYYYYMDVWGKGTMVTVSS
Аминокислотная последовательность139102 VL	89	EIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLYSNGYNYVDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFKLQISRVEAEDVGIYYCMQGRQFPYSFGQGTKVEIK
Аминокислотная последовательность139102 Полный CAR	104	MALPVTALLLPLALLLHAARPQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFSNYGITWVRQAPGQGLEWMGWISAYNGNTNYAQKFQGRVTMTRNTSISTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGPYYYYMDVWGKGTMVTVSSASGGGGSGGRASGGGGSEIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLYSNGYNYVDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFKLQISRVEAEDVGIYYCMQGRQFPYSFGQGTKVEIKTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
Последовательность нуклеиновой кислоты 139102 Полный CAR	119	ATGGCCCTCCCTGTCACCGCCCTGCTGCTTCCGCTGGCTCTTCTGCTCCACGCCGCTCGGCCCCAAGTCCAACTGGTCCAGAGCGGTGCAGAAGTGAAGAAGCCCGGAGCGAGCGTGAAAGTGTCCTGCAAGGCTTCCGGGTACACCTTCTCCAACTACGGCATCACTTGGGTGCGCCAGGCCCCGGGACAGGGCCTGGAATGGATGGGGTGGATTTCCGCGTACAACGGCAATACGAACTACGCTCAGAAGTTCCAGGGTAGAGTGACCATGACTAGGAACACCTCCATTTCCACCGCCTACATGGAACTGTCCTCCCTGCGGAGCGAGGACACCGCCGTGTACTATTGCGCCCGGGGACCATACTACTACTACATGGATGTCTGGGGGAAGGGGACTATGGTCACCGTGTCATCCGCCTCGGGAGGCGGCGGATCAGGAGGACGCGCCTCTGGTGGTGGAGGATCGGAGATCGTGATGACCCAGAGCCCTCTCTCCTTGCCCGTGACTCCTGGGGAGCCCGCATCCATTTCATGCCGGAGCTCCCAGTCACTTCTCTACTCCAACGGCTATAACTACGTGGATTGGTACCTCCAAAAGCCGGGCCAGAGCCCGCAGCTGCTGATCTACCTGGGCTCGAACAGGGCCAGCGGAGTGCCTGACCGGTTCTCCGGGTCGGGAAGCGGGACCGACTTCAAGCTGCAAATCTCGAGAGTGGAGGCCGAGGACGTGGGAATCTACTACTGTATGCAGGGCCGCCAGTTTCCGTACTCGTTCGGACAGGGCACCAAAGTGGAAATCAAGACCACTACCCCAGCACCGAGGCCACCCACCCCGGCTCCTACCATCGCCTCCCAGCCTCTGTCCCTGCGTCCGGAGGCATGTAGACCCGCAGCTGGTGGGGCCGTGCATACCCGGGGTCTTGACTTCGCCTGCGATATCTACATTTGGGCCCCTCTGGCTGGTACTTGCGGGGTCCTGCTGCTTTCACTCGTGATCACTCTTTACTGTAAGCGCGGTCGGAAGAAGCTGCTGTACATCTTTAAGCAACCCTTCATGAGGCCTGTGCAGACTACTCAAGAGGAGGACGGCTGTTCATGCCGGTTCCCAGAGGAGGAGGAAGGCGGCTGCGAACTGCGCGTGAAATTCAGCCGCAGCGCAGATGCTCCAGCCTACAAGCAGGGGCAGAACCAGCTCTACAACGAACTCAATCTTGGTCGGAGAGAGGAGTACGACGTGCTGGACAAGCGGAGAGGACGGGACCCAGAAATGGGCGGGAAGCCGCGCAGAAAGAATCCCCAAGAGGGCCTGTACAACGAGCTCCAAAAGGATAAGATGGCAGAAGCCTATAGCGAGATTGGTATGAAAGGGGAACGCAGAAGAGGCAAAGGCCACGACGGACTGTACCAGGGACTCAGCACCGCCACCAAGGACACCTATGACGCTCTTCACATGCAGGCCCTGCCGCCTCGG
139104
Аминокислотная последовательность 139104 ScFV-домен	45	EVQLLETGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFALSNHGMSWVRRAPGKGLEWVSGIVYSGSTYYAASVKGRFTISRDNSRNTLYLQMNSLRPEDTAIYYCSAHGGESDVWGQGTTVTVSSASGGGGSGGRASGGGGSEIVLTQSPATLSVSPGESATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRASGIPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYGSSLTFGGGTKVEIK
Последовательность нуклеиновой кислоты 139104 ScFV-домен	60	GAAGTGCAATTGCTCGAAACTGGAGGAGGTCTGGTGCAACCTGGAGGATCACTTCGCCTGTCCTGCGCCGTGTCGGGCTTTGCCCTGTCCAACCATGGAATGAGCTGGGTCCGCCGCGCGCCGGGGAAGGGCCTCGAATGGGTGTCCGGCATCGTCTACTCCGGCTCCACCTACTACGCCGCGTCCGTGAAGGGCCGGTTCACGATTTCACGGGACAACTCGCGGAACACCCTGTACCTCCAAATGAATTCCCTTCGGCCGGAGGATACTGCCATCTACTACTGCTCCGCCCACGGTGGCGAATCCGACGTCTGGGGCCAGGGAACCACCGTGACCGTGTCCAGCGCGTCCGGGGGAGGAGGAAGCGGGGGTAGAGCATCGGGTGGAGGCGGATCAGAGATCGTGCTGACCCAGTCCCCCGCCACCTTGAGCGTGTCACCAGGAGAGTCCGCCACCCTGTCATGCCGCGCCAGCCAGTCCGTGTCCTCCAACCTGGCTTGGTACCAGCAGAAGCCGGGGCAGGCCCCTAGACTCCTGATCTATGGGGCGTCGACCCGGGCATCTGGAATTCCCGATAGGTTCAGCGGATCGGGCTCGGGCACTGACTTCACTCTGACCATCTCCTCGCTGCAAGCCGAGGACGTGGCTGTGTACTACTGTCAGCAGTACGGAAGCTCCCTGACTTTCGGTGGCGGGACCAAAGTCGAGATTAAG
Аминокислотная последовательность139104 VH	75	EVQLLETGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFALSNHGMSWVRRAPGKGLEWVSGIVYSGSTYYAASVKGRFTISRDNSRNTLYLQMNSLRPEDTAIYYCSAHGGESDVWGQGTTVTVSS
Аминокислотная последовательность139104 VL	90	EIVLTQSPATLSVSPGESATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRASGIPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYGSSLTFGGGTKVEIK
Аминокислотная последовательность139104 Полный CAR	105	MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLLETGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFALSNHGMSWVRRAPGKGLEWVSGIVYSGSTYYAASVKGRFTISRDNSRNTLYLQMNSLRPEDTAIYYCSAHGGESDVWGQGTTVTVSSASGGGGSGGRASGGGGSEIVLTQSPATLSVSPGESATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRASGIPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYGSSLTFGGGTKVEIKTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
Последовательность нуклеиновой кислоты 139104 Полный CAR	120	ATGGCCCTCCCTGTCACCGCCCTGCTGCTTCCGCTGGCTCTTCTGCTCCACGCCGCTCGGCCCGAAGTGCAATTGCTCGAAACTGGAGGAGGTCTGGTGCAACCTGGAGGATCACTTCGCCTGTCCTGCGCCGTGTCGGGCTTTGCCCTGTCCAACCATGGAATGAGCTGGGTCCGCCGCGCGCCGGGGAAGGGCCTCGAATGGGTGTCCGGCATCGTCTACTCCGGCTCCACCTACTACGCCGCGTCCGTGAAGGGCCGGTTCACGATTTCACGGGACAACTCGCGGAACACCCTGTACCTCCAAATGAATTCCCTTCGGCCGGAGGATACTGCCATCTACTACTGCTCCGCCCACGGTGGCGAATCCGACGTCTGGGGCCAGGGAACCACCGTGACCGTGTCCAGCGCGTCCGGGGGAGGAGGAAGCGGGGGTAGAGCATCGGGTGGAGGCGGATCAGAGATCGTGCTGACCCAGTCCCCCGCCACCTTGAGCGTGTCACCAGGAGAGTCCGCCACCCTGTCATGCCGCGCCAGCCAGTCCGTGTCCTCCAACCTGGCTTGGTACCAGCAGAAGCCGGGGCAGGCCCCTAGACTCCTGATCTATGGGGCGTCGACCCGGGCATCTGGAATTCCCGATAGGTTCAGCGGATCGGGCTCGGGCACTGACTTCACTCTGACCATCTCCTCGCTGCAAGCCGAGGACGTGGCTGTGTACTACTGTCAGCAGTACGGAAGCTCCCTGACTTTCGGTGGCGGGACCAAAGTCGAGATTAAGACCACTACCCCAGCACCGAGGCCACCCACCCCGGCTCCTACCATCGCCTCCCAGCCTCTGTCCCTGCGTCCGGAGGCATGTAGACCCGCAGCTGGTGGGGCCGTGCATACCCGGGGTCTTGACTTCGCCTGCGATATCTACATTTGGGCCCCTCTGGCTGGTACTTGCGGGGTCCTGCTGCTTTCACTCGTGATCACTCTTTACTGTAAGCGCGGTCGGAAGAAGCTGCTGTACATCTTTAAGCAACCCTTCATGAGGCCTGTGCAGACTACTCAAGAGGAGGACGGCTGTTCATGCCGGTTCCCAGAGGAGGAGGAAGGCGGCTGCGAACTGCGCGTGAAATTCAGCCGCAGCGCAGATGCTCCAGCCTACAAGCAGGGGCAGAACCAGCTCTACAACGAACTCAATCTTGGTCGGAGAGAGGAGTACGACGTGCTGGACAAGCGGAGAGGACGGGACCCAGAAATGGGCGGGAAGCCGCGCAGAAAGAATCCCCAAGAGGGCCTGTACAACGAGCTCCAAAAGGATAAGATGGCAGAAGCCTATAGCGAGATTGGTATGAAAGGGGAACGCAGAAGAGGCAAAGGCCACGACGGACTGTACCAGGGACTCAGCACCGCCACCAAGGACACCTATGACGCTCTTCACATGCAGGCCCTGCCGCCTCGG
139106
Аминокислотная последовательность 139106 ScFV-домен	46	EVQLVETGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFALSNHGMSWVRRAPGKGLEWVSGIVYSGSTYYAASVKGRFTISRDNSRNTLYLQMNSLRPEDTAIYYCSAHGGESDVWGQGTTVTVSSASGGGGSGGRASGGGGSEIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSKLAWYQQKPGQAPRLLMYGASIRATGIPDRFSGSGSGTEFTLTISSLEPEDFAVYYCQQYGSSSWTFGQGTKVEIK
Последовательность нуклеиновой кислоты 139106 ScFV-домен	61	GAAGTGCAATTGGTGGAAACTGGAGGAGGACTTGTGCAACCTGGAGGATCATTGAGACTGAGCTGCGCAGTGTCGGGATTCGCCCTGAGCAACCATGGAATGTCCTGGGTCAGAAGGGCCCCTGGAAAAGGCCTCGAATGGGTGTCAGGGATCGTGTACTCCGGTTCCACTTACTACGCCGCCTCCGTGAAGGGGCGCTTCACTATCTCACGGGATAACTCCCGCAATACCCTGTACCTCCAAATGAACAGCCTGCGGCCGGAGGATACCGCCATCTACTACTGTTCCGCCCACGGTGGAGAGTCTGACGTCTGGGGCCAGGGAACTACCGTGACCGTGTCCTCCGCGTCCGGCGGTGGAGGGAGCGGCGGCCGCGCCAGCGGCGGCGGAGGCTCCGAGATCGTGATGACCCAGAGCCCCGCTACTCTGTCGGTGTCGCCCGGAGAAAGGGCGACCCTGTCCTGCCGGGCGTCGCAGTCCGTGAGCAGCAAGCTGGCTTGGTACCAGCAGAAGCCGGGCCAGGCACCACGCCTGCTTATGTACGGTGCCTCCATTCGGGCCACCGGAATCCCGGACCGGTTCTCGGGGTCGGGGTCCGGTACCGAGTTCACACTGACCATTTCCTCGCTCGAGCCCGAGGACTTTGCCGTCTATTACTGCCAGCAGTACGGCTCCTCCTCATGGACGTTCGGCCAGGGGACCAAGGTCGAAATCAAG
Аминокислотная последовательность139106 VH	76	EVQLVETGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFALSNHGMSWVRRAPGKGLEWVSGIVYSGSTYYAASVKGRFTISRDNSRNTLYLQMNSLRPEDTAIYYCSAHGGESDVWGQGTTVTVSS
Аминокислотная последовательность139106 VL	91	EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSKLAWYQQKPGQAPRLLMYGASIRATGIPDRFSGSGSGTEFTLTISSLEPEDFAVYYCQQYGSSSWTFGQGTKVEIK
Аминокислотная последовательность139106 Полный CAR	106	MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLVETGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFALSNHGMSWVRRAPGKGLEWVSGIVYSGSTYYAASVKGRFTISRDNSRNTLYLQMNSLRPEDTAIYYCSAHGGESDVWGQGTTVTVSSASGGGGSGGRASGGGGSEIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSKLAWYQQKPGQAPRLLMYGASIRATGIPDRFSGSGSGTEFTLTISSLEPEDFAVYYCQQYGSSSWTFGQGTKVEIKTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
Последовательность нуклеиновой кислоты 139106 Полный CAR	121	ATGGCCCTCCCTGTCACCGCCCTGCTGCTTCCGCTGGCTCTTCTGCTCCACGCCGCTCGGCCCGAAGTGCAATTGGTGGAAACTGGAGGAGGACTTGTGCAACCTGGAGGATCATTGAGACTGAGCTGCGCAGTGTCGGGATTCGCCCTGAGCAACCATGGAATGTCCTGGGTCAGAAGGGCCCCTGGAAAAGGCCTCGAATGGGTGTCAGGGATCGTGTACTCCGGTTCCACTTACTACGCCGCCTCCGTGAAGGGGCGCTTCACTATCTCACGGGATAACTCCCGCAATACCCTGTACCTCCAAATGAACAGCCTGCGGCCGGAGGATACCGCCATCTACTACTGTTCCGCCCACGGTGGAGAGTCTGACGTCTGGGGCCAGGGAACTACCGTGACCGTGTCCTCCGCGTCCGGCGGTGGAGGGAGCGGCGGCCGCGCCAGCGGCGGCGGAGGCTCCGAGATCGTGATGACCCAGAGCCCCGCTACTCTGTCGGTGTCGCCCGGAGAAAGGGCGACCCTGTCCTGCCGGGCGTCGCAGTCCGTGAGCAGCAAGCTGGCTTGGTACCAGCAGAAGCCGGGCCAGGCACCACGCCTGCTTATGTACGGTGCCTCCATTCGGGCCACCGGAATCCCGGACCGGTTCTCGGGGTCGGGGTCCGGTACCGAGTTCACACTGACCATTTCCTCGCTCGAGCCCGAGGACTTTGCCGTCTATTACTGCCAGCAGTACGGCTCCTCCTCATGGACGTTCGGCCAGGGGACCAAGGTCGAAATCAAGACCACTACCCCAGCACCGAGGCCACCCACCCCGGCTCCTACCATCGCCTCCCAGCCTCTGTCCCTGCGTCCGGAGGCATGTAGACCCGCAGCTGGTGGGGCCGTGCATACCCGGGGTCTTGACTTCGCCTGCGATATCTACATTTGGGCCCCTCTGGCTGGTACTTGCGGGGTCCTGCTGCTTTCACTCGTGATCACTCTTTACTGTAAGCGCGGTCGGAAGAAGCTGCTGTACATCTTTAAGCAACCCTTCATGAGGCCTGTGCAGACTACTCAAGAGGAGGACGGCTGTTCATGCCGGTTCCCAGAGGAGGAGGAAGGCGGCTGCGAACTGCGCGTGAAATTCAGCCGCAGCGCAGATGCTCCAGCCTACAAGCAGGGGCAGAACCAGCTCTACAACGAACTCAATCTTGGTCGGAGAGAGGAGTACGACGTGCTGGACAAGCGGAGAGGACGGGACCCAGAAATGGGCGGGAAGCCGCGCAGAAAGAATCCCCAAGAGGGCCTGTACAACGAGCTCCAAAAGGATAAGATGGCAGAAGCCTATAGCGAGATTGGTATGAAAGGGGAACGCAGAAGAGGCAAAGGCCACGACGGACTGTACCAGGGACTCAGCACCGCCACCAAGGACACCTATGACGCTCTTCACATGCAGGCCCTGCCGCCTCGG
139107
Аминокислотная последовательность 139107 ScFV-домен	47	EVQLVETGGGVVQPGGSLRLSCAVSGFALSNHGMSWVRRAPGKGLEWVSGIVYSGSTYYAASVKGRFTISRDNSRNTLYLQMNSLRPEDTAIYYCSAHGGESDVWGQGTTVTVSSASGGGGSGGRASGGGGSEIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVGSTNLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPDRFSGGGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPPWTFGQGTKVEIK
Последовательность нуклеиновой кислоты 139107 ScFV-домен	62	GAAGTGCAATTGGTGGAGACTGGAGGAGGAGTGGTGCAACCTGGAGGAAGCCTGAGACTGTCATGCGCGGTGTCGGGCTTCGCCCTCTCCAACCACGGAATGTCCTGGGTCCGCCGGGCCCCTGGGAAAGGACTTGAATGGGTGTCCGGCATCGTGTACTCGGGTTCCACCTACTACGCGGCCTCAGTGAAGGGCCGGTTTACTATTAGCCGCGACAACTCCAGAAACACACTGTACCTCCAAATGAACTCGCTGCGGCCGGAAGATACCGCTATCTACTACTGCTCCGCCCATGGGGGAGAGTCGGACGTCTGGGGACAGGGCACCACTGTCACTGTGTCCAGCGCTTCCGGCGGTGGTGGAAGCGGGGGACGGGCCTCAGGAGGCGGTGGCAGCGAGATTGTGCTGACCCAGTCCCCCGGGACCCTGAGCCTGTCCCCGGGAGAAAGGGCCACCCTCTCCTGTCGGGCATCCCAGTCCGTGGGGTCTACTAACCTTGCATGGTACCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCCCCTCGCCTGCTGATCTACGACGCGTCCAATAGAGCCACCGGCATCCCGGATCGCTTCAGCGGAGGCGGATCGGGCACCGACTTCACCCTCACCATTTCAAGGCTGGAACCGGAGGACTTCGCCGTGTACTACTGCCAGCAGTATGGTTCGTCCCCACCCTGGACGTTCGGCCAGGGGACTAAGGTCGAGATCAAG
Аминокислотная последовательность139107 VH	77	EVQLVETGGGVVQPGGSLRLSCAVSGFALSNHGMSWVRRAPGKGLEWVSGIVYSGSTYYAASVKGRFTISRDNSRNTLYLQMNSLRPEDTAIYYCSAHGGESDVWGQGTTVTVSS
Аминокислотная последовательность139107 VL	92	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVGSTNLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPDRFSGGGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPPWTFGQGTKVEIK
Аминокислотная последовательность139107 Полный CAR	107	MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLVETGGGVVQPGGSLRLSCAVSGFALSNHGMSWVRRAPGKGLEWVSGIVYSGSTYYAASVKGRFTISRDNSRNTLYLQMNSLRPEDTAIYYCSAHGGESDVWGQGTTVTVSSASGGGGSGGRASGGGGSEIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVGSTNLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPDRFSGGGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPPWTFGQGTKVEIKTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
Последовательность нуклеиновой кислоты 139107 Полный CAR	122	ATGGCCCTCCCTGTCACCGCCCTGCTGCTTCCGCTGGCTCTTCTGCTCCACGCCGCTCGGCCCGAAGTGCAATTGGTGGAGACTGGAGGAGGAGTGGTGCAACCTGGAGGAAGCCTGAGACTGTCATGCGCGGTGTCGGGCTTCGCCCTCTCCAACCACGGAATGTCCTGGGTCCGCCGGGCCCCTGGGAAAGGACTTGAATGGGTGTCCGGCATCGTGTACTCGGGTTCCACCTACTACGCGGCCTCAGTGAAGGGCCGGTTTACTATTAGCCGCGACAACTCCAGAAACACACTGTACCTCCAAATGAACTCGCTGCGGCCGGAAGATACCGCTATCTACTACTGCTCCGCCCATGGGGGAGAGTCGGACGTCTGGGGACAGGGCACCACTGTCACTGTGTCCAGCGCTTCCGGCGGTGGTGGAAGCGGGGGACGGGCCTCAGGAGGCGGTGGCAGCGAGATTGTGCTGACCCAGTCCCCCGGGACCCTGAGCCTGTCCCCGGGAGAAAGGGCCACCCTCTCCTGTCGGGCATCCCAGTCCGTGGGGTCTACTAACCTTGCATGGTACCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCCCCTCGCCTGCTGATCTACGACGCGTCCAATAGAGCCACCGGCATCCCGGATCGCTTCAGCGGAGGCGGATCGGGCACCGACTTCACCCTCACCATTTCAAGGCTGGAACCGGAGGACTTCGCCGTGTACTACTGCCAGCAGTATGGTTCGTCCCCACCCTGGACGTTCGGCCAGGGGACTAAGGTCGAGATCAAGACCACTACCCCAGCACCGAGGCCACCCACCCCGGCTCCTACCATCGCCTCCCAGCCTCTGTCCCTGCGTCCGGAGGCATGTAGACCCGCAGCTGGTGGGGCCGTGCATACCCGGGGTCTTGACTTCGCCTGCGATATCTACATTTGGGCCCCTCTGGCTGGTACTTGCGGGGTCCTGCTGCTTTCACTCGTGATCACTCTTTACTGTAAGCGCGGTCGGAAGAAGCTGCTGTACATCTTTAAGCAACCCTTCATGAGGCCTGTGCAGACTACTCAAGAGGAGGACGGCTGTTCATGCCGGTTCCCAGAGGAGGAGGAAGGCGGCTGCGAACTGCGCGTGAAATTCAGCCGCAGCGCAGATGCTCCAGCCTACAAGCAGGGGCAGAACCAGCTCTACAACGAACTCAATCTTGGTCGGAGAGAGGAGTACGACGTGCTGGACAAGCGGAGAGGACGGGACCCAGAAATGGGCGGGAAGCCGCGCAGAAAGAATCCCCAAGAGGGCCTGTACAACGAGCTCCAAAAGGATAAGATGGCAGAAGCCTATAGCGAGATTGGTATGAAAGGGGAACGCAGAAGAGGCAAAGGCCACGACGGACTGTACCAGGGACTCAGCACCGCCACCAAGGACACCTATGACGCTCTTCACATGCAGGCCCTGCCGCCTCGG
139108
Аминокислотная последовательность 139108 ScFV-домен	48	QVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMSWIRQAPGKGLEWVSYISSSGSTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARESGDGMDVWGQGTTVTVSSASGGGGSGGRASGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYTLAFGQGTKVDIK
Последовательность нуклеиновой кислоты 139108 ScFV-домен	63	CAAGTGCAACTCGTGGAATCTGGTGGAGGACTCGTGAAACCTGGAGGATCATTGAGACTGTCATGCGCGGCCTCGGGATTCACGTTCTCCGATTACTACATGAGCTGGATTCGCCAGGCTCCGGGGAAGGGACTGGAATGGGTGTCCTACATTTCCTCATCCGGCTCCACCATCTACTACGCGGACTCCGTGAAGGGGAGATTCACCATTAGCCGCGATAACGCCAAGAACAGCCTGTACCTTCAGATGAACTCCCTGCGGGCTGAAGATACTGCCGTCTACTACTGCGCAAGGGAGAGCGGAGATGGGATGGACGTCTGGGGACAGGGTACCACTGTGACCGTGTCGTCGGCCTCCGGCGGAGGGGGTTCGGGTGGAAGGGCCAGCGGCGGCGGAGGCAGCGACATCCAGATGACCCAGTCCCCCTCATCGCTGTCCGCCTCCGTGGGCGACCGCGTCACCATCACATGCCGGGCCTCACAGTCGATCTCCTCCTACCTCAATTGGTATCAGCAGAAGCCCGGAAAGGCCCCTAAGCTTCTGATCTACGCAGCGTCCTCCCTGCAATCCGGGGTCCCATCTCGGTTCTCCGGCTCGGGCAGCGGTACCGACTTCACTCTGACCATCTCGAGCCTGCAGCCGGAGGACTTCGCCACTTACTACTGTCAGCAAAGCTACACCCTCGCGTTTGGCCAGGGCACCAAAGTGGACATCAAG
Аминокислотная последовательность139108 VH	78	QVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMSWIRQAPGKGLEWVSYISSSGSTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARESGDGMDVWGQGTTVTVSS
Аминокислотная последовательность139108 VL	93	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYTLAFGQGTKVDIK
Аминокислотная последовательность139108 Полный CAR	108	MALPVTALLLPLALLLHAARPQVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMSWIRQAPGKGLEWVSYISSSGSTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARESGDGMDVWGQGTTVTVSSASGGGGSGGRASGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYTLAFGQGTKVDIKTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
Последовательность нуклеиновой кислоты 139108 Полный CAR	123	ATGGCCCTCCCTGTCACCGCCCTGCTGCTTCCGCTGGCTCTTCTGCTCCACGCCGCTCGGCCCCAAGTGCAACTCGTGGAATCTGGTGGAGGACTCGTGAAACCTGGAGGATCATTGAGACTGTCATGCGCGGCCTCGGGATTCACGTTCTCCGATTACTACATGAGCTGGATTCGCCAGGCTCCGGGGAAGGGACTGGAATGGGTGTCCTACATTTCCTCATCCGGCTCCACCATCTACTACGCGGACTCCGTGAAGGGGAGATTCACCATTAGCCGCGATAACGCCAAGAACAGCCTGTACCTTCAGATGAACTCCCTGCGGGCTGAAGATACTGCCGTCTACTACTGCGCAAGGGAGAGCGGAGATGGGATGGACGTCTGGGGACAGGGTACCACTGTGACCGTGTCGTCGGCCTCCGGCGGAGGGGGTTCGGGTGGAAGGGCCAGCGGCGGCGGAGGCAGCGACATCCAGATGACCCAGTCCCCCTCATCGCTGTCCGCCTCCGTGGGCGACCGCGTCACCATCACATGCCGGGCCTCACAGTCGATCTCCTCCTACCTCAATTGGTATCAGCAGAAGCCCGGAAAGGCCCCTAAGCTTCTGATCTACGCAGCGTCCTCCCTGCAATCCGGGGTCCCATCTCGGTTCTCCGGCTCGGGCAGCGGTACCGACTTCACTCTGACCATCTCGAGCCTGCAGCCGGAGGACTTCGCCACTTACTACTGTCAGCAAAGCTACACCCTCGCGTTTGGCCAGGGCACCAAAGTGGACATCAAGACCACTACCCCAGCACCGAGGCCACCCACCCCGGCTCCTACCATCGCCTCCCAGCCTCTGTCCCTGCGTCCGGAGGCATGTAGACCCGCAGCTGGTGGGGCCGTGCATACCCGGGGTCTTGACTTCGCCTGCGATATCTACATTTGGGCCCCTCTGGCTGGTACTTGCGGGGTCCTGCTGCTTTCACTCGTGATCACTCTTTACTGTAAGCGCGGTCGGAAGAAGCTGCTGTACATCTTTAAGCAACCCTTCATGAGGCCTGTGCAGACTACTCAAGAGGAGGACGGCTGTTCATGCCGGTTCCCAGAGGAGGAGGAAGGCGGCTGCGAACTGCGCGTGAAATTCAGCCGCAGCGCAGATGCTCCAGCCTACAAGCAGGGGCAGAACCAGCTCTACAACGAACTCAATCTTGGTCGGAGAGAGGAGTACGACGTGCTGGACAAGCGGAGAGGACGGGACCCAGAAATGGGCGGGAAGCCGCGCAGAAAGAATCCCCAAGAGGGCCTGTACAACGAGCTCCAAAAGGATAAGATGGCAGAAGCCTATAGCGAGATTGGTATGAAAGGGGAACGCAGAAGAGGCAAAGGCCACGACGGACTGTACCAGGGACTCAGCACCGCCACCAAGGACACCTATGACGCTCTTCACATGCAGGCCCTGCCGCCTCGG
139110
Аминокислотная последовательность 139110 ScFV-домен	50	QVQLVQSGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMSWIRQAPGKGLEWVSYISSSGNTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARSTMVREDYWGQGTLVTVSSASGGGGSGGRASGGGGSDIVLTQSPLSLPVTLGQPASISCKSSESLVHNSGKTYLNWFHQRPGQSPRRLIYEVSNRDSGVPDRFTGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQGTHWPGTFGQGTKLEIK
Последовательность нуклеиновой кислоты 139110 ScFV-домен	65	CAAGTGCAACTGGTGCAAAGCGGAGGAGGATTGGTCAAACCCGGAGGAAGCCTGAGACTGTCATGCGCGGCCTCTGGATTCACCTTCTCCGATTACTACATGTCATGGATCAGACAGGCCCCGGGGAAGGGCCTCGAATGGGTGTCCTACATCTCGTCCTCCGGGAACACCATCTACTACGCCGACAGCGTGAAGGGCCGCTTTACCATTTCCCGCGACAACGCAAAGAACTCGCTGTACCTTCAGATGAATTCCCTGCGGGCTGAAGATACCGCGGTGTACTATTGCGCCCGGTCCACTATGGTCCGGGAGGACTACTGGGGACAGGGCACACTCGTGACCGTGTCCAGCGCGAGCGGGGGTGGAGGCAGCGGTGGACGCGCCTCCGGCGGCGGCGGTTCAGACATCGTGCTGACTCAGTCGCCCCTGTCGCTGCCGGTCACCCTGGGCCAACCGGCCTCAATTAGCTGCAAGTCCTCGGAGAGCCTGGTGCACAACTCAGGAAAGACTTACCTGAACTGGTTCCATCAGCGGCCTGGACAGTCCCCACGGAGGCTCATCTATGAAGTGTCCAACAGGGATTCGGGGGTGCCCGACCGCTTCACTGGCTCCGGGTCCGGCACCGACTTCACCTTGAAAATCTCCAGAGTGGAAGCCGAGGACGTGGGCGTGTACTACTGTATGCAGGGTACCCACTGGCCTGGAACCTTTGGACAAGGAACTAAGCTCGAGATTAAG
Аминокислотная последовательность139110 VH	80	QVQLVQSGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMSWIRQAPGKGLEWVSYISSSGNTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARSTMVREDYWGQGTLVTVSS
Аминокислотная последовательность139110 VL	95	DIVLTQSPLSLPVTLGQPASISCKSSESLVHNSGKTYLNWFHQRPGQSPRRLIYEVSNRDSGVPDRFTGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQGTHWPGTFGQGTKLEIK
Аминокислотная последовательность139110 Полный CAR	110	MALPVTALLLPLALLLHAARPQVQLVQSGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMSWIRQAPGKGLEWVSYISSSGNTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARSTMVREDYWGQGTLVTVSSASGGGGSGGRASGGGGSDIVLTQSPLSLPVTLGQPASISCKSSESLVHNSGKTYLNWFHQRPGQSPRRLIYEVSNRDSGVPDRFTGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQGTHWPGTFGQGTKLEIKTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
Последовательность нуклеиновой кислоты 139110 Полный CAR	125	ATGGCCCTCCCTGTCACCGCCCTGCTGCTTCCGCTGGCTCTTCTGCTCCACGCCGCTCGGCCCCAAGTGCAACTGGTGCAAAGCGGAGGAGGATTGGTCAAACCCGGAGGAAGCCTGAGACTGTCATGCGCGGCCTCTGGATTCACCTTCTCCGATTACTACATGTCATGGATCAGACAGGCCCCGGGGAAGGGCCTCGAATGGGTGTCCTACATCTCGTCCTCCGGGAACACCATCTACTACGCCGACAGCGTGAAGGGCCGCTTTACCATTTCCCGCGACAACGCAAAGAACTCGCTGTACCTTCAGATGAATTCCCTGCGGGCTGAAGATACCGCGGTGTACTATTGCGCCCGGTCCACTATGGTCCGGGAGGACTACTGGGGACAGGGCACACTCGTGACCGTGTCCAGCGCGAGCGGGGGTGGAGGCAGCGGTGGACGCGCCTCCGGCGGCGGCGGTTCAGACATCGTGCTGACTCAGTCGCCCCTGTCGCTGCCGGTCACCCTGGGCCAACCGGCCTCAATTAGCTGCAAGTCCTCGGAGAGCCTGGTGCACAACTCAGGAAAGACTTACCTGAACTGGTTCCATCAGCGGCCTGGACAGTCCCCACGGAGGCTCATCTATGAAGTGTCCAACAGGGATTCGGGGGTGCCCGACCGCTTCACTGGCTCCGGGTCCGGCACCGACTTCACCTTGAAAATCTCCAGAGTGGAAGCCGAGGACGTGGGCGTGTACTACTGTATGCAGGGTACCCACTGGCCTGGAACCTTTGGACAAGGAACTAAGCTCGAGATTAAGACCACTACCCCAGCACCGAGGCCACCCACCCCGGCTCCTACCATCGCCTCCCAGCCTCTGTCCCTGCGTCCGGAGGCATGTAGACCCGCAGCTGGTGGGGCCGTGCATACCCGGGGTCTTGACTTCGCCTGCGATATCTACATTTGGGCCCCTCTGGCTGGTACTTGCGGGGTCCTGCTGCTTTCACTCGTGATCACTCTTTACTGTAAGCGCGGTCGGAAGAAGCTGCTGTACATCTTTAAGCAACCCTTCATGAGGCCTGTGCAGACTACTCAAGAGGAGGACGGCTGTTCATGCCGGTTCCCAGAGGAGGAGGAAGGCGGCTGCGAACTGCGCGTGAAATTCAGCCGCAGCGCAGATGCTCCAGCCTACAAGCAGGGGCAGAACCAGCTCTACAACGAACTCAATCTTGGTCGGAGAGAGGAGTACGACGTGCTGGACAAGCGGAGAGGACGGGACCCAGAAATGGGCGGGAAGCCGCGCAGAAAGAATCCCCAAGAGGGCCTGTACAACGAGCTCCAAAAGGATAAGATGGCAGAAGCCTATAGCGAGATTGGTATGAAAGGGGAACGCAGAAGAGGCAAAGGCCACGACGGACTGTACCAGGGACTCAGCACCGCCACCAAGGACACCTATGACGCTCTTCACATGCAGGCCCTGCCGCCTCGG
139112
Аминокислотная последовательность 139112 ScFV-домен	51	QVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFALSNHGMSWVRRAPGKGLEWVSGIVYSGSTYYAASVKGRFTISRDNSRNTLYLQMNSLRPEDTAIYYCSAHGGESDVWGQGTTVTVSSASGGGGSGGRASGGGGSDIRLTQSPSPLSASVGDRVTITCQASEDINKFLNWYHQTPGKAPKLLIYDASTLQTGVPSRFSGSGSGTDFTLTINSLQPEDIGTYYCQQYESLPLTFGGGTKVEIK
Последовательность нуклеиновой кислоты 139112 ScFV-домен	66	CAAGTGCAACTCGTGGAATCTGGTGGAGGACTCGTGCAACCCGGTGGAAGCCTTAGGCTGTCGTGCGCCGTCAGCGGGTTTGCTCTGAGCAACCATGGAATGTCCTGGGTCCGCCGGGCACCGGGAAAAGGGCTGGAATGGGTGTCCGGCATCGTGTACAGCGGGTCAACCTATTACGCCGCGTCCGTGAAGGGCAGATTCACTATCTCAAGAGACAACAGCCGGAACACCCTGTACTTGCAAATGAATTCCCTGCGCCCCGAGGACACCGCCATCTACTACTGCTCCGCCCACGGAGGAGAGTCGGACGTGTGGGGCCAGGGAACGACTGTGACTGTGTCCAGCGCATCAGGAGGGGGTGGTTCGGGCGGCCGGGCCTCGGGGGGAGGAGGTTCCGACATTCGGCTGACCCAGTCCCCGTCCCCACTGTCGGCCTCCGTCGGCGACCGCGTGACCATCACTTGTCAGGCGTCCGAGGACATTAACAAGTTCCTGAACTGGTACCACCAGACCCCTGGAAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACGATGCCTCGACCCTTCAAACTGGAGTGCCTAGCCGGTTCTCCGGGTCCGGCTCCGGCACTGATTTCACTCTGACCATCAACTCATTGCAGCCGGAAGATATCGGGACCTACTATTGCCAGCAGTACGAATCCCTCCCGCTCACATTCGGCGGGGGAACCAAGGTCGAGATTAAG
Аминокислотная последовательность139112 VH	81	QVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFALSNHGMSWVRRAPGKGLEWVSGIVYSGSTYYAASVKGRFTISRDNSRNTLYLQMNSLRPEDTAIYYCSAHGGESDVWGQGTTVTVSS
Аминокислотная последовательность139112 VL	96	DIRLTQSPSPLSASVGDRVTITCQASEDINKFLNWYHQTPGKAPKLLIYDASTLQTGVPSRFSGSGSGTDFTLTINSLQPEDIGTYYCQQYESLPLTFGGGTKVEIK
Аминокислотная последовательность139112 Полный CAR	111	MALPVTALLLPLALLLHAARPQVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFALSNHGMSWVRRAPGKGLEWVSGIVYSGSTYYAASVKGRFTISRDNSRNTLYLQMNSLRPEDTAIYYCSAHGGESDVWGQGTTVTVSSASGGGGSGGRASGGGGSDIRLTQSPSPLSASVGDRVTITCQASEDINKFLNWYHQTPGKAPKLLIYDASTLQTGVPSRFSGSGSGTDFTLTINSLQPEDIGTYYCQQYESLPLTFGGGTKVEIKTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
Последовательность нуклеиновой кислоты 139112 Полный CAR	126	ATGGCCCTCCCTGTCACCGCCCTGCTGCTTCCGCTGGCTCTTCTGCTCCACGCCGCTCGGCCCCAAGTGCAACTCGTGGAATCTGGTGGAGGACTCGTGCAACCCGGTGGAAGCCTTAGGCTGTCGTGCGCCGTCAGCGGGTTTGCTCTGAGCAACCATGGAATGTCCTGGGTCCGCCGGGCACCGGGAAAAGGGCTGGAATGGGTGTCCGGCATCGTGTACAGCGGGTCAACCTATTACGCCGCGTCCGTGAAGGGCAGATTCACTATCTCAAGAGACAACAGCCGGAACACCCTGTACTTGCAAATGAATTCCCTGCGCCCCGAGGACACCGCCATCTACTACTGCTCCGCCCACGGAGGAGAGTCGGACGTGTGGGGCCAGGGAACGACTGTGACTGTGTCCAGCGCATCAGGAGGGGGTGGTTCGGGCGGCCGGGCCTCGGGGGGAGGAGGTTCCGACATTCGGCTGACCCAGTCCCCGTCCCCACTGTCGGCCTCCGTCGGCGACCGCGTGACCATCACTTGTCAGGCGTCCGAGGACATTAACAAGTTCCTGAACTGGTACCACCAGACCCCTGGAAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACGATGCCTCGACCCTTCAAACTGGAGTGCCTAGCCGGTTCTCCGGGTCCGGCTCCGGCACTGATTTCACTCTGACCATCAACTCATTGCAGCCGGAAGATATCGGGACCTACTATTGCCAGCAGTACGAATCCCTCCCGCTCACATTCGGCGGGGGAACCAAGGTCGAGATTAAGACCACTACCCCAGCACCGAGGCCACCCACCCCGGCTCCTACCATCGCCTCCCAGCCTCTGTCCCTGCGTCCGGAGGCATGTAGACCCGCAGCTGGTGGGGCCGTGCATACCCGGGGTCTTGACTTCGCCTGCGATATCTACATTTGGGCCCCTCTGGCTGGTACTTGCGGGGTCCTGCTGCTTTCACTCGTGATCACTCTTTACTGTAAGCGCGGTCGGAAGAAGCTGCTGTACATCTTTAAGCAACCCTTCATGAGGCCTGTGCAGACTACTCAAGAGGAGGACGGCTGTTCATGCCGGTTCCCAGAGGAGGAGGAAGGCGGCTGCGAACTGCGCGTGAAATTCAGCCGCAGCGCAGATGCTCCAGCCTACAAGCAGGGGCAGAACCAGCTCTACAACGAACTCAATCTTGGTCGGAGAGAGGAGTACGACGTGCTGGACAAGCGGAGAGGACGGGACCCAGAAATGGGCGGGAAGCCGCGCAGAAAGAATCCCCAAGAGGGCCTGTACAACGAGCTCCAAAAGGATAAGATGGCAGAAGCCTATAGCGAGATTGGTATGAAAGGGGAACGCAGAAGAGGCAAAGGCCACGACGGACTGTACCAGGGACTCAGCACCGCCACCAAGGACACCTATGACGCTCTTCACATGCAGGCCCTGCCGCCTCGG
139113
Аминокислотная последовательность 139113 ScFV-домен	52	EVQLVETGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFALSNHGMSWVRRAPGKGLEWVSGIVYSGSTYYAASVKGRFTISRDNSRNTLYLQMNSLRPEDTAIYYCSAHGGESDVWGQGTTVTVSSASGGGGSGGRASGGGGSETTLTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVGSNLAWYQQKPGQGPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFAVYYCQQYNDWLPVTFGQGTKVEIK
Последовательность нуклеиновой кислоты 139113 ScFV-домен	67	GAAGTGCAATTGGTGGAAACTGGAGGAGGACTTGTGCAACCTGGAGGATCATTGCGGCTCTCATGCGCTGTCTCCGGCTTCGCCCTGTCAAATCACGGGATGTCGTGGGTCAGACGGGCCCCGGGAAAGGGTCTGGAATGGGTGTCGGGGATTGTGTACAGCGGCTCCACCTACTACGCCGCTTCGGTCAAGGGCCGCTTCACTATTTCACGGGACAACAGCCGCAACACCCTCTATCTGCAAATGAACTCTCTCCGCCCGGAGGATACCGCCATCTACTACTGCTCCGCACACGGCGGCGAATCCGACGTGTGGGGACAGGGAACCACTGTCACCGTGTCGTCCGCATCCGGTGGCGGAGGATCGGGTGGCCGGGCCTCCGGGGGCGGCGGCAGCGAGACTACCCTGACCCAGTCCCCTGCCACTCTGTCCGTGAGCCCGGGAGAGAGAGCCACCCTTAGCTGCCGGGCCAGCCAGAGCGTGGGCTCCAACCTGGCCTGGTACCAGCAGAAGCCAGGACAGGGTCCCAGGCTGCTGATCTACGGAGCCTCCACTCGCGCGACCGGCATCCCCGCGAGGTTCTCCGGGTCGGGTTCCGGGACCGAGTTCACCCTGACCATCTCCTCCCTCCAACCGGAGGACTTCGCGGTGTACTACTGTCAGCAGTACAACGATTGGCTGCCCGTGACATTTGGACAGGGGACGAAGGTGGAAATCAAA
Аминокислотная последовательность139113 VH	82	EVQLVETGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFALSNHGMSWVRRAPGKGLEWVSGIVYSGSTYYAASVKGRFTISRDNSRNTLYLQMNSLRPEDTAIYYCSAHGGESDVWGQGTTVTVSS
Аминокислотная последовательность139113 VL	97	ETTLTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVGSNLAWYQQKPGQGPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFAVYYCQQYNDWLPVTFGQGTKVEIK
Аминокислотная последовательность139113 Полный CAR	112	MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLVETGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFALSNHGMSWVRRAPGKGLEWVSGIVYSGSTYYAASVKGRFTISRDNSRNTLYLQMNSLRPEDTAIYYCSAHGGESDVWGQGTTVTVSSASGGGGSGGRASGGGGSETTLTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVGSNLAWYQQKPGQGPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFAVYYCQQYNDWLPVTFGQGTKVEIKTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
Последовательность нуклеиновой кислоты 139113 Полный CAR	127	ATGGCCCTCCCTGTCACCGCCCTGCTGCTTCCGCTGGCTCTTCTGCTCCACGCCGCTCGGCCCGAAGTGCAATTGGTGGAAACTGGAGGAGGACTTGTGCAACCTGGAGGATCATTGCGGCTCTCATGCGCTGTCTCCGGCTTCGCCCTGTCAAATCACGGGATGTCGTGGGTCAGACGGGCCCCGGGAAAGGGTCTGGAATGGGTGTCGGGGATTGTGTACAGCGGCTCCACCTACTACGCCGCTTCGGTCAAGGGCCGCTTCACTATTTCACGGGACAACAGCCGCAACACCCTCTATCTGCAAATGAACTCTCTCCGCCCGGAGGATACCGCCATCTACTACTGCTCCGCACACGGCGGCGAATCCGACGTGTGGGGACAGGGAACCACTGTCACCGTGTCGTCCGCATCCGGTGGCGGAGGATCGGGTGGCCGGGCCTCCGGGGGCGGCGGCAGCGAGACTACCCTGACCCAGTCCCCTGCCACTCTGTCCGTGAGCCCGGGAGAGAGAGCCACCCTTAGCTGCCGGGCCAGCCAGAGCGTGGGCTCCAACCTGGCCTGGTACCAGCAGAAGCCAGGACAGGGTCCCAGGCTGCTGATCTACGGAGCCTCCACTCGCGCGACCGGCATCCCCGCGAGGTTCTCCGGGTCGGGTTCCGGGACCGAGTTCACCCTGACCATCTCCTCCCTCCAACCGGAGGACTTCGCGGTGTACTACTGTCAGCAGTACAACGATTGGCTGCCCGTGACATTTGGACAGGGGACGAAGGTGGAAATCAAAACCACTACCCCAGCACCGAGGCCACCCACCCCGGCTCCTACCATCGCCTCCCAGCCTCTGTCCCTGCGTCCGGAGGCATGTAGACCCGCAGCTGGTGGGGCCGTGCATACCCGGGGTCTTGACTTCGCCTGCGATATCTACATTTGGGCCCCTCTGGCTGGTACTTGCGGGGTCCTGCTGCTTTCACTCGTGATCACTCTTTACTGTAAGCGCGGTCGGAAGAAGCTGCTGTACATCTTTAAGCAACCCTTCATGAGGCCTGTGCAGACTACTCAAGAGGAGGACGGCTGTTCATGCCGGTTCCCAGAGGAGGAGGAAGGCGGCTGCGAACTGCGCGTGAAATTCAGCCGCAGCGCAGATGCTCCAGCCTACAAGCAGGGGCAGAACCAGCTCTACAACGAACTCAATCTTGGTCGGAGAGAGGAGTACGACGTGCTGGACAAGCGGAGAGGACGGGACCCAGAAATGGGCGGGAAGCCGCGCAGAAAGAATCCCCAAGAGGGCCTGTACAACGAGCTCCAAAAGGATAAGATGGCAGAAGCCTATAGCGAGATTGGTATGAAAGGGGAACGCAGAAGAGGCAAAGGCCACGACGGACTGTACCAGGGACTCAGCACCGCCACCAAGGACACCTATGACGCTCTTCACATGCAGGCCCTGCCGCCTCGG
139114
Аминокислотная последовательность 139114 ScFV-домен	53	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFALSNHGMSWVRRAPGKGLEWVSGIVYSGSTYYAASVKGRFTISRDNSRNTLYLQMNSLRPEDTAIYYCSAHGGESDVWGQGTTVTVSSASGGGGSGGRASGGGGSEIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSIGSSSLAWYQQKPGQAPRLLMYGASSRASGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYAGSPPFTFGQGTKVEIK
Последовательность нуклеиновой кислоты 139114 ScFV-домен	68	GAAGTGCAATTGGTGGAATCTGGTGGAGGACTTGTGCAACCTGGAGGATCACTGAGACTGTCATGCGCGGTGTCCGGTTTTGCCCTGAGCAATCATGGGATGTCGTGGGTCCGGCGCGCCCCCGGAAAGGGTCTGGAATGGGTGTCGGGTATCGTCTACTCCGGGAGCACTTACTACGCCGCGAGCGTGAAGGGCCGCTTCACCATTTCCCGCGATAACTCCCGCAACACCCTGTACTTGCAAATGAACTCGCTCCGGCCTGAGGACACTGCCATCTACTACTGCTCCGCACACGGAGGAGAATCCGACGTGTGGGGCCAGGGAACTACCGTGACCGTCAGCAGCGCCTCCGGCGGCGGGGGCTCAGGCGGACGGGCTAGCGGCGGCGGTGGCTCCGAGATCGTGCTGACCCAGTCGCCTGGCACTCTCTCGCTGAGCCCCGGGGAAAGGGCAACCCTGTCCTGTCGGGCCAGCCAGTCCATTGGATCATCCTCCCTCGCCTGGTATCAGCAGAAACCGGGACAGGCTCCGCGGCTGCTTATGTATGGGGCCAGCTCAAGAGCCTCCGGCATTCCCGACCGGTTCTCCGGGTCCGGTTCCGGCACCGATTTCACCCTGACTATCTCGAGGCTGGAGCCAGAGGACTTCGCCGTGTACTACTGCCAGCAGTACGCGGGGTCCCCGCCGTTCACGTTCGGACAGGGAACCAAGGTCGAGATCAAG
Аминокислотная последовательность139114 VH	83	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFALSNHGMSWVRRAPGKGLEWVSGIVYSGSTYYAASVKGRFTISRDNSRNTLYLQMNSLRPEDTAIYYCSAHGGESDVWGQGTTVTVSS
Аминокислотная последовательность139114 VL	98	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSIGSSSLAWYQQKPGQAPRLLMYGASSRASGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYAGSPPFTFGQGTKVEIK
Аминокислотная последовательность139114 Полный CAR	113	MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFALSNHGMSWVRRAPGKGLEWVSGIVYSGSTYYAASVKGRFTISRDNSRNTLYLQMNSLRPEDTAIYYCSAHGGESDVWGQGTTVTVSSASGGGGSGGRASGGGGSEIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSIGSSSLAWYQQKPGQAPRLLMYGASSRASGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYAGSPPFTFGQGTKVEIKTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
Последовательность нуклеиновой кислоты 139114 Полный CAR	128	ATGGCCCTCCCTGTCACCGCCCTGCTGCTTCCGCTGGCTCTTCTGCTCCACGCCGCTCGGCCCGAAGTGCAATTGGTGGAATCTGGTGGAGGACTTGTGCAACCTGGAGGATCACTGAGACTGTCATGCGCGGTGTCCGGTTTTGCCCTGAGCAATCATGGGATGTCGTGGGTCCGGCGCGCCCCCGGAAAGGGTCTGGAATGGGTGTCGGGTATCGTCTACTCCGGGAGCACTTACTACGCCGCGAGCGTGAAGGGCCGCTTCACCATTTCCCGCGATAACTCCCGCAACACCCTGTACTTGCAAATGAACTCGCTCCGGCCTGAGGACACTGCCATCTACTACTGCTCCGCACACGGAGGAGAATCCGACGTGTGGGGCCAGGGAACTACCGTGACCGTCAGCAGCGCCTCCGGCGGCGGGGGCTCAGGCGGACGGGCTAGCGGCGGCGGTGGCTCCGAGATCGTGCTGACCCAGTCGCCTGGCACTCTCTCGCTGAGCCCCGGGGAAAGGGCAACCCTGTCCTGTCGGGCCAGCCAGTCCATTGGATCATCCTCCCTCGCCTGGTATCAGCAGAAACCGGGACAGGCTCCGCGGCTGCTTATGTATGGGGCCAGCTCAAGAGCCTCCGGCATTCCCGACCGGTTCTCCGGGTCCGGTTCCGGCACCGATTTCACCCTGACTATCTCGAGGCTGGAGCCAGAGGACTTCGCCGTGTACTACTGCCAGCAGTACGCGGGGTCCCCGCCGTTCACGTTCGGACAGGGAACCAAGGTCGAGATCAAGACCACTACCCCAGCACCGAGGCCACCCACCCCGGCTCCTACCATCGCCTCCCAGCCTCTGTCCCTGCGTCCGGAGGCATGTAGACCCGCAGCTGGTGGGGCCGTGCATACCCGGGGTCTTGACTTCGCCTGCGATATCTACATTTGGGCCCCTCTGGCTGGTACTTGCGGGGTCCTGCTGCTTTCACTCGTGATCACTCTTTACTGTAAGCGCGGTCGGAAGAAGCTGCTGTACATCTTTAAGCAACCCTTCATGAGGCCTGTGCAGACTACTCAAGAGGAGGACGGCTGTTCATGCCGGTTCCCAGAGGAGGAGGAAGGCGGCTGCGAACTGCGCGTGAAATTCAGCCGCAGCGCAGATGCTCCAGCCTACAAGCAGGGGCAGAACCAGCTCTACAACGAACTCAATCTTGGTCGGAGAGAGGAGTACGACGTGCTGGACAAGCGGAGAGGACGGGACCCAGAAATGGGCGGGAAGCCGCGCAGAAAGAATCCCCAAGAGGGCCTGTACAACGAGCTCCAAAAGGATAAGATGGCAGAAGCCTATAGCGAGATTGGTATGAAAGGGGAACGCAGAAGAGGCAAAGGCCACGACGGACTGTACCAGGGACTCAGCACCGCCACCAAGGACACCTATGACGCTCTTCACATGCAGGCCCTGCCGCCTCGG
149362
Аминокислотная последовательность 149362 ScFV-домен	129	Qvqlqesgpglvkpsetlsltctvsggsisssyyywgwirqppgkglewigsiyysgsayynpslksrvtisvdtsknqfslrlssvtaadtavyycarhwqewpdafdiwgqgtmvtvssggggsggggsggggsettltqspafmsatpgdkviisckasqdiddamnwyqqkpgeaplfiiqsatspvpgipprfsgsgfgtdfsltinniesedaayyfclqhdnfpltfgqgtkleik
Последовательность нуклеиновой кислоты 149362 ScFV-домен	150	caagtgcagcttcaggaaagcggaccgggcctggtcaagccatccgaaactctctccctgacttgcactgtgtctggcggttccatctcatcgtcgtactactactggggctggattaggcagccgcccggaaagggactggagtggatcggaagcatctactattccggctcggcgtactacaaccctagcctcaagtcgagagtgaccatctccgtggatacctccaagaaccagttttccctgcgcctgagctccgtgaccgccgctgacaccgccgtgtactactgtgctcggcattggcaggaatggcccgatgccttcgacatttggggccagggcactatggtcactgtgtcatccgggggtggaggcagcgggggaggagggtccggggggggaggttcagagacaaccttgacccagtcacccgcattcatgtccgccactccgggagacaaggtcatcatctcgtgcaaagcgtcccaggatatcgacgatgccatgaattggtaccagcagaagcctggcgaagcgccgctgttcattatccaatccgcaacctcgcccgtgcctggaatcccaccgcggttcagcggcagcggtttcggaaccgacttttccctgaccattaacaacattgagtccgaggacgccgcctactacttctgcctgcaacacgacaacttccctctcacgttcggccagggaaccaagctggaaatcaag
Аминокислотная последовательность 149362 VH	171	QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSSYYYWGWIRQPPGKGLEWIGSIYYSGSAYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLRLSSVTAADTAVYYCARHWQEWPDAFDIWGQGTMVTVSS
Аминокислотная последовательность 149362 VL	192	ETTLTQSPAFMSATPGDKVIISCKASQDIDDAMNWYQQKPGEAPLFIIQSATSPVPGIPPRFSGSGFGTDFSLTINNIESEDAAYYFCLQHDNFPLTFGQGTKLEIK
Аминокислотная последовательность 149362 Полный CAR	213	malpvtalllplalllhaarpqvqlqesgpglvkpsetlsltctvsggsisssyyywgwirqppgkglewigsiyysgsayynpslksrvtisvdtsknqfslrlssvtaadtavyycarhwqewpdafdiwgqgtmvtvssggggsggggsggggsettltqspafmsatpgdkviisckasqdiddamnwyqqkpgeaplfiiqsatspvpgipprfsgsgfgtdfsltinniesedaayyfclqhdnfpltfgqgtkleiktttpaprpptpaptiasqplslrpeacrpaaggavhtrgldfacdiyiwaplagtcgvlllslvitlyckrgrkkllyifkqpfmrpvqttqeedgcscrfpeeeeggcelrvkfsrsadapaykqgqnqlynelnlgrreeydvldkrrgrdpemggkprrknpqeglynelqkdkmaeayseigmkgerrrgkghdglyqglstatkdtydalhmqalppr
Последовательность нуклеиновой кислоты 149362 Полный CAR	234	atggccctccctgtcaccgccctgctgcttccgctggctcttctgctccacgccgctcggccccaagtgcagcttcaggaaagcggaccgggcctggtcaagccatccgaaactctctccctgacttgcactgtgtctggcggttccatctcatcgtcgtactactactggggctggattaggcagccgcccggaaagggactggagtggatcggaagcatctactattccggctcggcgtactacaaccctagcctcaagtcgagagtgaccatctccgtggatacctccaagaaccagttttccctgcgcctgagctccgtgaccgccgctgacaccgccgtgtactactgtgctcggcattggcaggaatggcccgatgccttcgacatttggggccagggcactatggtcactgtgtcatccgggggtggaggcagcgggggaggagggtccggggggggaggttcagagacaaccttgacccagtcacccgcattcatgtccgccactccgggagacaaggtcatcatctcgtgcaaagcgtcccaggatatcgacgatgccatgaattggtaccagcagaagcctggcgaagcgccgctgttcattatccaatccgcaacctcgcccgtgcctggaatcccaccgcggttcagcggcagcggtttcggaaccgacttttccctgaccattaacaacattgagtccgaggacgccgcctactacttctgcctgcaacacgacaacttccctctcacgttcggccagggaaccaagctggaaatcaagaccactaccccagcaccgaggccacccaccccggctcctaccatcgcctcccagcctctgtccctgcgtccggaggcatgtagacccgcagctggtggggccgtgcatacccggggtcttgacttcgcctgcgatatctacatttgggcccctctggctggtacttgcggggtcctgctgctttcactcgtgatcactctttactgtaagcgcggtcggaagaagctgctgtacatctttaagcaacccttcatgaggcctgtgcagactactcaagaggaggacggctgttcatgccggttcccagaggaggaggaaggcggctgcgaactgcgcgtgaaattcagccgcagcgcagatgctccagcctacaagcaggggcagaaccagctctacaacgaactcaatcttggtcggagagaggagtacgacgtgctggacaagcggagaggacgggacccagaaatgggcgggaagccgcgcagaaagaatccccaagagggcctgtacaacgagctccaaaaggataagatggcagaagcctatagcgagattggtatgaaaggggaacgcagaagaggcaaaggccacgacggactgtaccagggactcagcaccgccaccaaggacacctatgacgctcttcacatgcaggccctgccgcctcgg
149363
Аминокислотная последовательность 149363 ScFV-домен	130	vnlresgpalvkptqtltltctfsgfslrtsgmcvswirqppgkalewlaridwdedkfystslktrltiskdtsdnqvvlrmtnmdpadtatyycarsgaggtsatafdiwgpgtmvtvssggggsggggsggggsdiqmtqspsslsasvgdrvtitcrasqdiynnlawfqlkpgsaprslmyaanksqsgvpsrfsgsasgtdftltisslqpedfatyycqhyyrfpysfgqgtkleik
Последовательность нуклеиновой кислоты 149363 ScFV-домен	151	caagtcaatctgcgcgaatccggccccgccttggtcaagcctacccagaccctcactctgacctgtactttctccggcttctccctgcggacttccgggatgtgcgtgtcctggatcagacagcctccgggaaaggccctggagtggctcgctcgcattgactgggatgaggacaagttctactccacctcactcaagaccaggctgaccatcagcaaagatacctctgacaaccaagtggtgctccgcatgaccaacatggacccagccgacactgccacttactactgcgcgaggagcggagcgggcggaacctccgccaccgccttcgatatttggggcccgggtaccatggtcaccgtgtcaagcggaggaggggggtccgggggcggcggttccgggggaggcggatcggacattcagatgactcagtcaccatcgtccctgagcgctagcgtgggcgacagagtgacaatcacttgccgggcatcccaggacatctataacaaccttgcgtggttccagctgaagcctggttccgcaccgcggtcacttatgtacgccgccaacaagagccagtcgggagtgccgtcccggttttccggttcggcctcgggaactgacttcaccctgacgatctccagcctgcaacccgaggatttcgccacctactactgccagcactactaccgctttccctactcgttcggacagggaaccaagctggaaatcaag
Аминокислотная последовательность 149363 VH	172	QVNLRESGPALVKPTQTLTLTCTFSGFSLRTSGMCVSWIRQPPGKALEWLARIDWDEDKFYSTSLKTRLTISKDTSDNQVVLRMTNMDPADTATYYCARSGAGGTSATAFDIWGPGTMVTVSS
Аминокислотная последовательность 149363 VL	193	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDIYNNLAWFQLKPGSAPRSLMYAANKSQSGVPSRFSGSASGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHYYRFPYSFGQGTKLEIK
Аминокислотная последовательность 149363 Полный CAR	214	malpvtalllplalllhaarpqvnlresgpalvkptqtltltctfsgfslrtsgmcvswirqppgkalewlaridwdedkfystslktrltiskdtsdnqvvlrmtnmdpadtatyycarsgaggtsatafdiwgpgtmvtvssggggsggggsggggsdiqmtqspsslsasvgdrvtitcrasqdiynnlawfqlkpgsaprslmyaanksqsgvpsrfsgsasgtdftltisslqpedfatyycqhyyrfpysfgqgtkleiktttpaprpptpaptiasqplslrpeacrpaaggavhtrgldfacdiyiwaplagtcgvlllslvitlyckrgrkkllyifkqpfmrpvqttqeedgcscrfpeeeeggcelrvkfsrsadapaykqgqnqlynelnlgrreeydvldkrrgrdpemggkprrknpqeglynelqkdkmaeayseigmkgerrrgkghdglyqglstatkdtydalhmqalppr
Последовательность нуклеиновой кислоты 149363 Полный CAR	235	atggccctccctgtcaccgccctgctgcttccgctggctcttctgctccacgccgctcggccccaagtcaatctgcgcgaatccggccccgccttggtcaagcctacccagaccctcactctgacctgtactttctccggcttctccctgcggacttccgggatgtgcgtgtcctggatcagacagcctccgggaaaggccctggagtggctcgctcgcattgactgggatgaggacaagttctactccacctcactcaagaccaggctgaccatcagcaaagatacctctgacaaccaagtggtgctccgcatgaccaacatggacccagccgacactgccacttactactgcgcgaggagcggagcgggcggaacctccgccaccgccttcgatatttggggcccgggtaccatggtcaccgtgtcaagcggaggaggggggtccgggggcggcggttccgggggaggcggatcggacattcagatgactcagtcaccatcgtccctgagcgctagcgtgggcgacagagtgacaatcacttgccgggcatcccaggacatctataacaaccttgcgtggttccagctgaagcctggttccgcaccgcggtcacttatgtacgccgccaacaagagccagtcgggagtgccgtcccggttttccggttcggcctcgggaactgacttcaccctgacgatctccagcctgcaacccgaggatttcgccacctactactgccagcactactaccgctttccctactcgttcggacagggaaccaagctggaaatcaagaccactaccccagcaccgaggccacccaccccggctcctaccatcgcctcccagcctctgtccctgcgtccggaggcatgtagacccgcagctggtggggccgtgcatacccggggtcttgacttcgcctgcgatatctacatttgggcccctctggctggtacttgcggggtcctgctgctttcactcgtgatcactctttactgtaagcgcggtcggaagaagctgctgtacatctttaagcaacccttcatgaggcctgtgcagactactcaagaggaggacggctgttcatgccggttcccagaggaggaggaaggcggctgcgaactgcgcgtgaaattcagccgcagcgcagatgctccagcctacaagcaggggcagaaccagctctacaacgaactcaatcttggtcggagagaggagtacgacgtgctggacaagcggagaggacgggacccagaaatgggcgggaagccgcgcagaaagaatccccaagagggcctgtacaacgagctccaaaaggataagatggcagaagcctatagcgagattggtatgaaaggggaacgcagaagaggcaaaggccacgacggactgtaccagggactcagcaccgccaccaaggacacctatgacgctcttcacatgcaggccctgccgcctcgg
149364
Аминокислотная последовательность 149364 ScFV-домен	131	evqlvesggglvkpggslrlscaasgftfssysmnwvrqapgkglewvssisssssyiyyadsvkgrftisrdnaknslylqmnslraedtavyycaktiaavyafdiwgqgttvtvssggggsggggsggggseivltqsplslpvtpeepasiscrssqsllhsngynyldwylqkpgqspqlliylgsnrasgvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedvgvyycmqalqtpytfgqgtkleik
Последовательность нуклеиновой кислоты 149364 ScFV-домен	152	gaagtgcagcttgtcgaatccggggggggactggtcaagccgggcggatcactgagactgtcctgcgccgcgagcggcttcacgttctcctcctactccatgaactgggtccgccaagcccccgggaagggactggaatgggtgtcctctatctcctcgtcgtcgtcctacatctactacgccgactccgtgaagggaagattcaccatttcccgcgacaacgcaaagaactcactgtacttgcaaatgaactcactccgggccgaagatactgctgtgtactattgcgccaagactattgccgccgtctacgctttcgacatctggggccagggaaccaccgtgactgtgtcgtccggtggtggtggctcgggcggaggaggaagcggcggcggggggtccgagattgtgctgacccagtcgccactgagcctccctgtgacccccgaggaacccgccagcatcagctgccggtccagccagtccctgctccactccaacggatacaattacctcgattggtaccttcagaagcctggacaaagcccgcagctgctcatctacttgggatcaaaccgcgcgtcaggagtgcctgaccggttctccggctcgggcagcggtaccgatttcaccctgaaaatctccagggtggaggcagaggacgtgggagtgtattactgtatgcaggcgctgcagactccgtacacatttgggcagggcaccaagctggagatcaag
Аминокислотная последовательность 149364 VH	173	EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSSYSMNWVRQAPGKGLEWVSSISSSSSYIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKTIAAVYAFDIWGQGTTVTVSS
Аминокислотная последовательность 149364 VL	194	EIVLTQSPLSLPVTPEEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPYTFGQGTKLEIK
Аминокислотная последовательность 149364 Полный CAR	215	malpvtalllplalllhaarpevqlvesggglvkpggslrlscaasgftfssysmnwvrqapgkglewvssisssssyiyyadsvkgrftisrdnaknslylqmnslraedtavyycaktiaavyafdiwgqgttvtvssggggsggggsggggseivltqsplslpvtpeepasiscrssqsllhsngynyldwylqkpgqspqlliylgsnrasgvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedvgvyycmqalqtpytfgqgtkleiktttpaprpptpaptiasqplslrpeacrpaaggavhtrgldfacdiyiwaplagtcgvlllslvitlyckrgrkkllyifkqpfmrpvqttqeedgcscrfpeeeeggcelrvkfsrsadapaykqgqnqlynelnlgrreeydvldkrrgrdpemggkprrknpqeglynelqkdkmaeayseigmkgerrrgkghdglyqglstatkdtydalhmqalppr
Последовательность нуклеиновой кислоты 149364 Полный CAR	236	atggccctccctgtcaccgccctgctgcttccgctggctcttctgctccacgccgctcggcccgaagtgcagcttgtcgaatccggggggggactggtcaagccgggcggatcactgagactgtcctgcgccgcgagcggcttcacgttctcctcctactccatgaactgggtccgccaagcccccgggaagggactggaatgggtgtcctctatctcctcgtcgtcgtcctacatctactacgccgactccgtgaagggaagattcaccatttcccgcgacaacgcaaagaactcactgtacttgcaaatgaactcactccgggccgaagatactgctgtgtactattgcgccaagactattgccgccgtctacgctttcgacatctggggccagggaaccaccgtgactgtgtcgtccggtggtggtggctcgggcggaggaggaagcggcggcggggggtccgagattgtgctgacccagtcgccactgagcctccctgtgacccccgaggaacccgccagcatcagctgccggtccagccagtccctgctccactccaacggatacaattacctcgattggtaccttcagaagcctggacaaagcccgcagctgctcatctacttgggatcaaaccgcgcgtcaggagtgcctgaccggttctccggctcgggcagcggtaccgatttcaccctgaaaatctccagggtggaggcagaggacgtgggagtgtattactgtatgcaggcgctgcagactccgtacacatttgggcagggcaccaagctggagatcaagaccactaccccagcaccgaggccacccaccccggctcctaccatcgcctcccagcctctgtccctgcgtccggaggcatgtagacccgcagctggtggggccgtgcatacccggggtcttgacttcgcctgcgatatctacatttgggcccctctggctggtacttgcggggtcctgctgctttcactcgtgatcactctttactgtaagcgcggtcggaagaagctgctgtacatctttaagcaacccttcatgaggcctgtgcagactactcaagaggaggacggctgttcatgccggttcccagaggaggaggaaggcggctgcgaactgcgcgtgaaattcagccgcagcgcagatgctccagcctacaagcaggggcagaaccagctctacaacgaactcaatcttggtcggagagaggagtacgacgtgctggacaagcggagaggacgggacccagaaatgggcgggaagccgcgcagaaagaatccccaagagggcctgtacaacgagctccaaaaggataagatggcagaagcctatagcgagattggtatgaaaggggaacgcagaagaggcaaaggccacgacggactgtaccagggactcagcaccgccaccaaggacacctatgacgctcttcacatgcaggccctgccgcctcgg
149365
Аминокислотная последовательность 149365 ScFV-домен	132	evqlvesggglvkpggslrlscaasgftfsdyymswirqapgkglewvsyisssgstiyyadsvkgrftisrdnaknslylqmnslraedtavyycardlrgafdiwgqgtmvtvssggggsggggsggggssyvltqspsvsaapgytatiscggnnigtksvhwyqqkpgqapllvirddsvrpskipgrfsgsnsgnmatltisgvqagdeadfycqvwdsdsehvvfgggtkltvl
Последовательность нуклеиновой кислоты 149365 ScFV-домен	153	gaagtccagctcgtggagtccggcggaggccttgtgaagcctggaggttcgctgagactgtcctgcgccgcctccggcttcaccttctccgactactacatgtcctggatcagacaggccccgggaaagggcctggaatgggtgtcctacatctcgtcatcgggcagcactatctactacgcggactcagtgaaggggcggttcaccatttcccgggataacgcgaagaactcgctgtatctgcaaatgaactcactgagggccgaggacaccgccgtgtactactgcgcccgcgatctccgcggggcatttgacatctggggacagggaaccatggtcacagtgtccagcggagggggaggatcgggtggcggaggttccgggggtggaggctcctcctacgtgctgactcagagcccaagcgtcagcgctgcgcccggttacacggcaaccatctcctgtggcggaaacaacattgggaccaagtctgtgcactggtatcagcagaagccgggccaagctcccctgttggtgatccgcgatgactccgtgcggcctagcaaaattccgggacggttctccggctccaacagcggcaatatggccactctcaccatctcgggagtgcaggccggagatgaagccgacttctactgccaagtctgggactcagactccgagcatgtggtgttcgggggcggaaccaagctgactgtgctc
Аминокислотная последовательность 149365 VH	174	EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMSWIRQAPGKGLEWVSYISSSGSTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDLRGAFDIWGQGTMVTVSS
Аминокислотная последовательность 149365 VL	195	SYVLTQSPSVSAAPGYTATISCGGNNIGTKSVHWYQQKPGQAPLLVIRDDSVRPSKIPGRFSGSNSGNMATLTISGVQAGDEADFYCQVWDSDSEHVVFGGGTKLTVL
Аминокислотная последовательность 149365 Полный CAR	216	malpvtalllplalllhaarpevqlvesggglvkpggslrlscaasgftfsdyymswirqapgkglewvsyisssgstiyyadsvkgrftisrdnaknslylqmnslraedtavyycardlrgafdiwgqgtmvtvssggggsggggsggggssyvltqspsvsaapgytatiscggnnigtksvhwyqqkpgqapllvirddsvrpskipgrfsgsnsgnmatltisgvqagdeadfycqvwdsdsehvvfgggtkltvltttpaprpptpaptiasqplslrpeacrpaaggavhtrgldfacdiyiwaplagtcgvlllslvitlyckrgrkkllyifkqpfmrpvqttqeedgcscrfpeeeeggcelrvkfsrsadapaykqgqnqlynelnlgrreeydvldkrrgrdpemggkprrknpqeglynelqkdkmaeayseigmkgerrrgkghdglyqglstatkdtydalhmqalppr
Последовательность нуклеиновой кислоты 149365 Полный CAR	237	atggccctccctgtcaccgccctgctgcttccgctggctcttctgctccacgccgctcggcccgaagtccagctcgtggagtccggcggaggccttgtgaagcctggaggttcgctgagactgtcctgcgccgcctccggcttcaccttctccgactactacatgtcctggatcagacaggccccgggaaagggcctggaatgggtgtcctacatctcgtcatcgggcagcactatctactacgcggactcagtgaaggggcggttcaccatttcccgggataacgcgaagaactcgctgtatctgcaaatgaactcactgagggccgaggacaccgccgtgtactactgcgcccgcgatctccgcggggcatttgacatctggggacagggaaccatggtcacagtgtccagcggagggggaggatcgggtggcggaggttccgggggtggaggctcctcctacgtgctgactcagagcccaagcgtcagcgctgcgcccggttacacggcaaccatctcctgtggcggaaacaacattgggaccaagtctgtgcactggtatcagcagaagccgggccaagctcccctgttggtgatccgcgatgactccgtgcggcctagcaaaattccgggacggttctccggctccaacagcggcaatatggccactctcaccatctcgggagtgcaggccggagatgaagccgacttctactgccaagtctgggactcagactccgagcatgtggtgttcgggggcggaaccaagctgactgtgctcaccactaccccagcaccgaggccacccaccccggctcctaccatcgcctcccagcctctgtccctgcgtccggaggcatgtagacccgcagctggtggggccgtgcatacccggggtcttgacttcgcctgcgatatctacatttgggcccctctggctggtacttgcggggtcctgctgctttcactcgtgatcactctttactgtaagcgcggtcggaagaagctgctgtacatctttaagcaacccttcatgaggcctgtgcagactactcaagaggaggacggctgttcatgccggttcccagaggaggaggaaggcggctgcgaactgcgcgtgaaattcagccgcagcgcagatgctccagcctacaagcaggggcagaaccagctctacaacgaactcaatcttggtcggagagaggagtacgacgtgctggacaagcggagaggacgggacccagaaatgggcgggaagccgcgcagaaagaatccccaagagggcctgtacaacgagctccaaaaggataagatggcagaagcctatagcgagattggtatgaaaggggaacgcagaagaggcaaaggccacgacggactgtaccagggactcagcaccgccaccaaggacacctatgacgctcttcacatgcaggccctgccgcctcgg
149366
Аминокислотная последовательность 149366 ScFV-домен	133	qvqlvqsgaevkkpgasvkvsckpsgytvtshyihwvrrapgqglewmgminpsggvtaysqtlqgrvtmtsdtssstvymelsslrsedtamyycaregsgsgwyfdfwgrgtlvtvssggggsggggsggggssyvltqppsvsvspgqtasitcsgdglskkyvswyqqkagqspvvlisrdkerpsgipdrfsgsnsadtatltisgtqamdeadyycqawddttvvfgggtkltvl
Последовательность нуклеиновой кислоты 149366 ScFV-домен	154	caagtgcagctggtgcagagcggggccgaagtcaagaagccgggagcctccgtgaaagtgtcctgcaagccttcgggatacaccgtgacctcccactacattcattgggtccgccgcgcccccggccaaggactcgagtggatgggcatgatcaaccctagcggcggagtgaccgcgtacagccagacgctgcagggacgcgtgactatgacctcggatacctcctcctccaccgtctatatggaactgtccagcctgcggtccgaggataccgccatgtactactgcgcccgggaaggatcaggctccgggtggtatttcgacttctggggaagaggcaccctcgtgactgtgtcatctgggggagggggttccggtggtggcggatcgggaggaggcggttcatcctacgtgctgacccagccaccctccgtgtccgtgagccccggccagactgcatcgattacatgtagcggcgacggcctctccaagaaatacgtgtcgtggtaccagcagaaggccggacagagcccggtggtgctgatctcaagagataaggagcggcctagcggaatcccggacaggttctcgggttccaactccgcggacactgctactctgaccatctcggggacccaggctatggacgaagccgattactactgccaagcctgggacgacactactgtcgtgtttggagggggcaccaagttgaccgtcctt
Аминокислотная последовательность 149366 VH	175	QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKPSGYTVTSHYIHWVRRAPGQGLEWMGMINPSGGVTAYSQTLQGRVTMTSDTSSSTVYMELSSLRSEDTAMYYCAREGSGSGWYFDFWGRGTLVTVSS
Аминокислотная последовательность 149366 VL	196	SYVLTQPPSVSVSPGQTASITCSGDGLSKKYVSWYQQKAGQSPVVLISRDKERPSGIPDRFSGSNSADTATLTISGTQAMDEADYYCQAWDDTTVVFGGGTKLTVL
Аминокислотная последовательность 149366 Полный CAR	217	malpvtalllplalllhaarpqvqlvqsgaevkkpgasvkvsckpsgytvtshyihwvrrapgqglewmgminpsggvtaysqtlqgrvtmtsdtssstvymelsslrsedtamyycaregsgsgwyfdfwgrgtlvtvssggggsggggsggggssyvltqppsvsvspgqtasitcsgdglskkyvswyqqkagqspvvlisrdkerpsgipdrfsgsnsadtatltisgtqamdeadyycqawddttvvfgggtkltvltttpaprpptpaptiasqplslrpeacrpaaggavhtrgldfacdiyiwaplagtcgvlllslvitlyckrgrkkllyifkqpfmrpvqttqeedgcscrfpeeeeggcelrvkfsrsadapaykqgqnqlynelnlgrreeydvldkrrgrdpemggkprrknpqeglynelqkdkmaeayseigmkgerrrgkghdglyqglstatkdtydalhmqalppr
Последовательность нуклеиновой кислоты 149366 Полный CAR	238	atggccctccctgtcaccgccctgctgcttccgctggctcttctgctccacgccgctcggccccaagtgcagctggtgcagagcggggccgaagtcaagaagccgggagcctccgtgaaagtgtcctgcaagccttcgggatacaccgtgacctcccactacattcattgggtccgccgcgcccccggccaaggactcgagtggatgggcatgatcaaccctagcggcggagtgaccgcgtacagccagacgctgcagggacgcgtgactatgacctcggatacctcctcctccaccgtctatatggaactgtccagcctgcggtccgaggataccgccatgtactactgcgcccgggaaggatcaggctccgggtggtatttcgacttctggggaagaggcaccctcgtgactgtgtcatctgggggagggggttccggtggtggcggatcgggaggaggcggttcatcctacgtgctgacccagccaccctccgtgtccgtgagccccggccagactgcatcgattacatgtagcggcgacggcctctccaagaaatacgtgtcgtggtaccagcagaaggccggacagagcccggtggtgctgatctcaagagataaggagcggcctagcggaatcccggacaggttctcgggttccaactccgcggacactgctactctgaccatctcggggacccaggctatggacgaagccgattactactgccaagcctgggacgacactactgtcgtgtttggagggggcaccaagttgaccgtccttaccactaccccagcaccgaggccacccaccccggctcctaccatcgcctcccagcctctgtccctgcgtccggaggcatgtagacccgcagctggtggggccgtgcatacccggggtcttgacttcgcctgcgatatctacatttgggcccctctggctggtacttgcggggtcctgctgctttcactcgtgatcactctttactgtaagcgcggtcggaagaagctgctgtacatctttaagcaacccttcatgaggcctgtgcagactactcaagaggaggacggctgttcatgccggttcccagaggaggaggaaggcggctgcgaactgcgcgtgaaattcagccgcagcgcagatgctccagcctacaagcaggggcagaaccagctctacaacgaactcaatcttggtcggagagaggagtacgacgtgctggacaagcggagaggacgggacccagaaatgggcgggaagccgcgcagaaagaatccccaagagggcctgtacaacgagctccaaaaggataagatggcagaagcctatagcgagattggtatgaaaggggaacgcagaagaggcaaaggccacgacggactgtaccagggactcagcaccgccaccaaggacacctatgacgctcttcacatgcaggccctgccgcctcgg
149367
Аминокислотная последовательность 149367 ScFV-домен	134	qvqlqesgpglvkpsqtlsltctvsggsissggyywswirqhpgkglewigyiyysgstyynpslksrvtisvdtsknqfslklssvtaadtavyycaragiaarlrgafdiwgqgtmvtvssggggsggggsggggsdivmtqspssvsasvgdrviitcrasqgirnwlawyqqkpgkapnlliyaasnlqsgvpsrfsgsgsgadftltisslqpedvatyycqkynsapftfgpgtkvdik
Последовательность нуклеиновой кислоты 149367 ScFV-домен	155	caagtgcagcttcaggagagcggcccgggactcgtgaagccgtcccagaccctgtccctgacttgcaccgtgtcgggaggaagcatctcgagcggaggctactattggtcgtggattcggcagcaccctggaaagggcctggaatggatcggctacatctactactccggctcgacctactacaacccatcgctgaagtccagagtgacaatctcagtggacacgtccaagaatcagttcagcctgaagctctcttccgtgactgcggccgacaccgccgtgtactactgcgcacgcgctggaattgccgcccggctgaggggtgccttcgacatttggggacagggcaccatggtcaccgtgtcctccggcggcggaggttccgggggtggaggctcaggaggaggggggtccgacatcgtcatgactcagtcgccctcaagcgtcagcgcgtccgtcggggacagagtgatcatcacctgtcgggcgtcccagggaattcgcaactggctggcctggtatcagcagaagcccggaaaggcccccaacctgttgatctacgccgcctcaaacctccaatccggggtgccgagccgcttcagcggctccggttcgggtgccgatttcactctgaccatctcctccctgcaacctgaagatgtggctacctactactgccaaaagtacaactccgcaccttttactttcggaccggggaccaaagtggacattaag
Аминокислотная последовательность 149367 VH	176	QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISSGGYYWSWIRQHPGKGLEWIGYIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARAGIAARLRGAFDIWGQGTMVTVSS
Аминокислотная последовательность 149367 VL	197	DIVMTQSPSSVSASVGDRVIITCRASQGIRNWLAWYQQKPGKAPNLLIYAASNLQSGVPSRFSGSGSGADFTLTISSLQPEDVATYYCQKYNSAPFTFGPGTKVDIK
Аминокислотная последовательность 149367 Полный CAR	218	malpvtalllplalllhaarpqvqlqesgpglvkpsqtlsltctvsggsissggyywswirqhpgkglewigyiyysgstyynpslksrvtisvdtsknqfslklssvtaadtavyycaragiaarlrgafdiwgqgtmvtvssggggsggggsggggsdivmtqspssvsasvgdrviitcrasqgirnwlawyqqkpgkapnlliyaasnlqsgvpsrfsgsgsgadftltisslqpedvatyycqkynsapftfgpgtkvdiktttpaprpptpaptiasqplslrpeacrpaaggavhtrgldfacdiyiwaplagtcgvlllslvitlyckrgrkkllyifkqpfmrpvqttqeedgcscrfpeeeeggcelrvkfsrsadapaykqgqnqlynelnlgrreeydvldkrrgrdpemggkprrknpqeglynelqkdkmaeayseigmkgerrrgkghdglyqglstatkdtydalhmqalppr
Последовательность нуклеиновой кислоты 149367 Полный CAR	239	atggccctccctgtcaccgccctgctgcttccgctggctcttctgctccacgccgctcggccccaagtgcagcttcaggagagcggcccgggactcgtgaagccgtcccagaccctgtccctgacttgcaccgtgtcgggaggaagcatctcgagcggaggctactattggtcgtggattcggcagcaccctggaaagggcctggaatggatcggctacatctactactccggctcgacctactacaacccatcgctgaagtccagagtgacaatctcagtggacacgtccaagaatcagttcagcctgaagctctcttccgtgactgcggccgacaccgccgtgtactactgcgcacgcgctggaattgccgcccggctgaggggtgccttcgacatttggggacagggcaccatggtcaccgtgtcctccggcggcggaggttccgggggtggaggctcaggaggaggggggtccgacatcgtcatgactcagtcgccctcaagcgtcagcgcgtccgtcggggacagagtgatcatcacctgtcgggcgtcccagggaattcgcaactggctggcctggtatcagcagaagcccggaaaggcccccaacctgttgatctacgccgcctcaaacctccaatccggggtgccgagccgcttcagcggctccggttcgggtgccgatttcactctgaccatctcctccctgcaacctgaagatgtggctacctactactgccaaaagtacaactccgcaccttttactttcggaccggggaccaaagtggacattaagaccactaccccagcaccgaggccacccaccccggctcctaccatcgcctcccagcctctgtccctgcgtccggaggcatgtagacccgcagctggtggggccgtgcatacccggggtcttgacttcgcctgcgatatctacatttgggcccctctggctggtacttgcggggtcctgctgctttcactcgtgatcactctttactgtaagcgcggtcggaagaagctgctgtacatctttaagcaacccttcatgaggcctgtgcagactactcaagaggaggacggctgttcatgccggttcccagaggaggaggaaggcggctgcgaactgcgcgtgaaattcagccgcagcgcagatgctccagcctacaagcaggggcagaaccagctctacaacgaactcaatcttggtcggagagaggagtacgacgtgctggacaagcggagaggacgggacccagaaatgggcgggaagccgcgcagaaagaatccccaagagggcctgtacaacgagctccaaaaggataagatggcagaagcctatagcgagattggtatgaaaggggaacgcagaagaggcaaaggccacgacggactgtaccagggactcagcaccgccaccaaggacacctatgacgctcttcacatgcaggccctgccgcctcgg
149368
Аминокислотная последовательность 149368 ScFV-домен	135	qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckasggtfssyaiswvrqapgqglewmggiipifgtanyaqkfqgrvtitadeststaymelsslrsedtavyycarrggyqllrwdvgllrsafdiwgqgtmvtvssggggsggggsggggssyvltqppsvsvapgqtaritcggnnigsksvhwyqqkpgqapvlvlygknnrpsgvpdrfsgsrsgttasltitgaqaedeadyycssrdssgdhlrvfgtgtkvtvl
Последовательность нуклеиновой кислоты 149368 ScFV-домен	156	caagtgcagctggtccagtcgggcgccgaggtcaagaagcccgggagctctgtgaaagtgtcctgcaaggcctccgggggcacctttagctcctacgccatctcctgggtccgccaagcaccgggtcaaggcctggagtggatggggggaattatccctatcttcggcactgccaactacgcccagaagttccagggacgcgtgaccattaccgcggacgaatccacctccaccgcttatatggagctgtccagcttgcgctcggaagataccgccgtgtactactgcgcccggaggggtggataccagctgctgagatgggacgtgggcctcctgcggtcggcgttcgacatctggggccagggcactatggtcactgtgtccagcggaggaggcggatcgggaggcggcggatcagggggaggcggttccagctacgtgcttactcaacccccttcggtgtccgtggccccgggacagaccgccagaatcacttgcggaggaaacaacattgggtccaagagcgtgcattggtaccagcagaagccaggacaggcccctgtgctggtgctctacgggaagaacaatcggcccagcggagtgccggacaggttctcgggttcacgctccggtacaaccgcttcactgactatcaccggggcccaggcagaggatgaagcggactactactgttcctcccgggattcatccggcgaccacctccgggtgttcggaaccggaacgaaggtcaccgtgctg
Аминокислотная последовательность 149368 VH	177	QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARRGGYQLLRWDVGLLRSAFDIWGQGTMVTVSS
Аминокислотная последовательность 149368 VL	198	SYVLTQPPSVSVAPGQTARITCGGNNIGSKSVHWYQQKPGQAPVLVLYGKNNRPSGVPDRFSGSRSGTTASLTITGAQAEDEADYYCSSRDSSGDHLRVFGTGTKVTVL
Аминокислотная последовательность 149368 Полный CAR	219	malpvtalllplalllhaarpqvqlvqsgaevkkpgssvkvsckasggtfssyaiswvrqapgqglewmggiipifgtanyaqkfqgrvtitadeststaymelsslrsedtavyycarrggyqllrwdvgllrsafdiwgqgtmvtvssggggsggggsggggssyvltqppsvsvapgqtaritcggnnigsksvhwyqqkpgqapvlvlygknnrpsgvpdrfsgsrsgttasltitgaqaedeadyycssrdssgdhlrvfgtgtkvtvltttpaprpptpaptiasqplslrpeacrpaaggavhtrgldfacdiyiwaplagtcgvlllslvitlyckrgrkkllyifkqpfmrpvqttqeedgcscrfpeeeeggcelrvkfsrsadapaykqgqnqlynelnlgrreeydvldkrrgrdpemggkprrknpqeglynelqkdkmaeayseigmkgerrrgkghdglyqglstatkdtydalhmqalppr
Последовательность нуклеиновой кислоты 149368 Полный CAR	240	atggccctccctgtcaccgccctgctgcttccgctggctcttctgctccacgccgctcggccccaagtgcagctggtccagtcgggcgccgaggtcaagaagcccgggagctctgtgaaagtgtcctgcaaggcctccgggggcacctttagctcctacgccatctcctgggtccgccaagcaccgggtcaaggcctggagtggatggggggaattatccctatcttcggcactgccaactacgcccagaagttccagggacgcgtgaccattaccgcggacgaatccacctccaccgcttatatggagctgtccagcttgcgctcggaagataccgccgtgtactactgcgcccggaggggtggataccagctgctgagatgggacgtgggcctcctgcggtcggcgttcgacatctggggccagggcactatggtcactgtgtccagcggaggaggcggatcgggaggcggcggatcagggggaggcggttccagctacgtgcttactcaacccccttcggtgtccgtggccccgggacagaccgccagaatcacttgcggaggaaacaacattgggtccaagagcgtgcattggtaccagcagaagccaggacaggcccctgtgctggtgctctacgggaagaacaatcggcccagcggagtgccggacaggttctcgggttcacgctccggtacaaccgcttcactgactatcaccggggcccaggcagaggatgaagcggactactactgttcctcccgggattcatccggcgaccacctccgggtgttcggaaccggaacgaaggtcaccgtgctgaccactaccccagcaccgaggccacccaccccggctcctaccatcgcctcccagcctctgtccctgcgtccggaggcatgtagacccgcagctggtggggccgtgcatacccggggtcttgacttcgcctgcgatatctacatttgggcccctctggctggtacttgcggggtcctgctgctttcactcgtgatcactctttactgtaagcgcggtcggaagaagctgctgtacatctttaagcaacccttcatgaggcctgtgcagactactcaagaggaggacggctgttcatgccggttcccagaggaggaggaaggcggctgcgaactgcgcgtgaaattcagccgcagcgcagatgctccagcctacaagcaggggcagaaccagctctacaacgaactcaatcttggtcggagagaggagtacgacgtgctggacaagcggagaggacgggacccagaaatgggcgggaagccgcgcagaaagaatccccaagagggcctgtacaacgagctccaaaaggataagatggcagaagcctatagcgagattggtatgaaaggggaacgcagaagaggcaaaggccacgacggactgtaccagggactcagcaccgccaccaaggacacctatgacgctcttcacatgcaggccctgccgcctcgg
149369
Аминокислотная последовательность 149369 ScFV-домен	136	evqlqqsgpglvkpsqtlsltcaisgdsvssnsaawnwirqspsrglewlgrtyyrskwysfyaislksriiinpdtsknqfslqlksvtpedtavyycarsspeglflywfdpwgqgtlvtvssggdgsggggsggggssseltqdpavsvalgqtiritcqgdslgnyyatwyqqkpgqapvlviygtnnrpsgipdrfsasssgntasltitgaqaedeadyycnsrdssghhllfgtgtkvtvl
Последовательность нуклеиновой кислоты 149369 ScFV-домен	157	gaagtgcagctccaacagtcaggaccggggctcgtgaagccatcccagaccctgtccctgacttgtgccatctcgggagatagcgtgtcatcgaactccgccgcctggaactggattcggcagagcccgtcccgcggactggagtggcttggaaggacctactaccggtccaagtggtactctttctacgcgatctcgctgaagtcccgcattatcattaaccctgatacctccaagaatcagttctccctccaactgaaatccgtcacccccgaggacacagcagtgtattactgcgcacggagcagccccgaaggactgttcctgtattggtttgacccctggggccaggggactcttgtgaccgtgtcgagcggcggagatgggtccggtggcggtggttcggggggcggcggatcatcatccgaactgacccaggacccggctgtgtccgtggcgctgggacaaaccatccgcattacgtgccagggagactccctgggcaactactacgccacttggtaccagcagaagccgggccaagcccctgtgttggtcatctacgggaccaacaacagaccttccggcatccccgaccggttcagcgcttcgtcctccggcaacactgccagcctgaccatcactggagcgcaggccgaagatgaggccgactactactgcaacagcagagactcctcgggtcatcacctcttgttcggaactggaaccaaggtcaccgtgctg
Аминокислотная последовательность 149369 VH	178	EVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSSNSAAWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYSFYAISLKSRIIINPDTSKNQFSLQLKSVTPEDTAVYYCARSSPEGLFLYWFDPWGQGTLVTVSS
Аминокислотная последовательность 149369 VL	199	SSELTQDPAVSVALGQTIRITCQGDSLGNYYATWYQQKPGQAPVLVIYGTNNRPSGIPDRFSASSSGNTASLTITGAQAEDEADYYCNSRDSSGHHLLFGTGTKVTVL
Аминокислотная последовательность 149369 Полный CAR	220	malpvtalllplalllhaarpevqlqqsgpglvkpsqtlsltcaisgdsvssnsaawnwirqspsrglewlgrtyyrskwysfyaislksriiinpdtsknqfslqlksvtpedtavyycarsspeglflywfdpwgqgtlvtvssggdgsggggsggggssseltqdpavsvalgqtiritcqgdslgnyyatwyqqkpgqapvlviygtnnrpsgipdrfsasssgntasltitgaqaedeadyycnsrdssghhllfgtgtkvtvltttpaprpptpaptiasqplslrpeacrpaaggavhtrgldfacdiyiwaplagtcgvlllslvitlyckrgrkkllyifkqpfmrpvqttqeedgcscrfpeeeeggcelrvkfsrsadapaykqgqnqlynelnlgrreeydvldkrrgrdpemggkprrknpqeglynelqkdkmaeayseigmkgerrrgkghdglyqglstatkdtydalhmqalppr
Последовательность нуклеиновой кислоты 149369 Полный CAR	241	atggccctccctgtcaccgccctgctgcttccgctggctcttctgctccacgccgctcggcccgaagtgcagctccaacagtcaggaccggggctcgtgaagccatcccagaccctgtccctgacttgtgccatctcgggagatagcgtgtcatcgaactccgccgcctggaactggattcggcagagcccgtcccgcggactggagtggcttggaaggacctactaccggtccaagtggtactctttctacgcgatctcgctgaagtcccgcattatcattaaccctgatacctccaagaatcagttctccctccaactgaaatccgtcacccccgaggacacagcagtgtattactgcgcacggagcagccccgaaggactgttcctgtattggtttgacccctggggccaggggactcttgtgaccgtgtcgagcggcggagatgggtccggtggcggtggttcggggggcggcggatcatcatccgaactgacccaggacccggctgtgtccgtggcgctgggacaaaccatccgcattacgtgccagggagactccctgggcaactactacgccacttggtaccagcagaagccgggccaagcccctgtgttggtcatctacgggaccaacaacagaccttccggcatccccgaccggttcagcgcttcgtcctccggcaacactgccagcctgaccatcactggagcgcaggccgaagatgaggccgactactactgcaacagcagagactcctcgggtcatcacctcttgttcggaactggaaccaaggtcaccgtgctgaccactaccccagcaccgaggccacccaccccggctcctaccatcgcctcccagcctctgtccctgcgtccggaggcatgtagacccgcagctggtggggccgtgcatacccggggtcttgacttcgcctgcgatatctacatttgggcccctctggctggtacttgcggggtcctgctgctttcactcgtgatcactctttactgtaagcgcggtcggaagaagctgctgtacatctttaagcaacccttcatgaggcctgtgcagactactcaagaggaggacggctgttcatgccggttcccagaggaggaggaaggcggctgcgaactgcgcgtgaaattcagccgcagcgcagatgctccagcctacaagcaggggcagaaccagctctacaacgaactcaatcttggtcggagagaggagtacgacgtgctggacaagcggagaggacgggacccagaaatgggcgggaagccgcgcagaaagaatccccaagagggcctgtacaacgagctccaaaaggataagatggcagaagcctatagcgagattggtatgaaaggggaacgcagaagaggcaaaggccacgacggactgtaccagggactcagcaccgccaccaaggacacctatgacgctcttcacatgcaggccctgccgcctcgg
BCMA_EBB-C1978-A4
Аминокислотная последовательность BCMA_EBB-C1978-A4 ScFV-домен	137	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVEGSGSLDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEIVMTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSAYLAWYQQKPGQPPRLLISGASTRATGIPDRFGGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQHYGSSFNGSSLFTFGQGTRLEIK
Последовательность нуклеиновой кислоты BCMA_EBB-C1978-A4 ScFV-домен	158	GAAGTGCAGCTCGTGGAGTCAGGAGGCGGCCTGGTCCAGCCGGGAGGGTCCCTTAGACTGTCATGCGCCGCAAGCGGATTCACTTTCTCCTCCTATGCCATGAGCTGGGTCCGCCAAGCCCCCGGAAAGGGACTGGAATGGGTGTCCGCCATCTCGGGGTCTGGAGGCTCAACTTACTACGCTGACTCCGTGAAGGGACGGTTCACCATTAGCCGCGACAACTCCAAGAACACCCTCTACCTCCAAATGAACTCCCTGCGGGCCGAGGATACCGCCGTCTACTACTGCGCCAAAGTGGAAGGTTCAGGATCGCTGGACTACTGGGGACAGGGTACTCTCGTGACCGTGTCATCGGGCGGAGGAGGTTCCGGCGGTGGCGGCTCCGGCGGCGGAGGGTCGGAGATCGTGATGACCCAGAGCCCTGGTACTCTGAGCCTTTCGCCGGGAGAAAGGGCCACCCTGTCCTGCCGCGCTTCCCAATCCGTGTCCTCCGCGTACTTGGCGTGGTACCAGCAGAAGCCGGGACAGCCCCCTCGGCTGCTGATCAGCGGGGCCAGCACCCGGGCAACCGGAATCCCAGACAGATTCGGGGGTTCCGGCAGCGGCACAGATTTCACCCTGACTATTTCGAGGTTGGAGCCCGAGGACTTTGCGGTGTATTACTGTCAGCACTACGGGTCGTCCTTTAATGGCTCCAGCCTGTTCACGTTCGGACAGGGGACCCGCCTGGAAATCAAG
Аминокислотная последовательность BCMA_EBB-C1978-A4 VH	179	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVEGSGSLDYWGQGTLVTVSS
Аминокислотная последовательность BCMA_EBB-C1978-A4 VL	200	EIVMTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSAYLAWYQQKPGQPPRLLISGASTRATGIPDRFGGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQHYGSSFNGSSLFTFGQGTRLEIK
Аминокислотная последовательность BCMA_EBB-C1978-A4 Полный CART	221	MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVEGSGSLDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEIVMTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSAYLAWYQQKPGQPPRLLISGASTRATGIPDRFGGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQHYGSSFNGSSLFTFGQGTRLEIKTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
Последовательность нуклеиновой кислоты BCMA_EBB-C1978-A4 Полный CART	242	ATGGCCCTCCCTGTCACCGCCCTGCTGCTTCCGCTGGCTCTTCTGCTCCACGCCGCTCGGCCCGAAGTGCAGCTCGTGGAGTCAGGAGGCGGCCTGGTCCAGCCGGGAGGGTCCCTTAGACTGTCATGCGCCGCAAGCGGATTCACTTTCTCCTCCTATGCCATGAGCTGGGTCCGCCAAGCCCCCGGAAAGGGACTGGAATGGGTGTCCGCCATCTCGGGGTCTGGAGGCTCAACTTACTACGCTGACTCCGTGAAGGGACGGTTCACCATTAGCCGCGACAACTCCAAGAACACCCTCTACCTCCAAATGAACTCCCTGCGGGCCGAGGATACCGCCGTCTACTACTGCGCCAAAGTGGAAGGTTCAGGATCGCTGGACTACTGGGGACAGGGTACTCTCGTGACCGTGTCATCGGGCGGAGGAGGTTCCGGCGGTGGCGGCTCCGGCGGCGGAGGGTCGGAGATCGTGATGACCCAGAGCCCTGGTACTCTGAGCCTTTCGCCGGGAGAAAGGGCCACCCTGTCCTGCCGCGCTTCCCAATCCGTGTCCTCCGCGTACTTGGCGTGGTACCAGCAGAAGCCGGGACAGCCCCCTCGGCTGCTGATCAGCGGGGCCAGCACCCGGGCAACCGGAATCCCAGACAGATTCGGGGGTTCCGGCAGCGGCACAGATTTCACCCTGACTATTTCGAGGTTGGAGCCCGAGGACTTTGCGGTGTATTACTGTCAGCACTACGGGTCGTCCTTTAATGGCTCCAGCCTGTTCACGTTCGGACAGGGGACCCGCCTGGAAATCAAGACCACTACCCCAGCACCGAGGCCACCCACCCCGGCTCCTACCATCGCCTCCCAGCCTCTGTCCCTGCGTCCGGAggcatgtagacccgcagctggtggggccgtgcatacccggggtcttgacttcgcctgcgatatctacatttgggcccctctggctggtacttgcggggtcctgctgctttcactcgtgatcactctttactgtaagcgcggtcggaagaagctgctgtacatctttaagcaacccttcatgaggcctgtgcagactactcaagaggaggacggctgttcatgccggttcccagaggaggaggaaggcggctgcgaactgcgcgtgaaattcagccgcagcgcagatgctccagcctacaagcaggggcagaaccagctctacaacgaactcaatcttggtcggagagaggagtacgacgtgctggacaagcggagaggacgggacccagaaatgggcgggaagccgcgcagaaagaatccccaagagggcctgtacaacgagctccaaaaggataagatggcagaagcctatagcgagattggtatgaaaggggaacgcagaagaggcaaaggccacgacggactgtaccagggactcagcaccgccaccaaggacacctatgacgctcttcacatgcaggccctgccgcctcgg
BCMA_EBB-C1978-G1
Аминокислотная последовательность BCMA_EBB-C1978-G1 ScFV-домен	138	EVQLVETGGGLVQPGGSLRLSCAASGITFSRYPMSWVRQAPGKGLEWVSGISDSGVSTYYADSAKGRFTISRDNSKNTLFLQMSSLRDEDTAVYYCVTRAGSEASDIWGQGTMVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSNSLAWYQQKPGQAPRLLIYDASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAIYYCQQFGTSSGLTFGGGTKLEIK
Последовательность нуклеиновой кислоты BCMA_EBB-C1978-G1 ScFV-домен	159	GAAGTGCAACTGGTGGAAACCGGTGGCGGCCTGGTGCAGCCTGGAGGATCATTGAGGCTGTCATGCGCGGCCAGCGGTATTACCTTCTCCCGGTACCCCATGTCCTGGGTCAGACAGGCCCCGGGGAAAGGGCTTGAATGGGTGTCCGGGATCTCGGACTCCGGTGTCAGCACTTACTACGCCGACTCCGCCAAGGGACGCTTCACCATTTCCCGGGACAACTCGAAGAACACCCTGTTCCTCCAAATGAGCTCCCTCCGGGACGAGGATACTGCAGTGTACTACTGCGTGACCCGCGCCGGGTCCGAGGCGTCTGACATTTGGGGACAGGGCACTATGGTCACCGTGTCGTCCGGCGGAGGGGGCTCGGGAGGCGGTGGCAGCGGAGGAGGAGGGTCCGAGATCGTGCTGACCCAATCCCCGGCCACCCTCTCGCTGAGCCCTGGAGAAAGGGCAACCTTGTCCTGTCGCGCGAGCCAGTCCGTGAGCAACTCCCTGGCCTGGTACCAGCAGAAGCCCGGACAGGCTCCGAGACTTCTGATCTACGACGCTTCGAGCCGGGCCACTGGAATCCCCGACCGCTTTTCGGGGTCCGGCTCAGGAACCGATTTCACCCTGACAATCTCACGGCTGGAGCCAGAGGATTTCGCCATCTATTACTGCCAGCAGTTCGGTACTTCCTCCGGCCTGACTTTCGGAGGCGGCACGAAGCTCGAAATCAAG
Аминокислотная последовательность BCMA_EBB-C1978-G1 VH	180	EVQLVETGGGLVQPGGSLRLSCAASGITFSRYPMSWVRQAPGKGLEWVSGISDSGVSTYYADSAKGRFTISRDNSKNTLFLQMSSLRDEDTAVYYCVTRAGSEASDIWGQGTMVTVSS
Аминокислотная последовательность BCMA_EBB-C1978-G1 VL	201	EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSNSLAWYQQKPGQAPRLLIYDASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAIYYCQQFGTSSGLTFGGGTKLEIK
Аминокислотная последовательность BCMA_EBB-C1978-G1 Полный CART	222	MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLVETGGGLVQPGGSLRLSCAASGITFSRYPMSWVRQAPGKGLEWVSGISDSGVSTYYADSAKGRFTISRDNSKNTLFLQMSSLRDEDTAVYYCVTRAGSEASDIWGQGTMVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSNSLAWYQQKPGQAPRLLIYDASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAIYYCQQFGTSSGLTFGGGTKLEIKTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
Последовательность нуклеиновой кислоты BCMA_EBB-C1978-G1 Полный CART	243	ATGGCCCTCCCTGTCACCGCCCTGCTGCTTCCGCTGGCTCTTCTGCTCCACGCCGCTCGGCCCGAAGTGCAACTGGTGGAAACCGGTGGCGGCCTGGTGCAGCCTGGAGGATCATTGAGGCTGTCATGCGCGGCCAGCGGTATTACCTTCTCCCGGTACCCCATGTCCTGGGTCAGACAGGCCCCGGGGAAAGGGCTTGAATGGGTGTCCGGGATCTCGGACTCCGGTGTCAGCACTTACTACGCCGACTCCGCCAAGGGACGCTTCACCATTTCCCGGGACAACTCGAAGAACACCCTGTTCCTCCAAATGAGCTCCCTCCGGGACGAGGATACTGCAGTGTACTACTGCGTGACCCGCGCCGGGTCCGAGGCGTCTGACATTTGGGGACAGGGCACTATGGTCACCGTGTCGTCCGGCGGAGGGGGCTCGGGAGGCGGTGGCAGCGGAGGAGGAGGGTCCGAGATCGTGCTGACCCAATCCCCGGCCACCCTCTCGCTGAGCCCTGGAGAAAGGGCAACCTTGTCCTGTCGCGCGAGCCAGTCCGTGAGCAACTCCCTGGCCTGGTACCAGCAGAAGCCCGGACAGGCTCCGAGACTTCTGATCTACGACGCTTCGAGCCGGGCCACTGGAATCCCCGACCGCTTTTCGGGGTCCGGCTCAGGAACCGATTTCACCCTGACAATCTCACGGCTGGAGCCAGAGGATTTCGCCATCTATTACTGCCAGCAGTTCGGTACTTCCTCCGGCCTGACTTTCGGAGGCGGCACGAAGCTCGAAATCAAGACCACTACCCCAGCACCGAGGCCACCCACCCCGGCTCCTACCATCGCCTCCCAGCCTCTGTCCCTGCGTCCGGAggcatgtagacccgcagctggtggggccgtgcatacccggggtcttgacttcgcctgcgatatctacatttgggcccctctggctggtacttgcggggtcctgctgctttcactcgtgatcactctttactgtaagcgcggtcggaagaagctgctgtacatctttaagcaacccttcatgaggcctgtgcagactactcaagaggaggacggctgttcatgccggttcccagaggaggaggaaggcggctgcgaactgcgcgtgaaattcagccgcagcgcagatgctccagcctacaagcaggggcagaaccagctctacaacgaactcaatcttggtcggagagaggagtacgacgtgctggacaagcggagaggacgggacccagaaatgggcgggaagccgcgcagaaagaatccccaagagggcctgtacaacgagctccaaaaggataagatggcagaagcctatagcgagattggtatgaaaggggaacgcagaagaggcaaaggccacgacggactgtaccagggactcagcaccgccaccaaggacacctatgacgctcttcacatgcaggccctgccgcctcgg
BCMA_EBB-C1979-C1
Аминокислотная последовательность BCMA_EBB-C1979-C1 ScFV-домен	139	QVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAIYYCARATYKRELRYYYGMDVWGQGTMVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEIVMTQSPGTVSLSPGERATLSCRASQSVSSSFLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDSAVYYCQQYHSSPSWTFGQGTRLEIK
Последовательность нуклеиновой кислоты BCMA_EBB-C1979-C1 ScFV-домен	160	CAAGTGCAGCTCGTGGAATCGGGTGGCGGACTGGTGCAGCCGGGGGGCTCACTTAGACTGTCCTGCGCGGCCAGCGGATTCACTTTCTCCTCCTACGCCATGTCCTGGGTCAGACAGGCCCCTGGAAAGGGCCTGGAATGGGTGTCCGCAATCAGCGGCAGCGGCGGCTCGACCTATTACGCGGATTCAGTGAAGGGCAGATTCACCATTTCCCGGGACAACGCCAAGAACTCCTTGTACCTTCAAATGAACTCCCTCCGCGCGGAAGATACCGCAATCTACTACTGCGCTCGGGCCACTTACAAGAGGGAACTGCGCTACTACTACGGGATGGACGTCTGGGGCCAGGGAACCATGGTCACCGTGTCCAGCGGAGGAGGAGGATCGGGAGGAGGCGGTAGCGGGGGTGGAGGGTCGGAGATCGTGATGACCCAGTCCCCCGGCACTGTGTCGCTGTCCCCCGGCGAACGGGCCACCCTGTCATGTCGGGCCAGCCAGTCAGTGTCGTCAAGCTTCCTCGCCTGGTACCAGCAGAAACCGGGACAAGCTCCCCGCCTGCTGATCTACGGAGCCAGCAGCCGGGCCACCGGTATTCCTGACCGGTTCTCCGGTTCGGGGTCCGGGACCGACTTTACTCTGACTATCTCTCGCCTCGAGCCAGAGGACTCCGCCGTGTATTACTGCCAGCAGTACCACTCCTCCCCGTCCTGGACGTTCGGACAGGGCACAAGGCTGGAGATTAAG
Аминокислотная последовательность BCMA_EBB-C1979-C1 VH	181	QVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAIYYCARATYKRELRYYYGMDVWGQGTMVTVSS
Аминокислотная последовательность BCMA_EBB-C1979-C1 VL	202	EIVMTQSPGTVSLSPGERATLSCRASQSVSSSFLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDSAVYYCQQYHSSPSWTFGQGTRLEIK
Аминокислотная последовательность Полный BCMA_EBB-C1979-C1 CART	223	MALPVTALLLPLALLLHAARPQVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAIYYCARATYKRELRYYYGMDVWGQGTMVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEIVMTQSPGTVSLSPGERATLSCRASQSVSSSFLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDSAVYYCQQYHSSPSWTFGQGTRLEIKTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
Последовательность нуклеиновой кислоты BCMA_EBB-C1979-C1 Полный CART	244	ATGGCCCTCCCTGTCACCGCCCTGCTGCTTCCGCTGGCTCTTCTGCTCCACGCCGCTCGGCCCCAAGTGCAGCTCGTGGAATCGGGTGGCGGACTGGTGCAGCCGGGGGGCTCACTTAGACTGTCCTGCGCGGCCAGCGGATTCACTTTCTCCTCCTACGCCATGTCCTGGGTCAGACAGGCCCCTGGAAAGGGCCTGGAATGGGTGTCCGCAATCAGCGGCAGCGGCGGCTCGACCTATTACGCGGATTCAGTGAAGGGCAGATTCACCATTTCCCGGGACAACGCCAAGAACTCCTTGTACCTTCAAATGAACTCCCTCCGCGCGGAAGATACCGCAATCTACTACTGCGCTCGGGCCACTTACAAGAGGGAACTGCGCTACTACTACGGGATGGACGTCTGGGGCCAGGGAACCATGGTCACCGTGTCCAGCGGAGGAGGAGGATCGGGAGGAGGCGGTAGCGGGGGTGGAGGGTCGGAGATCGTGATGACCCAGTCCCCCGGCACTGTGTCGCTGTCCCCCGGCGAACGGGCCACCCTGTCATGTCGGGCCAGCCAGTCAGTGTCGTCAAGCTTCCTCGCCTGGTACCAGCAGAAACCGGGACAAGCTCCCCGCCTGCTGATCTACGGAGCCAGCAGCCGGGCCACCGGTATTCCTGACCGGTTCTCCGGTTCGGGGTCCGGGACCGACTTTACTCTGACTATCTCTCGCCTCGAGCCAGAGGACTCCGCCGTGTATTACTGCCAGCAGTACCACTCCTCCCCGTCCTGGACGTTCGGACAGGGCACAAGGCTGGAGATTAAGACCACTACCCCAGCACCGAGGCCACCCACCCCGGCTCCTACCATCGCCTCCCAGCCTCTGTCCCTGCGTCCGGAggcatgtagacccgcagctggtggggccgtgcatacccggggtcttgacttcgcctgcgatatctacatttgggcccctctggctggtacttgcggggtcctgctgctttcactcgtgatcactctttactgtaagcgcggtcggaagaagctgctgtacatctttaagcaacccttcatgaggcctgtgcagactactcaagaggaggacggctgttcatgccggttcccagaggaggaggaaggcggctgcgaactgcgcgtgaaattcagccgcagcgcagatgctccagcctacaagcaggggcagaaccagctctacaacgaactcaatcttggtcggagagaggagtacgacgtgctggacaagcggagaggacgggacccagaaatgggcgggaagccgcgcagaaagaatccccaagagggcctgtacaacgagctccaaaaggataagatggcagaagcctatagcgagattggtatgaaaggggaacgcagaagaggcaaaggccacgacggactgtaccagggactcagcaccgccaccaaggacacctatgacgctcttcacatgcaggccctgccgcctcgg
BCMA_EBB-C1978-C7
Аминокислотная последовательность BCMA_EBB-C1978-C7 ScFV-домен	140	EVQLVETGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNTLKAEDTAVYYCARATYKRELRYYYGMDVWGQGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEIVLTQSPSTLSLSPGESATLSCRASQSVSTTFLAWYQQKPGQAPRLLIYGSSNRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTIRRLEPEDFAVYYCQQYHSSPSWTFGQGTKVEIK
Последовательность нуклеиновой кислоты BCMA_EBB-C1978-C7 ScFV-домен	161	GAGGTGCAGCTTGTGGAAACCGGTGGCGGACTGGTGCAGCCCGGAGGAAGCCTCAGGCTGTCCTGCGCCGCGTCCGGCTTCACCTTCTCCTCGTACGCCATGTCCTGGGTCCGCCAGGCCCCCGGAAAGGGCCTGGAATGGGTGTCCGCCATCTCTGGAAGCGGAGGTTCCACGTACTACGCGGACAGCGTCAAGGGAAGGTTCACAATCTCCCGCGATAATTCGAAGAACACTCTGTACCTTCAAATGAACACCCTGAAGGCCGAGGACACTGCTGTGTACTACTGCGCACGGGCCACCTACAAGAGAGAGCTCCGGTACTACTACGGAATGGACGTCTGGGGCCAGGGAACTACTGTGACCGTGTCCTCGGGAGGGGGTGGCTCCGGGGGGGGCGGCTCCGGCGGAGGCGGTTCCGAGATTGTGCTGACCCAGTCACCTTCAACTCTGTCGCTGTCCCCGGGAGAGAGCGCTACTCTGAGCTGCCGGGCCAGCCAGTCCGTGTCCACCACCTTCCTCGCCTGGTATCAGCAGAAGCCGGGGCAGGCACCACGGCTCTTGATCTACGGGTCAAGCAACAGAGCGACCGGAATTCCTGACCGCTTCTCGGGGAGCGGTTCAGGCACCGACTTCACCCTGACTATCCGGCGCCTGGAACCCGAAGATTTCGCCGTGTATTACTGTCAACAGTACCACTCCTCGCCGTCCTGGACCTTTGGCCAAGGAACCAAAGTGGAAATCAAG
Аминокислотная последовательность BCMA_EBB-C1978-C7 VH	182	EVQLVETGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNTLKAEDTAVYYCARATYKRELRYYYGMDVWGQGTTVTVSS
Аминокислотная последовательность BCMA_EBB-C1978-C7 VL	203	EIVLTQSPSTLSLSPGESATLSCRASQSVSTTFLAWYQQKPGQAPRLLIYGSSNRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTIRRLEPEDFAVYYCQQYHSSPSWTFGQGTKVEIK
Аминокислотная последовательность BCMA_EBB-C1978-C7 Полный CART	224	MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLVETGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNTLKAEDTAVYYCARATYKRELRYYYGMDVWGQGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEIVLTQSPSTLSLSPGESATLSCRASQSVSTTFLAWYQQKPGQAPRLLIYGSSNRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTIRRLEPEDFAVYYCQQYHSSPSWTFGQGTKVEIKTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
Последовательность нуклеиновой кислоты BCMA_EBB-C1978-C7 Полный CART	245	ATGGCCCTCCCTGTCACCGCCCTGCTGCTTCCGCTGGCTCTTCTGCTCCACGCCGCTCGGCCCGAGGTGCAGCTTGTGGAAACCGGTGGCGGACTGGTGCAGCCCGGAGGAAGCCTCAGGCTGTCCTGCGCCGCGTCCGGCTTCACCTTCTCCTCGTACGCCATGTCCTGGGTCCGCCAGGCCCCCGGAAAGGGCCTGGAATGGGTGTCCGCCATCTCTGGAAGCGGAGGTTCCACGTACTACGCGGACAGCGTCAAGGGAAGGTTCACAATCTCCCGCGATAATTCGAAGAACACTCTGTACCTTCAAATGAACACCCTGAAGGCCGAGGACACTGCTGTGTACTACTGCGCACGGGCCACCTACAAGAGAGAGCTCCGGTACTACTACGGAATGGACGTCTGGGGCCAGGGAACTACTGTGACCGTGTCCTCGGGAGGGGGTGGCTCCGGGGGGGGCGGCTCCGGCGGAGGCGGTTCCGAGATTGTGCTGACCCAGTCACCTTCAACTCTGTCGCTGTCCCCGGGAGAGAGCGCTACTCTGAGCTGCCGGGCCAGCCAGTCCGTGTCCACCACCTTCCTCGCCTGGTATCAGCAGAAGCCGGGGCAGGCACCACGGCTCTTGATCTACGGGTCAAGCAACAGAGCGACCGGAATTCCTGACCGCTTCTCGGGGAGCGGTTCAGGCACCGACTTCACCCTGACTATCCGGCGCCTGGAACCCGAAGATTTCGCCGTGTATTACTGTCAACAGTACCACTCCTCGCCGTCCTGGACCTTTGGCCAAGGAACCAAAGTGGAAATCAAGACCACTACCCCAGCACCGAGGCCACCCACCCCGGCTCCTACCATCGCCTCCCAGCCTCTGTCCCTGCGTCCGGAggcatgtagacccgcagctggtggggccgtgcatacccggggtcttgacttcgcctgcgatatctacatttgggcccctctggctggtacttgcggggtcctgctgctttcactcgtgatcactctttactgtaagcgcggtcggaagaagctgctgtacatctttaagcaacccttcatgaggcctgtgcagactactcaagaggaggacggctgttcatgccggttcccagaggaggaggaaggcggctgcgaactgcgcgtgaaattcagccgcagcgcagatgctccagcctacaagcaggggcagaaccagctctacaacgaactcaatcttggtcggagagaggagtacgacgtgctggacaagcggagaggacgggacccagaaatgggcgggaagccgcgcagaaagaatccccaagagggcctgtacaacgagctccaaaaggataagatggcagaagcctatagcgagattggtatgaaaggggaacgcagaagaggcaaaggccacgacggactgtaccagggactcagcaccgccaccaaggacacctatgacgctcttcacatgcaggccctgccgcctcgg
BCMA_EBB-C1978-D10
Аминокислотная последовательность BCMA_EBB-C1978-D10 ScFV-домен	141	EVQLVETGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGISWNSGSIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRDEDTAVYYCARVGKAVPDVWGQGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQTPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTPYSFGQGTRLEIK
Последовательность нуклеиновой кислоты BCMA_EBB-C1978-D10 ScFV-домен	162	GAAGTGCAGCTCGTGGAAACTGGAGGTGGACTCGTGCAGCCTGGACGGTCGCTGCGGCTGAGCTGCGCTGCATCCGGCTTCACCTTCGACGATTATGCCATGCACTGGGTCAGACAGGCGCCAGGGAAGGGACTTGAGTGGGTGTCCGGTATCAGCTGGAATAGCGGCTCAATCGGATACGCGGACTCCGTGAAGGGAAGGTTCACCATTTCCCGCGACAACGCCAAGAACTCCCTGTACTTGCAAATGAACAGCCTCCGGGATGAGGACACTGCCGTGTACTACTGCGCCCGCGTCGGAAAAGCTGTGCCCGACGTCTGGGGCCAGGGAACCACTGTGACCGTGTCCAGCGGCGGGGGTGGATCGGGCGGTGGAGGGTCCGGTGGAGGGGGCTCAGATATTGTGATGACCCAGACCCCCTCGTCCCTGTCCGCCTCGGTCGGCGACCGCGTGACTATCACATGTAGAGCCTCGCAGAGCATCTCCAGCTACCTGAACTGGTATCAGCAGAAGCCGGGGAAGGCCCCGAAGCTCCTGATCTACGCGGCATCATCACTGCAATCGGGAGTGCCGAGCCGGTTTTCCGGGTCCGGCTCCGGCACCGACTTCACGCTGACCATTTCTTCCCTGCAACCCGAGGACTTCGCCACTTACTACTGCCAGCAGTCCTACTCCACCCCTTACTCCTTCGGCCAAGGAACCAGGCTGGAAATCAAG
Аминокислотная последовательность BCMA_EBB-C1978-D10 VH	183	EVQLVETGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGISWNSGSIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRDEDTAVYYCARVGKAVPDVWGQGTTVTVSS
Аминокислотная последовательность BCMA_EBB-C1978-D10 VL	204	DIVMTQTPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTPYSFGQGTRLEIK
Аминокислотная последовательность BCMA_EBB-C1978-D10 Полный CART	225	MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLVETGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGISWNSGSIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRDEDTAVYYCARVGKAVPDVWGQGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQTPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTPYSFGQGTRLEIKTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
Последовательность нуклеиновой кислоты BCMA_EBB-C1978-D10 Полный CART	246	ATGGCCCTCCCTGTCACCGCCCTGCTGCTTCCGCTGGCTCTTCTGCTCCACGCCGCTCGGCCCGAAGTGCAGCTCGTGGAAACTGGAGGTGGACTCGTGCAGCCTGGACGGTCGCTGCGGCTGAGCTGCGCTGCATCCGGCTTCACCTTCGACGATTATGCCATGCACTGGGTCAGACAGGCGCCAGGGAAGGGACTTGAGTGGGTGTCCGGTATCAGCTGGAATAGCGGCTCAATCGGATACGCGGACTCCGTGAAGGGAAGGTTCACCATTTCCCGCGACAACGCCAAGAACTCCCTGTACTTGCAAATGAACAGCCTCCGGGATGAGGACACTGCCGTGTACTACTGCGCCCGCGTCGGAAAAGCTGTGCCCGACGTCTGGGGCCAGGGAACCACTGTGACCGTGTCCAGCGGCGGGGGTGGATCGGGCGGTGGAGGGTCCGGTGGAGGGGGCTCAGATATTGTGATGACCCAGACCCCCTCGTCCCTGTCCGCCTCGGTCGGCGACCGCGTGACTATCACATGTAGAGCCTCGCAGAGCATCTCCAGCTACCTGAACTGGTATCAGCAGAAGCCGGGGAAGGCCCCGAAGCTCCTGATCTACGCGGCATCATCACTGCAATCGGGAGTGCCGAGCCGGTTTTCCGGGTCCGGCTCCGGCACCGACTTCACGCTGACCATTTCTTCCCTGCAACCCGAGGACTTCGCCACTTACTACTGCCAGCAGTCCTACTCCACCCCTTACTCCTTCGGCCAAGGAACCAGGCTGGAAATCAAGACCACTACCCCAGCACCGAGGCCACCCACCCCGGCTCCTACCATCGCCTCCCAGCCTCTGTCCCTGCGTCCGGAggcatgtagacccgcagctggtggggccgtgcatacccggggtcttgacttcgcctgcgatatctacatttgggcccctctggctggtacttgcggggtcctgctgctttcactcgtgatcactctttactgtaagcgcggtcggaagaagctgctgtacatctttaagcaacccttcatgaggcctgtgcagactactcaagaggaggacggctgttcatgccggttcccagaggaggaggaaggcggctgcgaactgcgcgtgaaattcagccgcagcgcagatgctccagcctacaagcaggggcagaaccagctctacaacgaactcaatcttggtcggagagaggagtacgacgtgctggacaagcggagaggacgggacccagaaatgggcgggaagccgcgcagaaagaatccccaagagggcctgtacaacgagctccaaaaggataagatggcagaagcctatagcgagattggtatgaaaggggaacgcagaagaggcaaaggccacgacggactgtaccagggactcagcaccgccaccaaggacacctatgacgctcttcacatgcaggccctgccgcctcgg
BCMA_EBB-C1979-C12
BCMA_EBB-C1979-C12 Аминокислотная последовательность ScFV-домен	142	EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCTASGFTFDDYAMHWVRQRPGKGLEWVASINWKGNSLAYGDSVKGRFAISRDNAKNTVFLQMNSLRTEDTAVYYCASHQGVAYYNYAMDVWGRGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRATQSIGSSFLAWYQQRPGQAPRLLIYGASQRATGIPDRFSGRGSGTDFTLTISRVEPEDSAVYYCQHYESSPSWTFGQGTKVEIK
Последовательность нуклеиновой кислоты BCMA_EBB-C1979-C12 ScFV-домен	163	GAAGTGCAGCTCGTGGAGAGCGGGGGAGGATTGGTGCAGCCCGGAAGGTCCCTGCGGCTCTCCTGCACTGCGTCTGGCTTCACCTTCGACGACTACGCGATGCACTGGGTCAGACAGCGCCCGGGAAAGGGCCTGGAATGGGTCGCCTCAATCAACTGGAAGGGAAACTCCCTGGCCTATGGCGACAGCGTGAAGGGCCGCTTCGCCATTTCGCGCGACAACGCCAAGAACACCGTGTTTCTGCAAATGAATTCCCTGCGGACCGAGGATACCGCTGTGTACTACTGCGCCAGCCACCAGGGCGTGGCATACTATAACTACGCCATGGACGTGTGGGGAAGAGGGACGCTCGTCACCGTGTCCTCCGGGGGCGGTGGATCGGGTGGAGGAGGAAGCGGTGGCGGGGGCAGCGAAATCGTGCTGACTCAGAGCCCGGGAACTCTTTCACTGTCCCCGGGAGAACGGGCCACTCTCTCGTGCCGGGCCACCCAGTCCATCGGCTCCTCCTTCCTTGCCTGGTACCAGCAGAGGCCAGGACAGGCGCCCCGCCTGCTGATCTACGGTGCTTCCCAACGCGCCACTGGCATTCCTGACCGGTTCAGCGGCAGAGGGTCGGGAACCGATTTCACACTGACCATTTCCCGGGTGGAGCCCGAAGATTCGGCAGTCTACTACTGTCAGCATTACGAGTCCTCCCCTTCATGGACCTTCGGTCAAGGGACCAAAGTGGAGATCAAG
Аминокислотная последовательность BCMA_EBB-C1979-C12 VH	184	EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCTASGFTFDDYAMHWVRQRPGKGLEWVASINWKGNSLAYGDSVKGRFAISRDNAKNTVFLQMNSLRTEDTAVYYCASHQGVAYYNYAMDVWGRGTLVTVSS
Аминокислотная последовательность BCMA_EBB-C1979-C12 VL	205	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRATQSIGSSFLAWYQQRPGQAPRLLIYGASQRATGIPDRFSGRGSGTDFTLTISRVEPEDSAVYYCQHYESSPSWTFGQGTKVEIK
Аминокислотная последовательность BCMA_EBB-C1979-C12 Полный CART	226	MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCTASGFTFDDYAMHWVRQRPGKGLEWVASINWKGNSLAYGDSVKGRFAISRDNAKNTVFLQMNSLRTEDTAVYYCASHQGVAYYNYAMDVWGRGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRATQSIGSSFLAWYQQRPGQAPRLLIYGASQRATGIPDRFSGRGSGTDFTLTISRVEPEDSAVYYCQHYESSPSWTFGQGTKVEIKTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
Последовательность нуклеиновой кислоты BCMA_EBB-C1979-C12 Полный CART	247	ATGGCCCTCCCTGTCACCGCCCTGCTGCTTCCGCTGGCTCTTCTGCTCCACGCCGCTCGGCCCGAAGTGCAGCTCGTGGAGAGCGGGGGAGGATTGGTGCAGCCCGGAAGGTCCCTGCGGCTCTCCTGCACTGCGTCTGGCTTCACCTTCGACGACTACGCGATGCACTGGGTCAGACAGCGCCCGGGAAAGGGCCTGGAATGGGTCGCCTCAATCAACTGGAAGGGAAACTCCCTGGCCTATGGCGACAGCGTGAAGGGCCGCTTCGCCATTTCGCGCGACAACGCCAAGAACACCGTGTTTCTGCAAATGAATTCCCTGCGGACCGAGGATACCGCTGTGTACTACTGCGCCAGCCACCAGGGCGTGGCATACTATAACTACGCCATGGACGTGTGGGGAAGAGGGACGCTCGTCACCGTGTCCTCCGGGGGCGGTGGATCGGGTGGAGGAGGAAGCGGTGGCGGGGGCAGCGAAATCGTGCTGACTCAGAGCCCGGGAACTCTTTCACTGTCCCCGGGAGAACGGGCCACTCTCTCGTGCCGGGCCACCCAGTCCATCGGCTCCTCCTTCCTTGCCTGGTACCAGCAGAGGCCAGGACAGGCGCCCCGCCTGCTGATCTACGGTGCTTCCCAACGCGCCACTGGCATTCCTGACCGGTTCAGCGGCAGAGGGTCGGGAACCGATTTCACACTGACCATTTCCCGGGTGGAGCCCGAAGATTCGGCAGTCTACTACTGTCAGCATTACGAGTCCTCCCCTTCATGGACCTTCGGTCAAGGGACCAAAGTGGAGATCAAGACCACTACCCCAGCACCGAGGCCACCCACCCCGGCTCCTACCATCGCCTCCCAGCCTCTGTCCCTGCGTCCGGAggcatgtagacccgcagctggtggggccgtgcatacccggggtcttgacttcgcctgcgatatctacatttgggcccctctggctggtacttgcggggtcctgctgctttcactcgtgatcactctttactgtaagcgcggtcggaagaagctgctgtacatctttaagcaacccttcatgaggcctgtgcagactactcaagaggaggacggctgttcatgccggttcccagaggaggaggaaggcggctgcgaactgcgcgtgaaattcagccgcagcgcagatgctccagcctacaagcaggggcagaaccagctctacaacgaactcaatcttggtcggagagaggagtacgacgtgctggacaagcggagaggacgggacccagaaatgggcgggaagccgcgcagaaagaatccccaagagggcctgtacaacgagctccaaaaggataagatggcagaagcctatagcgagattggtatgaaaggggaacgcagaagaggcaaaggccacgacggactgtaccagggactcagcaccgccaccaaggacacctatgacgctcttcacatgcaggccctgccgcctcgg
BCMA_EBB-C1980-G4
Аминокислотная последовательность BCMA_EBB-C1980-G4 ScFV-домен	143	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVVRDGMDVWGQGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGNGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSPPRFTFGPGTKVDIK
Последовательность нуклеиновой кислоты BCMA_EBB-C1980-G4 ScFV-домен	164	GAGGTGCAGTTGGTCGAAAGCGGGGGCGGGCTTGTGCAGCCTGGCGGATCACTGCGGCTGTCCTGCGCGGCATCAGGCTTCACGTTTTCTTCCTACGCCATGTCCTGGGTGCGCCAGGCCCCTGGAAAGGGACTGGAATGGGTGTCCGCGATTTCGGGGTCCGGCGGGAGCACCTACTACGCCGATTCCGTGAAGGGCCGCTTCACTATCTCGCGGGACAACTCCAAGAACACCCTCTACCTCCAAATGAATAGCCTGCGGGCCGAGGATACCGCCGTCTACTATTGCGCTAAGGTCGTGCGCGACGGAATGGACGTGTGGGGACAGGGTACCACCGTGACAGTGTCCTCGGGGGGAGGCGGTAGCGGCGGAGGAGGAAGCGGTGGTGGAGGTTCCGAGATTGTGCTGACTCAATCACCCGCGACCCTGAGCCTGTCCCCCGGCGAAAGGGCCACTCTGTCCTGTCGGGCCAGCCAATCAGTCTCCTCCTCGTACCTGGCCTGGTACCAGCAGAAGCCAGGACAGGCTCCGAGACTCCTTATCTATGGCGCATCCTCCCGCGCCACCGGAATCCCGGATAGGTTCTCGGGAAACGGATCGGGGACCGACTTCACTCTCACCATCTCCCGGCTGGAACCGGAGGACTTCGCCGTGTACTACTGCCAGCAGTACGGCAGCCCGCCTAGATTCACTTTCGGCCCCGGCACCAAAGTGGACATCAAG
Аминокислотная последовательность BCMA_EBB-C1980-G4 VH	185	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVVRDGMDVWGQGTTVTVSS
Аминокислотная последовательность BCMA_EBB-C1980-G4 VL	206	EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGNGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSPPRFTFGPGTKVDIK
Аминокислотная последовательность BCMA_EBB-C1980-G4 Полный CART	227	MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVVRDGMDVWGQGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGNGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSPPRFTFGPGTKVDIKTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
Последовательность нуклеиновой кислоты BCMA_EBB-C1980-G4 Полный CART	248	ATGGCCCTCCCTGTCACCGCCCTGCTGCTTCCGCTGGCTCTTCTGCTCCACGCCGCTCGGCCCGAGGTGCAGTTGGTCGAAAGCGGGGGCGGGCTTGTGCAGCCTGGCGGATCACTGCGGCTGTCCTGCGCGGCATCAGGCTTCACGTTTTCTTCCTACGCCATGTCCTGGGTGCGCCAGGCCCCTGGAAAGGGACTGGAATGGGTGTCCGCGATTTCGGGGTCCGGCGGGAGCACCTACTACGCCGATTCCGTGAAGGGCCGCTTCACTATCTCGCGGGACAACTCCAAGAACACCCTCTACCTCCAAATGAATAGCCTGCGGGCCGAGGATACCGCCGTCTACTATTGCGCTAAGGTCGTGCGCGACGGAATGGACGTGTGGGGACAGGGTACCACCGTGACAGTGTCCTCGGGGGGAGGCGGTAGCGGCGGAGGAGGAAGCGGTGGTGGAGGTTCCGAGATTGTGCTGACTCAATCACCCGCGACCCTGAGCCTGTCCCCCGGCGAAAGGGCCACTCTGTCCTGTCGGGCCAGCCAATCAGTCTCCTCCTCGTACCTGGCCTGGTACCAGCAGAAGCCAGGACAGGCTCCGAGACTCCTTATCTATGGCGCATCCTCCCGCGCCACCGGAATCCCGGATAGGTTCTCGGGAAACGGATCGGGGACCGACTTCACTCTCACCATCTCCCGGCTGGAACCGGAGGACTTCGCCGTGTACTACTGCCAGCAGTACGGCAGCCCGCCTAGATTCACTTTCGGCCCCGGCACCAAAGTGGACATCAAGACCACTACCCCAGCACCGAGGCCACCCACCCCGGCTCCTACCATCGCCTCCCAGCCTCTGTCCCTGCGTCCGGAggcatgtagacccgcagctggtggggccgtgcatacccggggtcttgacttcgcctgcgatatctacatttgggcccctctggctggtacttgcggggtcctgctgctttcactcgtgatcactctttactgtaagcgcggtcggaagaagctgctgtacatctttaagcaacccttcatgaggcctgtgcagactactcaagaggaggacggctgttcatgccggttcccagaggaggaggaaggcggctgcgaactgcgcgtgaaattcagccgcagcgcagatgctccagcctacaagcaggggcagaaccagctctacaacgaactcaatcttggtcggagagaggagtacgacgtgctggacaagcggagaggacgggacccagaaatgggcgggaagccgcgcagaaagaatccccaagagggcctgtacaacgagctccaaaaggataagatggcagaagcctatagcgagattggtatgaaaggggaacgcagaagaggcaaaggccacgacggactgtaccagggactcagcaccgccaccaaggacacctatgacgctcttcacatgcaggccctgccgcctcgg
BCMA_EBB-C1980-D2
Аминокислотная последовательность BCMA_EBB-C1980-D2 ScFV-домен	144	EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKIPQTGTFDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQRPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQHYGSSPSWTFGQGTRLEIK
Последовательность нуклеиновой кислоты BCMA_EBB-C1980-D2 ScFV-домен	165	GAAGTGCAGCTGCTGGAGTCCGGCGGTGGATTGGTGCAACCGGGGGGATCGCTCAGACTGTCCTGTGCGGCGTCAGGCTTCACCTTCTCGAGCTACGCCATGTCATGGGTCAGACAGGCCCCTGGAAAGGGTCTGGAATGGGTGTCCGCCATTTCCGGGAGCGGGGGATCTACATACTACGCCGATAGCGTGAAGGGCCGCTTCACCATTTCCCGGGACAACTCCAAGAACACTCTCTATCTGCAAATGAACTCCCTCCGCGCTGAGGACACTGCCGTGTACTACTGCGCCAAAATCCCTCAGACCGGCACCTTCGACTACTGGGGACAGGGGACTCTGGTCACCGTCAGCAGCGGTGGCGGAGGTTCGGGGGGAGGAGGAAGCGGCGGCGGAGGGTCCGAGATTGTGCTGACCCAGTCACCCGGCACTTTGTCCCTGTCGCCTGGAGAAAGGGCCACCCTTTCCTGCCGGGCATCCCAATCCGTGTCCTCCTCGTACCTGGCCTGGTACCAGCAGAGGCCCGGACAGGCCCCACGGCTTCTGATCTACGGAGCAAGCAGCCGCGCGACCGGTATCCCGGACCGGTTTTCGGGCTCGGGCTCAGGAACTGACTTCACCCTCACCATCTCCCGCCTGGAACCCGAAGATTTCGCTGTGTATTACTGCCAGCACTACGGCAGCTCCCCGTCCTGGACGTTCGGCCAGGGAACTCGGCTGGAGATCAAG
Аминокислотная последовательность BCMA_EBB-C1980-D2 VH	186	EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKIPQTGTFDYWGQGTLVTVSS
Аминокислотная последовательность BCMA_EBB-C1980-D2 VL	207	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQRPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQHYGSSPSWTFGQGTRLEIK
Аминокислотная последовательность BCMA_EBB-C1980-D2 Полный CART	228	MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKIPQTGTFDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQRPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQHYGSSPSWTFGQGTRLEIKTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
Последовательность нуклеиновой кислоты BCMA_EBB-C1980-D2 Полный CART	249	ATGGCCCTCCCTGTCACCGCCCTGCTGCTTCCGCTGGCTCTTCTGCTCCACGCCGCTCGGCCCGAAGTGCAGCTGCTGGAGTCCGGCGGTGGATTGGTGCAACCGGGGGGATCGCTCAGACTGTCCTGTGCGGCGTCAGGCTTCACCTTCTCGAGCTACGCCATGTCATGGGTCAGACAGGCCCCTGGAAAGGGTCTGGAATGGGTGTCCGCCATTTCCGGGAGCGGGGGATCTACATACTACGCCGATAGCGTGAAGGGCCGCTTCACCATTTCCCGGGACAACTCCAAGAACACTCTCTATCTGCAAATGAACTCCCTCCGCGCTGAGGACACTGCCGTGTACTACTGCGCCAAAATCCCTCAGACCGGCACCTTCGACTACTGGGGACAGGGGACTCTGGTCACCGTCAGCAGCGGTGGCGGAGGTTCGGGGGGAGGAGGAAGCGGCGGCGGAGGGTCCGAGATTGTGCTGACCCAGTCACCCGGCACTTTGTCCCTGTCGCCTGGAGAAAGGGCCACCCTTTCCTGCCGGGCATCCCAATCCGTGTCCTCCTCGTACCTGGCCTGGTACCAGCAGAGGCCCGGACAGGCCCCACGGCTTCTGATCTACGGAGCAAGCAGCCGCGCGACCGGTATCCCGGACCGGTTTTCGGGCTCGGGCTCAGGAACTGACTTCACCCTCACCATCTCCCGCCTGGAACCCGAAGATTTCGCTGTGTATTACTGCCAGCACTACGGCAGCTCCCCGTCCTGGACGTTCGGCCAGGGAACTCGGCTGGAGATCAAGACCACTACCCCAGCACCGAGGCCACCCACCCCGGCTCCTACCATCGCCTCCCAGCCTCTGTCCCTGCGTCCGGAggcatgtagacccgcagctggtggggccgtgcatacccggggtcttgacttcgcctgcgatatctacatttgggcccctctggctggtacttgcggggtcctgctgctttcactcgtgatcactctttactgtaagcgcggtcggaagaagctgctgtacatctttaagcaacccttcatgaggcctgtgcagactactcaagaggaggacggctgttcatgccggttcccagaggaggaggaaggcggctgcgaactgcgcgtgaaattcagccgcagcgcagatgctccagcctacaagcaggggcagaaccagctctacaacgaactcaatcttggtcggagagaggagtacgacgtgctggacaagcggagaggacgggacccagaaatgggcgggaagccgcgcagaaagaatccccaagagggcctgtacaacgagctccaaaaggataagatggcagaagcctatagcgagattggtatgaaaggggaacgcagaagaggcaaaggccacgacggactgtaccagggactcagcaccgccaccaaggacacctatgacgctcttcacatgcaggccctgccgcctcgg
BCMA_EBB-C1978-A10
Аминокислотная последовательность BCMA_EBB-C1978-A10 ScFV-домен	145	EVQLVETGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTMSRENDKNSVFLQMNSLRVEDTGVYYCARANYKRELRYYYGMDVWGQGTMVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEIVMTQSPGTLSLSPGESATLSCRASQRVASNYLAWYQHKPGQAPSLLISGASSRATGVPDRFSGSGSGTDFTLAISRLEPEDSAVYYCQHYDSSPSWTFGQGTKVEIK
Последовательность нуклеиновой кислоты BCMA_EBB-C1978-A10 ScFV-домен	166	GAAGTGCAACTGGTGGAAACCGGTGGAGGACTCGTGCAGCCTGGCGGCAGCCTCCGGCTGAGCTGCGCCGCTTCGGGATTCACCTTTTCCTCCTACGCGATGTCTTGGGTCAGACAGGCCCCCGGAAAGGGGCTGGAATGGGTGTCAGCCATCTCCGGCTCCGGCGGATCAACGTACTACGCCGACTCCGTGAAAGGCCGGTTCACCATGTCGCGCGAGAATGACAAGAACTCCGTGTTCCTGCAAATGAACTCCCTGAGGGTGGAGGACACCGGAGTGTACTATTGTGCGCGCGCCAACTACAAGAGAGAGCTGCGGTACTACTACGGAATGGACGTCTGGGGACAGGGAACTATGGTGACCGTGTCATCCGGTGGAGGGGGAAGCGGCGGTGGAGGCAGCGGGGGCGGGGGTTCAGAAATTGTCATGACCCAGTCCCCGGGAACTCTTTCCCTCTCCCCCGGGGAATCCGCGACTTTGTCCTGCCGGGCCAGCCAGCGCGTGGCCTCGAACTACCTCGCATGGTACCAGCATAAGCCAGGCCAAGCCCCTTCCCTGCTGATTTCCGGGGCTAGCAGCCGCGCCACTGGCGTGCCGGATAGGTTCTCGGGAAGCGGCTCGGGTACCGATTTCACCCTGGCAATCTCGCGGCTGGAACCGGAGGATTCGGCCGTGTACTACTGCCAGCACTATGACTCATCCCCCTCCTGGACATTCGGACAGGGCACCAAGGTCGAGATCAAG
Аминокислотная последовательность BCMA_EBB-C1978-A10 VH	187	EVQLVETGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTMSRENDKNSVFLQMNSLRVEDTGVYYCARANYKRELRYYYGMDVWGQGTMVTVSS
Аминокислотная последовательность BCMA_EBB-C1978-A10 VL	208	EIVMTQSPGTLSLSPGESATLSCRASQRVASNYLAWYQHKPGQAPSLLISGASSRATGVPDRFSGSGSGTDFTLAISRLEPEDSAVYYCQHYDSSPSWTFGQGTKVEIK
Аминокислотная последовательность BCMA_EBB-C1978-A10 Полный CART	229	MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLVETGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTMSRENDKNSVFLQMNSLRVEDTGVYYCARANYKRELRYYYGMDVWGQGTMVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEIVMTQSPGTLSLSPGESATLSCRASQRVASNYLAWYQHKPGQAPSLLISGASSRATGVPDRFSGSGSGTDFTLAISRLEPEDSAVYYCQHYDSSPSWTFGQGTKVEIKTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
Последовательность нуклеиновой кислоты BCMA_EBB-C1978-A10 Полный CART	250	ATGGCCCTCCCTGTCACCGCCCTGCTGCTTCCGCTGGCTCTTCTGCTCCACGCCGCTCGGCCCGAAGTGCAACTGGTGGAAACCGGTGGAGGACTCGTGCAGCCTGGCGGCAGCCTCCGGCTGAGCTGCGCCGCTTCGGGATTCACCTTTTCCTCCTACGCGATGTCTTGGGTCAGACAGGCCCCCGGAAAGGGGCTGGAATGGGTGTCAGCCATCTCCGGCTCCGGCGGATCAACGTACTACGCCGACTCCGTGAAAGGCCGGTTCACCATGTCGCGCGAGAATGACAAGAACTCCGTGTTCCTGCAAATGAACTCCCTGAGGGTGGAGGACACCGGAGTGTACTATTGTGCGCGCGCCAACTACAAGAGAGAGCTGCGGTACTACTACGGAATGGACGTCTGGGGACAGGGAACTATGGTGACCGTGTCATCCGGTGGAGGGGGAAGCGGCGGTGGAGGCAGCGGGGGCGGGGGTTCAGAAATTGTCATGACCCAGTCCCCGGGAACTCTTTCCCTCTCCCCCGGGGAATCCGCGACTTTGTCCTGCCGGGCCAGCCAGCGCGTGGCCTCGAACTACCTCGCATGGTACCAGCATAAGCCAGGCCAAGCCCCTTCCCTGCTGATTTCCGGGGCTAGCAGCCGCGCCACTGGCGTGCCGGATAGGTTCTCGGGAAGCGGCTCGGGTACCGATTTCACCCTGGCAATCTCGCGGCTGGAACCGGAGGATTCGGCCGTGTACTACTGCCAGCACTATGACTCATCCCCCTCCTGGACATTCGGACAGGGCACCAAGGTCGAGATCAAGACCACTACCCCAGCACCGAGGCCACCCACCCCGGCTCCTACCATCGCCTCCCAGCCTCTGTCCCTGCGTCCGGAggcatgtagacccgcagctggtggggccgtgcatacccggggtcttgacttcgcctgcgatatctacatttgggcccctctggctggtacttgcggggtcctgctgctttcactcgtgatcactctttactgtaagcgcggtcggaagaagctgctgtacatctttaagcaacccttcatgaggcctgtgcagactactcaagaggaggacggctgttcatgccggttcccagaggaggaggaaggcggctgcgaactgcgcgtgaaattcagccgcagcgcagatgctccagcctacaagcaggggcagaaccagctctacaacgaactcaatcttggtcggagagaggagtacgacgtgctggacaagcggagaggacgggacccagaaatgggcgggaagccgcgcagaaagaatccccaagagggcctgtacaacgagctccaaaaggataagatggcagaagcctatagcgagattggtatgaaaggggaacgcagaagaggcaaaggccacgacggactgtaccagggactcagcaccgccaccaaggacacctatgacgctcttcacatgcaggccctgccgcctcgg
BCMA_EBB-C1978-D4
Аминокислотная последовательность BCMA_EBB-C1978-D4 ScFV-домен	146	EVQLLETGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKALVGATGAFDIWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSLSSNFLAWYQQKPGQAPGLLIYGASNWATGTPDRFSGSGSGTDFTLTITRLEPEDFAVYYCQYYGTSPMYTFGQGTKVEIK
Последовательность нуклеиновой кислоты BCMA_EBB-C1978-D4 ScFV-домен	167	GAAGTGCAGCTGCTCGAAACCGGTGGAGGGCTGGTGCAGCCAGGGGGCTCCCTGAGGCTTTCATGCGCCGCTAGCGGATTCTCCTTCTCCTCTTACGCCATGTCGTGGGTCCGCCAAGCCCCTGGAAAAGGCCTGGAATGGGTGTCCGCGATTTCCGGGAGCGGAGGTTCGACCTATTACGCCGACTCCGTGAAGGGCCGCTTTACCATCTCCCGGGATAACTCCAAGAACACTCTGTACCTCCAAATGAACTCGCTGAGAGCCGAGGACACCGCCGTGTATTACTGCGCGAAGGCGCTGGTCGGCGCGACTGGGGCATTCGACATCTGGGGACAGGGAACTCTTGTGACCGTGTCGAGCGGAGGCGGCGGCTCCGGCGGAGGAGGGAGCGGGGGCGGTGGTTCCGAAATCGTGTTGACTCAGTCCCCGGGAACCCTGAGCTTGTCACCCGGGGAGCGGGCCACTCTCTCCTGTCGCGCCTCCCAATCGCTCTCATCCAATTTCCTGGCCTGGTACCAGCAGAAGCCCGGACAGGCCCCGGGCCTGCTCATCTACGGCGCTTCAAACTGGGCAACGGGAACCCCTGATCGGTTCAGCGGAAGCGGATCGGGTACTGACTTTACCCTGACCATCACCAGACTGGAACCGGAGGACTTCGCCGTGTACTACTGCCAGTACTACGGCACCTCCCCCATGTACACATTCGGACAGGGTACCAAGGTCGAGATTAAG
Аминокислотная последовательность BCMA_EBB-C1978-D4 VH	188	EVQLLETGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKALVGATGAFDIWGQGTLVTVSS
Аминокислотная последовательность BCMA_EBB-C1978-D4 VL	209	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSLSSNFLAWYQQKPGQAPGLLIYGASNWATGTPDRFSGSGSGTDFTLTITRLEPEDFAVYYCQYYGTSPMYTFGQGTKVEIK
Аминокислотная последовательность BCMA_EBB-C1978-D4 Полный CART	230	MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLLETGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKALVGATGAFDIWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSLSSNFLAWYQQKPGQAPGLLIYGASNWATGTPDRFSGSGSGTDFTLTITRLEPEDFAVYYCQYYGTSPMYTFGQGTKVEIKTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
Последовательность нуклеиновой кислоты BCMA_EBB-C1978-D4 Полный CART	251	ATGGCCCTCCCTGTCACCGCCCTGCTGCTTCCGCTGGCTCTTCTGCTCCACGCCGCTCGGCCCGAAGTGCAGCTGCTCGAAACCGGTGGAGGGCTGGTGCAGCCAGGGGGCTCCCTGAGGCTTTCATGCGCCGCTAGCGGATTCTCCTTCTCCTCTTACGCCATGTCGTGGGTCCGCCAAGCCCCTGGAAAAGGCCTGGAATGGGTGTCCGCGATTTCCGGGAGCGGAGGTTCGACCTATTACGCCGACTCCGTGAAGGGCCGCTTTACCATCTCCCGGGATAACTCCAAGAACACTCTGTACCTCCAAATGAACTCGCTGAGAGCCGAGGACACCGCCGTGTATTACTGCGCGAAGGCGCTGGTCGGCGCGACTGGGGCATTCGACATCTGGGGACAGGGAACTCTTGTGACCGTGTCGAGCGGAGGCGGCGGCTCCGGCGGAGGAGGGAGCGGGGGCGGTGGTTCCGAAATCGTGTTGACTCAGTCCCCGGGAACCCTGAGCTTGTCACCCGGGGAGCGGGCCACTCTCTCCTGTCGCGCCTCCCAATCGCTCTCATCCAATTTCCTGGCCTGGTACCAGCAGAAGCCCGGACAGGCCCCGGGCCTGCTCATCTACGGCGCTTCAAACTGGGCAACGGGAACCCCTGATCGGTTCAGCGGAAGCGGATCGGGTACTGACTTTACCCTGACCATCACCAGACTGGAACCGGAGGACTTCGCCGTGTACTACTGCCAGTACTACGGCACCTCCCCCATGTACACATTCGGACAGGGTACCAAGGTCGAGATTAAGACCACTACCCCAGCACCGAGGCCACCCACCCCGGCTCCTACCATCGCCTCCCAGCCTCTGTCCCTGCGTCCGGAggcatgtagacccgcagctggtggggccgtgcatacccggggtcttgacttcgcctgcgatatctacatttgggcccctctggctggtacttgcggggtcctgctgctttcactcgtgatcactctttactgtaagcgcggtcggaagaagctgctgtacatctttaagcaacccttcatgaggcctgtgcagactactcaagaggaggacggctgttcatgccggttcccagaggaggaggaaggcggctgcgaactgcgcgtgaaattcagccgcagcgcagatgctccagcctacaagcaggggcagaaccagctctacaacgaactcaatcttggtcggagagaggagtacgacgtgctggacaagcggagaggacgggacccagaaatgggcgggaagccgcgcagaaagaatccccaagagggcctgtacaacgagctccaaaaggataagatggcagaagcctatagcgagattggtatgaaaggggaacgcagaagaggcaaaggccacgacggactgtaccagggactcagcaccgccaccaaggacacctatgacgctcttcacatgcaggccctgccgcctcgg
BCMA_EBB-C1980-A2
Аминокислотная последовательность BCMA_EBB-C1980-A2 ScFV-домен	147	EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCVLWFGEGFDPWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVLTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPLTFGGGTKVDIK
Последовательность нуклеиновой кислоты BCMA_EBB-C1980-A2 ScFV-домен	168	GAAGTGCAGCTGCTTGAGAGCGGTGGAGGTCTGGTGCAGCCCGGGGGATCACTGCGCCTGTCCTGTGCCGCGTCCGGTTTCACTTTCTCCTCGTACGCCATGTCGTGGGTCAGACAGGCACCGGGAAAGGGACTGGAATGGGTGTCAGCCATTTCGGGTTCGGGGGGCAGCACCTACTACGCTGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATTTCCCGCGACAACTCCAAGAACACCTTGTACCTCCAAATGAACTCCCTGCGGGCCGAAGATACCGCCGTGTATTACTGCGTGCTGTGGTTCGGAGAGGGATTCGACCCGTGGGGACAAGGAACACTCGTGACTGTGTCATCCGGCGGAGGCGGCAGCGGTGGCGGCGGTTCCGGCGGCGGCGGATCTGACATCGTGTTGACCCAGTCCCCTCTGAGCCTGCCGGTCACTCCTGGCGAACCAGCCAGCATCTCCTGCCGGTCGAGCCAGTCCCTCCTGCACTCCAATGGGTACAACTACCTCGATTGGTATCTGCAAAAGCCGGGCCAGAGCCCCCAGCTGCTGATCTACCTTGGGTCAAACCGCGCTTCCGGGGTGCCTGATAGATTCTCCGGGTCCGGGAGCGGAACCGACTTTACCCTGAAAATCTCGAGGGTGGAGGCCGAGGACGTCGGAGTGTACTACTGCATGCAGGCGCTCCAGACTCCCCTGACCTTCGGAGGAGGAACGAAGGTCGACATCAAGA
Аминокислотная последовательность BCMA_EBB-C1980-A2 VH	189	EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCVLWFGEGFDPWGQGTLVTVSS
Аминокислотная последовательность BCMA_EBB-C1980-A2 VL	210	DIVLTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPLTFGGGTKVDIK
Аминокислотная последовательность BCMA_EBB-C1980-A2 Полный CART	231	MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCVLWFGEGFDPWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVLTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPLTFGGGTKVDIKTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
Последовательность нуклеиновой кислоты BCMA_EBB-C1980-A2 Полный CART	252	ATGGCCCTCCCTGTCACCGCCCTGCTGCTTCCGCTGGCTCTTCTGCTCCACGCCGCTCGGCCCGAAGTGCAGCTGCTTGAGAGCGGTGGAGGTCTGGTGCAGCCCGGGGGATCACTGCGCCTGTCCTGTGCCGCGTCCGGTTTCACTTTCTCCTCGTACGCCATGTCGTGGGTCAGACAGGCACCGGGAAAGGGACTGGAATGGGTGTCAGCCATTTCGGGTTCGGGGGGCAGCACCTACTACGCTGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATTTCCCGCGACAACTCCAAGAACACCTTGTACCTCCAAATGAACTCCCTGCGGGCCGAAGATACCGCCGTGTATTACTGCGTGCTGTGGTTCGGAGAGGGATTCGACCCGTGGGGACAAGGAACACTCGTGACTGTGTCATCCGGCGGAGGCGGCAGCGGTGGCGGCGGTTCCGGCGGCGGCGGATCTGACATCGTGTTGACCCAGTCCCCTCTGAGCCTGCCGGTCACTCCTGGCGAACCAGCCAGCATCTCCTGCCGGTCGAGCCAGTCCCTCCTGCACTCCAATGGGTACAACTACCTCGATTGGTATCTGCAAAAGCCGGGCCAGAGCCCCCAGCTGCTGATCTACCTTGGGTCAAACCGCGCTTCCGGGGTGCCTGATAGATTCTCCGGGTCCGGGAGCGGAACCGACTTTACCCTGAAAATCTCGAGGGTGGAGGCCGAGGACGTCGGAGTGTACTACTGCATGCAGGCGCTCCAGACTCCCCTGACCTTCGGAGGAGGAACGAAGGTCGACATCAAGACCACTACCCCAGCACCGAGGCCACCCACCCCGGCTCCTACCATCGCCTCCCAGCCTCTGTCCCTGCGTCCGGAggcatgtagacccgcagctggtggggccgtgcatacccggggtcttgacttcgcctgcgatatctacatttgggcccctctggctggtacttgcggggtcctgctgctttcactcgtgatcactctttactgtaagcgcggtcggaagaagctgctgtacatctttaagcaacccttcatgaggcctgtgcagactactcaagaggaggacggctgttcatgccggttcccagaggaggaggaaggcggctgcgaactgcgcgtgaaattcagccgcagcgcagatgctccagcctacaagcaggggcagaaccagctctacaacgaactcaatcttggtcggagagaggagtacgacgtgctggacaagcggagaggacgggacccagaaatgggcgggaagccgcgcagaaagaatccccaagagggcctgtacaacgagctccaaaaggataagatggcagaagcctatagcgagattggtatgaaaggggaacgcagaagaggcaaaggccacgacggactgtaccagggactcagcaccgccaccaaggacacctatgacgctcttcacatgcaggccctgccgcctcgg
BCMA_EBB-C1981-C3
Аминокислотная последовательность BCMA_EBB-C1981-C3 ScFV-домен	148	QVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVGYDSSGYYRDYYGMDVWGQGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGTSSRATGISDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQHYGNSPPKFTFGPGTKLEIK
Последовательность нуклеиновой кислоты BCMA_EBB-C1981-C3 ScFV-домен	169	CAAGTGCAGCTCGTGGAGTCAGGCGGAGGACTGGTGCAGCCCGGGGGCTCCCTGAGACTTTCCTGCGCGGCATCGGGTTTTACCTTCTCCTCCTATGCTATGTCCTGGGTGCGCCAGGCCCCGGGAAAGGGACTGGAATGGGTGTCCGCAATCAGCGGTAGCGGGGGCTCAACATACTACGCCGACTCCGTCAAGGGTCGCTTCACTATTTCCCGGGACAACTCCAAGAATACCCTGTACCTCCAAATGAACAGCCTCAGGGCCGAGGATACTGCCGTGTACTACTGCGCCAAAGTCGGATACGATAGCTCCGGTTACTACCGGGACTACTACGGAATGGACGTGTGGGGACAGGGCACCACCGTGACCGTGTCAAGCGGCGGAGGCGGTTCAGGAGGGGGAGGCTCCGGCGGTGGAGGGTCCGAAATCGTCCTGACTCAGTCGCCTGGCACTCTGTCGTTGTCCCCGGGGGAGCGCGCTACCCTGTCGTGTCGGGCGTCGCAGTCCGTGTCGAGCTCCTACCTCGCGTGGTACCAGCAGAAGCCCGGACAGGCCCCTAGACTTCTGATCTACGGCACTTCTTCACGCGCCACCGGGATCAGCGACAGGTTCAGCGGCTCCGGCTCCGGGACCGACTTCACCCTGACCATTAGCCGGCTGGAGCCTGAAGATTTCGCCGTGTATTACTGCCAACACTACGGAAACTCGCCGCCAAAGTTCACGTTCGGACCCGGAACCAAGCTGGAAATCAAG
Аминокислотная последовательность BCMA_EBB-C1981-C3 VH	190	QVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVGYDSSGYYRDYYGMDVWGQGTTVTVSS
Аминокислотная последовательность BCMA_EBB-C1981-C3 VL	211	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGTSSRATGISDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQHYGNSPPKFTFGPGTKLEIK
Аминокислотная последовательность BCMA_EBB-C1981-C3 Полный CART	232	MALPVTALLLPLALLLHAARPQVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVGYDSSGYYRDYYGMDVWGQGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGTSSRATGISDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQHYGNSPPKFTFGPGTKLEIKTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
Последовательность нуклеиновой кислоты BCMA_EBB-C1981-C3 Полный CART	253	ATGGCCCTCCCTGTCACCGCCCTGCTGCTTCCGCTGGCTCTTCTGCTCCACGCCGCTCGGCCCCAAGTGCAGCTCGTGGAGTCAGGCGGAGGACTGGTGCAGCCCGGGGGCTCCCTGAGACTTTCCTGCGCGGCATCGGGTTTTACCTTCTCCTCCTATGCTATGTCCTGGGTGCGCCAGGCCCCGGGAAAGGGACTGGAATGGGTGTCCGCAATCAGCGGTAGCGGGGGCTCAACATACTACGCCGACTCCGTCAAGGGTCGCTTCACTATTTCCCGGGACAACTCCAAGAATACCCTGTACCTCCAAATGAACAGCCTCAGGGCCGAGGATACTGCCGTGTACTACTGCGCCAAAGTCGGATACGATAGCTCCGGTTACTACCGGGACTACTACGGAATGGACGTGTGGGGACAGGGCACCACCGTGACCGTGTCAAGCGGCGGAGGCGGTTCAGGAGGGGGAGGCTCCGGCGGTGGAGGGTCCGAAATCGTCCTGACTCAGTCGCCTGGCACTCTGTCGTTGTCCCCGGGGGAGCGCGCTACCCTGTCGTGTCGGGCGTCGCAGTCCGTGTCGAGCTCCTACCTCGCGTGGTACCAGCAGAAGCCCGGACAGGCCCCTAGACTTCTGATCTACGGCACTTCTTCACGCGCCACCGGGATCAGCGACAGGTTCAGCGGCTCCGGCTCCGGGACCGACTTCACCCTGACCATTAGCCGGCTGGAGCCTGAAGATTTCGCCGTGTATTACTGCCAACACTACGGAAACTCGCCGCCAAAGTTCACGTTCGGACCCGGAACCAAGCTGGAAATCAAGACCACTACCCCAGCACCGAGGCCACCCACCCCGGCTCCTACCATCGCCTCCCAGCCTCTGTCCCTGCGTCCGGAggcatgtagacccgcagctggtggggccgtgcatacccggggtcttgacttcgcctgcgatatctacatttgggcccctctggctggtacttgcggggtcctgctgctttcactcgtgatcactctttactgtaagcgcggtcggaagaagctgctgtacatctttaagcaacccttcatgaggcctgtgcagactactcaagaggaggacggctgttcatgccggttcccagaggaggaggaaggcggctgcgaactgcgcgtgaaattcagccgcagcgcagatgctccagcctacaagcaggggcagaaccagctctacaacgaactcaatcttggtcggagagaggagtacgacgtgctggacaagcggagaggacgggacccagaaatgggcgggaagccgcgcagaaagaatccccaagagggcctgtacaacgagctccaaaaggataagatggcagaagcctatagcgagattggtatgaaaggggaacgcagaagaggcaaaggccacgacggactgtaccagggactcagcaccgccaccaaggacacctatgacgctcttcacatgcaggccctgccgcctcgg
BCMA_EBB-C1978-G4
Аминокислотная последовательность BCMA_EBB-C1978-G4 ScFV-домен	149	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKMGWSSGYLGAFDIWGQGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVASSFLAWYQQKPGQAPRLLIYGASGRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQHYGGSPRLTFGGGTKVDIK
Последовательность нуклеиновой кислоты BCMA_EBB-C1978-G4 ScFV-домен	170	GAAGTCCAACTGGTGGAGTCCGGGGGAGGGCTCGTGCAGCCCGGAGGCAGCCTTCGGCTGTCGTGCGCCGCCTCCGGGTTCACGTTCTCATCCTACGCGATGTCGTGGGTCAGACAGGCACCAGGAAAGGGACTGGAATGGGTGTCCGCCATTAGCGGCTCCGGCGGTAGCACCTACTATGCCGACTCAGTGAAGGGAAGGTTCACTATCTCCCGCGACAACAGCAAGAACACCCTGTACCTCCAAATGAACTCTCTGCGGGCCGAGGATACCGCGGTGTACTATTGCGCCAAGATGGGTTGGTCCAGCGGATACTTGGGAGCCTTCGACATTTGGGGACAGGGCACTACTGTGACCGTGTCCTCCGGGGGTGGCGGATCGGGAGGCGGCGGCTCGGGTGGAGGGGGTTCCGAAATCGTGTTGACCCAGTCACCGGGAACCCTCTCGCTGTCCCCGGGAGAACGGGCTACACTGTCATGTAGAGCGTCCCAGTCCGTGGCTTCCTCGTTCCTGGCCTGGTACCAGCAGAAGCCGGGACAGGCACCCCGCCTGCTCATCTACGGAGCCAGCGGCCGGGCGACCGGCATCCCTGACCGCTTCTCCGGTTCCGGCTCGGGCACCGACTTTACTCTGACCATTAGCAGGCTTGAGCCCGAGGATTTTGCCGTGTACTACTGCCAACACTACGGGGGGAGCCCTCGCCTGACCTTCGGAGGCGGAACTAAGGTCGATATCAAAA
Аминокислотная последовательность BCMA_EBB-C1978-G4 VH	191	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKMGWSSGYLGAFDIWGQGTTVTVSS
Аминокислотная последовательность BCMA_EBB-C1978-G4 VL	212	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVASSFLAWYQQKPGQAPRLLIYGASGRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQHYGGSPRLTFGGGTKVDIK
Аминокислотная последовательность BCMA_EBB-C1978-G4 Полный CART	233	MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKMGWSSGYLGAFDIWGQGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVASSFLAWYQQKPGQAPRLLIYGASGRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQHYGGSPRLTFGGGTKVDIKTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
Последовательность нуклеиновой кислоты BCMA_EBB-C1978-G4 Полный CART	254	ATGGCCCTCCCTGTCACCGCCCTGCTGCTTCCGCTGGCTCTTCTGCTCCACGCCGCTCGGCCCGAAGTCCAACTGGTGGAGTCCGGGGGAGGGCTCGTGCAGCCCGGAGGCAGCCTTCGGCTGTCGTGCGCCGCCTCCGGGTTCACGTTCTCATCCTACGCGATGTCGTGGGTCAGACAGGCACCAGGAAAGGGACTGGAATGGGTGTCCGCCATTAGCGGCTCCGGCGGTAGCACCTACTATGCCGACTCAGTGAAGGGAAGGTTCACTATCTCCCGCGACAACAGCAAGAACACCCTGTACCTCCAAATGAACTCTCTGCGGGCCGAGGATACCGCGGTGTACTATTGCGCCAAGATGGGTTGGTCCAGCGGATACTTGGGAGCCTTCGACATTTGGGGACAGGGCACTACTGTGACCGTGTCCTCCGGGGGTGGCGGATCGGGAGGCGGCGGCTCGGGTGGAGGGGGTTCCGAAATCGTGTTGACCCAGTCACCGGGAACCCTCTCGCTGTCCCCGGGAGAACGGGCTACACTGTCATGTAGAGCGTCCCAGTCCGTGGCTTCCTCGTTCCTGGCCTGGTACCAGCAGAAGCCGGGACAGGCACCCCGCCTGCTCATCTACGGAGCCAGCGGCCGGGCGACCGGCATCCCTGACCGCTTCTCCGGTTCCGGCTCGGGCACCGACTTTACTCTGACCATTAGCAGGCTTGAGCCCGAGGATTTTGCCGTGTACTACTGCCAACACTACGGGGGGAGCCCTCGCCTGACCTTCGGAGGCGGAACTAAGGTCGATATCAAAACCACTACCCCAGCACCGAGGCCACCCACCCCGGCTCCTACCATCGCCTCCCAGCCTCTGTCCCTGCGTCCGGAggcatgtagacccgcagctggtggggccgtgcatacccggggtcttgacttcgcctgcgatatctacatttgggcccctctggctggtacttgcggggtcctgctgctttcactcgtgatcactctttactgtaagcgcggtcggaagaagctgctgtacatctttaagcaacccttcatgaggcctgtgcagactactcaagaggaggacggctgttcatgccggttcccagaggaggaggaaggcggctgcgaactgcgcgtgaaattcagccgcagcgcagatgctccagcctacaagcaggggcagaaccagctctacaacgaactcaatcttggtcggagagaggagtacgacgtgctggacaagcggagaggacgggacccagaaatgggcgggaagccgcgcagaaagaatccccaagagggcctgtacaacgagctccaaaaggataagatggcagaagcctatagcgagattggtatgaaaggggaacgcagaagaggcaaaggccacgacggactgtaccagggactcagcaccgccaccaaggacacctatgacgctcttcacatgcaggccctgccgcctcgg

В вариантах осуществления дополнительные примеры конструкций BCMA CAR получают с использованием последовательностей VH и VL из публикации PCT № WO2012/0163805 (содержание которой включено, таким образом, в настоящее описание в качестве ссылки в полном объеме), например, в зависимости от результатов в отношении CAR pBCMA3 и pBCMA4, описываемых в примерах 2 и 3. Схематическое изображение примеров конструкций BCMA (BCMA-3NP и BCMA-4NP) представлено на фигуре 10A. Две конструкции отличаются ориентацией цепей VH и VL (фиг. 10B). Примеры конструкций BCMA CAR и соответствующих ID ДНК представлены ниже в таблице 3.

Таблица 3. ID рабочих конструкций CAR

Обозначение	Novartis ID	DNA2.0 ID
BCMA-3NP		126022
BCMA-4NP		126021

В вариантах осуществления дополнительные примеры конструкций BCMA CAR также можно получать с использованием последовательностей VH и VL, приведенных в таблице 16. Аминокислотные последовательности примеров scFV-доменов, содержащих домены VH и VL и линкерную последовательность, и полноразмерные CAR также приведены в таблице 16.

Таблица 16. Дополнительные примеры последовательностей CAR BCMA

Название	Последовательность	SEQ ID NO:
A7D12.2 VH	QIQLVQSGPDLKKPGETVKLSCKASGYTFTNFGMNWVKQAPGKGFKWMAWINTYTGESYFADDFKGRFAFSVETSATTAYLQINNLKTEDTATYFCARGEIYYGYDGGFAYWGQGTLVTVSA	255
A7D12.2 VL	DVVMTQSHRFMSTSVGDRVSITCRASQDVNTAVSWYQQKPGQSPKLLIFSASYRYTGVPDRFTGSGSGADFTLTISSVQAEDLAVYYCQQHYSTPWTFGGGTKLDIK	259
A7D12.2 scFV-домен	QIQLVQSGPDLKKPGETVKLSCKASGYTFTNFGMNWVKQAPGKGFKWMAWINTYTGESYFADDFKGRFAFSVETSATTAYLQINNLKTEDTATYFCARGEIYYGYDGGFAYWGQGTLVTVSAGGGGSGGGGSGGGGSDVVMTQSHRFMSTSVGDRVSITCRASQDVNTAVSWYQQKPGQSPKLLIFSASYRYTGVPDRFTGSGSGADFTLTISSVQAEDLAVYYCQQHYSTPWTFGGGTKLDIK	263
A7D12.2 Полный CART	QIQLVQSGPDLKKPGETVKLSCKASGYTFTNFGMNWVKQAPGKGFKWMAWINTYTGESYFADDFKGRFAFSVETSATTAYLQINNLKTEDTATYFCARGEIYYGYDGGFAYWGQGTLVTVSAGGGGSGGGGSGGGGSDVVMTQSHRFMSTSVGDRVSITCRASQDVNTAVSWYQQKPGQSPKLLIFSASYRYTGVPDRFTGSGSGADFTLTISSVQAEDLAVYYCQQHYSTPWTFGGGTKLDIKTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR	267
C11D5.3 VH	QIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFTDYSINWVKRAPGKGLKWMGWINTETREPAYAYDFRGRFAFSLETSASTAYLQINNLKYEDTATYFCALDYSYAMDYWGQGTSVTVSS	256
C11D5.3 VL	DIVLTQSPASLAMSLGKRATISCRASESVSVIGAHLIHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLETGVPARFSGSGSGTDFTLTIDPVEEDDVAIYSCLQSRIFPRTFGGGTKLEIK	260
C11D5.3 scFV-домен	QIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFTDYSINWVKRAPGKGLKWMGWINTETREPAYAYDFRGRFAFSLETSASTAYLQINNLKYEDTATYFCALDYSYAMDYWGQGTSVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFTDYSINWVKRAPGKGLKWMGWINTETREPAYAYDFRGRFAFSLETSASTAYLQINNLKYEDTATYFCALDYSYAMDYWGQGTSVTVSS	264
C11D5.3 Полный CART	QIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFTDYSINWVKRAPGKGLKWMGWINTETREPAYAYDFRGRFAFSLETSASTAYLQINNLKYEDTATYFCALDYSYAMDYWGQGTSVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFTDYSINWVKRAPGKGLKWMGWINTETREPAYAYDFRGRFAFSLETSASTAYLQINNLKYEDTATYFCALDYSYAMDYWGQGTSVTVSSTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR	268
C12A3.2 VH	QIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFRHYSMNWVKQAPGKGLKWMGRINTESGVPIYADDFKGRFAFSVETSASTAYLVINNLKDEDTASYFCSNDYLYSLDFWGQGTALTVSS	257
C12A3.2 VL	DIVLTQSPPSLAMSLGKRATISCRASESVTILGSHLIYWYQQKPGQPPTLLIQLASNVQTGVPARFSGSGSRTDFTLTIDPVEEDDVAVYYCLQSRTIPRTFGGGTKLEIK	261
C12A3.2 scFV-домен	QIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFRHYSMNWVKQAPGKGLKWMGRINTESGVPIYADDFKGRFAFSVETSASTAYLVINNLKDEDTASYFCSNDYLYSLDFWGQGTALTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVLTQSPPSLAMSLGKRATISCRASESVTILGSHLIYWYQQKPGQPPTLLIQLASNVQTGVPARFSGSGSRTDFTLTIDPVEEDDVAVYYCLQSRTIPRTFGGGTKLEIK	265
C12A3.2 Полный CART	QIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFRHYSMNWVKQAPGKGLKWMGRINTESGVPIYADDFKGRFAFSVETSASTAYLVINNLKDEDTASYFCSNDYLYSLDFWGQGTALTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVLTQSPPSLAMSLGKRATISCRASESVTILGSHLIYWYQQKPGQPPTLLIQLASNVQTGVPARFSGSGSRTDFTLTIDPVEEDDVAVYYCLQSRTIPRTFGGGTKLEIKTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR	269
C13F12.1 VH	QIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFTHYSMNWVKQAPGKGLKWMGRINTETGEPLYADDFKGRFAFSLETSASTAYLVINNLKNEDTATFFCSNDYLYSCDYWGQGTTLTVSS	258
C13F12.1 VL	DIVLTQSPPSLAMSLGKRATISCRASESVTILGSHLIYWYQQKPGQPPTLLIQLASNVQTGVPARFSGSGSRTDFTLTIDPVEEDDVAVYYCLQSRTIPRTFGGGTKLEIK	262
C13F12.1 scFV-домен	QIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFTHYSMNWVKQAPGKGLKWMGRINTETGEPLYADDFKGRFAFSLETSASTAYLVINNLKNEDTATFFCSNDYLYSCDYWGQGTTLTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVLTQSPPSLAMSLGKRATISCRASESVTILGSHLIYWYQQKPGQPPTLLIQLASNVQTGVPARFSGSGSRTDFTLTIDPVEEDDVAVYYCLQSRTIPRTFGGGTKLEIK	266
C13F12.1 Полный CART	QIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFTHYSMNWVKQAPGKGLKWMGRINTETGEPLYADDFKGRFAFSLETSASTAYLVINNLKNEDTATFFCSNDYLYSCDYWGQGTTLTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVLTQSPPSLAMSLGKRATISCRASESVTILGSHLIYWYQQKPGQPPTLLIQLASNVQTGVPARFSGSGSRTDFTLTIDPVEEDDVAVYYCLQSRTIPRTFGGGTKLEIKTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR	270

В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты примера гуманизированного scFv против BCMA, в котором VH предшествует VL (H2L, например, pBCMA 2 и pBCMA 4), является следующей:

CAGGTGCAGCTGGTCCAGAGCGGCGCCGAAGTGAAGAAGCCCGGCAGCTCCGTGAAAGTGAGCTGCAAGGCCAGCGGCGGCACCTTCAGCAACTACTGGATGCACTGGGTGAGGCAGGCCCCCGGACAGGGCCTGGAGTGGATGGGCGCCACCTACAGGGGCCACAGCGACACCTACTACAACCAGAAGTTCAAGGGCCGGGTGACCATCACCGCCGACAAGAGCACCAGCACCGCCTACATGGAACTGAGCAGCCTCAGGAGCGAGGACACCGCTGTGTATTACTGCGCCAGGGGCGCCATCTACAACGGCTACGACGTGCTGGACAACTGGGGCCAGGGCACACTAGTGACCGTGTCCAGCGGTGGAGGAGGTAGCGGAGGAGGCGGGAGCGGTGGAGGTGGCTCTGGAGGTGGCGGAAGCGACATCCAGATGACCCAGAGCCCTAGCTCACTGAGCGCCAGCGTGGGCGACAGGGTGACCATTACCTGCTCCGCCAGCCAGGACATCAGCAACTACCTGAACTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACTACACCTCCAACCTGCACTCCGGCGTGCCCAGCAGGTTCAGCGGAAGCGGCAGCGGCACCGATTTCACCCTGACCATCTCCAGCCTGCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGTACAGGAAGCTCCCCTGGACTTTCGGCCAGGGCACCAAACTGGAGATCAAGCGT

(SEQ ID NO: 272)

Соответствующая аминокислотная последовательность примера гуманизированного scFv против BCMA, в котором VH предшествует VL (H2L, например, pBCMA 2 и pBCMA 4), является следующей:

Q V Q L V Q S G A E V K K P G S S V K V S C K A S G G T F S N Y W M H W V R Q A P G Q G L E W M G A T Y R G H S D T Y Y N Q K F K G R V T I T A D K S T S T A Y M E L S S L R S E D T A V Y Y C A R G A I Y N G Y D V L D N W G Q G T L V T V S S G G G G S G G G G S G G G G S G G G G S D I Q M T Q S P S S L S A S V G D R V T I T C S A S Q D I S N Y L N W Y Q Q K P G K A P K L L I Y Y T S N L H S G V P S R F S G S G S G T D F T L T I S S L Q P E D F A T Y Y C Q Q Y R K L P W T F G Q G T K L E I K R (SEQ ID NO: 271)

В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты примера гуманизированного scFv против BCMA, в котором VL предшествует VH (L2H, например, pBCMA1 и pBCMA3), является следующей:

GACATCCAGATGACCCAGAGCCCTAGCTCACTGAGCGCCAGCGTGGGCGACAGGGTGACCATTACCTGCTCCGCCAGCCAGGACATCAGCAACTACCTGAACTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACTACACCTCCAACCTGCACTCCGGCGTGCCCAGCAGGTTCAGCGGAAGCGGCAGCGGCACCGATTTCACCCTGACCATCTCCAGCCTGCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGTACAGGAAGCTCCCCTGGACTTTCGGCCAGGGCACCAAACTGGAGATCAAGCGTGGTGGAGGAGGTAGCGGAGGAGGCGGGAGCGGTGGAGGTGGCTCTGGAGGTGGCGGAAGCCAGGTGCAGCTGGTCCAGAGCGGCGCCGAAGTGAAGAAGCCCGGCAGCTCCGTGAAAGTGAGCTGCAAGGCCAGCGGCGGCACCTTCAGCAACTACTGGATGCACTGGGTGAGGCAGGCCCCCGGACAGGGCCTGGAGTGGATGGGCGCCACCTACAGGGGCCACAGCGACACCTACTACAACCAGAAGTTCAAGGGCCGGGTGACCATCACCGCCGACAAGAGCACCAGCACCGCCTACATGGAACTGAGCAGCCTCAGGAGCGAGGACACCGCTGTGTATTACTGCGCCAGGGGCGCCATCTACAACGGCTACGACGTGCTGGACAACTGGGGCCAGGGCACACTAGTGACCGTGTCCAGC

(SEQ ID NO: 274)

Соответствующая аминокислотная последовательность примера гуманизированного scFv против BCMA, в котором VL предшествует VH (L2H, например, pBCMA1 и pBCMA3), является следующей:

DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCSASQDIS NYLNWYQQKP GKAPKLLIYY TSNLHSGVPSRFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ YRKLPWTFGQ GTKLEIKRGG GGSGGGGSGGGGSGGGGSQV QLVQSGAEVK KPGSSVKVSC KASGGTFSNY WMHWVRQAPG QGLEWMGATYRGHSDTYYNQ KFKGRVTITA DKSTSTAYME LSSLRSEDTA VYYCARGAIYNGYDVLDNWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 273)

CAR scFv-фрагменты можно клонировать в лентивирусные векторы для получения полноразмерной конструкции CAR в единой колирующей рамке считывания и с использованием промотора EF1 альфа для экспрессии (SEQ ID NO: 11).

Конструкция CAR может включать линкер Gly/Ser, имеющий одну или более следующих последовательностей: GGGGS (SEQ ID NO: 25), включающую 1-6 повторов "Gly Gly Gly Gly Ser", например, GGGGSGGGGS GGGGSGGGGS GGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 26), GGGGSGGGGS GGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 27), GGGGSGGGGS GGGGS (SEQ ID NO: 28), GGGS (SEQ ID NO: 29), или включающую 1-10 повторов "Gly Gly Gly Ser", например, GGGSGGGSGG GSGGGSGGGS GGGSGGGSGG GSGGGSGGGS (SEQ ID NO: 38).

В вариантах осуществления конструкция CAR включает поли(A)-последовательность, например, последовательность, включающую 50-5000 или 100-5000 аденинов (например, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 34 или SEQ ID NO: 35), или последовательность, включающую 50-5000 тиминов (например, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 32). Альтернативно, конструкция CAR может включать, например, линкер, включающий последовательность GSTSGSGKPGSGEGSTKG (SEQ ID NO: 1108)

Биспецифические CAR

В варианте осуществления полиспецифическая молекула антитела является биспецифической молекулой антитела. Биспецифическое антитело имеет специфичность не более чем для двух антигенов. Биспецифическая молекула антитела отличается последовательностью первого вариабельного домена иммуноглобулина, имеющего специфичность связывания для первого эпитопа, и последовательностью второго вариабельного домена иммуноглобулина, имеющего специфичность связывания для второго эпитопа. В варианте осуществления первый и второй эпитопы находятся на одном и том же антигене, например, одном и том же белке (или субъединице мультимерного белка). В варианте осуществления первый и второй эпитопы перекрываются. В варианте осуществления первый и второй эпитопы не перекрываются. В варианте осуществления первый и второй эпитопы находятся на разных антигенах, например, разных белках (или разных субъединицах мультимерного белка). В варианте осуществления биспецифическая молекула антитела содержит последовательность вариабельного домена тяжелой цепи и последовательность вариабельного домена легкой цепи, имеющие специфичность связывания для первого эпитопа, и последовательность вариабельного домена тяжелой цепи и последовательность вариабельного домена легкой цепи, имеющие специфичность связывания для второго эпитопа. В варианте осуществления биспецифическая молекула антитела содержит половину антитела, имеющую специфичность связывания для первого эпитопа, и половину антитела, имеющую специфичность связывания для второго эпитопа. В варианте осуществления биспецифическая молекула антитела содержит половину антитела или ее фрагмент, имеющую специфичность связывания для первого эпитопа, и половину антитела или ее фрагмент, имеющую специфичность связывания для второго эпитопа. В варианте осуществления биспецифическая молекула антитела содержит scFv или его фрагмент, имеющий специфичность связывания для первого эпитопа, и scFv или его фрагмент, имеющий специфичность связывания для второго эпитопа.

В определенных вариантах осуществления молекула антитела является полиспецифической (например, биспецифической или триспецифической) молекулой антитела. В этой области известны способы получения биспецифических или гетеродимерных молекул антител, включая, в качестве неограничивающих примеров, например, подход "выступ-во-впадину", описываемый, например, в US5731168, конструирование Fc-пар с использованием эффекта электростатического взаимодействия, как описано, например, в WO09/089004, WO06/106905 и WO2010/129304, образование гетеродимеров доменов, сконструированных с помощью замены цепей (SEED), как описано, например, в WO07/110205, замену Fab-плеч, как описано, например, в WO08/119353, WO2011/131746 и WO2013/060867, получение двойного конъюгата антител, например, посредством перекрестного сшивания антитела для получения биспецифической структуры с использованием гетеробифункционального реагента, содержащего реактивную аминогруппу и сульфгидрильную реактивную группу, как описано, например, в US4433059, детерминанты биспецифического антитела, получаемые посредством рекомбинации половин антител (пар тяжелых и легких цепей или Fab) из разных антител посредством цикла восстановления и окисления дисульфидных связей между двумя тяжелыми цепями, как описано, например, в US4444878, трифункциональные антитела, например, три Fab'-фрагмента, перекрестно сшитые посредством сульфгидрильных реактивных групп, как описано, например, в US5273743, биосинтетические связывающие белки, например, пара scFv, перекрестно сшитые C-концами, предпочтительно, посредством перекрестной сшивки дисульфидных связей или аминогрупп, как описано, например, в US5534254, бифункциональные антитела, например, Fab-фрагменты с разной специфичностью связывания, димеризованные посредством лейциновых молний (например, c-fos и c-jun), имеющие замененный константный домен, как описано, например, в US5582996, биспецифические и олигоспецифические моно- и олиговалентные рецепторы, например, области VH-CH1 двух антител (двух Fab-фрагментов), соединенные полипептидным спейсером между областью CH1 одного антитела и областью VH другого антитела, как правило, со связанными легкими цепями, как описано, например, в US5591828, биспецифические конъюгаты ДНК-антитело, например, перекрестная сшивка антител или Fab-фрагментов с помощью двухцепочечного фрагмента ДНК, как описано, например, в US5635602, биспецифические слитые белки, например, экспрессирующая конструкция, содержащая два scFv с гидрофильным спиральным пептидным линкером между ними и полной константной областью, как описано, например, в US5637481, мультивалентные и полиспецифические связывающие белки, например, димер полипептидов, содержащих первый домен со связывающей областью вариабельной области тяжелой цепи Ig и второй домен со связывающей областью вариабельной области легкой цепи Ig, как правило, обозначаемые как диатела (структуры более высокого порядка также включают биспецифические, триспецифические или тетраспецифические молекулы, как описано, например, в US5837242, конструкции минител со связанными цепями VL и VH, дополнительно соединенными с помощью пептидных спейсеров с шарнирной областью антитела и областью CH3, которые могут димеризоваться с образованием биспецифических/мультивалентных молекул, как описано, например, в US5837821, домены VH и VL, соединенные с помощью короткого пептидного линкера (например, из 5 или 10 аминокислот) или без линкера в любой ориентации, которые могут образовывать димеры с образованием биспецифических диател, тримеры и тетрамеры, как описано, например, в US5844094, нить доменов VH (или доменов VL в челнах семейства), соединенных пептидными связями с перекрестно сшивающими группами на C-концах, дополнительно связанные с доменами VL с образованием серии FV (или scFv), как описано, например, в US5864019, и одноцепочечные связывающие полипептиды с доменом VH и VL, соединенным с помощью пептидного линкера, комбинируют в мультивалентных структурах с помощью нековалентной или химической перекрестной сшивки с образованием, например, гомобивалентных, гетеробивалентных, тривалентных и тетравалентных структур с использованием формата типа scFv или диатела, как описано, например, в US5869620. Дополнительные примеры полиспецифических и биспецифических молекул и способов их получения приведены, например, в US5910573, US5932448, US5959083, US5989830, US6005079, US6239259, US6294353, US6333396, US6476198, US6511663, US6670453, US6743896, US6809185, US6833441, US7129330, US7183076, US7521056, US7527787, US7534866, US7612181, US2002004587A1, US2002076406A1, US2002103345A1, US2003207346A1, US2003211078A1, US2004219643A1, US2004220388A1, US2004242847A1, US2005003403A1, US2005004352A1, US2005069552A1, US2005079170A1, US2005100543A1, US2005136049A1, US2005136051A1, US2005163782A1, US2005266425A1, US2006083747A1, US2006120960A1, US2006204493A1, US2006263367A1, US2007004909A1, US2007087381A1, US2007128150A1, US2007141049A1, US2007154901A1, US2007274985A1, US2008050370A1, US2008069820A1, US2008152645A1, US2008171855A1, US2008241884A1, US2008254512A1, US2008260738A1, US2009130106A1, US2009148905A1, US2009155275A1, US2009162359A1, US2009162360A1, US2009175851A1, US2009175867A1, US2009232811A1, US2009234105A1, US2009263392A1, US2009274649A1, EP346087A2, WO0006605A2, WO02072635A2, WO04081051A1, WO06020258A2, WO2007044887A2, WO2007095338A2, WO2007137760A2, WO2008119353A1, WO2009021754A2, WO2009068630A1, WO9103493A1, WO9323537A1, WO9409131A1, WO9412625A2, WO9509917A1, WO9637621A2, WO9964460A1. Содержание приведенных выше заявок включено в настоящее описание в качестве ссылки в полном объеме.

В каждом антителе или фрагменте антитела (например, scFv) биспецифической молекулы антитела VH может находиться выше или ниже VL. В некоторых вариантах осуществления вышележащее антитело или фрагмент антитела (например, scFv) сконструировано так, что VH (VH₁) находится выше его VL (VL₁), а нижележащее антитело или фрагмент антитела (например, scFv) сконструировано так, что VL (VL₂) находится выше его VH (VH₂), таким образом, что общая биспецифическая молекула антитела имеет структуру VH₁-VL₁-VL₂-VH₂. В других вариантах осуществления вышележащее антитело или фрагмент антитела (например, scFv) сконструировано так, что VL (VL₁) находится выше его VH (VH₁) и нижележащее антитело или фрагмент антитела (например, scFv) сконструировано так, что VH (VH₂) находится выше его VL (VL₂), таким образом, что общая биспецифическая молекула антитела имеет структуру VL₁-VH₁-VH₂-VL₂. Необязательно, линкер располагают между двумя антителами или фрагментами антител (например, scFv), например, между VL₁ и VL_2, если конструкция имеет структуру VH₁-VL₁-VL₂-VH₂, или между VH₁ и VH_2, если конструкция имеет структуру VL₁-VH₁-VH₂-VL₂. Линкер может являться линкером, как представлено в настоящем описании, например, линкером (Gly₄-Ser)n, где n является 1, 2, 3, 4, 5 или 6, предпочтительно - 4 (SEQ ID NO: 26). В основном, линкер между двумя scFv должен быть достаточно длинным, чтобы избегать ошибочного спаривания между доменами двух scFv. Необязательно, линкер располагают между VL и VH первого scFv. Необязательно, линкер располагают между VL и VH второго scFv. В конструкциях, содержащих множество линкеров, любые два или более линкера могут являться одинаковыми или разными. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления биспецифический CAR содержит VL, VH и, необязательно, один или более линкеров в структуре, представленной в настоящем описании.

В одном из аспектов биспецифическая молекула антитела отличается последовательностью первого вариабельного домена иммуноглобулина, например, scFv, имеющего специфичность связывания для BCMA, например, содержит scFv, как представлено в настоящем описании, например, как описано в таблице 1 или таблице 16, или содержит CDR легкой цепи и/или CDR тяжелой цепи из scFv BCMA, представленного в настоящем описании, и последовательностью второго вариабельного домена иммуноглобулина, имеющего специфичность связывания для второго эпитопа на другом антигене. В некоторых аспектах последовательность второго вариабельного домена иммуноглобулина имеет специфичность связывания для антигена, экспрессирующегося на клетках AML, например, антигена, иного, чем BCMA. Например, последовательность второго вариабельного домена иммуноглобулина имеет специфичность связывания для CD123. В качестве другого примера, последовательность второго вариабельного домена иммуноглобулина имеет специфичность связывания для CLL-1. В качестве другого примера, последовательность второго вариабельного домена иммуноглобулина имеет специфичность связывания для CD34. В качестве другого примера, последовательность второго вариабельного домена иммуноглобулина имеет специфичность связывания для FLT3. Например, последовательность второго вариабельного домена иммуноглобулина имеет специфичность связывания для рецептора фолата бета. В некоторых аспектах последовательность второго вариабельного домена иммуноглобулина имеет специфичность связывания для антигена, экспрессирующегося на B-клетках, например, CD10, CD19, CD20, CD22, CD34, CD123, FLT-3, ROR1, CD79b, CD179b или CD79a.

Химерный TCR

В одном из аспектов антитела против BCMA и фрагменты антител по настоящему изобретению (например, описываемые в таблицах 1 и 16) можно пересаживать на один или более константных доменов цепи T-клеточного рецептора ("TCR"), например, альфа-цепи TCR или бета-цепи TCR, для получения химерного TCR, специфически связывающегося с BCMA. Не будучи связанными какой-либо теорией, полагают, что химерные TCR будут передавать сигнал через комплекс TCR после связывания антигена. Например, scFv BCMA, как представлено в настоящем описании, можно пересаживать на константный домен, например, по меньшей мере, часть внеклеточного константного домена, трансмембранного домена и цитоплазматического домена, цепи TCR, например, альфа-цепи TCR и/или бета-цепи TCR. В качестве другого примера, фрагмент антитела против BCMA, например, домен VL, как представлено в настоящем описании, можно пересаживать на константный домен альфа-цепи TCR, и фрагмент антитела против BCMA, например, домен VH, как представлено в настоящем описании, можно пересаживать на константный домен бета-цепи TCR (или альтернативно, домен VL можно пересаживать на константный домен бета-цепи TCR и домен VH можно пересаживать на альфа-цепь TCR). В качестве другого примера, CDR антитела против BCMA или фрагмента антитела, например, CDR антитела против BCMA или фрагмента антитела, описываемого в таблицах 20, 21, 22, 23, 24 или 25, можно пересаживать на альфа-цепь и/или бета-цепь TCR для получения химерного TCR, специфически связывающегося с BCMA. Например, LCDR, представленные в настоящем описании, можно пересаживать на вариабельный домен альфа-цепи TCR и HCDR, представленные в настоящем описании, можно пересаживать на вариабельный домен бета-цепи TCR, или наоборот. Такие химерные TCR можно получать известными в этой области способами (например, Willemsen RA et al, Gene Therapy 2000; 7: 1369-1377; Zhang T et al, Cancer Gene Ther 2004; 11: 487-496; Aggen et al, Gene Ther. 2012 Apr;19(4):365-74).

Трансмембранный домен

Что касается трансмембранного домена, в различных вариантах осуществления CAR можно конструировать так, чтобы он содержал трансмембранный домен, соединенный с внеклеточным доменом CAR. Трансмембранный домен может включать одну или более дополнительных аминокислот, смежных с трансмембранной областью, например, одной или более аминокислотами, связанными с внеклеточной областью белка, из которого получали трансмембранную область (например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 и до 15 аминокислот из внеклеточной области), и/или одной или более дополнительными аминокислотами, связанными с внутриклеточной областью белка, из которого получают трансмембранный белок (например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 и до 15 аминокислот внутриклеточной области). В одном из аспектов трансмембранный домен является доменом, связанным с одним из других доменов используемого CAR. В некоторых случаях трансмембранный домен можно выбирать или модифицировать посредством замены аминокислоты для избежания связывания таких доменов с трансмембранными доменами тех же или других белков поверхности мембраны, например, для минимизации взаимодействий с другими членами рецепторного комплекса. В одном из аспектов трансмембранный домен способен к гомодимеризации с другим CAR на поверхности CAR-экспрессирующей клетки, например, CART-клетке. В другом аспекте аминокислотную последовательность трансмембранного домена можно модифицировать или заменять для минимизации взаимодействий со связывающими доменами нативного партнера по связыванию, присутствующего в той же CAR-экспрессирующей клетке, например, CART.

Трансмембранный домен можно получать из природного или рекомбинантного источника. Если источник является природным, домен можно получать из любого мембраносвязанного или трансмембранного белка. В одном из аспектов трансмембранный домен способен к передаче сигнала к внутриклеточным доменам каждый раз, когда CAR связывается с мишенью. Особенно применимый в настоящем изобретении трансмембранный домен может включать, по меньшей мере, трансмембранные области, например, альфа-, бета- или дзета-цепи T-клеточного рецептора, CD28, CD3 эпсилон, CD45, CD4, CD5, CD8 (например, CD8 альфа, CD8 бета), CD9, CD16, CD22, CD33, CD37, CD64, CD80, CD86, CD134, CD137, CD154. В некоторых вариантах осуществления трансмембранный домен может включать, по меньшей мере, трансмембранные области костимуляторной молекулы, например, молекулы MHC класса I, белков рецепторов ФНО, иммуноглобулин-подобных белков, рецепторов цитокинов, интегринов, сигнальных молекул активации лимфоцитов (белков SLAM), активирующих рецепторов NK-клеток, BTLA, рецептора Толл-лиганда, OX40, CD2, CD7, CD27, CD28, CD30, CD40, CDS, ICAM-1, LFA-1 (CD11a/CD18), 4-1BB (CD137), B7-H3, CDS, ICAM-1, ICOS (CD278), GITR, BAFFR, LIGHT, HVEM (LIGHTR), KIRDS2, SLAMF7, NKp80 (KLRF1), NKp44, NKp30, NKp46, CD19, CD4, CD8 альфа, CD8 бета, IL2R бета, IL2R гамма, IL7R альфа, ITGA4, VLA1, CD49a, ITGA4, IA4, CD49D, ITGA6, VLA-6, CD49f, ITGAD, CD11d, ITGAE, CD103, ITGAL, CD11a, LFA-1, ITGAM, CD11b, ITGAX, CD11c, ITGB1, CD29, ITGB2, CD18, LFA-1, ITGB7, NKG2D, NKG2C, TNFR2, TRANCE/RANKL, DNAM1 (CD226), SLAMF4 (CD244, 2B4), CD84, CD96 (Tactile), CEACAM1, CRTAM, Ly9 (CD229), CD160 (BY55), PSGL1, CD100 (SEMA4D), CD69, SLAMF6 (NTB-A, Ly108), SLAM (SLAMF1, CD150, IPO-3), BLAME (SLAMF8), SELPLG (CD162), LTBR, LAT, GADS, SLP-76, PAG/Cbp, CD19a и лиганда, специфически связывающегося с CD83.

В некоторых случаях, трансмембранный домен можно соединять с внеклеточной областью CAR, например, антигенсвязывающим доменом CAR, посредством шарнирной области, например, шарнирной области белка человека. Например, в одном из вариантов осуществления шарнирная область может являться шарнирной областью Ig (иммуноглобулина) человека, например, шарнирной областью IgG4, или шарнирной областью CD8a. В одном из вариантов осуществления шарнирная область или спейсер содержит (например, состоит из) аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2. В одном из аспектов трансмембранный домен содержит (например, состоит из) трансмембранный домен SEQ ID NO: 6.

В одном из аспектов шарнирная область или спейсер содержит шарнирную область IgG4. Например, в одном из вариантов осуществления шарнирная область или спейсер содержит шарнирную область из аминокислотной последовательности ESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGKM (SEQ ID NO: 3). В некоторых вариантах осуществления шарнирная область или спейсер содержит шарнирную область, кодируемую нуклеотидной последовательностью GAGAGCAAGTACGGCCCTCCCTGCCCCCCTTGCCCTGCCCCCGAGTTCCTGGGCGGACCCAGCGTGTTCCTGTTCCCCCCCAAGCCCAAGGACACCCTGATGATCAGCCGGACCCCCGAGGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCAGGAGGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCCCGGGAGGAGCAGTTCAATAGCACCTACCGGGTGGTGTCCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAATACAAGTGTAAGGTGTCCAACAAGGGCCTGCCCAGCAGCATCGAGAAAACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCTCGGGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCCAAGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGCCTGGTGAAGGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCTGTGCTGGACAGCGACGGCAGCTTCTTCCTGTACAGCCGGCTGACCGTGGACAAGAGCCGGTGGCAGGAGGGCAACGTCTTTAGCTGCTCCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAACCACTACACCCAGAAGAGCCTGAGCCTGTCCCTGGGCAAGATG (SEQ ID NO: 14).

В одном из аспектов шарнирная область или спейсер содержит шарнирную область IgD. Например, в одном из вариантов осуществления шарнирная область или спейсер содержит шарнирную область с аминокислотной последовательностью RWPESPKAQASSVPTAQPQAEGSLAKATTAPATTRNTGRGGEEKKKEKEKEEQEERETKTPECPSHTQPLGVYLLTPAVQDLWLRDKATFTCFVVGSDLКДАHLTWEVAGKVPTGGVEEGLLERHSNGSQSQHSRLTLPRSLWNAGTSVTCTLNHPSLPPQRLMALREPAAQAPVKLSLNLLASSDPPEAASWLLCEVSGFSPPNILLMWLEDQREVNTSGFAPARPPPQPGSTTFWAWSVLRVPAPPSPQPATYTCVVSHEDSRTLLNASRSLEVSYVTDH (SEQ ID NO: 4). В некоторых вариантах осуществления шарнирная область или спейсер содержит шарнирную область, кодируемую нуклеотидной последовательностью AGGTGGCCCGAAAGTCCCAAGGCCCAGGCATCTAGTGTTCCTACTGCACAGCCCCAGGCAGAAGGCAGCCTAGCCAAAGCTACTACTGCACCTGCCACTACGCGCAATACTGGCCGTGGCGGGGAGGAGAAGAAAAAGGAGAAAGAGAAAGAAGAACAGGAAGAGAGGGAGACCAAGACCCCTGAATGTCCATCCCATACCCAGCCGCTGGGCGTCTATCTCTTGACTCCCGCAGTACAGGACTTGTGGCTTAGAGATAAGGCCACCTTTACATGTTTCGTCGTGGGCTCTGACCTGAAGGATGCCCATTTGACTTGGGAGGTTGCCGGAAAGGTACCCACAGGGGGGGTTGAGGAAGGGTTGCTGGAGCGCCATTCCAATGGCTCTCAGAGCCAGCACTCAAGACTCACCCTTCCGAGATCCCTGTGGAACGCCGGGACCTCTGTCACATGTACTCTAAATCATCCTAGCCTGCCCCCACAGCGTCTGATGGCCCTTAGAGAGCCAGCCGCCCAGGCACCAGTTAAGCTTAGCCTGAATCTGCTCGCCAGTAGTGATCCCCCAGAGGCCGCCAGCTGGCTCTTATGCGAAGTGTCCGGCTTTAGCCCGCCCAACATCTTGCTCATGTGGCTGGAGGACCAGCGAGAAGTGAACACCAGCGGCTTCGCTCCAGCCCGGCCCCCACCCCAGCCGGGTTCTACCACATTCTGGGCCTGGAGTGTCTTAAGGGTCCCAGCACCACCTAGCCCCCAGCCAGCCACATACACCTGTGTTGTGTCCCATGAAGATAGCAGGACCCTGCTAAATGCTTCTAGGAGTCTGGAGGTTTCCTACGTGACTGACCATT (SEQ ID NO: 15).

В одном из аспектов трансмембранный домен может являться рекомбинантным, в случае чего он будет содержать преимущественно гидрофобные остатки, такие как лейцин и валин. В одном из аспектов триплет фенилаланина, триптофана и валина можно найти на каждом конце рекомбинантного трансмембранного домена.

Необязательно, короткий олиго- или полипептидный линкер длиной от 2 и 10 аминокислот может образовывать соединение между трансмембранным доменом и цитоплазматической областью CAR. Дублет глицин-серин представляет собой особенно подходящий линкер. Например, В одном из аспектов линкер содержит аминокислотную последовательность GGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 5). В некоторых вариантах осуществления линкер кодируется нуклеотидной последовательностью GGTGGCGGAGGTTCTGGAGGTGGAGGTTCC (SEQ ID NO: 16).

В одном из аспектов шарнирная область или спейсер содержит шарнирную область KIR2DS2.

Цитоплазматический домен

Цитоплазматический домен или область CAR по настоящему изобретению относится к внутриклеточному сигнальному домену. Внутриклеточный сигнальный домен, как правило, отвечает за активацию по меньшей мере одной из нормальных эффекторных функций иммунной клетки, в которую встраивают CAR.

Примеры внутриклеточных сигнальных доменов для применения в CAR по изобретению включают цитоплазматические последовательности T-клеточного рецептора (TCR) и корецепторов, действующих согласовано для инициации передачи сигнала после вовлечения антигенного рецептора, а также любое производное или вариант этих последовательностей и любую рекомбинантную последовательность, имеющую ту же функциональную способность.

Известно, что сигналы, генерируемые только через TCR, являются недостаточными для полной активации T-клетки, и что также необходим вторичный и/или костимуляторный сигнал. Таким образом, можно сказать, что активация T-клетки опосредована двумя разными классами цитоплазматических сигнальных последовательностей: те, которые инициируют антигензависимую первичную активацию посредством TCR (первичные внутриклеточные сигнальные домены), и те, которые действуют антиген-независимым образом для обеспечения вторичного или костимуляторного сигнала (вторичный цитоплазматический домен, например, костимуляторный домен).

Первичный сигнальный домен регулирует первичную активацию комплекса TCR стимуляторным образом или ингибиторным образом. Первичные внутриклеточные сигнальные домены, действующие стимуляторным образом, могут содержать сигнальные мотивы, известные как иммунорецепторные тирозиновые активирующие мотивы или ITAM.

Примеры ITAM, содержащего первичные внутриклеточные сигнальные домены, особенно применимые в изобретении, включают домен TCR дзета, FcR гамма, FcR бета, CD3 гамма, CD3 дельта, CD3 эпсилон, CD5, CD22, CD79a, CD79b, CD278 (также известный как "ICOS"), FcεRI, DAP10, DAP12 и CD66d. В одном из вариантов осуществления CAR по изобретению содержит внутриклеточный сигнальный домен, например, первичный сигнальный домен CD3 дзета.

В одном из вариантов осуществления первичный сигнальный домен содержит модифицированный домен ITAM, например, мутантный домен ITAM, имеющий измененную (например, повышенную или пониженную) активность по сравнению с нативным доменом ITAM. В одном из вариантов осуществления первичный сигнальный домен содержит модифицированный ITAM-содержащий первичный внутриклеточный сигнальный домен, например, оптимизированный и/или укороченный ITAM-содержащий первичный внутриклеточный сигнальный домен. В варианте осуществления первичный сигнальный домен содержит один, два, три, четыре или более мотивов ITAM.

Дополнительные примеры молекул, содержащих первичный внутриклеточный сигнальный домен, особенно применимый в изобретении, включают DAP10, DAP12 и CD32.

Внутриклеточный сигнальный домен CAR может содержать сам первичный сигнальный домен, например, сигнальный домен CD3 дзета, или его можно комбинировать с любыми другими желаемыми внутриклеточными сигнальными доменами, применимыми в отношении CAR по изобретению. Например, внутриклеточный сигнальный домен CAR может содержать первичный сигнальный домен, например, часть дзета-цепи CD3, и костимуляторный сигнальный домен. Костимуляторный сигнальный домен относится к части CAR, содержащей внутриклеточный домен костимуляторной молекулы. Костимуляторная молекула является молекулой поверхности клетки, иной, чем антигенный рецептор или его лиганды, необходимые для эффективного ответа лимфоцитов на антиген. Примеры таких молекул включают молекулу MHC класса I, белки рецепторов ФНО, иммуноглобулин-подобные белки, рецепторы цитокинов, интегрины, сигнальные молекулы активации лимфоцитов (белки SLAM), активирующие рецепторы NK-клеток, BTLA, рецептор Толл-лиганда, OX40, CD2, CD7, CD27, CD28, CD30, CD40, CDS, ICAM-1, LFA-1 (CD11a/CD18), 4-1BB (CD137), B7-H3, CDS, ICAM-1, ICOS (CD278), GITR, BAFFR, LIGHT, HVEM (LIGHTR), KIRDS2, SLAMF7, NKp80 (KLRF1), NKp44, NKp30, NKp46, CD19, CD4, CD8 альфа, CD8 бета, IL2R бета, IL2R гамма, IL7R альфа, ITGA4, VLA1, CD49a, ITGA4, IA4, CD49D, ITGA6, VLA-6, CD49f, ITGAD, CD11d, ITGAE, CD103, ITGAL, CD11a, LFA-1, ITGAM, CD11b, ITGAX, CD11c, ITGB1, CD29, ITGB2, CD18, LFA-1, ITGB7, NKG2D, NKG2C, TNFR2, TRANCE/RANKL, DNAM1 (CD226), SLAMF4 (CD244, 2B4), CD84, CD96 (Tactile), CEACAM1, CRTAM, Ly9 (CD229), CD160 (BY55), PSGL1, CD100 (SEMA4D), CD69, SLAMF6 (NTB-A, Ly108), SLAM (SLAMF1, CD150, IPO-3), BLAME (SLAMF8), SELPLG (CD162), LTBR, LAT, GADS, SLP-76, PAG/Cbp, CD19a и лиганда, специфически связывающийся с CD83, и т.п. Например, показано, что костимуляция CD27 повышает экспансию, эффекторную функцию и выживаемость CART-клеток человека in vitro и повышает выживаемость и противоопухолевую активность T-клеток человека in vivo (Song et al. Blood. 2012; 119(3):696-706). Внутриклеточные сигнальные последовательности в цитоплазматической части CAR по изобретению можно соединять друг с другом в случайном или определенном порядке. Необязательно, короткий олиго- или полипептидный линкер, например, длиной от 2 до 10 аминокислот (например, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 аминокислот) может образовывать соединение между внутриклеточной сигнальной последовательностью. В одном из вариантов осуществления в качестве подходящего линкера можно использовать дублет глицин-серин. В одном из вариантов осуществления в качестве подходящего линкера можно использовать одну аминокислоту, например, аланин, глицин.

В одном из аспектов внутриклеточный сигнальный домен конструируют так, чтобы он содержал два или более, например, 2, 3, 4, 5 или более, костимуляторных сигнальных домена. В варианте осуществления два или более, например, 2, 3, 4, 5 или более, костимуляторных сигнальных домена разделяют линкерной молекулой, например, линкерной молекулой, представленной в настоящем описании. В одном из вариантов осуществления внутриклеточный сигнальный домен содержит два костимуляторных сигнальных домена. В некоторых вариантах осуществления линкерная молекула является остатком глицина. В некоторых вариантах осуществления линкер является остатком аланина.

В одном из аспектов внутриклеточный сигнальный домен конструируют так, чтобы он содержал сигнальный домен CD3 дзета и сигнальный домен CD28. В одном из аспектов внутриклеточный сигнальный домен конструируют так, чтобы он содержал сигнальный домен CD3 дзета и сигнальный домен 4-1BB. В одном из аспектов сигнальный домен 4-1BB является сигнальным доменом SEQ ID NO: 7. В одном из аспектов сигнальный домен CD3 дзета является сигнальным доменом SEQ ID NO: 9 (мутантным CD3 дзета) или SEQ ID NO: 10 (CD3 дзета человека дикого типа).

В одном из аспектов внутриклеточный сигнальный домен конструируют так, чтобы он содержал сигнальный домен CD3 дзета и сигнальный домен CD27. В одном из аспектов сигнальный домен CD27 содержит аминокислотную последовательность QRRKYRSNKGESPVEPAEPCRYSCPREEEGSTIPIQEDYRKPEPACSP (SEQ ID NO: 8). В одном из аспектов сигнальный домен CD27 кодируется последовательностью нуклеиновой кислоты AGGAGTAAGAGGAGCAGGCTCCTGCACAGTGACTACATGAACATGACTCCCCGCCGCCCCGGGCCCACCCGCAAGCATTACCAGCCCTATGCCCCACCACGCGACTTCGCAGCCTATCGCTCC (SEQ ID NO: 19).

В одном из аспектов внутриклеточный домен конструируют так, чтобы он содержал сигнальный домен CD3 дзета и сигнальный домен CD28. В одном из аспектов сигнальный домен CD28 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1104. В одном из аспектов сигнальный домен CD28 кодируется последовательностью нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 1105.

В одном из аспектов внутриклеточный сигнальный домен конструируют так, чтобы он содержал сигнальный домен CD3 дзета и сигнальный домен ICOS. В одном из аспектов сигнальный домен ICOS содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1106. В одном из аспектов сигнальный домен ICOS кодируется последовательностью нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 1107.

В одном из аспектов CAR-экспрессирующая клетка, представленная в настоящем описании, может дополнительно содержать второй CAR, например, второй CAR, включающий другой антигенсвязывающий домен, например, для той же мишени (BCMA) или другой мишени (например, CD19, CD20, или CS-1 или других мишеней множественной миеломы, например, легкой каппа-цепи, CD138, антиген Ley или CD38 (Garfall et al., Discovery Medicine, 2014, 17(91):37-46)). В одном из вариантов осуществления CAR-экспрессирующая клетка содержит первый CAR, направленный против первого антигена и включающий внутриклеточный сигнальный домен, имеющий костимуляторный сигнальный домен, но не первичный сигнальный домен, и второй CAR, направленный против второго, другого, антигена и включающий внутриклеточный сигнальный домен, имеющий первичный сигнальный домен, но не костимуляторный сигнальный домен. Не желая быть связанными какой-либо теорией, полагают, что помещение костимуляторного сигнального домена, например, 4-1BB, CD28, CD27 ICOS или OX-40, в первый CAR, и первичного сигнального домена, например, CD3 дзета, во второй CAR может ограничивать активность CAR в отношении клеток, в которых экспрессируются обе мишени. В одном из вариантов осуществления CAR-экспрессирующая клетка содержит первый CAR BCMA, включающий BCMA-связывающий домен, трансмембранный домен и костимуляторный домен, и второй CAR, направленный против антигена, иного, чем BCMA (например, антигена, экспрессирующегося на клетках лейкоза или лимфомы, например, CD19, CD20, CS-1, легкой каппа-цепи, CD139, антигена Ley или CD38) и включает антигенсвязывающий домен, трансмембранный домен и первичный сигнальный домен. В другом варианте осуществления CAR-экспрессирующая клетка содержит первый CAR BCMA, включающий BCMA-связывающий домен, трансмембранный домен и первичный сигнальный домен, и второй CAR, направленный против антигена, иного, чем BCMA (например, антигена, экспрессирующегося на клетках лейкоза или лимфомы, например, CD19, CD20, CS-1, легкой каппа-цепи, CD139, антигена Ley или CD38) и включает антигенсвязывающий домен против антигена, трансмембранный домен и костимуляторный сигнальный домен. В одном из вариантов осуществления CAR-экспрессирующая клетка содержит CAR BCMA, представленный в настоящем описании, и CAR против CD19 (CAR CD19).

В одном из вариантов осуществления CAR-экспрессирующая клетка содержит CAR BCMA, представленный в настоящем описании, и ингибиторный CAR. В одном из вариантов осуществления ингибиторный CAR содержит антигенсвязывающий домен, связывающийся с антигеном, обнаруживаемым на нормальных клетках, но не злокачественных клетках, например нормальных клетках, также экспрессирующих мезотелин. В одном из вариантов осуществления ингибиторный CAR содержит антигенсвязывающий домен, трансмембранный домен и внутриклеточный домен ингибиторной молекулы. Например, внутриклеточный домен ингибиторного CAR может являться внутриклеточным доменом PD1, PD-L1, PD-L2, CTLA4, TIM3, CEACAM (например, CEACAM-1, CEACAM-3 и/или CEACAM-5), LAG3, VISTA, BTLA, TIGIT, LAIR1, CD160, 2B4, CD80, CD86, B7-H3 (CD276), B7-H4 (VTCN1), HVEM (TNFRSF14 или CD270), KIR, A2aR, MHC класса I, MHC класса II, GAL9, аденозина и TGFR бета.

В одном из вариантов осуществления, если CAR-экспрессирующая клетка содержит два или более разных CAR, антигенсвязывающие домены разных CAR могут являться такими, что антигенсвязывающие домены не взаимодействуют друг с другом. Например, клетка, экспрессирующая первый и второй CAR, может иметь антигенсвязывающий домен первого CAR, например, в качестве фрагмента, например, scFv, не образующий соединение с антигенсвязывающим доменом второго CAR, например, антигенсвязывающий домен второго CAR является VHH.

В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий домен содержит однодоменные антигенсвязывающие (SDAB) молекулы, включающие молекулы, определяющие комплементарность области которых являются частью однодоменного полипептида. Неограничивающие примеры включают вариабельные домены тяжелой цепи, связывающие молекулы, в которых от природы отсутствуют легкие цепи, отдельные домены, полученные из общепринятых 4-цепочечных антител, сконструированные домены и однодоменные каркасы, иные, чем полученные из антител. Молекулы SDAB могут являться любыми молекулами SDAB, известными в этой области, или любыми однодоменными молекулами в будущем. Молекулы SDAB можно получать из любого вида, включая, в качестве неограничивающих примеров, мышь, человека, верблюда, ламу, миногу, рыбу, акулу, козу, кролика и крупный рогатый скот. Этот термин также включает природные однодоменные молекулы антитела из вида, иного, чем Верблюжьи и акулы.

В одном из аспектов молекулу SDAB можно получать из вариабельной области иммуноглобулина, обнаруживаемого у рыб, такой как, например, полученная из изотипа иммуноглобулина, известного как новый антигенный рецептор (NAR), обнаруживаемый в сыворотке акулы. Способы получения однодоменных молекул, полученных из вариабельной области NAR ("IgNAR"), описаны в WO03/014161 и Streltsov (2005) Protein Sci. 14:2901-2909.

По другому аспекту молекула SDAB является природной однодоменной антигенсвязывающей молекулой, известной как тяжелая цепь, лишенная легких цепей. Такие однодоменные молекулы описаны, например, в WO9404678 и Hamers-Casterman, C. et al. (1993) Nature 363:446-448. Для ясности, этот вариабельный домен, полученный из молекулы тяжелой цепи, от природы лишенной легкой цепи, известен в настоящем описании как VHH или нанотела для его различения от общепринятого VH из четырехцепочечных иммуноглобулинов. Такую молекулу VHH можно получать из видов Camelidae, например, верблюда, ламы, дромадера, альпаки и гуанако. Другие виды, помимо Camelidae, могут продуцировать молекулы тяжелой цепи, от природы лишенные легкой цепи, такие VHH входят в объем изобретения.

Молекулы SDAB могут являться рекомбинантными, CDR-пересаженными, гуманизированными, камелизированными, деиммунизированными и/или полученными in vitro (например, выбранными посредством фагового дисплея).

Также обнаружено, что клетки имеют множество химерных встроенных в мембрану рецепторов, содержащих антигенсвязывающий домен, что взаимодействия между антигенсвязывающим доменом рецепторов может являться нежелательным, например, т.к. они ингибируют способность одного или более антигенсвязывающих доменов связываться с их когнатным антигеном. Таким образом, настоящее изобретение относится к клеткам, имеющим первый и второй неприродный химерный встроенный в мембрану рецептор, содержащий антигенсвязывающие домены, минимизирующие такие взаимодействия. Настоящее изобретение также относится к нуклеиновым кислотам, кодирующим первый и второй неприродный, химерный, встроенный в мембрану рецептор, содержащий антигенсвязывающие домены, минимизирующие такие взаимодействия, а также способам получения и применения таких клеток и нуклеиновых кислот. В варианте осуществления антигенсвязывающий домен одного из указанного первого и указанного второго неприродного, химерного, встроенного в мембрану рецептора содержит scFv, а другой содержит один домен VH, например, один домен VH вида Верблюжьих, акулы или миноги или один домен VH, полученный из последовательности человека или мыши.

В некоторых вариантах осуществления описываемое в заявке изобретение содержит первый и второй CAR, где антигенсвязывающий домен одного из указанного первого CAR и указанного второго CAR не содержит вариабельный домен легкой цепи и вариабельный домен тяжелой цепи. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий домен одного из указанного первого CAR и указанного второго CAR является scFv, а другой не является scFv. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий домен одного из указанного первого CAR и указанного второго CAR содержит один домен VH, например, один домен VH вида Верблюжьих, акулы или миноги или один домен VH, полученный из последовательности человека или мыши. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий домен одного из указанного первого CAR и указанного второго CAR содержит нанотело. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий домен одного из указанного первого CAR и указанного второго CAR содержит домен VHH вида Верблюжьих.

В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий домен одного из указанного первого CAR и указанного второго CAR содержит scFv, а другой содержит один домен VH, например, один домен VH вида Верблюжьих, акулы или миноги или один домен VH, полученный из последовательности человека или мыши. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий домен одного из указанного первого CAR и указанного второго CAR содержит scFv, а другой содержит нанотело. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий домен одного из указанного первого CAR и указанного второго CAR содержит scFv, а другой содержит домен VHH вида Верблюжьих.

В некоторых вариантах осуществления при наличии на поверхности клетки связывание антигенсвязывающего домена указанного первого CAR с его когнатным антигеном, по существу, не снижено при наличии указанного второго CAR. В некоторых вариантах осуществления связывание антигенсвязывающего домена указанного первого CAR с его когнатным антигеном в присутствие указанного второго CAR составляет 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% от связывания антигенсвязывающего домена указанного первого CAR с его когнатным антигеном в отсутствие указанного второго CAR.

В некоторых вариантах осуществления при наличии на поверхности клетки антигенсвязывающие домены указанного первого CAR и указанного второго CAR связываются друг с другом меньше, чем если бы оба из них являлись антигенсвязывающими доменами scFv. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающие домены указанного первого CAR и указанного второго CAR связывается друг с другом на 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% меньше, чем если бы оба из них являлись антигенсвязывающими доменами scFv.

В другом аспекте CAR-экспрессирующая клетка, представленная в настоящем описании, может дополнительно экспрессировать другое средство, например, средство, повышающее активность CAR-экспрессирующей клетки. Например, в одном из вариантов осуществления средство может являться средством, ингибирующим ингибиторную молекулу, например, средством, представленным в настоящем описании. Ингибиторные молекулы, например, PD1, в некоторых вариантах осуществления могут снижать способность CAR-экспрессирующей клетки вызывать иммунный эффекторный ответ. Примеры ингибиторных молекул включают PD1, PD-L1, PD-L2, CTLA4, TIM3, CEACAM (например, CEACAM-1, CEACAM-3 и/или CEACAM-5), LAG3, VISTA, BTLA, TIGIT, LAIR1, CD160, 2B4, CD80, CD86, B7-H3 (CD276), B7-H4 (VTCN1), HVEM (TNFRSF14 или CD270), KIR, A2aR, MHC класса I, MHC класса II, GAL9, аденозин и TGFR бета. В одном из вариантов осуществления средство, ингибирующее ингибиторную молекулу, содержит первый полипептид, например, ингибиторную молекулу, связанный со вторым полипептидом, передающим положительный сигнал в клетку, например, внутриклеточный сигнальный домен, представленный в настоящем описании. В одном из вариантов осуществления средство содержит первый полипептид, например, из ингибиторной молекулы, такой как PD1, PD-L1, PD-L2, CTLA4, TIM3, CEACAM (например, CEACAM-1, CEACAM-3 и/или CEACAM-5), LAG3, VISTA, BTLA, TIGIT, LAIR1, CD160, 2B4, CD80, CD86, B7-H3 (CD276), B7-H4 (VTCN1), HVEM (TNFRSF14 или CD270), KIR, A2aR, MHC класса I, MHC класса II, GAL9, аденозин и TGFR бета или фрагмент любого из них (например, по меньшей мере, часть внеклеточного домена любого из них), и второй полипептид, являющийся внутриклеточным сигнальным доменом, представленным в настоящем описании (например, содержащим костимуляторный домен (например, 41BB, CD27 ICOS или CD28, например, как представлено в настоящем описании)), и/или первичным сигнальным доменом (например, сигнальным доменом CD3 дзета, представленным в настоящем описании). В одном из вариантов осуществления средство содержит первый полипептид PD1 или его фрагмент (например, по меньшей мере, часть внеклеточного домена PD1) и второй полипептид внутриклеточного сигнального домена, представленного в настоящем описании (например, сигнального домена CD28, представленного в настоящем описании, и/или сигнального домена CD3 дзета, представленного в настоящем описании). В вариантах осуществления CAR-экспрессирующая клетка, представленная в настоящем описании, содержит костимуляторный рецептор-переключатель, например, как описано в WO2013/019615, включенном в настоящее описание в качестве ссылки в полном объеме. PD1 является ингибиторным членом семейства рецепторов CD28, также включающего CD28, CTLA-4, ICOS, и BTLA. PD-1 экспрессируется на активированных B-клетках, T-клетках и миелоидных клетках (Agata et al. 1996 Int. Immunol 8:765-75). Показано, что два лиганда для PD1, PD-L1 и PD-L2 отрицательно регулируют активацию T-клеток после связывания с PD1 (Freeman et al. 2000 J Exp Med 192:1027-34; Latchman et al. 2001 Nat Immunol 2:261-8; Carter et al. 2002 Eur J Immunol 32:634-43). PD-L1 в избытке обнаруживается при злокачественных новообразованиях человека (Dong et al. 2003 J Mol Med 81:281-7; Blank et al. 2005 Cancer Immunol. Immunother 54:307-314; Konishi et al. 2004 Clin Cancer Res 10:5094). Иммуносупрессию можно реверсировать посредством ингибирования локального взаимодействия PD1 с PD-L1.

В одном из вариантов осуществления средство содержит внеклеточный домен (ECD) ингибиторной молекулы, например, белка программируемой смерти 1 (PD1), который можно подвергать слиянию с трансмембранным доменом и внутриклеточными сигнальными доменами, такими как 41BB и CD3 дзета (также обозначаемый в настоящем описании как CAR PD1). В одном из вариантов осуществления CAR PD1, при использовании в комбинациях с CAR BCMA, представленным в настоящем описании, улучшает выживаемость CAR-экспрессирующей клетки, например, T-клетки или NK-клетки. В одном из вариантов осуществления CAR является CAR PD1, содержащим внеклеточный домен PD1, указанный подчеркиванием в SEQ ID NO: 24. В одном из вариантов осуществления CAR PD1 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 24.

Malpvtalllplalllhaarppgwfldspdrpwnpptfspallvvtegdnatftcsfsntsesfvlnwyrmspsnqtdklaafpedrsqpgqdcrfrvtqlpngrdfhmsvvrarrndsgtylcgaislapkaqikeslraelrvterraevptahpspsprpagqfqtlvtttpaprpptpaptiasqplslrpeacrpaaggavhtrgldfacdiyiwaplagtcgvlllslvitlyckrgrkkllyifkqpfmrpvqttqeedgcscrfpeeeeggcelrvkfsrsadapaykqgqnqlynelnlgrreeydvldkrrgrdpemggkprrknpqeglynelqkdkmaeayseigmkgerrrgkghdglyqglstatkdtydalhmqalppr (SEQ ID NO: 24).

В одном из вариантов осуществления CAR PD1 содержит аминокислотную последовательность, представленную ниже (SEQ ID NO: 22).

pgwfldspdrpwnpptfspallvvtegdnatftcsfsntsesfvlnwyrmspsnqtdklaafpedrsqpgqdcrfrvtqlpngrdfhmsvvrarrndsgtylcgaislapkaqikeslraelrvterraevptahpspsprpagqfqtlvtttpaprpptpaptiasqplslrpeacrpaaggavhtrgldfacdiyiwaplagtcgvlllslvitlyckrgrkkllyifkqpfmrpvqttqeedgcscrfpeeeeggcelrvkfsrsadapaykqgqnqlynelnlgrreeydvldkrrgrdpemggkprrknpqeglynelqkdkmaeayseigmkgerrrgkghdglyqglstatkdtydalhmqalppr (SEQ ID NO: 22).

В одном из вариантов осуществления средство содержит последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую CAR PD1, например, CAR PD1, представленный в настоящем описании. В одном из вариантов осуществления последовательность нуклеиновой кислоты CAR PD1 представлена ниже, при этом ECD PD1 в SEQ ID NO: 23 выделен подчеркиванием.

atggccctccctgtcactgccctgcttctccccctcgcactcctgctccacgccgctagaccacccggatggtttctggactctccggatcgcccgtggaatcccccaaccttctcaccggcactcttggttgtgactgagggcgataatgcgaccttcacgtgctcgttctccaacacctccgaatcattcgtgctgaactggtaccgcatgagcccgtcaaaccagaccgacaagctcgccgcgtttccggaagatcggtcgcaaccgggacaggattgtcggttccgcgtgactcaactgccgaatggcagagacttccacatgagcgtggtccgcgctaggcgaaacgactccgggacctacctgtgcggagccatctcgctggcgcctaaggcccaaatcaaagagagcttgagggccgaactgagagtgaccgagcgcagagctgaggtgccaactgcacatccatccccatcgcctcggcctgcggggcagtttcagaccctggtcacgaccactccggcgccgcgcccaccgactccggccccaactatcgcgagccagcccctgtcgctgaggccggaagcatgccgccctgccgccggaggtgctgtgcatacccggggattggacttcgcatgcgacatctacatttgggctcctctcgccggaacttgtggcgtgctccttctgtccctggtcatcaccctgtactgcaagcggggtcggaaaaagcttctgtacattttcaagcagcccttcatgaggcccgtgcaaaccacccaggaggaggacggttgctcctgccggttccccgaagaggaagaaggaggttgcgagctgcgcgtgaagttctcccggagcgccgacgcccccgcctataagcagggccagaaccagctgtacaacgaactgaacctgggacggcgggaagagtacgatgtgctggacaagcggcgcggccgggaccccgaaatgggcgggaagcctagaagaaagaaccctcaggaaggcctgtataacgagctgcagaaggacaagatggccgaggcctactccgaaattgggatgaagggagagcggcggaggggaaaggggcacgacggcctgtaccaaggactgtccaccgccaccaaggacacatacgatgccctgcacatgcaggcccttccccctcgc (SEQ ID NO: 23).

В другом аспекте настоящее изобретение относится к популяции CAR-экспрессирующих клеток, например, CART-клеток или CAR-экспрессирующих NK-клеток. В некоторых вариантах осуществления популяция CAR-экспрессирующих клеток содержит смесь клеток, экспрессирующих различные CAR. Например, в одном из вариантов осуществления популяция CAR-экспрессирующих клеток (например, CART-клеток или CAR-экспрессирующих NK-клеток) может включать первую клетку, экспрессирующую CAR, содержащий связывающий домен против BCMA, представленный в настоящем описании, и вторую клетку, экспрессирующую CAR, содержащий другой связывающий домен против BCMA, например, связывающий домен против BCMA, представленный в настоящем описании, отличающийся от связывающего домена против BCMA в CAR, экспрессируемом первой клеткой. В качестве другого примера, популяция CAR-экспрессирующих клеток может включать первую клетку, экспрессирующую CAR, включающий связывающий домен против BCMA, например, как представлено в настоящем описании, и вторую клетку, экспрессирующую CAR, включающий антигенсвязывающий домен против мишени, иной, чем BCMA (например, CD19, CD20, CS-1, легкой каппа-цепи, CD139, антигена Ley или CD38). В одном из вариантов осуществления популяция CAR-экспрессирующих клеток включает первую клетку, экспрессирующую CAR, содержащий связывающий домен против BCMA, например, как представлено в настоящем описании, и вторую клетку, экспрессирующую CAR, содержащий антигенсвязывающий домен против CD19 (CAR CD19). В одном из вариантов осуществления популяция CAR-экспрессирующих клеток включает, например, первую клетку, экспрессирующую CAR, включающий первичный внутриклеточный сигнальный домен, и вторую клетку, экспрессирующую CAR, включающий вторичный сигнальный домен.

В другом аспекте настоящее изобретение относится к популяции клеток, где по меньшей мере одна клетка в популяции экспрессирует CAR, содержащий домен против BCMA, представленный в настоящем описании, и вторая клетка экспрессирует другое средство, например, средство, повышающее активность CAR-экспрессирующей клетки. Например, в одном из вариантов осуществления средство может являться средством, ингибирующим ингибиторную молекулу. Ингибиторные молекулы, например, в некоторых вариантах осуществления могут снижать способность CAR-экспрессирующей клетки вызывать иммунный эффекторный ответ. Примеры ингибиторных молекул включают PD1, PD-L1, PD-L2, CTLA4, TIM3, CEACAM (например, CEACAM-1, CEACAM-3 и/или CEACAM-5), LAG3, VISTA, BTLA, TIGIT, LAIR1, CD160, 2B4, CD80, CD86, B7-H3 (CD276), B7-H4 (VTCN1), HVEM (TNFRSF14 или CD270), KIR, A2aR, MHC класса I, MHC класса II, GAL9, аденозин и TGFR бета. В одном из вариантов осуществления средство, ингибирующее ингибиторную молекулу, содержит первый полипептид, например, ингибиторную молекулу, связанную со вторым полипептидом, передающим положительный сигнал в клетку, например, внутриклеточный сигнальный домен, представленный в настоящем описании. В одном из вариантов осуществления средство содержит первый полипептид, например, из ингибиторной молекулы, такой как PD1, PD-L1, PD-L2, CTLA4, TIM3, CEACAM (например, CEACAM-1, CEACAM-3 и/или CEACAM-5), LAG3, VISTA, BTLA, TIGIT, LAIR1, CD160, 2B4, CD80, CD86, B7-H3 (CD276), B7-H4 (VTCN1), HVEM (TNFRSF14 или CD270), KIR, A2aR, MHC класса I, MHC класса II, GAL9, аденозин и TGFR бета, или фрагмент любой из них (например, по меньшей мере, часть внеклеточного домена любой из них), и второй полипептид, являющийся внутриклеточным сигнальным доменом, представленным в настоящем описании (например, содержащим костимуляторный домен (например, 41BB, CD27, ICOS или CD28, например, как представлено в настоящем описании), и/или первичный сигнальный домен (например, сигнальный домен CD3 дзета, представленный в настоящем описании). В одном из вариантов осуществления средство содержит первый полипептид PD1 или его фрагмент (например, по меньшей мере, часть внеклеточного домена PD1) и второй полипептид внутриклеточного сигнального домена, представленного в настоящем описании (например, сигнального домена CD28, представленного в настоящем описании, и/или сигнального домена CD3 дзета, представленного в настоящем описании).

В одном из аспектов настоящее изобретение относится к способам, включающим введение популяции CAR-экспрессирующих клеток (например, CART-клеток или CAR-экспрессирующих NK-клеток), например, смеси клеток, экспрессирующих разные CAR, в комбинации с другим средством, например, ингибитором киназы, таким как ингибитор киназы, представленный в настоящем описании. В другом аспекте настоящее изобретение относится к способам, включающим введение популяции клеток, где по меньшей мере одна клетка в популяции экспрессирует CAR, содержащий связывающий домен против антигена, ассоциированного со злокачественным новообразованием, как представлено в настоящем описании, и вторая клетка экспрессирует другое средство, например, средство, повышающее активность CAR-экспрессирующей клетки, в комбинации с другим средством, например, ингибитором киназы, таким как ингибитор киназы, представленный в настоящем описании.

CAR с рецептором естественных киллеров (NKR)

В варианте осуществления молекула CAR, представленная в настоящем описании содержит один или более компонентов рецептора естественных киллеров (NKR), таким образом, образуя NKR-CAR. NKR-компонент может являться трансмембранным доменом, шарнирным доменом или цитоплазматическим доменом из любого из следующих рецепторов естественных киллеров: иммуноглобулин-подобного рецептора киллерных клеток (KIR), например, KIR2DL1, KIR2DL2/L3, KIR2DL4, KIR2DL5A, KIR2DL5B, KIR2DS1, KIR2DS2, KIR2DS3, KIR2DS4, DIR2DS5, KIR3DL1/S1, KIR3DL2, KIR3DL3, KIR2DP1, и KIR3DP1, рецептора естественных цитотоксических клеток (NCR), например, NKp30, NKp44, NKp46, семейства сигнальных молекул активации лимфоцитов (SLAM) рецепторов иммунных клеток, например, CD48, CD229, 2B4, CD84, NTB-A, CRACC, BLAME и CD2F-10, Fc-рецептора (FcR), например, CD16 и CD64, и рецепторов Ly49, например, LY49A, LY49C. Молекулы NKR-CAR, представленные в настоящем описании, могут взаимодействовать с адаптерной молекулой или внутриклеточным сигнальным доменом, например, DAP12. Примеры конфигураций и последовательностей молекул CAR, содержащих NKR-компоненты, описывают в международной публикации № WO2014/145252, содержание которой, таким образом, включено в настоящее описание в качестве ссылки.

Стратегии регуляции химерных антигенных рецепторов

Существует множество путей регуляции активности CAR. В некоторых вариантах осуществления регулируемый CAR (RCAR), в котором можно контролировать активность CAR, является желательным для оптимизации безопасности и эффективности терапии CAR. Например, в качестве "переключателя" в терапии CAR по настоящему изобретению можно использовать индуцирование апоптоза с использованием, например, каспазы, слитой с доменом димеризации (см., например, Di et al., N Engl. J. Med. 2011 Nov. 3; 365(18):1673-1683). В другом примере CAR-экспрессирующие клетки также экспрессирует молекулу индуцибельной каспазы-9 (iCaspase-9), которая после введения лекарственного средства-димеризатора (например, римидуцида (также называемого AP1903 (Bellicum Pharmaceuticals) или AP20187 (Ariad)) приводит к активации каспазы-9 и апоптоза клеток. Молекула iCaspase-9 содержит домен, связывающий химический индуктор димеризации (CID), опосредующий димеризацию в присутствие CID. Это приводит к индуцибельному и селективному истощению CAR-экспрессирующих клеток. В некоторых случаях молекула iCaspase-9 кодируется молекулой нуклеиновой кислоты отдельно от CAR-кодирующих векторов. В некоторых случаях, молекула iCaspase-9 кодируется той же молекулой нуклеиновой кислоты, что и CAR-кодирующий вектор. iCaspase-9 может представлять собой "предохранитель", чтобы избежать какой-либо токсичности CAR-экспрессирующих клеток. См., например, Song et al. Cancer Gene Ther. 2008; 15(10):667-75; описание клинического исследования под инвентарным номером NCT02107963 и Di Stasi et al. N. Engl. J. Med. 2011; 365:1673-83.

Альтернативные стратегии для регуляции терапии CAR по настоящему изобретению включают использование низкомолекулярных соединений или антител, деактивирующих или выключающих активность CAR, например, посредством истощения CAR-экспрессирующих клеток, например, посредством индукции антителозависимой клеточно-опосредованной цитотоксичности (ADCC). Например, CAR-экспрессирующие клетки, представленные в настоящем описании, также могут экспрессировать антиген, распознаваемый молекулами, способными индуцировать гибель клеток, например, ADCC или комплимент-индуцированную гибель клеток. Например, CAR-экспрессирующие клетки, представленные в настоящем описании, также могут экспрессировать рецептор, способный подвергаться таргетингу со стороны антитела или фрагмента антитела. Примеры таких рецепторов включают EpCAM, VEGFR, интегрины (например, интегрины ανβ3, α4, αΙ¾β3, α4β7, α5β1, ανβ3, αν), членов суперсемейства рецепторов ФНО (например, TRAIL-R1, TRAIL-R2), рецептор PDGF, рецептор интерферона, рецептор фолата, GPNMB, ICAM-1, HLA-DR, CEA, CA-125, MUC1, TAG-72, рецептор ИЛ-6, 5T4, GD2, GD3, CD2, CD3, CD4, CD5, CD11, CD11a/LFA-1, CD15, CD18/ITGB2, CD19, CD20, CD22, рецептор CD23/lgE, CD25, CD28, CD30, CD33, CD38, CD40, CD41, CD44, CD51, CD52, CD62L, CD74, CD80, CD125, CD147/басигин, CD152/CTLA-4, CD154/CD40L, CD195/CCR5, CD319/SLAMF7, EGFR и их укороченные версии (например, версии, сохраняющие один или более внеклеточных эпитопов, но лишенные одной или более областей в цитоплазматическом домене). Например, CAR-экспрессирующие клетки, представленные в настоящем описании, также могут экспрессировать укороченный рецептор эпидермального фактора роста (EGFR), у которого отсутствует способность к передаче сигнала, но сохраняющий эпитоп, распознаваемый молекулами, способными индуцировать ADCC, например, цетуксимабом (ERBITUX®), таким образом, что введение цетуксимаба индуцирует ADCC и последующее истощение CAR-экспрессирующих клеток (см., например, WO2011/056894, и Jonnalagadda et al., Gene Ther. 2013; 20(8)853-860). Другая стратегия включает экспрессию очень компактного маркера/"гена самоубийства", в котором комбинируют эпитопы-мишени из антигенов CD32 и CD20 в CAR-экспрессирующих клетках, представленных в настоящем описании, связывающихся с ритуксимабом, что приводит к селективному истощению CAR-экспрессирующих клеток, например, посредством ADCC (см., например, Philip et al., Blood. 2014; 124(8)1277-1287). Другие способы истощения CAR-экспрессирующих клеток, представленных в настоящем описании, включают введение CAMPATH®, моноклонального антитела против CD52, селективно связывающегося и воздействующего на зрелые лимфоциты, например, CAR-экспрессирующие клетки, для разрушения, например, посредством индукции ADCC. В других вариантах осуществления на CAR-экспрессирующие клетки можно селективно воздействовать с использованием лиганда CAR, например, антиидиотипического антитела. В некоторых вариантах осуществления антиидиотипическое антитело может вызывать активность эффекторной клетки, например, активности ADCC или ADC, таким образом, снижая количество CAR-экспрессирующих клеток. В других вариантах осуществления лиганд CAR, например, антиидиотипическое антитело, можно соединять со средством, индуцирующим цитолиз клеток, например, токсином, таким образом, снижая количество CAR-экспрессирующих клеток. Альтернативно, сами молекулы CAR можно конфигурировать таким образом, что можно регулировать активность, например, включать и выключать, как описано ниже.

В некоторых вариантах осуществления RCAR содержит набор полипептидов, как правило, два в простейших вариантах осуществления, в котором компоненты стандартного CAR, представленного в настоящем описании, например, антигенсвязывающий домен и внутриклеточный сигнальный домен, разделены по отдельным полипептидам или членам. В некоторых вариантах осуществления набор полипептидов включает переключатель димеризации, который при наличии молекулы димеризации может соединять полипептиды друг с другом, например, может соединять антигенсвязывающий домен с внутриклеточным сигнальным доменом. Дополнительное описание и примеры конфигураций таких регулируемых CAR представлены в настоящем описании и в международной публикации № WO2015/090229, включенной, таким образом, в настоящее описание в качестве ссылки в полном объеме.

В варианте осуществления RCAR содержит два полипептида или члена: 1) внутриклеточный сигнальный член, содержащий внутриклеточный сигнальный домен, например, первичный внутриклеточный сигнальный домен, представленный в настоящем описании, и первый домен-переключатель, 2) антигенсвязывающий член, содержащий антигенсвязывающий домен, например, направленный против опухолевого антигена, представленного в настоящем описании, как представлено в настоящем описании, и второй домен-переключатель. Необязательно, RCAR содержит трансмембранный домен, представленный в настоящем описании. В варианте осуществления трансмембранный домен может быть расположен на внутриклеточном сигнальном члене, на антигенсвязывающем члене или и том, и другом. (Если не указано иначе, если члены или элементы RCAR представлены в настоящем описании, порядок может быть таким, как представлено, но также включены другие порядки. Другими словами, в варианте осуществления порядок является таким, как определено в тексте, но в других вариантах осуществления порядок может отличаться. Например, порядок элементов на одной стороне трансмембранной области может отличаться от примера, например, расположение домена-переключателя относительно внутриклеточного сигнального домена может отличаться, например, являться обратным).

В варианте осуществления первый и второй домены-переключатели могут образовывать внутриклеточный или внеклеточный переключатель димеризации. В варианте осуществления переключатель димеризация может являться переключателем гомодимеризации, например, если первый и второй домен-переключатель являются одинаковыми, или переключателем гетеродимеризации, например, если первый и второй домен-переключатель отличаются друг от друга.

В вариантах осуществления RCAR может содержать "мульти-переключатель". Мульти-переключатель может содержать домены-переключатели гетеродимеризации или домены-переключатели гомодимеризации. Мульти-переключатель содержит множество, например, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10, доменов-переключателей, независимо от первого члена, например, антигенсвязывающего члена, и второго члена, например, внутриклеточного сигнального члена. В варианте осуществления первый член может содержать множество первых доменов-переключателей, например, домены-переключатели на основе FKBP, и второй член может содержать множество вторых доменов-переключателей, например, доменов-переключателей на основе FRB. В варианте осуществления первый член может содержать первый и второй домен-переключатель, например, домен-переключатель на основе FKBP и домен-переключатель на основе FRB, и второй член может содержать первый и второй домен-переключатель, например, домен-переключатель на основе FKBP и домен-переключатель на основе FRB.

В варианте осуществления внутриклеточный сигнальный член содержит один или более внутриклеточных сигнальных доменов, например, первичный внутриклеточный сигнальный домен и один или более костимуляторных сигнальных доменов.

В варианте осуществления антигенсвязывающий член может содержать один или более внутриклеточных сигнальных доменов, например, один или более костимуляторных сигнальных доменов. В варианте осуществления антигенсвязывающий член содержит множество, например, 2 или 3, костимуляторных сигнальных доменов, представленных в настоящем описании, например, выбранных из 4-1BB, CD28, CD27, ICOS и OX40, и в некоторых вариантах осуществления не содержит первичный внутриклеточный сигнальный домен. В варианте осуществления антигенсвязывающий член содержит следующие костимуляторные сигнальные домены в направлении от внеклеточного к внутриклеточному: 4-1BB-CD27, 4-1BB-CD27, CD27-4-1BB, 4-1BB-CD28, CD28-4-1BB, OX40-CD28, CD28-OX40, CD28-4-1BB или 4-1BB-CD28. В таких вариантах осуществления внутриклеточный связывающий член содержит домен CD3 дзета. В одном таком варианте осуществления RCAR содержит (1) антигенсвязывающий член, содержащий антигенсвязывающий домен, трансмембранный домен, два костимуляторных домена и первый домен-переключатель, и (2) внутриклеточный сигнальный домен, содержащий трансмембранный домен или мембраносвязывающий домен, по меньшей мере один первичный внутриклеточный сигнальный домен и второй домен-переключатель.

Вариант осуществления относится к RCAR, где антигенсвязывающий член не связан с поверхностью клетки CAR. Это позволяет клетке иметь внутриклеточный сигнальный член, удобно спаренный с одним или более антигенсвязывающими доменами, без трансформации клетки с использованием последовательности, кодирующей антигенсвязывающий член. В таких вариантах осуществления RCAR содержит: 1) внутриклеточный сигнальный член, содержащий: первый домен-переключатель, трансмембранный домен, внутриклеточный сигнальный домен, например, первичный внутриклеточный сигнальный домен и первый домен-переключатель, и 2) антигенсвязывающий член, содержащий: антигенсвязывающий домен и второй домен-переключатель, где антигенсвязывающий член не содержит трансмембранный домен или мембраносвязанный домен и, необязательно, не содержит внутриклеточный сигнальный домен. В некоторых вариантах осуществления RCAR может дополнительно содержать 3) второй антигенсвязывающий член, содержащий: второй антигенсвязывающий домен, например, второй антигенсвязывающий домен, связывающийся иным антигеном, чем связываемый антигенсвязывающим доменом, и второй домен-переключатель.

Настоящее изобретение также относится к RCAR, где антигенсвязывающий член имеет способность к биспецифической активации и таргетингу. В этом варианте осуществления антигенсвязывающий член может содержать множество, например, 2, 3, 4 или 5, антигенсвязывающих доменов, например, scFv, где каждый антигенсвязывающий домен связывается с антигеном-мишенью, например, разными антигенами или одним и тем же антигеном, например, одинаковыми или разными эпитопами на одном антигене. В варианте осуществления множество антигенсвязывающих доменов находится в тандеме, и, необязательно, между каждым из антигенсвязывающих доменов располагают линкер или шарнирную область. Подходящие линкеры и шарнирные области представлены в настоящем описании.

Вариант осуществления относится к RCAR, имеющим конфигурацию, делающую возможным переключение пролиферации. В этом варианте осуществления RCAR содержит: 1) внутриклеточный сигнальный член, содержащий: необязательно, трансмембранный домен или мембраносвязанный домен, один или более костимуляторных сигнальных доменов, например, выбранных из 4-1BB, CD28, CD27, ICOS и OX40, и домен-переключатель, и 2) антигенсвязывающий член, содержащий: антигенсвязывающий домен, трансмембранный домен и первичный внутриклеточный сигнальный домен, например, домен CD3 дзета, где антигенсвязывающий член не содержит домен-переключатель или не содержит домен-переключатель, димеризующийся с доменом-переключателем на внутриклеточном сигнальном члене. В варианте осуществления антигенсвязывающий член не содержит костимуляторный сигнальный домен. В варианте осуществления внутриклеточный сигнальный член содержит домен-переключатель из переключателя гомодимеризации. В варианте осуществления внутриклеточный сигнальный член содержит первый домен-переключатель переключателя гетеродимеризации, и RCAR содержит второй внутриклеточный сигнальный член, содержащий второй домен-переключатель из переключателя гетеродимеризации. В таких вариантах осуществления второй внутриклеточный сигнальный член содержит те же внутриклеточные сигнальные домены, что и внутриклеточный сигнальный член. В варианте осуществления переключатель димеризации является внутриклеточным. В варианте осуществления переключатель димеризации является внеклеточным.

В любой из конфигураций RCAR, представленных в настоящем описании, первый и второй домены-переключатели содержат переключатель на основе FKBP-FRB, как представлено в настоящем описании.

Настоящее изобретение также относится к клеткам, содержащим RCAR, представленный в настоящем описании. Любую клетку, сконструированную для экспрессии RCAR, можно использовать в качестве RCARX-клетки. В варианте осуществления RCARX-клетка является T-клеткой, и ее обозначают как RCART-клетку. В варианте осуществления RCARX-клетка является NK-клеткой, и ее обозначают как RCARN-клетку.

Настоящее изобретение также относится к нуклеиновым кислотам и векторам, содержащим последовательности, кодирующие RCAR. Последовательность, кодирующую различные элементы RCAR, можно располагать на одной и той же молекуле нуклеиновой кислоты, например, одной и той же плазмиде или векторе, например, вирусном векторе, например, лентивирусном векторе. В варианте осуществления (i) последовательность, кодирующая антигенсвязывающий член, и (ii) последовательность, кодирующая внутриклеточный сигнальный член, может присутствовать на одной и той же нуклеиновой кислоте, например, векторе. Продукции соответствующих белков можно достигать, например, с использованием отдельных промоторов или с использованием бицистронного продукта транскрипции (что может приводить к продукции двух белков посредством расщепления единого продукта трансляции или посредством трансляции двух отдельных белковых продуктов). В варианте осуществления последовательность, кодирующая расщепляемый пептид, например, последовательность P2A или F2A, располагают между (i) и (ii). В варианте осуществления последовательность, кодирующую IRES, например, EMCV или EV71 IRES, располагают между (i) и (ii). В этих вариантах осуществления (i) и (ii) транскрибируются в виде единой РНК. В варианте осуществления первый промотор функционально связан с (i), и второй промотор функционально связан с (ii), таким образом, что (i) и (ii) транскрибируются в виде отдельных мРНК.

Альтернативно, последовательность, кодирующую различные элементы RCAR, можно располагать на разных молекулах нуклеиновой кислоты, например, разных плазмидах или векторах, например, вирусном векторе, например, лентивирусном векторе. Например, (i) последовательность, кодирующая антигенсвязывающий член, может присутствовать на первой нуклеиновой кислоте, например, первом векторе, и (ii) последовательность, кодирующая внутриклеточный сигнальный член, может присутствовать на второй нуклеиновой кислоте, например, втором векторе.

Переключатели димеризации

Переключатели димеризации могут являться нековалентными или ковалентными. В нековалентном переключателе димеризации молекула димеризации способствует нековалентному взаимодействию между доменами-переключателями. В ковалентном переключателе димеризации молекула димеризации способствует ковалентному взаимодействию между доменами-переключателями.

В варианте осуществления RCAR содержит переключатель димеризации на основе FKBP/FRAP или FKBP/FRB. FKBP12 (FKBP или FK506-связывающий белок) является избыточным цитоплазматическим белком, служащим в качестве исходной внутриклеточной мишени для природного продукта, иммуносупрессирующего лекарственного средства, рапамицина. Рапамицин связывается с FKBP и с крупным гомологом PI3K FRAP (RAFT, mTOR). FRB является частью FRAP размером 93 аминокислоты, достаточной для связывания комплекса FKBP-рапамицин (Chen, J., Zheng, X. F., Brown, E. J. & Schreiber, S. L. (1995) Identification of an 11-kDa FKBP12-rapamycin-binding domain within the 289-kDa FKBP12-rapamycin-associated protein and characterization of a critical serine residue. Proc Natl Acad Sci U S A 92: 4947-51.).

В вариантах осуществления в переключателе на основе FKBP/FRAP, например, FKBP/FRB, можно использовать молекулу димеризации, например, рапамицин или аналог рапамицина.

Аминокислотная последовательность FKBP является следующей:

D V P D Y A S L G G P S S P K K K R K V S R G V Q V E T I S P G D G R T F P K R G Q T C V V H Y T G M L E D G K K F D S S R D R N K P F K F M L G K Q E V I R G W E E G V A Q M S V G Q R A K L T I S P D Y A Y G A T G H P G I I P P H A T L V F D V E L L K L E T S Y (SEQ ID NO: 275)

В вариантах осуществления домен-переключатель FKBP может содержать фрагмент FKBP, обладающей способностью связываться с FRB или его фрагментом или аналогом в присутствие рапамицина или рапалога, например, подчеркнутой части SEQ ID NO: 275, представляющей собой:

V Q V E T I S P G D G R T F P K R G Q T C V V H Y T G M L E D G K K F D S S R D R N K P F K F M L G K Q E V I R G W E E G V A Q M S V G Q R A K L T I S P D Y A Y G A T G H P G I I P P H A T L V F D V E L L K L E T S (SEQ ID NO: 276)

Аминокислотная последовательность FRB является следующей:

ILWHEMWHEG LEEASRLYFG ERNVKGMFEV LEPLHAMMER GPQTLKETSF NQAYGRDLME AQEWCRKYMK SGNVKDLTQA WDLYYHVFRR ISK (SEQ ID NO: 277)

Как применяют в настоящем описании, термин "переключатель на основе FKBP/FRAP, например, FKBP/FRB" относится к переключателю димеризации, содержащему: первый домен-переключатель, содержащий фрагмент FKBP или его аналог, обладающий способностью связываться с FRB или его фрагментом или аналогом в присутствие рапамицина или рапалога, например, RAD001, и имеющий по меньшей мере 70, 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98 или 99% идентичности или отличающийся не более чем 30, 25, 20, 15, 10, 5, 4, 3, 2 или 1 аминокислотным остатком от последовательности FKBP SEQ ID NO: 275 или 276, и второй домен-переключатель, содержащий фрагмент или аналог FRB, обладающий способностью связываться с FRB или его фрагментом или аналогом в присутствие рапамицина или рапалога, и имеющий по меньшей мере 70, 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98 или 99% идентичности или отличающийся не более, чем на 30, 25, 20, 15, 10, 5, 4, 3, 2 или 1 аминокислотным остатком от последовательности FRB SEQ ID NO: 277. В варианте осуществления RCAR, представленный в настоящем описании, содержит один домен-переключатель, содержащий аминокислотные остатки, описываемые в SEQ ID NO: 275 (или SEQ ID NO: 276), и один домен-переключатель, содержащий аминокислотные остатки, описываемые в SEQ ID NO: 277.

В вариантах осуществления переключатель димеризации FKBP/FRB содержит модифицированный домен-переключатель FRB, демонстрирующий измененное, например, повышенное, образование комплексов между доменом-переключателем на основе FRB, например, модифицированным доменом-переключателем FRB, доменом-переключателем на основе FKBP и молекулой димеризации, например, рапамицином или рапалогом, например, RAD001. В варианте осуществления модифицированный домен-переключатель FRB содержит одну или более мутаций, например, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или более, выбранных из мутаций в положениях аминокислот L2031, E2032, S2035, R2036, F2039, G2040, T2098, W2101, D2102, Y2105 и F2108, где аминокислоту дикого типа подвергают мутации в любую другую природную аминокислоту. В варианте осуществления мутантный FRB содержит мутацию в E2032, где E2032 подвергают мутации в фенилаланин (E2032F), метионин (E2032M), аргинин (E2032R), валин (E2032V), тирозин (E2032Y), изолейцин (E2032I), например, SEQ ID NO: 278, или лейцин (E2032L), например, SEQ ID NO: 279. В варианте осуществления мутантный FRB содержит мутацию в T2098, где T2098 подвергают мутации в фенилаланин (T2098F) или лейцин (T2098L), например, SEQ ID NO: 280. В варианте осуществления мутантный FRB содержит мутацию в E2032 и T2098, где E2032 подвергают мутации в любую аминокислоту, и где T2098 подвергают мутации в любую аминокислоту, например, SEQ ID NO: 281. В варианте осуществления мутантный FRB содержит мутацию E2032I и T2098L, например, SEQ ID NO: 282. В варианте осуществления мутантный FRB содержит мутацию E2032L и T2098L, например, SEQ ID NO: 283.

Таблица 17. Пример мутантного FRB, имеющего повышенную аффинность для молекулы димеризации.

Мутантный FRB	Аминокислотная последовательность	SEQ ID NO:
Мутант E2032I	ILWHEMWHEGLIEASRLYFGERNVKGMFEVLEPLHAMMERGPQTLKETSFNQAYGRDLMEAQEWCRKYMKSGNVKDLTQAWDLYYHVFRRISKTS	278
Мутант E2032L	ILWHEMWHEGLLEASRLYFGERNVKGMFEVLEPLHAMMERGPQTLKETSFNQAYGRDLMEAQEWCRKYMKSGNVKDLTQAWDLYYHVFRRISKTS	279
Мутант T2098L	ILWHEMWHEGLEEASRLYFGERNVKGMFEVLEPLHAMMERGPQTLKETSFNQAYGRDLMEAQEWCRKYMKSGNVKDLLQAWDLYYHVFRRISKTS	280
Мутант E2032, T2098	ILWHEMWHEGLXEASRLYFGERNVKGMFEVLEPLHAMMERGPQTLKETSFNQAYGRDLMEAQEWCRKYMKSGNVKDLXQAWDLYYHVFRRISKTS	281
Мутант E2032I, T2098L	ILWHEMWHEGLIEASRLYFGERNVKGMFEVLEPLHAMMERGPQTLKETSFNQAYGRDLMEAQEWCRKYMKSGNVKDLLQAWDLYYHVFRRISKTS	282
Мутант E2032L, T2098L	ILWHEMWHEGLLEASRLYFGERNVKGMFEVLEPLHAMMERGPQTLKETSFNQAYGRDLMEAQEWCRKYMKSGNVKDLLQAWDLYYHVFRRISKTS	283

Другие подходящие переключатели димеризации включают переключатель димеризации на основе GyrB-GyrB, переключатель димеризации на основе гиббереллина, переключатель димеризации-метку/связывающее средство и переключатель димеризации halo-tag/snap-tag. Специалисту в этой области будут очевидны такие переключатели и важные молекулы димеризации при следовании руководству, представленному в настоящем описании.

Молекула димеризации

Связывание между доменами-переключателями стимулируется молекулой димеризации. В присутствие молекулы димеризации взаимодействие или связывание между доменами-переключателями делает возможной передачу сигнала между полипептидом, связанным, например, слитым, с первым доменом-переключателем, и полипептидом, связанным, например, слитым, со вторым доменом-переключателем. В присутствие неограничивающих уровней молекулы димеризации передача сигнала повышается в 1,1, 1,2, 1,3, 1,4, 1,5, 1,6, 1,7, 1,8, 1,9, 2, 5, 10, 50, 100 раз, например, как измеряют в системе, представленной в настоящем описании.

Рапамицин и аналоги рапамицина (иногда обозначаемые как рапалоги), например, RAD001, можно использовать в качестве молекул димеризации в переключателе димеризации на основе FKBP/FRB, представленном в настоящем описании. В варианте осуществления молекулу димеризации можно выбирать из рапамицина (сиролимуса), RAD001 (эверолимуса), зотаролимуса, темсиролимуса, AP-23573 (ридафоролимуса), биолимуса и AP21967. Дополнительные аналоги рапамицина, пригодные для использования с переключателями димеризации на основе FKBP/FRB, дополнительно описаны в разделе под названием "Способы комбинированного лечения" или в подразделе под названием "Комбинация с низкой, усиливающей иммунитет дозой ингибитора mTOR".

Разделенный CAR

В некоторых вариантах осуществления в CAR-экспрессирующей клетке используют разделенный CAR. Подход разделенного CAR более подробно описан в публикациях №№ WO2014/055442 и WO2014/055657, включенных в настоящее описание в качестве ссылки. В кратком изложении, система разделенного CAR содержит клетку, экспрессирующую первый CAR, содержащий первый антигенсвязывающий домен и костимуляторный домен (например, 41BB), и клетка также экспрессирует второй CAR, содержащий второй антигенсвязывающий домен и внутриклеточный сигнальный домен (например, CD3 дзета). Если клетка встречается с первым антигеном, костимуляторный домен активируется, и клетка пролиферирует. Если клетка встречается со вторым антигеном, внутриклеточный сигнальный домен активируется и начинается цитолитическая активность. Таким образом, CAR-экспрессирующая клетка полностью активируется лишь в присутствие обоих антигенов. В вариантах осуществления первый антигенсвязывающий домен распознает BCMA, например, содержит антигенсвязывающий домен, представленный в настоящем описании, и второй антигенсвязывающий домен распознает антиген, экспрессирующийся на клетках острого миелолейкоза, например, CD123, CLL-1, CD34, FLT3 или рецептор фолата бета. В вариантах осуществления первый антигенсвязывающий домен распознает BCMA, например, содержит антигенсвязывающий домен, представленный в настоящем описании, и второй антигенсвязывающий домен распознает антиген, экспрессирующийся на B-клетках, например, CD10, CD19, CD20, CD22, CD34, CD123, FLT-3, ROR1, CD79b, CD179b или CD79a.

Стабильность и мутации

Стабильность связывающего домена против BCMA, например, молекул scFv (например, растворимого scFv) можно оценивать по отношению к биофизическим свойствам (например, термической стабильностью) общепринятой контрольной молекулы scFv или полноразмерного антитела. В одном из вариантов осуществления гуманизированный scFv обладает термической стабильностью, большей на приблизительно 0,1, приблизительно 0,25, приблизительно 0,5, приблизительно 0,75, приблизительно 1, приблизительно 1,25, приблизительно 1,5, приблизительно 1,75, приблизительно 2, приблизительно 2,5, приблизительно 3, приблизительно 3,5, приблизительно 4, приблизительно 4,5, приблизительно 5, приблизительно 5,5, приблизительно 6, приблизительно 6,5, приблизительно 7, приблизительно 7,5, приблизительно 8, приблизительно 8,5, приблизительно 9, приблизительно 9,5, приблизительно 10 градусов, приблизительно 11 градусов, приблизительно 12 градусов, приблизительно 13 градусов, приблизительно 14 градусов или приблизительно 15 градусов Цельсия, чем у контрольной связывающей молекулы (например, общепринятой молекулы scFv) в описываемых анализах.

Улучшенная термическая стабильность связывающего домена против BCMA, например, scFv, впоследствии придается всей конструкции CART-BCMA, что приводит к улучшенным терапевтическим свойствам конструкции CART-BCMA. Термическую стабильность связывающего домена против BCMA, например, scFv можно улучшать по меньшей мере на приблизительно 2°C или 3°C по сравнению с общепринятым антителом. В одном из вариантов осуществления связывающий домен против BCMA, например, scFv, имеет улучшенную на 1°C термическую стабильность по сравнению с общепринятым антителом. В другом варианте осуществления связывающий домен против BCMA, например, scFv, имеет улучшенную на 2°C термическую стабильность по сравнению с общепринятым антителом. В другом варианте осуществления scFv имеет улучшенную на 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15°C термическую стабильность по сравнению с общепринятым антителом. Можно сравнивать, например, молекулы scFv, представленные в настоящем описании, и молекулы scFv или Fab-фрагменты антитела, из которых получают VH и VL scFv. Термическую стабильность можно измерять известными в этой области способами. Например, в одном из вариантов осуществления можно измерять Tm. Способы измерения Tm и другие способы определения стабильности белка более подробно описаны ниже.

Мутации в scFv (возникающие в результате гуманизации или прямого мутагенеза растворимого scFv) изменяют стабильность scFv и улучшают общую стабильность scFv и конструкции CART33. Стабильность scFv человека можно сравнивать с scFv мыши посредством измерений, таких как Tm, температуры денатурации и температуры агрегации.

Связывающую способность мутантных scFv можно определять с использованием анализов, описываемых в примерах.

В одном из вариантов осуществления связывающий домен против BCMA, например, scFv, содержит по меньшей мере одну мутацию, возникающую в результате гуманизации таким образом, что мутантный scFv придает улучшенную стабильность конструкции CART-BCMA. В другом варианте осуществления связывающий домен против BCMA, например, scFv, содержит по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 мутаций, возникающих в результате гуманизации таким образом, что мутантный scFv придает улучшенную стабильность конструкции CART-BCMA.

Способы оценки стабильности белка

Стабильность антигенсвязывающего домена можно оценивать, например, описываемыми ниже способами. Такие способы позволяют определять множество термических конформационных переходов с разворачиванием, где наименьший стабильный домен разворачивается первым или ограничивает общий порог стабильности мультидоменной единицы, разворачивающейся совместно (например, мультидоменного белка, демонстрирующего один конформационный переход с разворачиванием). Наименьший стабильный домен можно идентифицировать рядом дополнительных способов. Можно осуществлять мутагенез для определения того, какой домен ограничивает общую стабильность. Кроме того, анализ резистентности мультидоменного белка к протеазе можно осуществлять в условиях, в которых известно, что наименьший стабильный домен, по существу, разворачивается, посредством DSC или другими спектроскопическими способами (Fontana, et al., (1997) Fold. Des., 2: R17-26; Dimasi et al. (2009) J. Mol. Biol. 393: 672-692). После идентификации наименьшего стабильного домена последовательность, кодирующую этот домен (или его часть), можно использовать в способах как тестовую последовательность.

a) Термическая стабильность

Термическую стабильность композиций можно анализировать с использованием ряда неограничивающих биофизических или биохимических способов, известных в этой области. В определенных вариантах осуществления термическую стабильность оценивают посредством аналитической спектроскопии.

Примером способа аналитической спектроскопии является дифференциальная сканирующая калориметрия (DSC). В DSC используют калориметр, чувствительный к поглощению тепла, сопровождающего разворачивание большинства белков или белковых доменов (см., например, Sanchez-Ruiz, et al., Biochemistry, 27: 1648-52, 1988). Для определения термической стабильности белка образец белка вносят в калориметр и повышают температуру до разворачивания Fab или scFv. Температура, при которой белок разворачивается, свидетельствует об общей стабильности белка.

Другим примером способа аналитической спектроскопии является спектроскопия кругового дихроизма (CD). При спектроскопии CD измеряют оптическую активность композиции как функцию повышающейся температуры. При спектроскопии кругового дихроизма (CD) измеряют различия в поглощении левополяризованного света по сравнению с правополяризованным светом, которые возникают в результате структурной асимметрии. Нарушенная или развернутая структура приводит к спектру CD, очень отличающемуся от такового у упорядоченной или свернутой структуры. Спектр CD отражает чувствительность белков к денатурирующим эффектам повышенной температуры и, таким образом, свидетельствует о термической стабильности белка (см. van Mierlo and Steemsma, J. Biotechnol., 79(3):281-98, 2000).

Другим примером способа аналитической спектроскопии для измерения термической стабильности является флуоресцентная спектроскопия (см. van Mierlo and Steemsma, выше). Другим примером способа аналитической спектроскопии для измерения термической стабильности является ядерная магнитно-резонансная спектроскопия (ЯМР) (см., например, van Mierlo and Steemsma, выше).

Термическую стабильность композиции можно измерять биохимически. Примером биохимического способа оценки термической стабильности является анализ посредством термической проверки. В "анализе посредством термической проверки" композицию подвергают воздействию диапазона повышенных температур в течение установленного периода времени. Например, в одном из вариантов осуществления тестовые молекулы scFv или молекулы, содержащие молекулы scFv, подвергают воздействию диапазона повышенных температур, например, в течение 1-1,5 часов. Затем оценивают активность белка с помощью соответствующего биохимического анализа. Например, если белок является связывающим белком (например, scFv или scFv-содержащим полипептидом), связывающую активность связывающего белка можно определять посредством функционального или количественного ELISA.

Такой анализ можно осуществлять в высокопроизводительном формате и форматов, описываемых в примерах с использованием E. coli и высокопроизводительного скрининга. Библиотеку связывающего домена против BCMA, например, вариантов scFv, можно получать известными в этой области способами. Экспрессию связывающего домена против BCMA, например, scFv, можно индуцировать и связывающий домен против BCMA, например, scFv, можно подвергать термической проверке. Исследуемые тестовые образцы можно оценивать на связывание, и связывающий домен против BCMA, например, scFv, являющийся стабильным, можно расширять и дополнительно охарактеризовывать.

Термическую стабильность оценивают посредством измерения температуры плавления (Tm) композиции с использованием любого их указанных выше способов (например, способов аналитической спектроскопии). Температура плавления является температурой в середине кривой термического перехода, где 50% молекул композиции находятся в свернутом состоянии (см. например, Dimasi et al. (2009) J. Mol Biol. 393: 672-692). В одном из вариантов осуществления значения Tm для связывающего домена против BCMA, например, scFv, составляют приблизительно 40°C, 41°C, 42°C, 43°C, 44°C, 45°C, 46°C, 47°C, 48°C, 49°C, 50°C, 51°C, 52°C, 53°C, 54°C, 55°C, 56°C, 57°C, 58°C, 59°C, 60°C, 61°C, 62°C, 63°C, 64°C, 65°C, 66°C, 67°C, 68°C, 69°C, 70°C, 71°C, 72°C, 73°C, 74°C, 75°C, 76°C, 77°C, 78°C, 79°C, 80°C, 81°C, 82°C, 83°C, 84°C, 85°C, 86°C, 87°C, 88°C, 89°C, 90°C, 91°C, 92°C, 93°C, 94°C, 95°C, 96°C, 97°C, 98°C, 99°C, 100°C. В одном из вариантов осуществления значения Tm для IgG составляют приблизительно 40°C, 41°C, 42°C, 43°C, 44°C, 45°C, 46°C, 47°C, 48°C, 49°C, 50°C, 51°C, 52°C, 53°C, 54°C, 55°C, 56°C, 57°C, 58°C, 59°C, 60°C, 61°C, 62°C, 63°C, 64°C, 65°C, 66°C, 67°C, 68°C, 69°C, 70°C, 71°C, 72°C, 73°C, 74°C, 75°C, 76°C, 77°C, 78°C, 79°C, 80°C, 81°C, 82°C, 83°C, 84°C, 85°C, 86°C, 87°C, 88°C, 89°C, 90°C, 91°C, 92°C, 93°C, 94°C, 95°C, 96°C, 97°C, 98°C, 99°C, 100°C. В одном из вариантов осуществления значения Tm для поливалентного антитела составляют приблизительно 40°C, 41°C, 42°C, 43°C, 44°C, 45°C, 46°C, 47°C, 48°C, 49°C, 50°C, 51°C, 52°C, 53°C, 54°C, 55°C, 56°C, 57°C, 58°C, 59°C, 60°C, 61°C, 62°C, 63°C, 64°C, 65°C, 66°C, 67°C, 68°C, 69°C, 70°C, 71°C, 72°C, 73°C, 74°C, 75°C, 76°C, 77°C, 78°C, 79°C, 80°C, 81°C, 82°C, 83°C, 84°C, 85°C, 86°C, 87°C, 88°C, 89°C, 90°C, 91°C, 92°C, 93°C, 94°C, 95°C, 96°C, 97°C, 98°C, 99°C, 100°C.

Термическую стабильность также оценивают посредством измерения удельной теплоемкости или теплоемкости (Cp) композиции с использованием аналитического калориметрического способа (например, DSC). Удельная теплоемкость композиции является энергией (например, в ккал/моль), необходимой для повышения температуры 1 моль воды на 1°C. Высокая Cp является признаком денатурированной или неактивной композиции или белка. Изменение теплоемкости (ΔCp) композиции измеряют посредством определения удельной теплоемкости композиции до и после его термического перехода. Термическую стабильность также можно оценивать посредством измерения или определения других параметров термодинамической стабильности, включая свободную энергию Гиббса разворачивания (ΔG), энтальпию разворачивания (ΔH) или энтропию разворачивания (ΔS). Один или более из указанных выше биохимических анализов (например, анализ посредством термической проверки) используют для определения температуры (т.е. значения T_C), при которой 50% композиции сохраняет свою активность (например, связывающую активность).

Кроме того, мутации в связывающем домене против BCMA, например, scFv, изменяют термическую стабильность связывающего домена против BCMA, например, scFv, по сравнению с немутантным связывающим доменом против BCMA, например, scFv. Если человеческий или гуманизированный связывающий домен против BCMA, например, scFv, встраивают в конструкцию BCMA, связывающий домен против BCMA, например, гуманизированный scFv, придает термическую стабильность общей конструкции CART против BCMA. В одном из вариантов осуществления связывающий домен против BCMA, например, scFv, содержит одну мутацию, придающую термическую стабильность связывающему домену против BCMA, например, scFv. В другом варианте осуществления связывающий домен против BCMA, например, scFv, содержит множество мутаций, придающих термическую стабильность связывающему домену против BCMA, например, scFv. В одном из вариантов осуществления множественные мутации в связывающем домене против BCMA, например, scFv, имеют аддитивный эффект в отношении термической стабильности связывающего домена против BCMA, например, scFv.

b) % агрегации

Стабильность композиции можно определять посредством измерения ее склонности к агрегации. Агрегацию можно измерять рядом неограничивающих биохимических или биофизических способов. Например, агрегацию композиции можно оценивать с использованием хроматографии, например, эксклюзионной хроматографии (SEC). При SEC разделяют молекулы с учетом их размера. Колонку наполняют полутвердыми бусами полимерного геля, который будет пропускать ионы и низкомолекулярные соединения внутрь себя, но не крупные молекулы. Если белковую композицию наносят сверху колонки, компактные свернутые белки (т.е. неагрегировавшие белки) распределяются в большем объеме растворителя, чем доступно для крупных белковых агрегатов. Таким образом, крупные агрегаты быстрее двигаются через колонку, и, таким образом, смесь можно разделять или фракционировать на компоненты. Каждую фракцию можно раздельно подвергать количественному анализу (например, по рассеянию света) с его элюцией из геля. Таким образом, % агрегации композиции можно определять, сравнивая концентрацию фракции с общей концентрацией белка, нанесенного на гель. Стабильные композиции элюируют из колонки в виде, по существу, единой фракции, и они выглядят как, по существу, единый пик на профиле элюции или хроматограмме.

c) Аффинность связывания

Стабильность композиции можно оценивать посредством определения ее аффинности связывания мишени. В этой области известен широкий спектр способов определения аффинности связывания. В примере способа определения аффинности связывания используют поверхностный плазмонный резонанс. Поверхностный плазмонный резонанс является оптическим явлением, делающим возможным анализ биоспецифических взаимодействий в реальном времени посредством детекции изменений концентрации белка в матрице биосенсора, например, с использованием системы BIAcore (Pharmacia Biosensor AB, Uppsala, Sweden и Piscataway, N.J.). Дополнительное описание см. в Jonsson, U., et al. (1993) Ann. Biol. Clin. 51:19-26; Jonsson, U., i (1991) Biotechniques 11:620-627; Johnsson, B., et al. (1995) J. Mol. Recognit. 8:125-131 и Johnnson, B., et al. (1991) Anal. Biochem. 198:268-277.

В одном из аспектов антигенсвязывающий домен CAR содержит аминокислотную последовательность, гомологичную аминокислотной последовательности антигенсвязывающего домена, представленной в настоящем описании, и антигенсвязывающий домен сохраняет желаемые функциональные свойства фрагментов антител против BCMA, представленных в настоящем описании. В одном конкретном аспекте композиция CAR по изобретению содержит фрагмент антитела. В дополнительном аспекте этот фрагмент антитела содержит scFv.

В различных аспектах антигенсвязывающий домен CAR конструируют посредством модификации одной или более аминокислот в одной или обеих вариабельных областях (например, VH и/или VL), например, в одной или более областях CDR и/или одной или более каркасных областях. В одном конкретном аспекте композиция CAR по изобретению содержит фрагмент антитела. В дополнительном аспекте этот фрагмент антитела содержит scFv.

Специалисту в этой области будет понятно, что антитело или фрагмент антитела по изобретению можно дополнительно модифицировать таким образом, что они отличаются по аминокислотной последовательности (например, из дикого типа), но не по желаемой активности. Например, в белке можно делать дополнительные замены нуклеотидов, например, консервативные замены, приводящие к заменам аминокислот, например, консервативным заменам в "не являющихся необходимыми" аминокислотных остатках. Например, не являющийся необходимым аминокислотный остаток в молекуле можно заменять другим аминокислотным остатком из того же семейства боковых цепей. В другом варианте осуществления цепь аминокислот можно заменять структурно схожей цепью, отличающейся порядком и/или композицией членов семейства боковой цепи, например, консервативной заменой, в которой аминокислотный остаток заменяют аминокислотным остатком, имеющим схожую боковую цепь.

В этой области определены семейства аминокислотных остатков, имеющих схожие боковые цепи, включая основные боковые цепи (например, лизин, аргинин, гистидин), кислые боковые цепи (например, аспарагиновую кислоту, глутаминовую кислоту), незаряженные полярные боковые цепи (например, глицин, аспарагин, глутамин, серин, треонин, тирозин, цистеин), неполярные боковые цепи (например, аланин, валин, лейцин, изолейцин, пролин, фенилаланин, метионин, триптофан), бета-разветвленные боковые цепи (например, треонин, валин, изолейцин) и ароматические боковые цепи (например, тирозин, фенилаланин, триптофан, гистидин).

Процент идентичности в отношении двух или более последовательностей нуклеиновых кислот или полипептидных последовательностей относится к двум или более последовательностям, являющимся одинаковыми. Две последовательности являются "по существу, идентичными", если две последовательности обладают определенной процентной долей аминокислотных остатков или нуклеотидов, являющихся одинаковыми (например, 60% идентичности, необязательно 70%, 71%. 72%. 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%,81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% идентичности в определенной области, или, если не указано, по всей последовательности), при сравнении и выравнивании для максимального соответствия в окне сравнения или обозначенной области, как измеряют с использованием одного из следующих алгоритмов сравнения последовательности или посредством выравнивания вручную и визуального осмотра. Необязательно, идентичность существует в области, составляющей по меньшей мере приблизительно 50 нуклеотидов (или 10 аминокислот) в длину или более предпочтительно - в области, составляющей от 100 до 500 или 1000 или более нуклеотидов (или 20, 50, 200 или более аминокислот) в длину.

В случае сравнения последовательности, как правило, одна последовательность выступает в качестве референсной последовательности, с которой сравнивают тестовые последовательности. При использовании алгоритма сравнения последовательности тестовые и референсные последовательности вносят в компьютер, обозначают координаты подпоследовательности, при необходимости, и задают параметры программы алгоритма последовательности. Можно использовать параметры программы по умолчанию или можно задавать альтернативные параметры. Затем посредством алгоритма сравнения последовательностей вычисляют процент идентичности последовательности для тестовых последовательностей относительно референсной последовательности с учетом параметров программы. В этой области хорошо известны способы выравнивания последовательностей для их сравнения. Оптимальное выравнивание последовательностей для их сравнения можно осуществлять, например, посредством алгоритма локальной гомологии Smith and Waterman, (1970) Adv. Appl. Math. 2:482c, алгоритма гомологичного выравнивания Needleman and Wunsch, (1970) J. Mol. Biol. 48:443, способом поиска сходства Pearson and Lipman, (1988) Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA 85:2444, с помощью компьютерных воплощений этих алгоритмов (GAP, BESTFIT, FASTA и TFASTA в Wisconsin Genetics Software Package, Genetics Computer Group, 575 Science Dr., Madison, WI) или посредством выравнивания вручную и визуального осмотра (см., например, Brent et al., (2003) Current Protocols in Molecular biology).

Двумя примерами алгоритмов, подходящих для определения процента идентичности последовательности и сходства последовательности, являются алгоритмы BLAST и BLAST 2.0, описываемые в Altschul et al., (1977) Nuc. Acids Res. 25:3389-3402 и Altschul et al., (1990) J. Mol. Biol. 215:403-410, соответственно. Программное обеспечение для осуществления анализов BLAST является общедоступным в National Center for Biotechnology Information.

Процент идентичности двух аминокислотных последовательностей также можно определять с использованием алгоритма E. Meyers и W. Miller, (1988) Comput. Appl. Biosci. 4:11-17), встроенного в программу ALIGN (версии 2.0), с использованием таблицы весов PAM120, штрафа за длину пропуска 12 и штрафа за открытие пропуска 4. Кроме того, процент идентичности двух аминокислотных последовательностей можно определять с использованием алгоритма Needleman and Wunsch (1970) J. Mol. Biol. 48:444-453), встроенного в программу GAP в пакете программ GCG (доступном на www.gcg.com), с использованием матрицы Blossom 62 или матрицы PAM250, и штрафа за пропуск 16, 14, 12, 10, 8, 6 или 4 и штрафа за удлинение пропуска 1, 2, 3, 4, 5 или 6.

В одном из аспектов настоящее изобретение включает модификации аминокислотной последовательности исходного антитела или фрагмента (например, scFv), которые приводят к получению функционально эквивалентных молекул. Например, VH или VL связывающего домена против BCMA, например, scFv, содержащиеся в CAR, можно модифицировать так, чтобы они сохраняли по меньшей мере приблизительно 70%, 71%. 72%. 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%,81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% идентичности по отношению к исходной каркасной области VH или VL связывающего домена против BCMA, например, scFv. Настоящее изобретение включает модификации целой конструкции CAR, например, модификации одной или более аминокислотных последовательностей различных доменов конструкции CAR для получения функционально эквивалентных молекул. Конструкцию CAR можно модифицировать так, чтобы она имела по меньшей мере приблизительно 70%, 71%. 72%. 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% идентичности по отношению к исходной конструкции CAR.

Трансфекция РНК

Настоящее изобретение относится к способам получения транскрибируемой in vitro РНК CAR. Настоящее изобретение также относится к конструкции РНК, кодирующей CAR, которую можно напрямую трансфицировать в клетку. Способ получения мРНК для применения в трансфекции может включать транскрипцию in vitro (IVT) матрицы с использованием специально сконструированных праймеров в последующим добавлением поли(A) для получения конструкции, содержащей последовательность 3'- и 5'-нетранслируемой области ("UTR"), 5'-кэп и/или внутренний участок связывания рибосомы (IRES), нуклеиновую кислоту, подлежащую экспрессии, и поли(A)-хвост, как правило, 50-2000 оснований в длину (SEQ ID NO: 35). Используя полученную таким образом РНК, можно эффективно трансфицировать различные типы клеток. В одном из аспектов матрица включает последовательности CAR.

В одном из аспектов CAR против BCMA кодируется матричной РНК (мРНК). В одном из аспектов мРНК, кодирующую CAR против BCMA, встраивают в иммунную эффекторную клетку, например, T-клетку или NK-клетку, для получения CAR-экспрессирующей клетки (например, CART-клетки или CAR-экспрессирующей NK-клетки).

В одном из вариантов осуществления транскрибируемую in vitro РНК CAR можно встраивать в клетку в форме транзиторной трансфекции. РНК получают посредством транскрипции in vitro с использованием матрицы, полученной посредством полимеразной цепной реакции (ПЦР). Интересующую ДНК из любого источника можно напрямую преобразовывать посредством ПЦР в матрицу для синтеза мРНК in vitro с использованием соответствующих праймеров и РНК-полимеразы. Источником ДНК может являться, например, геномная ДНК, плазмидная ДНК, фаговая ДНК, кДНК, синтетическая последовательность ДНК или любой другой соответствующий источник ДНК. Желаемой моделью для транскрипции in vitro является CAR по настоящему изобретению. Например, матрица для РНК CAR содержит внеклеточную область, содержащую одноцепочечный вариабельный домен противоопухолевого антитела, шарнирную область, трансмембранный домен (например, трансмембранный домен CD8a) и цитоплазматическую область, включающую внутриклеточный сигнальный домен, например, содержащий сигнальный домен CD3 дзета и сигнальный домен 4-1BB.

В одном из вариантов осуществления ДНК для использования в ПЦР содержит открытую рамку считывания. ДНК может быть из природной последовательности ДНК из генома организма. В одном из вариантов осуществления нуклеиновая кислота может включать некоторые или все из 5' и/или 3'-нетранслируемых областей (UTR). Нуклеиновая кислота может включать экзоны и интроны. В одном из вариантов осуществления ДНК для использования в ПЦР является последовательностью нуклеиновой кислоты человека. В другом варианте осуществления ДНК для использования в ПЦР является последовательностью нуклеиновой кислоты человека, включающей 5'- и 3'-UTR. Альтернативно, ДНК может являться искусственной последовательностью ДНК, в норме не экспрессирующейся в природном организме. Примером искусственной последовательности ДНК является последовательность, содержащая части генов, лигированных вместе для получения открытой рамки считывания, кодирующей слитый белок. Лигированные вместе части ДНК могут быть из одного организма или более организмов.

ПЦР используют для получения матрицы для транскрипции in vitro мРНК, используемой для трансфекции. Способы осуществления ПЦР хорошо известны в этой области. Праймеры для использования в ПЦР конструируют так, чтобы они имели области, по существу, комплементарные областям ДНК для использования в качестве матрицы для ПЦР. Как применяют в настоящем описании, термин "по существу, комплементарный" относится к последовательностям нуклеотидов, где большинство или все основания в последовательности праймера являются комплементарными, или одно или более оснований являются некомплементарными или несовпадающими. По существу комплементарные последовательности способны отжигаться или гибридизоваться с предполагаемой ДНК-мишенью в условиях отжига, используемых для ПЦР. Праймеры можно конструировать, по существу, комплементарными любой части ДНК-матрицы. Например, праймеры можно конструировать для амплификации части нуклеиновой кислоты, как правило, транскрибируемой в клетках (открытая рамка считывания), включая 5'- и 3'-UTR. Праймеры также можно конструировать для амплификации части нуклеиновой кислоты, кодирующей конкретный интересующий домен. В одном из вариантов осуществления праймеры конструируют для амплификации кодирующей области кДНК человека, включая все или части 5'-и 3'-UTR. Праймеры, применимые для ПЦР можно получать, способами синтеза, хорошо известными в этой области. "Прямые праймеры" являются праймерами, содержащими область нуклеотидов, по существу, комплементарную нуклеотидам на ДНК-матрице, расположенным выше последовательности ДНК, подлежащей амплификации. Термин "выше" в настоящем описании используют для обозначения 5'-направления к последовательности ДНК, подлежащей амплификации, относительно кодирующей цепи. "Обратные праймеры" являются праймерами, содержащими область нуклеотидов, по существу, комплементарным двухцепочечной ДНК-матрице, расположенной ниже последовательности ДНК, подлежащей амплификации. Термин "ниже" в настоящем описании используют для обозначения 3'-направления к последовательности ДНК, подлежащей амплификации, относительно кодирующей цепи.

В способах, представленных в настоящем описании, можно использовать любую ДНК-полимеразу, применимую для ПЦР. Реагенты и полимераза коммерчески доступны в ряде источников.

Также можно использовать химические структуры, которые могут способствовать стабильности и/или эффективности трансляции. РНК, предпочтительно, содержит 5'- и 3'-UTR. В одном из вариантов осуществления 5'-UTR составляет от одного до 3000 нуклеотидов в длину. Длину последовательностей 5'- и 3'-UTR для добавления в кодирующую область можно изменять различными способами, включая, в качестве неограничивающих примеров, конструирование праймеров для ПЦР, отжигающихся на разных областях UTR. Используя этот подход, специалист в этой области может модифицировать длины 5'- и 3'-UTR, необходимые для достижения оптимальной эффективности трансляции после трансфекции транскрибируемой РНК.

5'- и 3'-UTR могут являться природными, эндогенными 5'- и 3'-UTR для интересующей нуклеиновой кислоты. Альтернативно, можно добавлять последовательности UTR, не являющиеся эндогенными для интересующей нуклеиновой кислоты, посредством встраивания последовательностей UTR в прямые и обратные праймеры или посредством любой другой модификации матрицы. Использование последовательностей UTR, не являющихся эндогенными для интересующей нуклеиновой кислоты, может быть применимым для модификации стабильности и/или эффективности трансляции РНК. Например, известно, что AU-богатые элементы в последовательностях 3'-UTR могут снижать стабильность мРНК. Таким образом, 3'-UTR можно выбирать или конструировать для повышения стабильности транскрибируемой РНК с учетом свойств UTR, хорошо известных в этой области.

В одном из вариантов осуществления 5'-UTR может содержать последовательность Козак эндогенной нуклеиновой кислоты. Альтернативно, если 5'-UTR не является эндогенной по отношению к интересующей нуклеиновой кислоте, добавляемой посредством ПЦР, как описано выше, консенсусную последовательность Козак можно реконструировать посредством добавления последовательности 5'-UTR. Последовательности Козак могут повышать эффективность трансляции некоторых транскриптов РНК, но, по-видимому, не является необходимой для всех РНК, чтобы сделать возможной эффективную трансляцию. Требование в отношении последовательностей Козак для многих мРНК известно в этой области. В других вариантах осуществления 5'-UTR может являться 5'-UTR РНК-вируса, РНК-геном которого является стабильным в клетках. В других вариантах осуществления можно использовать различные аналоги нуклеотидов в 3'- или 5'-UTR для препятствования деградации мРНК экзонуклеазой.

Чтобы сделать возможным синтез РНК из ДНК-матрицы без потребности в клонировании гена, промотор для транскрипции необходимо присоединять к ДНК-матрице выше последовательности, подлежащей транскрипции. Если последовательность, функционирующую в качестве промотора для РНК-полимеразы, добавляют на 5'-конец прямого праймера, промотор для РНК-полимеразы становится встроенным в продукт ПЦР выше открытой рамки считывания, подлежащей транскрипции. В одном из предпочтительных вариантов осуществления промотор является промотором полимеразы T7, как представлено где-либо в настоящем описании. Другие применимые промоторы включают, в качестве неограничивающих примеров, промоторы РНК-полимераз T3 и SP6. Консенсусные нуклеотидные последовательности для промоторов T7, T3 и SP6 известны в этой области.

В предпочтительном варианте осуществления мРНК имеет и кэп на 5'-конце, и 3'-поли(A)-хвост, определяющий связывание с рибосомой, инициацию трансляции и стабильность мРНК в клетке. На кольцевой ДНК-матрице, например, плазмидной ДНК, РНК-полимераза продуцирует длинный конкатемерный продукт, не подходящий для экспрессии в эукариотических клетках. Транскрипция плазмидной ДНК, линеаризованной на конце 3'-UTR приводит к образованию мРНК нормального размера, не являющейся эффективной при трансфекции эукариот, даже если она полиаденилируется после транскрипции.

На линейной ДНК-матрице РНК-полимераза фага T7 может удлинять 3'-конец транскрипта за пределы последнего основания матрицы (Schenborn and Mierendorf, Nuc Acids Res., 13:6223-36 (1985); Nacheva and Berzal-Herranz, Eur. J. Biochem., 270:1485-65 (2003).

Общепринятым способом встраивания поли(A/T)-тяжей в ДНК-матрицу является молекулярное клонирование. Однако поли(A/T)-последовательность, встроенная в плазмидную ДНК, может вызывать нестабильность плазмиды, по этой причине плазмидные ДНК-матрицы, полученные из бактериальных клеток зачастую крайне контаминированы делециями и другими аномалиями. Это делает клонирование не только трудоемким и занимающим много времени, но часто и ненадежным. По этой причине способ, делающий возможным конструирование ДНК-матриц с 3'-поли(A/T)-тяжем без клонирования, является крайне желательным.

Поли(A/T)-сегмент транскрипционной ДНК-матрицы можно получать при ПЦР с использованием обратного праймера, содержащего поли(T)-хвост, такой как 100(T)-хвост (SEQ ID NO: 31) (размер может составлять 50-5000 T (SEQ ID NO: 32)), или после ПЦР любым другим способом, включая, в качестве неограничивающих примеров, лигирование ДНК или рекомбинацию in vitro. Поли(A)-хвосты также обеспечивают стабильность РНК и снижают их деградацию. Как правило, длина поли(A)-хвоста положительно коррелирует со стабильностью транскрибируемой РНК. В одном из вариантов осуществления поли(A)-хвост составляет от 100 до 5000 аденозинов (SEQ ID NO: 33).

Поли(A)-хвосты РНК можно дополнительно удлинять после транскрипции in vitro с использованием поли(A)-полимеразы, такой как поли(A)-полимераза E. coli (E-PAP). В одном из вариантов осуществления повышение длины поли(A)-хвоста с 100 нуклеотидов до от 300 до 400 нуклеотидов (SEQ ID NO: 34) приводит приблизительно к двукратному повышению эффективности трансляции РНК. Кроме того, присоединение различных химических групп к 3'-концу может повышать стабильность мРНК. Такое присоединение может включать модифицированные/искусственные нуклеотиды, аптамеры и другие соединения. Например, можно встраивать аналоги АТФ в поли(A)-хвост с использованием поли(A)-полимеразы. Аналоги АТФ могут дополнительно повышать стабильность РНК.

5'-кэп также обеспечивает стабильность молекул РНК. В предпочтительном варианте осуществления РНК, получаемая способами, представленными в настоящем описании, включает 5'-кэп. 5'-кэп получают способами, известными в этой области и представленными в настоящем описании (Cougot, et al., Trends in Biochem. Sci., 29:436-444 (2001); Stepinski, et al., RNA, 7:1468-95 (2001); Elango, et al., Biochim. Biophys. Res. Commun., 330:958-966 (2005)).

РНК, получаемая способами, представленными в настоящем описании, также может содержать последовательность внутреннего участка связывания рибосомы (IRES). Последовательность IRES может являться любой вирусной, хромосомной или искусственно сконструированной последовательностью, инициирующей кэп-независимое связывание рибосом с мРНК и облегчающей инициацию трансляции. Можно включать любые растворы, подходящие для электропорации клеток, которые могут содержать факторы, способствующие клеточной проницаемости и жизнеспособности, такие как сахара, пептиды, липиды, белки, антиоксиданты и поверхностно-активные вещества.

РНК можно встраивать в клетки-мишени любым из ряда различных способов, например, коммерчески доступных способов, включающих, в качестве неограничивающих примеров, электропорацию с использованием Amaxa Nucleofector-II (Amaxa Biosystems, Cologne, Germany), ECM 830 (BTX) (Harvard Instruments, Boston, Mass.) или Gene Pulser II (BioRad, Denver, Colo.), Multiporator (Eppendorf, Hamburg, Germany), трансфекцию, опосредуемую катионными липосомами, с использованием липофекции, инкапсуляцию полимерами, пептид-опосредованную трансфекцию или системы биолистической доставки частиц, такие как "генные пушки" (см., например, Nishikawa, et al. Hum Gene Ther., 12(8):861-70 (2001).

Невирусные способы доставки

В некоторых аспектах, для доставки нуклеиновой кислоты, кодирующей CAR, представленный в настоящем описании, в клетку, или ткань, или индивидуума можно использовать невирусные способы.

В некоторых вариантах осуществления невирусный способ включает использование транспозона (также называемого мобильным генетическим элементом). В некоторых вариантах осуществления транспозон является фрагментом ДНК, который сам может себя встраивать в участок генома, например, фрагментом ДНК, способным самореплицироваться и встраивать свою копию в геном, или фрагментом ДНК, который может сплайсироваться из более длинной нуклеиновой кислоты и встраиваться в другое место в геноме. Например, транспозон содержит последовательность ДНК, состоящую из инвертированных повторов, фланкирующих гены для транспозиции.

Примеры способов доставки нуклеиновых кислот с использованием транспозона включают систему транспозона "Спящая красавица" (SBTS) и систему транспозона piggyBac (PB). См., например, Aronovich et al. Hum. Mol. Genet. 20.R1(2011):R14-20; Singh et al. Cancer Res. 15(2008):2961-2971; Huang et al. Mol. Ther. 16(2008):580-589; Grabundzija et al. Mol. Ther. 18(2010):1200-1209; Kebriaei et al. Blood. 122,21(2013):166; Williams. Molecular Therapy 16,9(2008):1515-16; Bell et al. Nat. Protoc. 2,12(2007):3153-65 и Ding et al. Cell. 122,3(2005):473-83, все из которых включены в настоящее описание в качестве ссылок.

SBTS включает два компонента: 1) транспозон, содержащий трансген, и 2) источник фермента транспозазы. Транспозаза может переносить транспозон из плазмиды-носителя (или другой донорной ДНК) в ДНК-мишень, такую как хромосома/геном клетки-хозяина. Например, транспозаза связывается с плазмидой-носителем/донорной ДНК, вырезает транспозон (включающий трансгены) из плазмиды и встраивает его в геном клетки-хозяина. См., например, Aronovich et al., выше.

Примеры транспозонов включают транспозон на основе pT2. См., например, Grabundzija et al. Nucleic Acids Res. 41,3(2013):1829-47 и Singh et al. Cancer Res. 68,8(2008): 2961-2971, все из которых включены в настоящее описание в качестве ссылок. Примеры транспозаз включают транспозазу Tc1/типа mariner, например, транспозазу SB10 или транспозазу SB11 (гиперактивную транспозазу, которая может экспрессироваться, например, с промотора цитомегаловируса). См., например, Aronovich et al.; Kebriaei et al. и Grabundzija et al., все из которых включены в настоящее описание в качестве ссылок.

Использование SBTS делает возможной эффективную интеграцию и экспрессию трансгена, например, нуклеиновой кислоты, кодирующей CAR, представленный в настоящем описании. Настоящее изобретение относится к способам получения клетки, например, T-клетки или NK-клетки, стабильно экспрессирующей CAR, представленный в настоящем описании, например, с использованием системы транспозона, такой как SBTS.

В соответствии со способами, представленными в настоящем описании, в некоторых вариантах осуществления одну или более нуклеиновых кислот, например, плазмид, содержащих компоненты SBTS, доставляют в клетку (например, T- или NK-клетку). Например, нуклеиновые кислоты доставляют стандартными способами доставки нуклеиновых кислот (например, плазмидной ДНК), например, способами, представленными в настоящем описании, например, электропорацией, трансфекцией или липофекцией. В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота содержит транспозон, содержащий трансген, например, нуклеиновую кислоту, кодирующую CAR, представленный в настоящем описании. В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота содержит транспозон, содержащий трансген (например, нуклеиновую кислоту, кодирующую CAR, представленный в настоящем описании), а также последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую фермент транспозазу. Другие варианты осуществления относятся к системе с двумя нуклеиновыми кислотами, например, двойной плазмидной системе, например, где первая плазмида содержит транспозон, содержащий трансген, и вторая плазмида содержит последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую фермент транспозазу. Например, первую и вторую нуклеиновые кислоты совместно доставляют в клетку-хозяина.

В некоторых вариантах осуществления получают клетки, например, T- или NK-клетки, экспрессирующие CAR, представленный в настоящем описании, с использованием комбинации встраивания гена с использованием SBTS и генетического редактирования с использованием нуклеазы (например, нуклеаз с цинковыми пальцами (ZFN), подобных активатору транскрипции эффекторных нуклеаз (TALEN), системы CRISPR/Cas или сконструированных мегануклеаз-реконструированных хоминг-эндонуклеаз).

В некоторых вариантах осуществления использование невирусного способа доставки делает возможным перепрограммирование клеток, например, T- или NK-клеток, и прямую инфузию клеток индивидууму. Преимущества невирусных векторов включают, в качестве неограничивающих примеров, простоту и относительно низкую стоимость получения достаточных количеств, необходимых для соответствия требованиям популяции пациентов, стабильности при хранении и отсутствия иммуногенности.

Конструкции нуклеиновых кислот, кодирующие CAR

Настоящее изобретение также относится к молекулам нуклеиновой кислоты, кодирующим одну или более конструкции CAR, представленных в настоящем описании. В одном из аспектов молекула нуклеиновой кислоты представлена в виде транскрипта матричной РНК. В одном из аспектов молекула нуклеиновой кислоты представлена в виде конструкции ДНК.

Таким образом, в одном из аспектов изобретение относится к выделенной молекуле нуклеиновой кислоты, кодирующей химерный антигенный рецептор (CAR), где CAR содержит связывающий домен против BCMA (например, связывающий домен человека против BCMA), трансмембранный домен и внутриклеточный сигнальный домен, содержащий стимуляторный домен, например, костимуляторный сигнальный домен и/или первичный сигнальный домен, например, дзета-цепь. В одном из вариантов осуществления связывающий домен против BCMA является связывающим доменом против BCMA, представленным в настоящем описании, например, связывающим доменом против BCMA, содержащим последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 39, SEQ ID NO: 40, SEQ ID NO: 41, SEQ ID NO: 42, SEQ ID NO: 43, SEQ ID NO: 44, SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 47, SEQ ID NO: 48, SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 129, SEQ ID NO: 130, SEQ ID NO: 131, SEQ ID NO: 132, SEQ ID NO: 133, SEQ ID NO: 134, SEQ ID NO: 135, SEQ ID NO: 136, SEQ ID NO: 137, SEQ ID NO: 138, SEQ ID NO: 139, SEQ ID NO: 140, SEQ ID NO: 141, SEQ ID NO: 142, SEQ ID NO: 143, SEQ ID NO: 144, SEQ ID NO: 145, SEQ ID NO: 146, SEQ ID NO: 147, SEQ ID NO: 148 или SEQ ID NO: 149, или последовательность с 95-99% идентичности по отношению к ним. В одном из вариантов осуществления трансмембранный домен является трансмембранным доменом белка, выбранным из группы, состоящей из альфа-, бета- или дзета-цепи T-клеточного рецептора, CD28, CD3 эпсилон, CD45, CD4, CD5, CD8, CD9, CD16, CD22, CD33, CD37, CD64, CD80, CD86, CD134, CD137 и CD154. В одном из вариантов осуществления трансмембранный домен содержит последовательность SEQ ID NO: 6 или последовательность с 95-99% идентичности по отношению к ней. В одном из вариантов осуществления связывающий домен против BCMA соединяют с трансмембранным доменом посредством шарнирной области, например, шарнирной области, представленной в настоящем описании. В одном из вариантов осуществления шарнирная область содержит SEQ ID NO: 2, или SEQ ID NO: 3, или SEQ ID NO: 4 или SEQ ID NO: 5, или последовательность с 95-99% идентичности по отношению к ним. В одном из вариантов осуществления выделенная молекула нуклеиновой кислоты дополнительно содержит последовательность, кодирующую костимуляторный домен. В одном из вариантов осуществления костимуляторный домен является функциональным сигнальным доменом белка, выбранным из группы, состоящей из молекулы MHC класса I, белков рецепторов ФНО, иммуноглобулин-подобных белков, рецепторов цитокинов, интегринов, сигнальных молекул активации лимфоцитов (белков SLAM), активирующих рецепторов NK-клеток, BTLA, рецептора Толл-лиганда, OX40, CD2, CD7, CD27, CD28, CD30, CD40, CDS, ICAM-1, LFA-1 (CD11a/CD18), 4-1BB (CD137), B7-H3, CDS, ICAM-1, ICOS (CD278), GITR, BAFFR, LIGHT, HVEM (LIGHTR), KIRDS2, SLAMF7, NKp80 (KLRF1), NKp44, NKp30, NKp46, CD19, CD4, CD8 альфа, CD8 бета, IL2R бета, IL2R гамма, IL7R альфа, ITGA4, VLA1, CD49a, ITGA4, IA4, CD49D, ITGA6, VLA-6, CD49f, ITGAD, CD11d, ITGAE, CD103, ITGAL, CD11a, LFA-1, ITGAM, CD11b, ITGAX, CD11c, ITGB1, CD29, ITGB2, CD18, LFA-1, ITGB7, NKG2D, NKG2C, TNFR2, TRANCE/RANKL, DNAM1 (CD226), SLAMF4 (CD244, 2B4), CD84, CD96 (Tactile), CEACAM1, CRTAM, Ly9 (CD229), CD160 (BY55), PSGL1, CD100 (SEMA4D), CD69, SLAMF6 (NTB-A, Ly108), SLAM (SLAMF1, CD150, IPO-3), BLAME (SLAMF8), SELPLG (CD162), LTBR, LAT, GADS, SLP-76, PAG/Cbp, CD19a и лиганда, специфически связывающегося с CD83. В одном из вариантов осуществления костимуляторный домен содержит последовательность SEQ ID NO: 7, или последовательность с 95-99% идентичности по отношению к ней, или костимуляторный домен CD27, имеющий последовательность SEQ ID NO: 8 (или последовательность с 95-99% идентичности по отношению к ней), или костимуляторный домен CD28, имеющий последовательность SEQ ID NO: 379 (или последовательность с 95-99% идентичности по отношению к ней), или костимуляторный домен ICOS, имеющий последовательность SEQ ID NO: 381 (или последовательность с 95-99% идентичности по отношению к ней). В одном из вариантов осуществления внутриклеточный сигнальный домен содержит функциональный сигнальный домен 4-1BB и функциональный сигнальный домен CD3 дзета. В одном из вариантов осуществления внутриклеточный сигнальный домен содержит последовательность SEQ ID NO: 7 или SEQ ID NO: 8, или последовательность с 95-99% идентичности по отношению к ним, и последовательность SEQ ID NO: 9 или SEQ ID NO: 10, или последовательность с 95-99% идентичности по отношению к ним, где последовательности, содержащие внутриклеточный сигнальный домен, экспрессируются в одной и той же рамке считывания и в виде единой полипептидной цепи.

В другом аспекте изобретение относится к выделенной молекуле нуклеиновой кислоты, кодирующей конструкцию CAR, содержащую лидерную последовательность SEQ ID NO: 1, scFV-домен, имеющий последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 39, SEQ ID NO: 40, SEQ ID NO: 41, SEQ ID NO: 42, SEQ ID NO: 43, SEQ ID NO: 44, SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 47, SEQ ID NO: 48, SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 129, SEQ ID NO: 130, SEQ ID NO: 131, SEQ ID NO: 132, SEQ ID NO: 133, SEQ ID NO: 134, SEQ ID NO: 135, SEQ ID NO: 136, SEQ ID NO: 137, SEQ ID NO: 138, SEQ ID NO: 139, SEQ ID NO: 140, SEQ ID NO: 141, SEQ ID NO: 142, SEQ ID NO: 143, SEQ ID NO: 144, SEQ ID NO: 145, SEQ ID NO: 146, SEQ ID NO: 147, SEQ ID NO: 148 или SEQ ID NO: 149 (или последовательности с 95-99% идентичности по отношению к ним), шарнирную область SEQ ID NO: 2, или SEQ ID NO: 3, или SEQ ID NO: 4, или SEQ ID NO: 5 (или последовательность с 95-99% идентичности по отношению к ним), трансмембранный домен, имеющий последовательность SEQ ID NO: 6 (или последовательность с 95-99% идентичности по отношению к ней), костимуляторный домен 4-1BB, имеющий последовательность SEQ ID NO: 7, или костимуляторный домен CD27, имеющий последовательность SEQ ID NO: 8 (или последовательность с 95-99% идентичности по отношению к ней), или костимуляторный домен CD28, имеющий последовательность SEQ ID NO: 1104 (или последовательность с 95-99% идентичности по отношению к ней), или костимуляторный домен ICOS, имеющий последовательность SEQ ID NO: 1106 (или последовательность с 95-99% идентичности по отношению к ней), и стимуляторный домен CD3 дзета, имеющий последовательность SEQ ID NO: 9 или SEQ ID NO: 10 (или последовательность с 95-99% идентичности по отношению к ним).

В другом аспекте изобретение относится к выделенной полипептидной молекуле, кодируемой молекулой нуклеиновой кислоты. В одном из вариантов осуществления выделенная полипептидная молекула содержит последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 39, SEQ ID NO: 40, SEQ ID NO: 41, SEQ ID NO: 42, SEQ ID NO: 43, SEQ ID NO: 44, SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 47, SEQ ID NO: 48, SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 129, SEQ ID NO: 130, SEQ ID NO: 131, SEQ ID NO: 132, SEQ ID NO: 133, SEQ ID NO: 134, SEQ ID NO: 135, SEQ ID NO: 136, SEQ ID NO: 137, SEQ ID NO: 138, SEQ ID NO: 139, SEQ ID NO: 140, SEQ ID NO: 141, SEQ ID NO: 142, SEQ ID NO: 143, SEQ ID NO: 144, SEQ ID NO: 145, SEQ ID NO: 146, SEQ ID NO: 147, SEQ ID NO: 148 и SEQ ID NO: 149 или последовательность с 95-99% идентичности по отношению к ним.

В другом аспекте изобретение относится к молекуле нуклеиновой кислоты, кодирующей молекулу химерного антигенного рецептора (CAR), содержащую связывающий домен против BCMA, трансмембранный домен и внутриклеточный сигнальный домен, содержащий стимуляторный домен, и где указанный связывающий домен против BCMA содержит последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 39, SEQ ID NO: 40, SEQ ID NO: 41, SEQ ID NO: 42, SEQ ID NO: 43, SEQ ID NO: 44, SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 47, SEQ ID NO: 48, SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 129, SEQ ID NO: 130, SEQ ID NO: 131, SEQ ID NO: 132, SEQ ID NO: 133, SEQ ID NO: 134, SEQ ID NO: 135, SEQ ID NO: 136, SEQ ID NO: 137, SEQ ID NO: 138, SEQ ID NO: 139, SEQ ID NO: 140, SEQ ID NO: 141, SEQ ID NO: 142, SEQ ID NO: 143, SEQ ID NO: 144, SEQ ID NO: 145, SEQ ID NO: 146, SEQ ID NO: 147, SEQ ID NO: 148 и SEQ ID NO: 149 или последовательность с 95-99% идентичности по отношению к ним.

В одном из вариантов осуществления кодируемая молекула CAR дополнительно содержит последовательность, кодирующую костимуляторный домен. В одном из вариантов осуществления костимуляторный домен является функциональным сигнальным доменом белка, например, представленным в настоящем описании, например, выбранным из группы, состоящей из молекулы MHC класса I, белков рецепторов ФНО, иммуноглобулин-подобных белков, рецепторов цитокинов, интегринов, сигнальных молекул активации лимфоцитов (белков SLAM), активирующих рецепторов NK-клеток, BTLA, рецептора Толл-лиганда, OX40, CD2, CD7, CD27, CD28, CD30, CD40, CDS, ICAM-1, LFA-1 (CD11a/CD18), 4-1BB (CD137), B7-H3, CDS, ICAM-1, ICOS (CD278), GITR, BAFFR, LIGHT, HVEM (LIGHTR), KIRDS2, SLAMF7, NKp80 (KLRF1), NKp44, NKp30, NKp46, CD19, CD4, CD8 альфа, CD8 бета, IL2R бета, IL2R гамма, IL7R альфа, ITGA4, VLA1, CD49a, ITGA4, IA4, CD49D, ITGA6, VLA-6, CD49f, ITGAD, CD11d, ITGAE, CD103, ITGAL, CD11a, LFA-1, ITGAM, CD11b, ITGAX, CD11c, ITGB1, CD29, ITGB2, CD18, LFA-1, ITGB7, NKG2D, NKG2C, TNFR2, TRANCE/RANKL, DNAM1 (CD226), SLAMF4 (CD244, 2B4), CD84, CD96 (Tactile), CEACAM1, CRTAM, Ly9 (CD229), CD160 (BY55), PSGL1, CD100 (SEMA4D), CD69, SLAMF6 (NTB-A, Ly108), SLAM (SLAMF1, CD150, IPO-3), BLAME (SLAMF8), SELPLG (CD162), LTBR, LAT, GADS, SLP-76, PAG/Cbp, CD19a и лиганда, специфически связывающегося с CD83. В одном из вариантов осуществления костимуляторный домен содержит последовательность SEQ ID NO: 7. В одном из вариантов осуществления трансмембранный домен является трансмембранным доменом белка, например, представленным в настоящем описании, например, выбранным из группы, состоящей из альфа-, бета- или дзета-цепи T-клеточного рецептора, CD28, CD3 эпсилон, CD45, CD4, CD5, CD8, CD9, CD16, CD22, CD33, CD37, CD64, CD80, CD86, CD134, CD137 и CD154. В одном из вариантов осуществления трансмембранный домен содержит последовательность SEQ ID NO: 6. В одном из вариантов осуществления внутриклеточный сигнальный домен содержит функциональный сигнальный домен 4-1BB и функциональный сигнальный домен дзета. В одном из вариантов осуществления внутриклеточный сигнальный домен содержит последовательность SEQ ID NO: 7 и последовательность SEQ ID NO: 9, где последовательности, содержащие внутриклеточный сигнальный домен, экспрессируются в одной и той же рамке считывания и в виде единой полипептидной цепи. В одном из вариантов осуществления связывающий домен против BCMA соединяют с трансмембранным доменом посредством шарнирной области. В одном из вариантов осуществления шарнирная область содержит SEQ ID NO: 2. В одном из вариантов осуществления шарнирная область содержит SEQ ID NO: 3, или SEQ ID NO: 4, или SEQ ID NO: 5.

В другом аспекте изобретение относится к кодируемой молекуле CAR, содержащей лидерную последовательность SEQ ID NO: 1, scFV-домен, имеющий последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 39, SEQ ID NO: 40, SEQ ID NO: 41, SEQ ID NO: 42, SEQ ID NO: 43, SEQ ID NO: 44, SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 47, SEQ ID NO: 48, SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 129, SEQ ID NO: 130, SEQ ID NO: 131, SEQ ID NO: 132, SEQ ID NO: 133, SEQ ID NO: 134, SEQ ID NO: 135, SEQ ID NO: 136, SEQ ID NO: 137, SEQ ID NO: 138, SEQ ID NO: 139, SEQ ID NO: 140, SEQ ID NO: 141, SEQ ID NO: 142, SEQ ID NO: 143, SEQ ID NO: 144, SEQ ID NO: 145, SEQ ID NO: 146, SEQ ID NO: 147, SEQ ID NO: 148 и SEQ ID NO: 149 или последовательность с 95-99% идентичности по отношению к ним, шарнирную область SEQ ID NO: 2, или SEQ ID NO: 3, или SEQ ID NO: 4, или SEQ ID NO: 5, трансмембранный домен, имеющий последовательность SEQ ID NO: 6, костимуляторный домен 4-1BB, имеющий последовательность SEQ ID NO: 7, или костимуляторный домен CD27, имеющий последовательность SEQ ID NO: 8, или костимуляторный домен CD28, имеющий последовательность SEQ ID NO: 1104 (или последовательность с 95-99% идентичности по отношению к ней), или костимуляторный домен ICOS, имеющий последовательность SEQ ID NO: 1106 (или последовательность с 95-99% идентичности по отношению к ней), и стимуляторный домен CD3 дзета, имеющий последовательность SEQ ID NO: 9 или SEQ ID NO: 10. В одном из вариантов осуществления кодируемая молекула CAR содержит последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 99, SEQ ID NO: 100, SEQ ID NO: 101, SEQ ID NO: 102, SEQ ID NO: 103, SEQ ID NO: 104, SEQ ID NO: 105, SEQ ID NO: 106, SEQ ID NO: 107, SEQ ID NO: 108, SEQ ID NO: 109, SEQ ID NO: 110, SEQ ID NO: 111, SEQ ID NO: 112, SEQ ID NO: 113, SEQ ID NO: 213, SEQ ID NO: 214, SEQ ID NO: 215, SEQ ID NO: 216, SEQ ID NO: 217, SEQ ID NO: 218, SEQ ID NO: 219, SEQ ID NO: 220, SEQ ID NO: 221, SEQ ID NO: 222, SEQ ID NO: 223, SEQ ID NO: 224, SEQ ID NO: 225, SEQ ID NO: 226, SEQ ID NO: 227, SEQ ID NO: 228, SEQ ID NO: 229, SEQ ID NO: 230, SEQ ID NO: 231, SEQ ID NO: 232 и SEQ ID NO: 233, или последовательность с 95-99% идентичности по отношению к ним.

Последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующие желаемые молекулы, можно получать известными в этой области рекомбинантными способами, такими как, например, скрининг библиотек из клеток, экспрессирующих ген, получая ген из вектора, о котором известно, что он его включает, или выделяя непосредственно из клеток и тканей, содержащих его, стандартными способами. Альтернативно, интересующий ген можно получать синтетически, а не клонировать.

Настоящее изобретение также относится к векторам, в которые встраивают ДНК по настоящему изобретению. Векторы, полученные из ретровирусов, таких как лентивирус, являются подходящими инструментами для достижения длительного переноса генов, т.к. они делают возможной длительную, стабильную интеграцию трансгена и его размножение в дочерних клетках. Лентивирусный вектор обладает дополнительным преимуществом по сравнению с векторами, полученными из онкоретровирусов, таких как вирусы лейкоза мыши, таким образом, что с их помощью можно трансдуцировать непролиферирующие клетки, такие как гепатоциты. Они также обладают дополнительным преимуществом, состоящим в низкой иммуногенности. Ретровирусный вектор также может являться, например, гаммаретровирусным вектором. Гаммаретровирусный вектор может включать, например, промотор, сигнал упаковки (ψ), участок связывания праймера (PBS), один или более (например, два) длинных концевых повтора (LTR) и интересующий трансген, например, ген, кодирующий CAR. В гаммаретровирусном векторе могут отсутствовать вирусные структурные гены, такие как gag, pol и env. Примеры гаммаретровирусных векторов включают вирус лейкоза мыши (MLV), вирус некроза селезенки (SFFV), вирус миелопролиферативной саркомы (MPSV) и получаемые из них векторы. Другие гаммаретровирусные векторы описывают, например, в Tobias Maetzig et al., ʺGammaretroviral Vectors: Biology, Technology and Applicationʺ Viruses. 2011 Jun; 3(6): 677-713.

В другом варианте осуществления вектор, содержащий нуклеиновую кислоту, кодирующую желаемый CAR по изобретению, является аденовирусным вектором (A5/35). В другом варианте осуществления экспрессию нуклеиновых кислот, кодирующих CAR, можно осуществлять с использованием транспозонов, таких как "Спящая красавица", CRISPR, CAS9 и нуклеазы с цинковыми пальцами. См. ниже June et al. 2009 Nature Reviews Immunology 9.10: 704-716, включенную в настоящее описание в качестве ссылки.

В кратком изложении, экспрессии природных или синтетических нуклеиновых кислот, кодирующих CAR, как правило, достигают, функционально связывая нуклеиновую кислоту, кодирующую полипептид CAR или его части, с промотором и встраивая конструкцию в экспрессирующий вектор. Векторы могут подходить для репликации и интеграции в эукариоты. Типичные клонирующие векторы содержат терминаторы транскрипции и трансляции, последовательности инициации и промоторы, применимые для регуляции экспрессии желаемой последовательности нуклеиновой кислоты.

Экспрессирующие конструкции по настоящему изобретению также можно использовать для иммунизации нуклеиновой кислотой и генотерапии с использованием стандартных способов доставки генов. Способы доставки генов известны в этой области. См., например, патенты США №№ 5399346, 5580859, 5589466, включенные в настоящее описание в качестве ссылок в полном объеме. В другом варианте осуществления изобретение относится к вектору для генотерапии.

Нуклеиновую кислоту можно клонировать в ряд типов векторов. Например, нуклеиновая кислота можно клонировать в вектор, включая, в качестве неограничивающих примеров, плазмиду, фагмиду, производное фага, вирус животного и космиду. Особенно интересующие векторы включают экспрессирующие векторы, реплицирующиеся векторы, векторы для получения зондов и векторы для секвенирования.

Кроме того, экспрессирующий вектор можно встраивать в клетку в форме вирусного вектора. Технология вирусного вектора хорошо известна в этой области и ее описывают, например, в Sambrook et al., 2012, MOLECULAR CLONING: A LABORATORY MANUAL, volumes 1 -4, Cold Spring Harbor Press, NY) и других руководствах по вирусологии и молекулярной биологии. Вирусы, применимые в качестве векторов, включают, в качестве неограничивающих примеров, ретровирусы, аденовирусы, аденоассоциированные вирусы, вирусы герпеса и лентивирусы. В основном, подходящий вектор содержит участок начала репликации, функциональный по меньшей мере в одном организме, последовательность промотора, удобные участки узнавания рестрикционных эндонуклеаз и один или более селективных маркеров (например, WO01/96584; WO01/29058 и патент США № 6326193).

Разработан ряд систем на основе вирусов для переноса генов в клетки млекопитающих. Например, ретровирусы представляют собой удобную платформу для систем доставки генов. Выбранный ген можно встраивать в вектор и упаковывать в ретровирусные частицы известными в этой области способами. Затем рекомбинантный вирус можно выделять и доставлять в клетки индивидуума in vivo или ex vivo. В этой области известен ряд ретровирусных систем. В некоторых вариантах осуществления используют аденовирусные векторы. В этой области известен ряд аденовирусных векторов. В одном из вариантов осуществления используют лентивирусный вектор.

Дополнительные промоторные элементы, например, энхансеры, регулируют частоту инициации транскрипции. Как правило, они находятся в области на 30-110 п.н. выше участка старта, хотя показано, что ряд промоторов содержит также функциональные элементы ниже участка старта. Расстояние между промоторными элементами зачастую является гибким, таким образом, что сохраняют функцию промотора, если элементы инвертированы или сдвинуты относительно друг друга. В промоторе тимидинкиназы (tk) расстояние между промоторными элементами можно повышать до 50 п.н. до того, как активность начинает снижаться. По-видимому, в зависимости от промотора отдельные элементы могут функционировать совместно или независимо для активации транскрипции.

Примером промотора, способного экспрессировать трансген CAR в T-клетке млекопитающего, является промотор EF1a. Нативный промотор EF1a регулирует экспрессию альфа-субъединиц комплекса фактора элонгации-1, отвечающего за ферментативную доставку аминоацил-тРНК в рибосому. Промотор EF1a широко используют в плазмидах для экспрессии в клетках млекопитающих, и показано, что он эффективен в регуляции экспрессии CAR с трансгенов, клонированных в лентивирусный вектор. См., например, Milone et al., Mol. Ther. 17(8): 1453-1464 (2009). В одном из аспектов промотор EF1a содержит последовательность, приведенную как SEQ ID NO: 11.

Другим примером промотора является последовательность предраннего промотора цитомегаловируса (CMV). Эта последовательность промотора является последовательностью сильного конститутивного промотора, способного регулировать высокие уровни экспрессии любой полинуклеотидной последовательности, функционально связанной с ним. Однако также можно использовать другие последовательности конститутивных промоторов, включая, в качестве неограничивающих примеров, ранний промотор вируса обезьян 40 (SV40), промотор вируса опухоли молочной железы мыши (MMTV), промотор длинного концевого повтора (LTR) вируса иммунодефицита человека (ВИЧ), промотор MoMuLV, промотор вируса лейкоза птиц, предранний промотор вируса Эпштейна-Барр, промотор вируса саркомы Рауса, а также промоторы генов человека, в качестве неограничивающих примеров, таких как промотор актина, промотор миозина, промотор фактора элонгации-1α, промотор гемоглобина и промотор креатинкиназы. Кроме того, изобретение не следует ограничивать использованием конститутивных промоторов. Индуцибельные промоторы также рассматривают в качестве части изобретения. Использование индуцибельного промотора предоставляет молекулярный переключатель, способный включать экспрессию полинуклеотидной последовательности, с которой он функционально связан, если такая экспрессия является желательной, или выключать экспрессию, если экспрессия нежелательна. Примеры индуцибельных промоторов включают, в качестве неограничивающих примеров, промотор металлотионеина, промотор глюкокортикоида, промотор прогестерона и промотор тетрациклина.

Другим примером промотора является промотор фосфоглицераткиназы (PGK). В вариантах осуществления желательным может являться укороченный промотор PGK (например, промотор PGK с одной или более, например, 1, 2, 5, 10, 100, 200, 300 или 400, делециями нуклеотидов по сравнению с последовательностью промотора PGK дикого типа). Нуклеотидные последовательности примеров промоторов PGK представлены ниже.

Промотор PGK WT

ACCCCTCTCTCCAGCCACTAAGCCAGTTGCTCCCTCGGCTGACGGCTGCACGCGAGGCCTCCGAACGTCTTACGCCTTGTGGCGCGCCCGTCCTTGTCCCGGGTGTGATGGCGGGGTGTGGGGCGGAGGGCGTGGCGGGGAAGGGCCGGCGACGAGAGCCGCGCGGGACGACTCGTCGGCGATAACCGGTGTCGGGTAGCGCCAGCCGCGCGACGGTAACGAGGGACCGCGACAGGCAGACGCTCCCATGATCACTCTGCACGCCGAAGGCAAATAGTGCAGGCCGTGCGGCGCTTGGCGTTCCTTGGAAGGGCTGAATCCCCGCCTCGTCCTTCGCAGCGGCCCCCCGGGTGTTCCCATCGCCGCTTCTAGGCCCACTGCGACGCTTGCCTGCACTTCTTACACGCTCTGGGTCCCAGCCGCGGCGACGCAAAGGGCCTTGGTGCGGGTCTCGTCGGCGCAGGGACGCGTTTGGGTCCCGACGGAACCTTTTCCGCGTTGGGGTTGGGGCACCATAAGCT

(SEQ ID NO: 1109)

Примеры укороченных промоторов PGK:

PGK100:

ACCCCTCTCTCCAGCCACTAAGCCAGTTGCTCCCTCGGCTGACGGCTGCACGCGAGGCCTCCGAACGTCTTACGCCTTGTGGCGCGCCCGTCCTTGTCCCGGGTGTGATGGCGGGGTG

(SEQ ID NO: 1110)

PGK200:

ACCCCTCTCTCCAGCCACTAAGCCAGTTGCTCCCTCGGCTGACGGCTGCACGCGAGGCCTCCGAACGTCTTACGCCTTGTGGCGCGCCCGTCCTTGTCCCGGGTGTGATGGCGGGGTGTGGGGCGGAGGGCGTGGCGGGGAAGGGCCGGCGACGAGAGCCGCGCGGGACGACTCGTCGGCGATAACCGGTGTCGGGTAGCGCCAGCCGCGCGACGGTAACG

(SEQ ID NO: 1111)

PGK300:

ACCCCTCTCTCCAGCCACTAAGCCAGTTGCTCCCTCGGCTGACGGCTGCACGCGAGGCCTCCGAACGTCTTACGCCTTGTGGCGCGCCCGTCCTTGTCCCGGGTGTGATGGCGGGGTGTGGGGCGGAGGGCGTGGCGGGGAAGGGCCGGCGACGAGAGCCGCGCGGGACGACTCGTCGGCGATAACCGGTGTCGGGTAGCGCCAGCCGCGCGACGGTAACGAGGGACCGCGACAGGCAGACGCTCCCATGATCACTCTGCACGCCGAAGGCAAATAGTGCAGGCCGTGCGGCGCTTGGCGTTCCTTGGAAGGGCTGAATCCCCG

(SEQ ID NO: 1112)

PGK400:

ACCCCTCTCTCCAGCCACTAAGCCAGTTGCTCCCTCGGCTGACGGCTGCACGCGAGGCCTCCGAACGTCTTACGCCTTGTGGCGCGCCCGTCCTTGTCCCGGGTGTGATGGCGGGGTGTGGGGCGGAGGGCGTGGCGGGGAAGGGCCGGCGACGAGAGCCGCGCGGGACGACTCGTCGGCGATAACCGGTGTCGGGTAGCGCCAGCCGCGCGACGGTAACGAGGGACCGCGACAGGCAGACGCTCCCATGATCACTCTGCACGCCGAAGGCAAATAGTGCAGGCCGTGCGGCGCTTGGCGTTCCTTGGAAGGGCTGAATCCCCGCCTCGTCCTTCGCAGCGGCCCCCCGGGTGTTCCCATCGCCGCTTCTAGGCCCACTGCGACGCTTGCCTGCACTTCTTACACGCTCTGGGTCCCAGCCG

(SEQ ID NO: 1113)

Вектор также может включать, например, сигнальную последовательность для облегчения секреции, сигнал полиаденилирования и терминатор транскрипции (например, из гена бычьего гормона роста (BGH)), элемент, делающий возможной эписомную репликацию и репликацию в прокариотах (например, из SV40 и ColE1 или других известных в этой области), и/или элементы для селекции (например, ген устойчивости к ампициллину и/или маркер зеоцин).

Для оценки экспрессии полипептида CAR или его частей экспрессирующий вектор для встраивания в клетку также может содержать ген селективного маркера или репортерный ген или и тот, и другой для облегчения идентификации и селекции экспрессирующих клетках из популяции клеток, подлежащих трансфекции или инфицированию с помощью вирусных векторов. В других аспектах селективный маркер может находиться на отдельном фрагменте ДНК, и его можно использовать в котрансфекции. И селективные маркеры, и репортерные гены могут быть фланкированы соответствующими регуляторными последовательностями, чтобы сделать возможной экспрессию в клетках-хозяевах. Применимые селективные маркеры включают, например, гены устойчивости к антибиотикам, такие как neo и т.п.

Репортерные гены используют для идентификации потенциально трансфицированных клеток и для оценки функциональности регуляторных последовательностей. В основном, репортерный ген является геном, не присутствующим или не экспрессирующимся в организме или ткани реципиента и кодирующим полипептид, экспрессия которого проявляется некоторыми легко детектируемыми свойствами, например, ферментативной активностью. Экспрессию репортерного гена оценивают в подходящее время после встраивания ДНК в клетки-реципиенты. Подходящие репортерные гены могут включать гены, кодирующие люциферазу, бета-галактозидазу, хлорамфениколацетилтрансферазу, секретируемую щелочную фосфатазу или ген зеленого флуоресцентного белка (например, Ui-Tei et al., 2000 FEBS Letters 479: 79-82). Подходящие системы экспрессии хорошо известны и их можно получать известными способами или в коммерческих источниках. В основном, конструкцию с минимальной 5'-фланкирующей области, демонстрирующую наиболее высокий уровень экспрессии репортерного гена, идентифицируют как промотор. Такие промоторные области можно соединять с репортерным геном и использовать для оценки средств на их способность модулировать регулируемую промотором транскрипцию.

В одном из вариантов осуществления вектор может дополнительно содержать нуклеиновую кислоту, кодирующую второй CAR. В одном из вариантов осуществления второй CAR включает антигенсвязывающий домен для мишени, экспрессирующейся на клетках острого миелолейкоза, такой как, например, CD123, CD34, CLL-1, рецептор фолата бета или FLT3, или мишени, экспрессирующейся на B-клетке, например, CD10, CD19, CD20, CD22, CD34, CD123, FLT-3, ROR1, CD79b, CD179b или CD79a. В одном из вариантов осуществления вектор содержит последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую первый CAR, специфически связывающийся с первым антигеном, и включает внутриклеточный сигнальный домен, содержащий костимуляторный сигнальный домен, но не первичный сигнальный домен, и нуклеиновую кислоту, кодирующую второй CAR, специфически связывающийся со вторым, другим, антигеном, и включает внутриклеточный сигнальный домен, содержащий первичный сигнальный домен, но не костимуляторный сигнальный домен. В одном из вариантов осуществления вектор содержит нуклеиновую кислоту, кодирующую первый CAR BCMA, включающий BCMA-связывающий домен, трансмембранный домен и костимуляторный домен, и нуклеиновую кислоту, кодирующую второй CAR против антигена, иного, чем BCMA (например, антигена, экспрессирующегося на клетках AML, например, CD123, CD34, CLL-1, рецептор фолата бета или FLT3, или антигена, экспрессирующегося на B-клетке, например, CD10, CD19, CD20, CD22, CD34, CD123, FLT-3, ROR1, CD79b, CD179b или CD79a), и включает антигенсвязывающий домен, трансмембранный домен и первичный сигнальный домен. В другом варианте осуществления вектор содержит нуклеиновую кислоту, кодирующую первый CAR BCMA, включающий BCMA-связывающий домен, трансмембранный домен и первичный сигнальный домен, и нуклеиновую кислоту, кодирующую второй CAR, специфически связывающийся с антигеном, иным, чем BCMA (например, антигеном, экспрессирующимся на клетках AML, например, CD123, CD34, CLL-1, рецептор фолата бета или FLT3, или антигеном, экспрессирующимся на B-клетке, например, CD10, CD19, CD20, CD22, CD34, CD123, FLT-3, ROR1, CD79b, CD179b или CD79a), и включает антигенсвязывающий домен против антигена, трансмембранный домен и костимуляторный сигнальный домен.

В одном из вариантов осуществления вектор содержит нуклеиновую кислоту, кодирующую CAR BCMA, представленный в настоящем описании, и нуклеиновую кислоту, кодирующую ингибиторный CAR. В одном из вариантов осуществления ингибиторный CAR содержит антигенсвязывающий домен, связывающийся с антигеном, обнаруживаемым на нормальных клетках, но не злокачественных клетках, например нормальных клетках, также экспрессирующих BCMA. В одном из вариантов осуществления ингибиторный CAR содержит антигенсвязывающий домен, трансмембранный домен и внутриклеточный домен ингибиторной молекулы. Например, внутриклеточный домен ингибиторного CAR может являться внутриклеточным доменом PD1, PD-L1, PD-L2, CTLA4, TIM3, CEACAM (например, CEACAM-1, CEACAM-3 и/или CEACAM-5), LAG3, VISTA, BTLA, TIGIT, LAIR1, CD160, 2B4, CD80, CD86, B7-H3 (CD276), B7-H4 (VTCN1), HVEM (TNFRSF14 или CD270), KIR, A2aR, MHC класса I, MHC класса II, GAL9, аденозина и TGFR бета.

В вариантах осуществления вектор может содержать две или более последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующие CAR, например, CAR BCMA, представленный в настоящем описании, и второй CAR, например, ингибиторный CAR или CAR, специфически связывающийся с антигеном, иным, чем BCMA (например, антигеном, экспрессирующимся на клетках AML, например, CD123, CLL-1, CD34, FLT3 или рецептор фолата бета, или антигеном, экспрессирующимся на B-клетках, например, CD10, CD19, CD20, CD22, CD34, CD123, FLT-3, ROR1, CD79b, CD179b или CD79a). В таких вариантах осуществления две или более последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующие CAR, кодируются единой молекулой нуклеиновой кислоты в одной рамке считывания и в виде единой полипептидной цепи. В этом аспекте два или более CAR можно, например, разделять одним или более участками расщепления пептида (например, участком саморасщепления или субстрата для внутриклеточной протеазы). Примеры участков расщепления пептида включают следующие, где остатки GSG необязательны:

T2A: (GSG) E G R G S L L T C G D V E E N P G P (SEQ ID NO: 1114)

P2A: (GSG) A T N F S L L K Q A G D V E E N P G P (SEQ ID NO: 1115)

E2A: (GSG) Q C T N Y A L L K L A G D V E S N P G P (SEQ ID NO: 1116)

F2A: (GSG) V K Q T L N F D L L K L A G D V E S N P G P (SEQ ID NO: 1117)

Способы встраивания и экспрессии генов в клетке известны в этой области. Что касается экспрессирующего вектора, вектор можно легко встраивать в клетку-хозяина, например, клетку млекопитающего, бактерии, дрожжей или насекомого любым способом, известным в этой области. Например, экспрессирующий вектор можно переносить в клетку-хозяина физическими, химическими или биологическими способами.

Физические способы встраивания полинуклеотида в клетку-хозяина включают осаждение фосфатом кальция, липофекцию, бомбардировку частицами, микроинъекцию, электропорацию и т.п. Способы получения клеток, содержащих векторы и/или экзогенные нуклеиновые кислоты, хорошо известны в этой области. См., например, Sambrook et al., 2012, MOLECULAR CLONING: A LABORATORY MANUAL, volumes 1-4, Cold Spring Harbor Press, NY. Предпочтительным способом встраивания полинуклеотида в клетку-хозяина является трансфекция с фосфатом кальция.

Биологические способы встраивания интересующего полинуклеотида в клетку-хозяина включают использование ДНК- и РНК-векторов. Вирусные векторы, и особенно ретровирусные векторы, стали наиболее широко используемым способом встраивания генов в клетки млекопитающего, например, клетки человека. Другие вирусные векторы можно получать из лентивируса, поксвирусов, вируса простого герпеса I, аденовирусов и аденоассоциированных вирусов и т.п. См., например, патенты США №№ 5350674 и 5585362.

Химические способы встраивания полинуклеотида в клетку-хозяина включают системы коллоидных дисперсий, такие как комплексы макромолекул, нанокапсулы, микросферы, бусы и системы на основе липидов, включая эмульсии "масло-в-воде", мицеллы, смешанные мицеллы и липосомы. Примером коллоидной системы для использования в качестве средства доставки in vitro и in vivo является липосома (например, искусственный мембранный носитель). Доступны другие способы, относящиеся к современному уровню техники, направленные на доставку нуклеиновых кислоты, такие как доставка полинуклеотидов с использованием направленных наночастиц или другие подходящие системы доставки субмикронного размера.

В случае использования невирусной системы доставки примером носителя для доставки является липосома. Предусмотрено использование липидных составов для встраивания нуклеиновых кислот в клетку-хозяина (in vitro, ex vivo или in vivo). В другом аспекте нуклеиновую кислоту можно связывать с липидом. Нуклеиновую кислоту, связанную с липидом, можно инкапсулировать во внутренней водной среде липосомы, распределять в липидном бислое липосомы, прикреплять к липосоме с помощью связующей молекулы, связанной с липосомой и олигонуклеотидом, заключать в липосоме, комплексировать с липосомой, диспергировать в растворе, содержащем липид, смешивать с липидом, комбинировать с липидом, включать в качестве суспензии в липиде, включать или комплексировать с мицеллой или иным образом связывать с липидом. Композиции, связанные с липидом, липидом/ДНК или липидом/экспрессирующим вектором, не ограничены конкретной структурой в растворе. Например, они могут находиться в бислойной структуре, в виде мицелл или со "сжатой" структурой. Они также могут просто распределяться в растворе, возможно, образуя агрегаты, неоднородные по размеру или форме. Липиды являются жирными веществами, которые могут являться природными или синтетическими липидами. Например, липиды включают жировые капли, в природе встречающиеся в цитоплазме, а также класс соединений, содержащих длинноцепочечные алифатические углеводороды и их производные, такие как жирные кислоты, спирты, амины, аминоспирты и альдегиды.

Липиды, пригодные для использования, можно получать из коммерческих источников. Например, димиристоилфосфатидилхолин ("DMPC") можно получать в Sigma, St. Louis, MO, дицетилфосфат ("DCP") можно получать в K & K Laboratories (Plainview, NY), холестерин ("Choi") можно получать в Calbiochem-Behring, димиристилфосфатидилглицерин ("DMPG") и другие липиды можно получать в Avanti Polar Lipids, Inc. (Birmingham, AL.). Стоковые растворы липидов в хлороформе или хлороформе/метаноле можно хранить приблизительно при -20°C. Хлороформ используют в качестве единственного растворителя, т.к. он легче испаряется, чем метанол. "Липосома" является общим термином, включающим множество мультиламеллярных липидных носителей, формирующихся посредством образования замкнутых липидных бислоев или агрегатов. Липосомы можно охарактеризовать как имеющие везикулярные структуры с фосфолипидной бислойной мембраной и внутренней водной средой. Мультиламеллярные липосомы имеют множество липидных слоев, разделенных водной средой. Они образуются спонтанно, когда фосфолипиды суспендируют в избытке водного раствора. Липидные компоненты подвергаются самоперестройке перед образованием замкнутых структур и захватывают воду и растворы между липидными бислоями (Ghosh et al., 1991 Glycobiology 5: 505-10). Однако также предусмотрены композиции, имеющие иные структуры в растворе, чем нормальная везикулярная структура. Например, липиды могут представлять мицеллярную структуру или существовать исключительно в виде неоднородных агрегатов молекул липидов. Также предусмотрены комплексы липофектамин-нуклеиновая кислота.

Независимо от способа, используемого для встраивания экзогенных нуклеиновых кислот в клетку-хозяина или иного воздействия ингибитора по настоящему изобретению на клетку, для подтверждения наличия последовательности рекомбинантной ДНК в клетке-хозяине можно осуществлять множество анализов. Такие анализы включают, например, "молекулярно-биологические" анализы, хорошо известные специалистам в этой области, такие как Саузерн- и "нозерн"-блоттинг, RT-ПЦР и ПЦР, "биохимические" анализы, такие как определение наличия или отсутствия конкретного пептида, например, иммунологическими способами (ELISA и вестерн-блоттинг) или посредством анализов, представленных в настоящем описании, для идентификации средств, находящихся в объеме изобретения.

Настоящее изобретение дополнительно относится к вектору, содержащему молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую CAR. В одном из аспектов вектор CAR можно напрямую трансдуцировать в клетку, например, T-клетку или NK-клетку. В одном из аспектов вектор является клонирующим или экспрессирующим вектором, например, вектором, включающим, в качестве неограничивающих примеров, одну или более плазмид (например, экспрессирующих плазмид, клонирующих векторов, миниколец, минивекторов, двойных микрохромосом), конструкции ретровирусных и лентивирусных векторов. В одном из аспектов вектор способен экспрессировать конструкцию CAR в T-клетках или NK-клетках млекопитающих. В одном из аспектов T-клетка млекопитающего является T-клеткой человека. В одном из аспектов NK-клетка млекопитающего является NK-клеткой человека.

Источники клеток

Перед экспансией и генетической модификацией источник клеток, например, иммунных эффекторных клеток (например, T-клеток или NK-клеток), получают из индивидуума. Термин "индивидуум" предназначен для включения живых организмов, в которых можно вызывать иммунный ответ (например, млекопитающих). Примеры индивидуумов включают людей, собак, кошек, мышей, крыс и их трансгенные особи. T-клетки можно получать из ряда источников, включая мононуклеарные клетки периферической крови, костный мозг, ткань лимфоузла, пуповинную кровь, ткань тимуса, ткань из очага инфекции, асцитическую жидкость, плевральный выпот, ткань селезенки и опухоли.

В определенных аспектах по настоящему изобретению можно использовать любое количество линий иммунных эффекторных клеток (например, T-клеток или NK-клеток), доступных в этой области. В определенных аспектах по настоящему изобретению T-клетки можно получать из единицы крови, собранной из индивидуума с использованием любого количества способов, известных специалистам в этой области, таких как разделение с помощью Ficoll™. В одном из предпочтительных аспектов клетки из циркулирующей крови индивидуума получают с помощью афереза. Продукт афереза, как правило, содержит лимфоциты, включая T-клетки, моноциты, гранулоциты, B-клетки, другие ядерные лейкоциты, эритроциты и тромбоциты. В одном из аспектов клетки, собранные с помощью афереза, можно промывать для удаления фракции плазмы и для помещения клеток в соответствующий буфер или среду для последующих этапов обработки. В одном аспектов изобретения клетки промывают фосфатно-солевым буфером (PBS). В альтернативном аспекте в промывочном растворе отсутствует кальций и может отсутствовать магний или могут отсутствовать многие, если не все, бивалентные катионы.

Исходные этапы активации в отсутствие кальция могут приводить к усиленной активации. Как будет понятно специалистам в этой области, этап промывки можно осуществлять способами, известными специалистам в этой области, такими как использование полуавтоматизированной "проточной" центрифуги (например, клеточного процессора Cobe 2991, Baxter CytoMate или Haemonetics Cell Saver 5) по инструкциям производителя. После промывки клетки можно ресуспендировать во множестве биосовместимых буферов, таких как, например, Ca-несодержащий, Mg-несодержащий PBS, плазмалит A или другой физиологический раствор с буфером или без него. Альтернативно, нежелательные компоненты аферезного образца можно удалять и клетки можно напрямую ресуспендировать в средах для культивирования.

Установлено, что в способах по настоящему изобретению можно использовать условия сред для культивирования, содержащих 5% или менее, например, 2%, сыворотки AB человека, и использовать условия известных сред для культивирования и композиции, например, описываемые в Smith et al., ʺEx vivo expansion of human T cells for adoptive immunotherapy using the novel Xeno-free CTS Immune Cell Serum Replacementʺ Clinical & Translational Immunology (2015) 4, e31; doi:10.1038/cti.2014.31.

В одном из аспектов T-клетки выделяют из лимфоцитов периферической крови, лизируя эритроциты и истощая моноциты, например, посредством центрифугирования в градиенте PERCOLL^TM или проточного элютриационного центрифугирования. Конкретную субпопуляцию T-клеток, такую как CD3+, CD28+, CD4+, CD8+, CD45RA+ и CD45RO+ T-клетки, можно дополнительно выделять способами положительной или отрицательной селекции. Например, в одном из аспектов T-клетки выделяют посредством инкубации с бусами, конъюгированными с антителами против CD3/против CD28 (например, 3×28), такими как DYNABEADS® M-450 CD3/CD28 T, в течение периода времени, достаточного для положительной селекции желаемых T-клеток. В одном из аспектов период времени составляет приблизительно 30 минут. В дополнительном аспекте период времени находится в диапазоне от 30 минут до 36 часов или более, включая все целые значения между ними. В дополнительном аспекте период времени составляет по меньшей мере, 1, 2, 3, 4, 5 или 6 часов. В другом предпочтительном аспекте период времени составляет от 10 до 24 часов. В одном из аспектов период инкубации составляет 24 часа. Более длительную инкубацию можно использовать для выделения T-клеток в любой ситуации, когда есть мало T-клеток по сравнению с другими типами клеток, как при выделении инфильтрирующих опухоль лимфоцитов (TIL) из ткани опухоли или из иммунокомпрометированных индивидуумов. Кроме того, использование более длительной инкубации может повышать эффективность захвата CD8+ T-клеток. Таким образом, уменьшая или увеличивая время, в течение которого T-клеткам позволяют связываться с бусами CD3/CD28, и/или повышая или снижая соотношение бус и T-клеток (как описано далее в настоящем описании), субпопуляции T-клеток можно предпочтительно подвергать положительной или отрицательной селекции в начале культивирования или в другие моменты времени. Кроме того, повышая или снижая соотношение антител против CD3 и/или против CD28 на бусах или другой поверхности, субпопуляции T-клеток можно предпочтительно подвергать положительной или отрицательной селекции в начале культивирования или в другие моменты времени. Специалистам в этой области будет понятно, что в контексте настоящего изобретения также можно использовать множество раундов селекции. В определенных аспектах желательным может являться осуществление селекции и использование "неподвергнутых селекции" клеток в активации и экспансии. "Неподвергнутые селекции" клетки также можно подвергать дополнительным раундам селекции.

Обогащение популяции T-клеток посредством отрицательной селекции можно осуществлять с использованием комбинации антител против поверхностных маркеров, уникальных для подвергнутых отрицательной селекции клеток. Одним из способов является сортинг клеток и/или селекция посредством отрицательной магнитной иммунной адгезии или проточной цитометрии, в которой используют смесь моноклональных антител против поверхностных клеточных маркеров, присутствующих на подвергнутых отрицательной селекции клетках. Например, в случае обогащения CD4+-клеток посредством отрицательной селекции смесь моноклональных антител, как правило, включает антитела против CD14, CD20, CD11b, CD16, HLA-DR и CD8. В определенных аспектах желательным может являться обогащение или положительная селекция регуляторных T-клеток, как правило, экспрессирующих CD4+, CD25+, CD62Lhi, GITR+ и FoxP3+. Альтернативно, в определенных аспектах T-регуляторные клетки подвергают истощению с помощью бус, конъюгированных с антителами против C25, или другого схожего способа селекции.

Способы, представленные в настоящем описании, могут включать, например, селекцию конкретных субпопуляций иммунных эффекторных клеток, например, T-клеток, представляющих собой истощенную в отношении T-регуляторных клеток популяцию, CD25+-истощенные клетки, например, способом отрицательной селекции, например, представленным в настоящем описании. Предпочтительно, популяция, истощенная в отношении T-регуляторных клеток, содержит менее 30%, 25%, 20%, 15%, 10%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1% CD25+ клеток.

В одном из вариантов осуществления T-регуляторные клетки, например, CD25+ T-клетки, удаляют из популяции с использованием антитела против CD25, или его фрагмента, или CD25-связывающего лиганда, ИЛ-2. В одном из вариантов осуществления антитело против CD25, или его фрагмент, или CD25-связывающий лиганд конъюгируют с субстратом, например, бусиной, или иным образом покрывают им субстрат, например, бусину. В одном из вариантов осуществления антитело против CD25 или его фрагмент конъюгируют с субстратом, как представлено в настоящем описании.

В одном из вариантов осуществления T-регуляторные клетки, например, CD25+ T-клетки, удаляют из популяции с использованием реагента для истощения CD25 от Miltenyi^TM. В одном из вариантов осуществления соотношение клеток к реагенту для истощения CD25 составляет 1e7 клеток на 20 мкл, или 1e7 клеток на мкл, или 1e7 клеток на 10 мкл, или 1e7 клеток на 5 мкл, или 1e7 клеток на 2,5 мкл, или 1e7 клеток на 1,25 мкл. В одном из вариантов осуществления, например, в случае T-регуляторных клеток, например, при истощении CD25+, используют более 500 миллионов клеток/мл. В дополнительном аспекте используют концентрацию клеток 600, 700, 800 или 900 миллионов клеток/мл.

В одном из вариантов осуществления популяция иммунных эффекторных клеток, подлежащая истощению, включает приблизительно 6×10⁹ CD25+ T-клеток. В других аспектах популяция иммунных эффекторных клеток, подлежащих истощению, включает приблизительно от 1×10⁹ до 1× 10¹⁰ CD25+ T-клеток и любое целое число между ними. В одном из вариантов осуществления полученная популяция, истощенная в отношении T-регуляторных клеток, содержит 2×10⁹ T-регуляторных клеток, например, CD25+ клеток, или менее (например, 1×10⁹, 5×10^8, 1×10⁸, 5×10⁷, 1×10⁷ или менее CD25+ клеток).

В одном из вариантов осуществления T-регуляторные клетки, например, CD25+ клетки, удаляют из популяции с использованием системы CliniMAC с комплектом трубок для истощения, таких как, например, трубки 162-01. В одном из вариантов осуществления систему CliniMAC запускают в условиях истощения, таких как, например, DEPLETION2.1.

Не желая быть связанными какой-либо конкретной теорией, полагают, что снижение уровня отрицательных регуляторов иммунных клеток (например, снижение количества нежелательных иммунных клеток, например, T_REG-клеток) у индивидуума перед аферезом или при производстве продукта CAR-экспрессирующих клеток может снижать риск рецидива у индивидуума. Например, в этой области известны способы истощения T_REG-клеток. Способы снижения T_REG-клеток включают, в качестве неограничивающих примеров, использование циклофосфамида, антитела против GITR (антитело против GITR, представленное в настоящем описании), истощение CD25 и их комбинации.

В некоторых вариантах осуществления способы производства включают снижение количества (например, истощение) T_REG-клеток перед производством CAR-экспрессирующей клетки. Например, способы производства включают приведение образца, например, аферезного образца, в контакт с антителом против GITR и/или антителом против CD25 (или его фрагментом или CD25-связывающим лигандом), например, для истощения T_REG-клеток перед производством продукта CAR-экспрессирующих клеток (например, T-клеток, NK-клеток).

В варианте осуществления индивидуума предварительно подвергают одному или более способам терапии, снижающим T_REG-клетки перед сбором клеток для производства продукта CAR-экспрессирующих клеток, таким образом, снижая риск рецидива у индивидуума в ответ на лечение CAR-экспрессирующими клетками. В варианте осуществления способы снижения T_REG-клеток включают, в качестве неограничивающих примеров, проведение индивидууму одного или более из введения циклофосфамида, антитела против GITR, истощения CD25 или их комбинации. Проведение одного или более из введения циклофосфамида, антитела против GITR, истощения CD25 или их комбинации можно осуществлять до, в течение или после инфузии продукта CAR-экспрессирующих клеток.

В варианте осуществления индивидуума предварительно лечат циклофосфамидом перед сбором клеток для производства продукта CAR-экспрессирующих клеток, таким образом, снижая риск рецидива у индивидуума в ответ на лечение CAR-экспрессирующими клетками. В варианте осуществления индивидуума предварительно лечат антителом против GITR перед сбором клеток для производства продукта CAR-экспрессирующих клеток, таким образом, снижая риск рецидива у индивидуума в ответ на лечение CAR-экспрессирующими клетками.

В одном из вариантов осуществления популяция клеток, подлежащая удалению, не является ни регуляторными T-клетками, ни опухолевыми клетками, а клетками, иным образом отрицательно влияющими на экспансию и/или функцию CART-клеток, например клетками, экспрессирующими CD14, CD11b, CD33, CD15 или другие маркеры, экспрессируемые потенциально иммуносупрессирующими клетками. В одном из вариантов осуществления такие клетки предполагают удалять одновременно с регуляторными T-клетками и/или опухолевыми клетками, или после указанного истощения, или в другом порядке.

Способы, представленные в настоящем описании, могут включать несколько этапов селекции, например, несколько этапов истощения. Обогащение популяции T-клеток посредством отрицательной селекции можно осуществлять, например, с использованием комбинации антител против поверхностных маркеров, уникальных для подвергнутых отрицательной селекции клеток. Одним из способов является сортинг клеток и/или селекция посредством отрицательной магнитной иммунной адгезии или проточной цитометрии, в которой используют смесь моноклональных антител против поверхностных клеточных маркеров, присутствующих на подвергнутых отрицательной селекции клеток. Например, для обогащения в отношении CD4+-клеок посредством отрицательной селекции, смесь моноклональных антител может включать антитела против CD14, CD20, CD11b, CD16, HLA-DR и CD8.

Способы, представленные в настоящем описании, могут дополнительно включать удаление клеток из популяции, экспрессирующей опухолевый антиген, например, опухолевый антиген, не содержащий CD25, например, CD19, CD30, CD38, CD123, CD20, CD14 или CD11b, чтобы, таким образом, получать популяцию, истощенную в отношении T-регуляторных клеток, например, CD25+-истощенную, и популяцию истощенных по опухолевому антигену клеток, подходящих для экспрессии CAR, например, CAR, представленного в настоящем описании. В одном из вариантов осуществления клетки, экспрессирующие опухолевый антиген, удаляют одновременно с T-регуляторными, например, CD25+, клетками. Например, антитело против CD25 или его фрагмент и антитело против противоопухолевого антигена или его фрагмент можно присоединять к одному субстрату, например, бусине, который можно использовать для удаления клеток, или антитело против CD25 или его фрагмент или антитело против противоопухолевого антигена или его фрагмент можно присоединять к отдельным бусинам, смесь которых можно использовать для удаления клеток. В других вариантах осуществления удаление T-регуляторных клеток, например, CD25+-клеток, и удаление клеток, экспрессирующих опухолевый антиген, являются последовательными, и их можно осуществлять, например, в любом порядке.

Настоящее изобретение также относится к способам, включающим удаление клеток из популяции, экспрессирующей ингибитор контрольных точек, например, ингибитор контрольных точек, представленный в настоящем описании, например, одной или более из PD1+-клеток, LAG3+-клеток и TIM3+-клеток, чтобы, таким образом, получать популяцию, истощенную в отношении T-регуляторных клеток, например, CD25+-истощенные клетки, и клетки, истощенные по ингибитору контрольных точек, например, PD1+-, LAG3+- и/или TIM3+-истощенные клетки. Примеры ингибиторов контрольных точек включают PD1, PD-L1, PD-L2, CTLA4, TIM3, CEACAM (например, CEACAM-1, CEACAM-3 и/или CEACAM-5), LAG3, VISTA, BTLA, TIGIT, LAIR1, CD160, 2B4, CD80, CD86, B7-H3 (CD276), B7-H4 (VTCN1), HVEM (TNFRSF14 или CD270), KIR, A2aR, MHC класса I, MHC класса II, GAL9, аденозин и TGFR бета. В вариантах осуществления ингибитором контрольных точек является PD1 или PD-L1. В одном из вариантов осуществления клетки, экспрессирующие ингибитор контрольных точек, удаляют одновременно с T-регуляторными, например, CD25+, клетками. Например, антитело против CD25 или его фрагмент и антитело против ингибитора контрольных точек или его фрагмент можно присоединять к одной бусине, которую можно использовать для удаления клеток, или антитело против CD25 или его фрагмент и антитело против ингибитора контрольных точек или его фрагмент можно присоединять к отдельным бусинам, смесь которых можно использовать для удаления клеток. В других вариантах осуществления удаление T-регуляторных клеток, например, CD25+-клеток, и удаление клеток, экспрессирующих ингибитор контрольных точек, являются последовательными, и их можно осуществлять, например, в любом порядке.

В одном из вариантов осуществления селекции можно подвергать популяцию T-клеток, экспрессирующих один или более из ИФНγ, ФНО, ИЛ-17A, ИЛ-2, ИЛ-3, ИЛ-4, ГМ-КСФ, ИЛ-10, ИЛ-13, гранзима B и перфорина или других соответствующих молекул, например, других цитокинов. Способы скрининга экспрессии клеток можно определять, например, способами, описываемыми в публикации PCT №: WO2013/126712.

В случае выделения желаемой популяции клеток посредством положительной или отрицательной селекции можно варьировать концентрацию клеток и поверхности (например, частиц, таких как бусы). В определенных аспектах желательным может являться значительное снижение объема, в котором смешивают бусы и клетки (например, повышая концентрацию клеток), для обеспечения максимального контакта клеток и бус. Например, в одном из аспектов используют концентрацию 2 миллиарда клеток/мл. В одном из аспектов используют концентрацию 1 миллиард клеток/мл. В дополнительном аспекте используют более 100 миллионов клеток/мл. В дополнительном аспекте используют концентрацию клеток 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45 или 50 миллионов клеток/мл. В еще одном аспекте используют концентрацию клеток 75, 80, 85, 90, 95 или 100 миллионов клеток/мл. В дополнительных аспектах можно использовать концентрации 125 или 150 миллионов клеток/мл. Использование высоких концентраций может приводить к повышенному выходу клеток, активации клеток и экспансии клеток. Кроме того, использование высоких концентраций клеток делает возможным более эффективный захват клеток, которые могут слабо экспрессировать интересующие антигены-мишени, таких как CD28-отрицательные T-клетки, или из образцов, где присутствует много опухолевых клеток (например, лейкозной крови, опухолевой ткани и т.д.). Такие популяции клеток могут иметь терапевтическое значение, и их получение будет желательным. Например, использование высокой концентрации клеток делает возможной более эффективную селекцию CD8+-T-клеток, в норме имеющих более слабую экспрессию CD28.

В родственном аспекте желательным может являться использование более низких концентраций клеток. Значительно разводя смесь T-клеток и поверхности (например, частиц, таких как бусы), минимизируют взаимодействия между частицами и клетками. Это позволяет осуществлять селекцию клеток, экспрессирующих большие количества желаемых антигенов для связывания с частицами. Например, CD4+ T-клетки экспрессируют более высокие уровни CD28 и более эффективно захватываются, чем CD8+ T-клетки в концентрациях после разведения. В одном из аспектов используемая концентрация клеток составляет 5×10e6/мл. В других аспектах используемая концентрация может составлять приблизительно от 1×10⁵/мл до 1×10⁶/мл, включая любое целое число между ними.

В других аспектах клетки можно инкубировать на ротаторе в течение различных периодов времени при различных скоростях при 2-10°C или при комнатной температуре.

T-клетки для стимуляции также можно замораживать после этапа промывки. Не желая быть связанными какой-либо теорией, полагают, что с помощью этапа замораживания и последующего размораживания получают более однородный продукт, удаляя гранулоциты и, до некоторой степени, моноциты в популяции клеток. После этапа промывки, на котором удаляют плазму и тромбоциты, клетки можно суспендировать в растворе для замораживания. Хотя многие растворы для замораживания и параметры известны в этой области и будут применимы в этом контексте, один из способов включает использование PBS, содержащего 20% DMSO и 8% сывороточного альбумина человека, или сред для культивирования, содержащих 10% декстрана 40 и 5% декстрозы, 20% сывороточного альбумина человека и 7,5% DMSO, или 31,25% плазмалита A, 31,25% декстрозы 5%, 0,45% NaCl, 10% декстрана 40 и 5% декстрозы, 20% сывороточного альбумина человека и 7,5% DMSO, или других подходящих сред для замораживания клеток, содержащих, например, Hespan и плазмалит A, затем клетки замораживают до -80°C при скорости 1° в минуту и хранят в газовой фазе в резервуаре с жидким азотом. Можно использовать другие способы контролируемого замораживания, а также неконтролируемого замораживания непосредственно при -20°C или в жидком азоте.

В определенных аспектах криосохраненные клетки размораживают и промывают, как представлено в настоящем описании, и им позволяют отстаиваться в течение одного часа при комнатной температуре перед активацией способами по настоящему изобретению.

В контексте изобретения также предусмотрен сбор образцов крови или аферезного продукта от индивидуума в период времени перед тем, как выросшие клетки, представленные в настоящем описании, могут понадобиться. В связи с этим, источник клеток для экспансии можно собирать в любой необходимый момент времени, и желаемые клетки, такие как иммунные эффекторные клетки, например, T-клетки или NK-клетки, можно выделять и замораживать для последующего использования в клеточной терапии, например, T-клеточной терапии, для любого количества заболеваний или состояний, при которых может быть полезна клеточная терапия, например, T-клеточная терапия, такая как представленная в настоящем описании. В одном из аспектов образец крови или аферезный образец получают из, как правило, здорового индивидуума. В определенных аспектах образец крови или аферезный образец получают из, как правило, здорового индивидуума, имеющего риск развития заболевания, но у которого заболевание еще не развилось, и интересующие клетки выделяют и замораживают для последующего использования. В определенных аспектах иммунные эффекторные клетки (например, T-клетки или NK-клетки) можно выращивать, замораживать и использовать впоследствии. В определенных аспектах образцы собирают из пациентов вскоре после диагностирования конкретного заболевания, как представлено в настоящем описании, но до какого-либо лечения. В дополнительном аспекте клетки выделяют из образца крови или аферезного образца от индивидуума перед любым количеством соответствующих способов лечения, включая, в качестве неограничивающих примеров, лечение такими средствами, как натализумаб, эфализумаб, противовирусные средства, химиотерапия, лучевая терапия, иммуносупрессирующие средства, такие как циклоспорин, азатиоприн, метотрексат, микофенолат, FK506, антитела или другие иммуноабляционные средства, такие как CAMPATH, антитела против CD3, цитоксан, флударабин, циклоспорин, FK506, рапамицин, микофеноловая кислота, стероиды, FR901228 и лучевая терапия.

В дополнительном аспекте настоящего изобретения T-клетки получают из пациента непосредственно после лечения, оставляющего индивидуума с функциональными T-клетками. В связи с этим, наблюдали, что после конкретного лечения злокачественных опухолей, в частности, лечения лекарственными средствами, повреждающими иммунную систему, вскоре после лечения в течение периода, когда пациенты, как правило, будут восстанавливаться после лечения, качество получаемых T-клеток может являться оптимальным или улучшенным по их способности к экспансии ex vivo. Аналогично, после манипуляции ex vivo способами, представленными в настоящем описании, эти клетки могут находиться в предпочтительном состоянии для повышенной приживления и экспансии in vivo. Таким образом, в контексте настоящего описания предусмотрен сбор клеток крови, включая T-клетки, дендритные клетки или другие клетки гематопоэтического ростка, в течение этой фазы восстановления. Кроме того, в определенных аспектах можно использовать схемы мобилизации (например, мобилизации с помощью ГМ-КСФ) и кондиционирующего лечения для достижения состояния индивидуума, где предпочтительной является репопуляция, рециркуляция, регенерация и/или экспансия конкретных типов клеток, особенно, в течение определенного временного окна после терапии. Иллюстративные типы клеток включают T-клетки, B-клетки, дендритные клетки и другие клетки иммунной системы.

В одном из вариантов осуществления иммунные эффекторные клетки, экспрессирующие молекулу CAR, например, молекулу CAR, представленную в настоящем описании, получают из индивидуума, которому вводят низкую, усиливающую иммунитет дозу ингибитора mTOR. В варианте осуществления популяцию иммунных эффекторных клеток, например, T-клеток, для конструирования для экспрессии CAR, собирают после достаточного периода времени, или после достаточного введения низкой, усиливающей иммунитет дозы ингибитора mTOR, таким образом, что уровень PD1-отрицательных иммунных эффекторных клеток, например, T-клеток, или соотношение PD1-отрицательных иммунных эффекторных клеток, например, T-клеток/PD1-положительных иммунных эффекторных клеток, например, T-клеток, находящихся в индивидууме или собранных из индивидуума, по меньшей мере, транзиторно, повышают.

В других вариантах осуществления популяцию иммунных эффекторных клеток, например, T-клеток, имеющих экспрессию CAR или подлежащих конструированию для экспрессии CAR, можно обрабатывать ex vivo, приводя их в контакт с количеством ингибитора mTOR, повышающим количество PD1-отрицательных иммунных эффекторных клеток, например, T-клеток, или повышающим соотношение PD1-отрицательных иммунных эффекторных клеток, например, T-клеток/PD1-положительных иммунных эффекторных клеток, например, T-клеток.

В одном из вариантов осуществления популяция T-клеток является дефектной по диаглицеролкиназе (DGK). DGK-дефектные клетки включают клетки, не экспрессирующие РНК или белок DGK или имеющие сниженную или ингибированную активность DGK. DGK-дефектные клетки можно получать с помощью генетических подходов, например, вводя средства для РНК-интерференции, например, миРНК, shRNA, мкРНК, для снижения или предотвращения экспрессии DGK. Альтернативно, DGK-дефектные клетки можно получать посредством обработки ингибиторами DGK, представленными в настоящем описании.

В одном из вариантов осуществления популяция T-клеток является Ikaros-дефектной. Ikaros-дефектные клетки включают клетки, не экспрессирующие РНК или белок Ikaros или имеющие сниженную или ингибированную активность Ikaros, Ikaros-дефектные клетки можно получать с помощью генетических подходов, например, вводя средства для РНК-интерференции, например, миРНК, shRNA, мкРНК, для снижения или предотвращения экспрессии Ikaros. Альтернативно, Ikaros-дефектные клетки можно получать посредством обработки ингибиторами Ikaros, например, леналидомидом.

В вариантах осуществления популяция T-клеток является DGK-дефектной и Ikaros-дефектной, например, не экспрессирует DGK и Ikaros или имеет сниженную или ингибированную активность DGK и Ikaros. Такие DGK- и Ikaros-дефектные клетки можно получать любым из способов, представленных в настоящем описании.

В варианте осуществления NK-клетки получают из индивидуума. В другом варианте осуществления NK-клетки являются линией NK-клеток, например, линией клеток NK-92 (Conkwest).

Аллогенный CAR

В вариантах осуществления, представленных в настоящем описании, иммунная эффекторная клетка может являться аллогенной иммунной эффекторной клеткой, например, T-клеткой или NK-клеткой. Например, клетка может являться аллогенной T-клеткой, например, аллогенной T-клеткой без экспрессии функционального T-клеточного рецептора (TCR) и/или лейкоцитарного антигена человека (HLA), например, HLA класса I и/или HLA класса II.

T-клетку без функционального TCR, например, можно конструировать таким образом, что она не экспрессирует какой-либо функциональный TCR на своей поверхности, сконструированный таким образом, что она не экспрессирует одну или более субъединиц, содержащих функциональный TCR (например, сконструированная таким образом, что она не экспрессирует (или проявляет сниженную экспрессию) TCR альфа, TCR бета, TCR гамма, TCR дельта, TCR эпсилон и/или TCR дзета) или сконструированная таким образом, что она продуцирует очень мало функционального TCR на своей поверхности. Альтернативно, T-клетка может экспрессировать, по существу, поврежденный TCR, например, посредством экспрессии мутантных или укороченных форм одной или более субъединиц TCR. Термин "по существу, поврежденный TCR" означает, что этот TCR не будет вызывать побочную иммунную реакцию у хозяина.

T-клетку, представленную в настоящем описании, например, можно конструировать таким образом, что она не экспрессирует функциональный HLA на своей поверхности. Например, T-клетку, представленную в настоящем описании, можно конструировать таким образом, что поверхностная экспрессия клеткой HLA, например, HLA класса 1 и/или HLA класса II, подвержена отрицательной регуляции. В некоторых аспектах отрицательную регуляцию HLA можно осуществлять, снижая или устраняя экспрессию микроглобулина бета-2 (B2M). В некоторых вариантах осуществления в T-клетке может отсутствовать функциональный TCR и функциональный HLA, например, HLA класса I и/или HLA класса II.

Модифицированные T-клетки, у которых отсутствует экспрессия функционального TCR и/или HLA, можно получать любыми подходящими свойствами, включая нокаут или нокдаун одной или более субъединиц TCR или HLA. Например, T-клетка может включать нокдаун TCR и/или HLA с использованием миРНК, shRNA, коротких палиндромных повторов, регулярно расположенных группами (CRISPR), подобной активатору транскрипции эффекторной нуклеазы (TALEN) или эндонуклеазы с цинковыми пальцами (ZFN).

В некоторых вариантах осуществления аллогенная клетка может являться клеткой, не экспрессирующей ингибиторную молекулу или экспрессирующей ее на низких уровнях, например, клеткой, сконструированной любым способом, представленным в настоящем описании. Например, клетка может являться клеткой, не экспрессирующей ингибиторную молекулу или экспрессирующей ее на низких уровнях, например, которая может снижать способность CAR-экспрессирующей клетки вызывать иммунный эффекторный ответ. Примеры ингибиторных молекул включают PD1, PD-L1, PD-L2, CTLA4, TIM3, CEACAM (например, CEACAM-1, CEACAM-3 и/или CEACAM-5), LAG3, VISTA, BTLA, TIGIT, LAIR1, CD160, 2B4, CD80, CD86, B7-H3 (CD276), B7-H4 (VTCN1), HVEM (TNFRSF14 или CD270), KIR, A2aR, MHC класса I, MHC класса II, GAL9, аденозин и TGFR бета. Ингибирование ингибиторной молекулы, например, посредством ингибирования на уровне ДНК, РНК или белка, может оптимизировать свойства CAR-экспрессирующей клетки. В вариантах осуществления можно использовать ингибиторную нуклеиновую кислоту, например, ингибиторную нуклеиновую кислоту, например, дцРНК, например, миРНК или shRNA, короткие палиндромные повторы, регулярно расположенные группами (CRISPR), подобную активатору транскрипции эффекторную нуклеазу (TALEN) или эндонуклеазу с цинковыми пальцами (ZFN), например, как представлено в настоящем описании.

МиРНК и shRNA для ингибирования TCR или HLA

В некоторых вариантах осуществления экспрессию TCR и/или экспрессию HLA можно ингибировать с использованием миРНК или shRNA против нуклеиновой кислоты, кодирующей TCR, и/или HLA, и/или ингибиторную молекулу, представленную в настоящем описании (например, PD1, PD-L1, PD-L2, CTLA4, TIM3, CEACAM (например, CEACAM-1, CEACAM-3 и/или CEACAM-5), LAG3, VISTA, BTLA, TIGIT, LAIR1, CD160, 2B4, CD80, CD86, B7-H3 (CD276), B7-H4 (VTCN1), HVEM (TNFRSF14 или CD270), KIR, A2aR, MHC класса I, MHC класса II, GAL9, аденозин и TGFR бета), в клетке, например, T-клетке.

Экспрессии миРНК и shRNA в T-клетках можно достигать с использованием любой общепринятой системы экспрессии, например, такой как лентивирусная система экспрессии.

Примеры shRNA, отрицательно регулирующих экспрессию компонентов TCR, описывают, например, в публикации США № 2012/0321667. Примеры миРНК и shRNA, отрицательно регулирующих экспрессию генов HLA класса I и/или HLA класса II, описывают, например, в патентной публикации США № US2007/0036773.

CRISPR для ингибирования TCR или HLA

Как применяют в настоящем описании, термины "CRISPR", или "CRISPR к TCR и/или HLA", или "CRISPR для ингибирования TCR и/или HLA" относятся к набору коротких палиндромных повторов, регулярно расположенных группами, или системе, содержащей такой набор повторов. Как применяют в настоящем описании, термин "Cas", относится к CRISPR-ассоциированному белку. Система "CRISPR/Cas" относится к системе, полученной из CRISPR и Cas, которую можно использовать для сайленсинга или мутагенеза гена TCR и/или HLA и/или ингибиторной молекулы, представленной в настоящем описании (например, PD1, PD-L1, PD-L2, CTLA4, TIM3, CEACAM (например, CEACAM-1, CEACAM-3 и/или CEACAM-5), LAG3, VISTA, BTLA, TIGIT, LAIR1, CD160, 2B4, CD80, CD86, B7-H3 (CD276), B7-H4 (VTCN1), HVEM (TNFRSF14 или CD270), KIR, A2aR, MHC класса I, MHC класса II, GAL9, аденозина и TGFR бета).

Природные системы CRISPR/Cas обнаруживают приблизительно в 40% секвенированных геномов эубактерий и 90% секвенированных геномов архей. Grissa et al. (2007) BMC Bioinformatics 8: 172. Эта система является типом прокариотической иммунной системы, придающим устойчивость к чужеродным генетическим элементам, таким как плазмиды и фаги, и представляющим форму приобретенного иммунитета. Barrangou et al. (2007) Science 315: 1709-1712; Marragini et al. ( 2008) Science 322: 1843-1845.

Систему CRISPR/Cas модифицировали для использования в редактировании генов (сайленсинге, усилении или изменении конкретных генов) у эукариот, таких как мыши или приматы. Wiedenheft et al. (2012) Nature 482: 331-8. Это осуществляют посредством встраивания в эукариотическую клетку плазмиды, содержащей специально сконструированный CRISPR и один или более соответствующих Cas.

Последовательность CRISPR, иногда обозначаемая как локус CRISPR, содержит чередующиеся повторы и спейсеры. В природном CRISPR спейсеры, как правило, содержат последовательности, чужеродные для бактерии, такие как последовательность плазмиды или фага, в системе CRISPR/Cas к TCR и/или HLA спейсеры получают из последовательности гена TCR или HLA.

РНК из локуса CRISPR конститутивно экспрессируется и процессируется белками Cas в небольшие РНК. Они содержат спейсер, фланкированный последовательностью повтора. РНК направляет другие белки Cas для сайленсинга экзогенных генетических элементов на уровне РНК или ДНК. Horvath et al. (2010) Science 327: 167-170; Makarova et al. (2006) Biology Direct 1: 7. Таким образом, спейсеры служат в качестве матриц для молекул РНК, аналогично миРНК. Pennisi (2013) Science 341: 833-836.

Т.к. они в природе встречаются во многих разных типах бактерий, точное расположение CRISPR и структура, функция и количество генов Cas и их продукт, до некоторой степени, отличаются от вида к виду. Haft et al. (2005) PLoS Comput. Biol. 1: e60; Kunin et al. (2007) Genome Biol. 8: R61; Mojica et al. (2005) J. Mol. Evol. 60: 174-182; Bolotin et al. (2005) Microbiol. 151: 2551-2561; Pourcel et al. (2005) Microbiol. 151: 653-663 и Stern et al. (2010) Trends. Genet. 28: 335-340. Например, белки Cse (подтип Cas, E. coli) (например, CasA) образуют функциональный комплекс Cascade, процессирующий РНК-транскрипты CRISPR в единицах спейсер-повтор, которые удерживает Cascade. Brouns et al. (2008) Science 321: 960-964. У других прокариот Cas6 процессирует транскрипт CRISPR. Для инактивации фага на основе CRISPR в E. coli необходимы Cascade и Cas3, но не Cas1 или Cas2. Белки Cmr (модуль Cas RAMP) в Pyrococcus furiosus и других прокариотах образуют функциональный комплекс с небольшой РНК CRISPR, распознающей и расщепляющей комплементарную РНК-мишень. Более простая система CRISPR основана на белке Cas9, являющемся нуклеазой с двумя активными участками расщепления, по одному для каждой цепи двойной спирали. Комбинирование Cas9 и модифицированной РНК локуса CRISPR можно использовать в системе для редактирования генов. Pennisi (2013) Science 341: 833-836.

Таким образом, систему CRISPR/Cas можно использовать для редактирования гена TCR и/или HLA (добавления или делеции пары оснований) или встраивания преждевременного стоп-кодона, что, таким образом, снижает экспрессию TCR и/или HLA. Альтернативно, систему CRISPR/Cas можно использовать подобно РНК-интерференции, выключая ген TCR и/или HLA обратимым образом. В клетке млекопитающего, например, РНК может направлять белок Cas к промотору TCR и/или HLA, стерически блокируя РНК-полимеразы.

Можно получать искусственные системы CRISPR/Cas, ингибирующие TCR и/или HLA, с использованием технологии, известной в этой области, например, описываемой в патентной публикации США № 20140068797 и Cong (2013) Science 339: 819-823. Также можно получать другие искусственные системы CRISPR/Cas, известные в этой области, ингибирующие TCR и/или HLA, например, описываемые в Tsai (2014) Nature Biotechnol., 32:6 569-576, патентах США №№ 8871445, 8865406, 8795965, 8771945 и 8697359.

TALEN для ингибирования TCR и/или HLA

Термины "TALEN", или "TALEN к HLA и/или TCR", или "TALEN для ингибирования HLA и/или TCR" относятся к подобной активатору транскрипции эффекторной нуклеазе, искусственной нуклеазе, которую можно использовать для редактирования HLA, и/или гена TCR, и/или ингибиторной молекулы, представленной в настоящем описании (например, PD1, PD-L1, PD-L2, CTLA4, TIM3, CEACAM (например, CEACAM-1, CEACAM-3 и/или CEACAM-5), LAG3, VISTA, BTLA, TIGIT, LAIR1, CD160, 2B4, CD80, CD86, B7-H3 (CD276), B7-H4 (VTCN1), HVEM (TNFRSF14 или CD270), KIR, A2aR, MHC класса I, MHC класса II, GAL9, аденозина и TGFR бета).

TALEN получают искусственно посредством слияния TAL-эффекторного ДНК-связывающего домена с ДНК-расщепляющим доменом. Можно конструировать подобные активатору транскрипции эффекторы (TALE) так, чтобы они связывали любую желаемую последовательность ДНК, включая часть гена HLA или TCR. Комбинируя сконструированный TALE с ДНК-расщепляющим доменом, можно получать фермент рестрикции, специфичный для любой желаемой последовательности ДНК, включая последовательность HLA или TCR. Затем их можно встраивать в клетку, где их можно использовать для редактирования генома. Boch (2011) Nature Biotech. 29: 135-6 и Boch et al. (2009) Science 326: 1509-12; Moscou et al. (2009) Science 326: 3501.

TALE являются белками, секретируемыми бактериями Xanthomonas. ДНК-связывающий домен содержит повторяющуюся, высококонсервативную последовательность из 33-34 аминокислот, за исключением 12-ой и 13-ой аминокислот. Эти два положения являются высоковариабельными, демонстрируя сильную корреляцию со специфическим распознаванием нуклеотида. Таким образом, их можно конструировать так, чтобы они связывали желаемую последовательность ДНК.

Для получения TALEN белок TALE подвергают слиянию с нуклеазой (N), являющейся эндонуклеазой дикого типа или мутантной эндонуклеазой FokI. Получено несколько мутаций в FokI для ее использования в TALEN, они, например, улучшают специфичность расщепления или активность. Cermak et al. (2011) Nucl. Acids Res. 39: e82; Miller et al. (2011) Nature Biotech. 29: 143-8; Hockemeyer et al. (2011) Nature Biotech. 29: 731-734; Wood et al. (2011) Science 333: 307; Doyon et al. (2010) Nature Methods 8: 74-79; Szczepek et al. (2007) Nature Biotech. 25: 786-793 и Guo et al. (2010) J. Mol. Biol. 200: 96.

Домен FokI функционирует как димер, для него необходимы две конструкции с уникальными ДНК-связывающими доменами для участков в целевом геноме с правильной ориентацией и расстоянием. По-видимому, и количество аминокислотных остатков между ДНК связывающим доменом TALE и расщепляющим доменом FokI, и количество оснований между двумя отдельными участками связывания TALEN являются важными параметрами для достижения высоких уровней активности. Miller et al. (2011) Nature Biotech. 29: 143-8.

TALEN к HLA или TCR можно использовать внутри клетки для получения двухцепочечного разрыва (DSB). В участок разрыва может встраиваться мутация, если механизмы репарации неправильно репарируют разрыв посредством негомологичного соединения концов. Например, при неправильной репарации может встраиваться мутация со сдвигом рамки считывания. Альтернативно, в клетку можно встраивать чужеродную ДНК вместе с TALEN, в зависимости от последовательностей чужеродной ДНК и хромосомной последовательности этот способ можно использовать для коррекции дефекта в гене HLA или TCR или встраивать такой дефект в ген HLA или TCR дикого типа, таким образом, снижая экспрессию HLA или TCR.

TALEN, специфичные для последовательностей в HLA или TCR, можно конструировать любым известным в этой области способом, включая различные схемы с использованием модульных компонентов. Zhang et al. (2011) Nature Biotech. 29: 149-53; Geibler et al. (2011) PLoS ONE 6: e19509.

Нуклеаза с цинковыми пальцами для ингибирования HLA и/или TCR

Термины "ZFN", или "нуклеаза с цинковыми пальцами", или "ZFN к HLA и/или TCR", или "ZFN для ингибирования HLA и/или TCR" относится к нуклеазе с цинковыми пальцами, искусственной нуклеазе, которую можно использовать для редактирования HLA, и/или гена TCR, и/или ингибиторной молекулы, представленной в настоящем описании (например, PD1, PD-L1, PD-L2, CTLA4, TIM3, CEACAM (например, CEACAM-1, CEACAM-3 и/или CEACAM-5), LAG3, VISTA, BTLA, TIGIT, LAIR1, CD160, 2B4, CD80, CD86, B7-H3 (CD276), B7-H4 (VTCN1), HVEM (TNFRSF14 или CD270), KIR, A2aR, MHC класса I, MHC класса II, GAL9, аденозина и TGFR бета).

Подобно TALEN, ZFN содержит домен нуклеазы FokI (или его производное), слитый с ДНК-связывающим доменом. В случае ZFN ДНК-связывающий домен содержит один или более цинковых пальцев. Carroll et al. (2011) Genetics Society of America 188: 773-782 и Kim et al. (1996) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93: 1156-1160.

Цинковый палец является небольшим структурным мотивом белка, стабилизированным одним или более ионами цинка. Цинковый палец может содержать, например, Cys2His2, и может распознавать последовательность размером приблизительно 3 п.н. Различные цинковые пальцы известной специфичности можно комбинировать для получения полипептидов со множеством пальцев, распознающих последовательности размером приблизительно 6, 9, 12, 15 или 18 п.н. Доступны различные способы селекции и модульной сборки для получения цинковых пальцев (и их комбинаций), распознающих конкретные последовательности, включая фаговый дисплей, дрожжевые одногибридные системы, бактериальные одногибридные и двугибридные системы и клетки млекопитающих.

Подобно TALEN, ZFN должен димеризоваться для расщепления ДНК. Таким образом, пара ZFN необходима для воздействия на непалиндромные участки ДНК. Два отдельных ZFN должны связывать противоположные цепи ДНК так, чтобы их нуклеазы имели правильно расстояние между собой. Bitinaite et al. (1998) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95: 10570-5.

Также подобно TALEN, ZFN может создавать двухцепочечный разрыв в ДНК, который может приводить к мутации со сдвигом рамки считывания при неправильной репарации, приводя к снижению экспрессии и количества HLA и/или TCR в клетке. ZFN также можно использовать с гомологичной рекомбинации для мутагенеза в гене HLA или TCR.

ZFN, специфичные для последовательностей в гене HLA и/или TCR, можно конструировать любым известным в этой области способом. См., например, Provasi (2011) Nature Med. 18: 807-815; Torikai (2013) Blood 122: 1341-1349; Cathomen et al. (2008) Mol. Ther. 16: 1200-7; Guo et al. (2010) J. Mol. Biol. 400: 96; патентную публикацию США № 2011/0158957 и патентную публикацию США № 2012/0060230.

Экспрессия теломеразы

Не желая быть связанными какой-либо конкретной теорией, полагают, что в некоторых вариантах осуществления терапевтическая T-клетка обладает кратковременной выживаемостью у пациента по причине укорачивающихся теломер в T-клетке, таким образом, посредством трансфекции с использованием гена теломеразы можно удлинять теломеры T-клеток и улучшать выживаемость T-клеток у пациента. См. Carl June, "Adoptive T cell therapy for cancer in the clinic", Journal of Clinical Investigation, 117:1466-1476 (2007). Таким образом, в варианте осуществления иммунная эффекторная клетка, например, T-клетка, эктопически экспрессирует субъединицу теломеразы, например, каталитическую субъединицу теломеразы, например, TERT, например, hTERT. В некоторых аспектах настоящее изобретение относится к способу получения CAR-экспрессирующей клетки, включающему приведение клетки в контакт с нуклеиновой кислотой, кодирующей субъединицу теломеразы, например, каталитическую субъединицу теломеразы, например, TERT, например, hTERT. Клетку можно приводить в контакт с нуклеиновой кислотой до, одновременно или после приведения в контакт с конструкцией, кодирующей CAR.

В одном из аспектов настоящее изобретение относится к способу получения популяции иммунных эффекторных клеток (например, T-клеток, NK-клеток). В варианте осуществления способ включает: получение популяции иммунных эффекторных клеток (например, T-клеток или NK-клеток), приведение популяции иммунных эффекторных клеток в контакт с нуклеиновой кислотой, кодирующей CAR и приведение популяции иммунных эффекторных клеток в контакт с нуклеиновой кислотой, кодирующей субъединицу теломеразы, например, hTERT, в условиях, делающих возможной экспрессию CAR и теломеразы.

В варианте осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая субъединицу теломеразы, является ДНК. В варианте осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая субъединицу теломеразы, содержит промотор, способный регулировать экспрессию субъединицы теломеразы.

В варианте осуществления hTERT имеет следующую аминокислотную последовательность белка GenBank ID AAC51724.1 (Meyerson et al., ʺhEST2, the Putative Human Telomerase Catalytic Subunit Gene, Is Up-Regulated in Tumor Cells and during Immortalizationʺ Cell Volume 90, Issue 4, 22 August 1997, Pages 785-795):

MPRAPRCRAVRSLLRSHYREVLPLATFVRRLGPQGWRLVQRGDPAAFRALVAQCLVCVPWDARPPPAAPSFRQVSCLKELVARVLQRLCERGAKNVLAFGFALLDGARGGPPEAFTTSVRSYLPNTVTDALRGSGAWGLLLRRVGDDVLVHLLARCALFVLVAPSCAYQVCGPPLYQLGAATQARPPPHASGPRRRLGCERAWNHSVREAGVPLGLPAPGARRRGGSASRSLPLPKRPRRGAAPEPERTPVGQGSWAHPGRTRGPSDRGFCVVSPARPAEEATSLEGALSGTRHSHPSVGRQHHAGPPSTSRPPRPWDTPCPPVYAETKHFLYSSGDKEQLRPSFLLSSLRPSLTGARRLVETIFLGSRPWMPGTPRRLPRLPQRYWQMRPLFLELLGNHAQCPYGVLLKTHCPLRAAVTPAAGVCAREKPQGSVAAPEEEDTDPRRLVQLLRQHSSPWQVYGFVRACLRRLVPPGLWGSRHNERRFLRNTKKFISLGKHAKLSLQELTWKMSVRGCAWLRRSPGVGCVPAAEHRLREEILAKFLHWLMSVYVVELLRSFFYVTETTFQKNRLFFYRKSVWSKLQSIGIRQHLKRVQLRELSEAEVRQHREARPALLTSRLRFIPKPDGLRPIVNMDYVVGARTFRREKRAERLTSRVKALFSVLNYERARRPGLLGASVLGLDDIHRAWRTFVLRVRAQDPPPELYFVKVDVTGAYDTIPQDRLTEVIASIIKPQNTYCVRRYAVVQKAAHGHVRKAFKSHVSTLTDLQPYMRQFVAHLQETSPLRDAVVIEQSSSLNEASSGLFDVFLRFMCHHAVRIRGKSYVQCQGIPQGSILSTLLCSLCYGDMENKLFAGIRRDGLLLRLVDDFLLVTPHLTHAKTFLRTLVRGVPEYGCVVNLRKTVVNFPVEDEALGGTAFVQMPAHGLFPWCGLLLDTRTLEVQSDYSSYARTSIRASLTFNRGFKAGRNMRRKLFGVLRLKCHSLFLDLQVNSLQTVCTNIYKILLLQAYRFHACVLQLPFHQQVWKNPTFFLRVISDTASLCYSILKAKNAGMSLGAKGAAGPLPSEAVQWLCHQAFLLKLTRHRVTYVPLLGSLRTAQTQLSRKLPGTTLTALEAAANPALPSDFKTILD (SEQ ID NO: 284)

В варианте осуществления hTERT имеет последовательность, по меньшей мере на 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичную последовательности SEQ ID NO: 284. В варианте осуществления hTERT имеет последовательность SEQ ID NO: 284. В варианте осуществления hTERT содержит делецию (например, не более 5, 10, 15, 20 или 30 аминокислот) на N-конце, C-конце, или и том, и другом. В варианте осуществления hTERT содержит трансгенную аминокислотную последовательность (например, не более 5, 10, 15, 20 или 30 аминокислот) на N-конце, C-конце, или и том, и другом.

В варианте осуществления hTERT кодируется последовательностью нуклеиновой кислоты под инвентарным номером GenBank AF018167 (Meyerson et al., "hEST2, the Putative Human Telomerase Catalytic Subunit Gene, Is Up-Regulated in Tumor Cells and during Immortalization" Cell Volume 90, Issue 4, 22 August 1997, Pages 785-795):

1 caggcagcgt ggtcctgctg cgcacgtggg aagccctggc cccggccacc cccgcgatgc

61 cgcgcgctcc ccgctgccga gccgtgcgct ccctgctgcg cagccactac cgcgaggtgc

121 tgccgctggc cacgttcgtg cggcgcctgg ggccccaggg ctggcggctg gtgcagcgcg

181 gggacccggc ggctttccgc gcgctggtgg cccagtgcct ggtgtgcgtg ccctgggacg

241 cacggccgcc ccccgccgcc ccctccttcc gccaggtgtc ctgcctgaag gagctggtgg

301 cccgagtgct gcagaggctg tgcgagcgcg gcgcgaagaa cgtgctggcc ttcggcttcg

361 cgctgctgga cggggcccgc gggggccccc ccgaggcctt caccaccagc gtgcgcagct

421 acctgcccaa cacggtgacc gacgcactgc gggggagcgg ggcgtggggg ctgctgttgc

481 gccgcgtggg cgacgacgtg ctggttcacc tgctggcacg ctgcgcgctc tttgtgctgg

541 tggctcccag ctgcgcctac caggtgtgcg ggccgccgct gtaccagctc ggcgctgcca

601 ctcaggcccg gcccccgcca cacgctagtg gaccccgaag gcgtctggga tgcgaacggg

661 cctggaacca tagcgtcagg gaggccgggg tccccctggg cctgccagcc ccgggtgcga

721 ggaggcgcgg gggcagtgcc agccgaagtc tgccgttgcc caagaggccc aggcgtggcg

781 ctgcccctga gccggagcgg acgcccgttg ggcaggggtc ctgggcccac ccgggcagga

841 cgcgtggacc gagtgaccgt ggtttctgtg tggtgtcacc tgccagaccc gccgaagaag

901 ccacctcttt ggagggtgcg ctctctggca cgcgccactc ccacccatcc gtgggccgcc

961 agcaccacgc gggcccccca tccacatcgc ggccaccacg tccctgggac acgccttgtc

1021 ccccggtgta cgccgagacc aagcacttcc tctactcctc aggcgacaag gagcagctgc

1081 ggccctcctt cctactcagc tctctgaggc ccagcctgac tggcgctcgg aggctcgtgg

1141 agaccatctt tctgggttcc aggccctgga tgccagggac tccccgcagg ttgccccgcc

1201 tgccccagcg ctactggcaa atgcggcccc tgtttctgga gctgcttggg aaccacgcgc

1261 agtgccccta cggggtgctc ctcaagacgc actgcccgct gcgagctgcg gtcaccccag

1321 cagccggtgt ctgtgcccgg gagaagcccc agggctctgt ggcggccccc gaggaggagg

1381 acacagaccc ccgtcgcctg gtgcagctgc tccgccagca cagcagcccc tggcaggtgt

1441 acggcttcgt gcgggcctgc ctgcgccggc tggtgccccc aggcctctgg ggctccaggc

1501 acaacgaacg ccgcttcctc aggaacacca agaagttcat ctccctgggg aagcatgcca

1561 agctctcgct gcaggagctg acgtggaaga tgagcgtgcg gggctgcgct tggctgcgca

1621 ggagcccagg ggttggctgt gttccggccg cagagcaccg tctgcgtgag gagatcctgg

1681 ccaagttcct gcactggctg atgagtgtgt acgtcgtcga gctgctcagg tctttctttt

1741 atgtcacgga gaccacgttt caaaagaaca ggctcttttt ctaccggaag agtgtctgga

1801 gcaagttgca aagcattgga atcagacagc acttgaagag ggtgcagctg cgggagctgt

1861 cggaagcaga ggtcaggcag catcgggaag ccaggcccgc cctgctgacg tccagactcc

1921 gcttcatccc caagcctgac gggctgcggc cgattgtgaa catggactac gtcgtgggag

1981 ccagaacgtt ccgcagagaa aagagggccg agcgtctcac ctcgagggtg aaggcactgt

2041 tcagcgtgct caactacgag cgggcgcggc gccccggcct cctgggcgcc tctgtgctgg

2101 gcctggacga tatccacagg gcctggcgca ccttcgtgct gcgtgtgcgg gcccaggacc

2161 cgccgcctga gctgtacttt gtcaaggtgg atgtgacggg cgcgtacgac accatccccc

2221 aggacaggct cacggaggtc atcgccagca tcatcaaacc ccagaacacg tactgcgtgc

2281 gtcggtatgc cgtggtccag aaggccgccc atgggcacgt ccgcaaggcc ttcaagagcc

2341 acgtctctac cttgacagac ctccagccgt acatgcgaca gttcgtggct cacctgcagg

2401 agaccagccc gctgagggat gccgtcgtca tcgagcagag ctcctccctg aatgaggcca

2461 gcagtggcct cttcgacgtc ttcctacgct tcatgtgcca ccacgccgtg cgcatcaggg

2521 gcaagtccta cgtccagtgc caggggatcc cgcagggctc catcctctcc acgctgctct

2581 gcagcctgtg ctacggcgac atggagaaca agctgtttgc ggggattcgg cgggacgggc

2641 tgctcctgcg tttggtggat gatttcttgt tggtgacacc tcacctcacc cacgcgaaaa

2701 ccttcctcag gaccctggtc cgaggtgtcc ctgagtatgg ctgcgtggtg aacttgcgga

2761 agacagtggt gaacttccct gtagaagacg aggccctggg tggcacggct tttgttcaga

2821 tgccggccca cggcctattc ccctggtgcg gcctgctgct ggatacccgg accctggagg

2881 tgcagagcga ctactccagc tatgcccgga cctccatcag agccagtctc accttcaacc

2941 gcggcttcaa ggctgggagg aacatgcgtc gcaaactctt tggggtcttg cggctgaagt

3001 gtcacagcct gtttctggat ttgcaggtga acagcctcca gacggtgtgc accaacatct

3061 acaagatcct cctgctgcag gcgtacaggt ttcacgcatg tgtgctgcag ctcccatttc

3121 atcagcaagt ttggaagaac cccacatttt tcctgcgcgt catctctgac acggcctccc

3181 tctgctactc catcctgaaa gccaagaacg cagggatgtc gctgggggcc aagggcgccg

3241 ccggccctct gccctccgag gccgtgcagt ggctgtgcca ccaagcattc ctgctcaagc

3301 tgactcgaca ccgtgtcacc tacgtgccac tcctggggtc actcaggaca gcccagacgc

3361 agctgagtcg gaagctcccg gggacgacgc tgactgccct ggaggccgca gccaacccgg

3421 cactgccctc agacttcaag accatcctgg actgatggcc acccgcccac agccaggccg

3481 agagcagaca ccagcagccc tgtcacgccg ggctctacgt cccagggagg gaggggcggc

3541 ccacacccag gcccgcaccg ctgggagtct gaggcctgag tgagtgtttg gccgaggcct

3601 gcatgtccgg ctgaaggctg agtgtccggc tgaggcctga gcgagtgtcc agccaagggc

3661 tgagtgtcca gcacacctgc cgtcttcact tccccacagg ctggcgctcg gctccacccc

3721 agggccagct tttcctcacc aggagcccgg cttccactcc ccacatagga atagtccatc

3781 cccagattcg ccattgttca cccctcgccc tgccctcctt tgccttccac ccccaccatc

3841 caggtggaga ccctgagaag gaccctggga gctctgggaa tttggagtga ccaaaggtgt

3901 gccctgtaca caggcgagga ccctgcacct ggatgggggt ccctgtgggt caaattgggg

3961 ggaggtgctg tgggagtaaa atactgaata tatgagtttt tcagttttga aaaaaaaaaa

4021 aaaaaaa (SEQ ID NO: 285)

В варианте осуществления hTERT кодируется нуклеиновой кислотой, имеющей последовательность, по меньшей мере на 80%, 85%, 90%, 95%, 96, 97%, 98%, или 99% идентичной последовательности SEQ ID NO: 285. В варианте осуществления hTERT кодируется нуклеиновой кислотой SEQ ID NO: 285.

Активация и экспансия T-клеток

T-клетки можно активировать и выращивать, как правило, способами, описываемыми, например, в патентах США №№ 6352694, 6534055, 6905680, 6692964, 5858358, 6887466, 6905681, 7144575, 7067318, 7172869, 7232566, 7175843, 5883223, 6905874, 6797514, 6867041 и публикации патентной заявки США № 20060121005.

Как правило, T-клетки по изобретению можно выращивать посредством приведения в контакт с поверхностью с прикрепленным к ней средством, стимулирующим ассоциированный с комплексом CD3/TCR сигнал, и лигандом, стимулирующим костимуляторную молекулу на поверхности T-клеток. В частности, популяции T-клеток можно стимулировать, как представлено в настоящем описании, например, посредством приведения в контакт с антителом против CD3, или его антигенсвязывающим фрагментом, или антителом против CD2, иммобилизованном на поверхности, или посредством приведения в контакт с активатором протеинкиназы C (например, бриостатином) в комбинации с ионофором кальция. Для костимуляции вспомогательной молекулы на поверхности T-клеток используют лиганд, связывающийся со вспомогательной молекулой. Например, популяцию T-клеток можно приводить в контакт с антителом против CD3 и антителом против CD28 в условиях, подходящих для стимуляции пролиферации T-клеток. Для стимуляции пролиферации CD4+ T-клеток или CD8+ T-клеток можно использовать антитело против CD3 и антитело против CD28. Примеры антитела против CD28 включают 9.3, B-T3, XR-CD28 (Diaclone, Besançon, France), которые можно использовать, как и другие способы, общеизвестные в этой области (Berg et al., Transplant Proc. 30(8):3975-3977, 1998; Haanen et al., J. Exp. Med. 190(9):13191328, 1999; Garland et al., J. Immunol Meth. 227(1-2):53-63, 1999).

В определенных аспектах первичный стимуляторный сигнал и костимуляторный сигнал для T-клеток можно обеспечивать разными способами. Например, средства, обеспечивающие каждый сигнал, могут находиться в растворе или их можно соединять с поверхностью. При соединении с поверхностью средства можно соединять с одной поверхностью (т.е. в "цис"-положении) или с отдельными поверхностями (т.е. в "транс"-положении). Альтернативно, одно средство можно соединять с поверхностью и другим средством в растворе. В одном из аспектов средство, обеспечивающее костимуляторный сигнал, связывают с поверхностью клетки, и средство, обеспечивающее первичный сигнал активации, находится в растворе или соединено с поверхностью. В определенных аспектах оба средства могут находиться в растворе. В одном из аспектов средства могут находиться в растворимой форме, а затем перекрестно сшиваться с поверхностью, такой как клетка, экспрессирующая Fc-рецепторы, или антитело, или другое связывающее средство, которое будет связываться со средствами. В связи с этим, см. например, публикации патентных заявок США №№ 20040101519 и 20060034810 в случае искусственных антигенпредставляющих клеток (aAPC), предусмотренных для использования в активации и экспансии T-клеток в настоящем изобретении.

В одном из аспектов два средства иммобилизуют на бусах, как на одной бусине, т.е. "цис", или на отдельных бусах, т.е. "транс". В качестве примера, средство, обеспечивающее первичный сигнал активации, является антителом против CD3 или его антигенсвязывающим фрагментом, и средство, обеспечивающее костимуляторный сигнал, является антителом против CD28 или его антигенсвязывающим фрагментом и оба средства совместно иммобилизуют на одной бусине в эквивалентных молекулярных количествах. В одном из аспектов для экспансии CD4+ T-клеток и выращивания T-клеток используют соотношение 1:1 каждого антитела, связанного с бусами. В определенных аспектах по настоящему изобретению соотношение антител против CD3:CD28, связанных с бусами, используют таким образом, что наблюдают повышение экспансии T-клеток по сравнению с экспансией, наблюдаемой при использовании соотношения 1:1. В одном из конкретных аспектов наблюдают повышение в от приблизительно 1 до приблизительно 3 раз по сравнению с экспансией, наблюдаемой при использовании соотношения 1:1. В одном из аспектов соотношение антител против CD3:CD28, связанных с бусами, находится в диапазоне от 100:1 до 1:100, включая все целые значения между ними. В одном из аспектов настоящего изобретения с частицами связывается больше антитела против CD28, чем антитела против CD3, т.е. соотношение антител против CD3:CD28 составляет менее единицы. В определенных аспектах изобретения соотношение антитела против CD28 и антитела против CD3, связанного с бусами, составляет более 2:1. В одном из конкретных аспектов используют соотношение 1:100 антител против CD3:CD28, связанных с бусами. В одном из аспектов используют соотношение 1:75 антител против CD3:CD28, связанных с бусами. В дополнительном аспекте используют соотношение 1:50 антител против CD3:CD28, связанных с бусами. В одном из аспектов используют соотношение 1:30 антител против CD3:CD28, связанных с бусами. В одном из предпочтительных аспектов используют соотношение 1:10 антител против CD3:CD28, связанных с бусами. В одном из аспектов используют соотношение 1:3 антител против CD3:CD28, связанных с бусами. В еще одном аспекте используют соотношение 3:1 антител против CD3:CD28, связанных с бусами.

Можно использовать соотношения частиц и клеток от 1:500 до 500:1, включая любые целые значения между ними, для стимуляции T-клеток или других клеток-мишеней. Как будет легко понятно специалистам в этой области, соотношение частиц и клеток может зависеть от размера частиц относительно клетки-мишени. Например, бусы небольшого размера могут связываться лишь с несколькими клетками, в то время как более крупные бусы могут связывать множество клеток. В определенных аспектах соотношение клеток и частиц находится в диапазоне от 1:100 до 100:1, включая любые целые значения между ними, и в дополнительных аспектах соотношение включает от 1:9 до 9:1, включая любые целые значения между ними, которые также можно использовать для стимуляции T-клеток. Соотношение частиц, соединенных с антителами против CD3 и против CD28, и T-клеток, приводящее к стимуляции T-клеток, может варьироваться, как указано выше, однако конкретные предпочтительные значения включают 1:100, 1:50, 1:40, 1:30, 1:20, 1:10, 1:9, 1:8, 1:7, 1:6, 1:5, 1:4, 1:3, 1:2, 1:1, 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1, 10:1 и 15:1, при этом одно предпочтительное соотношение составляет по меньшей мере 1:1 частиц на T-клетку. В одном из аспектов используют соотношение частиц и клеток 1:1 или менее. В одном из конкретных аспектов предпочтительное соотношение частица:клетка составляет 1:5. В дополнительных аспектах соотношение частиц и клеток может варьироваться в зависимости от дня стимуляции. Например, в одном из аспектов соотношение частиц и клеток составляет от 1:1 до 10:1 в первый день, и дополнительные частицы добавляют к клеткам каждый день или через день впоследствии в течение до 10 дней с конечными соотношениями от 1:1 до 1:10 (с учетом количеств клеток в день добавления). В одном из конкретных аспектов соотношение частиц и клеток составляет 1:1 в первый день стимуляции, и его доводят до 1:5 на третий и пятый день стимуляции. В одном из аспектов частицы добавляют ежедневно или через день с учетом конечного соотношения 1:1 в первый день и 1:5 на третий и пятый день стимуляции. В одном из аспектов соотношение частиц и клеток составляет 2:1 в первый день стимуляции, и его доводят до 1:10 на третий и пятый день стимуляции. В одном из аспектов частицы добавляют ежедневно или через день с учетом конечного соотношения 1:1 в первый день и 1:10 на третий и пятый день стимуляции. Специалисту в этой области будет понятно, что множество других соотношений может являться пригодным для использования в настоящем изобретении. В частности, соотношения будут варьироваться в зависимости от размера частиц и размера и типа клеток. В одном из аспектов наиболее типичные соотношения для использования составляют приблизительно 1:1, 2:1 и 3:1 в первый день.

В дополнительных аспектах по настоящему изобретению клетки, такие как T-клетки, комбинируют с бусами, покрытыми средством, затем бусы и клетки разделяют, а затем клетки культивируют. В альтернативном аспекте перед культивированием покрытые средством бусы и клетки не разделяют, а культивируют совместно. В дополнительном аспекте бусы и клетки сначала концентрируют, прилагая силу, такую как сила магнитного поля, что приводит к повышенному лигированию поверхностных клеточных маркеров, таким образом, вызывая стимуляцию клеток.

В качестве примера, белки поверхности клетки можно лигировать, позволяя парамагнитным бусам, к которым присоединяют антитело против CD3 и против CD28 (бусы 3×28), контактировать с T-клетками. В одном из аспектов клетки (например, от 10⁴ до 10⁹ T-клеток) и бусы (например, парамагнитные бусы DYNABEADS® M-450 CD3/CD28 T в соотношении 1:1) комбинируют в буфере, например, PBS (без бивалентных катионов, таких как кальций и магний). И снова, специалистам в этой области будет понятно, что можно использовать любую концентрацию клеток. Например, клетка-мишень может являться очень редкой в образце и составляет лишь 0,01% образца, или целый образец (т.е. 100%) может содержать интересующую клетку-мишень. Таким образом, любое количество клеток находится в контексте настоящего описания. В определенных аспектах желательным может являться значительное снижение объема, в котором смешивают частицы и клетки (т.е. повышение концентрации клеток), для обеспечения максимального контакта клеток и частиц. Например, в одном из аспектов используют концентрацию приблизительно 10 миллиардов клеток/мл, 9 миллионов/мл, 8 миллионов/мл, 7 миллионов/мл, 6 миллионов/мл, 5 миллионов/мл или 2 миллиарда клеток/мл. В одном из аспектов используют более 100 миллионов клеток/мл. В дополнительном аспекте используют концентрацию клеток 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45 или 50 миллионов клеток/мл. В еще одном аспекте используют концентрацию клеток от 75, 80, 85, 90, 95 или 100 миллионов клеток/мл. В дополнительных аспектах можно использовать концентрации 125 или 150 миллионов клеток/мл. Использование высоких концентраций может приводить к повышенному выходу клеток, активации клеток и размножению клеток. Кроме того, использование высоких концентраций клеток делает возможным более эффективный захват клеток, которые могут слабо экспрессировать интересующие антигены-мишени, таких как CD28-отрицательных T-клеток. Такие популяции клеток могут иметь терапевтическое значение, и их получение в определенных аспектах будет желательным. Например, использование высокой концентрации клеток делает возможной более эффективную селекцию CD8+ T-клеток, в норме имеющих более слабую экспрессию CD28.

В одном из вариантов осуществления клетки, трансдуцированные с использованием нуклеиновой кислоты, кодирующей CAR, например, CAR, представленной в настоящем описании, выращивают, например, способом, представленным в настоящем описании. В одном из вариантов осуществления клетки выращивают в культуре в течение периода от нескольких часов (например, приблизительно 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 18, 21 часов) до приблизительно 14 дней (например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 или 14 дней). В одном из вариантов осуществления клетки выращивают в течение периода от 4 до 9 дней. В одном из вариантов осуществления клетки выращивают в течение периода 8 дней или менее, например, 7, 6 или 5 дней. В одном из вариантов осуществления клетки, например, клетку CAR BCMA, представленную в настоящем описании, выращивают в культуре в течение 5 дней, и полученные клетки являются более активными, чем те же клетки, выращиваемые в культуре в течение 9 дней в тех же условиях культивирования. Активность можно определять, например, по различным функциям T-клеток, например, пролиферации, уничтожению клеток-мишеней, продукции цитокинов, активации, миграции или их комбинациям. В одном из вариантов осуществления клетки, например, клетка CAR BCMA, представленная в настоящем описании, выращиваемые в течение 5 дней, демонстрируют по меньшей мере одно-, дву-, трех- или четырехкратное повышение делений клеток после стимуляции антигеном по сравнению с теми же клетками, выращиваемыми в культуре в течение 9 дней в тех же условиях культивирования. В одном из вариантов осуществления клетки, например, клетки, экспрессирующие CAR BCMA, представленные в настоящем описании, выращивают в культуре в течение 5 дней, и полученные клетки демонстрируют более высокую продукцию провоспалительных цитокинов, например, уровни ИФНγ и/или ГМ-КСФ, по сравнению с теми же клетками, выращиваемыми в культуре в течение 9 дней в тех же условиях культивирования. В одном из вариантов осуществления клетки, например, клетка CAR BCMA, представленная в настоящем описании, выращиваемые в течение 5 дней, демонстрируют по меньшей мере одно-, дву-, трех-, четырех-, пяти-, десятикратное или большее повышение продукции провоспалительных цитокинов, например, уровней ИФНγ и/или ГМ-КСФ, в пг/мл по сравнению с теми же клетками, выращиваемыми в культуре в течение 9 дней в тех же условиях культивирования.

В одном из аспектов настоящего изобретения смесь можно культивировать в течение периода от нескольких часов (приблизительно 3 часов) до приблизительно 14 дней, включая любое почасовое целое значение между ними. В одном из аспектов смесь можно культивировать в течение 21 дня. В одном аспектов изобретения бусы и T-клетки культивируют совместно в течение приблизительно восьми дней. В одном из аспектов бусы и T-клетки культивируют совместно в течение 2-3 дней. Также желательными могут являться несколько циклов стимуляции таким образом, что время культивирования T-клеток может составлять 60 дней или более. Условия, подходящие для культивирования T-клеток, включают соответствующие среды (например, минимальные питательные среды или среды RPMI 1640 или X-vivo 15 (Lonza)), которые могут содержать факторы, необходимые для пролиферации и жизнеспособности, включая сыворотку (например, эмбриональную бычью или человеческую сыворотку), интерлейкин-2 (ИЛ-2), инсулин, ИФНγ, ИЛ-4, ИЛ-7, ГМ-КСФ, ИЛ-10, ИЛ-12, ИЛ-15, TGFβ и ФНО или любые другие добавки для роста клеток, известные специалистам в этой области. Другие добавки для роста клеток включают, в качестве неограничивающих примеров, поверхностно-активное вещество, плазманат и восстановители, такие как N-ацетил-цистеин и 2-меркаптоэтанол. Среды могут включать RPMI 1640, AIM-V, DMEM, MEM, α-MEM, F-12, X-Vivo 15 и X-Vivo 20, Optimizer, с дополнительными аминокислотами, пируватом натрия и витаминами, без сыворотки или дополненные соответствующим количеством сыворотки (или плазмы), или определенным набором гормонов, и/или количеством цитокинов, достаточным для роста и экспансии T-клеток. Антибиотики, например, пенициллин и стрептомицин, включают только в экспериментальные культуры, но не в культуры клеток, подлежащие инфузии индивидууму. Клетки-мишени поддерживают в условиях, необходимых для поддержания роста, например, соответствующей температуры (например, 37°C) и атмосферы (например, воздух с 5% CO₂).

В одном из вариантов осуществления клетки выращивают в соответствующих средах (например, средах, представленных в настоящем описании), включающих один или более интерлейкинов, приводящих по меньшей мере к 200-кратному (например, 200-кратному, 250-кратному, 300-кратному, 350-кратному) повышению клеток в течение 14-дневного периода экспансии, например, как измеряют способом, представленным в настоящем описании, таким как проточная цитометрия. В одном из вариантов осуществления клетки выращивают в присутствие ИЛ-15 и/или ИЛ-7 (например, ИЛ-15 и ИЛ-7).

В вариантах осуществления способы, представленные в настоящем описании, например, способы производства CAR-экспрессирующих клеток, включают удаление T-регуляторных клеток, например, CD25+ T-клеток, из популяции клеток, например, с использованием антитела против CD25, или его фрагмента, или CD25-связывающего лиганда, ИЛ-2. Способы удаления T-регуляторных клеток, например, CD25+ T-клеток, из популяции клеток представлены в настоящем описании. В вариантах осуществления способы, например, способы производства, дополнительно включают приведение популяции клеток (например, популяции клеток, в которой T-регуляторные клетки, такие как CD25+ T-клетки, подвергнуты истощению, или популяции клеток, ранее подвергнутых контакту с антителом против CD25, его фрагментом, или CD25-связывающим лигандом) в контакт с ИЛ-15 и/или ИЛ-7. Например, популяцию клеток (например, которую ранее приводили в контакт с антителом против CD25, его фрагментом, или CD25-связывающим лигандом) выращивают в присутствие ИЛ-15 и/или ИЛ-7.

В некоторых вариантах осуществления CAR-экспрессирующую клетку, представленную в настоящем описании, приводят в контакт с композицией, содержащей полипептид интерлейкина-15 (ИЛ-15), полипептид рецептора интерлейкина-15 альфа (ИЛ-15Ra) или комбинацию полипептида ИЛ-15 и полипептида ИЛ-15Ra, например, hetIL-15, при производстве CAR-экспрессирующих клеток, например, ex vivo. В вариантах осуществления CAR-экспрессирующую клетку, представленную в настоящем описании, приводят в контакт с композицией, содержащей полипептид ИЛ-15, при производстве CAR-экспрессирующих клеток, например, ex vivo. В вариантах осуществления CAR-экспрессирующие клетки, представленные в настоящем описании, приводят в контакт с композицией, содержащей комбинацию полипептида ИЛ-15 и полипептида ИЛ-15Ra при производстве CAR-экспрессирующих клеток, например, ex vivo. В вариантах осуществления CAR-экспрессирующую клетку, представленную в настоящем описании, приводят в контакт с композицией, содержащей hetIL-15, при производстве CAR-экспрессирующих клеток, например, ex vivo.

В одном из вариантов осуществления CAR-экспрессирующую клетку, представленную в настоящем описании, приводят в контакт с композицией, содержащей hetIL-15, при экспансии ex vivo. В варианте осуществления CAR-экспрессирующую клетку, представленную в настоящем описании, приводят в контакт с композицией, содержащей полипептид ИЛ-15, при экспансии ex vivo. В варианте осуществления CAR-экспрессирующую клетку, представленную в настоящем описании, приводят в контакт с композицией, содержащей полипептид ИЛ-15 и полипептид ИЛ-15Ra, при экспансии ex vivo. В одном из вариантов осуществления приведение в контакт приводит к выживанию и пролиферации субпопуляции лимфоцитов, например, CD8+ T-клеток.

T-клетки, подвергнутые стимуляции в течение различных периодов времени, могут проявлять различные характеристики. Например, типичные продукты мононуклеарных клеток крови или аферезной периферической крови содержат популяцию T-хелперов (TH, CD4+), являющуюся большей, чем популяция цитотоксических или супрессорных T-клеток (TC, CD8+). При экспансии T-клеток ex vivo посредством стимуляции рецепторов CD3 и CD28 получают популяцию T-клеток, которая до приблизительно дней 8-9 состоит, главным образом, из T_H-клеток, в то время как через приблизительно дней 8-9 популяция T-клеток содержит все большую популяцию T_C-клеток. Таким образом, в зависимости от цели лечения предпочтительной может являться инфузия индивидууму популяции T-клеток, содержащих, главным образом, T_H-клетки. Аналогично, если выделяют антиген-специфическую субпопуляцию T_C-клеток, может быть полезным выращивание этой субпопуляции до большего объема.

Кроме того, в дополнение к маркерам CD4 и CD8, другие фенотипические маркеры значительно варьируются, но, в значительной степени, воспроизводимо в течение экспансии клеток. Таким образом, такая воспроизводимость делает возможной способность адаптировать активированный T-клеточный продукт для конкретных целей.

После конструирования CAR BCMA можно использовать различные анализы для оценки активности молекулы, такие как, в качестве неограничивающих примеров, способность к экспансии T-клеток после стимуляции антигеном, поддержание экспансии T-клеток в отсутствие повторной стимуляции и противораковые активности в соответствующих моделях in vitro и моделях на животных. Анализы для оценки эффектов CAR BCMA подробнее описывают ниже.

Для детекции наличия мономеров и димеров можно использовать анализ вестерн-блоттинга экспрессии CAR в первичных T-клетках. См., например, Milone et al., Molecular Therapy 17(8): 1453-1464 (2009). В кратком изложении, T-клетки (смесь 1:1 CD4⁺ и CD8⁺ T-клеток), экспрессирующие CAR, выращивают in vitro в течение более чем 10 дней с последующим лизисом и электрофорезом в ПААГ в присутствие SDS в восстановительных условиях. CAR, содержащие полноразмерный цитоплазматический домен TCR-ζ и эндогенную цепь TCR-ζ, определяют посредством вестерн-блоттинга с использованием антитела против цепи TCR-ζ. Те же субпопуляции T-клеток используют для электрофореза в ПААГ в присутствие SDS в невосстановительных условиях, чтобы сделать возможной оценку ковалентного образования димера.

Экспансию in vitro CAR⁺ T-клеток после стимуляции антигеном можно измерять посредством проточной цитометрии. Например, смесь CD4⁺ и CD8⁺ T-клеток стимулируют aAPC αCD3/αCD28 с последующей трансдукцией с использованием лентивирусных векторов, экспрессирующих GFP под контролем промоторов, подлежащих анализу. Примеры промоторов включают промоторы гена CMV IE, EF-1α, убиквитина C или фосфоглицерокиназы (PGK). Флуоресценцию GFP оценивают в день 6 культивирования в субпопуляциях CD4⁺ и/или CD8⁺ T-клеток посредством проточной цитометрии. См., например, Milone et al., Molecular Therapy 17(8): 1453-1464 (2009). Альтернативно, смесь CD4⁺ и CD8⁺ T-клеток стимулируют магнитными бусами, покрытыми αCD3/αCD28, в день 0 и трансдуцируют с использованием CAR в день 1 с использованием бицистронного лентивирусного вектора, экспрессирующего CAR вместе с eGFP с использованием рибосомальной перепрыгивающей последовательности 2A. Культуры повторно стимулируют BCMA-экспрессирующими клетками, такими как линии клеток множественной миеломы или K562-BCMA, после промывки. Раз в два дня в культуры добавляют экзогенный ИЛ-2 в дозе 100 МЕ/мл. GFP⁺ T-клетки подсчитывают посредством проточной цитометрии с использованием подсчета с учетом бус. См., например, Milone et al., Molecular Therapy 17(8): 1453-1464 (2009).

Также можно измерять поддерживаемую экспансию CAR⁺ T-клеток в отсутствие повторной стимуляции. См., например, Milone et al., Molecular Therapy 17(8): 1453-1464 (2009). В кратком изложении, средний объем T-клеток (фл) измеряют в день 8 культивирования с использованием счетчика частиц Coulter Multisizer III, Nexcelom Cellometer Vision или Millipore Scepter после стимуляции магнитными бусами, покрытыми αCD3/αCD28 в день 0 и трансдукции с использованием указанного CAR в день 1.

Для измерения активности CART также можно использовать модели на животных. Например, можно использовать модель ксенотрансплантата с использованием специфичных к BCMA человека CAR⁺ T-клеток для лечения первичной множественной миеломы человека у мышей с иммунодефицитом. См., например, Milone et al., Molecular Therapy 17(8): 1453-1464 (2009). В кратком изложении, после развития MM мышей случайным образом распределяют по исследуемым группам. Можно инъецировать различные количества BCMA CART-клеток мышам с иммунодефицитом, несущим MM. Животных оценивают на прогрессирование заболевания и опухолевую массу с недельными интервалами. Кривые выживаемости для групп сравнивают с использованием логарифмического рангового критерия. Кроме того, также можно анализировать абсолютные количества CD4⁺ и CD8⁺ T-клеток в периферической крови через 4 недели после инъекции T-клеток мышам с иммунодефицитом. Мышам инъецируют клетки множественной миеломы и через 3 недели им инъецируют T-клетки, сконструированные для экспрессии CAR BCMA, например, с помощью бицистронного лентивирусного вектора, кодирующего CAR, связанный с eGFP. T-клетки нормируют по 45-50% исходных GFP⁺ T-клеток посредством смешивания с ложнотрансдуцированными клетками перед инъекцией и подтверждают посредством проточной цитометрии. Животных оценивают на лейкоз с 1-недельными интервалами. Кривые выживаемости для групп с CAR⁺ T-клетками сравнивают с использованием логарифмического рангового критерия.

Оценка пролиферации клеток и продукции цитокинов описана ранее, например, в Milone et al., Molecular Therapy 17(8): 1453-1464 (2009). В кратком изложении, оценку CAR-опосредованной пролиферации осуществляют на планшетах для микротитрования посредством смешивания промытых T-клеток с клетками K562, экспрессирующими BCMA, или другими BCMA-экспрессирующими миеломными клетками, облученными гамма-радиацией перед использованием. Моноклональные антитела против CD3 (клон OKT3) и против CD28 (клон 9.3) добавляют в культуры с клетками KT32-BBL, чтобы они служили в качестве положительного контроля для стимуляции пролиферации T-клеток, т.к. эти сигналы поддерживают длительную экспансию CD8⁺ T-клеток ex vivo. T-клетки подсчитывают в культурах с использованием флуоресцентных бус CountBright™ (Invitrogen, Carlsbad, CA) и проточной цитометрии по инструкциям производителя. CAR⁺ T-клетки идентифицируют по экспрессии GFP с использованием T-клеток, сконструированных с использованием CAR-экспрессирующих лентивирусных векторов, связанных с eGFP-2A. В случае CAR+ T-клеток, не экспрессирующих GFP, CAR+ T-клетки определяют с помощью биотинилированного рекомбинантного белка BCMA и вторичного конъюгата авидин-PE. Также одновременно определяют экспрессию CD4+ и CD8⁺ на T-клетках с помощью специфических моноклональных антител (BD Biosciences). Измерения цитокинов осуществляют в супернатантах, собранных через 24 часа после повторной стимуляции с использованием цитометрического набора с бусами для анализа цитокинов TH1/TH2 человека (BD Biosciences, San Diego, CA) по инструкциям производителя. Флуоресценцию оценивают с использованием проточного цитометра FACScalibur и анализируют данные по инструкциям производителя.

Цитотоксичность можно оценивать с помощью стандартного анализа высвобождения ⁵¹Cr. См., например, Milone et al., Molecular Therapy 17(8): 1453-1464 (2009). В кратком изложении, клетки-мишени (например, линии K562, экспрессирующие BCMA, и первичные клетки множественной миеломы) нагружают ⁵¹Cr (в виде NaCrO₄, New England Nuclear, Boston, MA) при 37°C в течение 2 часов с частым перемешиванием, дважды промывают в полной RPMI и высевают на планшеты для микротитрования. Эффекторные T-клетки смешивают с клетками-мишенями в лунках в полной RPMI при различных соотношениях эффекторная клетка:клетка-мишень (E:T). Также подготавливают дополнительные лунки, содержащие только среды (спонтанное высвобождение, SR) или 1% раствор детергента Triton-X 100 (общее высвобождение, TR). Через 4 часа инкубации при 37°C из каждой лунки собирают супернатант. Затем измеряют высвобожденный ⁵¹Cr с использованием счетчика гамма-частиц (Packard Instrument Co., Waltham, MA). Каждое условие воспроизводят по меньшей мере в трех параллелях и вычисляют процентную долю лизиса с использованием формулы: % лизиса=(ER-SR)/(TR-SR), где ER представляет собой среднее высвобождение ⁵¹Cr для каждого экспериментального условия.

Можно использовать технологии визуализации для оценки специфической миграции и пролиферации CAR в моделях на животных, несущих опухоли. Такие анализы описывают, например, в Barrett et al., Human Gene Therapy 22:1575-1586 (2011). В кратком изложении, мышам NOD/SCID/γc^-/- (NSG) или с другим иммунодефицитом инъецируют IV клетки множественной миеломы, а через 7 дней BCMA CART-клетки через 4 часа после электропорации с использованием конструкций CAR. T-клетки стабильно трансфицируют с использованием лентивирусной конструкции для экспрессии люциферазы светлячка и мышей визуализируют на предмет биолюминесценции. Альтернативно, терапевтическую эффективность и специфичность одной инъекции CAR⁺ T-клеток в модели ксенотрансплантата множественной миеломы можно измерять следующим образом: мышам NSG инъецируют клетки множественной миеломы, трансдуцированные для стабильной экспрессии люциферазы светлячка, с последующей инъекцией в хвостовую вену T-клеток, электропорированных с использованием конструкции CAR BCMA днями позже. Животных визуализируют в различные моменты времени после инъекции. Например, можно получать тепловые карты плотности фотонов положительных на люциферазу светлячка опухолей у типичных мышей в день 5 (за 2 дня до обработки) и день 8 (через 24 часа после CAR⁺ PBL).

Альтернативно или в комбинации со способами, представленными в настоящем описании, описывают способы и композиции для одного или более из: детекции и/или количественного анализа CAR-экспрессирующих клеток (например, in vitro или in vivo (например, клинического мониторинга)), экспансии и/или активации иммунных клеток и/или CAR-специфической селекции, включающих использование лиганда CAR. В одном примере варианта осуществления лиганд CAR является антителом, связывающимся с молекулой CAR, например, связывающимся с внеклеточным антигенсвязывающим доменом CAR (например, антителом, связывающимся с антигенсвязывающим доменом, например, антиидиотипическим антителом, или антителом, связывающимся с константной областью внеклеточного связывающего домена). В других вариантах осуществления лиганд CAR является молекулой антигена CAR (например, молекулой антигена CAR, как представлено в настоящем описании).

В одном из аспектов описывают способ детекции и/или количественного анализа CAR-экспрессирующих клеток. Например, лиганд CAR можно использовать для детекции и/или количественного анализа CAR-экспрессирующих клеток in vitro или in vivo (например, клинического мониторинга CAR-экспрессирующих клеток у пациента или введения дозы пациенту). Способ включает:

получение лиганда CAR (необязательно, меченого лиганда CAR, например, лиганда CAR, включающего метку, бусину, радиоактивную или флуоресцентную метку);

получение CAR-экспрессирующей клетки (например, получение образца, содержащего CAR-экспрессирующие клетки, такое как производство образца или клинического образца);

приведение CAR-экспрессирующей клетки в контакт с лигандом CAR в условиях, в которых происходит связывание, таким образом, детекция уровня (например, количества) присутствующих CAR-экспрессирующих клеток. Связывание CAR-экспрессирующей клетки с лигандом CAR можно определять стандартными способами, такими как FACS, ELISA и т.п.

В другом аспекте описывают способ экспансии и/или активации клеток (например, иммунных эффекторных клеток). Способ включает:

получение CAR-экспрессирующей клетки (например, первой CAR-экспрессирующей клетки или транзиторно экспрессирующей CAR клетки);

приведение указанной CAR-экспрессирующей клетки в контакт с лигандом CAR, например, лигандом CAR, представленным в настоящем описании), в условиях, в которых происходит экспансия и/или пролиферация иммунных клеток, таким образом, получение популяции активированных и/или подвергнутых экспансии клеток.

В определенных вариантах осуществления лиганд CAR присутствует на (например, иммобилизован или прикреплен) субстрате, например, неприродном субстрате. В некоторых вариантах осуществления субстрат является неклеточным субстратом. Неклеточный субстрат может являться твердой подложкой, выбранной, например, из планшета (например, планшета для микротитрования), мембраны (например, нитроцеллюлозной мембраны), матрицы, чипа или бусины. В вариантах осуществления лиганд CAR присутствует в субстрате (например, на поверхности субстрата). Лиганд CAR можно иммобилизовать, прикреплять или связывать ковалентно или нековалентно (например, перекрестно сшивать) с субстратом. В одном из вариантов осуществления лиганд CAR присоединяют (например, ковалентно присоединяют) к бусине. В указанных выше вариантах осуществления популяцию иммунных клеток можно выращивать in vitro или ex vivo. Способ может дополнительно включать культивирование популяции иммунных клеток в присутствие лиганда молекулы CAR, например, с использованием любых способов, представленных в настоящем описании.

В других вариантах осуществления способ экспансии и/или активации клеток дополнительно включает добавление второй стимуляторной молекулы, например, CD28. Например, лиганд CAR и вторую стимуляторную молекулу можно иммобилизовать на субстрате, например, одной или более бусинах, таким образом, достигая повышенной экспансии и/или активации клеток.

Еще один аспект относится к способу селекции или обогащения CAR-экспрессирующих клеток. Способ включает приведение CAR-экспрессирующей клетки в контакт с лигандом CAR, как представлено в настоящем описании и выбор клеток с учетом связывания с лигандом CAR.

Другие варианты осуществления относятся к способу истощения, снижения и/или цитолиза CAR-экспрессирующих клеток. Способ включает приведение CAR-экспрессирующей клетки в контакт с лигандом CAR, как представлено в настоящем описании и направленное воздействие на клетку с учетом связывания лиганда CAR, таким образом, снижение количества и/или цитолиз CAR-экспрессирующих клеток. В одном из вариантов осуществления лиганд CAR соединяют с токсическим средством (например, токсином или лекарственным средством для абляции клеток). В другом варианте осуществления антиидиотипическое антитело может вызывать активность эффекторных клеток, например, активности ADCC или ADC.

Примеры антител против CAR, которые можно использовать в способах, к которым относится настоящее изобретение, описывают, например, в WO2014/190273 и Jena et al., "Chimeric Antigen Receptor (CAR)-Specific Monoclonal Antibody to Detect CD19-Specific T cells in Clinical Trials", PLOS March 2013 8:3 e57838, содержание которых включено в настоящее описание в качестве ссылок. В одном из вариантов осуществления молекула антиидиотипического антитела распознает молекулу антитела против CD19, например, scFv против CD19. Например, молекула антиидиотипического антитела может конкурировать за связывание с клоном № 136.20.1 CD19-специфического mAb CAR, описываемого в Jena et al., PLOS March 2013 8:3 e57838, может содержать те же CDR (например, одну или более, например, из всех из CDR1 VH, CDR2 VH, CDR3 CH, CDR1 VL, CDR2 VL и CDR3 VL с использованием определения по Kabat, определения по Chothia или комбинации определений по Kabat и Chothia), что и клон № 136.20.1 CD19-специфического mAb CAR, может содержать те же одну или более (например, 2) вариабельных областей, что и клон № 136.20.1CD19-специфического mAb CAR, или может содержать клон № 136.20.1 CD19-специфического mAb CAR. В некоторых вариантах осуществления антиидиотипическое антитело получали способом, описываемом в Jena et al. В другом варианте осуществления молекула антиидиотипического антитела является молекулой антиидиотипического антитела, описываемой в WO2014/190273. В некоторых вариантах осуществления молекула антиидиотипического антитела содержит те же CDR (например, одну или более из, например, всех из CDR1 VH, CDR2 VH, CDR3 CH, CDR1 VL, CDR2 VL и CDR3 VL), что и молекула антитела из WO2014/190273, такая как 136.20.1, может содержать одну или более (например, 2) вариабельные области молекулы антитела из WO2014/190273 или может содержать молекулу антитела из WO2014/190273, такую как 136.20.1. В других вариантах осуществления антитело против CAR связывается с константной областью внеклеточного связывающего домена молекулы CAR, например, как описано в WO2014/190273. В некоторых вариантах осуществления антитело против CAR связывается с константной областью внеклеточного связывающего домена молекулы CAR, например, константной области тяжелой цепи (например, шарнирной области CH2-CH3) или константной области легкой цепи. Например, в некоторых вариантах осуществления антитело против CAR конкурирует за связывание с моноклональным антителом 2D3, описываемым в WO2014/190273, содержит те же CDR (например, одну или более, например, из всех из, CDR1 VH, CDR2 VH, CDR3 CH, CDR1 VL, CDR2 VL и CDR3 VL), что и 2D3, или содержит одну или более (например, 2) вариабельных областей 2D3, или содержит 2D3, как описано в WO2014/190273.

В некоторых аспектах и варианты осуществления композиции и способы в настоящем описании оптимизируют для конкретной субпопуляции T-клеток, например, как описано в патенте США № 62/031699, зарегистрированном 31 июля 2014 года, содержание которого включено в настоящее описание в качестве ссылки в полном объеме. В некоторых вариантах осуществления оптимизированные субпопуляции T-клеток демонстрируют повышенную выживаемость по сравнению с контрольной T-клеткой, например, T-клеткой другого типа (например, CD8⁺ или CD4⁺), экспрессирующей ту же конструкцию.

В некоторых вариантах осуществления CD4⁺ T-клетка содержит CAR, представленный в настоящем описании, где CAR содержит внутриклеточный сигнальный домен, подходящий (например, оптимизированный, например, приводящий к повышенной выживаемости) для CD4⁺ T-клетки, например, домен ICOS. В некоторых вариантах осуществления CD8⁺ T-клетка содержит CAR, представленный в настоящем описании, где CAR содержит внутриклеточный сигнальный домен, подходящий (например, оптимизированный, например, приводящий к повышенной выживаемости) для CD8⁺ T-клетки, например, домен 4-1BB, домен CD28 или другой костимуляторный домен, иной, чем домен ICOS. В некоторых вариантах осуществления CAR, представленный в настоящем описании, содержит антигенсвязывающий домен, представленный в настоящем описании, например, CAR, содержащий антигенсвязывающий домен против BCMA, например, CAR из таблицы 1 или 16).

В одном из аспектов настоящее изобретение относится к способу лечения индивидуума, например, индивидуума со злокачественным новообразованием. Способ включает введение указанному индивидууму эффективного количества:

1) CD4⁺ T-клеток, содержащих CAR (CAR^CD4+),

содержащих:

антигенсвязывающий домен, например, антигенсвязывающий домен, представленный в настоящем описании, например, антигенсвязывающий домен против BCMA, например, антигенсвязывающий домен из таблицы 1 или 16;

трансмембранный домен; и

внутриклеточный сигнальный домен, например, первый костимуляторный домен, например, домен ICOS; и

2) CD8⁺ T-клеток содержащих CAR (CAR^CD8+), содержащих:

антигенсвязывающий домен, например, антигенсвязывающий домен, представленный в настоящем описании, например, антигенсвязывающий домен против BCMA, например, антигенсвязывающий домен из таблицы 1 или 16;

трансмембранный домен; и

внутриклеточный сигнальный домен, например, второй костимуляторный домен, например, домен 4-1BB, домен CD28 или другой костимуляторный домен, иной, чем домен ICOS;

где CAR^CD4+ и CAR^CD8+ отличаются друг от друга.

Необязательно, способ дополнительно включает введение:

3) второй CD8+ T-клетки, содержащей CAR (второй CAR^CD8+), содержащий:

антигенсвязывающий домен, например, антигенсвязывающий домен, представленный в настоящем описании, например, антигенсвязывающий домен, специфически связывающийся с BCMA, например, антигенсвязывающий домен из таблицы 1 или 16;

трансмембранный домен; и

внутриклеточный сигнальный домен, где второй CAR^CD8+ содержит внутриклеточный сигнальный домен, например, костимуляторный сигнальный домен, не присутствующий в CAR^CD8+, и, необязательно, не содержащий сигнальный домен ICOS.

Для оценки конструкций BCMA CAR по изобретению также можно использовать другие анализы, включая описываемые в разделе "Примеры" в настоящем описании, а также известные в этой области.

Терапевтическое применение

BCMA-ассоциированные заболевания и/или нарушения

В одном из аспектов изобретение относится к способам лечения заболевания, ассоциированного с экспрессией BCMA. В одном из аспектов изобретение относится к способам лечения заболевания, где часть опухоли является отрицательной на BCMA, и часть опухоли является положительной на BCMA. Например, CAR по изобретению применим для лечения индивидуумов, подвергаемых лечению заболевания, ассоциированного с повышенной экспрессией BCMA, где у индивидуума, подвергаемого лечению от повышенных уровней BCMA, наблюдают заболевание, ассоциированное с повышенными уровнями BCMA. В вариантах осуществления CAR по изобретению применим для лечения индивидуумов, подвергаемых лечению от заболевания, ассоциированного с экспрессией BCMA, где у индивидуума, подвергаемого лечению, относящемуся к экспрессии BCMA, наблюдают заболевание, ассоциированное с экспрессией BCMA.

В одном из вариантов осуществления изобретение относится к способам лечения заболевания, где BCMA экспрессируется на нормальных клетках и злокачественных клетках, но экспрессируется на более низких уровнях на нормальных клетках. В одном из вариантов осуществления способ дополнительно включает селекцию CAR по изобретению, связывающегося с аффинностью, позволяющей CAR BCMA связывать и уничтожать злокачественные клетки, экспрессирующие BCMA, но уничтожать менее 30%, 25%, 20%, 15%, 10%, 5% или менее нормальных клеток, экспрессирующих BCMA, например, как определяют посредством анализа, представленного в настоящем описании. Например, можно использовать анализ цитолиза, такой как проточная цитометрия на основе ⁵¹Cr CTL. В одном из вариантов осуществления CAR BCMA содержит антигенсвязывающий домен, имеющий аффинность связывания KD от 10^-4 M до 10^-8 M, например, от 10^-5 M до 10^-7 M, например, 10^-6 M или 10^-7 M, для антигена-мишени. В одном из вариантов осуществления BCMA-антигенсвязывающий домен имеет аффинность связывания, являющуюся по меньшей мере в пять, 10, 20, 30, 50, 100 или 1000 раз меньшей, чем у референсного антитела, например, антитела, представленного в настоящем описании.

В одном из аспектов изобретение относится к вектору, содержащему CAR BCMA, функционально связанный с промотором для экспрессии в иммунных эффекторных клетках млекопитающих, например, T-клетках или NK-клетках. В одном из аспектов изобретение относится к рекомбинантной иммунной эффекторной клетке, например, T-клетке или NK-клетке, экспрессирующей CAR BCMA, для применения в лечении BCMA-экспрессирующих опухолей, где рекомбинантную иммунную эффекторную клетку (например, T-клетку или NK-клетку), экспрессирующую CAR BCMA, обозначают как CAR BCMA-экспрессирующую клетку (например, BCMA CART или CAR BCMA-экспрессирующую NK-клетку). В одном из аспектов CAR BCMA-экспрессирующая клетка (например, BCMA CART или CAR BCMA-экспрессирующая NK-клетка) по изобретению способна приводить опухолевую клетку в контакт по меньшей мере с одним CAR BCMA по изобретению, экспрессирующимся на ее поверхности, таким образом, что CAR BCMA-экспрессирующая клетка (например, BCMA CART или CAR BCMA-экспрессирующая NK-клетка) направленно воздействует на опухолевую клетку, и рост опухоли ингибируется.

В одном из аспектов изобретение относится к способу ингибирования роста BCMA-экспрессирующей опухолевой клетки, включающему приведение опухолевой клетки в контакт с CAR BCMA-экспрессирующей клеткой (например, BCMA CART или CAR BCMA-экспрессирующей NK-клеткой) по настоящему изобретению таким образом, что CAR BCMA-экспрессирующая клетка (например, BCMA CART или CAR BCMA-экспрессирующая NK-клетка) активируется в ответ на антиген и направленно воздействует на злокачественную клетку, где рост опухоли ингибируется.

В одном из аспектов изобретение относится к способу лечения злокачественного новообразования у индивидуума. Способ включает введение индивидууму CAR BCMA-экспрессирующей клетки (например, BCMA CART или CAR BCMA-экспрессирующей NK-клетки) по настоящему изобретению таким образом, что лечат злокачественное новообразование у индивидуума. Примером злокачественного новообразования, которое можно лечить с помощью CAR BCMA-экспрессирующей клетки (например, BCMA CART или CAR BCMA-экспрессирующей NK-клетки) по изобретению, является злокачественное новообразование, ассоциированное с экспрессией BCMA.

Настоящее изобретение включает тип клеточной терапии, где иммунные эффекторные клетки (например, T-клетки или NK-клетки) генетически модифицируют для экспрессии химерного антигенного рецептора (CAR) и CAR BCMA-экспрессирующую клетку (например, BCMA CART или CAR BCMA-экспрессирующую NK-клетку) инфузируют нуждающемуся в этом реципиенту. Инфузируемая клетка способна уничтожать опухолевые клетки реципиента. В отличие от способов терапии антителами, CAR-модифицированные клетки, например, T-клетки или NK-клетки, способны делиться in vivo, что приводит к длительной выживаемости, приводящей к длительному контролю опухоли. В различных аспектах клетки (например, T-клетки или NK-клетки), вводимые пациенту, или их потомство персистируют у пациента в течение по меньшей мере четырех месяцев, пяти месяцев, шести месяцев, семи месяцев, восьми месяцев, девяти месяцев, десяти месяцев, одиннадцати месяцев, двенадцати месяцев, тринадцати месяцев, четырнадцати месяцев, пятнадцати месяцев, шестнадцати месяцев, семнадцати месяцев, восемнадцати месяцев, девятнадцати месяцев, двадцати месяцев, двадцати одного месяцев, двадцати двух месяцев, двадцати трех месяцев, двух лет, трех лет, четырех лет или пяти лет после введения клетки (например, T-клетки или NK-клетки) пациенту.

Изобретение также включает тип клеточной терапии, где иммунные эффекторные клетки (например, T-клетки или NK-клетки) модифицируют, например, посредством транскрибируемой in vitro РНК, для транзиторной экспрессии химерного антигенного рецептора (CAR), и иммунную эффекторную клетку (например, T-клетку или NK-клетку) инфузируют нуждающемуся в этом реципиенту. Инфузируемая клетка способна уничтожать опухолевые клетки реципиента. Таким образом, в различных аспектах иммунные эффекторные клетки (например, T-клетки или NK-клетки), вводимые пациенту, присутствуют в пациенте в течение менее одного месяца, например, трех недель, двух недель, одной недели, после введения иммунной эффекторной клетки (например, T-клетки или NK-клетки).

Без желания быть связанным какой-либо конкретной теорией, полагают, что противоопухолевый иммунный ответ, вызываемый CAR-модифицированными иммунными эффекторными клетками (например, T-клетками или NK-клетками), может являться активным или пассивным иммунным ответом или, альтернативно, может являться результатом прямого или непрямого иммунного ответа. В одном из аспектов трансдуцированные с помощью CAR иммунные эффекторные клетки (например, T-клетки или NK-клетки) демонстрируют специфическую секрецию провоспалительных цитокинов и мощную цитолитическую активность в ответ на злокачественные клетки человека, экспрессирующие BCMA, являются устойчивыми к ингибированию растворимым BCMA, опосредуют неспецифическое цитолиз и опосредуют регрессирование развившейся опухоли человека. Например, опухолевые клетки, лишенные антигена, в гетерогенной области BCMA-экспрессирующей опухоли могут являться восприимчивыми к непрямому разрушению BCMA-перенаправленными иммунными эффекторными клетками (например, T-клетками или NK-клетками), ранее реагировавшими против смежных антиген-положительных злокачественных клеток.

В одном из аспектов полностью человеческие CAR-модифицированные иммунные эффекторные клетки (например, T-клетки или NK-клетки) по изобретению могут являться типом вакцины для иммунизации ex vivo и/или терапии in vivo у млекопитающего. В одном из аспектов млекопитающее является человеком.

Что касается иммунизации ex vivo, по меньшей мере одно из следующего происходит in vitro перед введением клетки млекопитающему: i) экспансия клеток, ii) встраивание нуклеиновой кислоты, кодирующей CAR, в клетки или iii) криоконсервация клеток.

Способы ex vivo хорошо известны в этой области и более подробно описаны ниже. В кратком изложении, клетки выделяют из млекопитающего (например, человек) и генетически модифицируют (т.е. трансдуцируют или трансфицируют in vitro) с использованием вектора, экспрессирующего CAR, представленный в настоящем описании. CAR-модифицированную клетку можно вводить млекопитающему-реципиенту для достижения терапевтического эффекта. Реципиент-млекопитающее может являться человеком, и CAR-модифицированная клетка может являться аутологичной в отношении реципиента. Альтернативно, клетки могут являться аллогенными, сингенными или ксеногенными в отношении реципиента.

Способ экспансии ex vivo гематопоэтических стволовых клеток и клеток-предшественников описывают в патенте США № 5199942, включенном в настоящее описание в качестве ссылки, его можно применять к клеткам по настоящему изобретению. Другие подходящие способы известны в этой области, таким образом, настоящее изобретение не ограничено конкретным способом экспансии клеток ex vivo. В кратком изложении, культивирование ex vivo и экспансия T-клеток включает: (1) сбор CD34+ гематопоэтических стволовых клеток и клеток-предшественников из периферической крови или эксплантатов костного мозга млекопитающего и (2) экспансию таких клеток ex vivo. В дополнение к факторам роста клеток, описываемым в патенте США № 5199942, для культивирования и экспансии клеток можно использовать другие факторы, такие как flt3-L, ИЛ-1, ИЛ-3 и лиганд c-kit.

В дополнение к использованию вакцины на основе клеток в терминах иммунизации ex vivo, настоящее изобретение также относится к композициям и способам иммунизации in vivo для вызывания иммунного ответа, направленного против антигена у пациента.

Как правило, клетки, активированные и выращенные, как представлено в настоящем описании, можно использовать в лечении и профилактике заболеваний, возникающих у индивидуумов, являющихся иммунокомпрометированными. В частности, CAR-модифицированные иммунные эффекторные клетки (например, T-клетки или NK-клетки) по изобретению используют в лечении заболеваний, нарушений и состояний, ассоциированных с экспрессией BCMA. В определенных аспектах клетки по изобретению используют в лечении пациентов с риском развития заболеваний, нарушений и состояний, ассоциированных с экспрессией BCMA. Таким образом, настоящее изобретение относится к способам лечения или профилактики заболеваний, нарушений и состояний, ассоциированных с экспрессией BCMA, включающим введение нуждающемуся в этом индивидууму терапевтически эффективного количества CAR-модифицированных иммунных эффекторных клеток (например, T-клеток или NK-клеток) по изобретению.

В одном из аспектов CAR-экспрессирующие клетки (например, CART клетки или CAR-экспрессирующие NK-клетки) по изобретению можно использовать для лечения пролиферативного заболевания, такого как злокачественное новообразование, или предракового состояния, такого как миелодисплазия, миелодиспластический синдром или предлейкоз. В одном из аспектов злокачественное новообразование является гемобластозом. Гемобластозные состояния являются типами злокачественного новообразования, такими как лейкоз и злокачественные лимфопролиферативные состояния, поражающие кровь, костный мозг и лимфатическую систему. В одном из аспектов гемобластоз является лейкозом или гематологическим нарушением. Примером заболевания или нарушения, ассоциированного с BCMA, является множественная миелома (также известная как MM) (см. Claudio et al., Blood. 2002, 100(6):2175-86 и Novak et al., Blood. 2004, 103(2):689-94). Множественная миелома, также известная как плазмоклеточная миелома или болезнь Калера, является злокачественным новообразованием, отличающимся накоплением аномальных или злокачественных плазматических B-клеток в костном мозге. Зачастую злокачественные клетки инвазируют смежную кость, разрушая скелетные структуры и приводя к боли в костях и переломам. Большинству случаев миеломы также сопутствует продукция парапротеина (также известного как M-протеин или миеломный белок), являющегося аномальным иммуноглобулином, продуцирующимся в избытке при клональной пролиферации злокачественных плазматических клеток. Уровни парапротеина в сыворотке крови более 30 г/л являются диагностическим признаком множественной миеломы согласно диагностическим критериям International Myeloma Working Group (IMWG) (см. Kyle et al. (2009), Leukemia. 23:3-9). Другие симптомы или признаки множественной миеломы включают сниженную функцию почек или почечную недостаточность, повреждения кости, анемию, гиперкальциемию и неврологические симптомы.

Критерии для различения множественной миеломы и других пролиферативных нарушений из плазматических клеток установлены International Myeloma Working Group (см. Kyle et al. (2009), Leukemia. 23:3-9). Должны быть удовлетворены все три следующих критерия:

- Клональные плазматические клетки костного мозга ≥10%

- Наличие моноклонального белка в сыворотке и/или моче (за исключением пациентов с истинной несекретирующей множественной миеломой)

- Доказательство повреждения органа-мишени, обусловленного лежащим в основе пролиферативным нарушением из плазматических клеток, а именно:

○ Гиперкальциемия: кальций в сыворотке ≥11,5 мг/100 мл

○ Почечная недостаточность: креатинин в сыворотке >1,73 ммоль/л

○ Анемия: нормохромная, нормоцитарная со значением гемоглобина >2 г/100 мл ниже нижнего предела нормы или значением гемоглобина <10 г/100 мл

○ Повреждения костей: литические повреждения, тяжелая остеопения или патологические переломы.

Другие пролиферативные нарушения плазматических клеток, которые можно лечить с использованием композиций и способов, представленных в настоящем описании, включают, в качестве неограничивающих примеров, бессимптомную миелому (вялотекущую множественную миелому или индолентную миелому), моноклональную гаммапатию неустановленной этиологии (MGUS), макроглобулинемию Вальденстрема, плазмоцитомы (например, плазмоклеточную дискразию, солитарную миелому, солитарную плазмоцитому, экстрамедуллярную плазмоцитому и множественную плазмоцитому), системный амилоидоз легких цепей и POEMS-синдром (также известный как синдром Кроу-Фуказа, болезнь Такацуки и PEP-синдром).

Для стадирования множественной миеломы используют две системы стадирования: Международную систему стадирования (ISS) (см. Greipp et al. (2005), J. Clin. Oncol. 23 (15):3412-3420) и Систему стадирования Дюри-Сальмон (DSS) (см. Durie et al. (1975), Cancer 36 (3): 842-854). Две системы стадирования обобщены в таблице ниже:

Таблица 18

Стадия	Международная система стадирования	Система стадирования Дюри-Сальмон
Критерии	Медиана выживаемости	Критерии	Медиана выживаемости*
I	β2M<3,5 мг/л и сывороточный альбумин≥3,5 г/дл	62 месяца	Все из следующего: Уровень гемоглобина>10 г/дл Кальций в сыворотке, норма или<12 мг/дл Рентгенография кости, норма или лишь 1 плазмоцитома Низкая продукция моноклонального белка (IgG<5 г/дл, IgA<3 г/дл, белок Бенс-Джонса<4 г/дл за 24 часа	IA: 62 месяца IB: 22 месяца
II	Ни стадия I, ни стадия III	44 месяца	Ни стадия I, ни стадия III	IIA: 58 месяцев IIB: 354 месяца
III	β2M≥5,5 мг/л	29 месяцев	Один или более из следующего: Уровень гемоглобина<8,5 г/дл Кальций в сыворотке, норма или >12 мг/дл Прогрессирующие остеолитические повреждения Высокая продукция моноклонального белка (IgG>7 г/дл, IgA>5 г/дл, белок Бенс-Джонса>12 г/дл за 24 часа	IIIA: 45 месяцев IIIB: 24 месяца

*Система стадирования Дюри-Сальмон также включает подклассификацию, обозначающую состояние функции почек. Обозначение "A" или "B" добавляют после номера стадии, где "A" означает относительно нормальную функцию почек (значение креатинина в сыворотке <2,0 мг/дл), и B означает аномальную функцию почек (значение креатинина в сыворотке >2,0 мг/дл).

Стандартное лечение множественной миеломы и ассоциированных заболеваний включает химиотерапию, трансплантацию стволовых клеток (аутологичную или аллогенную), лучевую терапию и другие медикаментозные способы терапии. Часто используемые лекарственные средства против миеломы включают алкилирующие средства (например, бендамустин, циклофосфамид и мелфалан), ингибиторы протеасом (например, бортезомиб), кортикостероиды (например, дексаметазон и преднизон) и иммуномодуляторы (например, талидомид и леналидомид или Revlimid®) или любую их комбинацию. Бифосфонатные лекарственные средства также часто вводят в комбинации со стандартными способами лечения MM для профилактики рарефикации кости. Пациенты старше 65-70 лет являются маловероятными кандидатами для трансплантации стволовых клеток. В некоторых случаях трансплантации двойных аутологичных стволовых клеток являются вариантом для пациентов моложе 60 лет с субоптимальным ответом на первую трансплантацию. Композиции и способы по настоящему изобретению можно вводить в комбинации с любым из прописываемых в настоящее время способов лечения множественной миеломы.

Другим примером заболевания или нарушения, ассоциированного с BCMA, является лимфома Ходжкина и неходжкинская лимфома (См. Chiu et al., Blood. 2007, 109(2):729-39; He et al., J Immunol. 2004, 172(5):3268-79).

Лимфома Ходжкина (HL), также известная как болезнь Ходжкина, является злокачественным новообразованием лимфатической системы, происходящим из лейкоцитов или лимфоцитов. Аномальные клетки при лимфоме называют клетками Рид-Штернберга. При лимфоме Ходжкина злокачественное новообразование распространяется от одной группы лимфоузлов к другому. Лимфому Ходжкина можно подклассифицировать на четыре патологических подтипа в зависимости от морфологии клеток Рид-Штернберга и композиции клеток вокруг клеток Рид-Штернберга (что определяют посредством биопсии лимфоузлов): нодулярную склерозирующую HL, подтип со смешанной клеточностью, лимфоцитарно-богатую или с лимфоцитарным преобладанием, с истощением лимфоцитов. Некоторые лимфомы Ходжкина могут также являться нодулярной лимфомой Ходжкина с преобладанием лимфоцитов или могут являться неопределенными. Симптомы и признаки лимфомы Ходжкина включают безболезненный отек в лимфоузлах шеи, подмышек или паха, высокую температуру, ночную потливость, потерю веса, утомляемость, зуд или боль в животе.

Неходжкинская лимфома (NHL) включает разнообразную группу гемобластозов, включающих любой тип лимфомы, иной, чем лимфома Ходжкина. Подтипы неходжкинской лимфомы классифицируют, главным образом, по морфологии клеток, хромосомным аберрациям и поверхностным маркерам. Подтипы NHL (или NHL-асооциированные злокачественные новообразования) включают B-клеточные лимфомы, в качестве неограничивающих примеров, такие как, лимфома Беркитта, хронический B-клеточный лимфоцитарный лейкоз (B-CLL), B-клеточный пролимфоцитарный лейкоз (B-PLL), хронический лимфоцитарный лейкоз (CLL), диффузную крупноклеточную B-клеточную лимфому (DLBCL) (например, внутрисосудистую крупноклеточную B-клеточную лимфому и первичную медиастинальную B-клеточную лимфому), фолликулярную лимфому (например, лимфому из клеток центра фолликула, фолликулярную мелкоклеточную лимфому с рассеченными ядрами), волосатоклеточный лейкоз, B-клеточную лимфому высокой степени злокачественности (подобную лимфоме Беркитта), лимфоплазмоцитарную лимфому (макроглобулинемию Вальденстрема), лимфому из клеток мантийной зоны, B-клеточные лимфомы маргинальной зоны (например, экстранодальную B-клеточную лимфому маргинальной зоны или лимфому из лимфоидной ткани слизистых оболочек (MALT), нодальную B-клеточную лимфому маргинальной зоны и B-клеточную лимфому маргинальной зоны селезенки), плазмоцитому/миелому, B-лимфобластный лейкоз/лимфому из клеток-предшественников (PB-LBL/L), первичную лимфому центральной нервной системы (ЦНС), первичную внутриглазную лимфому, мелкоклеточную лимфоцитарную лимфому (SLL) и T-клеточные лимфомы, в качестве неограничивающих примеров, такие как, анапластическая крупноклеточная лимфома (ALCL), T-клеточная лимфома/лейкоз взрослых (например, вялотекущая, хроническая, острая и лимфоматозная), лимфангиома, ангиоиммунобластная T-клеточная лимфома, кожные T-клеточные лимфомы (например, фунгоидный микоз, синдром Сезари и т.д.), экстранодальная T-клеточная лимфома/лимфома естественных киллеров (назального типа), интестинальная T-клеточная лимфома энтеропатического типа, крупноклеточный гландулярный лимфоцитарный лейкоз, T-лимфобластная лимфома/лейкоз из клеток-предшественников (T-LBL/L), T-клеточный хронический лимфоцитарный лейкоз/пролимфоцитарный лейкоз (T-CLL/PLL) и неопределенная периферическая T-клеточная лимфома. Симптомы и признаки лимфомы Ходжкина включают безболезненные отеки лимфоузлов шеи, подмышек, или паха, высокую температуру, ночную потливость, потерю веса, утомляемость, зуд, боль в животе, кашель или боль в груди.

Стадирование является одинаковым и для лимфомы Ходжкина, и для неходжкинской лимфомы и относится к степени распространения злокачественных клеток в организме. На стадии I клетки лимфомы находятся в одной группе лимфоузлов. На стадии II клетки лимфомы присутствуют по меньшей мере в двух группах лимфоузлов, но обе группы находятся с одной стороны диафрагмы или в одной части ткани или органа и лимфоузлах вблизи органа на одной стороне диафрагмы. На стадии III клетки лимфомы находятся в лимфоузлах по обеим сторонам диафрагмы или в одной части ткани или органа вблизи этих групп лимфоузлов или в селезенке. На стадии IV клетки лимфомы обнаруживают в нескольких частях по меньшей мере одного органа или ткани, или клетки лимфомы находятся в органе и лимфоузлах на другой стороне диафрагмы. В дополнение к обозначению стадий римскими цифрами стадии также обозначают буквами A, B, E и S, где A относится к пациентам без симптомов, B относится к пациентам с симптомами, E относится к пациентам, у которых лимфому обнаруживают в тканях вне лимфатической системы, и S относится к пациентам, у которых лимфому обнаруживают в селезенке.

Лимфому Ходжкина общепринято лечат с использованием лучевой терапии, химиотерапии или трансплантации гематопоэтических стволовых клеток. Наиболее распространенной терапией для неходжкинской лимфомы является R-CHOP, состоящая из четырех разных химиотерапевтических средств (циклофосфамида, доксорубицина, винкристина и преднизолона) и ритуксимаба (Rituxan®). Другие способы терапии, общеупотребительные для лечения NHL, включают другие химиотерапевтические средства, лучевую терапию, трансплантацию стволовых клеток (аутологичную или аллогенную трансплантацию костного мозга) или биологическую терапию, такую как иммунотерапия. Другие неограничивающие примеры биологических терапевтических средств включают ритуксимаб (Rituxan®), тозитумомаб (Bexxar®), эпратузумаб (LymphoCide®) и алемтузумаб (MabCampath®). Композиции и способы по настоящему изобретению можно вводить в комбинации с любым из прописываемых в настоящее время способов лечения лимфомы Ходжкина или неходжкинской лимфомы.

Экспрессия BCMA также ассоциирована с макроглобулинемией Вальденстрема (WM), также известной как лимфоплазмоцитарная лимфома (LPL). (См. Elsawa et al., Blood. 2006, 107(7):2882-8). Макроглобулинемию Вальденстрема ранее считали относящейся к множественной миеломе, но в последнее время ее классифицируют как подтип неходжкинской лимфомы. WM отличается неконтролируемой пролиферацией B-клеток, приводящей к анемии и продукции избыточных количеств парапротеина или иммуноглобулина M (IgM), что повышает вязкость крови и приводит к синдрому повышенной вязкости крови. Другие симптомы или признаки WM включают высокую температуру, ночную потливость, утомляемость, анемию, потерю веса, лимфаденопатию или спленомегалию, нечеткое зрение, головокружение, носовое кровотечение, кровоточивость десен, необычные кровоподтеки, почечные нарушения или недостаточность, амилоидоз или периферическую невропатию.

Стандартное лечение WM состоит из химиотерапии, в частности, с использованием ритуксимаба (Rituxan®). Можно использовать другие химиотерапевтические лекарственные средства в комбинации, такие как хлорамбуцил (Leukeran®), циклофосфамид (Neosar®), флударабин (Fludara®), кладрибин (Leustatin®), винкристин и/или талидомид. Кортикостероиды, такие как преднизон, также можно вводить в комбинации с химиотерапией. Плазмаферез, или замещение плазмы, является общеупотребительным на всем протяжении лечения пациента для облегчения некоторых симптомов посредством удаления парапротеина из крови. В некоторых случаях трансплантация стволовых клеток является вариантом для некоторых пациентов.

Другим примером заболевания или нарушения, ассоциированного с BCMA, является злокачественное новообразование головного мозга. В частности, экспрессия BCMA ассоциирована с астроцитомой или глиобластомой (см. Deshayes et al, Oncogene. 2004, 23(17):3005-12, Pelekanou et al., PLoS One. 2013, 8(12):e83250). Астроцитомы являются опухолями, возникающими из астроцитов, являющихся типом глиальных клеток в головном мозге. Глиобластома (также известная как мультиформная глиобластома или GBM) является наиболее злокачественной формой астроцитомы, и ее считают наиболее поздней стадией злокачественного новообразования головного мозга (стадией IV). Существует два варианта глиобластомы: гигантоклеточная глиобластома и глиосаркома. Другие астроцитомы включают ювенильную пилоцитарную астроцитому (JPA), фибриллярную астроцитому, плеоморфную ксантоастроцитому (PXA), дизэмбриопластическую нейроэпителиальную опухоль (DNET) и анапластическую астроцитому (AA).

Симптомы или признаки, ассоциированные с глиобластомой или астроцитомой, включают повышенное давление в головном мозге, головные боли, судороги, утрату памяти, изменения поведения, утрату движения или ощущений на одной стороне тела, языковую дисфункцию, когнитивные нарушения, нарушения зрения, тошноту, рвоту и слабость в руках или ногах.

Хирургическое удаление опухоли (или резекция) является стандартным лечением для удаления настолько большого объема глиомы, насколько возможно без повреждения или с минимальным повреждением нормальной окружающей ткани головного мозга. Лучевую терапию и/или химиотерапию часто используют после хирургической операции для супрессии и медленного рецидивирования заболевания из каких-либо оставшихся злокачественных клеток или сопутствующих повреждений. Лучевая терапия включает лучевую терапию всего головного мозга (общепринятую наружную дистанционную лучевую терапию), направленную трехмерную конформную лучевую терапию и направленные радионуклиды. Химиотерапевтические средства, общеупотребительные для лечения глиобластомы, включают темозоломид, гефитиниб или эрлотиниб и цисплатин. Ингибиторы ангиогенеза, такие как бевацизумаб (Avastin®), также общеупотребительны в комбинации с химиотерапией и/или лучевой терапией.

Поддерживающее лечение также часто используют для облегчения неврологических симптомов и улучшения неврологической функции, и его вводят в комбинации с любым из способов терапии злокачественного новообразования, представленных в настоящем описании. Первичные поддерживающие средства включают антиконвульсанты и кортикостероиды. Таким образом, композиции и способы по настоящему изобретению можно использовать в комбинации с любым из стандартных или поддерживающих способов лечения для лечения глиобластомы или астроцитомы.

Несвязанные со злокачественным новообразованием заболевания и нарушения, ассоциированные с экспрессией BCMA, также можно лечить композициями и способами, представленными в настоящем описании. Неограничивающие примеры несвязанных со злокачественным новообразованием заболеваний и нарушений, ассоциированных с экспрессией BCMA, включают: вирусные инфекции, например, ВИЧ, грибковые инфекции, например, C. neoformans, синдром раздраженного кишечника, язвенный колит и нарушения, связанные с иммунными свойствами слизистых оболочек.

CAR-модифицированные иммунные эффекторные клетки (например, T-клетки или NK-клетки) по настоящему изобретению можно вводить в отдельности или в виде фармацевтической композиции в комбинации с дилюентами и/или другими компонентами, такими как ИЛ-2, или другие цитокины, или популяции клеток.

Настоящее изобретение относится к композициям и способам для лечения злокачественного новообразования. В одном из аспектов злокачественное новообразование является гемобластозом, включая, в качестве неограничивающих примеров, гемобластоз, являющийся лейкозом или лимфомой. В одном из аспектов можно использовать CAR-экспрессирующие клетки (например, CART-клетки или CAR-экспрессирующие NK-клетки) по изобретению для лечения злокачественных новообразований, в качестве неограничивающих примеров, таких как, например, острые лейкозы, включая, в качестве неограничивающих примеров, например, острый B-клеточный лимфоидный лейкоз ("BALL"), острый T-клеточный лимфоидный лейкоз ("TALL"), острый лимфоидный лейкоз (ALL), один или более хронических лейкозов, включая, в качестве неограничивающих примеров, например, хронический миелогенный лейкоз (CML), хронический лимфоцитарный лейкоз (CLL), дополнительные гемобластозы или гематологические состояния, включая, в качестве неограничивающих примеров, например, B-клеточный пролимфоцитарный лейкоз, неоплазию из бластных плазмацитоидных дендритных клеток, лимфому Беркитта, диффузную крупноклеточную B-клеточную лимфому, фолликулярную лимфому, волосатоклеточный лейкоз, мелкоклеточную или крупноклеточную фолликулярную лимфому, злокачественные лимфопролиферативные состояния, MALT-лимфому, лимфому из клеток мантийной зоны, лимфому из клеток маргинальной зоны, множественную миелому, миелодисплазию и миелодиспластический синдром, неходжкинскую лимфому, плазмобластную лимфому, неоплазию из плазмацитоидных дендритных клеток, макроглобулинемию Вальденстрема и "предлейкоз", представляющий собой широкий спектр гематологических состояний, объединенных неэффективной продукцией (или дисплазией) миелоидных клеток крови, и т.п. Дополнительные заболевания, ассоциированные с экспрессией BCMA, включают, в качестве неограничивающих примеров, например, атипичные и/или неклассические злокачественные новообразования, злокачественные новообразования, предраковые состояния или пролиферативные заболевания с экспрессией BCMA.

В вариантах осуществления композицию, представленную в настоящем описании, можно использовать для лечения заболевания, включая, в качестве неограничивающих примеров, пролиферативное нарушение из плазматических клеток, например, бессимптомную миелому (вялотекущую множественную миелому или индолентную миелому), моноклональную гаммапатию неустановленной этиологии (MGUS), макроглобулинемию Вальденстрема, плазмоцитомы (например, плазмоклеточную дискразию, солитарную миелому, солитарную плазмоцитому, экстрамедуллярную плазмоцитому, и множественную плазмоцитому), системный амилоидоз легких цепей и POEMS-синдром (также известный как синдром Кроу-Фуказа, болезнь Такацуки и PEP-синдром).

В вариантах осуществления композицию, представленную в настоящем описании, можно использовать для лечения заболевания, включая, в качестве неограничивающих примеров, злокачественное новообразование, например, злокачественное новообразование, представленное в настоящем описании, например, рак предстательной железы (например, кастрационно-резистентный или резистентный к терапии рак предстательной железы или метастазирующий рак предстательной железы), рак поджелудочной железы или рак легких.

Настоящее изобретение также относится к способам ингибирования пролиферации или снижения популяции BCMA-экспрессирующих клеток, способам, включающим приведение популяции клеток, содержащих BMCA-экспрессирующие клетки, в контакт с клеткой, экспрессирующей CAR против BCMA (например, BCMA CART-клеткой или CAR BCMA-экспрессирующей NK-клеткой), по изобретению, связывающиеся с BCMA-экспрессирующей клеткой. В конкретном аспекте настоящее изобретение относится к способам ингибирования пролиферации или снижения популяции злокачественных клеток, экспрессирующих BCMA, способам, включающим приведение популяции BCMA-экспрессирующих злокачественных клеток в контакт с клеткой, экспрессирующей CAR против BCMA (например, BCMA CART-клеткой или CAR BCMA-экспрессирующей NK-клеткой) по изобретению, связывающейся с BCMA-экспрессирующей клеткой. В одном из аспектов настоящее изобретение относится к способам ингибирования пролиферации или снижения популяции злокачественных клеток, экспрессирующих BCMA, способам, включающим приведение популяции BCMA-экспрессирующих злокачественных клеток в контакт с клеткой, экспрессирующей CAR против BCMA (например, BCMA CART-клеткой или CAR BCMA-экспрессирующей NK-клеткой) по изобретению, связывающейся с BCMA-экспрессирующей клеткой. В определенных аспектах клетка, экспрессирующая CAR против BCMA (например, BCMA CART-клетка или CAR BCMA-экспрессирующая NK-клетка) по изобретению снижает количество или процентную долю клеток и/или злокачественных клеток по меньшей мере на 25%, по меньшей мере на 30%, по меньшей мере на 40%, по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 65%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 95% или по меньшей мере на 99% у индивидуума с миелолейкозом или другим злокачественным новообразованием, ассоциированным с BCMA-экспрессирующими клетками, или модели миелолейкоза или другого злокачественного новообразования, ассоциированного с BCMA-экспрессирующими клетками, на животных относительно отрицательного контроля. В одном из аспектов индивидуум является человеком.

Настоящее изобретение также относится к способам профилактики, лечения и/или контроля заболевания, ассоциированного с BCMA-экспрессирующими клетками (например, гемобластоза или атипичного злокачественного новообразования с экспрессией BCMA), способам, включающим введение нуждающемуся в этом индивидууму клетки, экспрессирующей CAR против BCMA (например, BCMA CART-клетки или CAR BCMA-экспрессирующей NK-клетки) по изобретению, связывающейся с BCMA-экспрессирующей клеткой. В одном из аспектов индивидуум является человеком. Неограничивающие примеры нарушений, ассоциированных с BCMA-экспрессирующими клетками, включают вирусные или грибковые инфекции и нарушения, связанные с иммунными свойствами слизистых оболочек.

Настоящее изобретение также относится к способам профилактики, лечения и/или контроля заболевания, ассоциированного с BCMA-экспрессирующими клетками, способам, включающим введение нуждающемуся в этом индивидууму клетки, экспрессирующей CAR против BCMA (например, BCMA CART-клетки или CAR BCMA-экспрессирующей NK-клетки) по изобретению, связывающейся с BCMA-экспрессирующей клеткой. В одном из аспектов индивидуум является человеком.

Настоящее изобретение относится к способам профилактики рецидива злокачественного новообразования, ассоциированного с BCMA-экспрессирующими клетками, способам, включающим введение нуждающемуся в этом индивидууму клетки, экспрессирующей CAR против BCMA (например, BCMA CART-клетки или CAR BCMA-экспрессирующей NK-клетки) по изобретению, связывающейся с BCMA-экспрессирующей клеткой. В одном из аспектов способы включают введение нуждающемуся в этом индивидууму эффективного количества клетки, экспрессирующей CAR против BCMA (например, BCMA CART-клетки или CAR BCMA-экспрессирующей NK-клетки), представленной в настоящем описании, связывающейся с BCMA-экспрессирующей клеткой, в комбинации с эффективным количеством другого терапевтического средства.

Способы комбинированного лечения

CAR-экспрессирующую клетку, представленную в настоящем описании, можно использовать в комбинации с другими известными средствами и терапевтическими средствами. Как применяют в настоящем описании, введение "в комбинации" означает, что два (или более) различных терапевтических средства вводят индивидууму в течение периода, в течение которого индивидуум страдает нарушением, например, два или более терапевтических средства вводят после диагностирования нарушения у индивидуума и до излечения или устранения нарушения или прекращения лечения по другим причинам. В некоторых вариантах осуществления введение одного терапевтического средства все еще осуществляют, когда начинают введение второго терапевтического средства, таким образом, что существует перекрывание в терминах введения. В настоящем описании иногда ссылаются на "одновременную доставку". В других вариантах осуществления введение одного терапевтического средства заканчивают до начала введения другого терапевтического средства. В некоторых вариантах осуществления каждого случая лечение является более эффективным по причине комбинированного введения. Например, второе лечение является более эффективным, например, наблюдают эквивалентный эффект при меньшем втором лечении, или второе лечение снижает симптомы в большей степени, чем наблюдали бы в случае, если второе лечение проводят в отсутствие первого лечения, или аналогичную ситуацию наблюдают при первом лечении. В некоторых вариантах осуществления введение осуществляют таким образом, что снижение симптома или другого параметра, связанного с нарушением, является большим, чем наблюдали бы при одном лечении, осуществляемом в отсутствие другого. Эффект двух терапевтических средств может являться частично аддитивным, полностью аддитивным или более чем аддитивным. Введение можно осуществлять таким образом, что эффект первого осуществляемого лечения все еще является определяемым, когда проводят второе лечение.

CAR-экспрессирующую клетку, представленную в настоящем описании, и по меньшей мере одно дополнительное терапевтическое средство можно вводить одновременно в одной или отдельных композициях или последовательно. В случае последовательного введения CAR-экспрессирующую клетку, представленную в настоящем описании, можно вводить первой и дополнительное средство можно вводить вторым, или порядок введения может быть обратным.

Терапию CAR и/или другие терапевтические средства или способы можно проводить в течение периодов активного нарушения или в течение периода ремиссии или менее активного заболевания. Терапию CAR можно проводить перед другим лечением, одновременно с лечением, после лечения или в течение ремиссии нарушения.

При введении в комбинации терапевтическое средство CAR и дополнительное средство (например, второе или третье средство) или все из них можно вводить в количестве или дозе, более высокой, более низкой или той же, что и количество или доза каждого средства, используемого в отдельности, например, в качестве монотерапии. В определенных вариантах осуществления вводимое количество или доза терапевтического средства CAR, дополнительного средства (например, второго или третьего средства) или всех из них является более низкой (например, по меньшей мере 20%, по меньшей мере 30%, по меньшей мере 40% или по меньшей мере 50%), чем количество или доза каждого средства, используемого в отдельности, например, в качестве монотерапии. В других вариантах осуществления количество или доза терапевтического средства CAR, дополнительного средства (например, второго или третьего средства) или всех из них, приводящая к желаемому эффекту (например, лечению злокачественного новообразования), является более низкой (например, по меньшей мере на 20%, по меньшей мере на 30%, по меньшей мере на 40% или по меньшей мере на 50% более низкой), чем количество или доза каждого средства, используемого в отдельности, например, в качестве монотерапии, необходимая для достижения того же терапевтического эффекта.

В дополнительных аспектах CAR-экспрессирующую клетку, представленную в настоящем описании, можно использовать в схеме лечения в комбинации с хирургическим лечением, химиотерапией, лучевой терапией, иммуносупрессирующими средствами, такими как циклоспорин, азатиоприн, метотрексат, микофенолат и FK506, антитела или другие иммуноабляционные средства, такие как CAMPATH, антитела против CD3 или другие терапевтические средства на основе антител, цитоксин, флударабин, циклоспорин, FK506, рапамицин, микофеноловая кислота, стероиды, FR901228, цитокины и лучевая терапия. Пептидная вакцина, такая как описываемая в Izumoto et al. 2008 J Neurosurg 108:963-971.

В конкретных случаях соединения по настоящему изобретению комбинируют с другими терапевтическими средствами, такими как другие противораковые средства, противоаллергические средства, противорвотные средства (или антиэметики), анальгетики цитопротекторы и их комбинации.

В одном из вариантов осуществления первую CAR-экспрессирующую клетку, представленную в настоящем описании, например, CAR BCMA-экспрессирующую клетку, представленную в настоящем описании, можно использовать в комбинации со второй CAR-экспрессирующей клеткой. В одном из вариантов осуществления вторая CAR-экспрессирующая клетка экспрессирует CAR, содержащий другой связывающий домен против BMCA, например, связывающий домен против BCMA, представленный в настоящем описании, отличающийся от связывающего домена против BCMA в CAR, экспрессируемом первой CAR-экспрессирующей клеткой. В одном из вариантов осуществления вторая CAR-экспрессирующая клетка экспрессирует CAR, содержащий антигенсвязывающий домен против антигена, иного, чем BCMA (например, CD19, CD20, CS-1, легкая каппа-цепь, CD139, антиген Ley или CD38). В одном из вариантов осуществления первую CAR-экспрессирующую клетку, представленную в настоящем описании, например, CAR BCMA-экспрессирующую клетку, представленную в настоящем описании, используют в комбинации со второй CAR-экспрессирующей клеткой, содержащей CAR CD19. В одном из вариантов осуществления CAR BCMA-экспрессирующую клетку, представленную в настоящем описании, используют в комбинации с CAR CD19-экспрессирующей клеткой для лечения BCMA-ассоциированного злокачественного новообразования, представленного в настоящем описании, например, множественной миеломы. В некоторых вариантах осуществления множественная миелома является CD19-отрицательной, например, имеющей подавляющее большинство (например, по меньшей мере, 98%, 99%, 99,5%, 99,9% или 99,95%) неопластических плазматических клеток с CD19-отрицательным фенотипом, например, как определяют посредством проточной цитометрии, RT-ПЦР или и того, и другого. Как показано в примере 17 в настоящем описании, CAR CD19 может быть эффективным даже против CD19-отрицательной множественной миеломы. Не желая быть связанными какой-либо теорией, полагают, что CAR CD19 может действовать на небольшую, но важную CD19-положительную популяцию неопластических клеток, направленно воздействуя на клетку, экспрессирующую уровни CD19, находящиеся ниже порога чувствительности анализов, представленных в настоящем описании, или направленно воздействуя на ненеопластическую клетку, поддерживающую неопластические клетки. В вариантах осуществления CAR CD19 может приводить к удалению B-клеток, например, регуляторных B-клеток.

Например, в одном из вариантов осуществления первую CAR-экспрессирующую клетку, представленную в настоящем описании, например, CAR BCMA-экспрессирующую клетку, и вторую CAR-экспрессирующую клетку, представленную в настоящем описании, например, CAR CD19-экспрессирующую клетку, получают в одной композиции и вводят одновременно. В другом варианте осуществления первую CAR-экспрессирующую клетку, представленную в настоящем описании, например, CAR BCMA-экспрессирующую клетку, и вторую CAR-экспрессирующую клетку, представленную в настоящем описании, например, CAR CD19-экспрессирующую клетку, получают в отдельных композициях и отдельные композиции вводят одновременно или последовательно. Если CAR BCMA-экспрессирующую клетку и вторую CAR-экспрессирующую клетку получают в отдельных композициях, CAR BCMA-экспрессирующую клетку можно вводить первой, а вторую CAR-экспрессирующую клетку можно вводить второй, или порядок введения может быть обратным.

В одном из вариантов осуществления CAR CD19 является CAR CD19, например, гуманизированным CAR CD19, описываемым в WO2014/153270, зарегистрированной 15 марта 2014 года (включенной в настоящее описание в качестве ссылки в полном объеме) или последовательностью, по меньшей мере на 95%, например, 95-99%, идентичной ей. В некоторых вариантах осуществления конструкция CAR CD19 является конструкцией CAR19, представленной в публикации PCT WO2012/079000 (включенной в настоящее описание в качестве ссылки в полном объеме), или последовательностью, по меньшей мере на 95%, например, 95-99%, идентичной ей. В одном из вариантов осуществления связывающий домен против CD19 является scFv, описываемым в WO2012/079000, или последовательностью, по меньшей мере на 95%, например, 95-99%, идентичной ей.

В вариантах осуществления первую CAR-экспрессирующую клетку вводят индивидууму и вторую CAR-экспрессирующую клетку вводят индивидууму. В вариантах осуществления первая CAR-экспрессирующая клетка содержит CAR (например, CAR BCMA или CD19), содержащий костимуляторный домен CD27 и первичный сигнальный домен CD3 дзета (мутантный или дикого типа). В вариантах осуществления вторая CAR-экспрессирующая клетка содержит CAR (например, CAR BCMA), содержащий костимуляторный домен 4-1BB и первичный сигнальный домен CD3 дзета (мутантный или дикого типа). Не желая быть связанными какой-либо теорией, полагают, что в вариантах осуществления первая CAR-экспрессирующая клетка может быть менее токсичной, чем вторая CAR-экспрессирующая клетка, и ее можно использовать для уменьшения объема опухоли.

В одном из вариантов осуществления CAR-экспрессирующую клетку, представленную в настоящем описании, можно использовать в комбинации с химиотерапевтическим средством. Примеры химиотерапевтических средств включают антрациклин (например, доксорубицин (например, липосомальный доксорубицин)), алкалоид барвинка (например, винбластин, винкристин, виндезин, винорелбин), алкилирующее средство (например, циклофосфамид, декарбазин, мелфалан, ифосфамид, темозоломид), антитело для иммунных клеток (например, алемтузумаб, гемтузумаб, ритуксимаб, тозитумомаб), антиметаболит (включая, например, антагонисты фолиевой кислоты, аналоги пиримидина, аналоги пурина и ингибиторы аденозиндезаминазы (например, флударабин)), ингибитор mTOR, агонист глюкокортикоид-индуцированного TNFR-родственного белка (GITR), ингибитор протеасом (например, аклациномицин A, глиотоксин или бортезомиб), иммуномодулятор, такой как талидомид или производное талидомида (например, леналидомид).

Общие химиотерапевтические средства, предлагаемые для применения в способах комбинированного лечения, включают анастрозол (Arimidex®), бикалутамид (Casodex®), блеомицин сульфат (Blenoxane®), бусульфан (Myleran®), инъекцию бусульфана (Busulfex®), капецитабин (Xeloda®), N4-пентоксикарбонил-5-дезокси-5-фторцитидин, карбоплатин (Paraplatin®), кармустин (BiCNU®), хлорамбуцил (Leukeran®), цисплатин (Platinol®), кладрибин (Leustatin®), циклофосфамид (Cytoxan® или Neosar®), цитарабин, цитозинарабинозид (Cytosar-U®), инъекцию липосомального цитарабина (DepoCyt®), дакарбазин (DTIC-Dome®), дактиномицин (Актиномицин D, космеген), даунорубицина гидрохлорид (Cerubidine®), инъекцию липосомального даунорубицина цитрата (DaunoXome®), дексаметазон, доцетаксел (Taxotere®), доксорубицина гидрохлорид (Adriamycin®, Rubex®), этопозид (Vepesid®), флударабина фосфат (Fludara®), 5-фторурацил (Adrucil®, Efudex®), флутамид (Eulexin®), тезацитибин, гемцитабин (дифтородезоксицитидин), гидроксимочевину (Hydrea®), идарубицин (Idamycin®), ифосфамид (IFEX®), иринотекан (Camptosar®), L-аспарагиназу (ELSPAR®), лейковорин кальций, мелфалан (Alkeran®), 6-меркаптопурин (Purinethol®), метотрексат (Folex®), митоксантрон (Novantrone®), милотарг, паклитаксел (Taxol®), Phoenix (иттрий-90/MX-DTPA), пентостатин, полифепросан 20 с имплантатом кармустина (Gliadel®), тамоксифена цитрат (Nolvadex®), тенипозид (Vumon®), 6-тиогуанин, тиотепа, тирапазамин (Tirazone®), топотекана гидрохлорид для инъекции (Hycamptin®), винбластин (Velban®), винкристин (Oncovin®) и винорелбин (Navelbine®).

Особенно интересующие противораковые средства для комбинаций с соединениями по настоящему изобретению включают: антрациклины, алкилирующие средства, антиметаболиты, лекарственные средства, ингибирующие кальций-зависимую фосфатазу кальциневрин или p70S6 киназа FK506) или ингибирующие киназу p70S6, ингибиторы mTOR, иммуномодуляторы, антрациклины, алкалоиды барвинка, ингибиторы протеасом, агонисты GITR, ингибиторы протеинтирозинфосфатаз, ингибитор киназы CDK4, ингибитор BTK, ингибитор киназы MKN, ингибитор киназы DGK или онколитический вирус.

Неограничивающие примеры алкилирующих средств включают азотистые иприты, производные этиленимина, алкилсульфонаты, нитрозомочевины и триазены): урамустин (Aminouracil Mustard®, Chlorethaminacil®, Demethyldopan®, Desmethyldopan®, Haemanthamine®, Nordopan®, Uracil nitrogen mustard®, Uracillost®, Uracilmostaza®, Uramustin®, Uramustine®), хлорметин (Mustargen®), циклофосфамид (Cytoxan®, Neosar®, Clafen®, Endoxan®, Procytox®, Revimmune^TM), ифосфамид (Mitoxana®), мелфалан (Alkeran®), хлорамбуцил (Leukeran®), пипоброман (Amedel®, Vercyte®), триэтиленмеламин (Hemel®, Hexalen®, Hexastat®), триэтилентиофосфоамин, темозоломид (Temodar®), тиотепа (Thioplex®), бусульфан (Busilvex®, Myleran®), кармустин (BiCNU®), ломустин (CeeNU®), стрептозоцин (Zanosar®) и дакарбазин (DTIC-Dome®). Дополнительные неограничивающие примеры алкилирующих средств включают оксалиплатин (Eloxatin®), темозоломид (Temodar® и Temodal®), дактиномицин (также известный как актиномицин-D, Cosmegen®), мелфалан (также известный как L-PAM, L-сарколизин, Alkeran®), алтретамин (также известный как гексаметилмеламин (HMM), Hexalen®), кармустин (BiCNU®), бендамустин (Treanda®), бусульфан (Busulfex® и Myleran®), карбоплатин (Paraplatin®), ломустин (также известный как CCNU, CeeNU®), цисплатин (также известный как CDDP, Platinol® и Platinol®-AQ), хлорамбуцил (Leukeran®), циклофосфамид (Cytoxan® и Neosar®), дакарбазин (также известный как DTIC, DIC и имидазол карбоксамид, DTIC-Dome®), алтретамин (также известный как гексаметилмеламин (HMM), Hexalen®), ифосфамид (Ifex®), преднимустин, прокарбазин (Matulane®), мехлоретамин (также известный как азотистый иприт, мустин и мехлоретамин гидрохлорид, Mustargen®), стрептозоцин (Zanosar®), тиотепа (также известный как тиофосфоамид, TESPA и TSPA, Thioplex®), циклофосфамид (Endoxan®, Cytoxan®, Neosar®, Procytox®, Revimmune®) и бендамустин HCl (Treanda®).

Примеры ингибиторов mTOR включают темсиролимус, ридафоролимус (ранее известный как деферолимус, (1R,2R,4S)-4-[(2R)-2[(1R,9S,12S,15R,16E,18R,19R,21R,23S,24E,26E,28Z,30S,32S,35R)-1,18-дигидрокси-19,30-диметокси-15,17,21,23, 29,35-гексаметил-2,3,10,14,20-пентаоксо-11,36-диокса-4-азатрицикло[30.3.1.0^4,9]гексатриаконта-16,24,26,28-тетраен-12-ил]пропил]-2-метоксициклогексилдиметилфосфинат, также известный как AP23573 и MK8669, и описываемый в публикации PCT № WO03/064383), эверолимус (Afinitor® или RAD001), рапамицин (AY22989, Sirolimus®), симапимод (CAS 164301-51-3), эмсиролимус, (5-{2,4-бис[(3S)-3-метилморфолин-4-ил]пиридо[2,3-d]пиримидин-7-ил}-2-метоксифенил)метанол (AZD8055), 2-амино-8-[транс-4-(2-гидроксиэтокси)циклогексил]-6-(6-метокси-3-пиридинил)-4-метил-пиридо[2,3-d]пиримидин-7(8H)-он (PF04691502, CAS 1013101-36-4) и N²-[1,4-диоксо-4-[[4-(4-оксо-8-фенил-4H-1-бензопиран-2-ил)морфолин-4-ил]метокси]бутил]-L-аргинилглицил-L-α-аспартил-L-серин-(SEQ ID NO: 383), внутренняя соль (SF1126, CAS 936487-67-1) и XL765.

Примеры иммуномодуляторов включают афутузумаб (доступный в Roche®), пэгфилграстим (Neulasta®), леналидомид (CC-5013, Revlimid®), талидомид (Thalomid®), актимид (CC4047) и IRX-2 (смесь цитокинов человека, включая интерлейкин 1, интерлейкин 2 и интерферон γ, CAS 951209-71-5, доступная в IRX Therapeutics).

Примеры антрациклинов включают доксорубицин (Adriamycin® и Rubex®), блеомицин (lenoxane®), даунорубицин (даунорубицина гидрохлорид, дауномицин и рубидомицина гидрохлорид, Cerubidine®), липосомальный даунорубицин (липосомальный даунорубицина цитрат, DaunoXome®), митоксантрон (DHAD, Novantrone®), эпирубицин (Ellence™), идарубицин (Idamycin®, Idamycin PFS®), митомицин C (Mutamycin®), гелданамицин, гербимицин, равидомицин и дезацетилравидомицин.

Примеры алкалоидов барвинка включают винорелбина тартрат (Navelbine®), винкристин (Oncovin®) и виндезин (Eldisine®)), винбластин (также известный как винбластина сульфат, винкалейкобластин и VLB, Alkaban-AQ® и Velban®) и винорелбин (Navelbine®).

Примеры ингибиторов протеасом включают бортезомиб (Velcade®), карфилзомиб (PX-171-007, (S)-4-метил-N-((S)-1-(((S)-4-метил-1-((R)-2-метилоксиран-2-ил)-1-оксопентан-2-ил)амино)-1-оксо-3-фенилпропан-2-ил)-2-((S)-2-(2-морфолиноацетамидо)-4-фенилбутанамидо)-пентанамид), маризомиб (NPI-0052), иксазомиб цитрат (MLN-9708), деланзомиб (CEP-18770) и O-метил-N-[(2-метил-5-тиазолил)карбонил]-L-серил-O-метил-N-[(1S)-2-[(2R)-2-метил-2-оксиранил]-2-оксо-1-(фенилметил)этил]-L-серинамид (ONX-0912).

В вариантах осуществления CAR-экспрессирующую клетку, представленную в настоящем описании, вводят индивидууму в комбинации с флударабином циклофосфамидом и/или ритуксимабом. В вариантах осуществления CAR-экспрессирующую клетку, представленную в настоящем описании, вводят индивидууму в комбинации с флударабином, циклофосфамидом и ритуксимабом (FCR). В вариантах осуществления индивидуум имеет CLL. Например, индивидуум имеет делецию в коротком плече хромосомы 17 (del(17p), например, в лейкозной клетке). В других примерах индивидуум не имеет del(17p). В вариантах осуществления индивидуум содержит лейкозную клетку, содержащую мутацию в гене вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина (IgV_H). В других вариантах осуществления индивидуум не содержит лейкозную клетку, содержащую мутацию в гене вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина (IgV_H). В вариантах осуществления флударабин вводят в дозе приблизительно 10-50 мг/м² (например, приблизительно 10-15, 15-20, 20-25, 25-30, 30-35, 35-40, 40-45 или 45-50 мг/м²), например, внутривенно. В вариантах осуществления циклофосфамид вводят в дозе приблизительно 200-300 мг/м² (например, приблизительно 200-225, 225-250, 250-275 или 275-300 мг/м²), например, внутривенно. В вариантах осуществления ритуксимаб вводят в дозе приблизительно 400-600 мг/м² (например, 400-450, 450-500, 500-550 или 550-600 мг/м²), например, внутривенно.

В вариантах осуществления CAR-экспрессирующую клетку, представленную в настоящем описании, вводят индивидууму в комбинации с бендамустином и ритуксимабом. В вариантах осуществления индивидуум имеет CLL. Например, индивидуум имеет делецию в коротком плече хромосомы 17 (del(17p), например, в лейкозной клетке). В других примерах индивидуум не имеет del(17p). В вариантах осуществления индивидуум содержит лейкозную клетку, содержащую мутацию в гене вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина (IgV_H). В других вариантах осуществления индивидуум не содержит лейкозную клетку, содержащую мутацию в гене вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина (IgV_H). В вариантах осуществления бендамустин вводят в дозе приблизительно 70-110 мг/м² (например, 70-80, 80-90, 90-100 или 100-110 мг/м²), например, внутривенно. В вариантах осуществления ритуксимаб вводят в дозе приблизительно 400-600 мг/м² (например, 400-450, 450-500, 500-550 или 550-600 мг/м²), например, внутривенно.

В вариантах осуществления CAR-экспрессирующую клетку, представленную в настоящем описании, вводят индивидууму в комбинации с ритуксимабом, циклофосфамидом, доксорубицином, винкристином и/или кортикостероидом (например, преднизоном). В вариантах осуществления CAR-экспрессирующую клетку, представленную в настоящем описании, вводят индивидууму в комбинации с ритуксимабом, циклофосфамидом, доксорубицином, винкристином и преднизоном (R-CHOP). В вариантах осуществления индивидуум имеет диффузную крупноклеточную B-клеточную лимфому (DLBCL). В вариантах осуществления индивидуум имеет негенерализованную DLBCL локализованной стадии (например, содержит опухоль, имеющую размер/диаметр менее 7 см). В вариантах осуществления индивидуума лечат с помощью лучевой терапии в комбинации с R-CHOP. Например, индивидууму вводят R-CHOP (например, 1-6 циклов, например, 1, 2, 3, 4, 5 или 6 циклов R-CHOP) с последующей лучевой терапией. В некоторых случаях индивидууму вводят R-CHOP (например, 1-6 циклов, например, 1, 2, 3, 4, 5 или 6 циклов R-CHOP) после лучевой терапии.

В вариантах осуществления CAR-экспрессирующую клетку, представленную в настоящем описании, вводят индивидууму в комбинации с этопозидом, преднизоном, винкристином, циклофосфамидом, доксорубицином и/или ритуксимабом. В вариантах осуществления CAR-экспрессирующую клетку, представленную в настоящем описании, вводят индивидууму в комбинации с этопозидом, преднизоном, винкристином, циклофосфамидом, доксорубицином и ритуксимабом (EPOCH-R). В вариантах осуществления CAR-экспрессирующую клетку, представленную в настоящем описании, вводят индивидууму в комбинации с EPOCH-R с индивидуальным подбором дозы (DA-EPOCH-R). В вариантах осуществления индивидуум имеет B-клеточную лимфому, например, агрессивную B-клеточную лимфому с реаранжировкой Myc.

В вариантах осуществления CAR-экспрессирующую клетку, представленную в настоящем описании, вводят индивидууму в комбинации с ритуксимабом и/или леналидомидом. Леналидомид ((RS)-3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-дион) является иммуномодулятором. В вариантах осуществления CAR-экспрессирующую клетку, представленную в настоящем описании, вводят индивидууму в комбинации с ритуксимабом и леналидомидом. В вариантах осуществления индивидуум имеет фолликулярную лимфому (FL) или лимфому из клеток мантийной зоны (MCL). В вариантах осуществления индивидуум имеет FL, и его ранее не лечили с помощью противораковой терапии. В вариантах осуществления леналидомид вводят в дозе приблизительно 10-20 мг (например, 10-15 или 15-20 мг), например, ежедневно. В вариантах осуществления ритуксимаб вводят в дозе приблизительно 350-550 мг/м² (например, 350-375, 375-400, 400-425, 425-450, 450-475 или 475-500 мг/м²), например, внутривенно.

В вариантах осуществления CAR-экспрессирующую клетку, представленную в настоящем описании, вводят индивидууму в комбинации с брентуксимабом. Брентуксимаб является конъюгатом антитело-лекарственное средство антитела против CD30 и монометилауристатина E. В вариантах осуществления индивидуум имеет лимфому Ходжкина (HL), например, рецидивирующую или рефрактерную HL. В вариантах осуществления индивидуум имеет CD30+ HL. В вариантах осуществления индивидуума подвергали аутологичной трансплантации стволовых клеток (ASCT). В вариантах осуществления индивидуума не подвергали ASCT. В вариантах осуществления брентуксимаб вводят в дозе приблизительно 1-3 мг/кг (например, приблизительно 1-1,5, 1,5-2, 2-2,5 или 2,5-3 мг/кг), например, внутривенно, например, каждые 3 недели.

В вариантах осуществления CAR-экспрессирующую клетку, представленную в настоящем описании, вводят индивидууму в комбинации с брентуксимабом и дакарбазином или в комбинации с брентуксимабом и бендамустином. Дакарбазин является алкилирующим средством с химическим названием 5-(3,3-диметил-1-триазенил)имидазол-4-карбоксамид. Бендамустин является алкилирующим средством с химическим названием 4-[5-[бис(2-хлорэтил)амино]-1-метилбензимидазол-2-ил]бутановая кислота. В вариантах осуществления индивидуум имеет лимфому Ходжкина (HL). В вариантах осуществления индивидуума ранее не подвергали противораковой терапии. В вариантах осуществления возраст индивидуума составляет по меньшей мере 60 лет, например, 60, 65, 70, 75, 80, 85 или более. В вариантах осуществления дакарбазин вводят в дозе приблизительно 300-450 мг/м² (например, приблизительно 300-325, 325-350, 350-375, 375-400, 400-425 или 425-450 мг/м²), например, внутривенно. В вариантах осуществления бендамустин вводят в дозе приблизительно 75-125 мг/м² (например, 75-100 или 100-125 мг/м², например, приблизительно 90 мг/м²), например, внутривенно. В вариантах осуществления брентуксимаб вводят в дозе приблизительно 1-3 мг/кг (например, приблизительно 1-1,5, 1,5-2, 2-2,5 или 2,5-3 мг/кг), например, внутривенно, например, каждые 3 недели.

В некоторых вариантах осуществления CAR-экспрессирующую клетку, представленную в настоящем описании, вводят индивидууму в комбинации с ингибитором CD20, например, антителом против CD20 (например, моно- или биспецифическим антителом против CD20) или его фрагментом. Неограничивающие примеры антител против CD20 включают ритуксимаб, офатумумаб, окрелизумаб, велтузумаб, обинутузумаб, TRU-015 (Trubion Pharmaceuticals), окаратузумаб и Pro131921 (Genentech). См., например, Lim et al. Haematologica. 95,1(2010):135-43.

В некоторых вариантах осуществления антитело против CD20 содержит ритуксимаб. Ритуксимаб является химерным моноклональным антителом IgG1 каппа мыши/человека, связывающимся с CD20 и вызывающим цитолиз CD20-экспрессирующей клетки, например, как описано в www.accessdata.fda.gov/drugsatfda_docs/label/2010/103705s5311lbl.pdf. В вариантах осуществления CAR-экспрессирующую клетку, представленную в настоящем описании, вводят индивидууму в комбинации с ритуксимабом. В вариантах осуществления индивидуум имеет CLL или SLL.

В некоторых вариантах осуществления ритуксимаб вводят внутривенно, например, в виде внутривенной инфузии. Например, каждая инфузия включает приблизительно 500-2000 мг (например, приблизительно 500-550, 550-600, 600-650, 650-700, 700-750, 750-800, 800-850, 850-900, 900-950, 950-1000, 1000-1100, 1100-1200, 1200-1300, 1300-1400, 1400-1500, 1500-1600, 1600-1700, 1700-1800, 1800-1900 или 1900-2000 мг) ритуксимаба. В некоторых вариантах осуществления ритуксимаб вводят в дозе от 150 мг/м² до 750 мг/м², например, приблизительно 150-175 мг/м², 175-200 мг/м², 200-225 мг/м², 225-250 мг/м², 250-300 мг/м², 300-325 мг/м², 325-350 мг/м², 350-375 мг/м², 375-400 мг/м², 400-425 мг/м², 425-450 мг/м², 450-475 мг/м², 475-500 мг/м², 500-525 мг/м², 525-550 мг/м², 550-575 мг/м², 575-600 мг/м², 600-625 мг/м², 625-650 мг/м², 650-675 мг/м² или 675-700 мг/м², где м² соответствует площади поверхности тела индивидуума. В некоторых вариантах осуществления ритуксимаб вводят с интервалом введения по меньшей мере 4 дня, например, 4, 7, 14, 21, 28, 35 дней или более. Например, ритуксимаб вводят с интервалом введения по меньшей мере 0,5 недели, например, 0,5, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 недель или более. В некоторых вариантах осуществления ритуксимаб вводят в дозе и с интервалом введения, представленным в настоящем описании, в течение периода времени, например, по меньшей мере, 2 недели, например, по меньшей мере 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 недель или более. Например, ритуксимаб вводят в дозе и с интервалом введения, представленным в настоящем описании, всего в течение по меньшей мере 4 доз на цикл лечения (например, по меньшей мере 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16 или более доз на цикл лечения).

В некоторых вариантах осуществления антитело против CD20 содержит офатумумаб. Офатумумаб является моноклональным антителом IgG1κ человека против CD20 с молекулярной массой приблизительно 149 кДа. Например, офатумумаб получают с использованием трансгенной мыши и гибридомной технологии и экспрессируют и выделяют из линии рекомбинантных клеток мыши (NS0). См., например, www.accessdata.fda.gov/drugsatfda_docs/label/2009/125326lbl.pdf и в описаниях клинических испытаний под идентификационными номерами NCT01363128, NCT01515176, NCT01626352 и NCT01397591. В вариантах осуществления CAR-экспрессирующую клетку, представленную в настоящем описании, вводят индивидууму в комбинации с офатумумабом. В вариантах осуществления индивидуум имеет CLL или SLL.

В некоторых вариантах осуществления офатумумаб вводят в виде внутривенной инфузии. Например, каждая инфузия включает приблизительно 150-3000 мг (например, приблизительно 150-200, 200-250, 250-300, 300-350, 350-400, 400-450, 450-500, 500-550, 550-600, 600-650, 650-700, 700-750, 750-800, 800-850, 850-900, 900-950, 950-1000, 1000-1200, 1200-1400, 1400-1600, 1600-1800, 1800-2000, 2000-2200, 2200-2400, 2400-2600, 2600-2800 или 2800-3000 мг) офатумумаба. В вариантах осуществления офатумумаб вводят в исходной дозе приблизительно 300 мг, с последующей дозой 2000 мг, например, приблизительно 11 доз, например, в течение 24 недель. В некоторых вариантах осуществления офатумумаб вводят с интервалом введения по меньшей мере 4 дня, например, 4, 7, 14, 21, 28, 35 дня или более. Например, офатумумаб вводят с интервалом введения по меньшей мере 1 неделя, например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 24, 26, 28, 20, 22, 24, 26, 28, 30 недель или более. В некоторых вариантах осуществления офатумумаб вводят в дозе и с интервалом введения, представленным в настоящем описании, в течение периода времени, например, по меньшей мере 1 неделя, например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 40, 50, 60 недель или более, или 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 месяцев или более или 1, 2, 3, 4, 5 лет или более. Например, офатумумаб вводят в дозе и с интервалом введения, представленным в настоящем описании, всего для по меньшей мере 2 доз на цикл лечения (например, по меньшей мере 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 18, 20 или более доз на цикл лечения).

В некоторых случаях, антитело против CD20 содержит окрелизумаб. Окрелизумаб является гуманизированным моноклональным антителом против CD20, например, как описано в описаниях клинических испытаний под идентификационными номерами NCT00077870, NCT01412333, NCT00779220, NCT00673920, NCT01194570 и Kappos et al. Lancet. 19,378(2011):1779-87.

В некоторых случаях антитело против CD20 содержит велтузумаб. Велтузумаб является гуманизированным моноклональным антителом против CD20. См., например, описания клинических испытаний под идентификационными номерами NCT00547066, NCT00546793, NCT01101581 и Goldenberg et al. Leuk Lymphoma. 51(5)(2010):747-55.

В некоторых случаях антитело против CD20 содержит GA101. GA101 (также называемое обинутузумабом или RO5072759) является гуманизированным и глико-сконструированным моноклональным антителом против CD20. См., например, Robak. Curr. Opin. Investig. Drugs. 10,6(2009):588-96, описания клинических испытаний под идентификационными номерами: NCT01995669, NCT01889797, NCT02229422 и NCT01414205 и www.accessdata.fda.gov/drugsatfda_docs/label/2013/125486s000lbl.pdf.

В некоторых случаях антитело против CD20 содержит AME-133v. AME-133v (также называемое LY2469298 или окаратузумабом) является гуманизированным моноклональным антителом IgG1 против CD20 с повышенной аффинностью к рецептору FcγRIIIa и повышенной активностью антителозависимой клеточной цитотоксичности (ADCC) по сравнению с ритуксимабом. См., например, Robak et al. BioDrugs 25,1(2011):13-25 и Forero-Torres et al. Clin Cancer Res. 18,5(2012):1395-403.

В некоторых случаях антитело против CD20 содержит PRO131921. PRO131921 является гуманизированным моноклональным антителом против CD20, сконструированным так, чтобы оно имело лучшее связывание с FcγRIIIa и повышенную ADCC по сравнению с ритуксимабом. См., например, Robak et al. BioDrugs 25,1(2011):13-25 и Casulo et al. Clin Immunol. 154,1(2014):37-46 и описание клинических испытаний под идентификационным номером NCT00452127.

В некоторых случаях антитело против CD20 содержит TRU-015. TRU-015 является слитым белком против CD20, полученным из доменов антитела против CD20. TRU-015 меньше моноклональных антител, но сохраняет Fc-опосредованные эффекторные функции. См., например, Robak et al. BioDrugs 25,1(2011):13-25. TRU-015 содержит одноцепочечный вариабельный фрагмент против CD20 (scFv), связанный с шарнирной областью IgG1 человека, доменами CH2 и CH3, но без доменов CH1 и CL.

В некоторых вариантах осуществления антитело против CD20, представленное в настоящем описании, конъюгируют или иным образом связывают с терапевтическим средством, например, химиотерапевтическим средством (например, цитоксаном, флударабином, ингибитором гистондеацетилазы, деметилирующим средством, пептидной вакциной, противоопухолевым антибиотиком, ингибитором тирозинкиназы, алкилирующим средством, ингибитором микротрубочек или антимитотическим средством), противоаллергическим средством, противорвотным средством (или антиэметиком), анальгетиком или цитопротектором, представленным в настоящем описании.

В вариантах осуществления CAR-экспрессирующую клетку, представленную в настоящем описании, вводят индивидууму в комбинации с ингибитором B-клеточной лимфомы 2 (BCL-2) (например, венетоклаксом, также называемым ABT-199 или GDC-0199;) и/или ритуксимабом. В вариантах осуществления CAR-экспрессирующую клетку, представленную в настоящем описании, вводят индивидууму в комбинации с венетоклаксом и ритуксимабом. Венетоклакс является низкомолекулярным соединением, ингибирующим антиапоптотический белок, BCL-2. Структура венетоклакса (4-(4-{[2-(4-хлорфенил)-4,4-диметилциклогекс-1-ен-1-ил]метил}пиперазин-1-ил)-N-({3-нитро-4-[(тетрагидро-2H-пиран-4-илметил)амино]фенил}сульфонил)-2-(1H-пирроло[2,3-b]пиридин-5-илокси)бензамид) представлена ниже.

В вариантах осуществления индивидуум имеет CLL. В вариантах осуществления индивидуум имеет рецидивирующий CLL, например, индивидууму ранее проводили противораковую терапию. В вариантах осуществления венетоклакс вводят в дозе приблизительно 15-600 мг (например, 15-20, 20-50, 50-75, 75-100, 100-200, 200-300, 300-400, 400-500 или 500-600 мг), например, ежедневно. В вариантах осуществления ритуксимаб вводят в дозе приблизительно 350-550 мг/м² (например, 350-375, 375-400, 400-425, 425-450, 450-475 или 475-500 мг/м²), например, внутривенно, например, ежемесячно.

Не будучи связанными какой-либо теорией, полагают, что при некоторых злокачественных новообразованиях B-клетки (например, B-регуляторные клетки) могут супрессировать T-клетки. Кроме того, полагают, что комбинация оксиплатина и средства для истощения B-клеток может снижать размер опухоли и/или устранять опухоли у индивидуума. В некоторых вариантах осуществления CAR-экспрессирующую клетку, представленную в настоящем описании (например, CAR BCMA) вводят в комбинации со средством для истощения B-клеток (например, CAR CD19-экспрессирующей клеткой, CAR CD20-экспрессирующей клеткой, ритуксимабом, окрелизумабом, эпратузумабом или белимумабом) и оксиплатином. В вариантах осуществления злокачественная клетка может являться CD19-отрицательной, или CD19-положительной, или BCMA-отрицательной, или BMCA-положительной. В вариантах осуществления CAR-экспрессирующую клетку, представленную в настоящем описании (например, CAR BCMA), вводят в комбинации со средством для истощения B-клеток и оксиплатином для лечения злокачественного новообразования, например, злокачественного новообразования, представленного в настоящем описании, например, солидным раком, например, раком предстательной железы, раком поджелудочной железы или раком легких.

В вариантах осуществления CAR-экспрессирующая клетка, представленная в настоящем описании (например, CAR BCMA), может истощать B-клетки (например, B-клетки, имеющие фенотип, подобный плазматической клетке, например, экспрессирующей BCMA, CD19 и/или CD20) у индивидуума. В вариантах осуществления B-клетка может являться CD19-отрицательной, или CD19-положительной, или BCMA-отрицательной, или BMCA-положительной. В некоторых вариантах осуществления CAR-экспрессирующую клетку, представленную в настоящем описании (например, CAR BCMA), вводят в комбинации с оксиплатином. В вариантах осуществления CAR-экспрессирующую клетку, представленную в настоящем описании, вводят в комбинации с оксиплатином и используют для лечения злокачественного новообразования, например, солидного рака, например, рака предстательной железы, рака поджелудочной железы или рака легких. В некоторых вариантах осуществления CAR-экспрессирующую клетку, представленную в настоящем описании, вводят в комбинации с онколитическим вирусом. В вариантах осуществления онколитические вирусы способны селективно реплицироваться и запускать гибель или замедлять рост злокачественной клетки. В некоторых случаях онколитические вирусы не имеют эффектов или имеют минимальный эффект в отношении незлокачественных клеток. Онколитический вирус включает, в качестве неограничивающих примеров, онколитический аденовирус, онколитические вирусы простого герпеса, онколитический ретровирус, онколитический парвовирус, онколитический вирус осповакцины, онколитический вирус Синдбис, онколитический вирус гриппа или онколитический РНК-вирус (например, онколитический реовирус, онколитический вирус псевдочумы птиц (NDV), онколитический вирус кори или онколитический вирус везикулярного стоматита (VSV)).

В некоторых вариантах осуществления онколитический вирус является вирусом, например, рекомбинантным онколитическим вирусом, описываемым в US2010/0178684 A1, включенном в настоящее описание в качестве ссылки в полном объеме. В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный онколитический вирус содержит последовательность нуклеиновой кислоты (например, гетерологичную последовательность нуклеиновой кислоты), кодирующую ингибитор иммунного или воспалительного ответа, например, как описано в US2010/0178684 A1, включенном в настоящее описание в качестве ссылки в полном объеме. В вариантах осуществления рекомбинантный онколитический вирус, например, онколитический NDV, содержит проапоптотический белок (например, апоптин), цитокин (например, ГМ-КСФ, интерферон-гамма, интерлейкин-2 (ИЛ-2), фактор некроза опухоли), иммуноглобулин (например, антитело против фибронектина ED-B), опухоле-ассоциированный антиген, биспецифический адаптерный белок (например, биспецифическое антитело или фрагмент антитела против белка HN NDV и T-клеточного костимуляторного рецептора, такого как CD3 или CD28, или слитый белок ИЛ-2 человека и одноцепочечного антитела против белка HN NDV). См., например, Zamarin et al. Future Microbiol. 7,3(2012):347-67, включенный в настоящее описание в качестве ссылки в полном объеме. В некоторых вариантах осуществления онколитический вирус является химерным онколитическим NDV, описываемым в US8591881 B2, US2012/0122185 A1, или US2014/0271677 A1, каждый из которых включен в настоящее описание в качестве ссылки в полном объеме.

В некоторых вариантах осуществления онколитический вирус содержит условно реплицирующийся аденовирус (CRAd), сконструированный для репликации исключительно в злокачественных клетках. См., например, Alemany et al. Nature Biotechnol. 18(2000):723-27. В некоторых вариантах осуществления онколитический аденовирус содержит вирус, описываемый в таблице 1 на стр. 725 Alemany et al., включенном в настоящее описание в качестве ссылки в полном объеме.

Неограничивающие примеры онколитических вирусов включают следующие:

Онколитический аденовирус группы B (ColoAd1) (PsiOxus Therapeutics Ltd.) (см., например, описание клинического испытания под идентификационным номером: NCT02053220);

ONCOS-102 (ранее известный как CGTG-102), являющийся аденовирусом, содержащим гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор (ГМ-КСФ) (Oncos Therapeutics) (см., например, описание клинического испытания под идентификационным номером: NCT01598129);

VCN-01, являющийся генетически модифицированным онколитическим аденовирусом человека, кодирующим гиалуронидазу PH20 человека (VCN Biosciences, S.L.) (см., например, описания клинических испытаний под идентификационными номерами: NCT02045602 и NCT02045589);

Условно реплицирующийся аденовирус ICOVIR-5, являющийся вирусом, полученным из аденовируса человека дикого типа серотипа 5 (Had5), модифицированного для селективной репликации в злокачественных клетках с дисрегулируемым путем ретинобластомы/E2F (Institut Català d'Oncologia) (см., например, описание клинического испытания под идентификационным номером: NCT01864759);

Celyvir, содержащий полученные из костного мозга аутологичные мезенхимальные стволовые клетки (MSC), инфицированные ICOVIR5, онколитическим аденовирусом (Hospital Infantil Universitario Niño Jesús, Madrid, Spain/Ramon Alemany) (см., например, описание клинического испытания под идентификационным номером: NCT01844661);

CG0070, являющийся условно реплицирующимся онколитическим аденовирусом серотипа 5 (Ad5), в котором промотор E2F-1 человека запускает экспрессию важных вирусных генов E1a, таким образом, ограничивая вирусную репликацию и цитотоксичность дефектными по пути Rb опухолевыми клетками (Cold Genesys, Inc.) (см., например, описание клинического испытания под идентификационным номером: NCT02143804); или

DNX-2401 (ранее известный как Delta-24-RGD), являющийся аденовирусом, сконструированным для селективной репликации в дефектных по пути ретинобластомы (Rb) клетках и для более эффективного инфицирования клеток, экспрессирующих конкретные RGD-связывающие интегрины (Clinica Universidad de Navarra, Universidad de Navarra/DNAtrix, Inc.) (см., например, описание клинического испытания под идентификационным номером: NCT01956734).

В некоторых вариантах осуществления онколитический вирус, представленный в настоящем описании, вводят посредством инъекции, например, подкожной, внутриартериальной, внутривенной, внутримышечной, интратекальной или интраперитонеальной инъекции. В вариантах осуществления онколитический вирус, представленный в настоящем описании, вводят внутриопухолево, трансдермально, чресслизисто, перорально, интраназально или посредством легочного введения.

В варианте осуществления клетки, экспрессирующие CAR, представленный в настоящем описании, вводят индивидууму в комбинации с молекулой, снижающей популяцию Treg-клеток. Способы снижения количества (например, истощения) Treg-клеток известны в этой области и включают, например, истощение CD25, введение циклофосфамида, модуляцию функции GITR. Не желая быть связанными какой-либо теорией, полагают, что снижение количества Treg-клеток у индивидуума перед аферезом или перед введением CAR-экспрессирующей клетки, представленной в настоящем описании, снижает количество нежелательных иммунных клеток (например, Treg) в микроокружении опухоли и снижает риск рецидива у индивидуума. В одном из вариантов осуществления CAR-экспрессирующую клетку, представленную в настоящем описании, вводят индивидууму в комбинации с молекулой, направленно воздействующей на GITR и/или модулирующей функции GITR, такой как агонист GITR и/или антитело против GITR, истощающее регуляторные T-клетки (Treg). В вариантах осуществления клетки, экспрессирующие CAR, представленный в настоящем описании, вводят индивидууму в комбинации с циклофосфамидом. В одном из вариантов осуществления GITR-связывающие молекулы и/или молекулы, модулирующие функции GITR (например, агонист GITR и/или истощающие Treg антитела против GITR) вводят перед введением CAR-экспрессирующей клетки. Например, в одном из вариантов осуществления агониста GITR можно вводить перед аферезом клеток. В вариантах осуществления циклофосфамид вводят индивидууму перед введением (например, инфузией или реинфузией) CAR-экспрессирующей клетки или перед аферезом клеток. В вариантах осуществления циклофосфамид и антитело против GITR вводят индивидууму перед введением (например, инфузией или реинфузией) CAR-экспрессирующей клетки или перед аферезом клеток. В одном из вариантов осуществления индивидуум имеет злокачественное новообразование (например, солидный рак или гемобластоз, такой как множественная миелома, ALL или CLL). В варианте осуществления индивидуум имеет CLL. В вариантах осуществления индивидуум имеет множественную миелому. В вариантах осуществления индивидуум имеет солидный рак, например, солидный рак, представленный в настоящем описании. Примеры агонистов GITR включают, например, слитые белки GITR и антитела против GITR (например, бивалентные антитела против GITR), такие как, например, слитый белок GITR, описываемый в патенте США № 6111090, европейском патенте № 090505B1, патенте США № 8586023, публикациях PCT №: WO2010/003118 и 2011/090754, или антитело против GITR, описываемое, например, в патенте США № 7025962, европейском патенте № 1947183 B1, патенте США № 7812135, патенте США № 8388967, патенте США № 8591886, европейском патенте № EP 1866339, публикации PCT № WO2011/028683, публикации PCT № WO2013/039954, публикации PCT № WO2005/007190, публикации PCT № WO2007/133822, публикации PCT № WO2005/055808, публикации PCT № WO99/40196, публикации PCT № WO2001/03720, публикации PCT № WO99/20758, публикации PCT № WO2006/083289, публикации PCT № WO2005/115451, патенте США № 7618632 и публикации PCT № WO2011/051726.

В одном из вариантов осуществления CAR-экспрессирующую клетку, представленную в настоящем описании, вводят индивидууму в комбинации с ингибитором mTOR, например, ингибитором mTOR, представленным в настоящем описании, например, рапалогом, таким как эверолимус. В одном из вариантов осуществления ингибитор mTOR вводят перед CAR-экспрессирующей клеткой. Например, в одном из вариантов осуществления ингибитор mTOR можно вводить перед аферезом клеток.

В одном из вариантов осуществления CAR-экспрессирующую клетку, представленную в настоящем описании, вводят индивидууму в комбинации с агонистом GITR, например, агонистом GITR, представленным в настоящем описании. В одном из вариантов осуществления агониста GITR вводят перед CAR-экспрессирующей клеткой. Например, в одном из вариантов осуществления агониста GITR можно вводить перед аферезом клеток.

В одном из вариантов осуществления CAR-экспрессирующую клетку, представленную в настоящем описании, вводят индивидууму в комбинации с ингибитором протеинтирозинфосфатазы, например, ингибитором протеинтирозинфосфатазы, представленным в настоящем описании. В одном из вариантов осуществления ингибитор протеинтирозинфосфатазы является ингибитором SHP-1, например, ингибитором SHP-1, представленным в настоящем описании, таким как, например, стибоглюконат натрия. В одном из вариантов осуществления ингибитор протеинтирозинфосфатазы является ингибитором SHP-2.

В одном из вариантов осуществления CAR-экспрессирующую клетку, представленную в настоящем описании, можно использовать в комбинации с ингибитором киназы. В одном из вариантов осуществления ингибитор киназы является ингибитором CDK4, например, ингибитором CDK4, представленным в настоящем описании, например, ингибитором CDK4/6, таким как, например, 6-ацетил-8-циклопентил-5-метил-2-(5-пиперазин-1-ил-пиридин-2-иламино)-8H-пиридо[2,3-d]пиримидин-7-он гидрохлорид (также обозначаемый как палбоциклиб или PD0332991). В одном из вариантов осуществления ингибитор киназы является ингибитором BTK, например, ингибитором BTK, представленным в настоящем описании, таким как, например, ибрутиниб. В одном из вариантов осуществления ингибитор киназы является ингибитором mTOR, например, ингибитором mTOR, представленным в настоящем описании, таким как, например, рапамицин, аналог рапамицина, OSI-027. Ингибитор mTOR может являться, например, ингибитором mTORC1 и/или ингибитором mTORC2, например, ингибитором mTORC1 и/или ингибитором mTORC2, представленным в настоящем описании. В одном из вариантов осуществления ингибитор киназы является ингибитором MNK, например, ингибитором MNK, представленным в настоящем описании, таким как, например, 4-амино-5-(4-фторанилино)-пиразоло[3,4-d]пиримидин. Ингибитор MNK может являться, например, ингибитором MNK1a, MNK1b, MNK2a и/или MNK2b. В одном из вариантов осуществления ингибитором киназы является двойной ингибитор PI3K/mTOR, представленный в настоящем описании, такой как, например, PF-04695102. В одном из вариантов осуществления ингибитор киназы является ингибитором DGK, например, ингибитором DGK, представленным в настоящем описании, таким как, например, DGKinh1 (D5919) или DGKinh2 (D5794).

В одном из вариантов осуществления ингибитор киназы является ингибитором CDK4, выбранным из алоизина A, флавопиридола или HMR-1275, 2-(2-хлорфенил)-5,7-дигидрокси-8-[(3S,4R)-3-гидрокси-1-метил-4-пиперидинил]-4-хроменона, кризотиниба (PF-02341066, 2-(2-хлорфенил)-5,7-дигидрокси-8-[(2R,3S)-2-(гидроксиметил)-1-метил-3-пирролидинил]-4H-1-бензопиран-4-она гидрохлорида (P276-00), 1-метил-5-[[2-[5-(трифторметил)-1H-имидазол-2-ил]-4-пиридинил]окси]-N-[4-(трифторметил)фенил]-1H-бензимидазол-2-амина (RAF265), индисулама (E7070), росковитина (CYC202), палбоциклиба (PD0332991), динациклиба (SCH727965), N-[5-[[(5-трет-бутилоксазол-2-ил)метил]тио]тиазол-2-ил]пиперидин-4-карбоксамида (BMS 387032), 4-[[9-хлор-7-(2,6-дифторфенил)-5H-пиримидо[5,4-d][2]бензазепин-2-ил]амино]-бензойной кислоты (MLN8054), 5-[3-(4,6-дифтор-1H-бензимидазол-2-ил)-1H-индазол-5-ил]-N-этил-4-метил-3-пиридинметанамина (AG-024322), N-(пиперидин-4-ил)амида 4-(2,6-дихлорбензоиламино)-1H-пиразол-3-карбоновой кислоты (AT7519), 4-[2-метил-1-(1-метилэтил)-1H-имидазол-5-ил]-N-[4-(метилсульфонил)фенил]-2-пиримидинамина (AZD5438) и XL281 (BMS908662).

В одном из вариантов осуществления ингибитор киназы является ингибитором CDK4, например, палбоциклибом (PD0332991), и палбоциклиб вводят в дозе приблизительно 50 мг, 60 мг, 70 мг, 75 мг, 80 мг, 90 мг, 100 мг, 105 мг, 110 мг, 115 мг, 120 мг, 125 мг, 130 мг, 135 мг (например, 75 мг, 100 мг или 125 мг) ежедневно в течение периода времени, например, ежедневно в течение 14-21 дня 28-дневного цикла или ежедневно в течение 7-12 дней 21-дневного цикла. В одном из вариантов осуществления проводят 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 или более циклов введения палбоциклиба.

В вариантах осуществления CAR-экспрессирующую клетку, представленную в настоящем описании, вводят индивидууму в комбинации с ингибитором циклин-зависимой киназы (CDK) 4 или 6, например, ингибитором CDK4 или ингибитором CDK6, представленным в настоящем описании. В вариантах осуществления CAR-экспрессирующую клетку, представленную в настоящем описании, вводят индивидууму в комбинации с ингибитором CDK4/6 (например, ингибитором, направленно воздействующим и на CDK4, и на CDK6), например, ингибитором CDK4/6, представленным в настоящем описании. В варианте осуществления индивидуум имеет MCL. MCL является агрессивным злокачественным новообразованием, плохо отвечающим на доступные в настоящее время способы терапии, т.е., по существу, неизлечим. Во многих случаях MCL в клетках MCL экспрессируется циклин D1 (регулятор CDK4/6) (например, в результате хромосомной транслокации, включающей гены иммуноглобулинов и циклина D1). Таким образом, не будучи связанными какой-либо теорией, полагают, что клетки MCL крайне чувствительны к ингибированию CDK4/6 с высокой специфичностью (т.е. минимальным эффектом в отношении нормальных иммунных клеток). Ингибиторы CDK4/6 в отдельности обладают некоторой эффективностью в лечении MCL, но с их помощью достигают лишь частичной ремиссии с высокой частотой рецидивирования. Примером ингибитора CDK4/6 является LEE011 (также известный как ридоциклиб), структура которого представлена ниже.

Не будучи связанными какой-либо теорией, полагают, что посредством введения CAR-экспрессирующей клетки, представленной в настоящем описании, с ингибитором CDK4/6 (например, LEE011 или другим ингибитором CDK4/6, представленным в настоящем описании) можно достигать более высокой отвечаемости, например, с более высокой частотой ремиссии и/или более низкой частотой рецидивирования, например, по сравнению с ингибитором CDK4/6 в отдельности.

В одном из вариантов осуществления ингибитор киназы является ингибитором BTK, выбранным из ибрутиниба (PCI-32765), GDC-0834, RN-486, CGI-560, CGI-1764, HM-71224, CC-292, ONO-4059, CNX-774 и LFM-A13. В предпочтительном варианте осуществления ингибитор BTK не снижает или ингибирует киназную активность интерлейкин-2-индуцибельной киназы (ITK) и выбран из GDC-0834, RN-486, CGI-560, CGI-1764, HM-71224, CC-292, ONO-4059, CNX-774 и LFM-A13.

В одном из вариантов осуществления ингибитор киназы является ингибитором BTK, например, ибрутинибом (PCI-32765). В вариантах осуществления CAR-экспрессирующую клетку, представленную в настоящем описании, вводят индивидууму в комбинации с ингибитором BTK (например, ибрутинибом). В вариантах осуществления CAR-экспрессирующую клетку, представленную в настоящем описании, вводят индивидууму в комбинации с ибрутинибом (также называемым PCI-32765). Структура ибрутиниба (1-[(3R)-3-[4-Амино-3-(4-феноксифенил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил]пиперидин-1-ил]проп-2-ен-1-она) представлена ниже.

В вариантах осуществления индивидуум имеет CLL, лимфому из клеток мантийной зоны (MCL) или мелкоклеточную лимфоцитарную лимфому (SLL). Например, индивидуум имеет делецию в коротком плече хромосомы 17 (del(17p), например, в лейкозной клетке). В других примерах индивидуум не имеет del(17p). В вариантах осуществления индивидуум имеет рецидивирующий CLL или SLL, например, индивидууму ранее проводили противораковую терапию (например, ранее проводили одну, две, три или четыре предшествующие противораковые терапии). В вариантах осуществления индивидуум имеет рефрактерный CLL или SLL. В других вариантах осуществления индивидуум имеет фолликулярную лимфому, например, рецидивирующую или рефрактерную фолликулярную лимфому. В некоторых вариантах осуществления ибрутиниб вводят в дозе приблизительно 300-600 мг/день (например, приблизительно 300-350, 350-400, 400-450, 450-500, 500-550 или 550-600 мг/день, например, приблизительно 420 мг/день или приблизительно 560 мг/день), например, перорально. В вариантах осуществления ибрутиниб вводят в дозе приблизительно 250 мг, 300 мг, 350 мг, 400 мг, 420 мг, 440 мг, 460 мг, 480 мг, 500 мг, 520 мг, 540 мг, 560 мг, 580 мг, 600 мг (например, 250 мг, 420 мг или 560 мг) ежедневно в течение периода времени, например, ежедневно в течение 21-дневного цикла или ежедневно в течение 28-дневного цикла. В одном из вариантов осуществления проводят 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 или более циклов введения ибрутиниба. В некоторых вариантах осуществления ибрутиниб вводят в комбинации с ритуксимабом. См., например, Burger et al. (2013) Ibrutinib In Combination With Rituximab (iR) Is Well Tolerated and Induces a High Rate Of Durable Remissions In Patients With High-Risk Chronic Lymphocytic Leukemia (CLL): New, Updated Results Of a Phase II Trial In 40 Patients, Abstract 675, представленный на 55^th ASH Annual Meeting and Exposition, New Orleans, LA 7-10 Dec. Не будучи связанными какой-либо теорией, полагают, что добавление ибрутиниба повышает T-клеточный пролиферативный ответ и может сдвигать T-клетки с фенотипа T-хелпера-2 (Th2) к фенотипу T-хелпера-1 (Th1). Th1 и Th2 являются фенотипами T-хелперов, при этом Th1 и Th2 направляют разные пути иммунного ответа. Фенотип Th1 ассоциирован с провоспалительными ответами, например, для цитолиза клеток, такими как ответы на внутриклеточные патогены/вирусы или злокачественные клетки или сохраняющиеся аутоиммунные ответы. Фенотип Th2 ассоциирован с накоплением эозинофилов и противовоспалительными ответами.

В некоторых вариантах осуществления способов, применения и композиций по настоящему изобретению ингибитор BTK является ингибитором BTK, описываемым в международной заявке № WO/2015/079417, включенной в настоящее описание в качестве ссылки в полном объеме. Например, в некоторых вариантах осуществления ингибитор BTK является соединением формулы (I) или его фармацевтически приемлемой солью;

(I)

где,

R1 является водородом, C1-C6-алкилом, необязательно замещенным гидроксигруппой;

R2 является водородом или галогеном;

R3 является водородом или галогеном;

R4 является водородом;

R5 является водородом или галогеном;

или R4 и R5 соединены друг с другом и означают связь, -CH2-, -CH2-CH2-, -CH=CH-, -CH=CH-CH2-, -CH2-CH=CH-, или -CH2-CH2-CH2-;

R6 и R7 независимо друг от друга означают H, C1-C6-алкил, необязательно замещенный гидроксилом, C3-C6-циклоалкил, необязательно замещенный галогеном или гидроксигруппой, или галоген;

R8, R9, R, R', R10 и R11 независимо друг от друга означают H, или C1-C6-алкил, необязательно замещенный C1-C6-алкоксигруппой; или любые два из R8, R9, R, R', R10 и R11 вместе с атомом углерода, с которым они соединены, могут образовывать 3-6-членное насыщенное карбоциклическое кольцо;

R12 является водородом или C1-C6-алкилом, необязательно замещенным галогеном или C1-C6-алкоксигруппой;

или R12 и любой из R8, R9, R, R', R10 или R11 вместе с атомами, с которыми они связаны, могут образовывать 4-, 5-, 6- или 7-членное азациклическое кольцо, при этом кольцо можно необязательно замещать галогеном, цианогруппой, гидроксилом, C1-C6-алкилом или C1-C6-алкоксигруппой;

n является 0 или 1; и

R13 является C2-C6-алкенилом необязательно замещенным C1-C6-алкилом, C1-C6-алкоксигруппой или N,N-ди-C1-C6-алкиламиногруппой; C2-C6-алкинилом, необязательно замещенным C1-C6-алкилом или C1-C6-алкоксигруппой, или C2-C6-алкиленилоксидом, необязательно замещенным C1-C6-алкилом.

В некоторых вариантах осуществления ингибитор BTK формулы I выбран из: N-(3-(5-((1-акрилоилазетидин-3-ил)окси)-6-аминопиримидин-4-ил)-5-фтор-2-метилфенил)-4-циклопропил-2-фторбензамида, (E)-N-(3-(6-амино-5-((1-(бут-2-еноил)азетидин-3-ил)окси)пиримидин-4-ил)-5-фтор-2-метилфенил)-4-циклопропил-2-фторбензамида, N-(3-(6-амино-5-((1-проиолоилазетидин-3-ил)окси)пиримидин-4-ил)-5-фтор-2-метилфенил)-4-циклопропил-2-фторбензамида, N-(3-(6-амино-5-((1-(бут-2-иноил)азетидин-3-ил)окси)пиримидин-4-ил)-5-фтор-2-метилфенил)-4-циклопропил-2-фторбензамида, N-(3-(5-((1-акрилоилпиперидин-4-ил)окси)-6-аминопиримидин-4-ил)-5-фтор-2-метилфенил)-4-циклопропил-2-фторбензамида, N-(3-(6-амино-5-(2-(N-метилакриламидо)этокси)пиримидин-4-ил)-5-фтор-2-метилфенил)-4-циклопропил-2-фторбензамида, (E)-N-(3-(6-амино-5-(2-(N-метилбут-2-енамидо)этокси)пиримидин-4-ил)-5-фтор-2-метилфенил)-4-циклопропил-2-фторбензамида, N-(3-(6-амино-5-(2-(N-метилпропиоламидо)этокси)пиримидин-4-ил)-5-фтор-2-метилфенил)-4-циклопропил-2-фторбензамида, (E)-N-(3-(6-амино-5-(2-(4-метокси-N-метилбут-2-енамидо)этокси)пиримидин-4-ил)-5-фтор-2-метилфенил)-4-циклопропил-2-фторбензамида, N-(3-(6-амино-5-(2-(N-метилбут-2-инамидо)этокси)пиримидин-4-ил)-5-фтор-2-метилфенил)-4-циклопропил-2-фторбензамида, N-(2-((4-амино-6-(3-(4-циклопропил-2-фторбензамидо)-5-фтор-2-метилфенил)пиримидин-5-ил)окси)этил)-N-метилоксиран-2-карбоксамида, N-(2-((4-амино-6-(3-(6-циклопропил-8-фтор-1-оксоизохинолин-2(1H)-ил)фенил)пиримидин-5-ил)окси)этил)-N-метилакриламида, N-(3-(5-(2-акриламидоэтокси)-6-аминопиримидин-4-ил)-5-фтор-2-метилфенил)-4-циклопропил-2-фторбензамида, N-(3-(6-амино-5-(2-(N-этилакриламидо)этокси)пиримидин-4-ил)-5-фтор-2-метилфенил)-4-циклопропил-2-фторбензамида, N-(3-(6-амино-5-(2-(N-(2-фторэтил)акриламидо)этокси)пиримидин-4-ил)-5-фтор-2-метилфенил)-4-циклопропил-2-фторбензамида, N-(3-(5-((1-акриламидоциклопропил)метокси)-6-аминопиримидин-4-ил)-5-фтор-2-метилфенил)-4-циклопропил-2-фторбензамида, (S)-N-(3-(5-(2-акриламидопропокси)-6-аминопиримидин-4-ил)-5-фтор-2-метилфенил)-4-циклопропил-2-фторбензамида, (S)-N-(3-(6-амино-5-(2-(бут-2-инамидо)пропокси)пиримидин-4-ил)-5-фтор-2-метилфенил)-4-циклопропил-2-фторбензамида, (S)-N-(3-(6-амино-5-(2-(N-метилакриламидо)пропокси)пиримидин-4-ил)-5-фтор-2-метилфенил)-4-циклопропил-2-фторбензамида, (S)-N-(3-(6-амино-5-(2-(N-метилбут-2-инамидо)пропокси)пиримидин-4-ил)-5-фтор-2-метилфенил)-4-циклопропил-2-фторбензамида, N-(3-(6-амино-5-(3-(N-метилакриламидо)пропокси)пиримидин-4-ил)-5-фтор-2-метилфенил)-4-циклопропил-2-фторбензамида, (S)-N-(3-(5-((1-акрилоилпирролидин-2-ил)метокси)-6-аминопиримидин-4-ил)-5-фтор-2-метилфенил)-4-циклопропил-2-фторбензамида, (S)-N-(3-(6-амино-5-((1-(бут-2-иноил)пирролидин-2-ил)метокси)пиримидин-4-ил)-5-фтор-2-метилфенил)-4-циклопропил-2-фторбензамида, (S)-2-(3-(5-((1-акрилоилпирролидин-2-ил)метокси)-6-аминопиримидин-4-ил)-5-фтор-2-(гидроксиметил)фенил)-6-циклопропил-3,4-дигидроизохинолин-1(2H)-она, N-(2-((4-амино-6-(3-(6-циклопропил-1-оксо-3,4-дигидроизохинолин-2(1H)-ил)-5-фтор-2-(гидроксиметил)фенил)пиримидин-5-ил)окси)этил)-N-метилакриламида, N-(3-(5-(((2S,4R)-1-акрилоил-4-метоксипирролидин-2-ил)метокси)-6-аминопиримидин-4-ил)-5-фтор-2-метилфенил)-4-циклопропил-2-фторбензамида, N-(3-(6-амино-5-(((2S,4R)-1-(бут-2-иноил)-4-метоксипирролидин-2-ил)метокси)пиримидин-4-ил)-5-фтор-2-метилфенил)-4-циклопропил-2-фторбензамида, 2-(3-(5-(((2S,4R)-1-акрилоил-4-метоксипирролидин-2-ил)метокси)-6-аминопиримидин-4-ил)-5-фтор-2-(гидроксиметил)фенил)-6-циклопропил-3,4-дигидроизохинолин-1(2H)-она, N-(3-(5-(((2S,4S)-1-акрилоил-4-метоксипирролидин-2-ил)метокси)-6-аминопиримидин-4-ил)-5-фтор-2-метилфенил)-4-циклопропил-2-фторбензамида, N-(3-(6-Амино-5-(((2S,4S)-1-(бут-2-иноил)-4-метоксипирролидин-2-ил)метокси)пиримидин-4-ил)-5-фтор-2-метилфенил)-4-циклопропил-2-фторбензамида, N-(3-(5-(((2S,4R)-1-акрилоил-4-фторпирролидин-2-ил)метокси)-6-аминопиримидин-4-ил)-5-фтор-2-метилфенил)-4-циклопропил-2-фторбензамида, N-(3-(6-Амино-5-(((2S,4R)-1-(бут-2-иноил)-4-фторпирролидин-2-ил)метокси)пиримидин-4-ил)-5-фтор-2-метилфенил)-4-циклопропил-2-фторбензамида, (S)-N-(3-(5-((1-акрилоилазетидин-2-ил)метокси)-6-аминопиримидин-4-ил)-5-фтор-2-метилфенил)-4-циклопропил-2-фторбензамида, (S)-N-(3-(6-амино-5-((1-пропиолоилазетидин-2-ил)метокси)пиримидин-4-ил)-5-фтор-2-метилфенил)-4-циклопропил-2-фторбензамида, (S)-2-(3-(5-((1-акрилоилазетидин-2-ил)метокси)-6-аминопиримидин-4-ил)-5-фтор-2-(гидроксиметил)фенил)-6-циклопропил-3,4-дигидроизохинолин-1(2H)-она, (R)-N-(3-(5-((1-акрилоилазетидин-2-ил)метокси)-6-аминопиримидин-4-ил)-5-фтор-2-метилфенил)-4-циклопропил-2-фторбензамида, (R)-N-(3-(5-((1-акрилоилпиперидин-3-ил)метокси)-6-аминопиримидин-4-ил)-5-фтор-2-метилфенил)-4-циклопропил-2-фторбензамида, N-(3-(5-(((2R,3S)-1-акрилоил-3-метоксипирролидин-2-ил)метокси)-6-аминопиримидин-4-ил)-5-фтор-2-метилфенил)-4-циклопропил-2-фторбензамида, N-(3-(5-(((2S,4R)-1-акрилоил-4-цианопирролидин-2-ил)метокси)-6-аминопиримидин-4-ил)-5-фтор-2-метилфенил)-4-циклопропил-2-фторбензамида или N-(3-(5-(((2S,4S)-1-акрилоил-4-цианопирролидин-2-ил)метокси)-6-аминопиримидин-4-ил)-5-фтор-2-метилфенил)-4-циклопропил-2-фторбензамида.

Если не указано иное, химические термины, используемые выше в описании ингибитора BTK формулы I, используют в их значении, указанном в международной заявке № WO/2015/079417, включенной в настоящее описание в качестве ссылки в полном объеме.

В одном из вариантов осуществления ингибитор киназы является ингибитором mTOR, выбранным из темсиролимуса, ридафоролимуса (1R,2R,4S)-4-[(2R)-2[(1R,9S,12S,15R,16E,18R,19R,21R, 23S,24E,26E,28Z,30S,32S,35R)-1,18-дигидрокси-19,30-диметокси-15,17,21,23,29,35-гексаметил-2,3,10,14,20-пентаоксо-11,36-диокса-4-азатрицикло[30.3.1.0^4,9]гексатриаконта-16,24,26,28-тетраен-12-ил]пропил]-2-метоксициклогексилдиметилфосфината, также известного как AP23573 и MK8669, эверолимуса (RAD001), рапамицина (AY22989), симапимода, (5-{2,4-бис[(3S)-3-метилморфолин-4-ил]пиридо[2,3-d]пиримидин-7-ил}-2-метоксифенил)метанола (AZD8055), 2-амино-8-[транс-4-(2-гидроксиэтокси)циклогексил]-6-(6-метокси-3-пиридинил)-4-метил-пиридо[2,3-d]пиримидин-7(8H)-она (PF04691502) и N²-[1,4-диоксо-4-[[4-(4-оксо-8-фенил-4H-1-бензoпиран-2-ил)морфолиний-4-ил]метокси]бутил]-L-аргинилглицил-L-α-аспартил-L-серин-(SEQ ID NO: 383) внутренней соли (SF1126) и XL765.

В одном из вариантов осуществления ингибитор киназы является ингибитором mTOR, например, рапамицином, и рапамицин вводят в дозе приблизительно 3 мг, 4 мг, 5 мг, 6 мг, 7 мг, 8 мг, 9 мг, 10 мг (например, 6 мг) ежедневно в течение периода времени, например, ежедневно в течение 21-дневного цикла или ежедневно в течение 28-дневного цикла. В одном из вариантов осуществления проводят 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 или более циклов введения рапамицина. В одном из вариантов осуществления ингибитор киназы является ингибитором mTOR, например, эверолимусом, и эверолимус вводят в дозе приблизительно 2 мг, 2,5 мг, 3 мг, 4 мг, 5 мг, 6 мг, 7 мг, 8 мг, 9 мг, 10 мг, 11 мг, 12 мг, 13 мг, 14 мг, 15 мг (например, 10 мг) ежедневно в течение периода времени, например, ежедневно в течение 28-дневного цикла. В одном из вариантов осуществления проводят 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 или более циклов введения эверолимуса.

В одном из вариантов осуществления ингибитор киназы является ингибитором MNK, выбранным из CGP052088, 4-амино-3-(p-фторфениламино)-пиразоло[3,4-d]пиримидина (CGP57380), церкоспорамида, ETC-1780445-2 и 4-амино-5-(4-фторанилино)-пиразоло[3,4-d]пиримидина.

В вариантах осуществления CAR-экспрессирующую клетку, представленную в настоящем описании, вводят индивидууму в комбинации с ингибитором фосфоинозитол-3-киназы (PI3K) (например, ингибитором PI3K, представленным в настоящем описании, например, иделалисибом или дувелисибом) и/или ритуксимабом. В вариантах осуществления CAR-экспрессирующую клетку, представленную в настоящем описании, вводят индивидууму в комбинации с иделалисибом и ритуксимабом. В вариантах осуществления CAR-экспрессирующую клетку, представленную в настоящем описании, вводят индивидууму в комбинации с дувелисибом и ритуксимабом. Иделалисиб (также называемый GS-1101 или CAL-101, Gilead) является низкомолекулярным соединением, блокирующим дельта-изоформу PI3K. Структура иделалисиба (5-фтор-3-фенил-2-[(1S)-1-(7H-пурин-6-иламино)пропил]-4(3H)-хиназолинона) представлена ниже.

Дувелисиб (также называемый IPI-145, Infinity Pharmaceuticals and Abbvie) является низкомолекулярным соединением, блокирующим PI3K-δ,γ. Структура дувелисиба (8-хлор-2-фенил-3-[(1S)-1-(9H-пурин-6-иламино)этил]-1(2H)-изохинолинонп) представлена ниже.

В вариантах осуществления индивидуум имеет CLL. В вариантах осуществления индивидуум имеет рецидивирующий CLL, например, индивидууму ранее проводили противораковую терапию (например, ранее вводили антитело против CD20 или ранее вводили ибрутиниб). Например, индивидуум имеет делецию в коротком плече хромосомы 17 (del(17p), например, в лейкозной клетке). В других примерах индивидуум не имеет del(17p). В вариантах осуществления индивидуум содержит лейкозную клетку, содержащую мутацию в гене вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина (IgV_H). В других вариантах осуществления индивидуум не содержит лейкозную клетку, содержащую мутацию в гене вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина (IgV_H). В вариантах осуществления индивидуум имеет делецию в длинном плече хромосомы 11 (del(11q)). В других вариантах осуществления индивидуум не имеет del(11q). В вариантах осуществления иделалисиб вводят в дозе приблизительно 100-400 мг (например, 100-125, 125-150, 150-175, 175-200, 200-225, 225-250, 250-275, 275-300, 325-350, 350-375 или 375-400 мг), например, BID. В вариантах осуществления дувелисиб вводят в дозе приблизительно 15-100 мг (например, приблизительно 15-25, 25-50, 50-75 или 75-100 мг), например, дважды в сутки. В вариантах осуществления ритуксимаб вводят в дозе приблизительно 350-550 мг/м² (например, 350-375, 375-400, 400-425, 425-450, 450-475 или 475-500 мг/м²), например, внутривенно.

В вариантах осуществления CAR-экспрессирующую клетку, представленную в настоящем описании, вводят индивидууму в комбинации с ингибитором киназы анапластической лимфомы (ALK). Неограничивающие примеры киназ ALK включают кризотиниб (Pfizer), церитиниб (Novartis), алектиниб (Chugai), бригатиниб (также называемый AP26113, Ariad), энтректиниб (Ignyta), PF-06463922 (Pfizer), TSR-011 (Tesaro) (см., например, описание клинического испытания под идентификационным номером NCT02048488), CEP-37440 (Teva) и X-396 (Xcovery). В некоторых вариантах осуществления индивидуум имеет солидный рак, например, солидный рак, представленный в настоящем описании, например, рак легких.

Химическим названием кризотиниба является 3-[(1R)-1-(2,6-дихлор-3-фторфенил)этокси]-5-(1-пиперидин-4-илпиразол-4-ил)пиридин-2-амин. Химическим названием церитиниба является 5-хлор-N²-[2-изопропокси-5-метил-4-(4-пиперидинил)фенил]-N⁴-[2-(изопропилсульфонил)фенил]-2,4-пиримидиндиамин. Химическим названием алектиниба является 9-этил-6,6-диметил-8-(4-морфолинопиперидин-1-ил)-11-оксо-6,11-дигидро-5H-бензo[b]карбазол-3-кабонитрил. Химическим названием бригатиниба является 5-хлор-N²-{4-[4-(диметиламино)-1-пиперидинил]-2-метоксифенил}-N⁴-[2-(диметилфосфорил)фенил]-2,4-пиримидиндиамин. Химическим названием энтректиниба является N-(5-(3,5-дифторбензил)-1H-индазол-3-ил)-4-(4-метилпиперазин-1-ил)-2-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)бензамид. Химическим названием PF-06463922 является (10R)-7-амино-12-фтор-2,10,16-триметил-15-оксо-10,15,16,17-тетрагидро-2H-8,4-(метено)пиразоло[4,3-h][2,5,11]-бензоксадиазациклотетрадецин-3-карбонитрил. Химической структурой CEP-37440 является (S)-2-((5-хлор-2-((6-(4-(2-гидроксиэтил)пиперазин-1-ил)-1-метокси-6,7,8,9-тетрагидро-5H-бензo[7]аннулен-2-ил)амино)пиримидин-4-ил)амино)-N-метилбензамид. Химическим названием X-396 является (R)-6-амино-5-(1-(2,6-дихлор-3-фторфенил)этокси)-N-(4-(4-метилпиперазин-1-карбонил)фенил)пиридазин-3-карбоксамид.

В одном из вариантов осуществления ингибитором киназы является двойной ингибитор фосфатидилинозитол-3-киназы (PI3K) и mTOR, выбранный из 2-амино-8-[транс-4-(2-гидроксиэтокси)циклогексил]-6-(6-метокси-3-пиридинил)-4-метил-пиридо[2,3-d]пиримидин-7(8H)-она (PF-04691502), N-[4-[[4-(диметиламино)-1-пиперидинил]карбонил]фенил]-N'-[4-(4,6-ди-4-морфолинил-1,3,5-триазин-2-ил)фенил]мочевины (PF-05212384, PKI-587), 2-метил-2-{4-[3-метил-2-оксо-8-(хинолин-3-ил)-2,3-дигидро-1H-имидазо[4,5-c]хинолин-1-ил]фенил}пропаннитрила (BEZ-235), апитолисиба (GDC-0980, RG7422), 2,4-дифтор-N-{2-(метилокси)-5-[4-(4-пиридазинил)-6-хинолинил]-3-пиридинил}бензолсульфонамид (GSK2126458), 8-(6-метоксипиридин-3-ил)-3-метил-1-(4-(пиперазин-1-ил)-3-(трифторметил)фенил)-1H-имидазо[4,5-c]хинолин-2(3H)-она малеиновой кислоты (NVP-BGT226), 3-[4-(4-морфолинилпиридо[3',2':4,5]фуро[3,2-d]пиримидин-2-ил]фенола (PI-103), 5-(9-изопропил-8-метил-2-морфолино-9H-пурин-6-ил)пиримидин-2-амина (VS-5584, SB2343) и N-[2-[(3,5-диметоксифенил)амино]хиноксалин-3-ил]-4-[(4-метил-3-метоксифенил)карбонил]аминофенилсульфонамида (XL765).

Также можно использовать лекарственные средства, ингибирующие кальций-зависимую фосфатазу кальциневрин (циклоспорин и FK506) или ингибирующие киназу p70S6, важную для индуцируемой фактором роста передачи сигнала (рапамицин). (Liu et al., Cell 66:807-815, 1991; Henderson et al., Immun. 73:316-321, 1991; Bierer et al., Curr. Opin. Immun. 5:763-773, 1993). В дополнительном аспекте композиции клеток по настоящему изобретению можно вводить пациенту в комбинации с (например, до, одновременно или после) трансплантацией костного мозга, T-клеточно-абляционной терапией с использованием химиотерапевтических средств, таких как флударабин, наружной дистанционной лучевой терапией (XRT), циклофосфамидом и/или антителами, такими как OKT3 или CAMPATH. В одном из аспектов композиции клеток по настоящему изобретению вводят после B-клеточно-абляционной терапии, такой как средства, реагирующие с CD20, например, ритуксан. Например, в одном из вариантов осуществления индивидуумов можно подвергать стандартному лечению с использованием химиотерапии высокими дозами с последующей трансплантацией стволовых клеток периферической крови. В определенных вариантах осуществления после трансплантации индивидуумам проводят инфузию выращенных иммунных клеток по настоящему изобретению. В дополнительном варианте осуществления выращенные клетки вводят до или после хирургического вмешательства.

В одном из вариантов осуществления CAR-экспрессирующую клетку, представленную в настоящем описании, вводят индивидууму в комбинации с бифосфонатом, например, памидронатом (Aredia®), золедроновой кислотой или золедронатом (Zometa®, Zomera®, Aclasta® или Reclast®), аледронатом (Fosamax®), ризедронатом (Actonel®), ибандронатом (Boniva®), клодронатом (Bonefos®), этидронатом (Didronel®), тилудронатом (Skelid®), памидронатом (Aredia®), неридронатом (Nerixia®), ранелатом стронция (Protelos® или Protos®) и терипаратидом (Forteo®).

В одном из вариантов осуществления CAR-экспрессирующую клетку, представленную в настоящем описании, вводят индивидууму в комбинации с кортикостероидом, например, дексаметазоном (например, Decadron®), беклометазоном (например, Beclovent®), гидрокортизоном (также известным как кортизон, гидрокортизон сукцинат натрия, гидрокортизон фосфат натрия и продаваемым под торговыми названиями Ala-Cort®, гидрокортизон фосфат, Solu-Cortef®, Hydrocort Acetate® и Lanacort®), преднизолоном (продаваемым под торговыми названиями Delta-Cortel®, Orapred®, Pediapred® и Prelone®), преднизоном (продаваемым под торговыми названиями Deltasone®, Liquid Red®, Meticorten® и Orasone®), метилпреднизолоном (также известным как 6-метилпреднизолон, метилпреднизолона ацетат, метилпреднизолона сукцинат натрия, продаваемым под торговыми названиями Duralone®, Medralone®, Medrol®, M-Prednisol® и Solu-Medrol®), антигистаминными средствами, такими как дифенгидрамин (например, Benadryl®), гидроксизин и ципрогептадин и бронходилататорами, такими как агонисты бета-адренергических рецептором, альбутерол (например, Proventil®) и тербуталин (Brethine®).

В одном из вариантов осуществления CAR-экспрессирующую клетку, представленную в настоящем описании, вводят индивидууму в комбинации с иммуномодулятором, например, афутузумабом (доступным в Roche®), пэгфилграстимом (Neulasta®), леналидомидом (CC-5013, Revlimid®), талидомидом (Thalomid®), актимидом (CC4047) и IRX-2 (смесь цитокинов человека, включая интерлейкин 1, интерлейкин 2 и интерферон γ, CAS 951209-71-5, доступная в IRX Therapeutics).

В одном из вариантов осуществления CAR-экспрессирующую клетку, представленную в настоящем описании, вводят индивидууму в комбинации с ингибитором протеасом, например, бортезомибом (Velcade®), иксазомибом цитратом (MLN9708, CAS 1201902-80-8), данопревиром (RG7227, CAS 850876-88-9), иксазомибом (MLN2238, CAS 1072833-77-2) и (S)-N-[(фенилметокси)карбонил]-L-лейцил-N-(1-формил-3-метилбутил)-L-лейцинамидом (МГ-132, CAS 133407-82-6).

В одном из вариантов осуществления CAR-экспрессирующую клетку, представленную в настоящем описании, вводят индивидууму в комбинации с рецептором фактора роста эндотелия сосудов (VEGF), например, бевацизумабом (Avastin®), акситинибом (Inlyta®), бриваниба аланинатом (BMS-582664, (S)-((R)-1-(4-(4-фтор-2-метил-1H-индол-5-илокси)-5-метилпирроло[2,1-f][1,2,4]триазин-6-илокси)пропан-2-ил)2-аминопропаноатом), сорафенибом (Nexavar®), пазопанибом (Votrient®), сунитиниба малатом (Sutent®), цедиранибом (AZD2171, CAS 288383-20-1), варгатефом (BIBF1120, CAS 928326-83-4), форетинибом (GSK1363089), телатинибом (BAY57-9352, CAS 332012-40-5), апатинибом (YN968D1, CAS 811803-05-1), иматинибом (Gleevec®), понатинибом (AP24534, CAS 943319-70-8), тивозанибом (AV951, CAS 475108-18-0), регорафенибом (BAY73-4506, CAS 755037-03-7), ваталаниба дигидрохлоридом (PTK787, CAS 212141-51-0), бриванибом (BMS-540215, CAS 649735-46-6), вандетанибом (Caprelsa® или AZD6474), мотезаниба дифосфатом (AMG706, CAS 857876-30-3, N-(2,3-дигидро-3,3-диметил-1H-индол-6-ил)-2-[(4-пиридинилметил)амино]-3-пиридинкарбоксамидом, описываемым в публикации PCT № WO02/066470), довитинибом димолочной кислоты (TKI258, CAS 852433-84-2), линфанибом (ABT869, CAS 796967-16-3), кабозантинибом (XL184, CAS 849217-68-1), лестауртинибом (CAS 111358-88-4), N-[5-[[[5-(1,1-диметилэтил)-2-оксазолил]метил]тио]-2-тиазолил]-4-пиперидинкарбоксамидом (BMS38703, CAS 345627-80-7), (3R,4R)-4-амино-1-((4-((3-метоксифенил)амино)пирроло[2,1-f][1,2,4]триазин-5-ил)метил)пиперидин-3-олом (BMS690514), N-(3,4-дихлор-2-фторфенил)-6-метокси-7-[[(3aα,5β,6aα)-октагидро-2-метилциклопента[c]пиррол-5-ил]метокси]-4-хиназолинамином (XL647, CAS 781613-23-8), 4-метил-3-[[1-метил-6-(3-пиридинил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4-ил]амино]-N-[3-(трифторметил)фенил]-бензамидом (BHG712, CAS 940310-85-0) и афлиберцептом (Eylea®).

В одном из вариантов осуществления CAR-экспрессирующую клетку, представленную в настоящем описании, вводят индивидууму в комбинации с антителом против CD20 или его конъюгатом, например, ритуксимабом (Rituxan® и MabThera®) и тозитумомабом (Bexxar®) и офатумумабом (Arzerra®), ибритумомабом тиуксетаном (Zevalin®) и тозитумомабом.

В одном из вариантов осуществления CAR-экспрессирующую клетку, представленную в настоящем описании, вводят индивидууму в комбинации с антиконвульсантом, например, антиконвульсантами (антиэпилептическими или противосудорожными лекарственными средствами): альдегидами, например, паральдегидом, ароматическими аллильными спиртами, например, стирипентолом (Diacomit®), барбитуратами, например, фенобарбиталом (Luminal®), метилфенобарбиталом (Mebaral®), барбексаклоном (Maliasin®), бензодиазепинами, например, клобазамом (Onfi®), клоназепамом (Klonopin®), клоразепатом (Tranxene® и Novo-Clopate®), диазепамом (Valium®, Lembrol®, Diastat®), мидазоламом (Versed®), лоразепамом (Ativan® и Orfidal®), нитразепамом (Alodorm®, Arem®, Insoma®), темазепамом (Restoril®, Normison®), ниметзепамом (Erimin®), бромидами, например, бромидом калия, карбаматами, например, фелбаматом (Felbatol®), карбоксамидами, например, карбамазепином (Tegretol®, Equetro®), окскарбазепином (Trileptal®, Oxcarb®), эсликарбазепина ацетатом (Aptiom®), жирными кислотами, например, вальпроатами (вальпроевой кислотой, вальпроатом натрия, дивальпроексом натрия), вигабатрином (Sabril®), прогабидом (Gabren®), тиагабином (Gabitril®), производными фруктозы, например, топираматом (Topamax®), аналогами ГАМК, например, габапентином (Neurontin®), прегабалином (Lyrica®), гидантоинами, например, этотоином (Peganone®), фенитоином (Dilantin®), мефенитоином (Mesantoin®), фосфенитоином (Cerebyx®, Prodilantin®), оксазолидиндионами, например, параметадионом (Paradione®), триметадионом (Tridione®), пропионатами, например, бекламидом (Choracon®, Hibicon®, Posedrine®), пиримидиндионами, например, примидоном (Mysoline®), пирролидинами, например, бриварацетамом, леветирацетамом, селетрацетамом (Keppra®), сукцинимидами, например, этосуксимидом (Zarontin®), фенсуксимидом (Milontin®), месуксимидом (Celontin®, Petinutin®), сульфонамидами, например, ацетазоламидом (Diamox®), султиамом (Ospolot®), метазоламидом (Neptazane®), зонисамидом (Zonegran®), триазинами, например, ламотригином (Lamictal®), мочевинами, например, фенетуридом, фенацемидом (Phenurone®), вальпроиламидами (амидными производными вальпроата), например, вальпромидом (Depamide®), вальноктамидом, антагонистом рецептора AMPA, например, перампанелом (Fycompa®).

В вариантах осуществления CAR-экспрессирующую клетку, представленную в настоящем описании, вводят индивидууму в комбинации с ингибитором индоламин-2,3-диоксигеназы (IDO). IDO является ферментом, катализирующим деградацию аминокислоты L-триптофана в кинуренин. Многие злокачественные новообразования гиперэкспрессируют IDO, например, рак предстательной железы, колоректальный рак, рак поджелудочной железы, шейки матки, желудка, яичника, головы и легких. pDC, макрофаги и дендритные клетки (DC) могут экспрессировать IDO. Не будучи связанными какой-либо теорией, полагают, что снижение L-триптофана (например, катализируемое IDO) приводит к возникновению иммуносупрессорной среды посредством индуцирования T-клеточной анергии и апоптоза. Таким образом, не будучи связанными какой-либо теорией, полагают, что ингибитор IDO может повышать эффективность CAR-экспрессирующей клетки, представленной в настоящем описании, например, снижая супрессию или гибель CAR-экспрессирующей иммунной клетки. В вариантах осуществления индивидуум имеет солидную опухоль, например, солидную опухоль, представленную в настоящем описании, например, рак предстательной железы, колоректальный рак, рак поджелудочной железы, шейки матки, желудка, яичника, головы и легких. Неограничивающие примеры ингибиторов IDO включают 1-метил-триптофан, индоксимод (NewLink Genetics) (см., например, описания клинических испытаний под идентификационными номерами NCT01191216, NCT01792050), и INCB024360 (Incyte Corp.) (см., например, описания клинических испытаний под идентификационными номерами NCT01604889, NCT01685255).

В вариантах осуществления CAR-экспрессирующую клетку, представленную в настоящем описании, вводят индивидууму в комбинации с модулятором супрессорных клеток миелоидного происхождения (MDSC). MDSC накапливаются на периферии и в участках опухоли при многих солидных опухолях. Эти клетки супрессируют T-клеточные ответы, таким образом, препятствуя эффективной терапии CAR-экспрессирующими клетками. Не будучи связанными какой-либо теорией, полагают, что введение модулятора MDSC повышает эффективность CAR-экспрессирующей клетки, представленной в настоящем описании. В варианте осуществления индивидуум имеет солидную опухоль, например, солидную опухоль, представленную в настоящем описании, например, глиобластому. Неограничивающие примеры модуляторов MDSC включают MCS110 и BLZ945. MCS110 является моноклональным антителом (mAb) против макрофагального колониестимулирующего фактора (М-КСФ). См., например, описание клинического испытания под идентификационным номером NCT00757757. BLZ945 является низкомолекулярным ингибитором рецептора колониестимулирующего фактора 1 (CSF1R). См., например, Pyonteck et al. Nat. Med. 19(2013):1264-72. Структура BLZ945 представлена ниже.

В вариантах осуществления CAR-экспрессирующую клетку, представленную в настоящем описании, вводят индивидууму в комбинации с CD19 CART-клеткой (например, CTL019, например, как описано в WO2012/079000, включенной в настоящее описание в качестве ссылки). В вариантах осуществления индивидуум имеет острый миелолейкоз (AML), например, CD19-положительный AML или CD19-отрицательный AML. В вариантах осуществления индивидуум имеет CD19+-лимфому, например, CD19+-неходжкинскую лимфому (NHL), CD19+ FL или CD19+ DLBCL. В вариантах осуществления индивидуум имеет рецидивирующую или рефрактерную CD19+-лимфому. В вариантах осуществления истощающую лимфоциты химиотерапию проводят индивидууму до, одновременно или после введения (например, инфузии) CD19 CART-клеток. В примере истощающую лимфоциты химиотерапию проводят индивидууму перед введением CD19 CART-клеток. Например, истощающую лимфоциты химиотерапию заканчивают за 1-4 дня (например, 1, 2, 3 или 4 дня) до инфузии CD19 CART-клеток. В вариантах осуществления вводят множество доз CD19 CART-клеток, например, как представлено в настоящем описании. Например, одна доза содержит приблизительно 5×10⁸ CD19 CART-клеток. В вариантах осуществления истощающую лимфоциты химиотерапию проводят индивидууму до, одновременно или после введения (например, инфузии) CAR-экспрессирующей клетки, представленной в настоящем описании, например, не-CAR CD19-экспрессирующей клетки. В вариантах осуществления CD19 CART вводят индивидууму до, одновременно или после введения (например, инфузии) не-CAR CD19-экспрессирующей клетки, например, не-CAR CD19-экспрессирующей клетки, представленной в настоящем описании.

В некоторых вариантах осуществления CAR-экспрессирующую клетку, представленную в настоящем описании, вводят индивидууму в комбинации с CAR CD19-экспрессирующей клеткой, например, CTL019, например, как описано в WO2012/079000, включенной в настоящее описание в качестве ссылки, для лечения заболевания, ассоциированного с экспрессией BCMA, например, злокачественного новообразования, представленного в настоящем описании. Не будучи связанными какой-либо теорией, полагают, что введение CAR CD19-экспрессирующей клетки в комбинации с CAR-экспрессирующей клеткой улучшает эффективность CAR-экспрессирующей клетки, представленной в настоящем описании, посредством направленного воздействия на злокачественные клетки ранних стадий развития, например злокачественные стволовые клетки, модулируя иммунный ответ, истощая регуляторные B-клетки и/или улучшая микроокружение опухоли. Например, CAR CD19-экспрессирующая клетка направленно воздействует на злокачественные клетки, экспрессирующие маркеры ранних стадий развития, например, злокачественные стволовые клетки и CD19-экспрессирующие клетки, в то время как CAR-экспрессирующая клетка, представленная в настоящем описании, направленно воздействует на злокачественные клетки, экспрессирующие маркеры поздних стадий развития, например, BCMA. Этот подход предварительного кондиционирования может улучшать эффективность CAR-экспрессирующей клетки, представленной в настоящем описании. В таких вариантах осуществления CAR CD19-экспрессирующую клетку вводят до, одновременно или после введения (например, инфузии) CAR-экспрессирующей клетки, представленной в настоящем описании.

В вариантах осуществления CAR-экспрессирующая клетка, представленная в настоящем описании, также экспрессирует CAR против CD19, например, CAR CD19. В варианте осуществления клетку, экспрессирующую CAR, представленный в настоящем описании, и CAR CD19 вводят индивидууму для лечения злокачественного новообразования, представленного в настоящем описании, например, AML. В варианте осуществления конфигурации одной или обеих молекул CAR содержат первичный внутриклеточный сигнальный домен и костимуляторный сигнальный домен. В другом варианте осуществления конфигурации одной или обеих молекул CAR содержат первичный внутриклеточный сигнальный домен и два или более, например, 2, 3, 4, 5 или более, костимуляторных сигнальных доменов. В таких вариантах осуществления молекула CAR, представленная в настоящем описании, и CAR CD19 могут содержать одинаковые или разные первичные внутриклеточные сигнальные домены, одинаковые или разные костимуляторные сигнальные домены или одинаковое или разное количество костимуляторных сигнальных доменов. Альтернативно, CAR, представленный в настоящем описании, и CAR CD19 конфигурируют в виде разделенного CAR, в котором одна из молекул CAR содержит антигенсвязывающий домен и костимуляторный домен (например, 4-1BB), в то время как другая молекула CAR содержит антигенсвязывающий домен и первичный внутриклеточный сигнальный домен (например, CD3 дзета).

В некоторых вариантах осуществления CAR-экспрессирующую клетку, представленную в настоящем описании, вводят индивидууму в комбинации с полипептидом интерлейкина-15 (ИЛ-15), полипептидом рецептора интерлейкина-15 альфа (ИЛ-15Ra) или комбинацией полипептида ИЛ-15 и полипептида ИЛ-15Ra например, hetIL-15 (Admune Therapeutics, LLC). hetIL-15 является гетеродимерным нековалентным комплексом ИЛ-15 и ИЛ-15Ra. hetIL-15 описывают, например, в US8124084, US2012/0177598, US2009/0082299, US2012/0141413 и US2011/0081311, включенных в настоящее описание в качестве ссылки. В вариантах осуществления het-ИЛ-15 вводят подкожно. В вариантах осуществления индивидуум имеет злокачественное новообразование, например, солидный рак, например, меланому или рак толстого кишечника. В вариантах осуществления индивидуум имеет метастазирующее злокачественное новообразование.

В одном из вариантов осуществления индивидууму можно вводить средство, снижающее или улучшающее побочный эффект, ассоциированный с введением CAR-экспрессирующей клетки. Побочные эффекты, ассоциированные с введением CAR-экспрессирующей клетки, включают, в качестве неограничивающих примеров, CRS и гемофагоцитарный лимфогистиоцитоз (HLH), также обозначаемый как синдром активации макрофагов (MAS). Симптомы CRS включают высокую температуру, тошноту, преходящую гипотензию, гипоксию и т.п. CRS может включать общие клинические признаки и симптомы, такие как высокая температура, утомляемость, анорексия, миалгия, артралгия, тошнота, рвота и головная боль. CRS может включать кожные клинические признаки и симптомы, такие как сыпь. CRS может включать желудочно-кишечные клинические признаки и симптомы, такие как тошнота, рвота и диарея. CRS может включать респираторные клинические признаки и симптомы, такие как тахипноэ и гипоксемия. CRS может включать сердечно-сосудистые клинические признаки и симптомы, такие как тахикардия, расширенное пульсовое давление, гипотензия, повышенный сердечный выброс (ранний) и потенциально сниженный сердечный выброс (поздний). CRS может включать коагуляционные клинические признаки и симптомы, такие как повышенный d-димер, гипофибриногенемия с кровотечением или без него. CRS может включать почечные клинические признаки и симптомы, такие как азотемия. CRS может включать печеночные клинические признаки и симптомы, такие как трансаминит и гипербилирубинемия. CRS может включать неврологические клинические признаки и симптомы, такие как головная боль, изменения психического статуса, дезориентация, бред, затруднения с подбором слов или экспрессивная афазия, галлюцинации, тремор, дисметрия, изменение походки и судороги.

Таким образом, способы, представленные в настоящем описании, могут включать введение индивидууму CAR-экспрессирующей клетки, представленной в настоящем описании, и дополнительное введение одного или более средств для контроля повышенных уровней растворимого фактора, являющихся результатом лечения CAR-экспрессирующими клетками. В одном из вариантов осуществления растворимый фактор, повышенный у индивидуума, является одним или более из ИФНγ, ФНО, ИЛ-2 и ИЛ-6. В варианте осуществления фактор, повышенный у индивидуума, является одним или более из ИЛ-1, ГМ-КСФ, ИЛ-10, ИЛ-8, ИЛ-5 и фракталкина. Таким образом, средство, вводимое для лечения этого побочного эффекта, может являться средством, нейтрализующим один или более из этих растворимых факторов. В одном из вариантов осуществления средство, нейтрализующее одну или более из этих растворимых форм, является антителом или фрагментом антитела. Примеры таких средств включают, в качестве неограничивающих примеров, стероид (например, кортикостероид), ингибитор ФНО и ингибитор ИЛ-6. Примером ингибитора ФНО является молекула антитела против ФНО, такая как, инфликсимаб, адалимумаб, цертолизумаб пегол и голимумаб. Другим примером ингибитора ФНО является слитый белок, такой как этанерцепт. Низкомолекулярные ингибиторы ФНО включают, в качестве неограничивающих примеров, производные ксантина (например, пентоксифиллин) и бупропион. Примером ингибитора ИЛ-6 является молекула антитела против ИЛ-6, такого как тоцилизумаб (toc), сарилумаб, элсилимомаб, CNTO 328, ALD518/BMS-945429, CNTO 136, CPSI-2364, CDP6038, VX30, ARGX-109, FE301 и FM101. В одном из вариантов осуществления молекула антитела против ИЛ-6 является тоцилизумабом. Примером ингибитора на основе ИЛ-1R является анакинра.

В некотором варианте осуществления индивидууму вводят кортикостероид, такой как, помимо прочего, например, метилпреднизолон, гидрокортизон.

В некоторых вариантах осуществления индивидууму вводят сосудосуживающее средство, такое как, например, норэпинефрин, дофамин, фенилэфрин, эпинефрин, вазопрессин или их комбинация.

В варианте осуществления индивидууму можно вводить жаропонижающее средство. В варианте осуществления индивидууму можно вводить анальгетик.

В одном из вариантов осуществления индивидууму можно вводить средство, предотвращающее миграцию CAR BCMA-экспрессирующей клетки в головной мозг, например, натализумаб (TYSABRI®). Экспрессию BCMA, например, его вариант сплайсинга, определяют в некоторых частях головного мозга, например, мозжечке или продолговатом мозге. Не будучи связанными какой-либо теорией, полагают, что предотвращение миграции CAR BCMA-экспрессирующих клеток в головной мозг является предпочтительным для предотвращения взаимодействия каких-либо CAR BCMA-экспрессирующих клеток с BCMA-экспрессирующей тканью головного мозга или воздействия на нее.

В одном из вариантов осуществления индивидууму можно вводить средство, повышающее активность CAR-экспрессирующей клетки. Например, в одном из вариантов осуществления средство может являться средством, ингибирующим ингибиторную молекулу, например, средство является ингибитором контрольных точек. Ингибиторные молекулы, например, белок программируемой смерти 1 (PD1), в некоторых вариантах осуществления может снижать способность CAR-экспрессирующей клетки вызывать иммунный эффекторный ответ. Примеры ингибиторных молекул включают PD1, PD-L1, PD-L2, CTLA4, TIM3, CEACAM (например, CEACAM-1, CEACAM-3 и/или CEACAM-5), LAG3, VISTA, BTLA, TIGIT, LAIR1, CD160, 2B4, CD80, CD86, B7-H3 (CD276), B7-H4 (VTCN1), HVEM (TNFRSF14 или CD270), KIR, A2aR, MHC класса I, MHC класса II, GAL9, аденозин и TGFR бета. Ингибирование ингибиторной молекулы, например, посредством ингибирования на уровне ДНК, РНК или белка может оптимизировать свойства CAR-экспрессирующих клеток. В вариантах осуществления ингибиторную нуклеиновую кислоту, например, ингибиторную нуклеиновую кислоту, например, дцРНК, например, миРНК или shRNA, короткие палиндромные повторы, регулярно расположенные группами (CRISPR), подобную активатору транскрипции эффекторную нуклеазу (TALEN) или эндонуклеазу с цинковыми пальцами (ZFN), например, как представлено в настоящем описании, можно использовать для ингибирования экспрессии ингибиторной молекулы в CAR-экспрессирующей клетке. В варианте осуществления ингибитор является shRNA. В варианте осуществления ингибиторную молекулу ингибируют в CAR-экспрессирующей клетке. В этих вариантах осуществления молекулу дцРНК, ингибирующую экспрессию ингибиторной молекулы, соединяют с нуклеиновой кислотой, кодирующей компонент, например, все компоненты, CAR. В вариантах осуществления CAR-экспрессирующую клетку, представленную в настоящем описании, вводят в комбинации с ингибитором ингибиторной молекулы, например, в комбинации с ингибитором контрольных точек, например, в комбинации с ингибитором PD1 и/или PD-L1. В вариантах осуществления CAR-экспрессирующую клетку, представленную в настоящем, описании вводят в комбинации с ингибитором PD1. В вариантах осуществления CAR-экспрессирующую клетку, представленную в настоящем описании, вводят в комбинации с ингибитором PD-L1.

В варианте осуществления молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая молекулу дцРНК, ингибирующую экспрессию молекулы, модулирующей или регулирующей, например, ингибирующей, функцию T-клеток, функционально связана с промотором, например, промотором, полученным из H1 или U6, таким образом, что молекула дцРНК, ингибирующая экспрессию молекулы, модулирующей или регулирующей, например, ингибирующей, функцию T-клеток, экспрессируется, например, экспрессируется в CAR-экспрессирующей клетке. См. например, Tiscornia G., "Development of Lentiviral Vectors Expressing siRNA," Chapter 3, в Gene Transfer: Delivery and Expression of DNA and RNA (eds. Friedmann and Rossi). Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, USA, 2007; Brummelkamp TR, et al. (2002) Science 296: 550-553; Miyagishi M, et al. (2002) Nat. Biotechnol. 19: 497-500. В варианте осуществления молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая молекулу дцРНК, ингибирующую экспрессию молекулы, модулирующей или регулирующей, например, ингибирующей, функцию T-клеток, присутствует в одном векторе, например, лентивирусном векторе, содержащем молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую компонент, например, все компоненты, CAR. В таком варианте осуществления молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая молекулу дцРНК, ингибирующую экспрессию молекулы, модулирующей или регулирующей, например, ингибирующей, функцию T-клеток, находится в векторе, например, лентивирусном векторе, в 5'- или 3'-направлении к нуклеиновой кислоте, кодирующей компонент, например, все компоненты, CAR. Молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая молекулу дцРНК, ингибирующую экспрессию молекулы, модулирующей или регулирующей, например, ингибирующей, функцию T-клеток, может транскрибироваться в одном или разных направлениях относительно нуклеиновой кислоты, кодирующей компонент, например, все компоненты, CAR. В варианте осуществления молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая молекулу дцРНК, ингибирующую экспрессию молекулы, модулирующей или регулирующей, например, ингибирующей, функцию T-клеток, находится в векторе, ином, чем вектор, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую компонент, например, все компоненты, CAR. В варианте осуществления молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая молекулу дцРНК, ингибирующую экспрессию молекулы, модулирующей или регулирующей, например, ингибирующей, функцию T-клеток, транзиторно экспрессируется в CAR-экспрессирующей клетке. В варианте осуществления молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая молекулу дцРНК, ингибирующую экспрессию молекулы, модулирующей или регулирующей, например, ингибирующей, функцию T-клеток, стабильно встраивается в геном CAR-экспрессирующей клетки. На фигурах 41A-41E изображены примеры векторов для экспрессии компонента, например, всех компонентов, CAR в молекуле дцРНК, ингибирующей экспрессию молекулы, модулирующей или регулирующей, например, ингибирующей, функцию T-клеток.

Примеры молекул дцРНК, применимых для ингибирования экспрессии молекулы, модулирующей или регулирующей, например, ингибирующей, функцию T-клеток, где молекула, модулирующая или регулирующая, например, ингибирующая, функцию T-клеток, является PD-1, представлены ниже.

В таблице 18 ниже представлены названия средств РНКи PDCD1 (PD1) (полученные из их положения в последовательности гена PDCD1 мыши NM_008798.2) вместе с SEQ ID NO: 286-333, представляющими последовательности ДНК. И смысловые (S), и антисмысловые (AS) последовательности представлены в виде 19-мерных и 21-мерных последовательностей в этой таблице. Также необходимо отметить, что положение (PoS, например, 176) получают из номера положения в последовательности гена PDCD1 мыши NM_008798.2. SEQ ID NO указаны в группах по 12, соответствующих "sense19" SEQ ID NO: 286-297, "sense21" SEQ ID NO: 298-309, "asense21" SEQ ID NO: 310-321, "asense19" SEQ ID NO: 322-333.

Таблица 18. Последовательности shRNA PDCD1 (PD1) мыши

Положение в NM_008798.2	Целевая область	Sense19	Sense21	Asense21	Asense19
176	CDS	GGAGGTCCCTCACCTTCTA (SEQ ID NO: 286)	CTGGAGGTCCCTCACCTTCTA (SEQ ID NO: 298)	TAGAAGGTGAGGGACCTCCAG (SEQ ID NO: 310)	TAGAAGGTGAGGGACCTCC (SEQ ID NO: 322)
260	CDS	CGGAGGATCTTATGCTGAA (SEQ ID NO: 287)	GTCGGAGGATCTTATGCTGAA (SEQ ID NO: 299)	TTCAGCATAAGATCCTCCGAC (SEQ ID NO: 311)	TTCAGCATAAGATCCTCCG (SEQ ID NO: 323)
359	CDS	CCCGCTTCCAGATCATACA (SEQ ID NO: 288)	TGCCCGCTTCCAGATCATACA (SEQ ID NO: 300)	TGTATGATCTGGAAGCGGGCA (SEQ ID NO: 312)	TGTATGATCTGGAAGCGGG (SEQ ID NO: 324)
528	CDS	GGAGACCTCAACAAGATAT (SEQ ID NO: 289)	CTGGAGACCTCAACAAGATAT (SEQ ID NO: 301)	ATATCTTGTTGAGGTCTCCAG (SEQ ID NO: 313)	ATATCTTGTTGAGGTCTCC (SEQ ID NO: 325)
581	CDS	AAGGCATGGTCATTGGTAT (SEQ ID NO: 290)	TCAAGGCATGGTCATTGGTAT (SEQ ID NO: 302)	ATACCAATGACCATGCCTTGA (SEQ ID NO: 314)	ATACCAATGACCATGCCTT (SEQ ID NO: 326)
584	CDS	GCATGGTCATTGGTATCAT (SEQ ID NO: 291)	AGGCATGGTCATTGGTATCAT (SEQ ID NO: 303)	ATGATACCAATGACCATGCCT (SEQ ID NO: 315)	ATGATACCAATGACCATGC (SEQ ID NO: 327)
588	CDS	GGTCATTGGTATCATGAGT (SEQ ID NO: 292)	ATGGTCATTGGTATCATGAGT (SEQ ID NO: 304)	ATGGTCATTGGTATCATGAGT (SEQ ID NO: 316)	ATGGTCATTGGTATCATGA (SEQ ID NO: 328)
609	CDS	CCTAGTGGGTATCCCTGTA (SEQ ID NO: 293)	GCCCTAGTGGGTATCCCTGTA (SEQ ID NO: 305)	GCCCTAGTGGGTATCCCTGTA (SEQ ID NO: 317)	GCCCTAGTGGGTATCCCTG (SEQ ID NO: 329)
919	CDS	GAGGATGGACATTGTTCTT (SEQ ID NO: 294)	ATGAGGATGGACATTGTTCTT (SEQ ID NO: 306)	ATGAGGATGGACATTGTTCTT (SEQ ID NO: 318)	ATGAGGATGGACATTGTTC (SEQ ID NO: 330)
1021	3'-UTR	GCATGCAGGCTACAGTTCA (SEQ ID NO: 295)	GAGCATGCAGGCTACAGTTCA (SEQ ID NO: 307)	GAGCATGCAGGCTACAGTTCA (SEQ ID NO: 319)	GAGCATGCAGGCTACAGTT (SEQ ID NO: 331)
1097	3'-UTR	CCAGCACATGCACTGTTGA (SEQ ID NO: 296)	TTCCAGCACATGCACTGTTGA (SEQ ID NO: 308)	TTCCAGCACATGCACTGTTGA (SEQ ID NO: 320)	TTCCAGCACATGCACTGTT (SEQ ID NO: 332)
1101	3'-UTR	CACATGCACTGTTGAGTGA (SEQ ID NO: 297)	AGCACATGCACTGTTGAGTGA (SEQ ID NO: 309)	AGCACATGCACTGTTGAGTGA (SEQ ID NO: 321)	AGCACATGCACTGTTGAGT (SEQ ID NO: 333)

В таблице 19 ниже представлены названия средств РНКи PDCD1 (PD1) (полученные из их положения в последовательности гена PDCD1 человека вместе с SEQ ID NO: 334-381, представляющими последовательности ДНК). И смысловые (S), и антисмысловые (AS) последовательности представлены в виде 19-мерных и 21-мерных последовательностей. SEQ ID NO указаны в группах по 12, соответствующих "sense 19" SEQ ID NO: 334-345, "sense 21" SEQ ID NO: 346-357, "asense 21" SEQ ID NO: 358-369, "asense 19" SEQ ID NO: 370-381.

Таблица 19. Последовательности shRNA PDCD1 (PD1) человека

Положение в NM_005018.2	Целевая область	Sense19	Asense19	Sense21	Asense21
145	CDS	GGCCAGGATGGTTCTTAGA (SEQ ID NO: 334)	TCTAAGAACCATCCTGGCC (SEQ ID NO: 346)	GCGGCCAGGATGGTTCTTAGA (SEQ ID NO: 358)	TCTAAGAACCATCCTGGCCGC (SEQ ID NO: 370)
271	CDS	GCTTCGTGCTAAACTGGTA (SEQ ID NO: 335)	TACCAGTTTAGCACGAAGC (SEQ ID NO: 347)	GAGCTTCGTGCTAAACTGGTA (SEQ ID NO: 359)	TACCAGTTTAGCACGAAGCTC (SEQ ID NO: 371)
393	CDS	GGGCGTGACTTCCACATGA (SEQ ID NO: 336)	TCATGTGGAAGTCACGCCC (SEQ ID NO: 348)	ACGGGCGTGACTTCCACATGA (SEQ ID NO: 360)	TCATGTGGAAGTCACGCCCGT (SEQ ID NO: 372)
1497	3'-UTR	CAGGCCTAGAGAAGTTTCA (SEQ ID NO: 337)	TGAAACTTCTCTAGGCCTG (SEQ ID NO: 349)	TGCAGGCCTAGAGAAGTTTCA (SEQ ID NO: 361)	TGAAACTTCTCTAGGCCTGCA (SEQ ID NO: 373)
1863	3'-UTR	CTTGGAACCCATTCCTGAA (SEQ ID NO: 338)	TTCAGGAATGGGTTCCAAG (SEQ ID NO: 350)	TCCTTGGAACCCATTCCTGAA (SEQ ID NO: 362)	TTCAGGAATGGGTTCCAAGGA (SEQ ID NO: 374)
1866	3'-UTR	GGAACCCATTCCTGAAATT (SEQ ID NO: 339)	AATTTCAGGAATGGGTTCC (SEQ ID NO: 351)	TTGGAACCCATTCCTGAAATT (SEQ ID NO: 363)	AATTTCAGGAATGGGTTCCAA (SEQ ID NO: 375)
1867	3'-UTR	GAACCCATTCCTGAAATTA (SEQ ID NO: 340)	TAATTTCAGGAATGGGTTC (SEQ ID NO: 352)	TGGAACCCATTCCTGAAATTA (SEQ ID NO: 364)	TAATTTCAGGAATGGGTTCCA (SEQ ID NO: 376)
1868	3'-UTR	AACCCATTCCTGAAATTAT (SEQ ID NO: 341)	ATAATTTCAGGAATGGGTT (SEQ ID NO: 353)	GGAACCCATTCCTGAAATTAT (SEQ ID NO: 365)	ATAATTTCAGGAATGGGTTCC (SEQ ID NO: 377)
1869	3'-UTR	ACCCATTCCTGAAATTATT (SEQ ID NO: 342)	AATAATTTCAGGAATGGGT (SEQ ID NO: 354)	GAACCCATTCCTGAAATTATT (SEQ ID NO: 366)	AATAATTTCAGGAATGGGTTC (SEQ ID NO: 378)
1870	3'-UTR	CCCATTCCTGAAATTATTT (SEQ ID NO: 343)	AAATAATTTCAGGAATGGG (SEQ ID NO: 355)	AACCCATTCCTGAAATTATTT (SEQ ID NO: 367)	AAATAATTTCAGGAATGGGTT (SEQ ID NO: 379)
2079	3'-UTR	CTGTGGTTCTATTATATTA (SEQ ID NO: 344)	TAATATAATAGAACCACAG (SEQ ID NO: 356)	CCCTGTGGTTCTATTATATTA (SEQ ID NO: 368)	TAATATAATAGAACCACAGGG (SEQ ID NO: 380)
2109	3'-UTR	AAATATGAGAGCATGCTAA (SEQ ID NO: 345)	TTAGCATGCTCTCATATTT (SEQ ID NO: 357)	TTAAATATGAGAGCATGCTAA (SEQ ID NO: 369)	TTAGCATGCTCTCATATTTAA (SEQ ID NO: 381)

В одном из вариантов осуществления ингибитор ингибиторного сигнала может являться, например, антителом или фрагментом антитела, связывающимся с ингибиторной молекулой. Например, средство может являться антителом или фрагментом антитела, связывающимся с PD1, PD-L1, PD-L2 или CTLA4 (например, ипилимумабом (также обозначаемым как MDX-010 и MDX-101 и продаваемым как Yervoy®, Bristol-Myers Squibb, тремелимумабом (моноклональное антитело IgG2, доступное в Pfizer, ранее известный как тицилимумаб, CP-675.206)). В варианте осуществления средство является антителом или фрагментом антитела, связывающимся с TIM3. В варианте осуществления средство является антителом или фрагментом антитела, связывающимся с LAG3. В вариантах осуществления средство, повышающее активность CAR-экспрессирующей клетки, например, ингибитор ингибиторной молекулы, вводят в комбинации с аллогенным CAR, например, аллогенным CAR, представленным в настоящем описании (например, описываемым в разделе "Аллогенный CAR" в настоящем описании).

PD-1 является ингибиторным членом семейства рецепторов CD28, также включающим CD28, CTLA-4, ICOS и BTLA. PD-1 экспрессируется на активированных B-клетках, T-клетках и миелоидных клетках (Agata et al. 1996 Int. Immunol 8:765-75). Показано, что два лиганда PD-1, PD-L1 и PD-L2, понижающе регулируют активацию T-клеток после связывания с PD-1 (Freeman et al. 2000 J Exp Med 192:1027-34; Latchman et al. 2001 Nat Immunol 2:261-8; Carter et al. 2002 Eur J Immunol 32:634-43). PD-L1 в избытке встречается при злокачественных новообразованиях человека (Dong et al. 2003 J Mol Med 81:281-7; Blank et al. 2005 Cancer Immunol. Immunother 54:307-314; Konishi et al. 2004 Clin Cancer Res 10:5094). Иммуносупрессию можно реверсировать, ингибируя локальное взаимодействие PD-1 с PD-L1. Антитела, фрагменты антител и другие ингибиторы PD-1, PD-L1 и PD-L2, доступны в этой области и их можно использовать в комбинации с CAR по настоящему изобретению, представленными в настоящем описании. Например, ниволумаб (также обозначаемый как BMS-936558 или MDX1106, Bristol-Myers Squibb) является полностью человеческим моноклональным антителом IgG4, специфически блокирующим PD-1. Ниволумаб (клон 5C4) и другие моноклональные антитела человека, специфически связывающиеся с PD-1, описывают в US8008449 и WO2006/121168. Пидилизумаб (CT-011, Cure Tech) является гуманизированным моноклональным антителом IgG1k, связывающимся с PD-1. Пидилизумаб и другие гуманизированные моноклональные антитела против PD-1 описывают в WO2009/101611. Пембролизумаб (ранее известный как ламбролизумаб, также обозначаемый как MK03475, Merck) является гуманизированным моноклональным антителом IgG4, связывающимся с PD-1. Пембролизумаб и другие гуманизированные антитела против PD-1 описывают в US8354509 и WO2009/114335. MEDI4736 (Medimmune) является моноклональным антителом человека, связывающимся с PDL1, и ингибирует взаимодействие лиганда с PD1. MDPL3280A (Genentech/Roche) является Fc-оптимизированным моноклональным антителом IgG1 человека, связывающимся с PD-L1. MDPL3280A и другие моноклональные антитела человека против PD-L1 описывают в патенте США № 7943743 и патентной публикации США № 2012/0039906. Другие связывающие средства против PD-L1 включают YW243.55.S70 (вариабельные области тяжелой и легкой цепи приведены в SEQ ID NO: 20 и 21 в WO2010/077634) и MDX-1 105 (также обозначаемый как BMS-936559, и, например, связывающие средства против PD-L1, описываемые в WO2007/005874). AMP-224 (B7-DCIg, Amplimmune, например, описываемый в WO2010/027827 и WO2011/066342), является слитым растворимым рецептором PD-L2 Fc, блокирующим взаимодействие между PD-1 и B7-H1. Другие антитела против PD-1 включают AMP 514 (Amplimmune), помимо прочего, например, антитела против PD-1, описываемые в US8609089, US2010028330 и/или US20120114649.

TIM3 (T-клеточный иммуноглобулин-3) также отрицательно регулирует функцию T-клеток, в частности, ИФНγ-секретирующих CD4+ T-хелперов 1 и CD8+ T-цитотоксических 1 клеток, и играет критическую роль в истощении T-клеток. Ингибирование взаимодействия между TIM3 и его лигандами, например, галектином-9 (Gal9), фосфатидилсерином (PS) и HMGB1, может повышать иммунный ответ. Антитела, фрагменты антител и другие ингибиторы TIM3 и его лигандов доступны в этой области, и их можно использовать в комбинации с CAR CD19 или CAR BCMA, представленными в настоящем описании. Например, антитела, фрагменты антител, низкомолекулярные соединения или пептидные ингибиторы, направленно воздействующие на TIM3, связываются с IgV-доменом TIM3 для ингибирования взаимодействия с его лигандами. Антитела и пептиды, ингибирующие TIM3, описывают в WO2013/006490 и US2010/0247521. Другие антитела против TIM3 включают гуманизированные версии RMT3-23 (описываемые в Ngiow et al., 2011, Cancer Res, 71:3540-3551) и клон 8B.2C12 (описываемый в Monney et al., 2002, Nature, 415:536-541). Биспецифические антитела, ингибирующие TIM3 и PD-1, описывают в US2013/0156774.

В других вариантах осуществления средство, повышающее активность CAR-экспрессирующей клетки, является ингибитором CEACAM (например, ингибитором CEACAM-1, CEACAM-3 и/или CEACAM-5). В одном из вариантов осуществления ингибитор CEACAM является молекулой антитела против CEACAM. Примеры антител против CEACAM-1 описывают в WO2010/125571, WO2013/082366 WO2014/059251 и WO2014/022332, например, моноклональное антитело 34B1, 26H7 и 5F4, или их рекомбинантные формы, как описано, например, в US2004/0047858, US7132255 и WO99/052552. В других вариантах осуществления антитело против CEACAM связывается с CEACAM-5, как описано, например, в Zheng et al. PLoS One. 2010 Sep 2;5(9). pii: e12529 (DOI:10:1371/journal.pone.0021146), или перекрестно реагирует с CEACAM-1 и CEACAM-5, как описано, например, в WO2013/054331 и US2014/0271618.

Не желая быть связанными какой-либо теорией, полагают, что клеточные молекулы адгезии раково-эмбрионального антигена (CEACAM), такие как CEACAM-1 и CEACAM-5, по меньшей мере, частично, опосредуют ингибирование противоопухолевого иммунного ответа (см. например, Markel et al. J Immunol. 2002 Mar 15;168(6):2803-10; Markel et al. J Immunol. 2006 Nov 1;177(9):6062-71; Markel et al. Immunology. 2009 Feb;126(2):186-200; Markel et al. Cancer Immunol Immunother. 2010 Feb;59(2):215-30; Ortenberg et al. Mol Cancer Ther. 2012 Jun;11(6):1300-10; Stern et al. J Immunol. 2005 Jun 1;174(11):6692-701; Zheng et al. PLoS One. 2010 Sep 2;5(9). pii: e12529). Например, CEACAM-1 описывают как гетерофильный лиганд TIM-3, играющий роль в TIM-3-опосредованной T-клеточной толерантности и истощении (см. например, WO2014/022332; Huang, et al. (2014) Nature doi:10.1038/nature13848). В вариантах осуществления показано, что совместная блокада CEACAM-1 и TIM-3 повышает противоопухолевый иммунный ответ в моделях ксенотрансплантата колоректального рака (см. например, WO2014/022332; Huang, et al. (2014), выше). В других вариантах осуществления совместная блокада CEACAM-1 и PD-1 снижает T-клеточную толерантность, как описывают, например, в WO2014/059251. Таким образом, ингибиторы CEACAM можно использовать с другими иммуномодуляторами, представленными в настоящем описании (например, ингибиторами против PD-1 и/или против TIM-3), для повышения иммунного ответа против злокачественного новообразования, например, меланомы, рака легких (например, NSCLC), рака мочевого пузыря, рака толстого кишечника, рака яичников и других злокачественных новообразований, как представлено в настоящем описании.

LAG3 (ген активации лимфоцитов-3 или CD223) является молекулой поверхности клетки, экспрессирующейся на активированных T-клетках и B-клетках, которая, как показано, играет роль в истощении CD8+ T-клеток. Антитела, фрагменты антител и другие ингибиторы LAG3 и его лиганды доступны в этой области и их можно использовать в комбинации с CAR CD19 или CAR BCMA, представленными в настоящем описании. Например, BMS-986016 (Bristol-Myers Squib) является моноклональным антителом против LAG3. IMP701 (Immutep) является антагонистическим антителом против LAG3, и IMP731 (Immutep и GlaxoSmithKline) является истощающим LAG3 антителом. Другие ингибиторы LAG3 включают IMP321 (Immutep), являющийся рекомбинантным слитым белком растворимой части LAG3 и Ig, связывающимся с молекулами MHC класса II и активирующим антигенпредставляющие клетки (APC). Другие антитела описывают, например, в WO2010/019570.

В некоторых вариантах осуществления средство, повышающее активность CAR-экспрессирующей клетки, может являться, например, слитым белком, содержащим первый домен и второй домен, где первый домен является ингибиторной молекулой или его фрагментом, и второй домен является полипептидом, ассоциированным с положительным сигналом, например, полипептидом, содержащим внутриклеточный сигнальный домен, как представлено в настоящем описании. В некоторых вариантах осуществления полипептид, ассоциированный с положительным сигналом, может включать костимуляторный домен CD28, CD27, ICOS, например, внутриклеточный сигнальный домен CD28, CD27 и/или ICOS и/или первичный сигнальный домен, например, из CD3 дзета, например, представленный в настоящем описании. В одном из вариантов осуществления слитый белок экспрессируется той же клеткой, экспрессирующей CAR. В другом варианте осуществления слитый белок экспрессируется клеткой, например, T-клеткой или NK-клеткой, не экспрессирующей CAR против BCMA.

В одном из вариантов осуществления средство, повышающее активность CAR-экспрессирующей клетки, представленной в настоящем описании, является miR-17-92.

В одном из вариантов осуществления средство, повышающее активность CAR-экспрессирующей клетки, представленной в настоящем описании, является цитокином. Цитокины обладают важными функциями, относящимися к экспансии, дифференцировке, выживаемости и гомеостазу T-клеток. Цитокины, которые можно вводить индивидууму, которому вводят CAR-экспрессирующие клетки, представленные в настоящем описании, включают: ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-7, ИЛ-9, ИЛ-15, ИЛ-18 и ИЛ-21 или их комбинацию. В предпочтительных вариантах осуществления вводимый цитокин является ИЛ-7, ИЛ-15, ИЛ-21 или их комбинацией. Цитокин можно вводить раз в сутки или более раз в сутки, например, дважды в сутки, три раза в сутки или четыре раза в сутки. Цитокин можно вводить в течение нескольких дней, например, цитокин вводят в течение 2 дней, 3 дней, 4 дней, 5 дней, 6 дней, 1 недели, 2 недель, 3 недель или 4 недель. Например, цитокин вводят один раз в сутки в течение 7 дней.

В вариантах осуществления цитокин вводят в комбинации с CAR-экспрессирующими T-клетками. Цитокин можно вводить одновременно с CAR-экспрессирующими T-клетками, например, вводить в один и тот же день. Цитокин можно получать в той же фармацевтической композиции, что и CAR-экспрессирующие T-клетки, или можно получать в отдельных фармацевтических композициях. Альтернативно, цитокин можно вводить вскоре после введения CAR-экспрессирующих T-клеток, например, через 1 день, 2 дня, 3 дня, 4 дня, 5 дней, 6 дней или 7 дней после введения CAR-экспрессирующих T-клеток. В вариантах осуществления, в которых цитокин вводят по схеме введения, занимающей несколько дней, первый день схемы введения цитокина может являться тем же днем, что и день введения CAR-экспрессирующих T-клеток, или первый день схемы введения цитокина может быть через 1 день, 2 дня, 3 дня, 4 дня, 5 дней, 6 дней или 7 дней после введения CAR-экспрессирующих T-клеток. В одном из вариантов осуществления в первый день индивидууму вводят CAR-экспрессирующие T-клетки и во второй день вводят цитокин один раз в сутки в течение следующих 7 дней. В предпочтительном варианте осуществления цитокин для введения в комбинации с CAR-экспрессирующими T-клетками является ИЛ-7, ИЛ-15 или ИЛ-21.

В других вариантах осуществления цитокин вводят через период времени после введения CAR-экспрессирующих клеток, например, по меньшей мере через 2 недели, 3 недели, 4 недели, 6 недель, 8 недель, 10 недель, 12 недель, 4 месяцев, 5 месяцев, 6 месяцев, 7 месяцев, 8 месяцев, 9 месяцев, 10 месяцев, 11 месяцев, 1 год или более после введения CAR-экспрессирующих клеток. В одном из вариантов осуществления цитокин вводят после оценки ответа индивидуума на CAR-экспрессирующие клетки. Например, индивидууму вводят CAR-экспрессирующие клетки в соответствии со схемами введения и лечения, представленными в настоящем описании. Ответ индивидуума на терапию CAR-экспрессирующими клетками оценивают через 2 недели, 3 недели, 4 недели, 6 недель, 8 недель, 10 недель, 12 недель, 4 месяцев, 5 месяцев, 6 месяцев, 7 месяцев, 8 месяцев, 9 месяцев, 10 месяцев, 11 месяцев, 1 год или более после введения CAR-экспрессирующих клеток любым из способов, представленных в настоящем описании, включая ингибирование роста опухоли, снижение циркулирующих опухолевых клеток или регрессирование опухоли. Индивидуумам, не проявляющим достаточный ответ на терапию CAR-экспрессирующими клетками, можно вводить цитокин. Введение цитокина индивидууму, имеющему субоптимальный ответ на терапию CAR-экспрессирующими клетками, улучшает эффективность CAR-экспрессирующих клеток или противораковую активность. В предпочтительном варианте осуществления цитокин, вводимый после введения CAR-экспрессирующих клеток, является ИЛ-7.

Комбинация с низкой, усиливающей иммунитет дозой ингибитора mTOR

В способах, представленных в настоящем описании, используют низкие, усиливающие иммунитет дозы ингибиторов mTOR, например, аллостерических ингибиторов mTOR, включая рапалоги, такие как RAD001. Введение низкой, усиливающей иммунитет дозы ингибитора mTOR (например, дозы, недостаточной для полной супрессии иммунной системы, но достаточной для улучшения иммунной функции) может оптимизировать свойства иммунных эффекторных клеток, например, T-клеток или CAR-экспрессирующих клеток, у индивидуума. Способы измерения ингибирования mTOR, дозы, схемы лечения и подходящие фармацевтические композиции описывают в патентной заявке США № 2015/01240036, включенной, таким образом, в настоящее описание в качестве ссылки.

В варианте осуществления введение низкой, усиливающей иммунитет дозы ингибитора mTOR приводит к одному или более из следующего:

i) снижению количества PD-1-положительных иммунных эффекторных клеток;

ii) повышению количества PD-1-отрицательных иммунных эффекторных клеток;

iii) повышению соотношения PD-1-отрицательных иммунных эффекторных клеток/PD-1-положительных иммунных эффекторных клеток;

iv) повышению количества наивных T-клеток;

v) повышению экспрессии одного или более из следующих маркеров: CD62L^high, CD127^high, CD27⁺ и BCL2, например, на T-клетках памяти, например, предшественниках T-клеток памяти;

vi) снижению экспрессии KLRG1, например, на T-клетках памяти, например, предшественниках T-клеток памяти; или

vii) повышению количества предшественников T-клеток памяти, например, клеток с любой или комбинацией следующих характеристик: повышения CD62L^high, повышения CD127^high, повышения CD27⁺, снижения KLRG1 и повышения BCL2;

и где любое из указанного выше, например, i), ii), iii), iv), v), vi) или vii), происходит, например, по меньшей мере, транзиторно, например, по сравнению с неподвергнутым лечению индивидуумом.

В другом варианте осуществления введение низкой, усиливающей иммунитет дозы ингибитора mTOR приводит к повышенной или пролонгированной пролиферации или выживаемости CAR-экспрессирующих клеток, например, в культуре или у индивидуума, например, по сравнению с необработанными CAR-экспрессирующими клетками или неподвергнутым лечению индивидуумом. В вариантах осуществления повышенная пролиферация или выживаемость ассоциирована с повышением количества CAR-экспрессирующих клеток. Способы измерения повышенной или пролонгированной пролиферации описывают в примерах 15 и 16. В другом варианте осуществления введение низкой, усиливающей иммунитет дозы ингибитора mTOR приводит к повышенному уничтожению злокачественных клеток CAR-экспрессирующими клетками, например, в культуре или у индивидуума, например, по сравнению с необработанными CAR-экспрессирующими клетками или неподвергнутым лечению индивидуумом. В вариантах осуществления повышенный цитолиз злокачественных клеток ассоциирован со снижением объема опухоли. Способы измерения повышенного цитолиза злокачественных клеток представлены в настоящем описании, например, в примерах 2, 5-6, 8 и 13. В одном из вариантов осуществления клетки, экспрессирующие молекулу CAR, например, молекулу CAR, представленную в настоящем описании, вводят в комбинации с низкой, усиливающей иммунитет дозой ингибитора mTOR, например, аллостерического ингибитора mTOR, например, RAD001, или каталитического ингибитора mTOR. Например, введение низкой, усиливающей иммунитет дозы ингибитора mTOR можно начинать перед введением CAR-экспрессирующей клетки, представленной в настоящем описании, завершать перед введением CAR-экспрессирующей клетки, представленной в настоящем описании, начинать одновременно с введением CAR-экспрессирующей клетки, представленной в настоящем описании, оно может перекрываться с введением CAR-экспрессирующей клетки, представленной в настоящем описании, или его можно продолжать после введения CAR-экспрессирующей клетки, представленной в настоящем описании.

Альтернативно или дополнительно, посредством введения низкой, усиливающей иммунитет дозы ингибитора mTOR можно оптимизировать иммунные эффекторные клетки, подлежащие конструированию для экспрессии молекулы CAR, представленной в настоящем описании. В таких вариантах осуществления введение низкой, усиливающей иммунитет дозы ингибитора mTOR, например, аллостерического ингибитора, например, RAD001, или каталитического ингибитора, начинают или завершают после сбора иммунных эффекторных клеток, например, T-клеток или NK-клеток, подлежащих конструированию для экспрессии молекулы CAR, представленной в настоящем описании, из индивидуума.

В другом варианте осуществления иммунные эффекторные клетки, например, T-клетки или NK-клетки, подлежащие конструированию для экспрессии молекулы CAR, представленной в настоящем описании, например, после забора у индивидуума, или CAR-экспрессирующие иммунные эффекторные клетки, например, T-клетки или NK-клетки, например, перед введением индивидууму, можно культивировать в присутствие низкой, усиливающей иммунитет дозы ингибитора mTOR.

В варианте осуществления введение индивидууму низкой, усиливающей иммунитет дозы ингибитора mTOR включает введение, например, один раз в неделю, например, в лекарственной форме с немедленным высвобождением от 0,1 до 20, от 0,5 до 10, от 2,5 до 7,5, от 3 до 6 или приблизительно 5 мг RAD001 или его биоэквивалентной дозы. В варианте осуществления введение индивидууму низкой, усиливающей иммунитет дозы ингибитора mTOR включает введение, например, один раз в неделю, например, в лекарственной форме с замедленным высвобождением от 0,3 до 60, от 1,5 до 30, от 7,5 до 22,5, от 9 до 18 или приблизительно 15 мг RAD001 или его биоэквивалентной дозы.

В варианте осуществления доза ингибитора mTOR ассоциирована с ингибированием mTOR или обеспечивает ингибирование mTOR по меньшей мере на 5, но не более 90%, по меньшей мере на 10, но не более 90%, по меньшей мере на 15,, но не более 90%, по меньшей мере на 20, но не более 90%, по меньшей мере на 30, но не более 90%, по меньшей мере на 40, но не более 90%, по меньшей мере на 50, но не более 90%, по меньшей мере на 60, но не более 90%, по меньшей мере на 70, но не более 90%, по меньшей мере на 5, но не более 80%, по меньшей мере на 10, но не более 80%, по меньшей мере на 15, но не более 80%, по меньшей мере на 20, но не более 80%, по меньшей мере на 30, но не более 80%, по меньшей мере на 40, но не более 80%, по меньшей мере на 50, но не более 80%, по меньшей мере на 60, но не более 80%, по меньшей мере на 5, но не более 70%, по меньшей мере на 10, но не более 70%, по меньшей мере на 15, но не более 70%, по меньшей мере на 20, но не более 70%, по меньшей мере на 30, но не более 70%, по меньшей мере на 40, но не более 70%, по меньшей мере на 50, но не более 70%, по меньшей мере на 5, но не более 60%, по меньшей мере на 10, но не более 60%, по меньшей мере на 15, но не более 60%, по меньшей мере на 20, но не более 60%, по меньшей мере на 30, но не более 60%, по меньшей мере на 40, но не более 60%, по меньшей мере на 5, но не более 50%, по меньшей мере на 10, но не более 50%, по меньшей мере на 15, но не более 50%, по меньшей мере на 20, но не более 50%, по меньшей мере на 30, но не более 50%, по меньшей мере на 40, но не более 50%, по меньшей мере на 5, но не более 40%, по меньшей мере на 10, но не более 40%, по меньшей мере на 15, но не более 40%, по меньшей мере на 20, но не более 40%, по меньшей мере на 30, но не более 40%, по меньшей мере на 35, но не более 40%, по меньшей мере на 5, но не более 30%, по меньшей мере на 10, но не более 30%, по меньшей мере на 15, но не более 30%, по меньшей мере на 20, но не более 30% или по меньшей мере на 25, но не более 30%.

В варианте осуществления введение индивидууму низкой, усиливающей иммунитет дозы ингибитора mTOR включает введение, например, один раз в неделю, например, в лекарственной форме с немедленным высвобождением от 0,1 до 20, от 0,5 до 10, от 2,5 до 7,5, от 3 до 6 или приблизительно 5 мг RAD001 или его биоэквивалентной дозы. В варианте осуществления введение индивидууму низкой, усиливающей иммунитет дозы ингибитора mTOR включает введение, например, один раз в неделю, например, в лекарственной форме с замедленным высвобождением от 0,3 до 60, от 1,5 до 30, от 7,5 до 22,5, от 9 до 18 или приблизительно 15 мг RAD001 или его биоэквивалентной дозы.

Степень ингибирования mTOR можно выражать в виде степени ингибирования киназы P70 S6, или она может соответствовать ей, например, степень ингибирования mTOR можно определять по уровню снижения киназной активности P70 S6, например, по снижению фосфорилирования субстрата киназы P70 S6. Уровень ингибирования mTOR можно оценивать различными способами, такими как измерение киназной активности P70 S6 с помощью анализа Boulay, как описано в патентной заявке США № 2015/01240036, включенной, таким образом, в настоящее описание в качестве ссылки, или как описано в патенте США № 7727950, включенном, таким образом, в настоящее описание в качестве ссылки, измерение уровня фосфорилированного S6 посредством вестерн-блоттинга или оценка изменения соотношения PD1-отрицательных иммунных эффекторных клеток и PD1-положительных иммунных эффекторных клеток.

Как применяют в настоящем описании, термин "ингибитор mTOR" относится к соединению, или лиганду, или его фармацевтически приемлемой соли, ингибирующим киназу mTOR в клетке. В варианте осуществления ингибитор mTOR является аллостерическим ингибитором. Аллостерические ингибиторы mTOR включают нейтральное трициклическое соединение рапамицин (сиролимус), родственные рапамицину соединения, являющиеся соединениями, имеющими структурное и функциональное сходство с рапамицином, включая, например, производные рапамицина, аналоги рапамицина (также обозначаемые как рапалоги) и другие макролидные соединения, ингибирующие активность mTOR. В варианте осуществления ингибитор mTOR является каталитическим ингибитором.

Рапамицин является известным макролидным антибиотиком, продуцирующим Streptomyces hygroscopicus, имеющим структуру, представленную формулой A.

(A)

См., например, McAlpine, J.B., et al., J. Antibiotics (1991) 44: 688; Schreiber, S.L., et al., J. Am. Chem. Soc. (1991) 113: 7433; патент США № 3929992. Существует множество схем нумерации, предложенных для рапамицина. Во избежание путаницы, когда конкретные аналоги рапамицина называют в настоящем описании, названия дают со ссылкой на рапамицин с использованием схемы нумерации по формуле A.

Аналогами рапамицина, применимыми в настоящем изобретении, являются, например, O-замещенные аналоги, в которых гидроксильную группу в циклогексильном кольце рапамицина заменяют OR₁, в котором R₁ является гидроксиалкилом, гидроксиалкоксиалкилом, ациламиноалкилом или аминоалкилом, например, RAD001, также известный как эверолимус, как описано в US5665772 и WO94/09010, содержание каждого из которых включено в настоящее описание в качестве ссылки.

Другие подходящие аналоги рапамицина включают аналоги, замещенные в положении 26 или 28. Аналог рапамицина может являться эпимером аналога, указанного выше, в частности, эпимером аналога, замещенного в положении 40, 28 или 26, и, необязательно, его можно дополнительно гидрогенизировать, например, как описано в US6015815, WO95/14023 и WO99/15530, содержание которых включено в настоящее описание в качестве ссылок, например, ABT578, также известный как зотаролимус, или аналог рапамицина, описываемый в US7091213, WO98/02441 и WO01/14387, содержание которых включено в настоящее описание в качестве ссылок, например, AP23573, также известный как ридафоролимус.

Примеры аналогов рапамицина, пригодных для использования в настоящем изобретении, из US5665772, включают, в качестве неограничивающих примеров, 40-O-бензил-рапамицин, 40-O-(4'-гидроксиметил)бензил-рапамицин, 40-O-[4'-(1,2-дигидроксиэтил)]бензил-рапамицин, 40-O-аллил-рапамицин, 40-O-[3'-(2,2-диметил-1,3-диоксолан-4(S)-ил)-проп-2'-ен-1'-ил]-рапамицин, (2'E,4'S)-40-O-(4',5'-дигидроксипент-2'-ен-1'-ил)-рапамицин, 40-O-(2-гидрокси)этоксикарбонилметил-рапамицин, 40-O-(2-гидрокси)этил-рапамицин, 40-O-(3-гидрокси)пропил-рапамицин, 40-O-(6-гидрокси)гексил-рапамицин, 40-O-[2-(2-гидрокси)этокси]этил-рапамицин, 40-O-[(3S)-2,2-диметилдиоксолан-3-ил]метил-рапамицин, 40-O-[(2S)-2,3-дигидроксипроп-1-ил]-рапамицин, 40-O-(2-ацетокси)этил-рапамицин, 40-O-(2-никотиноилокси)этил-рапамицин, 40-O-[2-(N-морфолино)ацетокси]этил-рапамицин, 40-O-(2-N-имидазолилацетокси)этил-рапамицин, 40-O-[2-(N-метил-N'-пиперазинил)ацетокси]этил-рапамицин, 39-O-десметил-39,40-O,O-этилен-рапамицин, (26R)-26-дигидро-40-O-(2-гидрокси)этил-рапамицин, 40-O-(2-аминоэтил)-рапамицин, 40-O-(2-ацетаминоэтил)-рапамицин, 40-O-(2-никотинамидоэтил)-рапамицин, 40-O-(2-(N-метил-имидазо-2'-илкарбоэтоксамидо)этил)-рапамицин, 40-O-(2-этоксикарбониламиноэтил)-рапамицин, 40-O-(2-толилсульфонамидоэтил)-рапамицин и 40-O-[2-(4',5'-дикарбоэтокси-1',2',3'-триазол-1'-ил)-этил]-рапамицин.

Известны другие аналоги рапамицина, применимые в настоящем изобретении, которые являются аналогами, в которых гидроксильную группу в циклогексильном кольце рапамицина и/или гидроксигруппу в положении 28 заменяют гидроксиэфирной группой, например, аналоги рапамицина, обнаруживаемые в USRE44768, например темсиролимус.

Другие аналоги рапамицина, применимые в настоящем изобретении, включают аналоги, в которых метоксигруппу в положении 16 заменяют другим заместителем, предпочтительно (необязательно гидрокси-замещенной) алкинилоксигруппой, бензилом, ортометоксибензилом или хлорбензилом, и/или в которых метоксигруппу в положении 39 удаляют вместе с углеродом 39 таким образом, что циклогексильное кольцо рапамицина становится циклопентильным кольцом без метоксигруппы в положении 39, например, как описано в WO95/16691 и WO96/41807, содержание которых включено в настоящее описание в качестве ссылок. Аналоги можно дополнительно модифицировать таким образом, что гидроксигруппа в положении 40 рапамицина является алкилированной, и/или 32-карбонил является восстановленным.

Аналоги рапамицина из WO95/16691 включают, в качестве неограничивающих примеров, 16-деметокси-16-(пент-2-инил)окси-рапамицин, 16-деметокси-16-(бут-2-инил)окси-рапамицин, 16-деметокси-16-(пропаргил)окси-рапамицин, 16-деметокси-16-(4-гидрокси-бут-2-инил)окси-рапамицин, 16-деметокси-16-бензилокси-40-O-(2-гидроксиэтил)-рапамицин, 16-деметокси-16-бензилокси-рапамицин, 16-деметокси-16-орто-метоксибензил-рапамицин, 16-деметокси-40-O-(2-метоксиэтил)-16-пент-2-инил)окси-рапамицин, 39-деметокси-40-дезокси-39-формил-42-нор-рапамицин, 39-деметокси-40-дезокси-39-гидроксиметил-42-нор-рапамицин, 39-деметокси-40-дезокси-39-карбокси-42-нор-рапамицин, 39-деметокси-40-дезокси-39-(4-метил-пиперазин-1-ил)карбонил-42-нор-рапамицин, 39-деметокси-40-дезокси-39-(морфолин-4-ил)карбонил-42-нор-рапамицин, 39-деметокси-40-дезокси-39-[N-метил,N-(2-пиридин-2-ил-этил)]карбамоил-42-нор-рапамицин и 39-деметокси-40-дезокси-39-(p-толуолсульфонилгидразонометил)-42-нор-рапамицин.

Аналоги рапамицина из WO96/41807 включают, в качестве неограничивающих примеров, 32-дезоксо-рапамицин, 16-O-пент-2-инил-32-дезоксо-рапамицин, 16-O-пент-2-инил-32-дезоксо-40-O-(2-гидрокси-этил)-рапамицин, 16-O-пент-2-инил-32-(S)-дигидро-40-O-(2-гидроксиэтил)-рапамицин, 32(S)-дигидро-40-O-(2-метокси)этил-рапамицин и 32(S)-дигидро-40-O-(2-гидроксиэтил)-рапамицин.

Другим подходящим аналогом рапамицина является умиролимус, как описано в US2005/0101624, содержание которой включено в настоящее описание в качестве ссылки.

RAD001, также известный как эверолимус (Afinitor®), имеет химическое название (1R,9S,12S,15R,16E,18R,19R,21R,23S,24E,26E,28E,30S,32S,35R)-1,18-дигидрокси-12-{(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-гидроксиэтокси)-3-метоксициклогексил]-1-метилэтил}-19,30-диметокси-15,17,21,23,29,35-гексаметил-11,36-диокса-4-аза-трицикло[30.3.1.04.9]гексатриаконта-16,24,26,28-тетраен-2,3,10,14,20-пентаон, как описано в US5665772 и WO94/09010, содержание каждого из которых включено в настоящее описание в качестве ссылки.

Дополнительные примеры аллостерических ингибиторов mTOR включают сиролимус (рапамицин, AY-22989), 40-[3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропаноат]-рапамицин (также известный как темсиролимус или CCI-779) и ридафоролимус (AP-23573/MK-8669). Другие примеры аллостерических ингибиторов mTOR включают зотаролимус (ABT578) и умиролимус.

Альтернативно или дополнительно, обнаружено, что каталитические, АТФ-конкурентные ингибиторы mTOR напрямую направленно воздействуют на киназный домен mTOR и воздействуют на mTORC1 и mTORC2. Они также являются более эффективными ингибиторами mTORC1, чем такие аллостерические ингибиторы mTOR, как рапамицин, т.к. они модулируют рапамицин-резистентные последствия действия mTORC1, такие как фосфорилирование 4EBP1-T37/46 и кэп-зависимая трансляция.

Каталитические ингибиторы включают: BEZ235 или 2-метил-2-[4-(3-метил-2-оксо-8-хинолин-3-ил-2,3-дигидро-имидазо[4,5-c]хинолин-1-ил)-фенил]-пропионитрил или его монотозилатную соль (синтез BEZ235 описывают в WO2006/122806), CCG168 (также известный как AZD-8055, Chresta, C.M., et al., Cancer Res, 2010, 70(1), 288-298) имеющий химическое название {5-[2,4-бис-((S)-3-метил-морфолин-4-ил)-пиридо[2,3d]пиримидин-7-ил]-2-метокси-фенил}-метанол, 3-[2,4-бис[(3S)-3-метилморфолин-4-ил]пиридо[2,3-d]пиримидин-7-ил]-N-метилбензамид (WO09104019), 3-(2-аминобензo[d]оксазол-5-ил)-1-изопропил-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4-амин (WO10051043 и WO2013023184), N-(3-(N-(3-((3,5-диметоксифенил)амино)хиноксалин-2-ил)сульфамоил)фенил)-3-метокси-4-метилбензамид (WO07044729 и WO12006552), PKI-587 (Venkatesan, A.M., J. Med.Chem., 2010, 53, 2636-2645), имеющий химическое название 1-[4-[4-(диметиламино)пиперидин-1-карбонил]фенил]-3-[4-(4,6-диморфолино-1,3,5-триазин-2-ил)фенил]мочевина, GSK-2126458 (ACS Med. Chem. Lett., 2010, 1, 39-43), имеющий химическое название 2,4-дифтор-N-{2-метокси-5-[4-(4-пиридазинил)-6-хинолинил]-3-пиридинил}бензолсульфонамид, 5-(9-изопропил-8-метил-2-морфолино-9H-пурин-6-ил)пиримидин-2-амин (WO10114484) и (E)-N-(8-(6-амино-5-(трифторметил)пиридин-3-ил)-1-(6-(2-цианопропан-2-ил)пиридин-3-ил)-3-метил-1H-имидазо[4,5-c]хинолин-2(3H)-илиден)цианамид (WO12007926).

Дополнительные примеры каталитических ингибиторов mTOR включают 8-(6-метокси-пиридин-3-ил)-3-метил-1-(4-пиперазин-1-ил-3-трифторметил-фенил)-1,3-дигидро-имидазо[4,5-c]хинолин-2-он (WO2006/122806) и Ku-0063794 (Garcia-Martinez JM, et al.,Biochem J., 2009, 421(1), 29-42). Ku-0063794 является специфическим ингибитором мишени рапамицина в клетках млекопитающих (mTOR). WYE-354 является другим примером каталитического ингибитора mTOR (Yu K, et al. (2009). Biochemical, Cellular, and In vivo Activity of Novel ATP-Competitive and Selective Inhibitors of the Mammalian Target of Rapamycin. Cancer Res. 69(15): 6232-6240).

Ингибиторы mTOR, применимые по настоящему изобретению, также включают пролекарства, производные, фармацевтически приемлемые соли или аналоги любого из указанных выше.

Ингибиторы mTOR, такие как RAD001, можно составлять для доставки с учетом способов, хорошо известных в этой области, с учетом конкретных доз, представленных в настоящем описании. В частности, в патенте США № 6004973 (включенном в настоящее описание в качестве ссылки) представлены примеры составов, применимых с ингибиторами mTOR, представленными в настоящем описании.

Способы и биомаркеры для оценки эффективности CAR или пригодности образцов

В другом аспекте изобретение относится к способу оценки или мониторинга эффективности терапии CAR-экспрессирующими клетками (например, терапии BCMACAR) у индивидуума (например, индивидуума, имеющего злокачественное новообразование, например, гемобластоз) или пригодности образца (например, аферезного образца) для терапии CAR (например, терапии BCMACAR). Способ включает определение значения эффективности терапии CAR или пригодности образца, где указанное значение свидетельствует об эффективности или пригодности терапии CAR-экспрессирующими клетками.

В вариантах осуществления значение эффективности терапии CAR или пригодности образца включает измерение одного, двух, трех, четырех, пяти, шести или более (всех) из следующего:

(i) уровня или активности одного, двух, трех или более (например, всех) из покоящихся T_EFF-клеток, покоящихся T_REG-клеток, T-клеток более ранних стадий развития (например, CD4 или CD8 клеток более ранних стадий развития или гамма/дельта T-клеток), ранних T-клеток памяти или их комбинации в образце (например, аферезном образце или образце произведенного продукта CAR-экспрессирующих клеток);

(ii) уровня или активности одного, двух, трех или более (например, всех) из активированных T_EFF-клеток, активированных T_REG клетки, T-клеток более поздних стадий развития (например, CD4 или CD8 клеток более поздних стадий развития), поздних T-клеток памяти или их комбинации в образце (например, аферезном образце или образце произведенного продукта CAR-экспрессирующих клеток);

(iii) уровня или активности маркера истощения иммунных клеток, например, одного, двух или более ингибиторов иммунных контрольных точек (например, PD-1, PD-L1, TIM-3 и/или LAG-3) в образце (например, аферезном образце или образце произведенного продукта CAR-экспрессирующих клеток). В одном из вариантов осуществления иммунная клетка имеет истощенный фенотип, например, коэкспрессирует по меньшей мере два маркера истощения, например, коэкспрессирует PD-1 и TIM-3. В других вариантах осуществления иммунная клетка имеет истощенный фенотип, например, коэкспрессирует, по меньшей мере, два маркера истощения, например, коэкспрессирует PD-1 и LAG-3;

(iv) уровня или активности CD27 и/или CD45RO- (например, CD27+ CD45RO-) иммунных эффекторных клеток, например, в популяции CD4+ или CD8+ T-клеток, в образце (например, аферезном образце или образце произведенного продукта CAR-экспрессирующих клеток);

(v) уровня или активности одного, двух, трех, четырех, пяти, десяти, двадцати или более биомаркеров, выбранных из CCL20, ИЛ-17a и/или ИЛ-6, PD-1, PD-L1, LAG-3, TIM-3, CD57, CD27, CD122, CD62L, KLRG1;

(vi) уровня или активности цитокина (например, качества репертуара цитокинов) в образце продукта CAR-экспрессирующей клетки, например, образце продукта BCMA-экспрессирующей клетки; или

(vii) эффективности трансдукции CAR-экспрессирующей клетки в образце произведенного продукта CAR-экспрессирующих клеток.

В некоторых вариантах осуществления любого из способов, представленных в настоящем описании, терапия CAR-экспрессирующими клетками включает множество (например, популяцию) CAR-экспрессирующих иммунных эффекторных клеток, например, множество (например, популяцию) T-клеток или NK-клеток или их комбинацию. В одном из вариантов осуществления терапия CAR-экспрессирующими клетками является терапией BCMACAR.

В некоторых вариантах осуществления любого из способов, представленных в настоящем описании, измерение одного или более из (i)-(vii) осуществляют в аферезном образце, полученном из индивидуума. Аферезный образец можно оценивать перед инфузией или реинфузией.

В некоторых вариантах осуществления любого из способов, представленных в настоящем описании, измерение одного или более из (i)-(vii) осуществляют в образце произведенного продукта CAR-экспрессирующих клеток, например, образце продукта BCMACAR-экспрессирующих клеток. Произведенный продукт CAR-экспрессирующих клеток можно оценивать перед инфузией или реинфузией.

В некоторых вариантах осуществления любого из способов, представленных в настоящем описании, индивидуума оценивают до, в течение или после проведения терапии CAR-экспрессирующими клетками.

В некоторых вариантах осуществления любого из способов, представленных в настоящем описании, посредством измерения одного или более из (i)-(vii) оценивают профиль одного или более из экспрессии гена, проточной цитометрии или экспрессии белка.

В некоторых вариантах осуществления любого из способов, представленных в настоящем описании, способ дополнительно включает идентификацию индивидуума как пациента с ответом на лечение, пациента без ответа на лечение, пациента с рецидивом или пациента без рецидива с учетом измерения одного или более из (i)-(vii).

В некоторых вариантах осуществления любого из способов, представленных в настоящем описании, пациент с ответом на лечение (например, пациент с полным ответом на лечение) имеет или идентифицирован как имеющий более высокий уровень или активность одного, двух или более (всех) из GZMK, PPF1BP2 или наивных T-клеток по сравнению с пациентом без ответа на лечение.

В некоторых вариантах осуществления любого из способов, представленных в настоящем описании, пациент без ответа на лечение имеет или идентифицирован как имеющий более высокий уровень или активность одного, двух, трех, четырех, пяти, шести, семи или более (например, всех) из ИЛ-22, ИЛ-2RA, ИЛ-21, IRF8, ИЛ-8, CCL17, CCL22, эффекторных T-клеток или регуляторных T-клеток по сравнению с пациентом с ответом на лечение.

В варианте осуществления пациент с рецидивом является пациентом, имеющим или идентифицированным как имеющий повышенный уровень экспрессии одного или более (например, 2, 3, 4 или всех) из следующих генов по сравнению с пациентами без рецидива: MIR199A1, MIR1203, uc021ovp, ITM2C и HLA-DQB1, и/или сниженные уровни экспрессии одного или более (например, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 или всех) из следующих генов по сравнению с пациентами без рецидива: PPIAL4D, TTTY10, TXLNG2P, MIR4650-1, KDM5D, USP9Y, PRKY, RPS4Y2, RPS4Y1, NCRNA00185, SULT1E1 и EIF1AY.

В некоторых вариантах осуществления любого из способов, представленных в настоящем описании, пациент с полным ответом на лечение имеет или идентифицирован как имеющий более высокую, например статистически более высокую, процентную долю CD8+ T-клеток по сравнению с референсным значением, например, процентной долей CD8+ T-клеток у пациента без ответа на лечение.

В некоторых вариантах осуществления любого из способов, представленных в настоящем описании, пациент с полным ответом на лечение имеет или идентифицирован как имеющий более высокую процентную долю CD27+ CD45RO- иммунных эффекторных клеток, например, в CD8+ популяции, по сравнению с референсным значением, например, количеством CD27+ CD45RO- иммунных эффекторных клеток у пациента без ответа на лечение.

В некоторых вариантах осуществления любого из способов, представленных в настоящем описании, пациент с полным ответом на лечение или пациент с частичным ответом на лечение имеет или идентифицирован как имеющий более высокую, например, статистически более высокую, процентную долю CD4+ T-клеток по сравнению с референсным значением, например, процентной долей CD4+ T-клеток у пациента без ответа на лечение.

В некоторых вариантах осуществления любого из способов, представленных в настоящем описании, пациент с полным ответом на лечение имеет или идентифицирован как имеющий более высокую процентную долю одного, двух, трех или более (например, всех) из покоящихся T_EFF-клеток, покоящихся T_REG-клеток, T-клеток более ранних стадий развития (например, CD4 или CD8 клеток более ранних стадий развития или гамма/дельта T-клеток), ранних T-клеток памяти или их комбинации по сравнению с референсным значением, например, покоящихся T_EFF-клеток, покоящихся T_REG-клеток, T-клеток более ранних стадий развития (например, CD4 или CD8 клеток более ранних стадий развития) или ранних T-клеток памяти у пациента без ответа на лечение количества.

В некоторых вариантах осуществления любого из способов, представленных в настоящем описании, пациент без ответа на лечение имеет или идентифицирован как имеющий более высокую процентную долю одного, двух, трех или более (например, всех) из активированных T_EFF-клеток, активированных T_REG-клеток, T-клеток на более поздних стадиях развития (например, CD4 или CD8 клеток на более поздних стадиях развития), поздних T-клеток памяти или их комбинации по сравнению с референсным значением, например, количества активированных T_EFF-клеток, активированных T_REG-клеток, T-клеток на более поздних стадиях развития (например, CD4 или CD8 клеток на более поздних стадиях развития) или поздних T-клеток памяти у пациента с ответом на лечение.

В некоторых вариантах осуществления любого из способов, представленных в настоящем описании, пациент без ответа на лечение имеет или идентифицирован как имеющий более высокую процентную долю маркера истощения иммунных клеток, например, одного, двух или более ингибиторов иммунных контрольных точек (например, PD-1, PD-L1, TIM-3 и/или LAG-3). В одном из вариантов осуществления пациент без ответа на лечение имеет или идентифицирован как имеющий более высокую процентную долю PD-1-, PD-L1- или LAG-3-экспрессирующих иммунных эффекторных клеток (например, CD4+ T-клеток и/или CD8+ T-клеток) (например, CAR-экспрессирующих CD4+-клеток и/или CD8+ T-клеток) по сравнению с процентной долей PD-1- или LAG-3-экспрессирующих иммунных эффекторных клеток у пациента с ответом на лечение.

В одном из вариантов осуществления пациент без ответа на лечение имеет или идентифицирован как имеющий более высокую процентную долю иммунных клеток, имеющих истощенный фенотип, например, иммунных клеток, коэкспрессирующих по меньшей мере два маркера истощения, например, коэкспрессирующих PD-1, PD-L1 и/или TIM-3. В других вариантах осуществления пациент без ответа на лечение имеет или идентифицирован как имеющий более высокую процентную долю иммунных клеток, имеющих истощенный фенотип, например, иммунных клеток, коэкспрессирующих по меньшей мере два маркера истощения, например, коэкспрессирует PD-1 и LAG-3.

В некоторых вариантах осуществления любого из способов, представленных в настоящем описании, пациент без ответа на лечение имеет или идентифицирован как имеющий более высокую процентную долю PD-1/ PD-L1+/LAG-3+ клеток в популяции CAR-экспрессирующих клеток (например, популяции BCMACAR+ клеток) по сравнению с пациентом с ответом (например, пациентом с полным ответом) на терапию CAR-экспрессирующими клетками.

В некоторых вариантах осуществления любого из способов, представленных в настоящем описании, пациент с частичным ответом на лечение имеет или идентифицирован как имеющий более высокие процентные доли PD-1/PD-L1+/LAG-3+ клеток, чем у пациента с ответом на лечение, в популяции CAR-экспрессирующих клеток (например, популяции BCMACAR+ клеток).

В некоторых вариантах осуществления любого из способов, представленных в настоящем описании, пациент без ответа на лечение имеет или идентифицирован как имеющий истощенный фенотип PD1/PD-L1+ CAR+ и коэкспрессию LAG3 в популяции CAR-экспрессирующих клеток (например, популяции BCMACAR+ клеток).

В некоторых вариантах осуществления любого из способов, представленных в настоящем описании, пациент без ответа на лечение имеет или идентифицирован как имеющий более высокую процентную долю PD-1/PD-L1+/TIM-3+ клеток в популяции CAR-экспрессирующих клеток (например, популяции BCMACAR+ клеток) по сравнению с пациентом с ответом на лечение (например, пациентом с полным ответом на лечение).

В некоторых вариантах осуществления любого из способов, представленных в настоящем описании, пациент с частичным ответом на лечение имеет или идентифицирован как имеющий более высокую процентную долю PD-1/PD-L1+/TIM-3+ клеток, чем пациент с ответом на лечение, в популяции CAR-экспрессирующих клеток (например, популяции BCMACAR+ клеток).

В некоторых вариантах осуществления любого из способов, представленных в настоящем описании, наличие CD8+ CD27+ CD45RO- T-клеток в аферезном образце является положительным прогностическим фактором ответа индивидуума на терапию CAR-экспрессирующими клетками (например, терапию BCMACAR).

В некоторых вариантах осуществления любого из способов, представленных в настоящем описании, высокая процентная доля PD1+ CAR+ и LAG3+ или TIM3+ T-клеток в аферезном образце является плохим прогностическим фактором ответа индивидуума на терапию CAR-экспрессирующими клетками (например, терапию BCMACAR).

В некоторых вариантах осуществления любого из способов, представленных в настоящем описании, пациент с ответом на лечение (например, пациент с полным или частичным ответом на лечение) имеет один, два, три или более (или все) из следующих профилей:

(i) имеет более высокое количество CD27+ иммунных эффекторных клеток по сравнению с референсным значением, например, количеством CD27+ иммунных эффекторных клеток у пациента без ответа на лечение;

(ii) (i) имеет более высокое количество CD8+ T-клеток по сравнению с референсным значением, например, количеством CD8+ T-клеток у пациента без ответа на лечение;

(iii) имеет более низкое количество иммунных клеток, экспрессирующих один или более ингибиторов контрольных точек, например, ингибитора контрольных точек, выбранного из PD-1, PD-L1, LAG-3, TIM-3, или KLRG-1, или комбинации по сравнению с референсным значением, например, количеством клеток, экспрессирующих один или более ингибиторов контрольных точек, у пациента без ответа на лечение; или

(iv) имеет более высокое количество одного, двух, трех, четырех или более (всех) из покоящихся T_EFF-клеток, покоящихся T_REG-клеток, наивных CD4 клеток, нестимулированных клеток памяти, или ранних T-клеток памяти, или их комбинации, по сравнению с референсным значением, например, количество покоящихся T_EFF-клеток, покоящихся T_REG-клеток, наивных CD4 клеток, нестимулированных клеток памяти или ранних T-клеток памяти у пациента без ответа на лечение.

В некоторых вариантах осуществления любого из способов, представленных в настоящем описании, уровень или активность цитокинов в (vi) выбраны из одного, двух, трех, четырех, пяти, шести, семи, восьми или более (или всех) цитокинов CCL20/MIP3a, ИЛ-17A, ИЛ-6, ГМ-КСФ, ИФНγ, ИЛ-10, ИЛ-13, ИЛ-2, ИЛ-21, ИЛ-4, ИЛ-5, ИЛ-9, ФНО или их комбинации. Цитокин можно выбирать из одного, двух, трех, четырех или более (всех) из ИЛ-17a, CCL20, ИЛ-2, ИЛ-6 или ФНО. В одном из вариантов осуществления повышенный уровень или активность цитокина, выбранного из одного или обоих из ИЛ-17a и CCL20, свидетельствует о повышенной отвечаемости или сниженном рецидивировании.

В некоторых вариантах осуществления любого из способов, представленных в настоящем описании, эффективность трансдукции 15% или выше в (vii) свидетельствует о повышенной отвечаемости или сниженном рецидивировании.

В некоторых вариантах осуществления любого из способов, представленных в настоящем описании, эффективность трансдукции менее 15% в (vii) свидетельствует о сниженной отвечаемости или повышенном рецидивировании.

В вариантах осуществления пациента с ответом на лечение, пациента без ответа на лечение, пациента с рецидивом или пациента без рецидива, идентифицированных способами в настоящем описании, можно дополнительно оценивать согласно клиническим критериям. Например, пациент с полным ответом на лечение является индивидуумом, имеющим или идентифицированным как имеющий заболевание, например, злокачественное новообразование, проявляющим полный ответ на лечение, например, полную ремиссию. Полный ответ можно идентифицировать, например, с использованием NCCN Guidelines^® или Cheson et al, J Clin Oncol 17:1244 (1999) и Cheson et al., "Revised Response Criteria for Malignant Lymphoma", J Clin Oncol 25:579-586 (2007) (оба из которых включены в настоящее описание в качестве ссылок в полном объеме), как представлено в настоящем описании. Пациент с частичным ответом на лечение является индивидуумом, имеющим или идентифицированным как имеющий заболевание, например, злокачественное новообразование, проявляющим частичный ответ на лечение, например, частичную ремиссию. Частичный ответ можно идентифицировать, например, с использованием NCCN Guidelines^®, или критериев Cheson, как представлено в настоящем описании. Пациент без ответа на лечение является индивидуумом, имеющим или идентифицированным как имеющий заболевание, например, злокачественное новообразование, не проявляющим ответ на лечение, например, пациент имеет стабильное заболевание или прогрессирующее заболевание. Пациента без ответа на лечение можно идентифицировать, например, с использованием NCCN Guidelines^® или критериев Cheson, как представлено в настоящем описании.

Альтернативно, или в комбинации со способами, представленными в настоящем описании, в ответ на указанное значение осуществляют одно, два, три, четыре или более из:

проведения, например, пациенту с ответом на лечение или пациенту без рецидива терапии CAR-экспрессирующими клетками;

введения измененной дозы терапии CAR-экспрессирующими клетками;

изменения схемы или режима терапии CAR-экспрессирующими клетками;

введения, например, пациенту без ответа на лечение или пациенту с частичным ответом на лечение дополнительного средства в комбинации с терапией CAR-экспрессирующими клетками, например, ингибитора контрольных точек, например, ингибитора контрольных точек, представленного в настоящем описании;

проведения пациенту без ответа на лечение или пациенту с частичным ответом на лечение терапии, повышающей количество T-клеток более ранних стадий развития у индивидуума перед лечением с использованием терапии CAR-экспрессирующими клетками;

модификации способа производства терапевтического средства для терапии CAR-экспрессирующими клетками, например, обогащение T-клеток более ранних стадий развития перед встраиванием нуклеиновой кислоты, кодирующей CAR, или повышения эффективности трансдукции, например, для индивидуума, идентифицированного в качестве пациента без ответа на лечение или пациента с частичным ответом на лечение;

проведения альтернативной терапии, например, для пациента без ответа на лечение, или пациента с частичным ответом на лечение, или пациента с рецидивом; или,

если индивидуум является или идентифицирован как пациент без ответа на лечение или пациент с рецидивом, снижения популяции T_REG клеток и/или генной сигнатуры T_REG, например, посредством одного или более из истощения CD25, введения циклофосфамида, антитела против GITR или их комбинации.

В определенных вариантах осуществления индивидуума предварительно лечат антителом против GITR. В определенном варианте осуществления индивидуума лечат антителом против GITR перед инфузией или реинфузией.

Биополимерные способы доставки

В некоторых вариантах осуществления одну или более CAR-экспрессирующих клеток, как представлено в настоящем описании, можно вводить или доставлять индивидууму с помощью биополимерного каркаса, например, биополимерного имплантата. Биополимерные каркасы могут поддерживать или повышать доставку, экспансию и/или распространение CAR-экспрессирующих клеток, представленных в настоящем описании. Биополимерный каркас содержит биосовместимый (например, по существу, не индуцирующий воспалительный или иммунный ответ) и/или биодеградируемый полимер, который может являться природным или синтетическим.

Неограничивающие примеры подходящих биополимеров включают агар, агарозу, альгинат, цемент на основе альгината/фосфата кальция (CPC), бета-галактозидазу (β-GAL), 1,2,3,4,6-пентаацетил-α-D-галактозу, целлюлозу, хитин, хитозан, коллаген, эластин, желатин, гиалуроновую кислоту, коллаген, гидроксиапатит, поли(3-гидроксибутират-co-3-гидрокси-гексаноат) (PHBHHx), полилактид, поликапролактон (PCL), сополимер лактида и гликолида (PLG), полиэтилен оксид (PEO), сополимер молочной и гликолевой кислот (PLGA), полипропиленоксид (PPO), поливиниловый спирт (PVA), шелк, соевый белок и изолят соевого белка в отдельности или в комбинации с любой другой композицией полимера, в любой концентрации и в любом соотношении. Биополимер можно удлинять или модифицировать с использованием молекул, способствующих адгезии или миграции, например, коллаген-имитирующих пептидов, связывающихся с рецептором коллагена на лимфоцитах, и/или стимуляторных молекул для повышения доставки, экспансии или функции, например, противораковой активности, клеток, подлежащих доставке. Биополимерный каркас может являться инъецируемым, например, гелевой, или полутвердой, или твердой композицией.

В некоторых вариантах осуществления CAR-экспрессирующие клетки, представленные в настоящем описании, высевают на биополимерный каркас перед доставкой индивидууму. В вариантах осуществления биополимерный каркас дополнительно содержит одно или более дополнительных терапевтических средств, представленных в настоящем описании (например, другую CAR-экспрессирующую клетку, антитело или низкомолекулярное соединение), или средства, повышающие активность CAR-экспрессирующей клетки, например, встроенной или конъюгированной с биополимерами каркаса. В вариантах осуществления биополимерный каркас инъецируют, например, внутриопухолево, или хирургически имплантируют в опухоль или на близком расстоянии от опухоли, достаточном для опосредования противоопухолевого эффекта. Дополнительные примеры биополимерных композиций и способов их доставки описывают в Stephan et al., Nature Biotechnology, 2015, 33:97-101 и WO2014/110591.

Фармацевтические композиции и способы лечения

Фармацевтические композиции по настоящему изобретению могут содержать CAR-экспрессирующую клетку, например, множество CAR-экспрессирующих клеток, как представлено в настоящем описании, в комбинации с одним или более фармацевтически или физиологически приемлемыми носителями, дилюентами или эксципиентами. Такие композиции могут содержать буферы, такие как нейтральный забуференный физиологический раствор, фосфатно-солевой буфер и т.п., углеводы, такие как глюкоза, манноза, сахароза или декстраны, маннит, белки, полипептиды или аминокислоты, такие как глицин, антиоксиданты, хелатирующие средства, такие как ЭДТА или глутатион, адъюванты (например, гидроксид алюминия) и консерванты. Композиции по настоящему изобретению в одном из аспектов составляют для внутривенного введения.

Фармацевтические композиции по настоящему изобретению можно вводить способом, соответствующим заболеванию, подлежащему лечению (или профилактике). Количество и частоту введения будут определять с учетом таких факторов, как состояние пациента и тип и тяжесть заболевания пациента, хотя соответствующие дозы можно определять с помощью клинических испытаний.

В одном из вариантов осуществления фармацевтическая композиция, по существу, не содержит, например, нет детектируемых уровней загрязнений, например, выбранных из группы, состоящей из эндотоксина, микоплазмы, репликационно-компетентного лентивируса (RCL), p24, нуклеиновой кислоты VSV-G, gag ВИЧ, остаточных бус, покрытых антителом против CD3/против CD28, антител мыши, смешанных сывороток человека, бычьего сывороточного альбумина, бычьей сыворотки, компонентов сред для культивирования, клеток для упаковки вектора или плазмидных компонентов, бактерий и грибов. В одном из вариантов осуществления бактерия является по меньшей мере одной, выбранной из группы, состоящей из Alcaligenes faecalis, Candida albicans, Escherichia coli, Haemophilus influenza, Neisseria meningitides, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Streptococcus pneumonia и Streptococcus pyogenes группы A.

Если указано "иммунологически эффективное количество", "противоопухолевое эффективное количество", "опухоле-связывающее эффективное количество" или "терапевтическое количество", точное количество композиций по настоящему изобретению для введения может определять лечащий врач с учетом индивидуальных отличий в возрасте, массе тела, размере опухоли, степени инфицирования или метастазирования и состоянии пациента (индивидуума). Как правило, можно указывать, что фармацевтическую композицию, содержащую T-клетки, представленные в настоящем описании, можно вводить в дозе от 10⁴ до 10⁹ клеток/кг массы тела, в некоторых случаях от 10⁵ до 10⁶ клеток/кг массы тела, включая все целые значения в этих диапазонах. Композиции T-клеток также можно вводить множество раз в этих дозах. Клетки можно вводить способами инфузии, известными в области иммунотерапии (см., например, Rosenberg et al., New Eng. J. of Med. 319:1676, 1988).

В определенных аспектах желательным может являться введение индивидууму активированных T-клеток, а затем повторный забор крови (или осуществление афереза), активация T-клеток из него по настоящему изобретению и реинфузия пациенту этих активированных и выращенных T-клеток. Этот способ можно осуществлять множество раз каждые несколько недель. В определенных аспектах T-клетки можно активировать из образцов крови от 10 см³ до 400 см³. В определенных аспектах активируют T-клетки из образцов крови 20 см³, 30 см³, 40 см³, 50 см³, 60 см³, 70 см³, 80 см³, 90 см³ или 100 см³.

Введение индивидууму композиций можно осуществлять любым удобным способом, включая ингаляцию аэрозоля, инъекцию, прием внутрь, переливание, имплантацию или трансплантацию. Композиции, представленные в настоящем описании, можно вводить пациенту трансартериально, подкожно, внутрикожно, внутриопухолево, интранодально, интрамедуллярно, внутримышечно, посредством внутривенной (i.v.) инъекции или интраперитонеально. В одном из аспектов композиции T-клеток по настоящему изобретению вводят пациенту посредством внутрикожной или подкожной инъекции. В одном из аспектов композиции CAR-экспрессирующих клеток (например, T-клеток или NK-клеток) по настоящему изобретению вводят посредством i.v. инъекции. Композиции CAR-экспрессирующих клеток (например, T-клеток или NK-клеток) можно инъецировать непосредственно в опухоль, лимфоузел или очаг инфекции.

В конкретном примере аспекта индивидуумов можно подвергать лейкаферезу, при котором лейкоциты собирают, обогащают или истощают ex vivo для селекции и/или выделения интересующих клеток, например, иммунных эффекторных клеток (например, T-клеток или NK-клеток). Эти изоляты иммунных эффекторных клеток (например, T-клеток или NK-клеток) можно выращивать известными в этой области способами и обрабатывать таким образом, что можно встраивать одну или более конструкций CAR по изобретению, таким образом, получая CAR-экспрессирующую клетку (например, CAR T-клетку или CAR-экспрессирующую NK-клетку) по изобретению. Нуждающихся в этом индивидуумов затем можно подвергать стандартному лечению с использованием химиотерапии высокими дозами с последующей трансплантацией стволовых клеток периферической крови. В определенных аспектах после или одновременно с трансплантацией индивидуумам проводят инфузию выращенных CAR-экспрессирующих клеток (например, CAR T-клеток или NK-клеток) по настоящему изобретению. В дополнительном аспекте выращенные клетки вводят до или после хирургического вмешательства.

В вариантах осуществления индивидууму проводят истощение лимфоцитов, например, перед введением одной или более клеток, экспрессирующих CAR, представленный в настоящем описании, например, BCMA-связывающий CAR, представленный в настоящем описании. В вариантах осуществления истощение лимфоцитов включает введение одного или более из мелфалана, цитоксана, циклофосфамида и флударабина.

Доза указанных выше терапевтических средств, подлежащих введению пациенту, будет варьироваться в зависимости от конкретной природы состояния, подвергаемого лечению, и реципиента лечения. Выбор доз для введения человеку можно осуществлять в соответствии с общепринятыми в этой области практиками. Например, доза CAMPATH, как правило, будет находиться в диапазоне от 1 до приблизительно 100 мг в случае взрослого пациента, как правило, вводимая ежедневно в течение периода от 1 до 30 дней. Предпочтительная суточная доза составляет от 1 до 10 мг в сутки, хотя в некоторых случаях можно использовать более высокие дозы до 40 мг в сутки (описываемые в патенте США № 6120766).

В одном из вариантов осуществления CAR встраивают в иммунные эффекторные клетки (например, T-клетки или NK-клетки), например, с использованием транскрипции in vitro, и индивидууму (например, человеку) проводят исходное введение иммунных эффекторных CAR-клеток (например, T-клеток или NK-клеток) по изобретению и одно или более последующих введений иммунных эффекторных CAR-клеток (например, T-клеток или NK-клеток) по изобретению, где одно или более последующих введений проводят менее чем через 15 дней, например, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3 или 2 дня после предыдущего введения. В одном из вариантов осуществления индивидууму (например, человеку) проводят несколько введений иммунных эффекторных CAR-клеток (например, T-клеток или NK-клеток) по изобретению в неделю, например, проводят 2, 3 или 4 введения иммунных эффекторных CAR-клеток (например, T-клеток или NK-клеток) по изобретению в неделю. В одном из вариантов осуществления индивидууму (например, человеку) проводят несколько введений иммунных эффекторных CAR-клеток (например, T-клеток или NK-клеток) в неделю (например, 2, 3 или 4 введений в неделю) (также обозначаемых в настоящем описании как цикл), затем неделю не вводят иммунные эффекторные CAR-клетки (например, T-клетки или NK-клетки), а затем индивидууму проводят одно или более дополнительных введений иммунных эффекторных CAR-клеток (например, T-клеток или NK-клеток) (например, несколько введений иммунных эффекторных CAR-клеток (например, T-клеток или NK-клеток) в неделю). В другом варианте осуществления индивидууму (например, человеку) проводят несколько циклов введения иммунных эффекторных CAR-клеток (например, T-клеток или NK-клеток), и время между каждым циклом составляет менее 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4 или 3 дней. В одном из вариантов осуществления иммунные эффекторные CAR-клетки (например, T-клетки или NK-клетки) вводят через день в течение 3 введений в неделю. В одном из вариантов осуществления иммунные эффекторные CAR-клетки (например, T-клетки или NK-клетки) по изобретению вводят в течение по меньшей мере двух, трех, четырех, пяти, шести, семи, восьми или более недель.

В одном из аспектов CAR BCMA-экспрессирующие клетки (например, BCMA CART или CAR BCMA-экспрессирующие NK-клетки) получают с использованием лентивирусных векторов, таких как лентивирус. CAR-экспрессирующие клетки (например, CART или CAR-экспрессирующие NK-клетки), полученные таким способом, будут иметь стабильную экспрессию CAR.

В одном из аспектов CAR-экспрессирующие клетки, например, CART, получают с использованием вирусного вектора, такого как гаммаретровирусный вектор, например, гаммаретровирусный вектор, представленный в настоящем описании. CART, полученные с использованием этих векторов, могут иметь стабильную экспрессию CAR.

В одном из аспектов CAR-экспрессирующие клетки (например, CART или CAR-экспрессирующие NK-клетки) транзиторно экспрессируют векторы CAR в течение 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 дней после трансдукции. Транзиторную экспрессию CAR можно осуществлять посредством доставки вектора с РНК CAR. В одном из аспектов CAR РНК трансдуцируют в клетку, например, T-клетку или NK-клетку, посредством электропорации.

Потенциальной проблемой, которая может возникать у пациентов, которых лечат с использованием транзиторно экспрессирующих CAR-экспрессирующих клеток (например, CART или CAR-экспрессирующих NK-клеток) (в частности, CAR-экспрессирующими клетками, несущими scFv мыши (например, CART или CAR-экспрессирующими NK-клетками)), является анафилаксия после многократного лечения.

Не желая быть связанными этой теорией, полагают, что такой анафилактический ответ может быть вызван развивающимся гуморальным ответом пациента против CAR, т.е. антителами против CAR, имеющими изотип против IgE. Полагают, что продуцирующие антитела клетки пациента подвергаются переключению класса с изотипа IgG (не вызывающего анафилаксию) на изотип IgE, когда есть перерыв в воздействии антигена от десяти до четырнадцати дней.

Если пациент имеет высокий риск развития ответа с образованием антител против CAR в течение транзиторной терапии CAR (такой как получаемая посредством трансдукций РНК), перерывы между инфузиями CAR-экспрессирующих клеток (например, CART или CAR-экспрессирующих NK-клеток) не должны длиться более десяти-четырнадцати дней.

ПРИМЕРЫ

Настоящее изобретение далее подробно описано со ссылкой на следующие экспериментальные примеры. Эти примеры представлены исключительно в иллюстративных целях и не предназначены для ограничения, если не указано иначе. Таким образом, настоящее изобретение никоим образом не следует истолковывать как ограниченное следующими примерами, а скорее его следует истолковывать как включающее любые и все варианты, которые становятся очевидными из руководства, представленного в настоящем описании.

Без дальнейшего описания, полагают, что специалист в этой области, используя предшествующее описание и следующие иллюстративные примеры, может получать и применять соединения по настоящему изобретению и осуществлять на практике заявленные способы. В следующих демонстрационных примерах конкретно указаны различные аспекты настоящего изобретения, и их не следует истолковывать как каким-либо образом ограничивающие остальную часть описания.

Пример 1: BCMA экспрессируется в линиях клеток миеломы и первичных образцах

Анализ экспрессии BCMA в линиях клеток миеломы посредством количественной ПЦР

16 линий клеток злокачественных новообразований человека подвергали скринингу на экспрессию РНК BCMA посредством количественной RT-ПЦР. РНК выделяли с помощью набора RNAqueos-4PCR Kit (Ambion, AM-1914) и кДНК синтезировали с помощью iScript Reverse Transcription Supermix для RT-qPCR (BioRad, 170-8841). Относительное количество копий кДНК BCMA количественно анализировали посредством относительной qPCR (qPCR) с помощью BCMA-специфичных праймеров TaqMan ABI и набора зондов (ABI, Hs03045080, лот: 1139777), праймеров и набора зондов TaqMan GUSB (ABI, Hs99999908_M1, лот: 1093869) для нормализации.

Анализ qPCR показал, что все тестируемые линии клеток MM (U266, NCI H929 и RPMI 8226) экспрессируют BCMA. BCMA также определяли в клетках BJAB и LCL (линии лимфобластоидных B-клеток) и клетках CEM (линии T-лимфобластоидных клеток). Ни одна из других не-MM линий клеток не проявляла детектируемую экспрессию BCMA. Этим анализом РНК дополняют определение белка посредством проточной цитометрии для селекции положительных BCMA-экспрессирующих линий клеток, используемых для оценки. Подробные результаты представлены на фигуре 1A.

Сравнение экспрессии BCMA в плазматических клетках и различных образцах множественной миеломы от пациентов посредством анализа РНК представлен на фигуре 1B.

Анализ экспрессии BCMA в линиях клеток множественной миеломы и первичных образцах посредством проточной цитометрии

Линии клеток множественной миеломы (MM) U266, NCI H929 или RPMI 8226 или первичные образцы от пациентов MM (PB или BM) окрашивали с помощью аффинно очищенных PAb против BCMA/TNFRSF17 человека с фикоэритрином, IgG козы (R&D, FAB193P). Первичные образцы от пациентов с множественной миеломой также окрашивали с помощью красителя Live/dead (LifeTechnologies, L34960), CD45-BV421 (Biolegend, 304032), CD38-APCeF780 (eBioscience, 47-0389-42), CD138-APC (eBioscience, 17-1389-42), CD19-PECY7 (eBioscience, E10328-1632), PerCP-eF710 на лямбда-цепь (eBioscience, 46-9990-42) и на легкую каппа-цепь (eBioscience, 11-9970-42). Данные по окрашенным образцам собирали с использованием цитометра BD Fortessa. Проточный цитометрический анализ осуществляли с использованием Flowjo v10 (Tree Star Inc).

BCMA определяли на поверхности всех 3 линий клеток MM, как показано на фигурах 2A, 2B и 2C. Кроме того, BCMA гомогенно экспрессировался на большинстве клональных (каппа- или лямбда-рестрицированных) плазматических клеток у большинства анализируемых пациентов с MM (9 из 10). (фиг. 2D и 2E). Эти результаты, в значительной степени, подтверждают важность BCMA в качестве мишени при MM.

Проточный цитометрический анализ экспрессии BCMA в нормальных клетках периферической крови, выращенных CD3/CD28 T-клетках и стволовых клетках костного мозга

Для исключения возможной неспецифической экспрессии BCMA в нормальных тканях и на T-клетках, экспрессию BCMA в двух образцах костного мозга (BM) и периферической крови (PB) от добровольных здоровых доноров оценивали посредством проточной цитометрии. Мононуклеарные клетки получали посредством разделения в градиенте фиколл-пака (GE Healthcare). Клетки BM метили красителем Live/dead (LifeTechnologies, L34960), затем окрашивали моноклональными антителами против CD34-APC (eBioscience, 17-0349-42, CD38-PECY7 (eBioscience, 25-0389-42), маркеров гематопоэтического ростка человека mix-FITC (eBioscience, 22-7778-72), CD45RA-APC-eF780 (eBioscience, 47-0458-42, CD90-PerCPCy5,5 (eBioscience, 45-0909-41, CD10-BV421 (Biolegend, 312218) и BCMA-PE (R&D, FAB193P). Свежие клетки PB окрашивали в исходный момент времени и после стимуляции и экспансии с бусами CD3/CD28. PB окрашивали моноклональными антителами против CD14-V500 (BD, 561391), CD45-BV421 (Biolegend, 304032), CD3-AF700 (56-0038-42), CD19-PECY7 (eBioscience, E10328-1632) и BCMA-PE (R&D, FAB193P). Клетки дважды промывали и получали данные по окрашиванию с помощью цитометра BD Fortessa. Проточный цитометрический анализ осуществляли с использованием FlowJo v10 (Tree Star Inc).

Не наблюдали доказательств экспрессии BCMA на PBMC. Важно, что T-клетки оставались отрицательными на BCMA в течение экспансии (фиг. 3A). При анализе различных субпопуляций стволовых клеток в BM не наблюдали экспрессию BCMA на незрелых, отрицательных по маркерам ростка CD34-положительных стволовых клетках. В частности, общая лимфоидная клетка-предшественник и гематопоэтические стволовые клетки являлись отрицательными (фиг. 3B).

Анализ экспрессии BCMA в нормальных тканях посредством иммуногистохимии

Три коммерчески доступных антитела (Novus, Sigma) для иммуногистохимии выбирали и титровали на фиксированной в парафине нормальной ткани селезенки. Тканевые микропанели (TMA), включающие ткани 27 здоровых людей, окрашивали посредством иммуногистохимии.

Все 3 антитела демонстрировали положительное окрашивание на нормальных плазматических клетках в лимфоузлах, селезенке и миндалине, в то время как нормальное легкое, поджелудочная железа и щитовидная железа при тестировании являлись отрицательными. Окрашивание, по-видимому, неспецифическое по причине поликлональной природы доступных антител, наблюдали в следующих органах: желудке, слюнной железе, почке, надпочечнике, мозжечке, сердце и аппендиксе. Избранные результаты представлены на фигурах 4A-4E и приведены в таблице 11.

Таблица 11. Экспрессия BCMA, оцениваемая посредством иммуногистохимического окрашивания в нормальных тканях

Участок	n=	Окрашивание
Плацента	2	отриц.
Жировая ткань	2	отриц.
Мочевой пузырь	2	отриц.
Кора головного мозга	2	отриц.
Мозжечок	2	полож.
Молочная железа	0	не определено
Шейка матки	1	отриц.
Толстый кишечник	2	полож.
Диафрагма	2	отриц.
Двенадцатиперстная кишка	2	полож.
Пищевод	2	полож.
Желчный пузырь	2	отриц.
Сердце	2	отриц.
Подвздошная кишка	2	полож.
Тощая кишка	2	полож.
Почка	2	отриц.
Печень	2	отриц.
Легкое	2	отриц.
Яичник	2	отриц.
Поджелудочная железа	2	отриц.
Щитовидная железа	1	отриц.
Прямая кишка	2	полож.
Кожа	2	отриц.
Скелетная мышца	2	отриц.
Селезенка	2	полож.
Желудок	2	полож.
Яички	2	отриц.
Тимус	2	отриц.
Гладкая мышца	2	отриц.
Миндалина	1	полож.
Матка	2	отриц.

Эти результаты привели к дальнейшему анализу экспрессии, в частности, с использованием гибридизации in situ RNAscope для подтверждения отсутствия экспрессии BCMA в этих тканях. Избранные результаты представлены на фигуре 4F.

Пример 2: Оценка in vitro CAR, содержащих гуманизированный scFv против BCMA

Конструкции BCMA CAR, полученные из гуманизированного антитела мыши против BCMA

Четыре разных конструкции CAR против BCMA конструировали с использованием последовательностей VL и VH, описываемых в публикации PCT WO2012/163805 (содержание которой включено, таким образом, в настоящее описание в качестве ссылки в полном объеме). Для получения CAR против BCMA последовательности VH и VL синтезировали и соединяли с линкером [Gly-Gly-Gly-Gly-Ser]×4 (SEQ ID NO: 27), получая два одноцепочечных вариабельных фрагмента (scFvs), в которых VH предшествует VL (H2L, SEQ ID NO: 255) или VL предшествует VH (L2H, SEQ ID NO: 257). Лидерную последовательность CD8 также синтезировали и подвергали слиянию с 5'-концом каждого scFv с участком BamHI. Участки рестрикции для XbaI и BspE1 добавляли на 5' и 3'-концы, соответственно, во время синтеза для облегчения клонирования лидерной последовательности CD8-scFv в лентивирусный вектор pTRPE, содержащий шарнирную и TM области CD8 с цитоплазматическими доменами 4-1BB и CD3z. Для клонирования использовали две отдельные конструкции остова CAR, одна из которых содержит шарнирную область CD8 человека, а другая содержит шарнирную область IgG4 человека, для получения 4 конструкций CAR против BCMA, схематически представленных на фигуре 5, обозначенных как pBCMA 1, pBCMA 2, pBCMA 3 и pBCMA 4. Для получения инфекционных супернатантов с лентивирусными векторами 293-T-клетки трансфицировали с помощью следующих плазмид: pTRP-VSV-G (кодирующей оболочку вируса везикулярного стоматита (VSV-G)), pTRP gag/pol (кодирующей gag и pol) и pTRP-Rev с любой из четырех конструкций BCMA CAR, с использованием липофектамина 2000 (Invitrogen).

Последовательность нуклеиновой кислоты гуманизированного scFv против BCMA, в котором VH предшествует VL (H2L, например, pBCMA 2 и pBCMA 4), является следующей:

CAGGTGCAGCTGGTCCAGAGCGGCGCCGAAGTGAAGAAGCCCGGCAGCTCCGTGAAAGTGAGCTGCAAGGCCAGCGGCGGCACCTTCAGCAACTACTGGATGCACTGGGTGAGGCAGGCCCCCGGACAGGGCCTGGAGTGGATGGGCGCCACCTACAGGGGCCACAGCGACACCTACTACAACCAGAAGTTCAAGGGCCGGGTGACCATCACCGCCGACAAGAGCACCAGCACCGCCTACATGGAACTGAGCAGCCTCAGGAGCGAGGACACCGCTGTGTATTACTGCGCCAGGGGCGCCATCTACAACGGCTACGACGTGCTGGACAACTGGGGCCAGGGCACACTAGTGACCGTGTCCAGCGGTGGAGGAGGTAGCGGAGGAGGCGGGAGCGGTGGAGGTGGCTCTGGAGGTGGCGGAAGCGACATCCAGATGACCCAGAGCCCTAGCTCACTGAGCGCCAGCGTGGGCGACAGGGTGACCATTACCTGCTCCGCCAGCCAGGACATCAGCAACTACCTGAACTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACTACACCTCCAACCTGCACTCCGGCGTGCCCAGCAGGTTCAGCGGAAGCGGCAGCGGCACCGATTTCACCCTGACCATCTCCAGCCTGCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGTACAGGAAGCTCCCCTGGACTTTCGGCCAGGGCACCAAACTGGAGATCAAGCGT

(SEQ ID NO: 272)

Соответствующая аминокислотная последовательность гуманизированного scFv против BCMA, в котором Vh предшествует VL (H2L, например, pBCMA 2 и pBCMA 4), является следующей:

Q V Q L V Q S G A E V K K P G S S V K V S C K A S G G T F S N Y W M H W V R Q A P G Q G L E W M G A T Y R G H S D T Y Y N Q K F K G R V T I T A D K S T S T A Y M E L S S L R S E D T A V Y Y C A R G A I Y N G Y D V L D N W G Q G T L V T V S S G G G G S G G G G S G G G G S G G G G S D I Q M T Q S P S S L S A S V G D R V T I T C S A S Q D I S N Y L N W Y Q Q K P G K A P K L L I Y Y T S N L H S G V P S R F S G S G S G T D F T L T I S S L Q P E D F A T Y Y C Q Q Y R K L P W T F G Q G T K L E I K R (SEQ ID NO: 271)

Последовательность нуклеиновой кислоты гуманизированного scFv против BCMA, в котором VL предшествует VH (L2H, например, pBCMA1 и pBCMA3), является следующей:

GACATCCAGATGACCCAGAGCCCTAGCTCACTGAGCGCCAGCGTGGGCGACAGGGTGACCATTACCTGCTCCGCCAGCCAGGACATCAGCAACTACCTGAACTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACTACACCTCCAACCTGCACTCCGGCGTGCCCAGCAGGTTCAGCGGAAGCGGCAGCGGCACCGATTTCACCCTGACCATCTCCAGCCTGCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGTACAGGAAGCTCCCCTGGACTTTCGGCCAGGGCACCAAACTGGAGATCAAGCGTGGTGGAGGAGGTAGCGGAGGAGGCGGGAGCGGTGGAGGTGGCTCTGGAGGTGGCGGAAGCCAGGTGCAGCTGGTCCAGAGCGGCGCCGAAGTGAAGAAGCCCGGCAGCTCCGTGAAAGTGAGCTGCAAGGCCAGCGGCGGCACCTTCAGCAACTACTGGATGCACTGGGTGAGGCAGGCCCCCGGACAGGGCCTGGAGTGGATGGGCGCCACCTACAGGGGCCACAGCGACACCTACTACAACCAGAAGTTCAAGGGCCGGGTGACCATCACCGCCGACAAGAGCACCAGCACCGCCTACATGGAACTGAGCAGCCTCAGGAGCGAGGACACCGCTGTGTATTACTGCGCCAGGGGCGCCATCTACAACGGCTACGACGTGCTGGACAACTGGGGCCAGGGCACACTAGTGACCGTGTCCAGC

(SEQ ID NO: 274)

Соответствующая аминокислотная последовательность гуманизированного scFv против BCMA, в котором VL предшествует VH (L2H, например, pBCMA1 и pBCMA3), является следующей:

DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCSASQDIS NYLNWYQQKP GKAPKLLIYY TSNLHSGVPSRFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ YRKLPWTFGQ GTKLEIKRGG GGSGGGGSGGGGSGGGGSQV QLVQSGAEVK KPGSSVKVSC KASGGTFSNY WMHWVRQAPG QGLEWMGATYRGHSDTYYNQ KFKGRVTITA DKSTSTAYME LSSLRSEDTA VYYCARGAIYNGYDVLDNWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 273)

Эти pBCMA-CAR, содержащие гуманизированный scFv против BCMA, используют в экспериментах, подробно описанных ниже и в примере 3.

Эффективная экспрессия BCMA-CAR на T-клетках

Свежие выделенные T-клетки человека от здоровых доноров трансдуцировали с использованием супернатантов лентивирусных векторов, кодирующих pBCMA 1-4 CAR, и экспрессию CAR против BCMA оценивали посредством проточной цитометрии. В кратком изложении, T-клетки культивировали в среде RPMI 1640 с 10% FBS и стимулировали Dynabeads против CD3/против CD28 (Invitrogen). Через 24 часа после стимуляции T-клетки трансдуцировали четырьмя разными супернатантами лентивирусных векторов pBCMA CAR. T-клетки, трансдуцированные с помощью вектора CAR против мезотелина (SS1), использовали в качестве положительного контроля. Ложнотрансдуцированные T-клетки (NTD) использовали в качестве отрицательного контроля. Через 4-6 дней после лентивирусной трансдукции T-клетки окрашивали биотинилированным антителом против протеина L, а затем стрептавидином FITC (BD Biosciences) или биотинилированным антителом козы против мыши и оценивали экспрессию CAR посредством проточной цитометрии (FACSCalibur, BD). Проточный цитометрический анализ осуществляли с использованием Flowjo (Tree Star Inc).

После трансдукции наблюдали, что pBCMA CAR эффективно экспрессировались на поверхность трансдуцированных T-клеток, как показано на фигуре 6.

Продукция цитокинов из T-клеток, экспрессирующих CAR против BCMA (BCMA CART)

Клетки K562, эктопически экспрессирующие BCMA человека (K562-BCMA), получали посредством лентивирусной трансдукции с использованием вектора, поставляемого GeneCopoeia, с последующей селекцией пуромицином. K562-BCMA-специфичные клетки-мишени использовали in vitro для оценки цитотоксичности и продукции цитокинов из pBCMA 1-4 CAR-трансдуцированных T-клеток. T-клетки с pCAR против BCMA или контрольные T-клетки выращивали до конца фазы логарифмического роста, а затем сокультивировали в течение 16 часов с K562-BCMA-специфичными клетками-мишенями, клетками-мишенями K562-мезотелин в качестве положительного контроля или без клеток-мишеней в качестве отрицательного контроля при соотношении 3 к 1 эффекторных клеток и клеток-мишеней. Собирали супернатанты культур и измеряли концентрацию ИФН-гамма и ИЛ-2 с помощью специфического ELISA по инструкциям производителя (R&D).

T-клетки, экспрессирующие все четыре CAR против pBCMA, продуцировали схожие уровни ИФН-гамма и ИЛ-2 при сокультивировании с BCMA-экспрессирующими клетками-мишенями, но не с BCMA-отрицательными клетками-мишенями, как показано на фигуре 7A и 7B.

Цитотоксическая активность BCMA CART в отношении линий клеток миеломы

Способность pBCMA CAR T-клеток уничтожать BCMA-экспрессирующие клетки-мишени оценивали с использованием анализа высвобождения ⁵¹Cr. В кратком изложении, клетки-мишени MM метили ⁵¹Cr (дихроматом натрия), промывали и сокультивировали с эффекторными pBCMA CAR T-клетками при разных соотношения эффектор/мишень. Супернатанты собирали через 4 часа и помещали их в 96-луночные планшеты Lumaplates (Perkin Elmer). Количество ⁵¹Cr, высвобождаемого из меченых клеток-мишеней, измеряли с помощью жидкостного сцинтилляционного счетчика (MicroBeta trilux, Perkin Elmer). Клетки-мишени, инкубируемые в среде в отдельности или с 1% SDS, использовали для определения спонтанного (S) или максимального (M) высвобождения ⁵¹Cr. Процентную долю специфического лизиса вычисляли следующим образом: 100×(импульсы/мин при экспериментальном высвобождении-импульсы/мин при S-высвобождении)/(импульсы/мин при M-высвобождении-импульсы/мин при S-высвобождении).

Все четыре типа pBCMA-CAR-трансдуцированных T-клеток были способны индуцировать лизис клеток K562-BCMA и BCMA-экспрессирующих линий клеток множественной миеломы с низкой активностью в отношении BCMA-отрицательных линий клеток, как показано на фигурах 8A, 8B, 8C и 8D. pBCMA-CAR с шарнирной областью CD8 (pBCMA 3 и 4) проявляли более высокую цитотоксичность по сравнению с pBCMA CAR, содержащими шарнирную область IgG4, что позволяет предполагать, что шарнирная область является важным фактором в дизайне CAR для оптимального функционирования.

Пример 3: Оценка in vivo pBCMA-CART в случае множественной миеломы

В зависимости от данных in vitro, подтверждающих повышенную функцию T-клеток, модифицированных с помощью pBCMA 3 и pBCMA 4 CAR, противоопухолевую активность этих CART оценивали в доклинической модели множественной миеломы на животных с использованием линии клеток RPMI 8226. Клетки RPMI 8226 конструировали для экспрессии зеленой люциферазы жука-щелкуна (CB-G Luc⁺) для отслеживания прогрессирования опухоли с помощью биолюминесцентной визуализации in vivo (IVIS) и программного обеспечения Living Image (Perkin Elmer). Через 4 недели после инъекции CB-G Luc⁺ реципиентам NSG IV инъецировали клетки RPMI 8226, T-клетки, экспрессирующие pBCMA 3 CAR, pBCMA 4 CAR, CAR CD19 (FMC63 scFv против CD19 с шарнирной областью CD8 человека, цитоплазматическим доменом 4-1BB и CD3z) или CAR SS1 (SS1 scFv против мезотелина с шарнирной областью CD8 человека, цитоплазматический домен 4-1BB и CD3z), IV инъецировали и оценивали опухолевую массу посредством оптической визуализации, а также по появлению клинических признаков заболевания (таблица 12 ниже). Подсчет баллов осуществляли следующим образом: 1 - отсутствие клинических признаков, 2 - небольшие изменения походки/небольшая масса опухоли, 3 - сниженная подвижность/масса опухоли/все еще сохраняется способность ходить, 4 - паралич задних конечностей/большая масса опухоли/конечная точка и 5 - полный паралич конечностей.

Таблица 12. Исследуемые группы и клинические баллы.

Группы	Подсчет баллов в день 50
BCMA3	2
BCMA4	2
SS1	3
CD19	4
CTL	5

T-клетки, экспрессирующие pBCMA-3, и pBCMA 4 CAR T-клетки индуцируют значительное снижение опухолевой массы у мышей, несущих RPMI 8226, а также улучшенную клиническую активность заболевания по сравнению с контрольными T-клетками, направленно воздействующими на мезотелин (обозначенными как SS1) или CD19, как показано на фигуре 9A и 9B.

Эксперименты, описываемые в примерах 2 и 3, предоставляют разумное обоснование идентификации связывающих доменов scFv человека для дополнительных конструкций CAR, описываемых и анализируемых в примерах 4-7.

Пример 4: Получение конструкций CAR человека против BCMA

Специфичные для BCMA человека scFv для конструкций CAR идентифицировали с помощью 3 раундов пэннинга Bio-BCMA на основе бус. В эксперименте 1 использовали фаговую библиотеку SBAL-1Sk (8.4E13). В эксперименте 2 использовали фаговую библиотеку SBAL-3Sk(G1+G2+G4+G5) (1E13). Фаговые лизаты подвергали скринингу на реактивность BCMA посредством ELISA. Идентифицировали 319 положительных совпадений, представляющих собой 135 уникальных последовательностей. Фаговые последовательности преобразовывали в растворимые scFv, которые можно экспрессировать в E. coli. Затем лизаты E. coli подвергали скринингу посредством ELISA и периплазму подвергали скринингу посредством FACs. С помощью анализа FACs идентифицировали 15 совпадений. Затем scFv выделяли из E. coli и очищенные scFv тестировали посредством FACs. 15 scFv подтверждали и обозначали как BCMA-1, BCMA-2, BCMA-3, BCMA-4, BCMA-5, BCMA-6, BCMA-7, BCMA-8, BCMA-9, BCMA-10, BCMA-11, BCMA-12, BCMA-13, BCMA-14 и BCMA-15. Последовательности scFv-фрагментов человека против BCMA (SEQ ID NO: 39-52) представлены в таблице 1 (и их названия представлены в таблице 2). Полные конструкции BCMA CAR (SEQ ID NO: 99-113) получали с использованием scFv-фрагментов человека (SEQ ID NO: 39-52) в комбинации с дополнительными последовательностями, представленными в подробном описании, например, лидерной последовательностью, шарнирной областью CD8, трансмембранным доменом CD8, внутриклеточным доменом 4-1BB, внутриклеточным доменом CD27, внутриклеточным доменом CD28, доменом ICOS, доменом CD3 дзета (мутантным), доменом CD3 дзета человек, шарнирной областью IgG4, последовательностями Gly/Ser и/или поли(A)-последовательностями.

Затем scFv-фрагменты CAR клонировали в лентивирусные векторы для получения полноразмерной конструкции CAR в единой колирующей рамке считывания с использованием промотора EF1 альфа для экспрессии (SEQ ID NO: 11).

Аминокислотные последовательности и последовательности нуклеиновой кислоты scFV-доменов против BCMA и молекул CAR BCMA представлены в таблице 1 в подробном описании. В таблице 2 в подробном описании приведены названия конструкций BCMA CAR со ссылкой на номера ID ДНК, также представленные в таблице 1.

Дополнительные рабочие конструкции BCMA CAR также получали с использованием последовательностей VH и VL из публикации PCT № WO2012/0163805 (содержание которой включено, таким образом, в настоящее описание в качестве ссылки в полном объеме), и они основаны на результатах для pBCMA3 и pBCMA4 CAR, описываемых в примерах 2 и 3. Схема рабочих конструкций BCMA (BCMA-3NP и BCMA-4NP) представлена на фигуре 10A. Две конструкции отличаются ориентацией цепей VH и VL (фиг. 10B). Рабочие конструкции BCMA CAR и соответствующие им ID ДНК представлены ниже.

Таблица 3. ID рабочих конструкций CAR

Название	Novartis ID	DNA2.0 ID
BCMA-3NP		126022
BCMA-4NP		126021

Дополнительные конструкции BCMA CAR также можно получать с использованием последовательностей VH и VL, обнаруживаемых в таблице 16 в подробном описании. Аминокислотные последовательности примеров scFV-доменов, содержащих домены VH и VL и линкерную последовательность, и полноразмерные CAR также представлены в таблице 16.

Получение и вычисление вирусного титра для конструкций BCMA CAR

Лентивирусные супернатанты получали для 15 BCMA-специфичных конструкций CAR, полученных при фаговом скрининге scFv (таблица 2). Также получали супернатанты, содержащие лентивирус, для 2 рабочих конструкций CAR BCMA, BCMA-3NP и BCMA-4NP. Рабочие конструкции, описываемые в этом примере, основаны на конструкциях pBCMA3 и pBCMA4, описываемых выше в примерах 2 и 3.

Для получения лентивирусных супернатантов клетки LentiX-293T высевали в день 0 и трансфицировали в день 1 с использованием реагента для трансфекции липофектамина 2000 (Life Technologies). В случае каждой конструкции используемой плазмидной ДНК являлась: pRSV.REV (экспрессирующая Rev плазмида), pMDLg/p.RRE (экспрессирующая Gag/Pol плазмида), pVSV-G (экспрессирующая гликопротеин VSV плазмида) и вектор CAR для переноса. Смесь для трансфекции заменяли свежей средой в день 2 и вирусный супернатант собирали в дни 3 и 4.

Вирусные супернатанты концентрировали с использованием реагента Lenti-X Concentrator (Clontech) и полученные осадки ресуспендировали в среде для выращивания при 1/10-1/100 исходного объема. Концентрированные вирусные супернатанты аликвотировали и хранили при -80°C.

Вычисление вирусного титра осуществляли посредством трансдукции клеток SupT1 и оценки экспрессии CAR. Клетки SupT1 трансдуцировали в день 1 с использованием 3-кратного серийного разведения вирусных супернатантов с начальной концентрацией 1:300. Экспрессию CAR оценивали в день 5 с использованием антигена BCMA-Fc (R&D Systems) и реагента биотин-протеин L (GenScript). Вирусный титр вычисляли по следующей формуле:

(% CAR+)×(количество клеток SupT1)/(количество вируса (мл))×(разведение)

Средний вирусный титр вычисляли с помощью точек разделения в линейном диапазоне от 1 до 20% CAR-положительных результатов. Вычисления титров для клонов CAR BCMA представлены в таблице 4.

Таблица 4: Титр лентивирусных супернатантов клеток LentiX-293T, трансдуцированных с использованием CAR против BCMA, измеряемый с помощью BCMA-Fc или протеина L.

Клон	Титр BCMA-Fc (TU/мл)	Титр протеина L (TU/мл)
BCMA-1	1,27E+08	7,54E+06
BCMA-2	1,02E+08	1,43E+08
BCMA-4	1,46E+08	1,58E+08
BCMA-5	9,98E+07	9,64E+07
BCMA-6	1,41E+08	4,82E+06
BCMA-7	6,41E+07	5,53E+07
BCMA-8	6,15E+07	6,98E+07
BCMA-9	8,57E+07	7,75E+07
BCMA-10	6,73E+07	8,77E+07
BCMA-11	4,60E+07	5,43E+06
BCMA-12	4,88E+07	5,97E+07
BCMA-13	9,96E+07	5,52E+07
BCMA-14	9,88E+07	1,20E+08
BCMA-15	7,39E+07	7,41E+07
BCMA-3NP	5,38E+07	6,11E+07
BCMA-4NP	5,35E+07	5,37E+07

Все клоны CAR BCMA определяли с помощью антигена BCMA-Fc, но детекция была более слабой при использовании биотина-протеина L в случае ряда клонов (BCMA-1, BCMA-6, BCMA-11). Для вычисления MOI для трансдукции в первичных T-клетках использовали титры на основе детекции BCMA-Fc.

Конструкции BCMA CAR, содержащие scFv человека против BCMA, описываемые в этом примере, используют на всем протяжении экспериментов в примерах 4 и 5. Рабочие конструкции BCMA CAR, описываемые в этом примере, также используют в экспериментах, описываемых в примерах 5, 6 и 7.

Пример 5: Характеризация in vitro рабочих конструкций BCMA CAR

Репортерный анализ JNL рабочих конструкций BCMA CAR

Клетки Jurkat-NFAT-люцифераза (JNL), трансдуцированные с использованием рабочих конструкций BCMA CAR, оценивали на активацию в ответ на BCMA-экспрессирующие линии клеток-мишеней. В день 0 клетки JNL трансдуцировали с помощью BCMA-3NP и BCMA-4NP. Концентрации вируса доводили до MOI 3 и инкубировали в течение ночи. В день 6 после трансдукции CAR BCMA-трансдуцированные клетки JNL инкубировали с клетками-мишенями при соотношения эффектор-мишень (E:T) в диапазоне от 0 до 27. Линиями клеток-мишеней являлись: K562 (отрицательный контроль BCMA) и BCMA-положительные линии клеток множественной миеломы NCI-H929, KMS26 и RPMI 8226. Активацию JNL измеряли с использованием субстрата Bright-Glo (Promega) в день 7. Экспрессию CAR на трансдуцированных JNL оценивали в день 6 с помощью антигена BCMA-Fc (таблица 5). В этом репортерном анализе наблюдали, что рабочие клоны CAR против BCMA активируются в зависимости от мишени (фигура 11).

Таблица 5: Процент экспрессии CAR на клетках JNL

	Детекция BCMA-Fc
Клон	% CAR+
BCMA-3NP	31,2
BCMA-4NP	41,9

Схема выделения, трансдукции и активации первичных T-клеток с использованием рабочих CAR против BCMA представлена в таблице 6. В день 0 PBMC здоровых людей-доноров (программа донорства крови Novartis Employee Blood Donor program) выделяли из цельной крови посредством экстракции фиколлом и T-клетки выделяли из PBMC посредством отрицательной селекции с использованием набора Pan T Cell Isolation Kit II (Miltenyi Biotec). Выделенные T-клетки стимулировали в течение ночи с помощью бус Dynabeads Human T-Expander CD3/CD28 (Life Technologies) при соотношении бус и клеток 3:1. T-клетки также окрашивали для оценки относительных количеств клеток CD4+ и CD8+ (фигура 12).

Таблица 6: Схема экспансии T-клеток из трансдуцированных с помощью CAR BCMA клонов

День	Активность
0	Выделение и активация T-клеток
1	Трансдукция T-клеток (MOI=5)
2	Добавление среды - 0,5 мл/лунку
3
4	Разделение 1:2
5
6	Разделение 1:2 (Разделенный контроль UTD 1:2,5)
7
8
9	Разделение 1:2
10
11	Удаление бус и замораживание аликвот

В день 1 T-клетки трансдуцировали с помощью BCMA-3NP и BCMA-4NP. Концентрации вируса доводили до MOI 5 и инкубировали в течение ночи. В день 11 из трансдуцированных CART-клеток удаляли бусы и замораживали их в аликвотах в 90% FBS, 10% DMSO. После трансдукции и экспансии T-клетки снова окрашивали для оценки относительных количеств клеток CD4+ и CD8+. Кроме того, экспрессию CAR оценивали с помощью антигена BCMA-Fc (фигура 13).

Анализ пролиферации BCMA

Оценивали пролиферацию BCMA CART-клеток в ответ на BCMA-экспрессирующие клетки-мишени. CART-клетки размораживали в день 0 и инкубировали в течение ночи для восстановления. В день 1 CART-клетки метили с помощью CellTrace CFSE (Life Technologies) и инкубировали с облученными клетками-мишенями при соотношении E:T 1:1. Бусы Dynabeads Human T-Expander CD3/CD28 при соотношении бус и клеток 3:1 включали в качестве положительного контроля. В день 5 измеряли уровни CFSE в CART-клетках (фигура 14). Кроме того, CART-клетки окрашивали с помощью CD3, CD4, CD8 и антигена BCMA-Fc и измеряли посредством проточной цитометрии относительно бус CountBright Absolute Counting Beads (Life Technologies) для определения относительных количеств клеток (фигура 15). Специфическую пролиферацию в ответ на BCMA наблюдали и для BCMA-3NP, и для BCMA-4NP.

Анализ цитолиза BCMA CART-клеток с люциферазой

Оценивали цитолиз BCMA CART-клеток в ответ на BCMA-экспрессирующие клетки-мишени. CART-клетки размораживали в день 0 и инкубировали в течение ночи для восстановления. В день 1 CART-клетки инкубировали с BCMA-экспрессирующими клетками KMS11-люцифераза или клетками-мишенями MM1-S-люцифераза при соотношениях E:T в диапазоне от 0 до 20. Утрату сигнала люциферазы в результате цитолиза клеток измеряли с использованием субстрата Bright-Glo в день 2 и вычисляли специфический лизис по следующей формуле:

Специфический лизис (%)=100-(люминесценция образца/средняя максимальная люминесценция)*100

Результаты цитолиза клеток представлены на фигуре 16, где показано, что рабочие клоны CART имеют специфический цитолитический ответ.

Анализ цитолиза клеток BCMA CART CFSE

Оценивали цитолиз BCMA CART-клеток в ответ на BCMA-экспрессирующие клетки-мишени. CART-клетки размораживали в день 0 и инкубировали в течение ночи для восстановления. В день 1 клетки-мишени метили с помощью CellTrace CFSE (Life Technologies) и инкубировали с CAR BCMA T-клетками при соотношениях E:T в диапазоне от 0 до 10. Линиями клеток-мишеней являлись: K562-BCMA (сконструированные для стабильной экспрессии BCMA), K562 (родительская линия) и BCMA-положительные линии клеток множественной миеломы NCI-H929, KMS26 и RPMI 8226. Утрату CFSE-положительных клеток в результате цитолиза клеток измеряли в день 2 посредством проточной цитометрии относительно бус CountBright Absolute Counting Beads (Life Technologies) для определения относительных количеств клеток (фигура 17). Специфичный цитолиз клеток наблюдали и для BCMA-3NP, и для BCMA-4NP.

Учитывая характеризацию in vitro, рабочие клоны BCMA CAR, BCMA-3NP и BCMA-4NP, выбирали для оценки in vivo в модели диссеминированной опухоли KMS11-люцифераза. UTD (нетрансдуцированные) T-клетки выбирали в качестве отрицательного контроля. Результаты характеризации in vivo дополнительно описаны в примере 5.

Пример 6: Характеризация in vitro BCMA CART

В экспериментах, описываемых в этом примере, используют конструкции CAR, содержащие scFv человека против BCMA из таблицы 1, и рабочие конструкции CAR BCMA.

Репортерный анализ JNL в случае конструкций BCMA CAR

Клетки Jurkat-NFAT-люцифераза (JNL), трансдуцированные с помощью конструкций BCMA CAR, оценивали на активацию в ответ на BCMA-экспрессирующие линии клеток-мишеней. Получали маломасштабные образцы вирусных супернатантов клеток HEK293T для трансдукции клеток JNL. В день 3 после трансдукции CAR BCMA-трансдуцированные клетки JNL инкубировали с клетками-мишенями при соотношении эффектор-мишень (E:T) 6:1. Линиями клеток-мишеней являлись: K562-BCMA (сконструированная для стабильной экспрессии BCMA), K562 (родительская линия) и BCMA-положительные линии клеток множественной миеломы NCI-H929 и RPMI 8226. Активацию JNL измеряли с использованием субстрата Bright-Glo (Promega) в день 4. Экспрессию CAR на трансдуцированных JNL оценивали в день 7 с помощью антигена BCMA-Fc и реагента биотин-протеин L (таблица 7). В этом репортерном анализе наблюдали, что несколько клонов CAR против BCMA активируются в зависимости от мишени (фигура 18).

Таблица 7: Процент экспрессии CAR на клетках JNL

	Детекция BCMA-Fc
Клон	% CAR+
BCMA-1	72,1
BCMA-2	32,0
BCMA-3	0,0
BCMA-4	49,5
BCMA-5	28,9
BCMA-6	44,4
BCMA-7	30,4
BCMA-8	32,4
BCMA-9	54,7
BCMA-10	29,5
BCMA-11	42,7
BCMA-12	23,4
BCMA-13	32,7
BCMA-14	31,8
BCMA-15	36,9
BCMA-3NP	6,7
BCMA-4NP	28,3

Активность JNL не коррелировала с % экспрессии CAR. С учетом BCMA-специфической активации следующие клоны CAR BCMA выбирали для характеризации в первичных T-клетках: BCMA-1, BCMA-4, BCMA-5, BCMA-7, BCMA-8, BCMA-10, BCMA-12, BCMA-13, BCMA-14 и BCMA-15. С учетом наблюдаемой неспецифической активации в качестве отрицательного контроля выбирали BCMA-6. С учетом наблюдаемого отсутствия активности в качестве отрицательного контроля также выбирали BCMA-9.

Трансдукция первичных T-клеток человека с помощью CAR BCMA

Схема выделения, трансдукции и активации первичных T-клеток с помощью CAR против BCMA представлена в таблице 8. В день 0 PBMC здоровых людей-доноров (программа донорства крови Novartis Employee Blood Donor program) выделяли из цельной крови посредством экстракции фиколлом и T-клетки выделяли из PBMC посредством отрицательной селекции с использованием набора Pan T Cell Isolation Kit II (Miltenyi Biotec). Выделенные T-клетки стимулировали в течение ночи с помощью бус Dynabeads Human T-Expander CD3/CD28 (Life Technologies) при соотношении бус и клеток 3:1. T-клетки также окрашивали для оценки относительных количеств клеток CD4+ и CD8+ (фигура 19).

Таблица 8: Схема экспансии T-клеток из трансдуцированных с помощью CAR BCMA клонов

День	Активность
0	Выделение и активация T-клеток
1	Трансдукция T-клеток (MOI=5)
2	Добавление среды - 0,5 мл/лунку
3
4	Разделение 1:3
5
6	Разделение 1:2
7
8	Разделение 1:2,25
9
10
11	Удаление бус и замораживание аликвот

В день 1 T-клетки трансдуцировали с помощью следующих клонов CAR BCMA: BCMA-1, BCMA-4, BCMA-5, BCMA-6, BCMA-7, BCMA-8, BCMA-9, BCMA-10, BCMA-12, BCMA-13, BCMA-14, BCMA-15, BCMA-3NP и BCMA-4NP. Концентрации вируса доводили до MOI 5 (Таблица 9) и инкубировали в течение ночи.

Таблица 9: Вычисление количества T-клеток, добавляемых на лунку для каждого клона для достижения MOI 5.

Клон	TU/мл	MOI:5 на лунку
BCMA-1	1,27E+08	39,4
BCMA-4	1,46E+08	34,3
BCMA-5	9,98E+07	50,1
BCMA-6	1,41E+08	35,5
BCMA-7	6,41E+07	78,0
BCMA-8	6,15E+07	81,4
BCMA-9	8,57E+07	58,3
BCMA-10	6,73E+07	74,3
BCMA-12	4,88E+07	102,5
BCMA-13	9,96E+07	50,2
BCMA-14	9,88E+07	50,6
BCMA-15	7,39E+07	67,6
BCMA-3NP	5,38E+07	92,9
BCMA-4NP	5,35E+07	93,5

В день 11 из трансдуцированных CART-клеток удаляли бусы и замораживали их в аликвотах в 90% FBS, 10% DMSO. После трансдукции и экспансии T-клетки снова окрашивали для оценки относительных количеств CD4+ и CD8+ клеток. Кроме того, экспрессию CAR оценивали с помощью антигена BCMA-Fc (фигура 20).

Анализ пролиферации BCMA CART

Оценивали пролиферацию BCMA CART-клеток в ответ на BCMA-экспрессирующие клетки-мишени. CART-клетки размораживали в день 0 и инкубировали в течение ночи для восстановления. В день 1 CART-клетки метили CellTrace CFSE (Life Technologies) и инкубировали с облученными клетками-мишенями при соотношении E:T 1:1. В день 6 измеряли уровни CFSE в CART-клетках (фигура 21).

Кроме того, CART-клетки окрашивали с помощью CD3, CD4 и CD8 и измеряли посредством проточной цитометрии относительно бус CountBright Absolute Counting Beads (Life Technologies) для определения относительных количеств клеток (фигура 22A, 22B, и 22C). Наблюдали специфическую пролиферацию в ответ на BCMA для следующих клонов CART: BCMA-4, BCMA-10, BCMA-12, BCMA-13, BCMA-14 и BCMA-15.

Анализ цитолиза BCMA CART

Оценивали цитолиз BCMA CART-клеток в ответ на BCMA-экспрессирующие клетки-мишени. CART-клетки размораживали в день 0 и инкубировали в течение ночи для восстановления. В день 1 CART-клетки инкубировали с BCMA-экспрессирующими клетками-мишенями KMS11-люцифераза при соотношениях E:T в диапазоне от 0 до 10. Утрату сигнала люциферазы в результате цитолиза клеток измеряли с использованием субстрата Bright-Glo в день 2 и специфический лизис вычисляли по следующей формуле:

Специфический лизис (%)=100-(люминесценция образца/средняя максимальная люминесценция)*100

Результаты анализа цитолиза клеток представлены на фигуре 23A, где каждую конструкцию CAR BCMA сравнивают с BCMA-3NP и BCMA-4NP. Эти результаты свидетельствуют о том, что несколько клонов CART (экспрессирующих scFv человека против BCMA) имеют более высокий цитолитический ответ, чем контрольные конструкции BCMA-3NP и BCMA-4NP. Эти результаты для выбранных CAR BCMA-кандидатов (BCMA-4, BCMA-9, BCMA-10, BCMA-13 и BCMA-15) представлены на графике на фигуре 23B для сравнения мощности цитолиза между CAR-кандидатами. Нетрансдуцированные T-клетки и T-клетки, трансдуцированные с помощью конструкции BCMA-4NP, использовали в качестве отрицательных и положительных контролей, соответственно. Процентную долю цитолиза клеток выбранных клонов BCMA CART (BCMA-4, BCMA-9, BCMA-10, BCMA-13 и BCMA-15) нормализовали по проценту экспрессии CAR для каждой CART, и она представлена на фигуре 23C. Результаты свидетельствуют о том, что все клоны BCMA-4, BCMA-9, BCMA-10, BCMA-13 и BCMA-15 CART имели мощность цитолиза клеток, схожую с BCMA-4NP.

Общие результаты анализов in vitro описываемых выше клонов BCMA CART представлены в таблице 10. Учитывая характеризацию in vitro клонов BCMA CART, BCMA-4, BCMA-10, BCMA-13 и BCMA-15 выбирали для оценки in vivo в модели диссеминированной опухоли KMS11-люцифераза, как описано в примере 7. BCMA-4NP выбирали в качестве положительного контроля. BCMA-9 и UTD (нетрансдуцированные клетки) выбирали в качестве отрицательных контролей.

Таблица 10: Общие результаты характеризации in vitro клонов BCMA CART

Пример 7: Характеризация in vivo BCMA CART

KMS-11 является линией клеток множественной миеломы человека, полученной из плеврального выпота, и ее можно выращивать в качестве ксенотрансплантата в иммунокомпрометированных мышах. С помощью этого ксенотрансплантата будут имитировать заболевание в костном мозге, как наблюдают у людей, получая модель, с помощью которой тестируют эффективность способов терапии множественной миеломы в кости. Этих мышей можно использовать для тестирования эффективности T-клеток с химерным антигенным рецептором (CAR), специфичных по клеточным маркерам, обнаруживаемым на плазматических клетках и клетках множественной миеломы, таких как B-клеточный антиген созревания (BCMA). Клетки KMS-11 метили репортерным геном люциферазы светлячка и использовали в ортотопической модели множественной миеломы на мышах NOD.Cg-Prkdc^scidIl2rg^tm1Wjl/SzJ (NSG) для тестирования эффективности CAR T-клеток, специфичных к BCMA.

Экспрессию BCMA тестировали на клетках KMS-11 и эти клетки использовали в анализах in vitro для определения способности BCMA-специфичных CAR T-клеток распознавать и отвечать на мишень. Клетки KMS-11 росли in vivo при внутривенной имплантации через хвостовую вену, и их рост ограничен, главным образом, костным мозгом. Через неделю опухолевые клетки имплантировались, заболевание сдвигалось полностью в кости и начинало расти экспоненциально. При отсутствии лечения мыши начинали проявлять клинические симптомы и паралич задних конечностей через 5-6 недель после имплантации опухоли. Рабочие CAR BCMA T-клетки сначала тестировали на этой модели в исследовании эффективности для определения того, является ли модель подходящей моделью in vivo для тестирования эффективности и противоопухолевой активности CAR BCMA T-клеток. После этого лучшие scFv против BCMA из скрининга in vitro тестировали в этой модели in vivo и подтверждали в повторном исследовании эффективности.

Материалы и способы:

Линия клеток KMS-11: Линию клеток KMS-11 множественной миеломы человека получали из плеврального выпота пациента с множественной миеломой. Затем клетки метили люциферазой светлячка. Эти суспензионные культуры клеток выращивали в RPMI, дополненной 10% термически инактивированной эмбриональной телячьей сыворотки.

Мыши: Мышей NSG (NOD.Cg-Prkdc^scidIl2rg^tm1Wjl/SzJ) возрастом 6 недель получали из Jackson Laboratory (инвентарный номер 005557). Животным позволяли акклиматизироваться к условиям вивария Novartis NIBRI в течение по меньшей мере 3 дней перед экспериментами. С животными обращались в соответствии нормативами и руководствами Novartis ACUC.

Имплантация опухоли: Клетки KMS-11-luc выращивали in vitro в RPMI, дополненной 10% термически инактивированной эмбриональной телячьей сыворотки. Затем клетки переносили в коническую пробирку емкостью 15 мл и дважды промывали холодным стерильным PBS. Затем клетки KMS-11-luc подсчитывали и ресуспендировали в концентрации 10×10⁶ клеток на миллилитр PBS. Клетки помещали на лед и сразу (в пределах одного часа) имплантировали мышам. Клетки KMS-11 инъецировали внутривенно через хвостовую вену в объеме 100 мкл, всего 1×10⁶ клеток на мышь.

Дозирование CAR T-клеток: Мышам вводили 5×10⁶ T-клеток через 7-8 дней после имплантации опухоли. Клетки частично размораживали на водяной бане температурой 37°C, а затем полностью размораживали добавлением 1 мл холодного стерильного PBS в пробирку, содержащую клетки. Размороженные клетки переносили в пробирку Falcon емкостью 15 мл и доводили до конечного объема 10 мл с помощью PBS. Клетки промывали дважды при 1000 об/мин в течение 10 минут каждый раз, а затем подсчитывали с помощью гемоцитометра. CAR T-клетки нормализовали для трансдукции CAR таким образом, что каждая группа имела одинаковую процентную долю CAR⁺ T-клеток. Затем всего 5×10⁶ клеток ресуспендировали в концентрации 50×10⁶ клеток на мл холодного PBS и держали на льду до введения мышам. Мышам внутривенно через хвостовую вену инъецировали 100 мкл CAR T-клеток в дозе 5×10⁶ T-клеток на мышь.

От пяти до семи мышам на группу вводили 100 мкл PBS в отдельности (PBS), нетрансдуцированные T-клетки (Mock), рабочие CAR BCMA T-клетки (BCMA-3NP или BCMA-4NP) или новые CAR BCMA T-клетки (BCMA-4, BCMA-9, BCMA-10, BCMA-13, BCMA-15). Все T-клетки получали из одного человека-донора параллельно.

Мониторинг животных: Состояние здоровья мышей контролировали ежедневно, включая измерения массы тела дважды в неделю. Процент изменения массы тела вычисляли как (BW_наст.- BW_исх.)/(BW_исх.)×100%. Опухолевую массу контролировали дважды в неделю посредством биолюминесцентной визуализации. Мышам интраперитонеально инъецировали D-люциферин за 10 минут до анестезирования и визуализации мышей с помощью Xenogen. Вычисляли опухолевую массу, вычисляя биолюминесценцию опухолевых клеток (фотоны/секунду).

Анализ биолюминесценции: Процентные значения исследуемая группа/контроль (T/C) вычисляли с использованием следующей формулы:

% T/C=100×ΔT/ΔC, если ΔT≥0;

% регрессии=100×ΔT/T_исх., если ΔT<0;

где T=средняя биолюминесценция в группе, которой вводили лекарственное средство, в последний день исследования, T_исх.=средняя биолюминесценция в группе, которой вводили лекарственное средство, в исходный день введения дозы, ΔT=средняя биолюминесценция в группе, которой вводили лекарственное средство, в последний день исследования, минус средняя биолюминесценция в группе, которой вводили лекарственное средство, в исходный день введения дозы, C=средняя биолюминесценция в контрольной группе в последний день исследования и ΔC=средняя биолюминесценция в контрольной группе в последний день исследования минус средняя биолюминесценция в контрольной группе в исходный день введения дозы.

Значения T/C в диапазоне 100% до 42% интерпретируют как не соответствующие или соответствующие минимальной противоопухолевой активности, значения T/C, составляющие ≤42% и >10%, интерпретируют как соответствующие противоопухолевой активности или ингибированию роста опухоли. Значения T/C ≤10% или значения регрессии ≥-10% интерпретируют как соответствующие остановке роста опухоли. Значения регрессии <-10% соответствуют регрессированию.

Анализ FACS периферической крови: Также контролировали T-клетки в периферической крови мышей. У мышей еженедельно забирали кровь через хвостовую вену в покрытые ЭДТА пробирки, которые держали на льду. 10-20 мкл крови переносили из пробирок в 96-луночные планшеты на льду. Эритроциты лизировали лизирующим буфером для эритроцитов ACK (Life Technologies, кат. № A10492-01), а затем дважды промывали холодным PBS. Клетки инкубировали со смесью для блокирования Fc человека и мыши (Miltenyi Biotec, кат. № 130-059-901 и 130-092-575) в течение 30 минут, а затем инкубировали с антителом против CD11b мыши (BD Biosciences, кат. № 557960), антителом против CD4 человека (BD Biosciences, кат. № 563550), антителом против CD8 человека (BD Biosciences, кат. № 560347) и антителом BCMA-Fc (R&D Systems, кат. № 193-BC-050), а затем вторичным Ig (Jackson ImmunoResearch). Клетки фиксировали 2% раствором параформальдегида в течение 20 минут, промывали и хранили в PBS+2% FBS в течение ночи перед анализом с помощью BD Fortessa, с последующим анализом с использованием аналитического программного обеспечения FlowJo FACS. Клетки анализировали для определения количества CAR⁺ CD4⁺ и CD8⁺ T-клеток на миллилитр крови в мышах NSG, несущих опухоли KMS-11-luc. Количества T-клеток в крови выражают как среднее ± стандартная ошибка среднего (SEM).

Результаты :

Противоопухолевую активность рабочих CAR BCMA T-клеток (BCMA-3NP и BCMA 4-NP) оценивали и напрямую сравнивали в модели множественной миеломы KMS-11 человека. После имплантации опухоли в день 0 мышей случайным образом распределяли по исследуемым группам и вводили им 5×10⁶ T-клеток внутривенно в день 7. Контролировали опухолевую массу множественной миеломы и здоровье животных до достижения животными контрольной точки. Мышей во всех группах умерщвляли в день 14 после введения CAR T-клеток (день 21 после имплантации опухоли), когда опухолевая масса в контрольных группах при визуализации приближалась к максимальной люминесценции.

Можно наблюдать четкое различие в опухолевой массе между контрольными группами и группами, которым вводили рабочие CAR T-клетки, с P<0,01 в день 14 после введения CAR T-клеток. Оба типа рабочих CAR BCMA T-клеток демонстрировали схожую способность контролировать рост множественной миеломы человека у мышей NSG. Значение % T/C в группе ложнотрансдуцированных T-клеток составляет 212,13%, что свидетельствует о том, что ложнотрансдуцированные T-клетки не обладают противоопухолевой активностью. Значения дельты процента T/C в группах BCMA-3NP и BCMA-4P составляют 1,10% и 2,17%, соответственно, что свидетельствует об остановке роста опухоли после лечения рабочими CAR BCMA T-клетками. Результаты биолюминесцентной визуализации представлены на фигуре 24. Группа, которой вводили PBS, но не вводили какие-либо T-клетки, демонстрирует базовую кинетику роста опухоли KMS-11 у мышей NSG, которых проводили внутривенную имплантацию. Группе ложного введения вводили нетрансдуцированные T-клетки, подвергшиеся той же экспансии in vitro, что и CAR T-клетки. Эти клетки служат в качестве T-клеточного контроля для демонстрации неспецифического ответа T-клеток в этой модели опухоли. В группах, которым вводили PBS и ложнотрансдуцированные T-клетки, наблюдали непрерывное прогрессирование опухоли на всем протяжении эксперимента. Оба типа рабочих CAR BCMA T-клеток контролировали прогрессирование заболевание после инъекций 5×10⁶ T-клеток.

После подтверждения того, что модель KMS-11-luc отвечает на направленное воздействие с помощью CAR BCMA T-клеток, начинали исследование для оценки лучших новых scFv. После имплантации опухоли мышей снова случайным образом распределяли по исследуемым группам и вводили им внутривенно 5×10⁶ T-клеток в день 7. Контролировали опухолевую массу множественной миеломой и здоровье животного до достижения животными конечной точки. Мышей в каждой из групп умерщвляли, когда опухолевая масса в группе при визуализации приближалась к максимальной люминесценции.

Можно наблюдать четкое различие в опухолевой массе между контрольными группами и некоторыми из групп, которым вводили CAR BCMA T-клетки. Рабочие CAR BCMA T-клетки (BMCA-4NP) не контролировали рост опухоли KMS-11, как это было показано ранее. Однако некоторые из новых CAR BCMA T-клеток демонстрировали различные уровни эффективности в этой модели множественной миеломы. Значения % T/C, вычисляемые в конечной точке для каждой группы, свидетельствуют об остановке роста опухоли в группах BCMA-10 и BCMA-13. Группа, которой вводили ложнотрансдуцированные T-клетки, имеет значение % T/C 61,56%, свидетельствующее о том, что ложнотрансдуцированные T-клетки не обладают или обладают минимальной противоопухолевой активностью. Дельта значений процента T/C в группе BCMA-4P составляет 32,03%, что свидетельствует о некоторой минимальной противоопухолевой эффективности после лечения рабочими CAR BCMA T-клетками. В группах BCMA-10 и BCMA-13 наблюдают остановку роста опухоли со значениями T/C 0,07% и 6,04%, соответственно. BCMA-4 демонстрирует исходный контроль роста опухоли, но только при одной дозе T-клеток, вводимой каждой группе, опухоли в этой группе начинали расти. Результаты биолюминесцентной визуализации из первого эксперимента представлены на фигурах 25A. В группе, которой вводили PBS, которой не вводили какие-либо T-клетки, наблюдали базовую кинетику роста опухоли KMS-11 у мышей NSG, которым проводили внутривенную имплантацию. Группе ложного введения вводили нетрансдуцированные T-клетки, подвергнутые той же экспансии in vitro, что и CAR T-клетки. Эти клетки служат в качестве T-клеточного контроля для демонстрации неспецифического ответа T-клеток в этой модели опухоли. В группах, которым вводили PBS и ложнотрансдуцированные T-клетки, наблюдали непрерывное прогрессирование опухоли на всем протяжении эксперимента. Среди групп, которым вводили CAR BCMA T-клетки, BCMA-4, BCMA-10, и BCMA-13 демонстрируют противоопухолевую активность, в то время как рабочие CAR BCMA T-клетки (BCMA-4NP) и BCMA-9 и BCMA-15 не демонстрируют противоопухолевую эффективность. Осуществляли второй эксперимент, и результаты биолюминесцентной визуализации представлены на фигуре 25B. У мышей, которым вводили нетрансдуцированные T-клетки, наблюдали базовую кинетику роста опухоли KMS-11. BCMA-4NP* представляет собой результаты для клонов BCMA-4NP CART в первом эксперименте. Во втором эксперименте BCMA-10, BCMA-13 и BCMA-15 демонстрировали сильную противоопухолевую активность.

В дополнение к мониторингу опухолевой массы посредством биолюминесценции, количества CAR⁺ T-клеток в каждой группе также контролировали посредством анализа FACS периферической крови. Результаты FACS в этом исследовании представлены на фигуре 26. В группах, в которых наблюдают противоопухолевые эффекты в отношении опухолей KMS-11, также наблюдают экспансию CD4⁺CAR⁺ и CD8⁺CAR⁺ T-клеток в периферической крови. В группах BCMA-4, BCMA-10 и BCMA-13 наблюдают пик пролиферации CD4⁺CAR⁺ между днями 10 и 20 после введения T-клеток. В тех же группах также наблюдают пролонгированную экспансию CD8⁺CAR⁺ T-клеток.

Противоопухолевую активность новых трансдуцированных с помощью CAR BCMA T-клеток оценивали в исследовании эффективности на мышах NSG, несущих модель ксенотрансплантата множественной миеломы человека. Эти исследования свидетельствуют о том, что в модели KMS-11-luc воспроизводят множественную миелому человека на мышах NSG, на нее можно направленно воздействовать CAR BCMA T-клетками (фигура 24). После подтверждения того, что эта модель подходит для тестирования CAR BCMA T-клеток, новые CAR BCMA человека тестировали в исследовании эффективности. Это исследование показало, что несколько новых CAR BCMA (BCMA-4, BCMA-10 и BCMA-13) вызывали противоопухолевый ответ в модели ксенотрансплантата множественной миеломы (фигуры 25A). Повторяли эксперимент с опухолью, тестируя BCMA-4, BCMA-10, BCMA-13 и BCMA-15. BCMA-4, BCMA-10, BCMA-13 и BCMA-15 демонстрируют противоопухолевую эффективность посредством ингибирования или снижения роста опухоли в течение по меньшей мере 4 недель (28 дней) после имплантации (фигура 25B).

Кроме того, противоопухолевый ответ коррелирует с экспансией CD4⁺CAR⁺ и CD8⁺CAR⁺ T-клеток в периферической крови этих мышей (фигуры 26A, B, C, и D). Не наблюдали противоопухолевую эффективность в случае любого из CAR BCMA, если не наблюдали экспансию этих T-клеток. BCMA-10, демонстрирующий наиболее высокую противоопухолевую эффективность в этой модели, также демонстрирует наиболее длительную экспансию CD8⁺CAR⁺ T-клеток. Во всех из групп BCMA-4, BCMA-10 и BCMA-13 наблюдают значительное изменение роста опухоли по сравнению с контрольными группами. Отсутствие эффективности, наблюдаемое для рабочих CAR BCMA (BCMA-4NP) и BCMA-9 и BCMA-15 в первом эксперименте с опухолями (фигура 25A), коррелирует с отсутствием экспансии T-клеток в периферической крови у мышей в этих группах. Аналогично, отсутствие эффективности, наблюдаемое в случае BCMA-4NP во втором эксперименте с опухолями (фигура 25B), коррелирует с отсутствием экспансии T-клеток в периферической крови у мышей.

Конечные образцы костного мозга и селезенки также анализировали в конце эксперимента с опухолями in vivo для определения того, демонстрируют ли клоны CART, демонстрирующие противоопухолевую эффективность, различия в способности к приживлению популяции костного мозга по сравнению с группами, не демонстрировавшими противоопухолевую эффективность. Определяли количество CAR-экспрессирующих CD4+ и CD8+ T-клеток в костном мозге (фигуры 27A и 27C) и селезенке (фигуры 27B и 27D) мышей из первого эксперимента. Результаты свидетельствуют о том, что введение BCMA-9 CART приводило к наиболее высокому количеству CAR+ T-клеток (CD4+ и CD8+ T-клеток) в костном мозге и селезенке, что свидетельствует о том, что клетки BCMA-9 CART эффективно подвергаются экспансии in vivo, но не обладают мощностью цитолиза или противоопухолевой активностью. BCMA-10 CART клетки демонстрировали следующее по степени устойчивости приживление T-клеток в костном мозге и селезенке. BCMA-4 и BCMA-15 CART-клетки также обнаруживали в селезенке.

Пример 8: Идентификация лучших конструкций BCMA CAR для терапии

Для идентификации лучших конструкций BCMA CAR получали результаты нескольких анализов in vitro и in vivo. Экспериментальные анализы, примеры, в которых описаны подробности анализов, и количество лучших CAR BCMA, полученных после анализа, представлены в следующей таблице (таблице 13). Результаты анализов анализировали в порядке, представленном в таблице 13, для выбора CAR BCMA-кандидатов, проявляющих специфичность, экспрессию в иммунных эффекторных клетках и активность in vitro и/или in vivo.

Таблица 13. Анализы для выбора CAR BCMA

Анализ	Пример, в котором описывают анализ	Критерии	CAR BCMA (из 15)
Экспрессия CAR (Jurkat и/или первичные T-клетки, трансдуцированные с помощью лентивируса)	Примеры 5 и 6	Да	14
Активация репортера JNL NFAT	Пример 5	>в 2 раза по сравнению с отрицательным контролем	10
Экспансия T-клеток (размер клеток, общее количество клеток)	Примеры 5 и 6	Размер: 10 мкм Количество клеток: >в 20 раз по сравнению с количеством клеток в T=0	10
Пролиферация T-клеток (FACS CFSE-окрашенных клеток)		Сдвиг ≥ 1 log относительно отрицательного контроля	10
Цитолиз клеток-мишеней (CFSE или люцифераза)	Примеры 5 и 6	>90% цитолиз при 3-кратном E:T <отрицательного контроля	7
Регрессирование опухоли (введение однократной дозы, 1,5×106 CAR+ T-клеток)	Пример 7	Длительное регрессирование опухоли >2 недель Доказательство экспансии CAR+ T-клеток	4 или 2
Лентивирусный титр	Пример 8	Воспроизводимо высокие титры вируса	4 или 2

С учетом анализов in vitro, например, экспрессии трансдуцированных с помощью лентивируса CAR, активации JNL NFAT, экспансии T-клеток, пролиферации T-клеток и цитолиза клеток-мишеней (как описано в примерах 5, 6 и 7), 7 CAR BCMA идентифицировали как лучшие CAR для тестирования на терапевтическую эффективность in vivo и 5 CAR BCMA (BCMA-4, BCMA-9, BCMA-10, BCMA-13 и BCMA-15) тестировали в примере 8. Как описано в примере 8, все из BCMA-4, BCMA-10, BCMA-13 и BCMA-15 демонстрировали противоопухолевую эффективность, при этом BCMA-10 и BCMA-13 воспроизводимо демонстрировали противоопухолевую эффективность в двух отдельных экспериментах in vivo.

Сравнивали лентивирусный титр среди CAR BCMA-кандидатов после автоматизированной продукции вируса и автоматизированной трансдукции клеток SupT1. Осуществляли два независимых анализа лентивирусного титра. В первом тестировании титра анализировали два независимых препарата ДНК (A и B) BMCA-4, BCMA-10, BCMA-13 и BCMA-15 CAR. Во втором тестировании титра анализировали три независимых препарата ДНК (A, B и C) BMCA-4, BCMA-10, BCMA-13 и BCMA-15 CAR. Получение вируса осуществляли в автоматизированном 96-луночном формате. Трансдукцию клеток SupT1 также осуществляли в автоматизированном 96-луночном формате. Экспрессию CAR вручную анализировали посредством FACs и результаты представлены на фигурах 28A и 28B. Все тестируемые CAR BCMA демонстрировали сравнимые уровни и последовательность вирусного титра.

Таким образом, в совокупности, в результате экспериментов in vitro и in vivo, описанных в таблице 13, BMCA-4, BCMA-10, BCMA-13 и BCMA-15 идентифицировали как соответствующие критериям для каждого анализа и являющиеся перспективными для дальнейшего тестирования для терапевтического применения. Затем при использовании более строгих критериев в анализе регрессирования опухоли, в котором далее анализировали только конструкции CAR, воспроизводимо демонстрирующие противоопухолевую эффективность в обоих экспериментах, идентифицировали BCMA-10 и BCMA-13 для дальнейшего терапевтического тестирования.

Пример 9: Характеризация лучших конструкций BCMA CAR

Осуществляли дополнительные анализы для характеризации свойств лучших конструкций BCMA CAR BMCA-4, BCMA-10, BCMA-13 и BCMA-15 CAR, демонстрировавших эффективность in vitro и in vivo в различных анализах, описываемых в примерах 5-8. Выравнивание последовательностей BCMA-10 и BCMA-13 показало, что два CAR имеют идентичные CDR тяжелой цепи и высокую гомологию CDR легкой цепи. Осуществляли конкурентный анализ четырех лучших CAR-кандидатов BMCA-4, BCMA-10, BCMA-13 и BCMA-15 и BCMA-4NP (рабочего CAR) в качестве контроля. BCMA-4NP инкубировали с субстратом BCMA, и он связывался в течение от 50 до 300 секунд после инкубации, как показано на фигуре 29. Добавляли четыре конструкции BCMA CAR и контролировали связывание с субстратом. Как показано на фигуре 29, все четыре конструкции BCMA CAR конкурировали с контрольным BCMA-4NP, что свидетельствует о том, что все четыре CAR BCMA-кандидата связываются с тем же эпитопом, что и рабочий CAR BCMA-4NP. При указанных концентрациях, если CAR-кандидаты связывались с другим эпитопом, ожидаемое изменение RU будет составлять приблизительно 70 RU. Небольшое изменение RU, наблюдаемое при связывании CAR BCMA-кандидатов, являлось результатом незначительной диссоциации контрольного образца BCMA-4NP от BCMA.

Также оценивали аффинность антитела для CAR BCMA-кандидатов: BCMA-4, BCMA-10, BCMA-13 и BMCA-15. Результаты представлены на фигуре 30 и обобщены в таблице ниже.

Таблица 14. Аффинность связывания CAR BCMA

Образец	Совпадение	ka	kd	KD
BCMA-10	Связывание 1:1	7,10E+04	2,39E-03	33,6
BCMA-13	Связывание 1:1	6,56E+04	1,61E-03	24,5
BCMA-15	Связывание 1:1	2,01E+05	1,87E-03	9,3
BCMA-4	Связывание 1:1	6,17E+05	6,00E-04	1,0
BCMA-4NP	Связывание 1:1	1,58E+06	1,72E-04	0,1

BCMA-10 и BCMA-13 обладают схожими аффинностями и имеют наименьшие аффинности среди тестируемых кандидатов.

Также тестировали селективное связывание CAR BCMA-кандидатов. BCMA является одним из рецепторов в семействе рецепторов ФНО, включающем близкородственных членов семейства BaffR и TACI. BCMA имеет приблизительно 41% гомологии с BaffR и приблизительно 22% гомологии с TACI. T-клетки, экспрессирующие CAR BCMA-кандидаты BCMA-4, BCMA-10, BCMA-13 и BCMA-15, инкубировали с рекомбинантными BCMA, BaffR или TACI, слитыми с Fc-областями. Связывание оценивали посредством окрашивания CAR+ клеток (фигура 31). Результаты свидетельствуют о том, что специфическое связывание наблюдали между всеми BCMA-экспрессирующими T-клетками и рекомбинантными BCMA-Fc, что свидетельствует о том, что конструкции BCMA CAR селективно связываются с BCMA.

Пример 10: Экспрессия BCMA в головном мозге

Результаты анализа ткани с помощью микрочипа, представленные в таблице 11, свидетельствовали о том, посредством иммуногистохимического анализа экспрессию BCMA определяли в мозжечке. Фиксированные формалином, погруженные в парафин (FFPE) ткани головного мозга человека и не являющегося человеком примата окрашивали антителами против BCMA, например, поликлональным антителом кролика USBio (0807-50G), индуцированным против внутриклеточного эпитопа BCMA, и химерным антителом кролика J6MO, распознающим внеклеточный эпитоп BCMA. Окрашивание поликлональным антителом кролика UsBio в ткани головного мозга не являющегося человеком примата (яванского макака) приводило к положительному окрашиванию лазящих волокон мозжечка (фигура 32A) и телец клеток в нижнем оливном ядре (фигура 32B) мозжечка. Окрашивание ткани головного мозга не являющегося человеком примата с использованием J6MO приводило к BCMA-положительному окрашиванию только в нижнем оливном ядре (фигура 32C, окрашивание Ig-контролем на фигуре 32E). Аналогично, окрашивание ткани головного мозга человека с использованием J6MO также приводило к BCMA-положительному окрашиванию только в нижнем оливном ядре (фигура 32D, окрашивание Ig-контролем на фигуре 32F).

Результаты иммуногистохимии подтверждали посредством анализа РНК. Осуществляли гибридизацию in situ ткани головного мозга не являющегося человеком примата и человека. Мозжечок и продолговатый мозг являлись BCMA-отрицательными при детекции мРНК посредством гибридизации in situ (фигуры 33A и 33B). Также осуществляли количественную ПЦР на тканях мозжечка, продолговатого мозга, желудка и почек не являющегося человеком примата (яванского макака) и человека. Результаты qPCR свидетельствуют о том, что мРНК BCMA не определяли в мозжечке и продолговатом мозге человека (фигура 33C) или не являющегося человеком примата (фигура 33D). Потенциальное несоответствие между иммуногистохимическим анализом и анализом РНК может являться результатом разных вариантов сплайсинга BCMA, известных в этой области (Smirnova et al., Mol Immunol, 2008, 45:1179-83).

Анализ RNAseq, с помощью которого можно определять все изоформы и варианты сплайсинга BCMA, осуществляли на нормальных тканях. Результаты свидетельствуют о том, что посредством RNAseq в нормальной ткани определяли небольшую экспрессию BCMA или ее отсутствие (фигура 33E).

Дополнительный анализ осуществляют для определения того, будет ли определяемый белок BCMA доступным для BCMA CART клеток, и определения последствий для терапии BCMA CART. Зонды для ПЦР заново конструировали и повторно оценивали экспрессию вариантов сплайсинга BCMA. Осуществляют RNAseq отдельных клеток в образцах мозжечка. Осуществляют конфокальную микроскопию для визуализации внутриклеточного окрашивания. Мышей также оценивают на эффекты в отношении головного мозга в случае эффективных CART, например, BCMA-10 и BCMA-13. Для предотвращения потенциальной миграции BCMA CART-клеток в головной мозг индивидуумам можно вводить натализумаб.

Пример 11: Терапия BCMA при рецидивирующей/рефрактерной миеломе

В этом примере описывают однокогортное, открытое пилотное исследование для оценки безопасности и осуществимости инфузии аутологичных T-клеток, экспрессирующих BCMA-специфические CAR, при рецидивирующей и/или рефрактерной множественной миеломе. BCMA-CAR содержат тандемные костимуляторные домены TCRζ и 4-1BB (TCRζ /4-1BB), и T-клетки, экспрессирующие BCMA-CAR, обозначают как CAR BCMA T-клетки.

Цели исследования

Первичной целью исследования является определение безопасности и переносимости CAR BCMA T-клеток у пациентов с MM. Вторичные цели включают: описание исходов, включая долю ответов, долю минимальной остаточной болезни (MRD), выживаемость без прогрессирования и общую выживаемость и оценку осуществимости производства CAR BCMA T-клеток. Исследовательские цели включают: характеризацию CAR BCMA T-клеток в отношении их экспансии, выживаемости, хоминга, фенотипа и функции, оценку развития клеточного и/или гуморального иммунитета против CAR BCMA T-клеток, оценку эффекта CAR BCMA T-клеток в отношении компартментов B-клеток и плазматических клеток, включая уровни иммуноглобулинов, определение влияния CAR BCMA T-клеток на системные растворимые иммунные факторы у пациентов, оценку экспрессии BCMA на клетках MM до и после лечения и оценку безопасности и эффективности повторного лечения CAR BCMA T-клетками у пациентов, у которых наблюдают прогрессирование после предшествующего клинического результата.

Длительность исследования

Длительность активного вмешательства и мониторинга составляет приблизительно 2 года. Через 2 года мониторинг отсроченных побочных реакций перейдет в отдельный длительный протокол последующего исследования в соответствии с руководствами FDA. Для протокола потребуется приблизительно 12-18 месяцев для завершения регистрации.

Диагностика и основные критерии включения

Будут включать до 12 поддающихся оценке индивидуумов.

Критерии включения включают взрослых пациентов возрастом >18 с рецидивирующей и/или рефрактерной множественной миеломой после по меньшей мере 3 предшествующих линий терапии, которые должны включать предшествующее алкилирующее средство, ингибитор протеасом (PI) и иммуномодулирующее лекарственное средство (IMiD) (или 2 предшествующих средства, если заболевание является двойным рефрактерным к IMiD (иммуномодулирующему лекарственному средству, талидомиду и леналидомиду) и ингибитору протеасом). Пациенты имеют рецидивирующее заболевание, определяемое как соответствующее критериям IMWG (International Myeloma Working Group) для PD, или являются рефрактерными, как определяют по достижению <PR после последней схемы лечения. Пациенты имеют ограниченный прогноз (ожидаемая выживаемость ≤2 лет) с учетом доступных в настоящее время способов терапии.

Исследуемый продукт, доза, путь, схема лечения

Однократная инфузия CAR BCMA T-клеток, вводимых посредством внутривенной инфузии. Когорте 1 будут вводить 1-5×10⁸ CAR BCMA T-клеток в отдельности, вычисляемых как диапазон 2-50% трансдуцированных клеток из общего количества клеток (дозу клеток в когорте 1 можно снижать до 1-5×10⁷ CAR BCMA T-клеток (когорта -1), если наблюдают неожиданную тяжелую токсичность). Когорте 2 будут вводить циклофосфамид (цитоксан) в дозе 1,5 г/м², вводимый посредством i.v. инфузии за 1-3 дня до инфузии 1-5×10⁷ CAR BCMA T-клеток. Когорте 3 будут вводить циклофосфамид в дозе 1,5 г/м², вводимый посредством i.v. инфузии за 1-3 дня до инфузии 1-5×10⁸ CAR BCMA T-клеток.

Учитывают общий объем, подлежащий инфузии, и рекомендуемую скорость инфузии 10-20 мл в минуту. Доза и схемы лечения для каждой когорты обобщены в таблице ниже, и схематическая диаграмма представлена на фигуре 34.

Таблица 15. Общие данные о когортах и дозах

Когорта	Химиотерапия для истощения лимфоцитов	Доза BCMA-CAR T-клеток
-1	-	от 1 до 5×107
1 (n=3)	-	от 1 до 5×108
2 (n=3)	Цитоксан, 1,5 г/м2	от 1 до 5×107
3 (n=6)	Цитоксан, 1,5 г/м2	от 1 до 5×108

Для профилактики потенциальной миграции T-клеток в головной мозг пациентам можно вводить натализумаб (TYSABRI®).

Мониторинг пациентов

Ответ опухоли будут измерять посредством электрофореза белков сыворотки и мочи и иммунофиксации, биопсии костного мозга и визуализации наличия скелетных повреждений до лечения. Также будут осуществлять неврологические обследования до и после терапии для обеспечения отсутствия неврологических изменений.

Статистическая методология

Статистический анализ будет, главным образом, описательным в соответствии с поисковым характером исследования. Будут использовать описательную статистику для определения относительного приживления, выживаемости и миграции компонентов исследуемого лекарственного средства в кровь и костный мозг. Будут описывать все побочные реакции и получать точные 95%-ные доверительные интервалы для долей побочных реакций вообще и в основных категориях. Анализ других вторичных конечных точек, таких как противоопухолевая активность, также будет описательным и может включать сводную статистику, такую как средние значения и стандартные отклонения или кривые Каплана-Мейер в случае информации о выживаемости.

Пример 12: Секреция цитокинов CART-клетками

Определяли способность CART-клеток секретировать цитокины в ответ на мишень. CART-клетки, содержащие BCMA-10 CAR, или нетрансдуцированные T-клетки сокультивировали с BCMA-положительными (KMS11-luc) или BCMA-отрицательными (U87-luc) клетками-мишенями и измеряли секрецию ИЛ-2, ИФНγ и ФНО в среды. В частности, размороженные CAR T-клетки, содержащие BCMA-10 CAR, или нетрансдуцированные клетки сокультивировали с клетками-мишенями в течение 20 часов при соотношении эффектор:мишень 2,5:1. Клетки-мишени включали BCMA-положительные KMS-11 с люциферазой (KMS11-luc) или BCMA-отрицательные клетки U87 с люциферазой (U87-luc). Эффекторные клетки культивировали в 96-луночных планшетах с U-образным дном с 3×10⁴ клеток-мишеней в общем объеме 200 мкл/лунку в полных T-клеточных средах. Через 20 часов супернатанты удаляли из культур и количественно анализировали секрецию ИФНγ, ИЛ-2 и ФНО посредством цитометрического анализа с использованием бус (BD Bioscience) с помощью FACS по инструкциям производителя. Измерения осуществляли в двух параллелях. Планки погрешностей представляют стандартное отклонение (фигуры 35A-35B). Результаты свидетельствуют о том, что BCMA-10 CART, но не нетрансдуцированные T-клетки, стимулировали с продукцией цитокинов BCMA-экспрессирующими, но не BCMA-отрицательными, клетками-мишенями (фигуры 35A-35B).

Пример 13: Функция BCMA-CART при множественной миеломе

Множественная миелома (MM) является злокачественным новообразованием из плазматических клеток в костном мозге с клиническими признаками, включающими, в качестве наиболее распространенных, анемию, повреждения кожи, хрупкость костей или боль в костях, утомляемость, остеолитические повреждения, гиперкальциемию, почечную недостаточность и рецидивирующую бактериальную инфекцию. Несмотря на тот факт, что современные способы лечения лекарственными средствами, такими как леналидомид, приводят к значительному повышению выживаемости при рецидивирующей MM, заболевание почти всегда является неизлечимым. Медиана 5-летней выживаемости составляет приблизительно 35%. По причине неблагоприятного прогноза необходима эффективная направленная терапия.

Лечение с использованием T-клеток, сконструированных для экспрессии химерных антигенных рецепторов (CAR), может привести к многообещающим способам иммунотерапии гемобластозов, таких как ALL. CAR содержат слитый белок, распознающий белок-мишень поверхности клетки, экспрессирующийся на опухолевой клетке. В исследования дифференциальной экспрессии генов идентифицирован B-клеточный антиген созревания (BCMA, CD269) как высокоспецифичный антиген-мишень в случае злокачественных плазматических клеток и нормальных плазматических клеток, таким образом, BCMA является потенциально применимым антигеном-мишенью для терапии CAR T-клетками. См., например, Carpenter et al. Clin Cancer Res. 19,8(2013):2048-60.

BCMA является членом суперсемейства рецепторов ФНО. Белок кодируется геном TNFRSF17. BCMA экспрессируется в зрелых B-лимфоцитах. Он связывается с суперсемейством факторов некроза опухоли (лигандом), членом 13b (TNFSF13B/TALL-1/BAFF), APRIL и с различными членами семейства TRAF. Взаимодействие между их лигандами приводит к сигналам NF-kappaB и MAPK8/JNK, связанным с развитием B-клеток, длительной выживаемостью в плазме и пролиферацией клеток.

В этом примере описывают преклиническое исследование для оценки функции in vitro и in vivo huBCMA-BBz CAR-трансдуцированных T-клеток (CART-BCMA или BCMA-CART), включающих BCMA10 scFv.

Материалы

T-клетки. T-клетки здоровых доноров получали из University of Pennsylvania CFAR Human Immunology Core (Philadelphia, PA). Клетки получали посредством лейкафереза здоровых доноров-добровольцев.

Среда. Использовали среду RPMI (Gibco), дополненную 10% эмбриональной телячьей сывороткой и профильтрованную (Valley Biomedical), 2 мМ GlutaMax, (Invitrogen), 10 мМ HEPES (Invitrogen), 100 Ед/мл пенициллина и 100 мкг/мл стрептомицина (Gibco).

Бусы CD3/28. Бусы CD3/28 (категории GMP) производили в Clinical Cell and Vaccine Production Facility в University of Pennsylvania.

Плазмиды. Конструкцию huBCMA-BBz CAR, клонируемую в лентивирусный вектор pELPS NVP-MCM998, получали в Novartis.

Антитела. Антитела козы против BCMA человека, меченые PE (Biolegend кат. № 357504), и стрептавидин (BD Biosciences) использовали для детекции экспрессии BCMA на линиях клеток множественной миеломы. В случае экспрессии CAR T-клетками использовали слитый белок BCMA-Fc (R&D Systems, кат. №193-BC-050), а затем антитело против Fc IgG человека с PE (Biolegend, кат. № 409304).

PBS. PBS получали в Gibco.

Упаковка лентивируса. Плазмиды PCL USUG, PRSV Rev, PGAG pol (Nature Technology corp., кат. № NTC RP20) использовали для получения лентивируса huBCMA-BBz посредством трансфекции с использованием липофектамина 2000 (Invitrogen, кат. № 11668027) на клетках 293T.

Линии клеток. Для получения лентивируса использовали эмбриональные клетки почки человека 293T (ATCC кат. № CRL-3216). Для функциональных экспериментов с CART-BCMA клетками использовали линии клеток множественной миеломы RPMI 8226 (ATCC, кат. № CCL-155), MM1S (ATCC, кат. № CRL-2974), U266 (ATCC, кат. № CRL-3216), NCI H929 (ATCC, кат. № CRL-9068) и OPM2 (DSMZ, кат. № ACC-50) и K562 (ATCC, кат. № CCL-256) или клетки K562-BCMA (лентивирусный вектор BCMA от Genecopoeia, кат. № Lv105).

Способы

Получение лентивируса и определение титра. Клетки 293T высевали при 8×10⁶ клеток/на флакон во флакон T150 (Corning Costar, кат. №430825) со средой RPMI1640 (Gibco, кат. №11875-080), дополненной 10% FBS (ATCC, кат. № 30-2020) и стрептомицином/пенициллином (Invitrogen, кат. № 10378-016), и трансфицировали с использованием смеси плазмид для упаковки (Nature Technology corp.) и huBCMA-BBz, кодирующего лентивирусный вектор pELPS, в течение 24 часов. Полученный вирусный препарат хранили при -80°C. Рекомбинантный лентивирус титровали относительно CD4 T.

Трансдукция. T-клетки, полученные из Human Immunology Core, однократно промывали в средах, ресуспендировали при 10⁶ клеток/мл и стимулировали бусами CD3/28 при соотношении клетка:бусы 1:3. Трансдукцию лентивирусом осуществляли в день 2 посредством смешивания лентивирусного вектора с культурами клеток при MOI 3.

Экспансия T-клеток. Стимулируемые T-клетки подпитывали и разделяли каждые 2-3 дня до 0,8×10⁶ клеток/мл в течение 7-9 дней или до тех пор, пока клетки являлись покоящимися, как определяли по снижению скорости деления клеток и снижению среднего объема клеток до <~300 фл.

Культуры клеток. Линии клеток множественной миеломы и линии клеток K562, K562 BCMA культивировали в RPMI с 10% FBS и антибиотиками.

Определение количества клеток. Клетки подсчитывали каждые 3 дня в течение экспансии посредством осторожного смешивания культур и сбора 40 мкл клеток из объема культур и помещали в Accuvettes (Beckman Coulter) с 20 мл буфера Isoton II Diluent Buffer для подсчета с использованием Coulter Multisizer 3 (Beckman Coulter). Результаты этого теста (абсолютное количество клеток и объем клеток) использовали для определения концентрации клеток, общих количеств клеток, скорости роста и объемов разведения.

Анализ высвобождения ⁵¹Cr. Способность клеток CART-BCMA уничтожать BCMA-экспрессирующие клетки-мишени оценивали с использованием анализа высвобождения ⁵¹Cr. В кратком изложении, клетки-мишени K562-BCMA (или контрольные клетки K562) и линии клеток множественной миеломы метили ⁵¹Cr (дихроматом натрия), промывали и сокультивировали с эффекторными CART-BCMA или контрольными нетрансдуцированными T-клетки (NTD) при различных соотношениях эффектор/мишень. Супернатанты собирали через 4 часов и помещали в 96-луночные планшеты Lumaplates (Perkin Elmer). Количество ⁵¹Cr, высвобождаемого из меченых клеток-мишеней, измеряли с помощью жидкостного сцинтилляционного счетчика (MicroBeta trilux, Perkin Elmer). Клетки-мишени, инкубируемые в среде в отдельности или с 1% SDS, использовали для определения спонтанного (S) или максимального (M) высвобождения ⁵¹Cr. Процентную долю специфического лизиса вычисляли следующим образом: 100×(импульсы/мин при экспериментальном высвобождении-импульсы/мин при S-высвобождении)/(импульсы/мин при M-высвобождении-импульсы/мин при S-высвобождении).

Детекция CAR на трансдуцированных T-клетках. Для оценки трансдукции CART-BCMA T-клетки окрашивали с помощью слитого белка BCMA-Fc (R&D Systems), а затем антителом против Fc IgG человека-PE (Biolengend).

Проточная цитометрия. В случае окрашивания против BCMA линии клеток миеломы человека окрашивали с использованием антитела козы против BCMA человека-PE (Biolegend), а затем стрептавидина (BD Biosciences). Проточную цитометрию во всех экспериментах осуществляли с использованием FlowJo (Tree Star, Inc.).

ELISA. Клетки-мишени K562-BCMA (или контрольные клетки K562) или линии клеток множественной миеломы комбинировали с CAR-трансдуцированными T-клетками при соотношении мишень:эффектор 1:3 в двух параллелях в лунках 96-луночного плоскодонного планшета. Анализ ELISA осуществляли в разведении 1:10 супернатанта, собранного после 16 часов инкубации, с использованием набора ELISA для ИФНγ или ИЛ-2 человека Duoset (R&D) по инструкциям производителя.

Результаты

huBCMA-BBz в высокой степени экспрессировался на трансдуцированных T-клетках.

Свежеочищенные, подвергнутые отрицательной селекции нормальные T-клетки человека активировали in vitro с использованием бус CD3/28 (соотношение клетки:бусы 1:3) и позволяли им делиться. В день 1 после активации клетки трансдуцировали с использованием преклинического лентивирусного вектора, экспрессирующего huBMCA-BBz, или ложно трансдуцировали (контроль NTD). На фигуре 36A показано повышение общего количества T-клеток в течение культивирования. BCMA-CART клетки подсчитывали каждые 3 дня и доводили до соотношения разделенных клеток. T-клетки подсчитывали с использованием Coulter Counter Multisizer III и подпитывали каждые 2 дня до конца цикла экспансии (день 7-9). В день 6 экспансии ex vivo 200 мкл CART-BCMA или контрольных NTD T-клеток окрашивали, как описано в разделе "Способы" выше. Живые популяции клеток гейтировали с использованием FCS относительно SSC. Получение данных проточной цитометрии осуществляли с помощью инструмента BC FACS Canto и анализ данных проточной цитометрии осуществляли с использованием программного обеспечения FlowJo (TreeStar, Inc).

Не наблюдали различий в скоростях пролиферации нетрансдуцированных (NTD) и CART-BCMA клеток, что свидетельствует о том, что лентивирусная экспрессия не влияла на пролиферативный потенциал T-клеток (фигура 36A). Эффективность трансдукции оценивали в день 6 после трансдукции, как описано в разделе "Способы" выше. На фигуре 36B показано, что эффективность трансдукции huBCMA-BBz составляла 49%. Эти результаты свидетельствуют о том, что huBCMA-BBz CAR эффективно экспрессировался на поверхности T-клеток человека.

BCMA экспрессировался на различных уровнях на линиях клеток множественной миеломы.

Поверхностную экспрессию BCMA на линиях клеток множественной миеломы определяли с использованием окрашивания и проточной цитометрии. Живые популяции клеток гейтировали по параметрам FCS/SCC. Получение данных проточной цитометрии осуществляли с помощью инструмента Canto и анализ данных проточной цитометрии осуществляли с использованием программного обеспечения FlowJo. Большинство тестируемых линий клеток множественной миеломы демонстрировали сильную экспрессию BCMA, в то время как клетки RPMI 8226 и контрольные клетки K562-BCMA экспрессировали более низкие уровни на поверхности BCMA (фигура 37). На всех графиках оранжевый сплошной пик представляет изотипический контроль, и синий сплошной пик представляет окрашивание с использованием антитела против BCMA (фигура 37). При окрашивании и проточной цитометрии выявляли экспрессию BCMA на поверхности линий клеток множественной миеломы NCI H929, U266, RPMI 8226, OPM2 и MM1S, а также клеток K562-BCMA. Не определяли BCMA на поверхности линии клеток K562 (фигура 37). Эти результаты свидетельствуют о том, что BCMA экспрессировался несколькими линиями клеток множественной миеломы с уровнями экспрессии, варьирующимися приблизительно на 1 log.

Клетки CART-BCMA продуцировали цитокины и демонстрировали цитотоксические свойства, в частности, в ответ на различные BCMA-экспрессирующие линии клеток множественной миеломы.

Определяли способность клеток CART-BCMA продуцировать цитокины и уничтожать BCMA+ клетки-мишени. Клетки CART-BCMA (трансдуцированные с помощью huBCMA-BBz T-клетки) или контрольные нетрансдуцированные T-клетки (NTD) сокультивировали в двух параллелях в течение 16 часов с K562, K562-BCMA или линиями клеток множественной миеломы (MM1S, OPM2 или U266). Клетки сокультивировали в соотношении T-клеток и клеток-мишеней 3:1. Собирали супернатант, не содержащий клетки, и оценивали продукцию ИЛ-2 или ИФНγ, как описано в разделе "Способы" выше.

Клетки CART-BCMA особенно продуцировали ИЛ-2 или ИФНγ в присутствие K562, сконструированных для экспрессии BCMA (K562-BCMA), по сравнению с неэкспрессирующими антиген клетками K562 дикого типа. Клетки CART-BCMA также были способны продуцировать цитокины в присутствие линий клеток множественной миеломы U266, OPM2 и MM1S (фигуры 38A-38B). Эти результаты свидетельствуют о том, что в присутствие линий BCMA+ клеток-мишеней клетки CART-BCMA продуцировали провоспалительные цитокины.

Другой мерой противоопухолевой эффективности in vitro клеток CART-BCMA является их способность уничтожать BCMA+ клетки-мишени. T-клетки активировали и трансдуцировали, как описано выше, например, в отношении фигур 36A-36B. BCMA10 CAR T-клетки сокультивировали с ⁵¹Cr-мечеными линиями клеток K562-BCMA, RPMI 8226 или MM1S в течение 4 часов при соотношения эффектора и мишени (соотношении E:T), указанном на фигурах 39A-39C (E:T 0, 10, 20 или 30) и вычисляли процентную долю лизиса, как описано в разделе "Способы" выше. На фигуре 39A показано, что клетки CART-BCMA особенно уничтожали клетки K562-BCMA. Клетки CART-BCMA также эффективно уничтожали линию клеток множественной миеломы BCMA^high MM1S и линию клеток BCMA^low RPMI 8226 в 4-часовом анализе цитотоксичности (фигуры 39B, 39C). Эти результаты свидетельствуют о том, что CART-BCMA демонстрировали повышенную цитотоксическую активность (анализ ⁵¹Cr) против линий клеток множественной миеломы.

Противоопухолевая активность клеток CART-BCMA in vivo

Используя клетки RPMI 8226, демонстрирующие более низкие уровни экспрессии BCMA по сравнению со многими другими линиями клеток миеломы, разрабатывали мышиную модель для оценки способности CART-BCMA распознавать и устранять опухоли, образуемые линией клеток BCMA^low RPMI 8226, сконструированной для экспрессии зеленой люциферазы жука-щелкуна (CBG) для биолюминесцентной визуализации (BLI). Мышам NOD/SCID/γ-цепь^-/- (NSG) с развившимися опухолями из внутривенно введенных RPMI 8226 делали внутривенные инъекции клеток CART-BCMA (N=10) или нетрансдуцированных контрольных T-клеток (NTD) (N=10) в день 30 после инокуляции опухолевых клеток. Мышам NSG, которым пересаживали клетки RPMI-8226, вводили 5×10⁶ T-клеток CART-BCMA в день 30 после инъекции опухолевых клеток. После прогрессирования миеломной опухоли осуществляли BLI in vivo (BLI вентральных и дорзальных областей мыши один раз в неделю) до 9 недель после инфузии T-клеток (через 14 недель после инъекции опухоли).

Нетрансдуцированные T-клетки не могли контролировать опухоли, и всех мышей приходилось умерщвлять по причине прогрессирования заболевания через 10-11 недель после инъекции опухоли (фигура 40A и 40C). В отличие от этого, мыши, которым вводили клетки CART-BCMA, демонстрировали контроль роста опухоли у большинства мышей, что приводило к 80% выживаемости мышей, которым вводили CART-BCMA, через 10 недель после инокуляции опухолевых клеток по сравнению с 0% выживаемости мышей, которым вводили контроль NTD (фигуры 40B и 40C). Эти результаты свидетельствуют о том, что интрамедуллярные опухоли RPMI 8226 ингибировали введением CART-BCMA.

Пример 14: Схема введения BCMA-CART

Терапию клетками BCMA CART, например, терапию клетками BCMA CART, представленную в настоящем описании, можно проводить пациентам, например, пациентам с множественной миеломой, в соответствии со схемой введения, представленной в настоящем описании, например, схемой введения, описываемой далее.

Пред проведением терапии BCMA CART осуществляют лейкаферез у пациента для получения аутологичных T-клеток. Осуществляют производство и/или криоконсервацию T-клеток BCMA lentiCAR. В течение производства пациентам можно проводить терапию для сохранения контроля заболевания. Некоторым пациентам можно проводить терапию с истощением лимфоцитов (например, цитоксаном) перед введением CART-клеток. Например, пациенту проводят химиотерапию с истощением лимфоцитов, например, цитоксаном (например, в дозе 1,5 г/м²). В других схемах введения пациенту не проводят химиотерапию с истощением лимфоцитов. Затем пациентов лечат клетками BCMA CART в соответствии со схемой введения, представленной в настоящем описании.

Схема введения включает фракционирование дозы, например, где конкретную процентную долю общей дозы клеток вводят в первый день лечения, другую процентную долю общей дозы клеток вводят в последующий день лечения, и другую процентную долю общей дозы клеток вводят в еще более поздний день лечения. Например, 10% общей дозы клеток вводят в первый день, 30% общей дозы клеток вводят во второй день и оставшиеся 60% общей дозы клеток вводят в третий день лечения. Например, общая доза клеток включает от 1 до 5×10⁷ или от 1 до 5×10⁸ BCMA-CART-клеток.

В одной схеме введения не проводят химиотерапию с истощением лимфоцитов и вводят общую дозу клеток BCMA-CART от 1 до 5×10⁷ (например, посредством инфузии) с 10% дозы клеток в день 1 лечения, 30% в день 2 лечения и 60% в день 3 лечения. В другой схеме введения не проводят химиотерапию с истощением лимфоцитов и вводят общую дозу клеток BCMA-CART от 1 до 5×10⁸ (например, посредством инфузии) с 10% дозы клеток в день 1 лечения, 30% в день 2 лечения и 60% в день 3 лечения. В другой схеме введения химиотерапию с истощением лимфоцитов (цитоксаном в дозе 1,5 г/м²) проводят за три дня до введения BCMA-CART-клеток, а затем вводят общую дозу клеток BCMA-CART от 1 до 5×10⁷ (например, посредством инфузии) с 10% дозы клеток в день 1 лечения, 30% в день 2 лечения и 60% в день 3 лечения. В другой схеме введения химиотерапию с истощением лимфоцитов (цитоксаном в дозе 1,5 г/м²) проводят за три дня до введения BCMA-CART-клеток, а затем вводят общую дозу клеток BCMA-CART от 1 до 5×10⁸ (например, посредством инфузии) с 10% дозы клеток в день 1 лечения, 30% в день 2 лечения и 60% в день 3 лечения.

Клинические лабораторные анализы осуществляют в дни 1, 2, 4, 7, 14, 21, 28, каждые 4 недели, после введения CART-клеток (при этом день 0 является первым днем введения CART). Оценки множественной миеломы осуществляют до введения CART, в первый день введения CART (день 0) и дни 14, 28 и каждые 4 недели. Аспирацию/биопсию костного мозга (bx) осуществляют до введения CART и в дни 28 и 90 после введения CART. После первых 28 дней лечения CART последующее наблюдение осуществляют каждые 4 недели в течение до 6 месяцев, затем каждые 3 месяца в течение до 2 лет.

Пример 15: Низкая доза RAD001 стимулирует пролиферацию CART в модели культуры клеток

Эффект низких доз RAD001 в отношении пролиферации CART-клеток in vitro оценивали посредством сокультивирования CART-экспрессирующих клеток с клетками-мишенями в присутствие разных концентраций RAD001.

Материалы и способы

Получение CAR-трансдуцированных T-клеток

Лентивирусный вектор для переноса с гуманизированным CAR против CD19 человека (huCART19) использовали для получения геномного материала, упакованного в псевдотипированные лентивирусные частицы VSVg. Аминокислотной и нуклеотидной последовательностью гуманизированного CAR против CD19 человека (huCART19) являются CAR 1, ID 104875, описываемые в публикации PCT № WO2014/153270, зарегистрированной 15 марта 2014 года, и обозначаемые как SEQ ID NO: 85 и 31 в настоящем описании.

Лентивирусный вектор для переноса ДНК смешивают с тремя компонентами для упаковки VSVg env, gag/pol и rev в комбинации с реагентом липофектамином для трансфекции клеток Lenti-X 293T. Среду заменяли через 24 и 30 часов, содержащие вирус среды собирают, фильтруют и хранят при -80°C. CART получают посредством трансдукции свежих или замороженных наивных T-клеток, полученных посредством отрицательной магнитной селекции крови здорового донора или Leukopak. T-клетки активируют посредством инкубации с использованием бус против CD3/против CD28 в течение 24 часов, после чего вирусный супернатант или концентрированный вирус (MOI=2 или 10, соответственно) добавляют в культуры. Модифицированным T-клеткам позволяли расти в течение приблизительно 10 дней. Процентную долю трансдуцированных клеток (экспрессирующих CAR на поверхности клетки) и уровень экспрессии CAR (относительную интенсивность флуоресценции, геометрическое среднее) определяют посредством проточного цитометрического анализа между днями 7 и 9. При комбинации замедленного роста клеток и размера T-клеток, приближающегося к ~350 фл, состояние T-клеток определяют как подлежащее криосохранению для дальнейшего анализа.

Оценка пролиферации CART

Для оценки функциональности CART T-клетки размораживали и подсчитывали и определяли жизнеспособность с помощью Cellometer. Количество CAR-положительных клеток в каждой культуре нормировали с использованием нетрансдуцированных T-клеток (UTD). Влияние RAD001 на CART тестировали при титровании RAD001, начиная с 50 нМ. Линией клеток-мишеней, используемых во всех экспериментах с сокультивированием, является Nalm-6, линия пре-B-клеток острого лимфобластного лейкоза человека (ALL), экспрессирующих CD19 и трансдуцированных для экспрессии люциферазы.

Для измерения пролиферации CART, T-клетки культивируют с клетками-мишенями в соотношении 1:1. Анализ осуществляют в течение 4 дней, когда клетки окрашивают на экспрессию CD3, CD4, CD8 и CAR. Количество T-клеток оценивают посредством проточной цитометрии с использованием бус для подсчета в качестве референса.

Результаты

Способность CART-клеток к пролиферации тестировали в 4-дневном анализе сокультивирования. Количество CAR-положительных CD3-положительных T-клеток (темные столбики) и общее количество CD3-положительных T-клеток (светлые столбики) оценивали после культивирования CAR-трансдуцированных и нетрансдуцированных T-клеток с Nalm-6 (фиг. 43). Клетки huCART19 росли при культивировании в присутствие менее чем 0,016 нМ RAD001 и, в меньшей степени, при более высоких концентрациях соединения. Важно, что и при 0,0032, и при 0,016 нМ RAD001 пролиферация являлась более высокой, чем наблюдали при отсутствии добавления RAD001. Нетрансдуцированные T-клетки (UTD) не демонстрировали детектируемую экспансию.

Пример 16: Низкая доза RAD001 стимулирует экспансию CART in vivo

В этом примере оценивают способность клеток huCAR19 пролиферировать in vivo при различных концентрациях RAD001.

Материалы и способы:

Клетки NALM6-luc: Линию клеток острого лимфобластного лейкоза (ALL) человека NALM6 получали из периферической крови пациента с рецидивирующим ALL. Затем клетки метили люциферазой светлячка. Эти клетки в суспензионной культуре росли в RPMI, дополненной 10% термически инактивированной эмбриональной телячьей сывороткой.

Мыши: Мышей NSG (NOD.Cg-Prkdc^scidIl2rg^tm1Wjl/SzJ) возрастом 6 недель получали в Jackson Laboratory (инвентарный номер 005557).

Имплантация опухоли: Клетки NALM6-luc выращивали in vitro в RPMI, дополненной 10% термически инактивированной эмбриональной телячьей сывороткой. Затем клетки переносили в коническую пробирку емкостью 15 мл и дважды промывали холодным стерильным PBS. Затем клетки NALM6-luc подсчитывали и ресуспендировали в концентрации 10×10⁶ клеток на миллилитр PBS. Клетки помещали на лед и сразу (в пределах одного часа) имплантировали мышам. Клетки NALM6-luc инъецировали внутривенно через хвостовую вену в объеме 100 мкл, всего 1×10⁶ клеток на мышь.

Дозирование CAR T-клеток: Мышам вводили 5×10⁶ CAR T-клеток через 7 дней после имплантации опухоли. Клетки частично размораживали на водяной бане температурой 37°C, а затем полностью размораживали добавлением 1 мл холодного стерильного PBS в пробирку, содержащую клетки. Размороженные клетки переносили в пробирку Falcon емкостью 15 мл и доводили PBS до конечного объема 10 мл. Клетки промывали дважды при 1000 об./мин каждый раз в течение 10 минут, а затем подсчитывали с помощью гемоцитометра. Затем T-клетки ресуспендировали в концентрации 50×10⁶ CAR T-клеток на мл холодного PBS и держали на льду до введения мышам. Мышам внутривенно через хвостовую вену инъецировали 100 мкл CAR T-клеток в дозе 5×10⁶ CAR T-клеток на мышь. Восьми мышам на группу вводили 100 мкл PBS в отдельности (PBS) или T-клетки с гуманизированным CAR CD19.

Введение дозы RAD001: Составляли 50 мг концентрированной микроэмульсии, равные 1 мг RAD001, а затем ресуспендировали в D5W (5% декстрозы в воде) во время введения. Мышам ежедневно перорально вводили (через желудочный зонд) 200 мкл желаемых доз RAD001.

Анализ PK: Мышам ежедневно вводили дозу RAD001, начиная через 7 дней после имплантации опухоли. Группы дозирования являлись следующими: 0,3 мг/кг, 1 мг/кг, 3 мг/кг и 10 мг/кг. У мышей забирали кровь в дни 0 и 14 после первой и последней дозы RAD001 в следующие моменты времени для анализа PK: 15 минут, 30 минут, 1 час, 2 часа, 4 часа, 8 часов, 12 часов и 24 часа.

Результаты:

Экспансию и фармакокинетику RAD001 тестировали на мышах NSG с опухолями NALM6-luc. Ежедневное пероральное введение RAD001 в отдельности не оказывало влияния на рост опухолей NALM6-luc (фигура 44). Фармакокинетический анализ RAD001 показывает, что он достаточно стабилен в крови мышей, несущих опухоли (фигура 45A и 45B). Анализы PK в день 0 и день 14 показывают, что концентрации RAD001 в крови составляют более 10 нм даже через 24 часа после введения при наименьшей тестируемой дозе (0,3 мг/кг).

Учитывая эти дозы, huCAR19 CAR T-клетки вводили с RAD001 и без него для определения пролиферативной способности этих клеток. Наибольшая используемая доза составляла 3 мг/кг с учетом уровней RAD001 в крови через 24 часа после введения. Т.к. концентрация RAD001 составляла более 10 нМ через 24 часа после начальной дозы RAD001, в исследовании in vivo с CAR T-клетками использовали несколько более низких доз RAD001. CAR T-клетки вводили IV за один день до начала ежедневного перорального введения RAD001. Мышей контролировали посредством FACS на экспансию T-клеток.

При наименьших дозах RAD001 наблюдают повышенную пролиферацию CAR T-клеток (фигура 46). Эта повышенная пролиферация является более очевидной и пролонгированной при использовании CD4⁺ CAR T-клеток, чем CD8⁺ CAR T-клеток. Однако при использовании CD8⁺ CAR T-клеток можно наблюдать повышенную пролиферацию в ранние моменты времени после дозы CAR T-клеток.

Пример 17: CAR CD19 T-клетки для применения в лечении множественной миеломы

Даже при использовании современных схем химиотерапии, направленной терапии и аутологичной трансплантации стволовых клеток, миелому считают неизлечимым заболеванием. В этом примере описывают лечение множественной миеломы (MM) с использованием аутологичных T-клеток, направленных против CD19, с химерным антигенным рецептором (лентивирус/CD19:4-1BB:CD3 дзета, также известных как "CART19" или CTL019). В этом примере показано, что способы терапии CAR против CD19 обладают потенциалом для развития устойчивых, длительных ремиссий с учетом направленного воздействия на миеломные стволовые клетки и/или опухолевые клетки, экспрессирующие очень низкие (неопределяемые большинством способов) уровни CD19.

При лечении пациентки с агрессивным вторичным плазмоклеточным лейкозом авторы настоящего изобретения обнаруживали, что CART19, вводимые через два дня после аутологичной трансплантации стволовых клеток, приводили к быстрому выведению плазмоклеточного лейкоза и очень хорошему частичному ответу у пациента, подвергнутого множеству линий химиотерапии. Эта пациентка зависела от переливаний в течение месяцев перед лечением, через два месяца после лечения у нее восстанавливались анализы крови (с количеством тромбоцитов и количеством лейкоцитов в диапазоне нормы) и ей не требовались переливания с тех пор, как ее выписали из больницы после лечения.

Т.к. миеломные клетки, как правило, не экспрессируют CD19, данные о том, что лечение CART19 индуцировало быстрый и значительный опухолевый ответ в этой опухоли, являлись неожиданными. Не желая быть связанными какой-либо конкретной теорией, полагали, что CART19 можно использовать для лечения миеломы: (1) т.к., хотя общепринято считают, что миеломные клетки являются отрицательными по экспрессии CD19 при проточной цитометрии, есть данные, свидетельствующие о том, что миеломные клетки могут экспрессировать очень низкие уровни CD19, таким образом, что экспрессию определяют по РНК, но не посредством проточной цитометрии или иммуногистохимии, и (2) по причине концепции направленного воздействия на клонотипические B-клетки, которые, как считают, являются злокачественными стволовыми клетками, дающими начало множественной миеломе и особенно резистентными к химиотерапии. Существует клональная взаимосвязь между B-клетками и опухолевыми клетками миеломы, но общепринятая терапия миеломы направлена на злокачественные плазматические клетки, а не на B-клетки. Таким образом, CART19 для лечения миеломы направленно воздействует на иную популяцию клеток, чем большинство способов терапии миеломы.

В этом опыте с одним пациентом пациентка имела циркулирующие плазматические клетки, и авторы настоящего изобретения могли тестировать ее опухолевые клетки на экспрессию CD19. Приблизительно 1-2% ее опухолевых клеток экспрессировали антиген CD19. (фиг. 47). Таким образом, предполагают, что CART19 может иметь прямой эффект в отношении каждой небольшой популяции ее опухолевых клеток, очень хороший частичный ответ, хотя его нельзя спрогнозировать с учетом направленного воздействия только на очень небольшую популяцию CD19+ опухолевых клеток.

В этом случае CART19 вводили после аутологичной трансплантации стволовых клеток после высокой дозы мелфалана. Хотя это является стандартной терапией при миеломе, она не приводит к излечению. Кроме того, эту пациентку ранее подвергали тандемным аутологичным трансплантациям стволовых клеток, и у нее был ранний рецидив (<6 месяцев) после трансплантации. Не желая быть связанными какой-либо конкретной теорией, полагают, что использование клеток CART19, как описано в этом примере, может иметь неперекрывающийся механизм при лечении миеломы при комбинировании с аутологичной трансплантацией стволовых клеток.

Пациента с рефрактерной множественной миеломой лечили с использованием CTL019 после миелоабляционной химиотерапии и ASCT. Ремиссию поддерживали несмотря на утрату детектируемого CTL019 и восстановления нормальных CD19-положительных B-клеток, что свидетельствует о том, что для этого ответа не требуется длительная активность CTL019. Кроме того, этого ответа пациента достигали даже при том, что подавляющее большинство (99,95%) неопластических плазматических клеток являлись CD19-отрицательными при проточной цитометрии и RT-ПЦР.

Отсутствие детектируемой экспрессии CD19 в доминантной популяции неопластических плазматических клеток этого пациента позволяет предполагать, что клинически важная мишень CTL019 находится вне этой доминантной CD19-отрицательной популяции. Неопластические плазматические клетки у пациентов с множественной миеломой проявляют генетическую, иммунофенотипическую и функциональную гетерогенность. Конкретные субпопуляции могут потребоваться для выживаемости клона в течение противомиеломной терапии. У описываемого пациента, например, небольшая CD19-экспрессирующая субпопуляция плазматических клеток может являться относительно мелфалан-резистентной, но чувствительной к CTL019. Эти данные позволяют предполагать, что терапевтическое направленное воздействие на небольшую субпопуляцию клонов может приводить к длительному клиническому результату в комбинации с общепринятой противомиеломной терапией.

Альтернативно, клинически важная мишень CTL019 у этого пациента может находиться вне популяции неопластических плазматических клеток. Например, CTL019 может направленно воздействовать на популяцию стволовых клеток, являющуюся относительно небольшой, но дающей начало неопластическим плазматическим клеткам. Таким образом, множественная миелома может являться заболеванием с вовлечением множества поздних типов B-клеток, не только окончательно дифференцированных плазматических клеток, таким образом, что способы терапии, такие как CTL019, направленно воздействующие на B-лимфоциты, могут являться применимыми вспомогательными средствами для способов терапии, напрямую воздействующими на плазматические клетки.

Десять дополнительных пациентов с множественной миеломой будут лечить с использованием CART19 в исследовании фазы I, по меньшей мере трех пациентов лечат до сих пор.

Обоснование дозы

В случае первых 3 пациентов авторы настоящего изобретения наблюдали клиническую активность при дозах в диапазоне от 1,4×l0⁷ до 1,1×10⁹ клеток CART-19. По меньшей мере у первых 3 пациентов, подвергнутых лечению, это наблюдение свидетельствует о том, что нет очевидной взаимосвязи между дозой и ответом. Полный ответ наблюдали у пациентов, которым вводили дозу, отличающуюся в два log раз. Таким образом, в отличие от стандартных лекарственных средств, которые метаболизируются, CAR T-клетки могут иметь широкий диапазон дозозависимого эффекта. Наиболее вероятно, это является результатом того, что CAR T-клетки способны интенсивно пролиферировать в пациентах. Таким образом, авторы настоящего изобретения установили диапазон доз 1-5×10⁸ клеток CART-19 для инфузии. В этом исследовании одного пациента, представленном на основе благотворительно-испытательного использования, пациенту вводили до 5×l0⁸ клеток CART19 без нижнего предела дозы. В случае исследования десяти пациентов им будут вводить 1-5×10⁷ клеток CART-19.

Общий дизайн

Это исследование являлось исследованием одного пациента, предложенным на основе благотворительно-испытательного использования, его моделировали после исследования фазы I для определения того, является ли инфузия аутологичных T-клеток, трансдуцированных для экспрессии CART-19, безопасной. Основными целями исследования являлось определение безопасности, переносимости и потенциала приживления CART-19 T-клеток у пациентов, подвергаемых аутологичной ASCT после раннего рецидива после первой ASCT. Протокол состоит из открытого пилотного исследования.

При поступлении индивидуумов будут подвергать биопсии костного мозга и рутинным лабораторным оценкам и визуализации их MM. Пригодных индивидуумов будут подвергать стационарному аферезу для получения больших количеств мононуклеарных клеток периферической крови (PBMC) для производства CART-19. T-клетки будут очищать от PBMC, трансдуцировать с использованием лентивирусного вектора TCRζ/4-1BB, выращивать in vitro, а затем замораживать для дальнейшего введения. Будут регистрировать количество пациентов, имеющих неподходящие забор, экспансию или производство T-клеток, по сравнению с количеством пациентов, T-клетки которых успешно производили, ожидают, что в этой выборке пациентов осуществимость производства продукта не будет затруднительной.

Индивидуумы, как правило, будут иметь подходящие стволовые клетки периферической крови, хранящиеся с момента мобилизации/забора, осуществляемого при подготовке к их первой ASCT для осуществления двух дополнительных ASCT. Тех, у кого их нет, будут подвергать второй мобилизации/забору до или после их стационарного афереза по схеме лечения в соответствии с решением лечащего врача. Приблизительно через две недели после исходного лейкафереза индивидуумы поступали в больницу, и им вводили высокую дозу мелфалана (день -2) с последующей инфузией аутологичных стволовых клеток двумя днями позже (день 0), и всем индивидуумам будут проводить инфузию CART-19 клеток через двенадцать-четырнадцать дней (день +12-14). Будут включать до 10 пациентов.

Всем индивидуумам будут проводить анализы крови для оценки безопасности и приживления и выживаемости CART-19 клеток через регулярные интервалы до недели 4 исследования. В день +42 и день +100 индивидуумов будут подвергать аспирации/биопсии костного мозга для оценки бремени плазматических клеток костного мозга и миграции клеток CART-19 в костный мозг. Формальную оценку ответа будут осуществлять в день 100 по критериям International Myeloma Working Group (IMWG) и TTP будут контролировать в соответствии с рутинной клинической практикой для пациентов с множественной миеломой. Основным результатом в отношении эффективности, измеряемым в этом исследовании, будет сравнение TTP после исходной ASCT пациента с TTP после ASCT в этом исследовании.

Схема лечения

Терапия рецидивирующей/прогрессирующей множественной миеломы

Перед включением в исследование пациентам можно проводить терапию рецидивирующей/прогрессирующей множественной миеломы в соответствии с решением лечащего врача. Терапию можно продолжать после включения в исследование.

Пациенты должны прекращать всю терапию за две недели перед аферезом и за две недели до введения высокой дозы мелфалана. Если ожидают, что пройдет более двух недель между аферезом и введением высокой дозой мелфалана, пациенты могут возобновлять терапию после афереза по решению их лечащего врача.

Высокая доза мелфалана (день -2)

Пациенты будут поступать в больницу в день -3 или -2, и их будут подвергать обследованию лечащим врачом и рутинным лабораторным тестам, которые будут включать мониторинг параметров на синдром распада опухоли перед началом протокола лечения. Кровь для лабораторных тестов для мониторинга MM (SPEP, количественный анализ иммуноглобулинов и анализ свободных легких цепей в сыворотке) будут забирать перед началом терапии, если такие тесты не будут проводить в течение 7 дней после поступления.

Терапия высокими дозами будет состоять из мелфалана в дозе 200 мг/м², вводимого внутривенно в течение приблизительно 20 минут в день -2. Дозу мелфалана будут снижать до 140 мг/м² в случае пациентов возрастом >70 лет или в случае пациентов любого возраста, которые по мнению лечащего врача могут не перенести дозу 200 мг/м². Всем пациентам будут проводить стандартную профилактику антиэметиками, которая может включать дексаметазон, и стандартную профилактику антибиотиками.

Реинфузия стволовых клеток (день 0)

Инфузию стволовых клеток будут проводить в день 0, по меньшей мере через 18 часов после введения высокой дозы мелфалана. Стволовые клетки будут инфузировать внутривенно в течение приблизительно 20-60 минут после премедикации в соответствии со стандартной институционной практикой. Следует инфузировать по меньшей мере 2×10⁶ CD34+ предшественников/кг массы тела. Кроме того, по меньшей мере 1×10⁶ CD34+ предшественников/кг массы тела должны быть доступными в качестве резервного продукта стволовых клеток для инфузии в случае замедленного приживления или позднего отторжения трансплантата. Необходимо вводить Г-КСФ SQ, начиная со дня +5, в соответствии со стандартной институционной практикой. Другие меры поддерживающей терапии, такие как переливание, будут предпринимать в соответствии со стандартными институционными руководствами.

Инфузия клеток CART19 (день +12-14)

Будут вводить однократную дозу трансдуцированных T-клеток CART-19, состоящую из до 5×10⁷ клеток CART-19. Минимальная приемлемая доза для инфузии клеток, трансдуцированных с использованием вектора CD19 TCRζ4-1BB, составляет 1×10⁷. Клетки CART-19 будут вводить в виде однократной дозы посредством быстрой i.v. инфузии в день +12-14 после инфузии стволовых клеток. Если пациент не соответствует каким-либо из критериев включения, представленным в настоящем описании, в пределах 12-14-дневного окна, инфузию CART-19 можно задерживать после дня +12-14 до тех пор, пока критерии не будут удовлетворены.

Поддерживающая терапия леналидомидом

Индивидуумы, которым проводили и которые переносили поддерживающую терапию леналидомидом после из первой ASCT, будут возобновлять поддерживающую терапию леналидомидом приблизительно в день +100, исходя из того, что нет противопоказаний по решению лечащего врача. Начальная доза будет составлять 10 мг ежедневно, если предыдущий опыт не обусловливает использование альтернативной начальной дозы в случае конкретного пациента. Поддерживающую терапию будут продолжать до прогрессирования заболевания или непереносимости.

Введение исследуемого лекарственного средства

Инфузию будут проводить в изолированном помещении в Rhoads с использованием мер предосторожности в случае подвергнутых иммуносупрессии пациентов. Трансдуцированные T-клетки будут вводить посредством быстрой внутривенной инфузии при скорости потока приблизительно от 10 мл до 20 мл в минуту через безлатексный набор для инфузии типа Y калибра 18 с 3-ходовым клапаном. Длительность инфузии будет зависеть от общего объема, подлежащего инфузии, и рекомендуемой скорости инфузии. Каждый инфузионный пакет снабжен ярлыком, содержащим следующее: "ИСКЛЮЧИТЕЛЬНО ДЛЯ АУТОЛОГИЧНОГО ПРИМЕНЕНИЯ". Кроме того, ярлык будет содержать по меньшей мере два уникальных идентификатора, таких как инициалы индивидуума, дата рождения и номер в исследовании. Перед инфузией два индивидуума будут независимо проверять всю эту информацию в присутствие индивидуума и, таким образом, подтверждать то, что информация соответствует участнику исследования.

Упаковка

Инфузия будет включать однократную дозу 1-5×10⁷ CART19-трансдуцированных клеток с минимальной приемлемой дозой 1×10⁷ клеток CART-19 для инфузии. Каждый пакет будет содержать аликвоту (объем зависит от дозы) сред для криосохранения, содержащих следующие реагенты инфузируемой категории (% об./об.): 31,25% плазмалита A, 31,25% декстрозы (5%), 0,45% NaCl, до 7,5% DMSO, 1% декстрана 40, 5% сывороточного альбумина человека.

Аферез

Аферез большого объема (12-15 литров или 4-6 объемов крови) осуществляют в аферезном центре. В течение этой процедуры получают PBMC для CART-19. При однократном лейкаферезе предполагают собрать по меньшей мере 5×10⁹ лейкоцитов для производства T-клеток CART-19. Исходные лейкоциты крови по требованиям FDA к ретроспективным исследованиям и для исследования также получали и подвергали криосохранению. Ожидают, что клеточный продукт будет готов к выпуску приблизительно через 2-4 недели. Осуществляли количественный анализ субпопуляций лимфоцитов посредством проточной цитометрии, включая определение CD19 и CD20 B-клеток. Осуществляют исходную оценку на антитело человека против VSV-G и против мыши (HAMA). Если индивидууму ранее уже проводили адекватный аферез, продукт которого хранят в соответствии с современными Good Manufacturing Practices в Clinical Cell and Vaccine Production Facility, эти клетки можно использовать в качестве источника клеток для производства CART-19. Использование сохраненного аферезного продукта будет снижать стоимость, время и риск прохождения индивидуумом дополнительного афереза.

Циторедуктивная химиотерапия

Химиотерапия с истощением лимфоцитов будет представлять собой мелфалан в высокой дозе, как представлено в настоящем описании.

Инфузия CART-19

Инфузию будут начинать в день +12-14 после реинфузии стволовых клеток.

В день+12-14 до первой инфузии пациентам будут проводить CBC с дифференциалом и оценку количеств CD3, CD4 и CD8, т.к. химиотерапию, частично, будут проводить для индуцирования лимфопении.

Первую дозу будут вводить с использованием однократной дозы. Клетки размораживают у постели пациента. Размороженные клетки будут вводить с такой высокой скоростью инфузии, которая является переносимой, таким образом, что длительность инфузии будет составлять приблизительно 10-15 минут. Для облегчения смешивания клетки будут вводить одновременно с использованием Y-образного адаптера. Индивидуумам будут проводить инфузию и премедикацию, как представлено в настоящем описании. Будут оценивать основные показатели жизнедеятельности индивидуума и осуществлять пульсоксиметрию перед введением дозы, в конце инфузии и впоследствии каждые 15 минут в течение 1 часа и до тех пор, пока они не станут стабильными и удовлетворительными. Образец крови для определения исходного уровня CART-19 получают каждый раз перед первой инфузией и через период от 20 минут до 4 часов после каждой инфузии (и отсылают в TCSL).

Результаты

Трех пациентов с рефрактерной к лечению множественной миеломой на поздней стадии лечили с использованием CTL019 в этом текущем исследовании. Результаты для двух из этих пациентов свидетельствуют о том, что они оба имели существенные противоопухолевые эффекты в результате терапии CTL019 с учетом первичной оценки эффективности через три месяца. Третий пациент еще не достиг этой временной точки в три месяца. Результаты для двух пациентов более подробно описаны ниже.

В случае первой пациентки с миеломой оценку ответа завершили в день +100 и у нее наблюдали очень хороший ответ на терапию CART19. Осуществляли следующие тесты со следующими результатами:

-SPEP/иммунофиксация: отрицательная

-иммунофиксация в моче: слабая неизмеримая полоса легкой каппа-цепи при иммунофиксации (также присутствует в день 38, что не является новым)

В остальном, пациентка соответствует критериям строгой полной ремиссии, включая:

-соотношение свободных легких цепей в сыворотке: нормальное

-биопсия костного мозга: отрицательная

-иммунофенотипирование IgA: IgA ниже предела определения

В остальном, кроме слабого неизмеримого результата по легкой каппа-цепи при иммунофиксации мочи, пациентка соответствует всем критериям "строгой полной ремиссии". Общие результаты иммунофенотипирования плазматических клеток в 3 момента времени (день -2, день +38, день +103) представлены на фигуре 39 и свидетельствуют о том, что IgA пациента находится ниже предела определения. Общие результаты свидетельствуют о тяжелом миеломном бремени в день -2, не определяемом в дни +38 и +103, что позволяет классифицировать пациентку как "MRD-отрицательную" при анализе посредством проточной цитометрии. В день +103 общие результаты свидетельствуют о восстановлении нормальных, поликлональных, CD19+ плазматических клеток и B-клеток. У пациентки не наблюдали симптомы заболевания или терапии, и она функционировала как нормальный индивидуум.

Вторая подвергаемая лечению пациентка еще не достигла дня +100. Однако в этот момент времени она чувствует себя хорошо, но еще слишком рано для определения эффекта инфузии CTL019.

ЭКВИВАЛЕНТЫ

Описание каждого патента, патентной заявки и публикации, процитированной в настоящем описании, таким образом, включено в настоящее описание в качестве ссылки в полном объеме. Хотя настоящее изобретение описано со ссылкой на конкретные аспекты, очевидно, что специалисты в этой области могут разрабатывать другие аспекты и варианты настоящего изобретения без отклонения от сущности и объема изобретения. Прилагаемую формулу изобретения следует истолковывать как включающую все такие аспекты и эквивалентные варианты.

--->

СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> BROGDON, JENNIFER

CHOI, EUGENE

EBERSBACH, HILMAR ERHARD

GLASS, DAVID

HUET, HEATHER

JUNE, CARL H.

MANNICK, JOAN

MILONE, MICHAEL C.

MURPHY, LEON

PLESA, GABRIELA

RICHARDSON, CELESTE

RUELLA, MARCO

SINGH, RESHMA

WANG, YONGQIANG

WU, QILONG

<120> ЛЕЧЕНИЕ ЗЛОКАЧЕСТВЕННОГО НОВООБРАЗОВАНИЯ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ

ГУМАНИЗИРОВАННОГО ХИМЕРНОГО АНТИГЕННОГО РЕЦЕПТОРА ПРОТИВ BCMA

<130> N2067-704510

<140> 14/805,193

<141> 2015-07-21

<150> PCT/CN2014/090501

<151> 2014-11-06

<150> PCT/CN2014/082586

<151> 2014-07-21

<160> 1117

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 21

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro

20

<210> 2

<211> 45

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 2

Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala

1 5 10 15

Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly

20 25 30

Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp

35 40 45

<210> 3

<211> 230

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 3

Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe

1 5 10 15

Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr

20 25 30

Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val

35 40 45

Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val

50 55 60

Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser

65 70 75 80

Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu

85 90 95

Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser

100 105 110

Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro

115 120 125

Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln

130 135 140

Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala

145 150 155 160

Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr

165 170 175

Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu

180 185 190

Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser

195 200 205

Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser

210 215 220

Leu Ser Leu Gly Lys Met

225 230

<210> 4

<211> 282

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 4

Arg Trp Pro Glu Ser Pro Lys Ala Gln Ala Ser Ser Val Pro Thr Ala

1 5 10 15

Gln Pro Gln Ala Glu Gly Ser Leu Ala Lys Ala Thr Thr Ala Pro Ala

20 25 30

Thr Thr Arg Asn Thr Gly Arg Gly Gly Glu Glu Lys Lys Lys Glu Lys

35 40 45

Glu Lys Glu Glu Gln Glu Glu Arg Glu Thr Lys Thr Pro Glu Cys Pro

50 55 60

Ser His Thr Gln Pro Leu Gly Val Tyr Leu Leu Thr Pro Ala Val Gln

65 70 75 80

Asp Leu Trp Leu Arg Asp Lys Ala Thr Phe Thr Cys Phe Val Val Gly

85 90 95

Ser Asp Leu Lys Asp Ala His Leu Thr Trp Glu Val Ala Gly Lys Val

100 105 110

Pro Thr Gly Gly Val Glu Glu Gly Leu Leu Glu Arg His Ser Asn Gly

115 120 125

Ser Gln Ser Gln His Ser Arg Leu Thr Leu Pro Arg Ser Leu Trp Asn

130 135 140

Ala Gly Thr Ser Val Thr Cys Thr Leu Asn His Pro Ser Leu Pro Pro

145 150 155 160

Gln Arg Leu Met Ala Leu Arg Glu Pro Ala Ala Gln Ala Pro Val Lys

165 170 175

Leu Ser Leu Asn Leu Leu Ala Ser Ser Asp Pro Pro Glu Ala Ala Ser

180 185 190

Trp Leu Leu Cys Glu Val Ser Gly Phe Ser Pro Pro Asn Ile Leu Leu

195 200 205

Met Trp Leu Glu Asp Gln Arg Glu Val Asn Thr Ser Gly Phe Ala Pro

210 215 220

Ala Arg Pro Pro Pro Gln Pro Gly Ser Thr Thr Phe Trp Ala Trp Ser

225 230 235 240

Val Leu Arg Val Pro Ala Pro Pro Ser Pro Gln Pro Ala Thr Tyr Thr

245 250 255

Cys Val Val Ser His Glu Asp Ser Arg Thr Leu Leu Asn Ala Ser Arg

260 265 270

Ser Leu Glu Val Ser Tyr Val Thr Asp His

275 280

<210> 5

<211> 10

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 5

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

1 5 10

<210> 6

<211> 24

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 6

Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu

1 5 10 15

Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys

20

<210> 7

<211> 42

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 7

Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met

1 5 10 15

Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe

20 25 30

Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu

35 40

<210> 8

<211> 48

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 8

Gln Arg Arg Lys Tyr Arg Ser Asn Lys Gly Glu Ser Pro Val Glu Pro

1 5 10 15

Ala Glu Pro Cys Arg Tyr Ser Cys Pro Arg Glu Glu Glu Gly Ser Thr

20 25 30

Ile Pro Ile Gln Glu Asp Tyr Arg Lys Pro Glu Pro Ala Cys Ser Pro

35 40 45

<210> 9

<211> 112

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 9

Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly

1 5 10 15

Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr

20 25 30

Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys

35 40 45

Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys

50 55 60

Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg

65 70 75 80

Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala

85 90 95

Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

100 105 110

<210> 10

<211> 112

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 10

Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly

1 5 10 15

Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr

20 25 30

Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys

35 40 45

Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys

50 55 60

Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg

65 70 75 80

Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala

85 90 95

Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

100 105 110

<210> 11

<211> 1184

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полинуклеотид

<400> 11

cgtgaggctc cggtgcccgt cagtgggcag agcgcacatc gcccacagtc cccgagaagt 60

tggggggagg ggtcggcaat tgaaccggtg cctagagaag gtggcgcggg gtaaactggg 120

aaagtgatgt cgtgtactgg ctccgccttt ttcccgaggg tgggggagaa ccgtatataa 180

gtgcagtagt cgccgtgaac gttctttttc gcaacgggtt tgccgccaga acacaggtaa 240

gtgccgtgtg tggttcccgc gggcctggcc tctttacggg ttatggccct tgcgtgcctt 300

gaattacttc cacctggctg cagtacgtga ttcttgatcc cgagcttcgg gttggaagtg 360

ggtgggagag ttcgaggcct tgcgcttaag gagccccttc gcctcgtgct tgagttgagg 420

cctggcctgg gcgctggggc cgccgcgtgc gaatctggtg gcaccttcgc gcctgtctcg 480

ctgctttcga taagtctcta gccatttaaa atttttgatg acctgctgcg acgctttttt 540

tctggcaaga tagtcttgta aatgcgggcc aagatctgca cactggtatt tcggtttttg 600

gggccgcggg cggcgacggg gcccgtgcgt cccagcgcac atgttcggcg aggcggggcc 660

tgcgagcgcg gccaccgaga atcggacggg ggtagtctca agctggccgg cctgctctgg 720

tgcctggcct cgcgccgccg tgtatcgccc cgccctgggc ggcaaggctg gcccggtcgg 780

caccagttgc gtgagcggaa agatggccgc ttcccggccc tgctgcaggg agctcaaaat 840

ggaggacgcg gcgctcggga gagcgggcgg gtgagtcacc cacacaaagg aaaagggcct 900

ttccgtcctc agccgtcgct tcatgtgact ccacggagta ccgggcgccg tccaggcacc 960

tcgattagtt ctcgagcttt tggagtacgt cgtctttagg ttggggggag gggttttatg 1020

cgatggagtt tccccacact gagtgggtgg agactgaagt taggccagct tggcacttga 1080

tgtaattctc cttggaattt gccctttttg agtttggatc ttggttcatt ctcaagcctc 1140

agacagtggt tcaaagtttt tttcttccat ttcaggtgtc gtga 1184

<210> 12

<211> 63

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический олигонуклеотид

<400> 12

atggccctgc ctgtgacagc cctgctgctg cctctggctc tgctgctgca tgccgctaga 60

ccc 63

<210> 13

<211> 135

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полинуклеотид

<400> 13

accacgacgc cagcgccgcg accaccaaca ccggcgccca ccatcgcgtc gcagcccctg 60

tccctgcgcc cagaggcgtg ccggccagcg gcggggggcg cagtgcacac gagggggctg 120

gacttcgcct gtgat 135

<210> 14

<211> 690

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полинуклеотид

<400> 14

gagagcaagt acggccctcc ctgcccccct tgccctgccc ccgagttcct gggcggaccc 60

agcgtgttcc tgttcccccc caagcccaag gacaccctga tgatcagccg gacccccgag 120

gtgacctgtg tggtggtgga cgtgtcccag gaggaccccg aggtccagtt caactggtac 180

gtggacggcg tggaggtgca caacgccaag accaagcccc gggaggagca gttcaatagc 240

acctaccggg tggtgtccgt gctgaccgtg ctgcaccagg actggctgaa cggcaaggaa 300

tacaagtgta aggtgtccaa caagggcctg cccagcagca tcgagaaaac catcagcaag 360

gccaagggcc agcctcggga gccccaggtg tacaccctgc cccctagcca agaggagatg 420

accaagaacc aggtgtccct gacctgcctg gtgaagggct tctaccccag cgacatcgcc 480

gtggagtggg agagcaacgg ccagcccgag aacaactaca agaccacccc ccctgtgctg 540

gacagcgacg gcagcttctt cctgtacagc cggctgaccg tggacaagag ccggtggcag 600

gagggcaacg tctttagctg ctccgtgatg cacgaggccc tgcacaacca ctacacccag 660

aagagcctga gcctgtccct gggcaagatg 690

<210> 15

<211> 847

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полинуклеотид

<400> 15

aggtggcccg aaagtcccaa ggcccaggca tctagtgttc ctactgcaca gccccaggca 60

gaaggcagcc tagccaaagc tactactgca cctgccacta cgcgcaatac tggccgtggc 120

ggggaggaga agaaaaagga gaaagagaaa gaagaacagg aagagaggga gaccaagacc 180

cctgaatgtc catcccatac ccagccgctg ggcgtctatc tcttgactcc cgcagtacag 240

gacttgtggc ttagagataa ggccaccttt acatgtttcg tcgtgggctc tgacctgaag 300

gatgcccatt tgacttggga ggttgccgga aaggtaccca cagggggggt tgaggaaggg 360

ttgctggagc gccattccaa tggctctcag agccagcact caagactcac ccttccgaga 420

tccctgtgga acgccgggac ctctgtcaca tgtactctaa atcatcctag cctgccccca 480

cagcgtctga tggcccttag agagccagcc gcccaggcac cagttaagct tagcctgaat 540

ctgctcgcca gtagtgatcc cccagaggcc gccagctggc tcttatgcga agtgtccggc 600

tttagcccgc ccaacatctt gctcatgtgg ctggaggacc agcgagaagt gaacaccagc 660

ggcttcgctc cagcccggcc cccaccccag ccgggttcta ccacattctg ggcctggagt 720

gtcttaaggg tcccagcacc acctagcccc cagccagcca catacacctg tgttgtgtcc 780

catgaagata gcaggaccct gctaaatgct tctaggagtc tggaggtttc ctacgtgact 840

gaccatt 847

<210> 16

<211> 30

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический олигонуклеотид

<400> 16

ggtggcggag gttctggagg tggaggttcc 30

<210> 17

<211> 72

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический олигонуклеотид

<400> 17

atctacatct gggcgccctt ggccgggact tgtggggtcc ttctcctgtc actggttatc 60

accctttact gc 72

<210> 18

<211> 126

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полинуклеотид

<400> 18

aaacggggca gaaagaaact cctgtatata ttcaaacaac catttatgag accagtacaa 60

actactcaag aggaagatgg ctgtagctgc cgatttccag aagaagaaga aggaggatgt 120

gaactg 126

<210> 19

<211> 123

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полинуклеотид

<400> 19

aggagtaaga ggagcaggct cctgcacagt gactacatga acatgactcc ccgccgcccc 60

gggcccaccc gcaagcatta ccagccctat gccccaccac gcgacttcgc agcctatcgc 120

tcc 123

<210> 20

<211> 336

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полинуклеотид

<400> 20

agagtgaagt tcagcaggag cgcagacgcc cccgcgtaca agcagggcca gaaccagctc 60

tataacgagc tcaatctagg acgaagagag gagtacgatg ttttggacaa gagacgtggc 120

cgggaccctg agatgggggg aaagccgaga aggaagaacc ctcaggaagg cctgtacaat 180

gaactgcaga aagataagat ggcggaggcc tacagtgaga ttgggatgaa aggcgagcgc 240

cggaggggca aggggcacga tggcctttac cagggtctca gtacagccac caaggacacc 300

tacgacgccc ttcacatgca ggccctgccc cctcgc 336

<210> 21

<211> 336

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<400> 21

agagtgaagt tcagcaggag cgcagacgcc cccgcgtacc agcagggcca gaaccagctc 60

tataacgagc tcaatctagg acgaagagag gagtacgatg ttttggacaa gagacgtggc 120

cgggaccctg agatgggggg aaagccgaga aggaagaacc ctcaggaagg cctgtacaat 180

gaactgcaga aagataagat ggcggaggcc tacagtgaga ttgggatgaa aggcgagcgc 240

cggaggggca aggggcacga tggcctttac cagggtctca gtacagccac caaggacacc 300

tacgacgccc ttcacatgca ggccctgccc cctcgc 336

<210> 22

<211> 373

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 22

Pro Gly Trp Phe Leu Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro Thr

1 5 10 15

Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr Phe

20 25 30

Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val Leu Asn Trp Tyr

35 40 45

Arg Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala Ala Phe Pro Glu

50 55 60

Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg Val Thr Gln Leu

65 70 75 80

Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn

85 90 95

Asp Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu Ala Pro Lys Ala

100 105 110

Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg

115 120 125

Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro Ser Pro Arg Pro Ala Gly

130 135 140

Gln Phe Gln Thr Leu Val Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr

145 150 155 160

Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala

165 170 175

Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe

180 185 190

Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val

195 200 205

Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys

210 215 220

Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr

225 230 235 240

Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu

245 250 255

Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro

260 265 270

Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly

275 280 285

Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro

290 295 300

Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr

305 310 315 320

Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly

325 330 335

Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln

340 345 350

Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln

355 360 365

Ala Leu Pro Pro Arg

370

<210> 23

<211> 1182

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полинуклеотид

<400> 23

atggccctcc ctgtcactgc cctgcttctc cccctcgcac tcctgctcca cgccgctaga 60

ccacccggat ggtttctgga ctctccggat cgcccgtgga atcccccaac cttctcaccg 120

gcactcttgg ttgtgactga gggcgataat gcgaccttca cgtgctcgtt ctccaacacc 180

tccgaatcat tcgtgctgaa ctggtaccgc atgagcccgt caaaccagac cgacaagctc 240

gccgcgtttc cggaagatcg gtcgcaaccg ggacaggatt gtcggttccg cgtgactcaa 300

ctgccgaatg gcagagactt ccacatgagc gtggtccgcg ctaggcgaaa cgactccggg 360

acctacctgt gcggagccat ctcgctggcg cctaaggccc aaatcaaaga gagcttgagg 420

gccgaactga gagtgaccga gcgcagagct gaggtgccaa ctgcacatcc atccccatcg 480

cctcggcctg cggggcagtt tcagaccctg gtcacgacca ctccggcgcc gcgcccaccg 540

actccggccc caactatcgc gagccagccc ctgtcgctga ggccggaagc atgccgccct 600

gccgccggag gtgctgtgca tacccgggga ttggacttcg catgcgacat ctacatttgg 660

gctcctctcg ccggaacttg tggcgtgctc cttctgtccc tggtcatcac cctgtactgc 720

aagcggggtc ggaaaaagct tctgtacatt ttcaagcagc ccttcatgag gcccgtgcaa 780

accacccagg aggaggacgg ttgctcctgc cggttccccg aagaggaaga aggaggttgc 840

gagctgcgcg tgaagttctc ccggagcgcc gacgcccccg cctataagca gggccagaac 900

cagctgtaca acgaactgaa cctgggacgg cgggaagagt acgatgtgct ggacaagcgg 960

cgcggccggg accccgaaat gggcgggaag cctagaagaa agaaccctca ggaaggcctg 1020

tataacgagc tgcagaagga caagatggcc gaggcctact ccgaaattgg gatgaaggga 1080

gagcggcgga ggggaaaggg gcacgacggc ctgtaccaag gactgtccac cgccaccaag 1140

gacacatacg atgccctgca catgcaggcc cttccccctc gc 1182

<210> 24

<211> 394

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 24

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Pro Gly Trp Phe Leu Asp Ser Pro Asp Arg Pro

20 25 30

Trp Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu Gly

35 40 45

Asp Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser Phe

50 55 60

Val Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys Leu

65 70 75 80

Ala Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Cys Arg Phe

85 90 95

Arg Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val Val

100 105 110

Arg Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser

115 120 125

Leu Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg

130 135 140

Val Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro Ser

145 150 155 160

Pro Arg Pro Ala Gly Gln Phe Gln Thr Leu Val Thr Thr Thr Pro Ala

165 170 175

Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser

180 185 190

Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr

195 200 205

Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala

210 215 220

Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys

225 230 235 240

Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met

245 250 255

Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe

260 265 270

Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg

275 280 285

Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn

290 295 300

Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg

305 310 315 320

Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro

325 330 335

Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala

340 345 350

Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His

355 360 365

Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp

370 375 380

Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

385 390

<210> 25

<211> 5

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 25

Gly Gly Gly Gly Ser

1 5

<210> 26

<211> 30

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(30)

<223> Эта последовательность может включать повторяющиеся единицы 1-6

'Gly Gly Gly Gly Ser', где некоторые положения могут отсутствовать

<220>

<223> См. замены и предпочтительные варианты осуществления в подробном описании

<400> 26

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

1 5 10 15

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

20 25 30

<210> 27

<211> 20

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 27

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

1 5 10 15

Gly Gly Gly Ser

20

<210> 28

<211> 15

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 28

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

1 5 10 15

<210> 29

<211> 4

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 29

Gly Gly Gly Ser

1

<210> 30

<211> 5000

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (1)..(5000)

<223> Эта последовательность может включать 50-5000 нуклеотидов, где

некоторые положения могут отсутствовать

<220>

<223> См. замены и предпочтительные варианты осуществления в подробном описании

<400> 30

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 60

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 120

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 180

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 240

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 300

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 360

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 420

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 480

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 540

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 600

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 660

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 720

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 780

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 840

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 900

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 960

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1020

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1080

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1140

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1200

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1260

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1320

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1380

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1440

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1500

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1560

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1620

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1680

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1740

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1800

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1860

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1920

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1980

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 2040

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 2100

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 2160

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 2220

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 2280

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 2340

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 2400

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 2460

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 2520

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 2580

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 2640

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 2700

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 2760

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 2820

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 2880

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 2940

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 3000

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 3060

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 3120

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 3180

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 3240

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 3300

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 3360

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 3420

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 3480

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 3540

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 3600

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 3660

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 3720

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 3780

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 3840

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 3900

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 3960

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 4020

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 4080

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 4140

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 4200

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 4260

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 4320

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 4380

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 4440

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 4500

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 4560

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 4620

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 4680

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 4740

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 4800

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 4860

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 4920

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 4980

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 5000

<210> 31

<211> 100

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полинуклеотид

<400> 31

tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 60

tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 100

<210> 32

<211> 5000

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (1)..(5000)

<223> Эта последовательность может включать 50-5000 нуклеотидов, где

некоторые положения могут отсутствовать

<400> 32

tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 60

tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 120

tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 180

tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 240

tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 300

tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 360

tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 420

tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 480

tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 540

tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 600

tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 660

tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 720

tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 780

tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 840

tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 900

tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 960

tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 1020

tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 1080

tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 1140

tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 1200

tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 1260

tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 1320

tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 1380

tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 1440

tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 1500

tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 1560

tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 1620

tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 1680

tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 1740

tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 1800

tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 1860

tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 1920

tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 1980

tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 2040

tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 2100

tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 2160

tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 2220

tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 2280

tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 2340

tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 2400

tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 2460

tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 2520

tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 2580

tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 2640

tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 2700

tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 2760

tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 2820

tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 2880

tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 2940

tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 3000

tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 3060

tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 3120

tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 3180

tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 3240

tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 3300

tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 3360

tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 3420

tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 3480

tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 3540

tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 3600

tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 3660

tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 3720

tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 3780

tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 3840

tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 3900

tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 3960

tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 4020

tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 4080

tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 4140

tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 4200

tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 4260

tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 4320

tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 4380

tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 4440

tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 4500

tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 4560

tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 4620

tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 4680

tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 4740

tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 4800

tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 4860

tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 4920

tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 4980

tttttttttt tttttttttt 5000

<210> 33

<211> 5000

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (1)..(5000)

<223> Эта последовательность может включать 100-5000 нуклеотидов, где

некоторые положения могут отсутствовать

<400> 33

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 60

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 120

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 180

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 240

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 300

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 360

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 420

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 480

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 540

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 600

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 660

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 720

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 780

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 840

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 900

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 960

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1020

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1080

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1140

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1200

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1260

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1320

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1380

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1440

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1500

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1560

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1620

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1680

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1740

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1800

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1860

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1920

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1980

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 2040

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 2100

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 2160

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 2220

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 2280

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 2340

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 2400

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 2460

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 2520

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 2580

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 2640

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 2700

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 2760

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 2820

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 2880

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 2940

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 3000

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 3060

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 3120

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 3180

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 3240

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 3300

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 3360

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 3420

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 3480

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 3540

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 3600

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 3660

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 3720

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 3780

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 3840

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 3900

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 3960

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 4020

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 4080

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 4140

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 4200

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 4260

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 4320

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 4380

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 4440

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 4500

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 4560

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 4620

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 4680

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 4740

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 4800

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 4860

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 4920

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 4980

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 5000

<210> 34

<211> 400

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (1)..(400)

<223> Эта последовательность может включать 100-400 нуклеотидов, где

некоторые положения могут отсутствовать

<220>

<223> См. замены и предпочтительные варианты осуществления в подробном описании

<400> 34

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 60

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 120

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 180

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 240

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 300

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 360

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 400

<210> 35

<211> 2000

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (1)..(2000)

<223> Эта последовательность может включать 50-2000 нуклеотидов, где

некоторые положения могут отсутствовать

<400> 35

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 60

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 120

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 180

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 240

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 300

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 360

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 420

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 480

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 540

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 600

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 660

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 720

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 780

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 840

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 900

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 960

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1020

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1080

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1140

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1200

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1260

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1320

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1380

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1440

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1500

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1560

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1620

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1680

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1740

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1800

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1860

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1920

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1980

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 2000

<210> 36

<211> 230

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 36

Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe

1 5 10 15

Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr

20 25 30

Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val

35 40 45

Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val

50 55 60

Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser

65 70 75 80

Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu

85 90 95

Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser

100 105 110

Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro

115 120 125

Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln

130 135 140

Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala

145 150 155 160

Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr

165 170 175

Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu

180 185 190

Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser

195 200 205

Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser

210 215 220

Leu Ser Leu Gly Lys Met

225 230

<210> 37

<211> 690

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полинуклеотид

<400> 37

gagagcaagt acggccctcc ctgcccccct tgccctgccc ccgagttcct gggcggaccc 60

agcgtgttcc tgttcccccc caagcccaag gacaccctga tgatcagccg gacccccgag 120

gtgacctgtg tggtggtgga cgtgtcccag gaggaccccg aggtccagtt caactggtac 180

gtggacggcg tggaggtgca caacgccaag accaagcccc gggaggagca gttcaatagc 240

acctaccggg tggtgtccgt gctgaccgtg ctgcaccagg actggctgaa cggcaaggaa 300

tacaagtgta aggtgtccaa caagggcctg cccagcagca tcgagaaaac catcagcaag 360

gccaagggcc agcctcggga gccccaggtg tacaccctgc cccctagcca agaggagatg 420

accaagaacc aggtgtccct gacctgcctg gtgaagggct tctaccccag cgacatcgcc 480

gtggagtggg agagcaacgg ccagcccgag aacaactaca agaccacccc ccctgtgctg 540

gacagcgacg gcagcttctt cctgtacagc cggctgaccg tggacaagag ccggtggcag 600

gagggcaacg tctttagctg ctccgtgatg cacgaggccc tgcacaacca ctacacccag 660

aagagcctga gcctgtccct gggcaagatg 690

<210> 38

<211> 40

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(40)

<223> Эта последовательность может включать повторяющиеся единицы 1-10

'Gly Gly Gly Ser', где некоторые положения могут отсутствовать

<220>

<223> См. замены и предпочтительные варианты осуществления в подробном описании

<400> 38

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser

1 5 10 15

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser

20 25 30

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser

35 40

<210> 39

<211> 246

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 39

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr

20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Gly Trp Val

35 40 45

Ser Gly Ile Ser Arg Ser Gly Glu Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Pro Ala His Tyr Tyr Gly Gly Met Asp Val Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

115 120 125

Gly Arg Ala Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser

130 135 140

Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys

145 150 155 160

Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Ser Phe Leu Ala Trp Tyr Gln Gln

165 170 175

Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Arg Arg

180 185 190

Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp

195 200 205

Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro Glu Asp Ser Ala Val Tyr

210 215 220

Tyr Cys Gln Gln Tyr His Ser Ser Pro Ser Trp Thr Phe Gly Gln Gly

225 230 235 240

Thr Lys Leu Glu Ile Lys

245

<210> 40

<211> 244

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 40

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr

20 25 30

Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Gly Ile Ser Trp Asn Ser Gly Ser Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ser Val His Ser Phe Leu Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr

100 105 110

Val Ser Ser Ala Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Arg Ala Ser Gly

115 120 125

Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro

130 135 140

Val Thr Pro Gly Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser

145 150 155 160

Leu Leu His Ser Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys

165 170 175

Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala

180 185 190

Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe

195 200 205

Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr

210 215 220

Cys Met Gln Ala Leu Gln Thr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys

225 230 235 240

Val Glu Ile Lys

<210> 41

<211> 243

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 41

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Ala Leu Ser Asn His

20 25 30

Gly Met Ser Trp Val Arg Arg Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Gly Ile Val Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ala Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Arg Asn Thr Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ser

85 90 95

Ala His Gly Gly Glu Ser Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr

100 105 110

Val Ser Ser Ala Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Arg Ala Ser Gly

115 120 125

Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser

130 135 140

Val Thr Pro Gly Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser

145 150 155 160

Leu Leu Arg Asn Asp Gly Lys Thr Pro Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Lys

165 170 175

Ala Gly Gln Pro Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Glu Val Ser Asn Arg Phe

180 185 190

Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe

195 200 205

Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Ala Tyr Tyr

210 215 220

Cys Met Gln Asn Ile Gln Phe Pro Ser Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu

225 230 235 240

Glu Ile Lys

<210> 42

<211> 249

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 42

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Arg Lys Thr Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Asp Asn Phe

20 25 30

Gly Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Asn Pro Lys Asn Asn Asn Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Asn Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Val Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Pro Tyr Tyr Tyr Gln Ser Tyr Met Asp Val Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

115 120 125

Gly Arg Ala Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Met Thr Gln Thr

130 135 140

Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys

145 150 155 160

Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asn

165 170 175

Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu

180 185 190

Gly Ser Lys Arg Ala Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly

195 200 205

Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu His Ile Thr Arg Val Gly Ala Glu Asp

210 215 220

Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala Leu Gln Thr Pro Tyr Thr Phe

225 230 235 240

Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

245

<210> 43

<211> 246

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 43

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Asp

20 25 30

Ala Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Val Ile Ser Gly Ser Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Leu Asp Ser Ser Gly Tyr Tyr Tyr Ala Arg Gly Pro Arg Tyr

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Gly Gly Gly

115 120 125

Gly Ser Gly Gly Arg Ala Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Leu

130 135 140

Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr

145 150 155 160

Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr

165 170 175

Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser

180 185 190

Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly

195 200 205

Thr His Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Gln Ser Glu Asp Ser Ala

210 215 220

Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Lys Arg Ala Ser Phe Gly Gln Gly

225 230 235 240

Thr Lys Val Glu Ile Lys

245

<210> 44

<211> 247

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 44

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Asn Tyr

20 25 30

Gly Ile Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Ser Ala Tyr Asn Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asn Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Pro Tyr Tyr Tyr Tyr Met Asp Val Trp Gly Lys Gly Thr

100 105 110

Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Arg

115 120 125

Ala Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu

130 135 140

Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser

145 150 155 160

Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser Asn Gly Tyr Asn Tyr Val Asp Trp Tyr

165 170 175

Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser

180 185 190

Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly

195 200 205

Thr Asp Phe Lys Leu Gln Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly

210 215 220

Ile Tyr Tyr Cys Met Gln Gly Arg Gln Phe Pro Tyr Ser Phe Gly Gln

225 230 235 240

Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

245

<210> 45

<211> 238

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 45

Glu Val Gln Leu Leu Glu Thr Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Ala Leu Ser Asn His

20 25 30

Gly Met Ser Trp Val Arg Arg Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Gly Ile Val Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ala Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Arg Asn Thr Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ser

85 90 95

Ala His Gly Gly Glu Ser Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr

100 105 110

Val Ser Ser Ala Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Arg Ala Ser Gly

115 120 125

Gly Gly Gly Ser Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser

130 135 140

Val Ser Pro Gly Glu Ser Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser

145 150 155 160

Val Ser Ser Asn Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro

165 170 175

Arg Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Ser Gly Ile Pro Asp

180 185 190

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser

195 200 205

Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly

210 215 220

Ser Ser Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

225 230 235

<210> 46

<211> 239

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 46

Glu Val Gln Leu Val Glu Thr Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Ala Leu Ser Asn His

20 25 30

Gly Met Ser Trp Val Arg Arg Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Gly Ile Val Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ala Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Arg Asn Thr Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ser

85 90 95

Ala His Gly Gly Glu Ser Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr

100 105 110

Val Ser Ser Ala Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Arg Ala Ser Gly

115 120 125

Gly Gly Gly Ser Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser

130 135 140

Val Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser

145 150 155 160

Val Ser Ser Lys Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro

165 170 175

Arg Leu Leu Met Tyr Gly Ala Ser Ile Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp

180 185 190

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser

195 200 205

Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly

210 215 220

Ser Ser Ser Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

225 230 235

<210> 47

<211> 241

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 47

Glu Val Gln Leu Val Glu Thr Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Ala Leu Ser Asn His

20 25 30

Gly Met Ser Trp Val Arg Arg Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Gly Ile Val Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ala Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Arg Asn Thr Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ser

85 90 95

Ala His Gly Gly Glu Ser Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr

100 105 110

Val Ser Ser Ala Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Arg Ala Ser Gly

115 120 125

Gly Gly Gly Ser Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser

130 135 140

Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser

145 150 155 160

Val Gly Ser Thr Asn Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala

165 170 175

Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro

180 185 190

Asp Arg Phe Ser Gly Gly Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile

195 200 205

Ser Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr

210 215 220

Gly Ser Ser Pro Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile

225 230 235 240

Lys

<210> 48

<211> 239

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 48

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Ser Gly Asp Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Arg Ala

115 120 125

Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser

130 135 140

Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser

145 150 155 160

Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys

165 170 175

Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val

180 185 190

Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr

195 200 205

Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln

210 215 220

Ser Tyr Thr Leu Ala Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys

225 230 235

<210> 49

<211> 239

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 49

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Ala Leu Ser Asn His

20 25 30

Gly Met Ser Trp Val Arg Arg Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Gly Ile Val Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ala Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Arg Asn Thr Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ser

85 90 95

Ala His Gly Gly Glu Ser Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr

100 105 110

Val Ser Ser Ala Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Arg Ala Ser Gly

115 120 125

Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser

130 135 140

Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser

145 150 155 160

Ile Ser Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro

165 170 175

Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser

180 185 190

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser

195 200 205

Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr

210 215 220

Ser Thr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

225 230 235

<210> 50

<211> 246

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 50

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Asn Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Thr Met Val Arg Glu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Arg Ala

115 120 125

Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Leu Ser

130 135 140

Leu Pro Val Thr Leu Gly Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser

145 150 155 160

Glu Ser Leu Val His Asn Ser Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Phe His

165 170 175

Gln Arg Pro Gly Gln Ser Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Glu Val Ser Asn

180 185 190

Arg Asp Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr

195 200 205

Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val

210 215 220

Tyr Tyr Cys Met Gln Gly Thr His Trp Pro Gly Thr Phe Gly Gln Gly

225 230 235 240

Thr Lys Leu Glu Ile Lys

245

<210> 51

<211> 239

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 51

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Ala Leu Ser Asn His

20 25 30

Gly Met Ser Trp Val Arg Arg Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Gly Ile Val Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ala Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Arg Asn Thr Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ser

85 90 95

Ala His Gly Gly Glu Ser Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr

100 105 110

Val Ser Ser Ala Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Arg Ala Ser Gly

115 120 125

Gly Gly Gly Ser Asp Ile Arg Leu Thr Gln Ser Pro Ser Pro Leu Ser

130 135 140

Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Glu Asp

145 150 155 160

Ile Asn Lys Phe Leu Asn Trp Tyr His Gln Thr Pro Gly Lys Ala Pro

165 170 175

Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Thr Leu Gln Thr Gly Val Pro Ser

180 185 190

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn

195 200 205

Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ile Gly Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Glu

210 215 220

Ser Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

225 230 235

<210> 52

<211> 240

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 52

Glu Val Gln Leu Val Glu Thr Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Ala Leu Ser Asn His

20 25 30

Gly Met Ser Trp Val Arg Arg Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Gly Ile Val Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ala Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Arg Asn Thr Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ser

85 90 95

Ala His Gly Gly Glu Ser Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr

100 105 110

Val Ser Ser Ala Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Arg Ala Ser Gly

115 120 125

Gly Gly Gly Ser Glu Thr Thr Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser

130 135 140

Val Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser

145 150 155 160

Val Gly Ser Asn Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Gly Pro

165 170 175

Arg Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala

180 185 190

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser

195 200 205

Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn

210 215 220

Asp Trp Leu Pro Val Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

225 230 235 240

<210> 53

<211> 241

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 53

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Ala Leu Ser Asn His

20 25 30

Gly Met Ser Trp Val Arg Arg Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Gly Ile Val Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ala Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Arg Asn Thr Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ser

85 90 95

Ala His Gly Gly Glu Ser Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr

100 105 110

Val Ser Ser Ala Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Arg Ala Ser Gly

115 120 125

Gly Gly Gly Ser Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser

130 135 140

Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser

145 150 155 160

Ile Gly Ser Ser Ser Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala

165 170 175

Pro Arg Leu Leu Met Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Ser Gly Ile Pro

180 185 190

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile

195 200 205

Ser Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr

210 215 220

Ala Gly Ser Pro Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile

225 230 235 240

Lys

<210> 54

<211> 738

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полинуклеотид

<400> 54

caagtgcaac tcgtggaatc tggtggagga ctcgtgcaac ccggaagatc gcttagactg 60

tcgtgtgccg ccagcgggtt cactttctcg aactacgcga tgtcctgggt ccgccaggca 120

cccggaaagg gactcggttg ggtgtccggc atttcccggt ccggcgaaaa tacctactac 180

gccgactccg tgaagggccg cttcaccatc tcaagggaca acagcaaaaa caccctgtac 240

ttgcaaatga actccctgcg ggatgaagat acagccgtgt actattgcgc ccggtcgcct 300

gcccattact acggcggaat ggacgtctgg ggacagggaa ccactgtgac tgtcagcagc 360

gcgtcgggtg gcggcggctc agggggtcgg gcctccgggg ggggagggtc cgacatcgtg 420

ctgacccagt ccccgggaac cctgagcctg agcccgggag agcgcgcgac cctgtcatgc 480

cgggcatccc agagcattag ctcctccttt ctcgcctggt atcagcagaa gcccggacag 540

gccccgaggc tgctgatcta cggcgctagc agaagggcta ccggaatccc agaccggttc 600

tccggctccg gttccgggac cgatttcacc cttactatct cgcgcctgga acctgaggac 660

tccgccgtct actactgcca gcagtaccac tcatccccgt cgtggacgtt cggacagggc 720

accaagctgg agattaag 738

<210> 55

<211> 732

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полинуклеотид

<400> 55

caagtgcaac tcgtcgaatc cggtggaggt ctggtccaac ctggtagaag cctgagactg 60

tcgtgtgcgg ccagcggatt cacctttgat gactatgcta tgcactgggt gcggcaggcc 120

ccaggaaagg gcctggaatg ggtgtcggga attagctgga actccgggtc cattggctac 180

gccgactccg tgaagggccg cttcaccatc tcccgcgaca acgcaaagaa ctccctgtac 240

ttgcaaatga actcgctcag ggctgaggat accgcgctgt actactgctc cgtgcattcc 300

ttcctggcct actggggaca gggaactctg gtcaccgtgt cgagcgcctc cggcggcggg 360

ggctcgggtg gacgggcctc gggcggaggg gggtccgaca tcgtgatgac ccagaccccg 420

ctgagcttgc ccgtgactcc cggagagcct gcatccatct cctgccggtc atcccagtcc 480

cttctccact ccaacggata caactacctc gactggtacc tccagaagcc gggacagagc 540

cctcagcttc tgatctacct ggggtcaaat agagcctcag gagtgccgga tcggttcagc 600

ggatctggtt cgggaactga tttcactctg aagatttccc gcgtggaagc cgaggacgtg 660

ggcgtctact actgtatgca ggcgctgcag accccctata ccttcggcca agggacgaaa 720

gtggagatca ag 732

<210> 56

<211> 729

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полинуклеотид

<400> 56

gaagtgcaat tgttggaatc tggaggagga cttgtgcagc ctggaggatc actgagactt 60

tcgtgtgcgg tgtcaggctt cgccctgagc aaccacggca tgagctgggt gcggagagcc 120

ccggggaagg gtctggaatg ggtgtccggg atcgtctact ccggttcaac ttactacgcc 180

gcaagcgtga agggtcgctt caccatttcc cgcgataact cccggaacac cctgtacctc 240

caaatgaact ccctgcggcc cgaggacacc gccatctact actgttccgc gcatggagga 300

gagtccgatg tctggggaca gggcactacc gtgaccgtgt cgagcgcctc ggggggagga 360

ggctccggcg gtcgcgcctc cggggggggt ggcagcgaca ttgtgatgac gcagactcca 420

ctctcgctgt ccgtgacccc gggacagccc gcgtccatct cgtgcaagag ctcccagagc 480

ctgctgagga acgacggaaa gactcctctg tattggtacc tccagaaggc tggacagccc 540

ccgcaactgc tcatctacga agtgtcaaat cgcttctccg gggtgccgga tcggttttcc 600

ggctcgggat cgggcaccga cttcaccctg aaaatctcca gggtcgaggc cgaggacgtg 660

ggagcctact actgcatgca aaacatccag ttcccttcct tcggcggcgg cacaaagctg 720

gagattaag 729

<210> 57

<211> 747

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полинуклеотид

<400> 57

caagtccaac tcgtccagtc cggcgcagaa gtcagaaaaa ccggtgctag cgtgaaagtg 60

tcctgcaagg cctccggcta cattttcgat aacttcggaa tcaactgggt cagacaggcc 120

ccgggccagg ggctggaatg gatgggatgg atcaacccca agaacaacaa caccaactac 180

gcacagaagt tccagggccg cgtgactatc accgccgatg aatcgaccaa taccgcctac 240

atggaggtgt cctccctgcg gtcggaggac actgccgtgt attactgcgc gaggggccca 300

tactactacc aaagctacat ggacgtctgg ggacagggaa ccatggtgac cgtgtcatcc 360

gcctccggtg gtggaggctc cggggggcgg gcttcaggag gcggaggaag cgatattgtg 420

atgacccaga ctccgcttag cctgcccgtg actcctggag aaccggcctc catttcctgc 480

cggtcctcgc aatcactcct gcattccaac ggttacaact acctgaattg gtacctccag 540

aagcctggcc agtcgcccca gttgctgatc tatctgggct cgaagcgcgc ctccggggtg 600

cctgaccggt ttagcggatc tgggagcggc acggacttca ctctccacat cacccgcgtg 660

ggagcggagg acgtgggagt gtactactgt atgcaggcgc tgcagactcc gtacacattc 720

ggacagggca ccaagctgga gatcaag 747

<210> 58

<211> 738

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полинуклеотид

<400> 58

caagtgcaac ttcaagaatc aggcggagga ctcgtgcagc ccggaggatc attgcggctc 60

tcgtgcgccg cctcgggctt caccttctcg agcgacgcca tgacctgggt ccgccaggcc 120

ccggggaagg ggctggaatg ggtgtctgtg atttccggct ccgggggaac tacgtactac 180

gccgattccg tgaaaggtcg cttcactatc tcccgggaca acagcaagaa caccctttat 240

ctgcaaatga attccctccg cgccgaggac accgccgtgt actactgcgc caagctggac 300

tcctcgggct actactatgc ccggggtccg agatactggg gacagggaac cctcgtgacc 360

gtgtcctccg cgtccggcgg aggagggtcg ggagggcggg cctccggcgg cggcggttcg 420

gacatccagc tgacccagtc cccatcctca ctgagcgcaa gcgtgggcga cagagtcacc 480

attacatgca gggcgtccca gagcatcagc tcctacctga actggtacca acagaagcct 540

ggaaaggctc ctaagctgtt gatctacggg gcttcgaccc tggcatccgg ggtgcccgcg 600

aggtttagcg gaagcggtag cggcactcac ttcactctga ccattaacag cctccagtcc 660

gaggattcag ccacttacta ctgtcagcag tcctacaagc gggccagctt cggacagggc 720

actaaggtcg agatcaag 738

<210> 59

<211> 741

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полинуклеотид

<400> 59

caagtccaac tggtccagag cggtgcagaa gtgaagaagc ccggagcgag cgtgaaagtg 60

tcctgcaagg cttccgggta caccttctcc aactacggca tcacttgggt gcgccaggcc 120

ccgggacagg gcctggaatg gatggggtgg atttccgcgt acaacggcaa tacgaactac 180

gctcagaagt tccagggtag agtgaccatg actaggaaca cctccatttc caccgcctac 240

atggaactgt cctccctgcg gagcgaggac accgccgtgt actattgcgc ccggggacca 300

tactactact acatggatgt ctgggggaag gggactatgg tcaccgtgtc atccgcctcg 360

ggaggcggcg gatcaggagg acgcgcctct ggtggtggag gatcggagat cgtgatgacc 420

cagagccctc tctccttgcc cgtgactcct ggggagcccg catccatttc atgccggagc 480

tcccagtcac ttctctactc caacggctat aactacgtgg attggtacct ccaaaagccg 540

ggccagagcc cgcagctgct gatctacctg ggctcgaaca gggccagcgg agtgcctgac 600

cggttctccg ggtcgggaag cgggaccgac ttcaagctgc aaatctcgag agtggaggcc 660

gaggacgtgg gaatctacta ctgtatgcag ggccgccagt ttccgtactc gttcggacag 720

ggcaccaaag tggaaatcaa g 741

<210> 60

<211> 714

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полинуклеотид

<400> 60

gaagtgcaat tgctcgaaac tggaggaggt ctggtgcaac ctggaggatc acttcgcctg 60

tcctgcgccg tgtcgggctt tgccctgtcc aaccatggaa tgagctgggt ccgccgcgcg 120

ccggggaagg gcctcgaatg ggtgtccggc atcgtctact ccggctccac ctactacgcc 180

gcgtccgtga agggccggtt cacgatttca cgggacaact cgcggaacac cctgtacctc 240

caaatgaatt cccttcggcc ggaggatact gccatctact actgctccgc ccacggtggc 300

gaatccgacg tctggggcca gggaaccacc gtgaccgtgt ccagcgcgtc cgggggagga 360

ggaagcgggg gtagagcatc gggtggaggc ggatcagaga tcgtgctgac ccagtccccc 420

gccaccttga gcgtgtcacc aggagagtcc gccaccctgt catgccgcgc cagccagtcc 480

gtgtcctcca acctggcttg gtaccagcag aagccggggc aggcccctag actcctgatc 540

tatggggcgt cgacccgggc atctggaatt cccgataggt tcagcggatc gggctcgggc 600

actgacttca ctctgaccat ctcctcgctg caagccgagg acgtggctgt gtactactgt 660

cagcagtacg gaagctccct gactttcggt ggcgggacca aagtcgagat taag 714

<210> 61

<211> 717

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полинуклеотид

<400> 61

gaagtgcaat tggtggaaac tggaggagga cttgtgcaac ctggaggatc attgagactg 60

agctgcgcag tgtcgggatt cgccctgagc aaccatggaa tgtcctgggt cagaagggcc 120

cctggaaaag gcctcgaatg ggtgtcaggg atcgtgtact ccggttccac ttactacgcc 180

gcctccgtga aggggcgctt cactatctca cgggataact cccgcaatac cctgtacctc 240

caaatgaaca gcctgcggcc ggaggatacc gccatctact actgttccgc ccacggtgga 300

gagtctgacg tctggggcca gggaactacc gtgaccgtgt cctccgcgtc cggcggtgga 360

gggagcggcg gccgcgccag cggcggcgga ggctccgaga tcgtgatgac ccagagcccc 420

gctactctgt cggtgtcgcc cggagaaagg gcgaccctgt cctgccgggc gtcgcagtcc 480

gtgagcagca agctggcttg gtaccagcag aagccgggcc aggcaccacg cctgcttatg 540

tacggtgcct ccattcgggc caccggaatc ccggaccggt tctcggggtc ggggtccggt 600

accgagttca cactgaccat ttcctcgctc gagcccgagg actttgccgt ctattactgc 660

cagcagtacg gctcctcctc atggacgttc ggccagggga ccaaggtcga aatcaag 717

<210> 62

<211> 723

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полинуклеотид

<400> 62

gaagtgcaat tggtggagac tggaggagga gtggtgcaac ctggaggaag cctgagactg 60

tcatgcgcgg tgtcgggctt cgccctctcc aaccacggaa tgtcctgggt ccgccgggcc 120

cctgggaaag gacttgaatg ggtgtccggc atcgtgtact cgggttccac ctactacgcg 180

gcctcagtga agggccggtt tactattagc cgcgacaact ccagaaacac actgtacctc 240

caaatgaact cgctgcggcc ggaagatacc gctatctact actgctccgc ccatggggga 300

gagtcggacg tctggggaca gggcaccact gtcactgtgt ccagcgcttc cggcggtggt 360

ggaagcgggg gacgggcctc aggaggcggt ggcagcgaga ttgtgctgac ccagtccccc 420

gggaccctga gcctgtcccc gggagaaagg gccaccctct cctgtcgggc atcccagtcc 480

gtggggtcta ctaaccttgc atggtaccag cagaagcccg gccaggcccc tcgcctgctg 540

atctacgacg cgtccaatag agccaccggc atcccggatc gcttcagcgg aggcggatcg 600

ggcaccgact tcaccctcac catttcaagg ctggaaccgg aggacttcgc cgtgtactac 660

tgccagcagt atggttcgtc cccaccctgg acgttcggcc aggggactaa ggtcgagatc 720

aag 723

<210> 63

<211> 717

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полинуклеотид

<400> 63

caagtgcaac tcgtggaatc tggtggagga ctcgtgaaac ctggaggatc attgagactg 60

tcatgcgcgg cctcgggatt cacgttctcc gattactaca tgagctggat tcgccaggct 120

ccggggaagg gactggaatg ggtgtcctac atttcctcat ccggctccac catctactac 180

gcggactccg tgaaggggag attcaccatt agccgcgata acgccaagaa cagcctgtac 240

cttcagatga actccctgcg ggctgaagat actgccgtct actactgcgc aagggagagc 300

ggagatggga tggacgtctg gggacagggt accactgtga ccgtgtcgtc ggcctccggc 360

ggagggggtt cgggtggaag ggccagcggc ggcggaggca gcgacatcca gatgacccag 420

tccccctcat cgctgtccgc ctccgtgggc gaccgcgtca ccatcacatg ccgggcctca 480

cagtcgatct cctcctacct caattggtat cagcagaagc ccggaaaggc ccctaagctt 540

ctgatctacg cagcgtcctc cctgcaatcc ggggtcccat ctcggttctc cggctcgggc 600

agcggtaccg acttcactct gaccatctcg agcctgcagc cggaggactt cgccacttac 660

tactgtcagc aaagctacac cctcgcgttt ggccagggca ccaaagtgga catcaag 717

<210> 64

<211> 717

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полинуклеотид

<400> 64

gaagtgcaat tggtggaatc agggggagga cttgtgcagc ctggaggatc gctgagactg 60

tcatgtgccg tgtccggctt tgccctgtcc aaccacggga tgtcctgggt ccgccgcgcg 120

cctggaaagg gcctcgaatg ggtgtcgggt attgtgtaca gcggtagcac ctactatgcc 180

gcatccgtga aggggagatt caccatcagc cgggacaact ccaggaacac tctgtacctc 240

caaatgaatt cgctgaggcc agaggacact gccatctact actgctccgc gcatggcgga 300

gagtccgacg tctggggaca ggggaccacc gtgaccgtgt ctagcgcgtc cggcggaggc 360

ggcagcgggg gtcgggcatc agggggcggc ggatcggaca tccagctcac ccagtccccg 420

agctcgctgt ccgcctccgt gggagatcgg gtcaccatca cgtgccgcgc cagccagtcg 480

atttcctcct acctgaactg gtaccaacag aagcccggaa aagccccgaa gcttctcatc 540

tacgccgcct cgagcctgca gtcaggagtg ccctcacggt tctccggctc cggttccggt 600

actgatttca ccctgaccat ttcctccctg caaccggagg acttcgctac ttactactgc 660

cagcagtcgt actccacccc ctacactttc ggacaaggca ccaaggtcga aatcaag 717

<210> 65

<211> 738

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полинуклеотид

<400> 65

caagtgcaac tggtgcaaag cggaggagga ttggtcaaac ccggaggaag cctgagactg 60

tcatgcgcgg cctctggatt caccttctcc gattactaca tgtcatggat cagacaggcc 120

ccggggaagg gcctcgaatg ggtgtcctac atctcgtcct ccgggaacac catctactac 180

gccgacagcg tgaagggccg ctttaccatt tcccgcgaca acgcaaagaa ctcgctgtac 240

cttcagatga attccctgcg ggctgaagat accgcggtgt actattgcgc ccggtccact 300

atggtccggg aggactactg gggacagggc acactcgtga ccgtgtccag cgcgagcggg 360

ggtggaggca gcggtggacg cgcctccggc ggcggcggtt cagacatcgt gctgactcag 420

tcgcccctgt cgctgccggt caccctgggc caaccggcct caattagctg caagtcctcg 480

gagagcctgg tgcacaactc aggaaagact tacctgaact ggttccatca gcggcctgga 540

cagtccccac ggaggctcat ctatgaagtg tccaacaggg attcgggggt gcccgaccgc 600

ttcactggct ccgggtccgg caccgacttc accttgaaaa tctccagagt ggaagccgag 660

gacgtgggcg tgtactactg tatgcagggt acccactggc ctggaacctt tggacaagga 720

actaagctcg agattaag 738

<210> 66

<211> 717

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полинуклеотид

<400> 66

caagtgcaac tcgtggaatc tggtggagga ctcgtgcaac ccggtggaag ccttaggctg 60

tcgtgcgccg tcagcgggtt tgctctgagc aaccatggaa tgtcctgggt ccgccgggca 120

ccgggaaaag ggctggaatg ggtgtccggc atcgtgtaca gcgggtcaac ctattacgcc 180

gcgtccgtga agggcagatt cactatctca agagacaaca gccggaacac cctgtacttg 240

caaatgaatt ccctgcgccc cgaggacacc gccatctact actgctccgc ccacggagga 300

gagtcggacg tgtggggcca gggaacgact gtgactgtgt ccagcgcatc aggagggggt 360

ggttcgggcg gccgggcctc ggggggagga ggttccgaca ttcggctgac ccagtccccg 420

tccccactgt cggcctccgt cggcgaccgc gtgaccatca cttgtcaggc gtccgaggac 480

attaacaagt tcctgaactg gtaccaccag acccctggaa aggcccccaa gctgctgatc 540

tacgatgcct cgacccttca aactggagtg cctagccggt tctccgggtc cggctccggc 600

actgatttca ctctgaccat caactcattg cagccggaag atatcgggac ctactattgc 660

cagcagtacg aatccctccc gctcacattc ggcgggggaa ccaaggtcga gattaag 717

<210> 67

<211> 720

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полинуклеотид

<400> 67

gaagtgcaat tggtggaaac tggaggagga cttgtgcaac ctggaggatc attgcggctc 60

tcatgcgctg tctccggctt cgccctgtca aatcacggga tgtcgtgggt cagacgggcc 120

ccgggaaagg gtctggaatg ggtgtcgggg attgtgtaca gcggctccac ctactacgcc 180

gcttcggtca agggccgctt cactatttca cgggacaaca gccgcaacac cctctatctg 240

caaatgaact ctctccgccc ggaggatacc gccatctact actgctccgc acacggcggc 300

gaatccgacg tgtggggaca gggaaccact gtcaccgtgt cgtccgcatc cggtggcgga 360

ggatcgggtg gccgggcctc cgggggcggc ggcagcgaga ctaccctgac ccagtcccct 420

gccactctgt ccgtgagccc gggagagaga gccaccctta gctgccgggc cagccagagc 480

gtgggctcca acctggcctg gtaccagcag aagccaggac agggtcccag gctgctgatc 540

tacggagcct ccactcgcgc gaccggcatc cccgcgaggt tctccgggtc gggttccggg 600

accgagttca ccctgaccat ctcctccctc caaccggagg acttcgcggt gtactactgt 660

cagcagtaca acgattggct gcccgtgaca tttggacagg ggacgaaggt ggaaatcaaa 720

<210> 68

<211> 723

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полинуклеотид

<400> 68

gaagtgcaat tggtggaatc tggtggagga cttgtgcaac ctggaggatc actgagactg 60

tcatgcgcgg tgtccggttt tgccctgagc aatcatggga tgtcgtgggt ccggcgcgcc 120

cccggaaagg gtctggaatg ggtgtcgggt atcgtctact ccgggagcac ttactacgcc 180

gcgagcgtga agggccgctt caccatttcc cgcgataact cccgcaacac cctgtacttg 240

caaatgaact cgctccggcc tgaggacact gccatctact actgctccgc acacggagga 300

gaatccgacg tgtggggcca gggaactacc gtgaccgtca gcagcgcctc cggcggcggg 360

ggctcaggcg gacgggctag cggcggcggt ggctccgaga tcgtgctgac ccagtcgcct 420

ggcactctct cgctgagccc cggggaaagg gcaaccctgt cctgtcgggc cagccagtcc 480

attggatcat cctccctcgc ctggtatcag cagaaaccgg gacaggctcc gcggctgctt 540

atgtatgggg ccagctcaag agcctccggc attcccgacc ggttctccgg gtccggttcc 600

ggcaccgatt tcaccctgac tatctcgagg ctggagccag aggacttcgc cgtgtactac 660

tgccagcagt acgcggggtc cccgccgttc acgttcggac agggaaccaa ggtcgagatc 720

aag 723

<210> 69

<211> 120

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 69

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr

20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Gly Trp Val

35 40 45

Ser Gly Ile Ser Arg Ser Gly Glu Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Pro Ala His Tyr Tyr Gly Gly Met Asp Val Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 70

<211> 115

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 70

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr

20 25 30

Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Gly Ile Ser Trp Asn Ser Gly Ser Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ser Val His Ser Phe Leu Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr

100 105 110

Val Ser Ser

115

<210> 71

<211> 115

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 71

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Ala Leu Ser Asn His

20 25 30

Gly Met Ser Trp Val Arg Arg Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Gly Ile Val Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ala Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Arg Asn Thr Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ser

85 90 95

Ala His Gly Gly Glu Ser Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr

100 105 110

Val Ser Ser

115

<210> 72

<211> 120

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 72

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Arg Lys Thr Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Asp Asn Phe

20 25 30

Gly Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Asn Pro Lys Asn Asn Asn Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Asn Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Val Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Pro Tyr Tyr Tyr Gln Ser Tyr Met Asp Val Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 73

<211> 123

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 73

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Asp

20 25 30

Ala Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Val Ile Ser Gly Ser Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Leu Asp Ser Ser Gly Tyr Tyr Tyr Ala Arg Gly Pro Arg Tyr

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 74

<211> 118

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 74

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Asn Tyr

20 25 30

Gly Ile Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Ser Ala Tyr Asn Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asn Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Pro Tyr Tyr Tyr Tyr Met Asp Val Trp Gly Lys Gly Thr

100 105 110

Met Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 75

<211> 115

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 75

Glu Val Gln Leu Leu Glu Thr Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Ala Leu Ser Asn His

20 25 30

Gly Met Ser Trp Val Arg Arg Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Gly Ile Val Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ala Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Arg Asn Thr Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ser

85 90 95

Ala His Gly Gly Glu Ser Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr

100 105 110

Val Ser Ser

115

<210> 76

<211> 115

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 76

Glu Val Gln Leu Val Glu Thr Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Ala Leu Ser Asn His

20 25 30

Gly Met Ser Trp Val Arg Arg Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Gly Ile Val Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ala Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Arg Asn Thr Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ser

85 90 95

Ala His Gly Gly Glu Ser Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr

100 105 110

Val Ser Ser

115

<210> 77

<211> 115

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 77

Glu Val Gln Leu Val Glu Thr Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Ala Leu Ser Asn His

20 25 30

Gly Met Ser Trp Val Arg Arg Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Gly Ile Val Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ala Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Arg Asn Thr Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ser

85 90 95

Ala His Gly Gly Glu Ser Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr

100 105 110

Val Ser Ser

115

<210> 78

<211> 117

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 78

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Ser Gly Asp Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 79

<211> 115

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 79

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Ala Leu Ser Asn His

20 25 30

Gly Met Ser Trp Val Arg Arg Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Gly Ile Val Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ala Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Arg Asn Thr Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ser

85 90 95

Ala His Gly Gly Glu Ser Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr

100 105 110

Val Ser Ser

115

<210> 80

<211> 117

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 80

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Asn Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Thr Met Val Arg Glu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 81

<211> 115

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 81

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Ala Leu Ser Asn His

20 25 30

Gly Met Ser Trp Val Arg Arg Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Gly Ile Val Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ala Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Arg Asn Thr Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ser

85 90 95

Ala His Gly Gly Glu Ser Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr

100 105 110

Val Ser Ser

115

<210> 82

<211> 115

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 82

Glu Val Gln Leu Val Glu Thr Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Ala Leu Ser Asn His

20 25 30

Gly Met Ser Trp Val Arg Arg Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Gly Ile Val Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ala Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Arg Asn Thr Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ser

85 90 95

Ala His Gly Gly Glu Ser Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr

100 105 110

Val Ser Ser

115

<210> 83

<211> 115

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 83

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Ala Leu Ser Asn His

20 25 30

Gly Met Ser Trp Val Arg Arg Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Gly Ile Val Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ala Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Arg Asn Thr Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ser

85 90 95

Ala His Gly Gly Glu Ser Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr

100 105 110

Val Ser Ser

115

<210> 84

<211> 109

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 84

Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Ser

20 25 30

Phe Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Gly Ala Ser Arg Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu

65 70 75 80

Pro Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr His Ser Ser Pro

85 90 95

Ser Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 85

<211> 112

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 85

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser

20 25 30

Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala

85 90 95

Leu Gln Thr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 86

<211> 111

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 86

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Arg Asn

20 25 30

Asp Gly Lys Thr Pro Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Lys Ala Gly Gln Pro

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Glu Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Ala Tyr Tyr Cys Met Gln Asn

85 90 95

Ile Gln Phe Pro Ser Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 87

<211> 112

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 87

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser

20 25 30

Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asn Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Lys Arg Ala Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu His Ile

65 70 75 80

Thr Arg Val Gly Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala

85 90 95

Leu Gln Thr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 88

<211> 106

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 88

Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Gly Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr His Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Gln Ser

65 70 75 80

Glu Asp Ser Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Lys Arg Ala Ser

85 90 95

Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 89

<211> 112

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 89

Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser

20 25 30

Asn Gly Tyr Asn Tyr Val Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Lys Leu Gln Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Ile Tyr Tyr Cys Met Gln Gly

85 90 95

Arg Gln Phe Pro Tyr Ser Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 90

<211> 106

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 90

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Ser Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala

65 70 75 80

Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Leu Thr

85 90 95

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 91

<211> 107

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 91

Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Lys

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Met

35 40 45

Tyr Gly Ala Ser Ile Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Ser Trp

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 92

<211> 109

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 92

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Gly Ser Thr

20 25 30

Asn Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Gly Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu

65 70 75 80

Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro

85 90 95

Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 93

<211> 105

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 93

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Thr Leu Ala Phe

85 90 95

Gly Gln Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys

100 105

<210> 94

<211> 107

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 94

Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Tyr

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 95

<211> 112

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 95

Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly

1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Glu Ser Leu Val His Asn

20 25 30

Ser Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Phe His Gln Arg Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Glu Val Ser Asn Arg Asp Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Gly

85 90 95

Thr His Trp Pro Gly Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 96

<211> 107

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 96

Asp Ile Arg Leu Thr Gln Ser Pro Ser Pro Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Glu Asp Ile Asn Lys Phe

20 25 30

Leu Asn Trp Tyr His Gln Thr Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Thr Leu Gln Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Ile Gly Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Glu Ser Leu Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 97

<211> 108

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 97

Glu Thr Thr Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Gly Ser Asn

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Gly Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Asp Trp Leu Pro

85 90 95

Val Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 98

<211> 109

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 98

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Ser Ser

20 25 30

Ser Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu

35 40 45

Met Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu

65 70 75 80

Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ala Gly Ser Pro

85 90 95

Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 99

<211> 490

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 99

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu

20 25 30

Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe

35 40 45

Thr Phe Ser Asn Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys

50 55 60

Gly Leu Gly Trp Val Ser Gly Ile Ser Arg Ser Gly Glu Asn Thr Tyr

65 70 75 80

Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser

85 90 95

Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Asp Glu Asp Thr

100 105 110

Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Pro Ala His Tyr Tyr Gly Gly Met

115 120 125

Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Gly

130 135 140

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Arg Ala Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile

145 150 155 160

Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg

165 170 175

Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Ser Phe Leu

180 185 190

Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr

195 200 205

Gly Ala Ser Arg Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser

210 215 220

Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro Glu

225 230 235 240

Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr His Ser Ser Pro Ser Trp

245 250 255

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Thr Thr Thr Pro Ala

260 265 270

Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser

275 280 285

Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr

290 295 300

Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala

305 310 315 320

Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys

325 330 335

Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met

340 345 350

Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe

355 360 365

Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg

370 375 380

Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn

385 390 395 400

Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg

405 410 415

Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro

420 425 430

Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala

435 440 445

Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His

450 455 460

Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp

465 470 475 480

Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

485 490

<210> 100

<211> 488

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 100

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu

20 25 30

Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe

35 40 45

Thr Phe Asp Asp Tyr Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys

50 55 60

Gly Leu Glu Trp Val Ser Gly Ile Ser Trp Asn Ser Gly Ser Ile Gly

65 70 75 80

Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala

85 90 95

Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr

100 105 110

Ala Leu Tyr Tyr Cys Ser Val His Ser Phe Leu Ala Tyr Trp Gly Gln

115 120 125

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

130 135 140

Gly Arg Ala Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Met Thr Gln Thr

145 150 155 160

Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys

165 170 175

Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp

180 185 190

Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu

195 200 205

Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly

210 215 220

Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp

225 230 235 240

Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala Leu Gln Thr Pro Tyr Thr Phe

245 250 255

Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg

260 265 270

Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg

275 280 285

Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly

290 295 300

Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr

305 310 315 320

Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg

325 330 335

Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro

340 345 350

Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu

355 360 365

Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala

370 375 380

Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu

385 390 395 400

Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly

405 410 415

Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu

420 425 430

Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser

435 440 445

Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly

450 455 460

Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu

465 470 475 480

His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

485

<210> 101

<211> 487

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 101

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu

20 25 30

Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe

35 40 45

Ala Leu Ser Asn His Gly Met Ser Trp Val Arg Arg Ala Pro Gly Lys

50 55 60

Gly Leu Glu Trp Val Ser Gly Ile Val Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr

65 70 75 80

Ala Ala Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Arg

85 90 95

Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala

100 105 110

Ile Tyr Tyr Cys Ser Ala His Gly Gly Glu Ser Asp Val Trp Gly Gln

115 120 125

Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

130 135 140

Gly Arg Ala Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Met Thr Gln Thr

145 150 155 160

Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys

165 170 175

Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Arg Asn Asp Gly Lys Thr Pro Leu Tyr

180 185 190

Trp Tyr Leu Gln Lys Ala Gly Gln Pro Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Glu

195 200 205

Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly

210 215 220

Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp

225 230 235 240

Val Gly Ala Tyr Tyr Cys Met Gln Asn Ile Gln Phe Pro Ser Phe Gly

245 250 255

Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro

260 265 270

Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro

275 280 285

Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu

290 295 300

Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys

305 310 315 320

Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly

325 330 335

Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val

340 345 350

Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu

355 360 365

Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp

370 375 380

Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn

385 390 395 400

Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg

405 410 415

Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly

420 425 430

Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu

435 440 445

Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu

450 455 460

Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His

465 470 475 480

Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

485

<210> 102

<211> 493

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 102

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val

20 25 30

Arg Lys Thr Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr

35 40 45

Ile Phe Asp Asn Phe Gly Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln

50 55 60

Gly Leu Glu Trp Met Gly Trp Ile Asn Pro Lys Asn Asn Asn Thr Asn

65 70 75 80

Tyr Ala Gln Lys Phe Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser

85 90 95

Thr Asn Thr Ala Tyr Met Glu Val Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr

100 105 110

Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Pro Tyr Tyr Tyr Gln Ser Tyr Met

115 120 125

Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Gly

130 135 140

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Arg Ala Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile

145 150 155 160

Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly Glu Pro

165 170 175

Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser Asn Gly

180 185 190

Tyr Asn Tyr Leu Asn Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln

195 200 205

Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Lys Arg Ala Ser Gly Val Pro Asp Arg

210 215 220

Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu His Ile Thr Arg

225 230 235 240

Val Gly Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala Leu Gln

245 250 255

Thr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Thr Thr

260 265 270

Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln

275 280 285

Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala

290 295 300

Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala

305 310 315 320

Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr

325 330 335

Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln

340 345 350

Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser

355 360 365

Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys

370 375 380

Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn Gln

385 390 395 400

Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu

405 410 415

Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg

420 425 430

Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met

435 440 445

Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly

450 455 460

Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp

465 470 475 480

Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

485 490

<210> 103

<211> 490

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 103

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Leu

20 25 30

Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe

35 40 45

Thr Phe Ser Ser Asp Ala Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys

50 55 60

Gly Leu Glu Trp Val Ser Val Ile Ser Gly Ser Gly Gly Thr Thr Tyr

65 70 75 80

Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser

85 90 95

Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr

100 105 110

Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys Leu Asp Ser Ser Gly Tyr Tyr Tyr Ala

115 120 125

Arg Gly Pro Arg Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

130 135 140

Ala Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Arg Ala Ser Gly Gly Gly Gly

145 150 155 160

Ser Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val

165 170 175

Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser

180 185 190

Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu

195 200 205

Ile Tyr Gly Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser

210 215 220

Gly Ser Gly Ser Gly Thr His Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Gln

225 230 235 240

Ser Glu Asp Ser Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Lys Arg Ala

245 250 255

Ser Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Thr Thr Thr Pro Ala

260 265 270

Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser

275 280 285

Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr

290 295 300

Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala

305 310 315 320

Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys

325 330 335

Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met

340 345 350

Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe

355 360 365

Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg

370 375 380

Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn

385 390 395 400

Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg

405 410 415

Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro

420 425 430

Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala

435 440 445

Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His

450 455 460

Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp

465 470 475 480

Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

485 490

<210> 104

<211> 491

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 104

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val

20 25 30

Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr

35 40 45

Thr Phe Ser Asn Tyr Gly Ile Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln

50 55 60

Gly Leu Glu Trp Met Gly Trp Ile Ser Ala Tyr Asn Gly Asn Thr Asn

65 70 75 80

Tyr Ala Gln Lys Phe Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asn Thr Ser

85 90 95

Ile Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr

100 105 110

Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Pro Tyr Tyr Tyr Tyr Met Asp Val

115 120 125

Trp Gly Lys Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Gly Gly Gly

130 135 140

Gly Ser Gly Gly Arg Ala Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Ile Val Met

145 150 155 160

Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly Glu Pro Ala Ser

165 170 175

Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser Asn Gly Tyr Asn

180 185 190

Tyr Val Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu

195 200 205

Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser

210 215 220

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Lys Leu Gln Ile Ser Arg Val Glu

225 230 235 240

Ala Glu Asp Val Gly Ile Tyr Tyr Cys Met Gln Gly Arg Gln Phe Pro

245 250 255

Tyr Ser Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Thr Thr Thr Pro

260 265 270

Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu

275 280 285

Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His

290 295 300

Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu

305 310 315 320

Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr

325 330 335

Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe

340 345 350

Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg

355 360 365

Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser

370 375 380

Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr

385 390 395 400

Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys

405 410 415

Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn

420 425 430

Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu

435 440 445

Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly

450 455 460

His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr

465 470 475 480

Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

485 490

<210> 105

<211> 482

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 105

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Glu Val Gln Leu Leu Glu Thr Gly Gly Gly Leu

20 25 30

Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe

35 40 45

Ala Leu Ser Asn His Gly Met Ser Trp Val Arg Arg Ala Pro Gly Lys

50 55 60

Gly Leu Glu Trp Val Ser Gly Ile Val Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr

65 70 75 80

Ala Ala Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Arg

85 90 95

Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala

100 105 110

Ile Tyr Tyr Cys Ser Ala His Gly Gly Glu Ser Asp Val Trp Gly Gln

115 120 125

Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

130 135 140

Gly Arg Ala Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser

145 150 155 160

Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly Glu Ser Ala Thr Leu Ser Cys

165 170 175

Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys

180 185 190

Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala

195 200 205

Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe

210 215 220

Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr

225 230 235 240

Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val

245 250 255

Glu Ile Lys Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro

260 265 270

Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro

275 280 285

Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp

290 295 300

Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu

305 310 315 320

Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu

325 330 335

Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu

340 345 350

Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys

355 360 365

Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys

370 375 380

Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu

385 390 395 400

Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly

405 410 415

Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu

420 425 430

Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly

435 440 445

Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser

450 455 460

Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro

465 470 475 480

Pro Arg

<210> 106

<211> 483

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 106

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Glu Val Gln Leu Val Glu Thr Gly Gly Gly Leu

20 25 30

Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe

35 40 45

Ala Leu Ser Asn His Gly Met Ser Trp Val Arg Arg Ala Pro Gly Lys

50 55 60

Gly Leu Glu Trp Val Ser Gly Ile Val Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr

65 70 75 80

Ala Ala Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Arg

85 90 95

Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala

100 105 110

Ile Tyr Tyr Cys Ser Ala His Gly Gly Glu Ser Asp Val Trp Gly Gln

115 120 125

Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

130 135 140

Gly Arg Ala Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Ile Val Met Thr Gln Ser

145 150 155 160

Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys

165 170 175

Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Lys Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys

180 185 190

Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Met Tyr Gly Ala Ser Ile Arg Ala

195 200 205

Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe

210 215 220

Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr

225 230 235 240

Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Ser Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys

245 250 255

Val Glu Ile Lys Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala

260 265 270

Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg

275 280 285

Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys

290 295 300

Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu

305 310 315 320

Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu

325 330 335

Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln

340 345 350

Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly

355 360 365

Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr

370 375 380

Lys Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg

385 390 395 400

Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met

405 410 415

Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu

420 425 430

Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys

435 440 445

Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu

450 455 460

Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu

465 470 475 480

Pro Pro Arg

<210> 107

<211> 485

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 107

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Glu Val Gln Leu Val Glu Thr Gly Gly Gly Val

20 25 30

Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe

35 40 45

Ala Leu Ser Asn His Gly Met Ser Trp Val Arg Arg Ala Pro Gly Lys

50 55 60

Gly Leu Glu Trp Val Ser Gly Ile Val Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr

65 70 75 80

Ala Ala Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Arg

85 90 95

Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala

100 105 110

Ile Tyr Tyr Cys Ser Ala His Gly Gly Glu Ser Asp Val Trp Gly Gln

115 120 125

Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

130 135 140

Gly Arg Ala Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser

145 150 155 160

Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys

165 170 175

Arg Ala Ser Gln Ser Val Gly Ser Thr Asn Leu Ala Trp Tyr Gln Gln

180 185 190

Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asn Arg

195 200 205

Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Gly Gly Ser Gly Thr Asp

210 215 220

Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr

225 230 235 240

Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly

245 250 255

Thr Lys Val Glu Ile Lys Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr

260 265 270

Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala

275 280 285

Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe

290 295 300

Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val

305 310 315 320

Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys

325 330 335

Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr

340 345 350

Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu

355 360 365

Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro

370 375 380

Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly

385 390 395 400

Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro

405 410 415

Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr

420 425 430

Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly

435 440 445

Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln

450 455 460

Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln

465 470 475 480

Ala Leu Pro Pro Arg

485

<210> 108

<211> 483

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 108

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu

20 25 30

Val Lys Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe

35 40 45

Thr Phe Ser Asp Tyr Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys

50 55 60

Gly Leu Glu Trp Val Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile Tyr

65 70 75 80

Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala

85 90 95

Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr

100 105 110

Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Ser Gly Asp Gly Met Asp Val Trp

115 120 125

Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Gly Gly Gly Gly

130 135 140

Ser Gly Gly Arg Ala Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr

145 150 155 160

Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile

165 170 175

Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln

180 185 190

Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Ser

195 200 205

Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr

210 215 220

Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr

225 230 235 240

Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Thr Leu Ala Phe Gly Gln Gly Thr Lys

245 250 255

Val Asp Ile Lys Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala

260 265 270

Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg

275 280 285

Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys

290 295 300

Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu

305 310 315 320

Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu

325 330 335

Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln

340 345 350

Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly

355 360 365

Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr

370 375 380

Lys Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg

385 390 395 400

Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met

405 410 415

Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu

420 425 430

Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys

435 440 445

Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu

450 455 460

Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu

465 470 475 480

Pro Pro Arg

<210> 109

<211> 483

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 109

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu

20 25 30

Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe

35 40 45

Ala Leu Ser Asn His Gly Met Ser Trp Val Arg Arg Ala Pro Gly Lys

50 55 60

Gly Leu Glu Trp Val Ser Gly Ile Val Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr

65 70 75 80

Ala Ala Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Arg

85 90 95

Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala

100 105 110

Ile Tyr Tyr Cys Ser Ala His Gly Gly Glu Ser Asp Val Trp Gly Gln

115 120 125

Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

130 135 140

Gly Arg Ala Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser

145 150 155 160

Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys

165 170 175

Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys

180 185 190

Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln

195 200 205

Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe

210 215 220

Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr

225 230 235 240

Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys

245 250 255

Val Glu Ile Lys Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala

260 265 270

Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg

275 280 285

Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys

290 295 300

Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu

305 310 315 320

Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu

325 330 335

Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln

340 345 350

Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly

355 360 365

Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr

370 375 380

Lys Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg

385 390 395 400

Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met

405 410 415

Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu

420 425 430

Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys

435 440 445

Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu

450 455 460

Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu

465 470 475 480

Pro Pro Arg

<210> 110

<211> 490

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 110

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu

20 25 30

Val Lys Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe

35 40 45

Thr Phe Ser Asp Tyr Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys

50 55 60

Gly Leu Glu Trp Val Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Asn Thr Ile Tyr

65 70 75 80

Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala

85 90 95

Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr

100 105 110

Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Thr Met Val Arg Glu Asp Tyr Trp

115 120 125

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Gly Gly Gly Gly

130 135 140

Ser Gly Gly Arg Ala Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Leu Thr

145 150 155 160

Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly Gln Pro Ala Ser Ile

165 170 175

Ser Cys Lys Ser Ser Glu Ser Leu Val His Asn Ser Gly Lys Thr Tyr

180 185 190

Leu Asn Trp Phe His Gln Arg Pro Gly Gln Ser Pro Arg Arg Leu Ile

195 200 205

Tyr Glu Val Ser Asn Arg Asp Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly

210 215 220

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala

225 230 235 240

Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Gly Thr His Trp Pro Gly

245 250 255

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Thr Thr Thr Pro Ala

260 265 270

Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser

275 280 285

Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr

290 295 300

Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala

305 310 315 320

Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys

325 330 335

Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met

340 345 350

Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe

355 360 365

Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg

370 375 380

Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn

385 390 395 400

Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg

405 410 415

Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro

420 425 430

Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala

435 440 445

Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His

450 455 460

Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp

465 470 475 480

Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

485 490

<210> 111

<211> 483

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 111

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu

20 25 30

Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe

35 40 45

Ala Leu Ser Asn His Gly Met Ser Trp Val Arg Arg Ala Pro Gly Lys

50 55 60

Gly Leu Glu Trp Val Ser Gly Ile Val Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr

65 70 75 80

Ala Ala Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Arg

85 90 95

Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala

100 105 110

Ile Tyr Tyr Cys Ser Ala His Gly Gly Glu Ser Asp Val Trp Gly Gln

115 120 125

Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

130 135 140

Gly Arg Ala Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Arg Leu Thr Gln Ser

145 150 155 160

Pro Ser Pro Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys

165 170 175

Gln Ala Ser Glu Asp Ile Asn Lys Phe Leu Asn Trp Tyr His Gln Thr

180 185 190

Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Thr Leu Gln

195 200 205

Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe

210 215 220

Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ile Gly Thr Tyr Tyr

225 230 235 240

Cys Gln Gln Tyr Glu Ser Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys

245 250 255

Val Glu Ile Lys Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala

260 265 270

Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg

275 280 285

Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys

290 295 300

Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu

305 310 315 320

Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu

325 330 335

Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln

340 345 350

Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly

355 360 365

Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr

370 375 380

Lys Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg

385 390 395 400

Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met

405 410 415

Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu

420 425 430

Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys

435 440 445

Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu

450 455 460

Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu

465 470 475 480

Pro Pro Arg

<210> 112

<211> 484

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 112

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Glu Val Gln Leu Val Glu Thr Gly Gly Gly Leu

20 25 30

Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe

35 40 45

Ala Leu Ser Asn His Gly Met Ser Trp Val Arg Arg Ala Pro Gly Lys

50 55 60

Gly Leu Glu Trp Val Ser Gly Ile Val Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr

65 70 75 80

Ala Ala Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Arg

85 90 95

Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala

100 105 110

Ile Tyr Tyr Cys Ser Ala His Gly Gly Glu Ser Asp Val Trp Gly Gln

115 120 125

Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

130 135 140

Gly Arg Ala Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Thr Thr Leu Thr Gln Ser

145 150 155 160

Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys

165 170 175

Arg Ala Ser Gln Ser Val Gly Ser Asn Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys

180 185 190

Pro Gly Gln Gly Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala

195 200 205

Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe

210 215 220

Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr

225 230 235 240

Cys Gln Gln Tyr Asn Asp Trp Leu Pro Val Thr Phe Gly Gln Gly Thr

245 250 255

Lys Val Glu Ile Lys Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro

260 265 270

Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys

275 280 285

Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala

290 295 300

Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu

305 310 315 320

Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys

325 330 335

Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr

340 345 350

Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly

355 360 365

Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala

370 375 380

Tyr Lys Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg

385 390 395 400

Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu

405 410 415

Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn

420 425 430

Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met

435 440 445

Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly

450 455 460

Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala

465 470 475 480

Leu Pro Pro Arg

<210> 113

<211> 485

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 113

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu

20 25 30

Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe

35 40 45

Ala Leu Ser Asn His Gly Met Ser Trp Val Arg Arg Ala Pro Gly Lys

50 55 60

Gly Leu Glu Trp Val Ser Gly Ile Val Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr

65 70 75 80

Ala Ala Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Arg

85 90 95

Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala

100 105 110

Ile Tyr Tyr Cys Ser Ala His Gly Gly Glu Ser Asp Val Trp Gly Gln

115 120 125

Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

130 135 140

Gly Arg Ala Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser

145 150 155 160

Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys

165 170 175

Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Ser Ser Ser Leu Ala Trp Tyr Gln Gln

180 185 190

Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Met Tyr Gly Ala Ser Ser Arg

195 200 205

Ala Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp

210 215 220

Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr

225 230 235 240

Tyr Cys Gln Gln Tyr Ala Gly Ser Pro Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly

245 250 255

Thr Lys Val Glu Ile Lys Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr

260 265 270

Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala

275 280 285

Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe

290 295 300

Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val

305 310 315 320

Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys

325 330 335

Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr

340 345 350

Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu

355 360 365

Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro

370 375 380

Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly

385 390 395 400

Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro

405 410 415

Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr

420 425 430

Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly

435 440 445

Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln

450 455 460

Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln

465 470 475 480

Ala Leu Pro Pro Arg

485

<210> 114

<211> 1470

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полинуклеотид

<400> 114

atggccctcc ctgtcaccgc cctgctgctt ccgctggctc ttctgctcca cgccgctcgg 60

ccccaagtgc aactcgtgga atctggtgga ggactcgtgc aacccggaag atcgcttaga 120

ctgtcgtgtg ccgccagcgg gttcactttc tcgaactacg cgatgtcctg ggtccgccag 180

gcacccggaa agggactcgg ttgggtgtcc ggcatttccc ggtccggcga aaatacctac 240

tacgccgact ccgtgaaggg ccgcttcacc atctcaaggg acaacagcaa aaacaccctg 300

tacttgcaaa tgaactccct gcgggatgaa gatacagccg tgtactattg cgcccggtcg 360

cctgcccatt actacggcgg aatggacgtc tggggacagg gaaccactgt gactgtcagc 420

agcgcgtcgg gtggcggcgg ctcagggggt cgggcctccg gggggggagg gtccgacatc 480

gtgctgaccc agtccccggg aaccctgagc ctgagcccgg gagagcgcgc gaccctgtca 540

tgccgggcat cccagagcat tagctcctcc tttctcgcct ggtatcagca gaagcccgga 600

caggccccga ggctgctgat ctacggcgct agcagaaggg ctaccggaat cccagaccgg 660

ttctccggct ccggttccgg gaccgatttc acccttacta tctcgcgcct ggaacctgag 720

gactccgccg tctactactg ccagcagtac cactcatccc cgtcgtggac gttcggacag 780

ggcaccaagc tggagattaa gaccactacc ccagcaccga ggccacccac cccggctcct 840

accatcgcct cccagcctct gtccctgcgt ccggaggcat gtagacccgc agctggtggg 900

gccgtgcata cccggggtct tgacttcgcc tgcgatatct acatttgggc ccctctggct 960

ggtacttgcg gggtcctgct gctttcactc gtgatcactc tttactgtaa gcgcggtcgg 1020

aagaagctgc tgtacatctt taagcaaccc ttcatgaggc ctgtgcagac tactcaagag 1080

gaggacggct gttcatgccg gttcccagag gaggaggaag gcggctgcga actgcgcgtg 1140

aaattcagcc gcagcgcaga tgctccagcc tacaagcagg ggcagaacca gctctacaac 1200

gaactcaatc ttggtcggag agaggagtac gacgtgctgg acaagcggag aggacgggac 1260

ccagaaatgg gcgggaagcc gcgcagaaag aatccccaag agggcctgta caacgagctc 1320

caaaaggata agatggcaga agcctatagc gagattggta tgaaagggga acgcagaaga 1380

ggcaaaggcc acgacggact gtaccaggga ctcagcaccg ccaccaagga cacctatgac 1440

gctcttcaca tgcaggccct gccgcctcgg 1470

<210> 115

<211> 1464

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полинуклеотид

<400> 115

atggccctcc ctgtcaccgc cctgctgctt ccgctggctc ttctgctcca cgccgctcgg 60

ccccaagtgc aactcgtcga atccggtgga ggtctggtcc aacctggtag aagcctgaga 120

ctgtcgtgtg cggccagcgg attcaccttt gatgactatg ctatgcactg ggtgcggcag 180

gccccaggaa agggcctgga atgggtgtcg ggaattagct ggaactccgg gtccattggc 240

tacgccgact ccgtgaaggg ccgcttcacc atctcccgcg acaacgcaaa gaactccctg 300

tacttgcaaa tgaactcgct cagggctgag gataccgcgc tgtactactg ctccgtgcat 360

tccttcctgg cctactgggg acagggaact ctggtcaccg tgtcgagcgc ctccggcggc 420

gggggctcgg gtggacgggc ctcgggcgga ggggggtccg acatcgtgat gacccagacc 480

ccgctgagct tgcccgtgac tcccggagag cctgcatcca tctcctgccg gtcatcccag 540

tcccttctcc actccaacgg atacaactac ctcgactggt acctccagaa gccgggacag 600

agccctcagc ttctgatcta cctggggtca aatagagcct caggagtgcc ggatcggttc 660

agcggatctg gttcgggaac tgatttcact ctgaagattt cccgcgtgga agccgaggac 720

gtgggcgtct actactgtat gcaggcgctg cagaccccct ataccttcgg ccaagggacg 780

aaagtggaga tcaagaccac taccccagca ccgaggccac ccaccccggc tcctaccatc 840

gcctcccagc ctctgtccct gcgtccggag gcatgtagac ccgcagctgg tggggccgtg 900

catacccggg gtcttgactt cgcctgcgat atctacattt gggcccctct ggctggtact 960

tgcggggtcc tgctgctttc actcgtgatc actctttact gtaagcgcgg tcggaagaag 1020

ctgctgtaca tctttaagca acccttcatg aggcctgtgc agactactca agaggaggac 1080

ggctgttcat gccggttccc agaggaggag gaaggcggct gcgaactgcg cgtgaaattc 1140

agccgcagcg cagatgctcc agcctacaag caggggcaga accagctcta caacgaactc 1200

aatcttggtc ggagagagga gtacgacgtg ctggacaagc ggagaggacg ggacccagaa 1260

atgggcggga agccgcgcag aaagaatccc caagagggcc tgtacaacga gctccaaaag 1320

gataagatgg cagaagccta tagcgagatt ggtatgaaag gggaacgcag aagaggcaaa 1380

ggccacgacg gactgtacca gggactcagc accgccacca aggacaccta tgacgctctt 1440

cacatgcagg ccctgccgcc tcgg 1464

<210> 116

<211> 1461

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полинуклеотид

<400> 116

atggccctcc ctgtcaccgc cctgctgctt ccgctggctc ttctgctcca cgccgctcgg 60

cccgaagtgc aattgttgga atctggagga ggacttgtgc agcctggagg atcactgaga 120

ctttcgtgtg cggtgtcagg cttcgccctg agcaaccacg gcatgagctg ggtgcggaga 180

gccccgggga agggtctgga atgggtgtcc gggatcgtct actccggttc aacttactac 240

gccgcaagcg tgaagggtcg cttcaccatt tcccgcgata actcccggaa caccctgtac 300

ctccaaatga actccctgcg gcccgaggac accgccatct actactgttc cgcgcatgga 360

ggagagtccg atgtctgggg acagggcact accgtgaccg tgtcgagcgc ctcgggggga 420

ggaggctccg gcggtcgcgc ctccgggggg ggtggcagcg acattgtgat gacgcagact 480

ccactctcgc tgtccgtgac cccgggacag cccgcgtcca tctcgtgcaa gagctcccag 540

agcctgctga ggaacgacgg aaagactcct ctgtattggt acctccagaa ggctggacag 600

cccccgcaac tgctcatcta cgaagtgtca aatcgcttct ccggggtgcc ggatcggttt 660

tccggctcgg gatcgggcac cgacttcacc ctgaaaatct ccagggtcga ggccgaggac 720

gtgggagcct actactgcat gcaaaacatc cagttccctt ccttcggcgg cggcacaaag 780

ctggagatta agaccactac cccagcaccg aggccaccca ccccggctcc taccatcgcc 840

tcccagcctc tgtccctgcg tccggaggca tgtagacccg cagctggtgg ggccgtgcat 900

acccggggtc ttgacttcgc ctgcgatatc tacatttggg cccctctggc tggtacttgc 960

ggggtcctgc tgctttcact cgtgatcact ctttactgta agcgcggtcg gaagaagctg 1020

ctgtacatct ttaagcaacc cttcatgagg cctgtgcaga ctactcaaga ggaggacggc 1080

tgttcatgcc ggttcccaga ggaggaggaa ggcggctgcg aactgcgcgt gaaattcagc 1140

cgcagcgcag atgctccagc ctacaagcag gggcagaacc agctctacaa cgaactcaat 1200

cttggtcgga gagaggagta cgacgtgctg gacaagcgga gaggacggga cccagaaatg 1260

ggcgggaagc cgcgcagaaa gaatccccaa gagggcctgt acaacgagct ccaaaaggat 1320

aagatggcag aagcctatag cgagattggt atgaaagggg aacgcagaag aggcaaaggc 1380

cacgacggac tgtaccaggg actcagcacc gccaccaagg acacctatga cgctcttcac 1440

atgcaggccc tgccgcctcg g 1461

<210> 117

<211> 1479

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полинуклеотид

<400> 117

atggccctcc ctgtcaccgc cctgctgctt ccgctggctc ttctgctcca cgccgctcgg 60

ccccaagtcc aactcgtcca gtccggcgca gaagtcagaa aaaccggtgc tagcgtgaaa 120

gtgtcctgca aggcctccgg ctacattttc gataacttcg gaatcaactg ggtcagacag 180

gccccgggcc aggggctgga atggatggga tggatcaacc ccaagaacaa caacaccaac 240

tacgcacaga agttccaggg ccgcgtgact atcaccgccg atgaatcgac caataccgcc 300

tacatggagg tgtcctccct gcggtcggag gacactgccg tgtattactg cgcgaggggc 360

ccatactact accaaagcta catggacgtc tggggacagg gaaccatggt gaccgtgtca 420

tccgcctccg gtggtggagg ctccgggggg cgggcttcag gaggcggagg aagcgatatt 480

gtgatgaccc agactccgct tagcctgccc gtgactcctg gagaaccggc ctccatttcc 540

tgccggtcct cgcaatcact cctgcattcc aacggttaca actacctgaa ttggtacctc 600

cagaagcctg gccagtcgcc ccagttgctg atctatctgg gctcgaagcg cgcctccggg 660

gtgcctgacc ggtttagcgg atctgggagc ggcacggact tcactctcca catcacccgc 720

gtgggagcgg aggacgtggg agtgtactac tgtatgcagg cgctgcagac tccgtacaca 780

ttcggacagg gcaccaagct ggagatcaag accactaccc cagcaccgag gccacccacc 840

ccggctccta ccatcgcctc ccagcctctg tccctgcgtc cggaggcatg tagacccgca 900

gctggtgggg ccgtgcatac ccggggtctt gacttcgcct gcgatatcta catttgggcc 960

cctctggctg gtacttgcgg ggtcctgctg ctttcactcg tgatcactct ttactgtaag 1020

cgcggtcgga agaagctgct gtacatcttt aagcaaccct tcatgaggcc tgtgcagact 1080

actcaagagg aggacggctg ttcatgccgg ttcccagagg aggaggaagg cggctgcgaa 1140

ctgcgcgtga aattcagccg cagcgcagat gctccagcct acaagcaggg gcagaaccag 1200

ctctacaacg aactcaatct tggtcggaga gaggagtacg acgtgctgga caagcggaga 1260

ggacgggacc cagaaatggg cgggaagccg cgcagaaaga atccccaaga gggcctgtac 1320

aacgagctcc aaaaggataa gatggcagaa gcctatagcg agattggtat gaaaggggaa 1380

cgcagaagag gcaaaggcca cgacggactg taccagggac tcagcaccgc caccaaggac 1440

acctatgacg ctcttcacat gcaggccctg ccgcctcgg 1479

<210> 118

<211> 1470

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полинуклеотид

<400> 118

atggccctcc ctgtcaccgc cctgctgctt ccgctggctc ttctgctcca cgccgctcgg 60

ccccaagtgc aacttcaaga atcaggcgga ggactcgtgc agcccggagg atcattgcgg 120

ctctcgtgcg ccgcctcggg cttcaccttc tcgagcgacg ccatgacctg ggtccgccag 180

gccccgggga aggggctgga atgggtgtct gtgatttccg gctccggggg aactacgtac 240

tacgccgatt ccgtgaaagg tcgcttcact atctcccggg acaacagcaa gaacaccctt 300

tatctgcaaa tgaattccct ccgcgccgag gacaccgccg tgtactactg cgccaagctg 360

gactcctcgg gctactacta tgcccggggt ccgagatact ggggacaggg aaccctcgtg 420

accgtgtcct ccgcgtccgg cggaggaggg tcgggagggc gggcctccgg cggcggcggt 480

tcggacatcc agctgaccca gtccccatcc tcactgagcg caagcgtggg cgacagagtc 540

accattacat gcagggcgtc ccagagcatc agctcctacc tgaactggta ccaacagaag 600

cctggaaagg ctcctaagct gttgatctac ggggcttcga ccctggcatc cggggtgccc 660

gcgaggttta gcggaagcgg tagcggcact cacttcactc tgaccattaa cagcctccag 720

tccgaggatt cagccactta ctactgtcag cagtcctaca agcgggccag cttcggacag 780

ggcactaagg tcgagatcaa gaccactacc ccagcaccga ggccacccac cccggctcct 840

accatcgcct cccagcctct gtccctgcgt ccggaggcat gtagacccgc agctggtggg 900

gccgtgcata cccggggtct tgacttcgcc tgcgatatct acatttgggc ccctctggct 960

ggtacttgcg gggtcctgct gctttcactc gtgatcactc tttactgtaa gcgcggtcgg 1020

aagaagctgc tgtacatctt taagcaaccc ttcatgaggc ctgtgcagac tactcaagag 1080

gaggacggct gttcatgccg gttcccagag gaggaggaag gcggctgcga actgcgcgtg 1140

aaattcagcc gcagcgcaga tgctccagcc tacaagcagg ggcagaacca gctctacaac 1200

gaactcaatc ttggtcggag agaggagtac gacgtgctgg acaagcggag aggacgggac 1260

ccagaaatgg gcgggaagcc gcgcagaaag aatccccaag agggcctgta caacgagctc 1320

caaaaggata agatggcaga agcctatagc gagattggta tgaaagggga acgcagaaga 1380

ggcaaaggcc acgacggact gtaccaggga ctcagcaccg ccaccaagga cacctatgac 1440

gctcttcaca tgcaggccct gccgcctcgg 1470

<210> 119

<211> 1473

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полинуклеотид

<400> 119

atggccctcc ctgtcaccgc cctgctgctt ccgctggctc ttctgctcca cgccgctcgg 60

ccccaagtcc aactggtcca gagcggtgca gaagtgaaga agcccggagc gagcgtgaaa 120

gtgtcctgca aggcttccgg gtacaccttc tccaactacg gcatcacttg ggtgcgccag 180

gccccgggac agggcctgga atggatgggg tggatttccg cgtacaacgg caatacgaac 240

tacgctcaga agttccaggg tagagtgacc atgactagga acacctccat ttccaccgcc 300

tacatggaac tgtcctccct gcggagcgag gacaccgccg tgtactattg cgcccgggga 360

ccatactact actacatgga tgtctggggg aaggggacta tggtcaccgt gtcatccgcc 420

tcgggaggcg gcggatcagg aggacgcgcc tctggtggtg gaggatcgga gatcgtgatg 480

acccagagcc ctctctcctt gcccgtgact cctggggagc ccgcatccat ttcatgccgg 540

agctcccagt cacttctcta ctccaacggc tataactacg tggattggta cctccaaaag 600

ccgggccaga gcccgcagct gctgatctac ctgggctcga acagggccag cggagtgcct 660

gaccggttct ccgggtcggg aagcgggacc gacttcaagc tgcaaatctc gagagtggag 720

gccgaggacg tgggaatcta ctactgtatg cagggccgcc agtttccgta ctcgttcgga 780

cagggcacca aagtggaaat caagaccact accccagcac cgaggccacc caccccggct 840

cctaccatcg cctcccagcc tctgtccctg cgtccggagg catgtagacc cgcagctggt 900

ggggccgtgc atacccgggg tcttgacttc gcctgcgata tctacatttg ggcccctctg 960

gctggtactt gcggggtcct gctgctttca ctcgtgatca ctctttactg taagcgcggt 1020

cggaagaagc tgctgtacat ctttaagcaa cccttcatga ggcctgtgca gactactcaa 1080

gaggaggacg gctgttcatg ccggttccca gaggaggagg aaggcggctg cgaactgcgc 1140

gtgaaattca gccgcagcgc agatgctcca gcctacaagc aggggcagaa ccagctctac 1200

aacgaactca atcttggtcg gagagaggag tacgacgtgc tggacaagcg gagaggacgg 1260

gacccagaaa tgggcgggaa gccgcgcaga aagaatcccc aagagggcct gtacaacgag 1320

ctccaaaagg ataagatggc agaagcctat agcgagattg gtatgaaagg ggaacgcaga 1380

agaggcaaag gccacgacgg actgtaccag ggactcagca ccgccaccaa ggacacctat 1440

gacgctcttc acatgcaggc cctgccgcct cgg 1473

<210> 120

<211> 1446

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полинуклеотид

<400> 120

atggccctcc ctgtcaccgc cctgctgctt ccgctggctc ttctgctcca cgccgctcgg 60

cccgaagtgc aattgctcga aactggagga ggtctggtgc aacctggagg atcacttcgc 120

ctgtcctgcg ccgtgtcggg ctttgccctg tccaaccatg gaatgagctg ggtccgccgc 180

gcgccgggga agggcctcga atgggtgtcc ggcatcgtct actccggctc cacctactac 240

gccgcgtccg tgaagggccg gttcacgatt tcacgggaca actcgcggaa caccctgtac 300

ctccaaatga attcccttcg gccggaggat actgccatct actactgctc cgcccacggt 360

ggcgaatccg acgtctgggg ccagggaacc accgtgaccg tgtccagcgc gtccggggga 420

ggaggaagcg ggggtagagc atcgggtgga ggcggatcag agatcgtgct gacccagtcc 480

cccgccacct tgagcgtgtc accaggagag tccgccaccc tgtcatgccg cgccagccag 540

tccgtgtcct ccaacctggc ttggtaccag cagaagccgg ggcaggcccc tagactcctg 600

atctatgggg cgtcgacccg ggcatctgga attcccgata ggttcagcgg atcgggctcg 660

ggcactgact tcactctgac catctcctcg ctgcaagccg aggacgtggc tgtgtactac 720

tgtcagcagt acggaagctc cctgactttc ggtggcggga ccaaagtcga gattaagacc 780

actaccccag caccgaggcc acccaccccg gctcctacca tcgcctccca gcctctgtcc 840

ctgcgtccgg aggcatgtag acccgcagct ggtggggccg tgcatacccg gggtcttgac 900

ttcgcctgcg atatctacat ttgggcccct ctggctggta cttgcggggt cctgctgctt 960

tcactcgtga tcactcttta ctgtaagcgc ggtcggaaga agctgctgta catctttaag 1020

caacccttca tgaggcctgt gcagactact caagaggagg acggctgttc atgccggttc 1080

ccagaggagg aggaaggcgg ctgcgaactg cgcgtgaaat tcagccgcag cgcagatgct 1140

ccagcctaca agcaggggca gaaccagctc tacaacgaac tcaatcttgg tcggagagag 1200

gagtacgacg tgctggacaa gcggagagga cgggacccag aaatgggcgg gaagccgcgc 1260

agaaagaatc cccaagaggg cctgtacaac gagctccaaa aggataagat ggcagaagcc 1320

tatagcgaga ttggtatgaa aggggaacgc agaagaggca aaggccacga cggactgtac 1380

cagggactca gcaccgccac caaggacacc tatgacgctc ttcacatgca ggccctgccg 1440

cctcgg 1446

<210> 121

<211> 1449

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полинуклеотид

<400> 121

atggccctcc ctgtcaccgc cctgctgctt ccgctggctc ttctgctcca cgccgctcgg 60

cccgaagtgc aattggtgga aactggagga ggacttgtgc aacctggagg atcattgaga 120

ctgagctgcg cagtgtcggg attcgccctg agcaaccatg gaatgtcctg ggtcagaagg 180

gcccctggaa aaggcctcga atgggtgtca gggatcgtgt actccggttc cacttactac 240

gccgcctccg tgaaggggcg cttcactatc tcacgggata actcccgcaa taccctgtac 300

ctccaaatga acagcctgcg gccggaggat accgccatct actactgttc cgcccacggt 360

ggagagtctg acgtctgggg ccagggaact accgtgaccg tgtcctccgc gtccggcggt 420

ggagggagcg gcggccgcgc cagcggcggc ggaggctccg agatcgtgat gacccagagc 480

cccgctactc tgtcggtgtc gcccggagaa agggcgaccc tgtcctgccg ggcgtcgcag 540

tccgtgagca gcaagctggc ttggtaccag cagaagccgg gccaggcacc acgcctgctt 600

atgtacggtg cctccattcg ggccaccgga atcccggacc ggttctcggg gtcggggtcc 660

ggtaccgagt tcacactgac catttcctcg ctcgagcccg aggactttgc cgtctattac 720

tgccagcagt acggctcctc ctcatggacg ttcggccagg ggaccaaggt cgaaatcaag 780

accactaccc cagcaccgag gccacccacc ccggctccta ccatcgcctc ccagcctctg 840

tccctgcgtc cggaggcatg tagacccgca gctggtgggg ccgtgcatac ccggggtctt 900

gacttcgcct gcgatatcta catttgggcc cctctggctg gtacttgcgg ggtcctgctg 960

ctttcactcg tgatcactct ttactgtaag cgcggtcgga agaagctgct gtacatcttt 1020

aagcaaccct tcatgaggcc tgtgcagact actcaagagg aggacggctg ttcatgccgg 1080

ttcccagagg aggaggaagg cggctgcgaa ctgcgcgtga aattcagccg cagcgcagat 1140

gctccagcct acaagcaggg gcagaaccag ctctacaacg aactcaatct tggtcggaga 1200

gaggagtacg acgtgctgga caagcggaga ggacgggacc cagaaatggg cgggaagccg 1260

cgcagaaaga atccccaaga gggcctgtac aacgagctcc aaaaggataa gatggcagaa 1320

gcctatagcg agattggtat gaaaggggaa cgcagaagag gcaaaggcca cgacggactg 1380

taccagggac tcagcaccgc caccaaggac acctatgacg ctcttcacat gcaggccctg 1440

ccgcctcgg 1449

<210> 122

<211> 1455

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полинуклеотид

<400> 122

atggccctcc ctgtcaccgc cctgctgctt ccgctggctc ttctgctcca cgccgctcgg 60

cccgaagtgc aattggtgga gactggagga ggagtggtgc aacctggagg aagcctgaga 120

ctgtcatgcg cggtgtcggg cttcgccctc tccaaccacg gaatgtcctg ggtccgccgg 180

gcccctggga aaggacttga atgggtgtcc ggcatcgtgt actcgggttc cacctactac 240

gcggcctcag tgaagggccg gtttactatt agccgcgaca actccagaaa cacactgtac 300

ctccaaatga actcgctgcg gccggaagat accgctatct actactgctc cgcccatggg 360

ggagagtcgg acgtctgggg acagggcacc actgtcactg tgtccagcgc ttccggcggt 420

ggtggaagcg ggggacgggc ctcaggaggc ggtggcagcg agattgtgct gacccagtcc 480

cccgggaccc tgagcctgtc cccgggagaa agggccaccc tctcctgtcg ggcatcccag 540

tccgtggggt ctactaacct tgcatggtac cagcagaagc ccggccaggc ccctcgcctg 600

ctgatctacg acgcgtccaa tagagccacc ggcatcccgg atcgcttcag cggaggcgga 660

tcgggcaccg acttcaccct caccatttca aggctggaac cggaggactt cgccgtgtac 720

tactgccagc agtatggttc gtccccaccc tggacgttcg gccaggggac taaggtcgag 780

atcaagacca ctaccccagc accgaggcca cccaccccgg ctcctaccat cgcctcccag 840

cctctgtccc tgcgtccgga ggcatgtaga cccgcagctg gtggggccgt gcatacccgg 900

ggtcttgact tcgcctgcga tatctacatt tgggcccctc tggctggtac ttgcggggtc 960

ctgctgcttt cactcgtgat cactctttac tgtaagcgcg gtcggaagaa gctgctgtac 1020

atctttaagc aacccttcat gaggcctgtg cagactactc aagaggagga cggctgttca 1080

tgccggttcc cagaggagga ggaaggcggc tgcgaactgc gcgtgaaatt cagccgcagc 1140

gcagatgctc cagcctacaa gcaggggcag aaccagctct acaacgaact caatcttggt 1200

cggagagagg agtacgacgt gctggacaag cggagaggac gggacccaga aatgggcggg 1260

aagccgcgca gaaagaatcc ccaagagggc ctgtacaacg agctccaaaa ggataagatg 1320

gcagaagcct atagcgagat tggtatgaaa ggggaacgca gaagaggcaa aggccacgac 1380

ggactgtacc agggactcag caccgccacc aaggacacct atgacgctct tcacatgcag 1440

gccctgccgc ctcgg 1455

<210> 123

<211> 1449

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полинуклеотид

<400> 123

atggccctcc ctgtcaccgc cctgctgctt ccgctggctc ttctgctcca cgccgctcgg 60

ccccaagtgc aactcgtgga atctggtgga ggactcgtga aacctggagg atcattgaga 120

ctgtcatgcg cggcctcggg attcacgttc tccgattact acatgagctg gattcgccag 180

gctccgggga agggactgga atgggtgtcc tacatttcct catccggctc caccatctac 240

tacgcggact ccgtgaaggg gagattcacc attagccgcg ataacgccaa gaacagcctg 300

taccttcaga tgaactccct gcgggctgaa gatactgccg tctactactg cgcaagggag 360

agcggagatg ggatggacgt ctggggacag ggtaccactg tgaccgtgtc gtcggcctcc 420

ggcggagggg gttcgggtgg aagggccagc ggcggcggag gcagcgacat ccagatgacc 480

cagtccccct catcgctgtc cgcctccgtg ggcgaccgcg tcaccatcac atgccgggcc 540

tcacagtcga tctcctccta cctcaattgg tatcagcaga agcccggaaa ggcccctaag 600

cttctgatct acgcagcgtc ctccctgcaa tccggggtcc catctcggtt ctccggctcg 660

ggcagcggta ccgacttcac tctgaccatc tcgagcctgc agccggagga cttcgccact 720

tactactgtc agcaaagcta caccctcgcg tttggccagg gcaccaaagt ggacatcaag 780

accactaccc cagcaccgag gccacccacc ccggctccta ccatcgcctc ccagcctctg 840

tccctgcgtc cggaggcatg tagacccgca gctggtgggg ccgtgcatac ccggggtctt 900

gacttcgcct gcgatatcta catttgggcc cctctggctg gtacttgcgg ggtcctgctg 960

ctttcactcg tgatcactct ttactgtaag cgcggtcgga agaagctgct gtacatcttt 1020

aagcaaccct tcatgaggcc tgtgcagact actcaagagg aggacggctg ttcatgccgg 1080

ttcccagagg aggaggaagg cggctgcgaa ctgcgcgtga aattcagccg cagcgcagat 1140

gctccagcct acaagcaggg gcagaaccag ctctacaacg aactcaatct tggtcggaga 1200

gaggagtacg acgtgctgga caagcggaga ggacgggacc cagaaatggg cgggaagccg 1260

cgcagaaaga atccccaaga gggcctgtac aacgagctcc aaaaggataa gatggcagaa 1320

gcctatagcg agattggtat gaaaggggaa cgcagaagag gcaaaggcca cgacggactg 1380

taccagggac tcagcaccgc caccaaggac acctatgacg ctcttcacat gcaggccctg 1440

ccgcctcgg 1449

<210> 124

<211> 1449

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полинуклеотид

<400> 124

atggccctcc ctgtcaccgc cctgctgctt ccgctggctc ttctgctcca cgccgctcgg 60

cccgaagtgc aattggtgga atcaggggga ggacttgtgc agcctggagg atcgctgaga 120

ctgtcatgtg ccgtgtccgg ctttgccctg tccaaccacg ggatgtcctg ggtccgccgc 180

gcgcctggaa agggcctcga atgggtgtcg ggtattgtgt acagcggtag cacctactat 240

gccgcatccg tgaaggggag attcaccatc agccgggaca actccaggaa cactctgtac 300

ctccaaatga attcgctgag gccagaggac actgccatct actactgctc cgcgcatggc 360

ggagagtccg acgtctgggg acaggggacc accgtgaccg tgtctagcgc gtccggcgga 420

ggcggcagcg ggggtcgggc atcagggggc ggcggatcgg acatccagct cacccagtcc 480

ccgagctcgc tgtccgcctc cgtgggagat cgggtcacca tcacgtgccg cgccagccag 540

tcgatttcct cctacctgaa ctggtaccaa cagaagcccg gaaaagcccc gaagcttctc 600

atctacgccg cctcgagcct gcagtcagga gtgccctcac ggttctccgg ctccggttcc 660

ggtactgatt tcaccctgac catttcctcc ctgcaaccgg aggacttcgc tacttactac 720

tgccagcagt cgtactccac cccctacact ttcggacaag gcaccaaggt cgaaatcaag 780

accactaccc cagcaccgag gccacccacc ccggctccta ccatcgcctc ccagcctctg 840

tccctgcgtc cggaggcatg tagacccgca gctggtgggg ccgtgcatac ccggggtctt 900

gacttcgcct gcgatatcta catttgggcc cctctggctg gtacttgcgg ggtcctgctg 960

ctttcactcg tgatcactct ttactgtaag cgcggtcgga agaagctgct gtacatcttt 1020

aagcaaccct tcatgaggcc tgtgcagact actcaagagg aggacggctg ttcatgccgg 1080

ttcccagagg aggaggaagg cggctgcgaa ctgcgcgtga aattcagccg cagcgcagat 1140

gctccagcct acaagcaggg gcagaaccag ctctacaacg aactcaatct tggtcggaga 1200

gaggagtacg acgtgctgga caagcggaga ggacgggacc cagaaatggg cgggaagccg 1260

cgcagaaaga atccccaaga gggcctgtac aacgagctcc aaaaggataa gatggcagaa 1320

gcctatagcg agattggtat gaaaggggaa cgcagaagag gcaaaggcca cgacggactg 1380

taccagggac tcagcaccgc caccaaggac acctatgacg ctcttcacat gcaggccctg 1440

ccgcctcgg 1449

<210> 125

<211> 1470

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полинуклеотид

<400> 125

atggccctcc ctgtcaccgc cctgctgctt ccgctggctc ttctgctcca cgccgctcgg 60

ccccaagtgc aactggtgca aagcggagga ggattggtca aacccggagg aagcctgaga 120

ctgtcatgcg cggcctctgg attcaccttc tccgattact acatgtcatg gatcagacag 180

gccccgggga agggcctcga atgggtgtcc tacatctcgt cctccgggaa caccatctac 240

tacgccgaca gcgtgaaggg ccgctttacc atttcccgcg acaacgcaaa gaactcgctg 300

taccttcaga tgaattccct gcgggctgaa gataccgcgg tgtactattg cgcccggtcc 360

actatggtcc gggaggacta ctggggacag ggcacactcg tgaccgtgtc cagcgcgagc 420

gggggtggag gcagcggtgg acgcgcctcc ggcggcggcg gttcagacat cgtgctgact 480

cagtcgcccc tgtcgctgcc ggtcaccctg ggccaaccgg cctcaattag ctgcaagtcc 540

tcggagagcc tggtgcacaa ctcaggaaag acttacctga actggttcca tcagcggcct 600

ggacagtccc cacggaggct catctatgaa gtgtccaaca gggattcggg ggtgcccgac 660

cgcttcactg gctccgggtc cggcaccgac ttcaccttga aaatctccag agtggaagcc 720

gaggacgtgg gcgtgtacta ctgtatgcag ggtacccact ggcctggaac ctttggacaa 780

ggaactaagc tcgagattaa gaccactacc ccagcaccga ggccacccac cccggctcct 840

accatcgcct cccagcctct gtccctgcgt ccggaggcat gtagacccgc agctggtggg 900

gccgtgcata cccggggtct tgacttcgcc tgcgatatct acatttgggc ccctctggct 960

ggtacttgcg gggtcctgct gctttcactc gtgatcactc tttactgtaa gcgcggtcgg 1020

aagaagctgc tgtacatctt taagcaaccc ttcatgaggc ctgtgcagac tactcaagag 1080

gaggacggct gttcatgccg gttcccagag gaggaggaag gcggctgcga actgcgcgtg 1140

aaattcagcc gcagcgcaga tgctccagcc tacaagcagg ggcagaacca gctctacaac 1200

gaactcaatc ttggtcggag agaggagtac gacgtgctgg acaagcggag aggacgggac 1260

ccagaaatgg gcgggaagcc gcgcagaaag aatccccaag agggcctgta caacgagctc 1320

caaaaggata agatggcaga agcctatagc gagattggta tgaaagggga acgcagaaga 1380

ggcaaaggcc acgacggact gtaccaggga ctcagcaccg ccaccaagga cacctatgac 1440

gctcttcaca tgcaggccct gccgcctcgg 1470

<210> 126

<211> 1449

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полинуклеотид

<400> 126

atggccctcc ctgtcaccgc cctgctgctt ccgctggctc ttctgctcca cgccgctcgg 60

ccccaagtgc aactcgtgga atctggtgga ggactcgtgc aacccggtgg aagccttagg 120

ctgtcgtgcg ccgtcagcgg gtttgctctg agcaaccatg gaatgtcctg ggtccgccgg 180

gcaccgggaa aagggctgga atgggtgtcc ggcatcgtgt acagcgggtc aacctattac 240

gccgcgtccg tgaagggcag attcactatc tcaagagaca acagccggaa caccctgtac 300

ttgcaaatga attccctgcg ccccgaggac accgccatct actactgctc cgcccacgga 360

ggagagtcgg acgtgtgggg ccagggaacg actgtgactg tgtccagcgc atcaggaggg 420

ggtggttcgg gcggccgggc ctcgggggga ggaggttccg acattcggct gacccagtcc 480

ccgtccccac tgtcggcctc cgtcggcgac cgcgtgacca tcacttgtca ggcgtccgag 540

gacattaaca agttcctgaa ctggtaccac cagacccctg gaaaggcccc caagctgctg 600

atctacgatg cctcgaccct tcaaactgga gtgcctagcc ggttctccgg gtccggctcc 660

ggcactgatt tcactctgac catcaactca ttgcagccgg aagatatcgg gacctactat 720

tgccagcagt acgaatccct cccgctcaca ttcggcgggg gaaccaaggt cgagattaag 780

accactaccc cagcaccgag gccacccacc ccggctccta ccatcgcctc ccagcctctg 840

tccctgcgtc cggaggcatg tagacccgca gctggtgggg ccgtgcatac ccggggtctt 900

gacttcgcct gcgatatcta catttgggcc cctctggctg gtacttgcgg ggtcctgctg 960

ctttcactcg tgatcactct ttactgtaag cgcggtcgga agaagctgct gtacatcttt 1020

aagcaaccct tcatgaggcc tgtgcagact actcaagagg aggacggctg ttcatgccgg 1080

ttcccagagg aggaggaagg cggctgcgaa ctgcgcgtga aattcagccg cagcgcagat 1140

gctccagcct acaagcaggg gcagaaccag ctctacaacg aactcaatct tggtcggaga 1200

gaggagtacg acgtgctgga caagcggaga ggacgggacc cagaaatggg cgggaagccg 1260

cgcagaaaga atccccaaga gggcctgtac aacgagctcc aaaaggataa gatggcagaa 1320

gcctatagcg agattggtat gaaaggggaa cgcagaagag gcaaaggcca cgacggactg 1380

taccagggac tcagcaccgc caccaaggac acctatgacg ctcttcacat gcaggccctg 1440

ccgcctcgg 1449

<210> 127

<211> 1452

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полинуклеотид

<400> 127

atggccctcc ctgtcaccgc cctgctgctt ccgctggctc ttctgctcca cgccgctcgg 60

cccgaagtgc aattggtgga aactggagga ggacttgtgc aacctggagg atcattgcgg 120

ctctcatgcg ctgtctccgg cttcgccctg tcaaatcacg ggatgtcgtg ggtcagacgg 180

gccccgggaa agggtctgga atgggtgtcg gggattgtgt acagcggctc cacctactac 240

gccgcttcgg tcaagggccg cttcactatt tcacgggaca acagccgcaa caccctctat 300

ctgcaaatga actctctccg cccggaggat accgccatct actactgctc cgcacacggc 360

ggcgaatccg acgtgtgggg acagggaacc actgtcaccg tgtcgtccgc atccggtggc 420

ggaggatcgg gtggccgggc ctccgggggc ggcggcagcg agactaccct gacccagtcc 480

cctgccactc tgtccgtgag cccgggagag agagccaccc ttagctgccg ggccagccag 540

agcgtgggct ccaacctggc ctggtaccag cagaagccag gacagggtcc caggctgctg 600

atctacggag cctccactcg cgcgaccggc atccccgcga ggttctccgg gtcgggttcc 660

gggaccgagt tcaccctgac catctcctcc ctccaaccgg aggacttcgc ggtgtactac 720

tgtcagcagt acaacgattg gctgcccgtg acatttggac aggggacgaa ggtggaaatc 780

aaaaccacta ccccagcacc gaggccaccc accccggctc ctaccatcgc ctcccagcct 840

ctgtccctgc gtccggaggc atgtagaccc gcagctggtg gggccgtgca tacccggggt 900

cttgacttcg cctgcgatat ctacatttgg gcccctctgg ctggtacttg cggggtcctg 960

ctgctttcac tcgtgatcac tctttactgt aagcgcggtc ggaagaagct gctgtacatc 1020

tttaagcaac ccttcatgag gcctgtgcag actactcaag aggaggacgg ctgttcatgc 1080

cggttcccag aggaggagga aggcggctgc gaactgcgcg tgaaattcag ccgcagcgca 1140

gatgctccag cctacaagca ggggcagaac cagctctaca acgaactcaa tcttggtcgg 1200

agagaggagt acgacgtgct ggacaagcgg agaggacggg acccagaaat gggcgggaag 1260

ccgcgcagaa agaatcccca agagggcctg tacaacgagc tccaaaagga taagatggca 1320

gaagcctata gcgagattgg tatgaaaggg gaacgcagaa gaggcaaagg ccacgacgga 1380

ctgtaccagg gactcagcac cgccaccaag gacacctatg acgctcttca catgcaggcc 1440

ctgccgcctc gg 1452

<210> 128

<211> 1455

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полинуклеотид

<400> 128

atggccctcc ctgtcaccgc cctgctgctt ccgctggctc ttctgctcca cgccgctcgg 60

cccgaagtgc aattggtgga atctggtgga ggacttgtgc aacctggagg atcactgaga 120

ctgtcatgcg cggtgtccgg ttttgccctg agcaatcatg ggatgtcgtg ggtccggcgc 180

gcccccggaa agggtctgga atgggtgtcg ggtatcgtct actccgggag cacttactac 240

gccgcgagcg tgaagggccg cttcaccatt tcccgcgata actcccgcaa caccctgtac 300

ttgcaaatga actcgctccg gcctgaggac actgccatct actactgctc cgcacacgga 360

ggagaatccg acgtgtgggg ccagggaact accgtgaccg tcagcagcgc ctccggcggc 420

gggggctcag gcggacgggc tagcggcggc ggtggctccg agatcgtgct gacccagtcg 480

cctggcactc tctcgctgag ccccggggaa agggcaaccc tgtcctgtcg ggccagccag 540

tccattggat catcctccct cgcctggtat cagcagaaac cgggacaggc tccgcggctg 600

cttatgtatg gggccagctc aagagcctcc ggcattcccg accggttctc cgggtccggt 660

tccggcaccg atttcaccct gactatctcg aggctggagc cagaggactt cgccgtgtac 720

tactgccagc agtacgcggg gtccccgccg ttcacgttcg gacagggaac caaggtcgag 780

atcaagacca ctaccccagc accgaggcca cccaccccgg ctcctaccat cgcctcccag 840

cctctgtccc tgcgtccgga ggcatgtaga cccgcagctg gtggggccgt gcatacccgg 900

ggtcttgact tcgcctgcga tatctacatt tgggcccctc tggctggtac ttgcggggtc 960

ctgctgcttt cactcgtgat cactctttac tgtaagcgcg gtcggaagaa gctgctgtac 1020

atctttaagc aacccttcat gaggcctgtg cagactactc aagaggagga cggctgttca 1080

tgccggttcc cagaggagga ggaaggcggc tgcgaactgc gcgtgaaatt cagccgcagc 1140

gcagatgctc cagcctacaa gcaggggcag aaccagctct acaacgaact caatcttggt 1200

cggagagagg agtacgacgt gctggacaag cggagaggac gggacccaga aatgggcggg 1260

aagccgcgca gaaagaatcc ccaagagggc ctgtacaacg agctccaaaa ggataagatg 1320

gcagaagcct atagcgagat tggtatgaaa ggggaacgca gaagaggcaa aggccacgac 1380

ggactgtacc agggactcag caccgccacc aaggacacct atgacgctct tcacatgcag 1440

gccctgccgc ctcgg 1455

<210> 129

<211> 243

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 129

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser

20 25 30

Tyr Tyr Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu

35 40 45

Trp Ile Gly Ser Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Ala Tyr Tyr Asn Pro Ser

50 55 60

Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe

65 70 75 80

Ser Leu Arg Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr

85 90 95

Cys Ala Arg His Trp Gln Glu Trp Pro Asp Ala Phe Asp Ile Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly

115 120 125

Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Thr Thr Leu Thr Gln Ser Pro

130 135 140

Ala Phe Met Ser Ala Thr Pro Gly Asp Lys Val Ile Ile Ser Cys Lys

145 150 155 160

Ala Ser Gln Asp Ile Asp Asp Ala Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro

165 170 175

Gly Glu Ala Pro Leu Phe Ile Ile Gln Ser Ala Thr Ser Pro Val Pro

180 185 190

Gly Ile Pro Pro Arg Phe Ser Gly Ser Gly Phe Gly Thr Asp Phe Ser

195 200 205

Leu Thr Ile Asn Asn Ile Glu Ser Glu Asp Ala Ala Tyr Tyr Phe Cys

210 215 220

Leu Gln His Asp Asn Phe Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu

225 230 235 240

Glu Ile Lys

<210> 130

<211> 244

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 130

Val Asn Leu Arg Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gln Thr

1 5 10 15

Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Arg Thr Ser Gly

20 25 30

Met Cys Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp

35 40 45

Leu Ala Arg Ile Asp Trp Asp Glu Asp Lys Phe Tyr Ser Thr Ser Leu

50 55 60

Lys Thr Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Asp Asn Gln Val Val

65 70 75 80

Leu Arg Met Thr Asn Met Asp Pro Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Gly Ala Gly Gly Thr Ser Ala Thr Ala Phe Asp Ile Trp

100 105 110

Gly Pro Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

115 120 125

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser

130 135 140

Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys

145 150 155 160

Arg Ala Ser Gln Asp Ile Tyr Asn Asn Leu Ala Trp Phe Gln Leu Lys

165 170 175

Pro Gly Ser Ala Pro Arg Ser Leu Met Tyr Ala Ala Asn Lys Ser Gln

180 185 190

Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Ala Ser Gly Thr Asp Phe

195 200 205

Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr

210 215 220

Cys Gln His Tyr Tyr Arg Phe Pro Tyr Ser Phe Gly Gln Gly Thr Lys

225 230 235 240

Leu Glu Ile Lys

<210> 131

<211> 246

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 131

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ser Ile Ser Ser Ser Ser Ser Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Thr Ile Ala Ala Val Tyr Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

115 120 125

Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Leu Ser

130 135 140

Leu Pro Val Thr Pro Glu Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser

145 150 155 160

Gln Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu

165 170 175

Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn

180 185 190

Arg Ala Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr

195 200 205

Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val

210 215 220

Tyr Tyr Cys Met Gln Ala Leu Gln Thr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly

225 230 235 240

Thr Lys Leu Glu Ile Lys

245

<210> 132

<211> 240

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 132

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asp Leu Arg Gly Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

115 120 125

Gly Gly Gly Ser Ser Tyr Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Val Ser Ala

130 135 140

Ala Pro Gly Tyr Thr Ala Thr Ile Ser Cys Gly Gly Asn Asn Ile Gly

145 150 155 160

Thr Lys Ser Val His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Leu

165 170 175

Leu Val Ile Arg Asp Asp Ser Val Arg Pro Ser Lys Ile Pro Gly Arg

180 185 190

Phe Ser Gly Ser Asn Ser Gly Asn Met Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly

195 200 205

Val Gln Ala Gly Asp Glu Ala Asp Phe Tyr Cys Gln Val Trp Asp Ser

210 215 220

Asp Ser Glu His Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

225 230 235 240

<210> 133

<211> 241

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 133

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Pro Ser Gly Tyr Thr Val Thr Ser His

20 25 30

Tyr Ile His Trp Val Arg Arg Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Met Ile Asn Pro Ser Gly Gly Val Thr Ala Tyr Ser Gln Thr Leu

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Ser Asp Thr Ser Ser Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Gly Ser Gly Ser Gly Trp Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Arg

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly

115 120 125

Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser

130 135 140

Val Ser Val Ser Pro Gly Gln Thr Ala Ser Ile Thr Cys Ser Gly Asp

145 150 155 160

Gly Leu Ser Lys Lys Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Ala Gly Gln

165 170 175

Ser Pro Val Val Leu Ile Ser Arg Asp Lys Glu Arg Pro Ser Gly Ile

180 185 190

Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Asn Ser Ala Asp Thr Ala Thr Leu Thr

195 200 205

Ile Ser Gly Thr Gln Ala Met Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ala

210 215 220

Trp Asp Asp Thr Thr Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val

225 230 235 240

Leu

<210> 134

<211> 245

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 134

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Gly

20 25 30

Gly Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln His Pro Gly Lys Gly Leu Glu

35 40 45

Trp Ile Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser

50 55 60

Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe

65 70 75 80

Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr

85 90 95

Cys Ala Arg Ala Gly Ile Ala Ala Arg Leu Arg Gly Ala Phe Asp Ile

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser

115 120 125

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Met Thr Gln

130 135 140

Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Ile Ile Thr

145 150 155 160

Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Trp Leu Ala Trp Tyr Gln Gln

165 170 175

Lys Pro Gly Lys Ala Pro Asn Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Leu

180 185 190

Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ala Asp

195 200 205

Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr

210 215 220

Tyr Cys Gln Lys Tyr Asn Ser Ala Pro Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr

225 230 235 240

Lys Val Asp Ile Lys

245

<210> 135

<211> 253

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 135

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Arg Gly Gly Tyr Gln Leu Leu Arg Trp Asp Val Gly Leu Leu

100 105 110

Arg Ser Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser

115 120 125

Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

130 135 140

Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln

145 150 155 160

Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Gly Asn Asn Ile Gly Ser Lys Ser Val

165 170 175

His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Leu Tyr

180 185 190

Gly Lys Asn Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser

195 200 205

Arg Ser Gly Thr Thr Ala Ser Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu

210 215 220

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Arg Asp Ser Ser Gly Asp His

225 230 235 240

Leu Arg Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu

245 250

<210> 136

<211> 248

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 136

Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Ile Ser Gly Asp Ser Val Ser Ser Asn

20 25 30

Ser Ala Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Ser Pro Ser Arg Gly Leu Glu

35 40 45

Trp Leu Gly Arg Thr Tyr Tyr Arg Ser Lys Trp Tyr Ser Phe Tyr Ala

50 55 60

Ile Ser Leu Lys Ser Arg Ile Ile Ile Asn Pro Asp Thr Ser Lys Asn

65 70 75 80

Gln Phe Ser Leu Gln Leu Lys Ser Val Thr Pro Glu Asp Thr Ala Val

85 90 95

Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Ser Pro Glu Gly Leu Phe Leu Tyr Trp Phe

100 105 110

Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Asp

115 120 125

Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Ser Glu Leu

130 135 140

Thr Gln Asp Pro Ala Val Ser Val Ala Leu Gly Gln Thr Ile Arg Ile

145 150 155 160

Thr Cys Gln Gly Asp Ser Leu Gly Asn Tyr Tyr Ala Thr Trp Tyr Gln

165 170 175

Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr Gly Thr Asn Asn

180 185 190

Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Ala Ser Ser Ser Gly Asn

195 200 205

Thr Ala Ser Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp

210 215 220

Tyr Tyr Cys Asn Ser Arg Asp Ser Ser Gly His His Leu Leu Phe Gly

225 230 235 240

Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu

245

<210> 137

<211> 246

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 137

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Val Glu Gly Ser Gly Ser Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

115 120 125

Gly Gly Gly Gly Ser Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu

130 135 140

Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln

145 150 155 160

Ser Val Ser Ser Ala Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln

165 170 175

Pro Pro Arg Leu Leu Ile Ser Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile

180 185 190

Pro Asp Arg Phe Gly Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr

195 200 205

Ile Ser Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His

210 215 220

Tyr Gly Ser Ser Phe Asn Gly Ser Ser Leu Phe Thr Phe Gly Gln Gly

225 230 235 240

Thr Arg Leu Glu Ile Lys

245

<210> 138

<211> 241

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 138

Glu Val Gln Leu Val Glu Thr Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ile Thr Phe Ser Arg Tyr

20 25 30

Pro Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Gly Ile Ser Asp Ser Gly Val Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Ala

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe

65 70 75 80

Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Val Thr Arg Ala Gly Ser Glu Ala Ser Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Met Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

115 120 125

Gly Gly Gly Gly Ser Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu

130 135 140

Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln

145 150 155 160

Ser Val Ser Asn Ser Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala

165 170 175

Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro

180 185 190

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile

195 200 205

Ser Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Ile Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe

210 215 220

Gly Thr Ser Ser Gly Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile

225 230 235 240

Lys

<210> 139

<211> 248

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 139

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ala Thr Tyr Lys Arg Glu Leu Arg Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp

100 105 110

Val Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly

115 120 125

Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Ile Val Met Thr

130 135 140

Gln Ser Pro Gly Thr Val Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu

145 150 155 160

Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser Phe Leu Ala Trp Tyr

165 170 175

Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser

180 185 190

Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly

195 200 205

Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro Glu Asp Ser Ala

210 215 220

Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr His Ser Ser Pro Ser Trp Thr Phe Gly

225 230 235 240

Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys

245

<210> 140

<211> 248

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 140

Glu Val Gln Leu Val Glu Thr Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Thr Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ala Thr Tyr Lys Arg Glu Leu Arg Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp

100 105 110

Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly

115 120 125

Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Ile Val Leu Thr

130 135 140

Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Ser Ala Thr Leu

145 150 155 160

Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Thr Thr Phe Leu Ala Trp Tyr

165 170 175

Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Gly Ser Ser

180 185 190

Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly

195 200 205

Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Arg Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala

210 215 220

Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr His Ser Ser Pro Ser Trp Thr Phe Gly

225 230 235 240

Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

245

<210> 141

<211> 239

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 141

Glu Val Gln Leu Val Glu Thr Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr

20 25 30

Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Gly Ile Ser Trp Asn Ser Gly Ser Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Val Gly Lys Ala Val Pro Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

115 120 125

Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Ser Ser Leu Ser

130 135 140

Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser

145 150 155 160

Ile Ser Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro

165 170 175

Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser

180 185 190

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser

195 200 205

Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr

210 215 220

Ser Thr Pro Tyr Ser Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys

225 230 235

<210> 142

<211> 246

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 142

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr

20 25 30

Ala Met His Trp Val Arg Gln Arg Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Ser Ile Asn Trp Lys Gly Asn Ser Leu Ala Tyr Gly Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Ala Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Phe

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ser His Gln Gly Val Ala Tyr Tyr Asn Tyr Ala Met Asp Val Trp

100 105 110

Gly Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

115 120 125

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser

130 135 140

Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys

145 150 155 160

Arg Ala Thr Gln Ser Ile Gly Ser Ser Phe Leu Ala Trp Tyr Gln Gln

165 170 175

Arg Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Gln Arg

180 185 190

Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Arg Gly Ser Gly Thr Asp

195 200 205

Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Pro Glu Asp Ser Ala Val Tyr

210 215 220

Tyr Cys Gln His Tyr Glu Ser Ser Pro Ser Trp Thr Phe Gly Gln Gly

225 230 235 240

Thr Lys Val Glu Ile Lys

245

<210> 143

<211> 241

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 143

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Val Val Arg Asp Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

115 120 125

Gly Gly Gly Ser Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser

130 135 140

Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser

145 150 155 160

Val Ser Ser Ser Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala

165 170 175

Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro

180 185 190

Asp Arg Phe Ser Gly Asn Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile

195 200 205

Ser Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr

210 215 220

Gly Ser Pro Pro Arg Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile

225 230 235 240

Lys

<210> 144

<211> 242

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 144

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Ile Pro Gln Thr Gly Thr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

115 120 125

Gly Gly Gly Gly Ser Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu

130 135 140

Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln

145 150 155 160

Ser Val Ser Ser Ser Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln

165 170 175

Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile

180 185 190

Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr

195 200 205

Ile Ser Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His

210 215 220

Tyr Gly Ser Ser Pro Ser Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu

225 230 235 240

Ile Lys

<210> 145

<211> 248

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 145

Glu Val Gln Leu Val Glu Thr Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Met Ser Arg Glu Asn Asp Lys Asn Ser Val Phe

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Val Glu Asp Thr Gly Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ala Asn Tyr Lys Arg Glu Leu Arg Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp

100 105 110

Val Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly

115 120 125

Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Ile Val Met Thr

130 135 140

Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Ser Ala Thr Leu

145 150 155 160

Ser Cys Arg Ala Ser Gln Arg Val Ala Ser Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr

165 170 175

Gln His Lys Pro Gly Gln Ala Pro Ser Leu Leu Ile Ser Gly Ala Ser

180 185 190

Ser Arg Ala Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly

195 200 205

Thr Asp Phe Thr Leu Ala Ile Ser Arg Leu Glu Pro Glu Asp Ser Ala

210 215 220

Val Tyr Tyr Cys Gln His Tyr Asp Ser Ser Pro Ser Trp Thr Phe Gly

225 230 235 240

Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

245

<210> 146

<211> 244

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 146

Glu Val Gln Leu Leu Glu Thr Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Ala Leu Val Gly Ala Thr Gly Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly

115 120 125

Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly

130 135 140

Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala

145 150 155 160

Ser Gln Ser Leu Ser Ser Asn Phe Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro

165 170 175

Gly Gln Ala Pro Gly Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Asn Trp Ala Thr

180 185 190

Gly Thr Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr

195 200 205

Leu Thr Ile Thr Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys

210 215 220

Gln Tyr Tyr Gly Thr Ser Pro Met Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys

225 230 235 240

Val Glu Ile Lys

<210> 147

<211> 244

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 147

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Val Leu Trp Phe Gly Glu Gly Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

115 120 125

Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro

130 135 140

Val Thr Pro Gly Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser

145 150 155 160

Leu Leu His Ser Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys

165 170 175

Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala

180 185 190

Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe

195 200 205

Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr

210 215 220

Cys Met Gln Ala Leu Gln Thr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys

225 230 235 240

Val Asp Ile Lys

<210> 148

<211> 251

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 148

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Val Gly Tyr Asp Ser Ser Gly Tyr Tyr Arg Asp Tyr Tyr Gly

100 105 110

Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly

115 120 125

Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Ile Val

130 135 140

Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala

145 150 155 160

Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser Tyr Leu Ala

165 170 175

Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Gly

180 185 190

Thr Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Ser Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly

195 200 205

Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro Glu Asp

210 215 220

Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Tyr Gly Asn Ser Pro Pro Lys Phe

225 230 235 240

Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

245 250

<210> 149

<211> 246

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 149

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Met Gly Trp Ser Ser Gly Tyr Leu Gly Ala Phe Asp Ile Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

115 120 125

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser

130 135 140

Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys

145 150 155 160

Arg Ala Ser Gln Ser Val Ala Ser Ser Phe Leu Ala Trp Tyr Gln Gln

165 170 175

Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Gly Arg

180 185 190

Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp

195 200 205

Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr

210 215 220

Tyr Cys Gln His Tyr Gly Gly Ser Pro Arg Leu Thr Phe Gly Gly Gly

225 230 235 240

Thr Lys Val Asp Ile Lys

245

<210> 150

<211> 729

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полинуклеотид

<400> 150

caagtgcagc ttcaggaaag cggaccgggc ctggtcaagc catccgaaac tctctccctg 60

acttgcactg tgtctggcgg ttccatctca tcgtcgtact actactgggg ctggattagg 120

cagccgcccg gaaagggact ggagtggatc ggaagcatct actattccgg ctcggcgtac 180

tacaacccta gcctcaagtc gagagtgacc atctccgtgg atacctccaa gaaccagttt 240

tccctgcgcc tgagctccgt gaccgccgct gacaccgccg tgtactactg tgctcggcat 300

tggcaggaat ggcccgatgc cttcgacatt tggggccagg gcactatggt cactgtgtca 360

tccgggggtg gaggcagcgg gggaggaggg tccggggggg gaggttcaga gacaaccttg 420

acccagtcac ccgcattcat gtccgccact ccgggagaca aggtcatcat ctcgtgcaaa 480

gcgtcccagg atatcgacga tgccatgaat tggtaccagc agaagcctgg cgaagcgccg 540

ctgttcatta tccaatccgc aacctcgccc gtgcctggaa tcccaccgcg gttcagcggc 600

agcggtttcg gaaccgactt ttccctgacc attaacaaca ttgagtccga ggacgccgcc 660

tactacttct gcctgcaaca cgacaacttc cctctcacgt tcggccaggg aaccaagctg 720

gaaatcaag 729

<210> 151

<211> 735

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полинуклеотид

<400> 151

caagtcaatc tgcgcgaatc cggccccgcc ttggtcaagc ctacccagac cctcactctg 60

acctgtactt tctccggctt ctccctgcgg acttccggga tgtgcgtgtc ctggatcaga 120

cagcctccgg gaaaggccct ggagtggctc gctcgcattg actgggatga ggacaagttc 180

tactccacct cactcaagac caggctgacc atcagcaaag atacctctga caaccaagtg 240

gtgctccgca tgaccaacat ggacccagcc gacactgcca cttactactg cgcgaggagc 300

ggagcgggcg gaacctccgc caccgccttc gatatttggg gcccgggtac catggtcacc 360

gtgtcaagcg gaggaggggg gtccgggggc ggcggttccg ggggaggcgg atcggacatt 420

cagatgactc agtcaccatc gtccctgagc gctagcgtgg gcgacagagt gacaatcact 480

tgccgggcat cccaggacat ctataacaac cttgcgtggt tccagctgaa gcctggttcc 540

gcaccgcggt cacttatgta cgccgccaac aagagccagt cgggagtgcc gtcccggttt 600

tccggttcgg cctcgggaac tgacttcacc ctgacgatct ccagcctgca acccgaggat 660

ttcgccacct actactgcca gcactactac cgctttccct actcgttcgg acagggaacc 720

aagctggaaa tcaag 735

<210> 152

<211> 738

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полинуклеотид

<400> 152

gaagtgcagc ttgtcgaatc cgggggggga ctggtcaagc cgggcggatc actgagactg 60

tcctgcgccg cgagcggctt cacgttctcc tcctactcca tgaactgggt ccgccaagcc 120

cccgggaagg gactggaatg ggtgtcctct atctcctcgt cgtcgtccta catctactac 180

gccgactccg tgaagggaag attcaccatt tcccgcgaca acgcaaagaa ctcactgtac 240

ttgcaaatga actcactccg ggccgaagat actgctgtgt actattgcgc caagactatt 300

gccgccgtct acgctttcga catctggggc cagggaacca ccgtgactgt gtcgtccggt 360

ggtggtggct cgggcggagg aggaagcggc ggcggggggt ccgagattgt gctgacccag 420

tcgccactga gcctccctgt gacccccgag gaacccgcca gcatcagctg ccggtccagc 480

cagtccctgc tccactccaa cggatacaat tacctcgatt ggtaccttca gaagcctgga 540

caaagcccgc agctgctcat ctacttggga tcaaaccgcg cgtcaggagt gcctgaccgg 600

ttctccggct cgggcagcgg taccgatttc accctgaaaa tctccagggt ggaggcagag 660

gacgtgggag tgtattactg tatgcaggcg ctgcagactc cgtacacatt tgggcagggc 720

accaagctgg agatcaag 738

<210> 153

<211> 720

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полинуклеотид

<400> 153

gaagtccagc tcgtggagtc cggcggaggc cttgtgaagc ctggaggttc gctgagactg 60

tcctgcgccg cctccggctt caccttctcc gactactaca tgtcctggat cagacaggcc 120

ccgggaaagg gcctggaatg ggtgtcctac atctcgtcat cgggcagcac tatctactac 180

gcggactcag tgaaggggcg gttcaccatt tcccgggata acgcgaagaa ctcgctgtat 240

ctgcaaatga actcactgag ggccgaggac accgccgtgt actactgcgc ccgcgatctc 300

cgcggggcat ttgacatctg gggacaggga accatggtca cagtgtccag cggaggggga 360

ggatcgggtg gcggaggttc cgggggtgga ggctcctcct acgtgctgac tcagagccca 420

agcgtcagcg ctgcgcccgg ttacacggca accatctcct gtggcggaaa caacattggg 480

accaagtctg tgcactggta tcagcagaag ccgggccaag ctcccctgtt ggtgatccgc 540

gatgactccg tgcggcctag caaaattccg ggacggttct ccggctccaa cagcggcaat 600

atggccactc tcaccatctc gggagtgcag gccggagatg aagccgactt ctactgccaa 660

gtctgggact cagactccga gcatgtggtg ttcgggggcg gaaccaagct gactgtgctc 720

<210> 154

<211> 723

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полинуклеотид

<400> 154

caagtgcagc tggtgcagag cggggccgaa gtcaagaagc cgggagcctc cgtgaaagtg 60

tcctgcaagc cttcgggata caccgtgacc tcccactaca ttcattgggt ccgccgcgcc 120

cccggccaag gactcgagtg gatgggcatg atcaacccta gcggcggagt gaccgcgtac 180

agccagacgc tgcagggacg cgtgactatg acctcggata cctcctcctc caccgtctat 240

atggaactgt ccagcctgcg gtccgaggat accgccatgt actactgcgc ccgggaagga 300

tcaggctccg ggtggtattt cgacttctgg ggaagaggca ccctcgtgac tgtgtcatct 360

gggggagggg gttccggtgg tggcggatcg ggaggaggcg gttcatccta cgtgctgacc 420

cagccaccct ccgtgtccgt gagccccggc cagactgcat cgattacatg tagcggcgac 480

ggcctctcca agaaatacgt gtcgtggtac cagcagaagg ccggacagag cccggtggtg 540

ctgatctcaa gagataagga gcggcctagc ggaatcccgg acaggttctc gggttccaac 600

tccgcggaca ctgctactct gaccatctcg gggacccagg ctatggacga agccgattac 660

tactgccaag cctgggacga cactactgtc gtgtttggag ggggcaccaa gttgaccgtc 720

ctt 723

<210> 155

<211> 735

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полинуклеотид

<400> 155

caagtgcagc ttcaggagag cggcccggga ctcgtgaagc cgtcccagac cctgtccctg 60

acttgcaccg tgtcgggagg aagcatctcg agcggaggct actattggtc gtggattcgg 120

cagcaccctg gaaagggcct ggaatggatc ggctacatct actactccgg ctcgacctac 180

tacaacccat cgctgaagtc cagagtgaca atctcagtgg acacgtccaa gaatcagttc 240

agcctgaagc tctcttccgt gactgcggcc gacaccgccg tgtactactg cgcacgcgct 300

ggaattgccg cccggctgag gggtgccttc gacatttggg gacagggcac catggtcacc 360

gtgtcctccg gcggcggagg ttccgggggt ggaggctcag gaggaggggg gtccgacatc 420

gtcatgactc agtcgccctc aagcgtcagc gcgtccgtcg gggacagagt gatcatcacc 480

tgtcgggcgt cccagggaat tcgcaactgg ctggcctggt atcagcagaa gcccggaaag 540

gcccccaacc tgttgatcta cgccgcctca aacctccaat ccggggtgcc gagccgcttc 600

agcggctccg gttcgggtgc cgatttcact ctgaccatct cctccctgca acctgaagat 660

gtggctacct actactgcca aaagtacaac tccgcacctt ttactttcgg accggggacc 720

aaagtggaca ttaag 735

<210> 156

<211> 759

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полинуклеотид

<400> 156

caagtgcagc tggtccagtc gggcgccgag gtcaagaagc ccgggagctc tgtgaaagtg 60

tcctgcaagg cctccggggg cacctttagc tcctacgcca tctcctgggt ccgccaagca 120

ccgggtcaag gcctggagtg gatgggggga attatcccta tcttcggcac tgccaactac 180

gcccagaagt tccagggacg cgtgaccatt accgcggacg aatccacctc caccgcttat 240

atggagctgt ccagcttgcg ctcggaagat accgccgtgt actactgcgc ccggaggggt 300

ggataccagc tgctgagatg ggacgtgggc ctcctgcggt cggcgttcga catctggggc 360

cagggcacta tggtcactgt gtccagcgga ggaggcggat cgggaggcgg cggatcaggg 420

ggaggcggtt ccagctacgt gcttactcaa cccccttcgg tgtccgtggc cccgggacag 480

accgccagaa tcacttgcgg aggaaacaac attgggtcca agagcgtgca ttggtaccag 540

cagaagccag gacaggcccc tgtgctggtg ctctacggga agaacaatcg gcccagcgga 600

gtgccggaca ggttctcggg ttcacgctcc ggtacaaccg cttcactgac tatcaccggg 660

gcccaggcag aggatgaagc ggactactac tgttcctccc gggattcatc cggcgaccac 720

ctccgggtgt tcggaaccgg aacgaaggtc accgtgctg 759

<210> 157

<211> 744

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полинуклеотид

<400> 157

gaagtgcagc tccaacagtc aggaccgggg ctcgtgaagc catcccagac cctgtccctg 60

acttgtgcca tctcgggaga tagcgtgtca tcgaactccg ccgcctggaa ctggattcgg 120

cagagcccgt cccgcggact ggagtggctt ggaaggacct actaccggtc caagtggtac 180

tctttctacg cgatctcgct gaagtcccgc attatcatta accctgatac ctccaagaat 240

cagttctccc tccaactgaa atccgtcacc cccgaggaca cagcagtgta ttactgcgca 300

cggagcagcc ccgaaggact gttcctgtat tggtttgacc cctggggcca ggggactctt 360

gtgaccgtgt cgagcggcgg agatgggtcc ggtggcggtg gttcgggggg cggcggatca 420

tcatccgaac tgacccagga cccggctgtg tccgtggcgc tgggacaaac catccgcatt 480

acgtgccagg gagactccct gggcaactac tacgccactt ggtaccagca gaagccgggc 540

caagcccctg tgttggtcat ctacgggacc aacaacagac cttccggcat ccccgaccgg 600

ttcagcgctt cgtcctccgg caacactgcc agcctgacca tcactggagc gcaggccgaa 660

gatgaggccg actactactg caacagcaga gactcctcgg gtcatcacct cttgttcgga 720

actggaacca aggtcaccgt gctg 744

<210> 158

<211> 738

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полинуклеотид

<400> 158

gaagtgcagc tcgtggagtc aggaggcggc ctggtccagc cgggagggtc ccttagactg 60

tcatgcgccg caagcggatt cactttctcc tcctatgcca tgagctgggt ccgccaagcc 120

cccggaaagg gactggaatg ggtgtccgcc atctcggggt ctggaggctc aacttactac 180

gctgactccg tgaagggacg gttcaccatt agccgcgaca actccaagaa caccctctac 240

ctccaaatga actccctgcg ggccgaggat accgccgtct actactgcgc caaagtggaa 300

ggttcaggat cgctggacta ctggggacag ggtactctcg tgaccgtgtc atcgggcgga 360

ggaggttccg gcggtggcgg ctccggcggc ggagggtcgg agatcgtgat gacccagagc 420

cctggtactc tgagcctttc gccgggagaa agggccaccc tgtcctgccg cgcttcccaa 480

tccgtgtcct ccgcgtactt ggcgtggtac cagcagaagc cgggacagcc ccctcggctg 540

ctgatcagcg gggccagcac ccgggcaacc ggaatcccag acagattcgg gggttccggc 600

agcggcacag atttcaccct gactatttcg aggttggagc ccgaggactt tgcggtgtat 660

tactgtcagc actacgggtc gtcctttaat ggctccagcc tgttcacgtt cggacagggg 720

acccgcctgg aaatcaag 738

<210> 159

<211> 723

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полинуклеотид

<400> 159

gaagtgcaac tggtggaaac cggtggcggc ctggtgcagc ctggaggatc attgaggctg 60

tcatgcgcgg ccagcggtat taccttctcc cggtacccca tgtcctgggt cagacaggcc 120

ccggggaaag ggcttgaatg ggtgtccggg atctcggact ccggtgtcag cacttactac 180

gccgactccg ccaagggacg cttcaccatt tcccgggaca actcgaagaa caccctgttc 240

ctccaaatga gctccctccg ggacgaggat actgcagtgt actactgcgt gacccgcgcc 300

gggtccgagg cgtctgacat ttggggacag ggcactatgg tcaccgtgtc gtccggcgga 360

gggggctcgg gaggcggtgg cagcggagga ggagggtccg agatcgtgct gacccaatcc 420

ccggccaccc tctcgctgag ccctggagaa agggcaacct tgtcctgtcg cgcgagccag 480

tccgtgagca actccctggc ctggtaccag cagaagcccg gacaggctcc gagacttctg 540

atctacgacg cttcgagccg ggccactgga atccccgacc gcttttcggg gtccggctca 600

ggaaccgatt tcaccctgac aatctcacgg ctggagccag aggatttcgc catctattac 660

tgccagcagt tcggtacttc ctccggcctg actttcggag gcggcacgaa gctcgaaatc 720

aag 723

<210> 160

<211> 744

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полинуклеотид

<400> 160

caagtgcagc tcgtggaatc gggtggcgga ctggtgcagc cggggggctc acttagactg 60

tcctgcgcgg ccagcggatt cactttctcc tcctacgcca tgtcctgggt cagacaggcc 120

cctggaaagg gcctggaatg ggtgtccgca atcagcggca gcggcggctc gacctattac 180

gcggattcag tgaagggcag attcaccatt tcccgggaca acgccaagaa ctccttgtac 240

cttcaaatga actccctccg cgcggaagat accgcaatct actactgcgc tcgggccact 300

tacaagaggg aactgcgcta ctactacggg atggacgtct ggggccaggg aaccatggtc 360

accgtgtcca gcggaggagg aggatcggga ggaggcggta gcgggggtgg agggtcggag 420

atcgtgatga cccagtcccc cggcactgtg tcgctgtccc ccggcgaacg ggccaccctg 480

tcatgtcggg ccagccagtc agtgtcgtca agcttcctcg cctggtacca gcagaaaccg 540

ggacaagctc cccgcctgct gatctacgga gccagcagcc gggccaccgg tattcctgac 600

cggttctccg gttcggggtc cgggaccgac tttactctga ctatctctcg cctcgagcca 660

gaggactccg ccgtgtatta ctgccagcag taccactcct ccccgtcctg gacgttcgga 720

cagggcacaa ggctggagat taag 744

<210> 161

<211> 744

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полинуклеотид

<400> 161

gaggtgcagc ttgtggaaac cggtggcgga ctggtgcagc ccggaggaag cctcaggctg 60

tcctgcgccg cgtccggctt caccttctcc tcgtacgcca tgtcctgggt ccgccaggcc 120

cccggaaagg gcctggaatg ggtgtccgcc atctctggaa gcggaggttc cacgtactac 180

gcggacagcg tcaagggaag gttcacaatc tcccgcgata attcgaagaa cactctgtac 240

cttcaaatga acaccctgaa ggccgaggac actgctgtgt actactgcgc acgggccacc 300

tacaagagag agctccggta ctactacgga atggacgtct ggggccaggg aactactgtg 360

accgtgtcct cgggaggggg tggctccggg gggggcggct ccggcggagg cggttccgag 420

attgtgctga cccagtcacc ttcaactctg tcgctgtccc cgggagagag cgctactctg 480

agctgccggg ccagccagtc cgtgtccacc accttcctcg cctggtatca gcagaagccg 540

gggcaggcac cacggctctt gatctacggg tcaagcaaca gagcgaccgg aattcctgac 600

cgcttctcgg ggagcggttc aggcaccgac ttcaccctga ctatccggcg cctggaaccc 660

gaagatttcg ccgtgtatta ctgtcaacag taccactcct cgccgtcctg gacctttggc 720

caaggaacca aagtggaaat caag 744

<210> 162

<211> 717

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полинуклеотид

<400> 162

gaagtgcagc tcgtggaaac tggaggtgga ctcgtgcagc ctggacggtc gctgcggctg 60

agctgcgctg catccggctt caccttcgac gattatgcca tgcactgggt cagacaggcg 120

ccagggaagg gacttgagtg ggtgtccggt atcagctgga atagcggctc aatcggatac 180

gcggactccg tgaagggaag gttcaccatt tcccgcgaca acgccaagaa ctccctgtac 240

ttgcaaatga acagcctccg ggatgaggac actgccgtgt actactgcgc ccgcgtcgga 300

aaagctgtgc ccgacgtctg gggccaggga accactgtga ccgtgtccag cggcgggggt 360

ggatcgggcg gtggagggtc cggtggaggg ggctcagata ttgtgatgac ccagaccccc 420

tcgtccctgt ccgcctcggt cggcgaccgc gtgactatca catgtagagc ctcgcagagc 480

atctccagct acctgaactg gtatcagcag aagccgggga aggccccgaa gctcctgatc 540

tacgcggcat catcactgca atcgggagtg ccgagccggt tttccgggtc cggctccggc 600

accgacttca cgctgaccat ttcttccctg caacccgagg acttcgccac ttactactgc 660

cagcagtcct actccacccc ttactccttc ggccaaggaa ccaggctgga aatcaag 717

<210> 163

<211> 738

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полинуклеотид

<400> 163

gaagtgcagc tcgtggagag cgggggagga ttggtgcagc ccggaaggtc cctgcggctc 60

tcctgcactg cgtctggctt caccttcgac gactacgcga tgcactgggt cagacagcgc 120

ccgggaaagg gcctggaatg ggtcgcctca atcaactgga agggaaactc cctggcctat 180

ggcgacagcg tgaagggccg cttcgccatt tcgcgcgaca acgccaagaa caccgtgttt 240

ctgcaaatga attccctgcg gaccgaggat accgctgtgt actactgcgc cagccaccag 300

ggcgtggcat actataacta cgccatggac gtgtggggaa gagggacgct cgtcaccgtg 360

tcctccgggg gcggtggatc gggtggagga ggaagcggtg gcgggggcag cgaaatcgtg 420

ctgactcaga gcccgggaac tctttcactg tccccgggag aacgggccac tctctcgtgc 480

cgggccaccc agtccatcgg ctcctccttc cttgcctggt accagcagag gccaggacag 540

gcgccccgcc tgctgatcta cggtgcttcc caacgcgcca ctggcattcc tgaccggttc 600

agcggcagag ggtcgggaac cgatttcaca ctgaccattt cccgggtgga gcccgaagat 660

tcggcagtct actactgtca gcattacgag tcctcccctt catggacctt cggtcaaggg 720

accaaagtgg agatcaag 738

<210> 164

<211> 723

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полинуклеотид

<400> 164

gaggtgcagt tggtcgaaag cgggggcggg cttgtgcagc ctggcggatc actgcggctg 60

tcctgcgcgg catcaggctt cacgttttct tcctacgcca tgtcctgggt gcgccaggcc 120

cctggaaagg gactggaatg ggtgtccgcg atttcggggt ccggcgggag cacctactac 180

gccgattccg tgaagggccg cttcactatc tcgcgggaca actccaagaa caccctctac 240

ctccaaatga atagcctgcg ggccgaggat accgccgtct actattgcgc taaggtcgtg 300

cgcgacggaa tggacgtgtg gggacagggt accaccgtga cagtgtcctc ggggggaggc 360

ggtagcggcg gaggaggaag cggtggtgga ggttccgaga ttgtgctgac tcaatcaccc 420

gcgaccctga gcctgtcccc cggcgaaagg gccactctgt cctgtcgggc cagccaatca 480

gtctcctcct cgtacctggc ctggtaccag cagaagccag gacaggctcc gagactcctt 540

atctatggcg catcctcccg cgccaccgga atcccggata ggttctcggg aaacggatcg 600

gggaccgact tcactctcac catctcccgg ctggaaccgg aggacttcgc cgtgtactac 660

tgccagcagt acggcagccc gcctagattc actttcggcc ccggcaccaa agtggacatc 720

aag 723

<210> 165

<211> 726

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полинуклеотид

<400> 165

gaagtgcagc tgctggagtc cggcggtgga ttggtgcaac cggggggatc gctcagactg 60

tcctgtgcgg cgtcaggctt caccttctcg agctacgcca tgtcatgggt cagacaggcc 120

cctggaaagg gtctggaatg ggtgtccgcc atttccggga gcgggggatc tacatactac 180

gccgatagcg tgaagggccg cttcaccatt tcccgggaca actccaagaa cactctctat 240

ctgcaaatga actccctccg cgctgaggac actgccgtgt actactgcgc caaaatccct 300

cagaccggca ccttcgacta ctggggacag gggactctgg tcaccgtcag cagcggtggc 360

ggaggttcgg ggggaggagg aagcggcggc ggagggtccg agattgtgct gacccagtca 420

cccggcactt tgtccctgtc gcctggagaa agggccaccc tttcctgccg ggcatcccaa 480

tccgtgtcct cctcgtacct ggcctggtac cagcagaggc ccggacaggc cccacggctt 540

ctgatctacg gagcaagcag ccgcgcgacc ggtatcccgg accggttttc gggctcgggc 600

tcaggaactg acttcaccct caccatctcc cgcctggaac ccgaagattt cgctgtgtat 660

tactgccagc actacggcag ctccccgtcc tggacgttcg gccagggaac tcggctggag 720

atcaag 726

<210> 166

<211> 744

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полинуклеотид

<400> 166

gaagtgcaac tggtggaaac cggtggagga ctcgtgcagc ctggcggcag cctccggctg 60

agctgcgccg cttcgggatt caccttttcc tcctacgcga tgtcttgggt cagacaggcc 120

cccggaaagg ggctggaatg ggtgtcagcc atctccggct ccggcggatc aacgtactac 180

gccgactccg tgaaaggccg gttcaccatg tcgcgcgaga atgacaagaa ctccgtgttc 240

ctgcaaatga actccctgag ggtggaggac accggagtgt actattgtgc gcgcgccaac 300

tacaagagag agctgcggta ctactacgga atggacgtct ggggacaggg aactatggtg 360

accgtgtcat ccggtggagg gggaagcggc ggtggaggca gcgggggcgg gggttcagaa 420

attgtcatga cccagtcccc gggaactctt tccctctccc ccggggaatc cgcgactttg 480

tcctgccggg ccagccagcg cgtggcctcg aactacctcg catggtacca gcataagcca 540

ggccaagccc cttccctgct gatttccggg gctagcagcc gcgccactgg cgtgccggat 600

aggttctcgg gaagcggctc gggtaccgat ttcaccctgg caatctcgcg gctggaaccg 660

gaggattcgg ccgtgtacta ctgccagcac tatgactcat ccccctcctg gacattcgga 720

cagggcacca aggtcgagat caag 744

<210> 167

<211> 732

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полинуклеотид

<400> 167

gaagtgcagc tgctcgaaac cggtggaggg ctggtgcagc cagggggctc cctgaggctt 60

tcatgcgccg ctagcggatt ctccttctcc tcttacgcca tgtcgtgggt ccgccaagcc 120

cctggaaaag gcctggaatg ggtgtccgcg atttccggga gcggaggttc gacctattac 180

gccgactccg tgaagggccg ctttaccatc tcccgggata actccaagaa cactctgtac 240

ctccaaatga actcgctgag agccgaggac accgccgtgt attactgcgc gaaggcgctg 300

gtcggcgcga ctggggcatt cgacatctgg ggacagggaa ctcttgtgac cgtgtcgagc 360

ggaggcggcg gctccggcgg aggagggagc gggggcggtg gttccgaaat cgtgttgact 420

cagtccccgg gaaccctgag cttgtcaccc ggggagcggg ccactctctc ctgtcgcgcc 480

tcccaatcgc tctcatccaa tttcctggcc tggtaccagc agaagcccgg acaggccccg 540

ggcctgctca tctacggcgc ttcaaactgg gcaacgggaa cccctgatcg gttcagcgga 600

agcggatcgg gtactgactt taccctgacc atcaccagac tggaaccgga ggacttcgcc 660

gtgtactact gccagtacta cggcacctcc cccatgtaca cattcggaca gggtaccaag 720

gtcgagatta ag 732

<210> 168

<211> 733

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полинуклеотид

<400> 168

gaagtgcagc tgcttgagag cggtggaggt ctggtgcagc ccgggggatc actgcgcctg 60

tcctgtgccg cgtccggttt cactttctcc tcgtacgcca tgtcgtgggt cagacaggca 120

ccgggaaagg gactggaatg ggtgtcagcc atttcgggtt cggggggcag cacctactac 180

gctgactccg tgaagggccg gttcaccatt tcccgcgaca actccaagaa caccttgtac 240

ctccaaatga actccctgcg ggccgaagat accgccgtgt attactgcgt gctgtggttc 300

ggagagggat tcgacccgtg gggacaagga acactcgtga ctgtgtcatc cggcggaggc 360

ggcagcggtg gcggcggttc cggcggcggc ggatctgaca tcgtgttgac ccagtcccct 420

ctgagcctgc cggtcactcc tggcgaacca gccagcatct cctgccggtc gagccagtcc 480

ctcctgcact ccaatgggta caactacctc gattggtatc tgcaaaagcc gggccagagc 540

ccccagctgc tgatctacct tgggtcaaac cgcgcttccg gggtgcctga tagattctcc 600

gggtccggga gcggaaccga ctttaccctg aaaatctcga gggtggaggc cgaggacgtc 660

ggagtgtact actgcatgca ggcgctccag actcccctga ccttcggagg aggaacgaag 720

gtcgacatca aga 733

<210> 169

<211> 753

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полинуклеотид

<400> 169

caagtgcagc tcgtggagtc aggcggagga ctggtgcagc ccgggggctc cctgagactt 60

tcctgcgcgg catcgggttt taccttctcc tcctatgcta tgtcctgggt gcgccaggcc 120

ccgggaaagg gactggaatg ggtgtccgca atcagcggta gcgggggctc aacatactac 180

gccgactccg tcaagggtcg cttcactatt tcccgggaca actccaagaa taccctgtac 240

ctccaaatga acagcctcag ggccgaggat actgccgtgt actactgcgc caaagtcgga 300

tacgatagct ccggttacta ccgggactac tacggaatgg acgtgtgggg acagggcacc 360

accgtgaccg tgtcaagcgg cggaggcggt tcaggagggg gaggctccgg cggtggaggg 420

tccgaaatcg tcctgactca gtcgcctggc actctgtcgt tgtccccggg ggagcgcgct 480

accctgtcgt gtcgggcgtc gcagtccgtg tcgagctcct acctcgcgtg gtaccagcag 540

aagcccggac aggcccctag acttctgatc tacggcactt cttcacgcgc caccgggatc 600

agcgacaggt tcagcggctc cggctccggg accgacttca ccctgaccat tagccggctg 660

gagcctgaag atttcgccgt gtattactgc caacactacg gaaactcgcc gccaaagttc 720

acgttcggac ccggaaccaa gctggaaatc aag 753

<210> 170

<211> 739

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полинуклеотид

<400> 170

gaagtccaac tggtggagtc cgggggaggg ctcgtgcagc ccggaggcag ccttcggctg 60

tcgtgcgccg cctccgggtt cacgttctca tcctacgcga tgtcgtgggt cagacaggca 120

ccaggaaagg gactggaatg ggtgtccgcc attagcggct ccggcggtag cacctactat 180

gccgactcag tgaagggaag gttcactatc tcccgcgaca acagcaagaa caccctgtac 240

ctccaaatga actctctgcg ggccgaggat accgcggtgt actattgcgc caagatgggt 300

tggtccagcg gatacttggg agccttcgac atttggggac agggcactac tgtgaccgtg 360

tcctccgggg gtggcggatc gggaggcggc ggctcgggtg gagggggttc cgaaatcgtg 420

ttgacccagt caccgggaac cctctcgctg tccccgggag aacgggctac actgtcatgt 480

agagcgtccc agtccgtggc ttcctcgttc ctggcctggt accagcagaa gccgggacag 540

gcaccccgcc tgctcatcta cggagccagc ggccgggcga ccggcatccc tgaccgcttc 600

tccggttccg gctcgggcac cgactttact ctgaccatta gcaggcttga gcccgaggat 660

tttgccgtgt actactgcca acactacggg gggagccctc gcctgacctt cggaggcgga 720

actaaggtcg atatcaaaa 739

<210> 171

<211> 121

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 171

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser

20 25 30

Tyr Tyr Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu

35 40 45

Trp Ile Gly Ser Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Ala Tyr Tyr Asn Pro Ser

50 55 60

Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe

65 70 75 80

Ser Leu Arg Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr

85 90 95

Cys Ala Arg His Trp Gln Glu Trp Pro Asp Ala Phe Asp Ile Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 172

<211> 123

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 172

Gln Val Asn Leu Arg Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gln

1 5 10 15

Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Arg Thr Ser

20 25 30

Gly Met Cys Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu

35 40 45

Trp Leu Ala Arg Ile Asp Trp Asp Glu Asp Lys Phe Tyr Ser Thr Ser

50 55 60

Leu Lys Thr Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Asp Asn Gln Val

65 70 75 80

Val Leu Arg Met Thr Asn Met Asp Pro Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr

85 90 95

Cys Ala Arg Ser Gly Ala Gly Gly Thr Ser Ala Thr Ala Phe Asp Ile

100 105 110

Trp Gly Pro Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 173

<211> 119

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 173

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ser Ile Ser Ser Ser Ser Ser Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Thr Ile Ala Ala Val Tyr Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 174

<211> 117

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 174

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asp Leu Arg Gly Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 175

<211> 120

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 175

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Pro Ser Gly Tyr Thr Val Thr Ser His

20 25 30

Tyr Ile His Trp Val Arg Arg Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Met Ile Asn Pro Ser Gly Gly Val Thr Ala Tyr Ser Gln Thr Leu

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Ser Asp Thr Ser Ser Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Gly Ser Gly Ser Gly Trp Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Arg

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 176

<211> 123

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 176

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Gly

20 25 30

Gly Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln His Pro Gly Lys Gly Leu Glu

35 40 45

Trp Ile Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser

50 55 60

Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe

65 70 75 80

Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr

85 90 95

Cys Ala Arg Ala Gly Ile Ala Ala Arg Leu Arg Gly Ala Phe Asp Ile

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 177

<211> 129

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 177

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Arg Gly Gly Tyr Gln Leu Leu Arg Trp Asp Val Gly Leu Leu

100 105 110

Arg Ser Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser

115 120 125

Ser

<210> 178

<211> 125

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 178

Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Ile Ser Gly Asp Ser Val Ser Ser Asn

20 25 30

Ser Ala Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Ser Pro Ser Arg Gly Leu Glu

35 40 45

Trp Leu Gly Arg Thr Tyr Tyr Arg Ser Lys Trp Tyr Ser Phe Tyr Ala

50 55 60

Ile Ser Leu Lys Ser Arg Ile Ile Ile Asn Pro Asp Thr Ser Lys Asn

65 70 75 80

Gln Phe Ser Leu Gln Leu Lys Ser Val Thr Pro Glu Asp Thr Ala Val

85 90 95

Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Ser Pro Glu Gly Leu Phe Leu Tyr Trp Phe

100 105 110

Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 179

<211> 118

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 179

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Val Glu Gly Ser Gly Ser Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 180

<211> 118

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 180

Glu Val Gln Leu Val Glu Thr Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ile Thr Phe Ser Arg Tyr

20 25 30

Pro Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Gly Ile Ser Asp Ser Gly Val Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Ala

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe

65 70 75 80

Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Val Thr Arg Ala Gly Ser Glu Ala Ser Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Met Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 181

<211> 124

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 181

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ala Thr Tyr Lys Arg Glu Leu Arg Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp

100 105 110

Val Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 182

<211> 124

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 182

Glu Val Gln Leu Val Glu Thr Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Thr Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ala Thr Tyr Lys Arg Glu Leu Arg Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp

100 105 110

Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 183

<211> 117

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 183

Glu Val Gln Leu Val Glu Thr Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr

20 25 30

Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Gly Ile Ser Trp Asn Ser Gly Ser Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Val Gly Lys Ala Val Pro Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 184

<211> 122

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 184

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr

20 25 30

Ala Met His Trp Val Arg Gln Arg Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Ser Ile Asn Trp Lys Gly Asn Ser Leu Ala Tyr Gly Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Ala Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Phe

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ser His Gln Gly Val Ala Tyr Tyr Asn Tyr Ala Met Asp Val Trp

100 105 110

Gly Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 185

<211> 117

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 185

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Val Val Arg Asp Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 186

<211> 118

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 186

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Ile Pro Gln Thr Gly Thr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 187

<211> 124

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 187

Glu Val Gln Leu Val Glu Thr Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Met Ser Arg Glu Asn Asp Lys Asn Ser Val Phe

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Val Glu Asp Thr Gly Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ala Asn Tyr Lys Arg Glu Leu Arg Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp

100 105 110

Val Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 188

<211> 120

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 188

Glu Val Gln Leu Leu Glu Thr Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Ala Leu Val Gly Ala Thr Gly Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 189

<211> 117

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 189

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Val Leu Trp Phe Gly Glu Gly Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 190

<211> 126

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 190

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Val Gly Tyr Asp Ser Ser Gly Tyr Tyr Arg Asp Tyr Tyr Gly

100 105 110

Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 191

<211> 122

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 191

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Met Gly Trp Ser Ser Gly Tyr Leu Gly Ala Phe Asp Ile Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 192

<211> 107

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 192

Glu Thr Thr Leu Thr Gln Ser Pro Ala Phe Met Ser Ala Thr Pro Gly

1 5 10 15

Asp Lys Val Ile Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asp Asp Ala

20 25 30

Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Glu Ala Pro Leu Phe Ile Ile

35 40 45

Gln Ser Ala Thr Ser Pro Val Pro Gly Ile Pro Pro Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Phe Gly Thr Asp Phe Ser Leu Thr Ile Asn Asn Ile Glu Ser

65 70 75 80

Glu Asp Ala Ala Tyr Tyr Phe Cys Leu Gln His Asp Asn Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 193

<211> 107

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 193

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Tyr Asn Asn

20 25 30

Leu Ala Trp Phe Gln Leu Lys Pro Gly Ser Ala Pro Arg Ser Leu Met

35 40 45

Tyr Ala Ala Asn Lys Ser Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Ala Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Tyr Tyr Arg Phe Pro Tyr

85 90 95

Ser Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 194

<211> 112

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 194

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Glu

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser

20 25 30

Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala

85 90 95

Leu Gln Thr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 195

<211> 108

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 195

Ser Tyr Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Val Ser Ala Ala Pro Gly Tyr

1 5 10 15

Thr Ala Thr Ile Ser Cys Gly Gly Asn Asn Ile Gly Thr Lys Ser Val

20 25 30

His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Leu Leu Val Ile Arg

35 40 45

Asp Asp Ser Val Arg Pro Ser Lys Ile Pro Gly Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Asn Ser Gly Asn Met Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Val Gln Ala Gly

65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Phe Tyr Cys Gln Val Trp Asp Ser Asp Ser Glu His

85 90 95

Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105

<210> 196

<211> 106

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 196

Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln

1 5 10 15

Thr Ala Ser Ile Thr Cys Ser Gly Asp Gly Leu Ser Lys Lys Tyr Val

20 25 30

Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Ala Gly Gln Ser Pro Val Val Leu Ile Ser

35 40 45

Arg Asp Lys Glu Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Asn Ser Ala Asp Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Met

65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ala Trp Asp Asp Thr Thr Val Val

85 90 95

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105

<210> 197

<211> 107

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 197

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Ile Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Asn Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Ala Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Lys Tyr Asn Ser Ala Pro Phe

85 90 95

Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys

100 105

<210> 198

<211> 109

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 198

Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln

1 5 10 15

Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Gly Asn Asn Ile Gly Ser Lys Ser Val

20 25 30

His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Leu Tyr

35 40 45

Gly Lys Asn Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Arg Ser Gly Thr Thr Ala Ser Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu

65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Arg Asp Ser Ser Gly Asp His

85 90 95

Leu Arg Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu

100 105

<210> 199

<211> 108

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 199

Ser Ser Glu Leu Thr Gln Asp Pro Ala Val Ser Val Ala Leu Gly Gln

1 5 10 15

Thr Ile Arg Ile Thr Cys Gln Gly Asp Ser Leu Gly Asn Tyr Tyr Ala

20 25 30

Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr

35 40 45

Gly Thr Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Ala Ser

50 55 60

Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu

65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Asn Ser Arg Asp Ser Ser Gly His His

85 90 95

Leu Leu Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu

100 105

<210> 200

<211> 113

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 200

Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ala

20 25 30

Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Arg Leu Leu

35 40 45

Ile Ser Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Gly

50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu

65 70 75 80

Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Tyr Gly Ser Ser Phe

85 90 95

Asn Gly Ser Ser Leu Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile

100 105 110

Lys

<210> 201

<211> 108

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 201

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Asn Ser

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Ile Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Gly Thr Ser Ser Gly

85 90 95

Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 202

<211> 109

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 202

Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Gly Thr Val Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser

20 25 30

Phe Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu

65 70 75 80

Pro Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr His Ser Ser Pro

85 90 95

Ser Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 203

<211> 109

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 203

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Ser Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Thr Thr

20 25 30

Phe Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Gly Ser Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Arg Arg Leu Glu

65 70 75 80

Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr His Ser Ser Pro

85 90 95

Ser Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 204

<211> 107

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 204

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Tyr

85 90 95

Ser Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 205

<211> 109

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 205

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Thr Gln Ser Ile Gly Ser Ser

20 25 30

Phe Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Gly Ala Ser Gln Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Arg Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu

65 70 75 80

Pro Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Tyr Glu Ser Ser Pro

85 90 95

Ser Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 206

<211> 109

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 206

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser

20 25 30

Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Asn Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu

65 70 75 80

Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Pro Pro

85 90 95

Arg Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys

100 105

<210> 207

<211> 109

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 207

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser

20 25 30

Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu

65 70 75 80

Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Tyr Gly Ser Ser Pro

85 90 95

Ser Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 208

<211> 109

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 208

Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Ser Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Arg Val Ala Ser Asn

20 25 30

Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln His Lys Pro Gly Gln Ala Pro Ser Leu Leu

35 40 45

Ile Ser Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Ala Ile Ser Arg Leu Glu

65 70 75 80

Pro Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Tyr Asp Ser Ser Pro

85 90 95

Ser Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 209

<211> 109

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 209

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Leu Ser Ser Asn

20 25 30

Phe Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Gly Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Gly Ala Ser Asn Trp Ala Thr Gly Thr Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Thr Arg Leu Glu

65 70 75 80

Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Tyr Tyr Gly Thr Ser Pro

85 90 95

Met Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 210

<211> 112

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 210

Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser

20 25 30

Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala

85 90 95

Leu Gln Thr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys

100 105 110

<210> 211

<211> 110

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 211

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser

20 25 30

Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Gly Thr Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Ser Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu

65 70 75 80

Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Tyr Gly Asn Ser Pro

85 90 95

Pro Lys Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 212

<211> 109

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 212

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ala Ser Ser

20 25 30

Phe Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Gly Ala Ser Gly Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu

65 70 75 80

Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Tyr Gly Gly Ser Pro

85 90 95

Arg Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys

100 105

<210> 213

<211> 487

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 213

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu

20 25 30

Val Lys Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly

35 40 45

Ser Ile Ser Ser Ser Tyr Tyr Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro

50 55 60

Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly Ser Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Ala

65 70 75 80

Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr

85 90 95

Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu Arg Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp

100 105 110

Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg His Trp Gln Glu Trp Pro Asp Ala

115 120 125

Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Gly Gly

130 135 140

Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Thr Thr

145 150 155 160

Leu Thr Gln Ser Pro Ala Phe Met Ser Ala Thr Pro Gly Asp Lys Val

165 170 175

Ile Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asp Asp Ala Met Asn Trp

180 185 190

Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Glu Ala Pro Leu Phe Ile Ile Gln Ser Ala

195 200 205

Thr Ser Pro Val Pro Gly Ile Pro Pro Arg Phe Ser Gly Ser Gly Phe

210 215 220

Gly Thr Asp Phe Ser Leu Thr Ile Asn Asn Ile Glu Ser Glu Asp Ala

225 230 235 240

Ala Tyr Tyr Phe Cys Leu Gln His Asp Asn Phe Pro Leu Thr Phe Gly

245 250 255

Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro

260 265 270

Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro

275 280 285

Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu

290 295 300

Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys

305 310 315 320

Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly

325 330 335

Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val

340 345 350

Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu

355 360 365

Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp

370 375 380

Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn

385 390 395 400

Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg

405 410 415

Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly

420 425 430

Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu

435 440 445

Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu

450 455 460

Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His

465 470 475 480

Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

485

<210> 214

<211> 489

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 214

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Gln Val Asn Leu Arg Glu Ser Gly Pro Ala Leu

20 25 30

Val Lys Pro Thr Gln Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe

35 40 45

Ser Leu Arg Thr Ser Gly Met Cys Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro

50 55 60

Gly Lys Ala Leu Glu Trp Leu Ala Arg Ile Asp Trp Asp Glu Asp Lys

65 70 75 80

Phe Tyr Ser Thr Ser Leu Lys Thr Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr

85 90 95

Ser Asp Asn Gln Val Val Leu Arg Met Thr Asn Met Asp Pro Ala Asp

100 105 110

Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Gly Ala Gly Gly Thr Ser Ala

115 120 125

Thr Ala Phe Asp Ile Trp Gly Pro Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser

130 135 140

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp

145 150 155 160

Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp

165 170 175

Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Tyr Asn Asn Leu

180 185 190

Ala Trp Phe Gln Leu Lys Pro Gly Ser Ala Pro Arg Ser Leu Met Tyr

195 200 205

Ala Ala Asn Lys Ser Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser

210 215 220

Ala Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu

225 230 235 240

Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Tyr Tyr Arg Phe Pro Tyr Ser

245 250 255

Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Thr Thr Thr Pro Ala Pro

260 265 270

Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu

275 280 285

Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg

290 295 300

Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly

305 310 315 320

Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys

325 330 335

Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg

340 345 350

Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro

355 360 365

Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser

370 375 380

Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu

385 390 395 400

Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg

405 410 415

Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln

420 425 430

Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr

435 440 445

Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp

450 455 460

Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala

465 470 475 480

Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

485

<210> 215

<211> 490

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 215

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu

20 25 30

Val Lys Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe

35 40 45

Thr Phe Ser Ser Tyr Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys

50 55 60

Gly Leu Glu Trp Val Ser Ser Ile Ser Ser Ser Ser Ser Tyr Ile Tyr

65 70 75 80

Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala

85 90 95

Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr

100 105 110

Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys Thr Ile Ala Ala Val Tyr Ala Phe Asp

115 120 125

Ile Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly

130 135 140

Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Ile Val Leu Thr

145 150 155 160

Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Glu Glu Pro Ala Ser Ile

165 170 175

Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Tyr Asn Tyr

180 185 190

Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile

195 200 205

Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly

210 215 220

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala

225 230 235 240

Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala Leu Gln Thr Pro Tyr

245 250 255

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Thr Thr Thr Pro Ala

260 265 270

Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser

275 280 285

Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr

290 295 300

Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala

305 310 315 320

Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys

325 330 335

Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met

340 345 350

Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe

355 360 365

Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg

370 375 380

Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn

385 390 395 400

Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg

405 410 415

Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro

420 425 430

Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala

435 440 445

Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His

450 455 460

Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp

465 470 475 480

Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

485 490

<210> 216

<211> 484

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 216

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu

20 25 30

Val Lys Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe

35 40 45

Thr Phe Ser Asp Tyr Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys

50 55 60

Gly Leu Glu Trp Val Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile Tyr

65 70 75 80

Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala

85 90 95

Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr

100 105 110

Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Leu Arg Gly Ala Phe Asp Ile Trp

115 120 125

Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

130 135 140

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Tyr Val Leu Thr Gln Ser

145 150 155 160

Pro Ser Val Ser Ala Ala Pro Gly Tyr Thr Ala Thr Ile Ser Cys Gly

165 170 175

Gly Asn Asn Ile Gly Thr Lys Ser Val His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro

180 185 190

Gly Gln Ala Pro Leu Leu Val Ile Arg Asp Asp Ser Val Arg Pro Ser

195 200 205

Lys Ile Pro Gly Arg Phe Ser Gly Ser Asn Ser Gly Asn Met Ala Thr

210 215 220

Leu Thr Ile Ser Gly Val Gln Ala Gly Asp Glu Ala Asp Phe Tyr Cys

225 230 235 240

Gln Val Trp Asp Ser Asp Ser Glu His Val Val Phe Gly Gly Gly Thr

245 250 255

Lys Leu Thr Val Leu Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro

260 265 270

Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys

275 280 285

Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala

290 295 300

Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu

305 310 315 320

Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys

325 330 335

Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr

340 345 350

Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly

355 360 365

Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala

370 375 380

Tyr Lys Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg

385 390 395 400

Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu

405 410 415

Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn

420 425 430

Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met

435 440 445

Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly

450 455 460

Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala

465 470 475 480

Leu Pro Pro Arg

<210> 217

<211> 485

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 217

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val

20 25 30

Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Pro Ser Gly Tyr

35 40 45

Thr Val Thr Ser His Tyr Ile His Trp Val Arg Arg Ala Pro Gly Gln

50 55 60

Gly Leu Glu Trp Met Gly Met Ile Asn Pro Ser Gly Gly Val Thr Ala

65 70 75 80

Tyr Ser Gln Thr Leu Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Ser Asp Thr Ser

85 90 95

Ser Ser Thr Val Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr

100 105 110

Ala Met Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Gly Ser Gly Ser Gly Trp Tyr Phe

115 120 125

Asp Phe Trp Gly Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly

130 135 140

Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Tyr Val Leu

145 150 155 160

Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln Thr Ala Ser Ile

165 170 175

Thr Cys Ser Gly Asp Gly Leu Ser Lys Lys Tyr Val Ser Trp Tyr Gln

180 185 190

Gln Lys Ala Gly Gln Ser Pro Val Val Leu Ile Ser Arg Asp Lys Glu

195 200 205

Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Asn Ser Ala Asp

210 215 220

Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Met Asp Glu Ala Asp

225 230 235 240

Tyr Tyr Cys Gln Ala Trp Asp Asp Thr Thr Val Val Phe Gly Gly Gly

245 250 255

Thr Lys Leu Thr Val Leu Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr

260 265 270

Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala

275 280 285

Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe

290 295 300

Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val

305 310 315 320

Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys

325 330 335

Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr

340 345 350

Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu

355 360 365

Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro

370 375 380

Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly

385 390 395 400

Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro

405 410 415

Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr

420 425 430

Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly

435 440 445

Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln

450 455 460

Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln

465 470 475 480

Ala Leu Pro Pro Arg

485

<210> 218

<211> 489

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 218

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu

20 25 30

Val Lys Pro Ser Gln Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly

35 40 45

Ser Ile Ser Ser Gly Gly Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln His Pro

50 55 60

Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr

65 70 75 80

Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr

85 90 95

Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp

100 105 110

Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Ala Gly Ile Ala Ala Arg Leu Arg

115 120 125

Gly Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser

130 135 140

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp

145 150 155 160

Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly Asp

165 170 175

Arg Val Ile Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Trp Leu

180 185 190

Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Asn Leu Leu Ile Tyr

195 200 205

Ala Ala Ser Asn Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser

210 215 220

Gly Ser Gly Ala Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu

225 230 235 240

Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Lys Tyr Asn Ser Ala Pro Phe Thr

245 250 255

Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys Thr Thr Thr Pro Ala Pro

260 265 270

Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu

275 280 285

Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg

290 295 300

Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly

305 310 315 320

Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys

325 330 335

Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg

340 345 350

Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro

355 360 365

Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser

370 375 380

Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu

385 390 395 400

Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg

405 410 415

Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln

420 425 430

Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr

435 440 445

Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp

450 455 460

Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala

465 470 475 480

Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

485

<210> 219

<211> 497

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 219

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val

20 25 30

Lys Lys Pro Gly Ser Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly

35 40 45

Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln

50 55 60

Gly Leu Glu Trp Met Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn

65 70 75 80

Tyr Ala Gln Lys Phe Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser

85 90 95

Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr

100 105 110

Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Gly Gly Tyr Gln Leu Leu Arg Trp

115 120 125

Asp Val Gly Leu Leu Arg Ser Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr

130 135 140

Met Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

145 150 155 160

Gly Gly Gly Gly Ser Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser

165 170 175

Val Ala Pro Gly Gln Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Gly Asn Asn Ile

180 185 190

Gly Ser Lys Ser Val His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro

195 200 205

Val Leu Val Leu Tyr Gly Lys Asn Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp

210 215 220

Arg Phe Ser Gly Ser Arg Ser Gly Thr Thr Ala Ser Leu Thr Ile Thr

225 230 235 240

Gly Ala Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Arg Asp

245 250 255

Ser Ser Gly Asp His Leu Arg Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr

260 265 270

Val Leu Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr

275 280 285

Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala

290 295 300

Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile

305 310 315 320

Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser

325 330 335

Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr

340 345 350

Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu

355 360 365

Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu

370 375 380

Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln

385 390 395 400

Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu

405 410 415

Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly

420 425 430

Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln

435 440 445

Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu

450 455 460

Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr

465 470 475 480

Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro

485 490 495

Arg

<210> 220

<211> 492

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 220

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu

20 25 30

Val Lys Pro Ser Gln Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Ile Ser Gly Asp

35 40 45

Ser Val Ser Ser Asn Ser Ala Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Ser Pro

50 55 60

Ser Arg Gly Leu Glu Trp Leu Gly Arg Thr Tyr Tyr Arg Ser Lys Trp

65 70 75 80

Tyr Ser Phe Tyr Ala Ile Ser Leu Lys Ser Arg Ile Ile Ile Asn Pro

85 90 95

Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu Gln Leu Lys Ser Val Thr Pro

100 105 110

Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Ser Pro Glu Gly Leu

115 120 125

Phe Leu Tyr Trp Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val

130 135 140

Ser Ser Gly Gly Asp Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

145 150 155 160

Ser Ser Ser Glu Leu Thr Gln Asp Pro Ala Val Ser Val Ala Leu Gly

165 170 175

Gln Thr Ile Arg Ile Thr Cys Gln Gly Asp Ser Leu Gly Asn Tyr Tyr

180 185 190

Ala Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile

195 200 205

Tyr Gly Thr Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Ala

210 215 220

Ser Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala

225 230 235 240

Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Asn Ser Arg Asp Ser Ser Gly His

245 250 255

His Leu Leu Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Thr Thr Thr

260 265 270

Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro

275 280 285

Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val

290 295 300

His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro

305 310 315 320

Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu

325 330 335

Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro

340 345 350

Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys

355 360 365

Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe

370 375 380

Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn Gln Leu

385 390 395 400

Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp

405 410 415

Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys

420 425 430

Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala

435 440 445

Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys

450 455 460

Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr

465 470 475 480

Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

485 490

<210> 221

<211> 490

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 221

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu

20 25 30

Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe

35 40 45

Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys

50 55 60

Gly Leu Glu Trp Val Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr

65 70 75 80

Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser

85 90 95

Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr

100 105 110

Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys Val Glu Gly Ser Gly Ser Leu Asp Tyr

115 120 125

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser

130 135 140

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Ile Val Met Thr Gln

145 150 155 160

Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser

165 170 175

Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ala Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln

180 185 190

Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Arg Leu Leu Ile Ser Gly Ala Ser Thr

195 200 205

Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Gly Gly Ser Gly Ser Gly Thr

210 215 220

Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val

225 230 235 240

Tyr Tyr Cys Gln His Tyr Gly Ser Ser Phe Asn Gly Ser Ser Leu Phe

245 250 255

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys Thr Thr Thr Pro Ala

260 265 270

Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser

275 280 285

Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr

290 295 300

Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala

305 310 315 320

Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys

325 330 335

Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met

340 345 350

Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe

355 360 365

Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg

370 375 380

Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn

385 390 395 400

Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg

405 410 415

Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro

420 425 430

Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala

435 440 445

Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His

450 455 460

Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp

465 470 475 480

Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

485 490

<210> 222

<211> 485

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 222

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Glu Val Gln Leu Val Glu Thr Gly Gly Gly Leu

20 25 30

Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ile

35 40 45

Thr Phe Ser Arg Tyr Pro Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys

50 55 60

Gly Leu Glu Trp Val Ser Gly Ile Ser Asp Ser Gly Val Ser Thr Tyr

65 70 75 80

Tyr Ala Asp Ser Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser

85 90 95

Lys Asn Thr Leu Phe Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Asp Glu Asp Thr

100 105 110

Ala Val Tyr Tyr Cys Val Thr Arg Ala Gly Ser Glu Ala Ser Asp Ile

115 120 125

Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser

130 135 140

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Ile Val Leu Thr Gln

145 150 155 160

Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser

165 170 175

Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Asn Ser Leu Ala Trp Tyr Gln Gln

180 185 190

Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Ser Arg

195 200 205

Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp

210 215 220

Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Ile Tyr

225 230 235 240

Tyr Cys Gln Gln Phe Gly Thr Ser Ser Gly Leu Thr Phe Gly Gly Gly

245 250 255

Thr Lys Leu Glu Ile Lys Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr

260 265 270

Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala

275 280 285

Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe

290 295 300

Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val

305 310 315 320

Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys

325 330 335

Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr

340 345 350

Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu

355 360 365

Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro

370 375 380

Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly

385 390 395 400

Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro

405 410 415

Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr

420 425 430

Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly

435 440 445

Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln

450 455 460

Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln

465 470 475 480

Ala Leu Pro Pro Arg

485

<210> 223

<211> 492

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 223

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu

20 25 30

Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe

35 40 45

Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys

50 55 60

Gly Leu Glu Trp Val Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr

65 70 75 80

Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala

85 90 95

Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr

100 105 110

Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala Arg Ala Thr Tyr Lys Arg Glu Leu Arg Tyr

115 120 125

Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser

130 135 140

Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

145 150 155 160

Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Gly Thr Val Ser Leu Ser Pro Gly

165 170 175

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser

180 185 190

Phe Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu

195 200 205

Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser

210 215 220

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu

225 230 235 240

Pro Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr His Ser Ser Pro

245 250 255

Ser Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys Thr Thr Thr

260 265 270

Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro

275 280 285

Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val

290 295 300

His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro

305 310 315 320

Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu

325 330 335

Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro

340 345 350

Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys

355 360 365

Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe

370 375 380

Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn Gln Leu

385 390 395 400

Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp

405 410 415

Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys

420 425 430

Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala

435 440 445

Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys

450 455 460

Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr

465 470 475 480

Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

485 490

<210> 224

<211> 492

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 224

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Glu Val Gln Leu Val Glu Thr Gly Gly Gly Leu

20 25 30

Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe

35 40 45

Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys

50 55 60

Gly Leu Glu Trp Val Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr

65 70 75 80

Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser

85 90 95

Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Thr Leu Lys Ala Glu Asp Thr

100 105 110

Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Ala Thr Tyr Lys Arg Glu Leu Arg Tyr

115 120 125

Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser

130 135 140

Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

145 150 155 160

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

165 170 175

Glu Ser Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Thr Thr

180 185 190

Phe Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu

195 200 205

Ile Tyr Gly Ser Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser

210 215 220

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Arg Arg Leu Glu

225 230 235 240

Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr His Ser Ser Pro

245 250 255

Ser Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Thr Thr Thr

260 265 270

Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro

275 280 285

Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val

290 295 300

His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro

305 310 315 320

Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu

325 330 335

Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro

340 345 350

Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys

355 360 365

Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe

370 375 380

Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn Gln Leu

385 390 395 400

Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp

405 410 415

Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys

420 425 430

Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala

435 440 445

Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys

450 455 460

Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr

465 470 475 480

Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

485 490

<210> 225

<211> 483

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 225

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Glu Val Gln Leu Val Glu Thr Gly Gly Gly Leu

20 25 30

Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe

35 40 45

Thr Phe Asp Asp Tyr Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys

50 55 60

Gly Leu Glu Trp Val Ser Gly Ile Ser Trp Asn Ser Gly Ser Ile Gly

65 70 75 80

Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala

85 90 95

Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Asp Glu Asp Thr

100 105 110

Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Val Gly Lys Ala Val Pro Asp Val Trp

115 120 125

Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

130 135 140

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Met Thr Gln Thr

145 150 155 160

Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys

165 170 175

Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys

180 185 190

Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln

195 200 205

Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe

210 215 220

Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr

225 230 235 240

Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Tyr Ser Phe Gly Gln Gly Thr Arg

245 250 255

Leu Glu Ile Lys Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala

260 265 270

Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg

275 280 285

Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys

290 295 300

Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu

305 310 315 320

Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu

325 330 335

Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln

340 345 350

Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly

355 360 365

Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr

370 375 380

Lys Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg

385 390 395 400

Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met

405 410 415

Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu

420 425 430

Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys

435 440 445

Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu

450 455 460

Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu

465 470 475 480

Pro Pro Arg

<210> 226

<211> 490

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 226

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu

20 25 30

Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe

35 40 45

Thr Phe Asp Asp Tyr Ala Met His Trp Val Arg Gln Arg Pro Gly Lys

50 55 60

Gly Leu Glu Trp Val Ala Ser Ile Asn Trp Lys Gly Asn Ser Leu Ala

65 70 75 80

Tyr Gly Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Ala Ile Ser Arg Asp Asn Ala

85 90 95

Lys Asn Thr Val Phe Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Thr Glu Asp Thr

100 105 110

Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ser His Gln Gly Val Ala Tyr Tyr Asn Tyr

115 120 125

Ala Met Asp Val Trp Gly Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly

130 135 140

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Ile

145 150 155 160

Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg

165 170 175

Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Thr Gln Ser Ile Gly Ser Ser Phe Leu

180 185 190

Ala Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr

195 200 205

Gly Ala Ser Gln Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Arg

210 215 220

Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Pro Glu

225 230 235 240

Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Tyr Glu Ser Ser Pro Ser Trp

245 250 255

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Thr Thr Thr Pro Ala

260 265 270

Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser

275 280 285

Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr

290 295 300

Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala

305 310 315 320

Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys

325 330 335

Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met

340 345 350

Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe

355 360 365

Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg

370 375 380

Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn

385 390 395 400

Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg

405 410 415

Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro

420 425 430

Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala

435 440 445

Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His

450 455 460

Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp

465 470 475 480

Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

485 490

<210> 227

<211> 485

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 227

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu

20 25 30

Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe

35 40 45

Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys

50 55 60

Gly Leu Glu Trp Val Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr

65 70 75 80

Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser

85 90 95

Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr

100 105 110

Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys Val Val Arg Asp Gly Met Asp Val Trp

115 120 125

Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

130 135 140

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser

145 150 155 160

Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys

165 170 175

Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln

180 185 190

Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg

195 200 205

Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Asn Gly Ser Gly Thr Asp

210 215 220

Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr

225 230 235 240

Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Pro Pro Arg Phe Thr Phe Gly Pro Gly

245 250 255

Thr Lys Val Asp Ile Lys Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr

260 265 270

Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala

275 280 285

Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe

290 295 300

Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val

305 310 315 320

Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys

325 330 335

Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr

340 345 350

Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu

355 360 365

Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro

370 375 380

Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly

385 390 395 400

Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro

405 410 415

Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr

420 425 430

Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly

435 440 445

Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln

450 455 460

Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln

465 470 475 480

Ala Leu Pro Pro Arg

485

<210> 228

<211> 486

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 228

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu

20 25 30

Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe

35 40 45

Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys

50 55 60

Gly Leu Glu Trp Val Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr

65 70 75 80

Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser

85 90 95

Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr

100 105 110

Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys Ile Pro Gln Thr Gly Thr Phe Asp Tyr

115 120 125

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser

130 135 140

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Ile Val Leu Thr Gln

145 150 155 160

Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser

165 170 175

Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln

180 185 190

Gln Arg Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Ser

195 200 205

Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr

210 215 220

Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val

225 230 235 240

Tyr Tyr Cys Gln His Tyr Gly Ser Ser Pro Ser Trp Thr Phe Gly Gln

245 250 255

Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro

260 265 270

Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu

275 280 285

Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp

290 295 300

Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly

305 310 315 320

Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg

325 330 335

Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln

340 345 350

Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu

355 360 365

Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala

370 375 380

Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu

385 390 395 400

Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp

405 410 415

Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu

420 425 430

Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile

435 440 445

Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr

450 455 460

Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met

465 470 475 480

Gln Ala Leu Pro Pro Arg

485

<210> 229

<211> 492

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 229

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Glu Val Gln Leu Val Glu Thr Gly Gly Gly Leu

20 25 30

Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe

35 40 45

Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys

50 55 60

Gly Leu Glu Trp Val Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr

65 70 75 80

Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Met Ser Arg Glu Asn Asp

85 90 95

Lys Asn Ser Val Phe Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Val Glu Asp Thr

100 105 110

Gly Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Ala Asn Tyr Lys Arg Glu Leu Arg Tyr

115 120 125

Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser

130 135 140

Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

145 150 155 160

Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

165 170 175

Glu Ser Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Arg Val Ala Ser Asn

180 185 190

Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln His Lys Pro Gly Gln Ala Pro Ser Leu Leu

195 200 205

Ile Ser Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser

210 215 220

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Ala Ile Ser Arg Leu Glu

225 230 235 240

Pro Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Tyr Asp Ser Ser Pro

245 250 255

Ser Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Thr Thr Thr

260 265 270

Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro

275 280 285

Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val

290 295 300

His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro

305 310 315 320

Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu

325 330 335

Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro

340 345 350

Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys

355 360 365

Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe

370 375 380

Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn Gln Leu

385 390 395 400

Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp

405 410 415

Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys

420 425 430

Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala

435 440 445

Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys

450 455 460

Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr

465 470 475 480

Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

485 490

<210> 230

<211> 488

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 230

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Glu Val Gln Leu Leu Glu Thr Gly Gly Gly Leu

20 25 30

Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe

35 40 45

Ser Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys

50 55 60

Gly Leu Glu Trp Val Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr

65 70 75 80

Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser

85 90 95

Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr

100 105 110

Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys Ala Leu Val Gly Ala Thr Gly Ala Phe

115 120 125

Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly

130 135 140

Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Ile Val Leu

145 150 155 160

Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr

165 170 175

Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Leu Ser Ser Asn Phe Leu Ala Trp

180 185 190

Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Gly Leu Leu Ile Tyr Gly Ala

195 200 205

Ser Asn Trp Ala Thr Gly Thr Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser

210 215 220

Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Thr Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe

225 230 235 240

Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Tyr Tyr Gly Thr Ser Pro Met Tyr Thr Phe

245 250 255

Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg

260 265 270

Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg

275 280 285

Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly

290 295 300

Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr

305 310 315 320

Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg

325 330 335

Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro

340 345 350

Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu

355 360 365

Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala

370 375 380

Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu

385 390 395 400

Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly

405 410 415

Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu

420 425 430

Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser

435 440 445

Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly

450 455 460

Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu

465 470 475 480

His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

485

<210> 231

<211> 488

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 231

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu

20 25 30

Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe

35 40 45

Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys

50 55 60

Gly Leu Glu Trp Val Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr

65 70 75 80

Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser

85 90 95

Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr

100 105 110

Ala Val Tyr Tyr Cys Val Leu Trp Phe Gly Glu Gly Phe Asp Pro Trp

115 120 125

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

130 135 140

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser

145 150 155 160

Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys

165 170 175

Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp

180 185 190

Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu

195 200 205

Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly

210 215 220

Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp

225 230 235 240

Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala Leu Gln Thr Pro Leu Thr Phe

245 250 255

Gly Gly Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg

260 265 270

Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg

275 280 285

Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly

290 295 300

Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr

305 310 315 320

Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg

325 330 335

Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro

340 345 350

Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu

355 360 365

Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala

370 375 380

Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu

385 390 395 400

Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly

405 410 415

Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu

420 425 430

Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser

435 440 445

Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly

450 455 460

Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu

465 470 475 480

His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

485

<210> 232

<211> 495

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 232

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu

20 25 30

Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe

35 40 45

Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys

50 55 60

Gly Leu Glu Trp Val Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr

65 70 75 80

Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser

85 90 95

Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr

100 105 110

Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys Val Gly Tyr Asp Ser Ser Gly Tyr Tyr

115 120 125

Arg Asp Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr

130 135 140

Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly

145 150 155 160

Gly Ser Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser

165 170 175

Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser

180 185 190

Ser Ser Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg

195 200 205

Leu Leu Ile Tyr Gly Thr Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Ser Asp Arg

210 215 220

Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg

225 230 235 240

Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Tyr Gly Asn

245 250 255

Ser Pro Pro Lys Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

260 265 270

Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala

275 280 285

Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly

290 295 300

Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile

305 310 315 320

Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val

325 330 335

Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe

340 345 350

Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly

355 360 365

Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg

370 375 380

Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln

385 390 395 400

Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp

405 410 415

Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro

420 425 430

Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp

435 440 445

Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg

450 455 460

Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr

465 470 475 480

Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

485 490 495

<210> 233

<211> 490

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 233

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu

20 25 30

Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe

35 40 45

Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys

50 55 60

Gly Leu Glu Trp Val Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr

65 70 75 80

Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser

85 90 95

Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr

100 105 110

Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys Met Gly Trp Ser Ser Gly Tyr Leu Gly

115 120 125

Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly

130 135 140

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Ile

145 150 155 160

Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg

165 170 175

Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ala Ser Ser Phe Leu

180 185 190

Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr

195 200 205

Gly Ala Ser Gly Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser

210 215 220

Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro Glu

225 230 235 240

Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Tyr Gly Gly Ser Pro Arg Leu

245 250 255

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys Thr Thr Thr Pro Ala

260 265 270

Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser

275 280 285

Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr

290 295 300

Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala

305 310 315 320

Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys

325 330 335

Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met

340 345 350

Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe

355 360 365

Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg

370 375 380

Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn

385 390 395 400

Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg

405 410 415

Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro

420 425 430

Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala

435 440 445

Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His

450 455 460

Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp

465 470 475 480

Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

485 490

<210> 234

<211> 1461

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полинуклеотид

<400> 234

atggccctcc ctgtcaccgc cctgctgctt ccgctggctc ttctgctcca cgccgctcgg 60

ccccaagtgc agcttcagga aagcggaccg ggcctggtca agccatccga aactctctcc 120

ctgacttgca ctgtgtctgg cggttccatc tcatcgtcgt actactactg gggctggatt 180

aggcagccgc ccggaaaggg actggagtgg atcggaagca tctactattc cggctcggcg 240

tactacaacc ctagcctcaa gtcgagagtg accatctccg tggatacctc caagaaccag 300

ttttccctgc gcctgagctc cgtgaccgcc gctgacaccg ccgtgtacta ctgtgctcgg 360

cattggcagg aatggcccga tgccttcgac atttggggcc agggcactat ggtcactgtg 420

tcatccgggg gtggaggcag cgggggagga gggtccgggg ggggaggttc agagacaacc 480

ttgacccagt cacccgcatt catgtccgcc actccgggag acaaggtcat catctcgtgc 540

aaagcgtccc aggatatcga cgatgccatg aattggtacc agcagaagcc tggcgaagcg 600

ccgctgttca ttatccaatc cgcaacctcg cccgtgcctg gaatcccacc gcggttcagc 660

ggcagcggtt tcggaaccga cttttccctg accattaaca acattgagtc cgaggacgcc 720

gcctactact tctgcctgca acacgacaac ttccctctca cgttcggcca gggaaccaag 780

ctggaaatca agaccactac cccagcaccg aggccaccca ccccggctcc taccatcgcc 840

tcccagcctc tgtccctgcg tccggaggca tgtagacccg cagctggtgg ggccgtgcat 900

acccggggtc ttgacttcgc ctgcgatatc tacatttggg cccctctggc tggtacttgc 960

ggggtcctgc tgctttcact cgtgatcact ctttactgta agcgcggtcg gaagaagctg 1020

ctgtacatct ttaagcaacc cttcatgagg cctgtgcaga ctactcaaga ggaggacggc 1080

tgttcatgcc ggttcccaga ggaggaggaa ggcggctgcg aactgcgcgt gaaattcagc 1140

cgcagcgcag atgctccagc ctacaagcag gggcagaacc agctctacaa cgaactcaat 1200

cttggtcgga gagaggagta cgacgtgctg gacaagcgga gaggacggga cccagaaatg 1260

ggcgggaagc cgcgcagaaa gaatccccaa gagggcctgt acaacgagct ccaaaaggat 1320

aagatggcag aagcctatag cgagattggt atgaaagggg aacgcagaag aggcaaaggc 1380

cacgacggac tgtaccaggg actcagcacc gccaccaagg acacctatga cgctcttcac 1440

atgcaggccc tgccgcctcg g 1461

<210> 235

<211> 1467

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полинуклеотид

<400> 235

atggccctcc ctgtcaccgc cctgctgctt ccgctggctc ttctgctcca cgccgctcgg 60

ccccaagtca atctgcgcga atccggcccc gccttggtca agcctaccca gaccctcact 120

ctgacctgta ctttctccgg cttctccctg cggacttccg ggatgtgcgt gtcctggatc 180

agacagcctc cgggaaaggc cctggagtgg ctcgctcgca ttgactggga tgaggacaag 240

ttctactcca cctcactcaa gaccaggctg accatcagca aagatacctc tgacaaccaa 300

gtggtgctcc gcatgaccaa catggaccca gccgacactg ccacttacta ctgcgcgagg 360

agcggagcgg gcggaacctc cgccaccgcc ttcgatattt ggggcccggg taccatggtc 420

accgtgtcaa gcggaggagg ggggtccggg ggcggcggtt ccgggggagg cggatcggac 480

attcagatga ctcagtcacc atcgtccctg agcgctagcg tgggcgacag agtgacaatc 540

acttgccggg catcccagga catctataac aaccttgcgt ggttccagct gaagcctggt 600

tccgcaccgc ggtcacttat gtacgccgcc aacaagagcc agtcgggagt gccgtcccgg 660

ttttccggtt cggcctcggg aactgacttc accctgacga tctccagcct gcaacccgag 720

gatttcgcca cctactactg ccagcactac taccgctttc cctactcgtt cggacaggga 780

accaagctgg aaatcaagac cactacccca gcaccgaggc cacccacccc ggctcctacc 840

atcgcctccc agcctctgtc cctgcgtccg gaggcatgta gacccgcagc tggtggggcc 900

gtgcataccc ggggtcttga cttcgcctgc gatatctaca tttgggcccc tctggctggt 960

acttgcgggg tcctgctgct ttcactcgtg atcactcttt actgtaagcg cggtcggaag 1020

aagctgctgt acatctttaa gcaacccttc atgaggcctg tgcagactac tcaagaggag 1080

gacggctgtt catgccggtt cccagaggag gaggaaggcg gctgcgaact gcgcgtgaaa 1140

ttcagccgca gcgcagatgc tccagcctac aagcaggggc agaaccagct ctacaacgaa 1200

ctcaatcttg gtcggagaga ggagtacgac gtgctggaca agcggagagg acgggaccca 1260

gaaatgggcg ggaagccgcg cagaaagaat ccccaagagg gcctgtacaa cgagctccaa 1320

aaggataaga tggcagaagc ctatagcgag attggtatga aaggggaacg cagaagaggc 1380

aaaggccacg acggactgta ccagggactc agcaccgcca ccaaggacac ctatgacgct 1440

cttcacatgc aggccctgcc gcctcgg 1467

<210> 236

<211> 1470

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полинуклеотид

<400> 236

atggccctcc ctgtcaccgc cctgctgctt ccgctggctc ttctgctcca cgccgctcgg 60

cccgaagtgc agcttgtcga atccgggggg ggactggtca agccgggcgg atcactgaga 120

ctgtcctgcg ccgcgagcgg cttcacgttc tcctcctact ccatgaactg ggtccgccaa 180

gcccccggga agggactgga atgggtgtcc tctatctcct cgtcgtcgtc ctacatctac 240

tacgccgact ccgtgaaggg aagattcacc atttcccgcg acaacgcaaa gaactcactg 300

tacttgcaaa tgaactcact ccgggccgaa gatactgctg tgtactattg cgccaagact 360

attgccgccg tctacgcttt cgacatctgg ggccagggaa ccaccgtgac tgtgtcgtcc 420

ggtggtggtg gctcgggcgg aggaggaagc ggcggcgggg ggtccgagat tgtgctgacc 480

cagtcgccac tgagcctccc tgtgaccccc gaggaacccg ccagcatcag ctgccggtcc 540

agccagtccc tgctccactc caacggatac aattacctcg attggtacct tcagaagcct 600

ggacaaagcc cgcagctgct catctacttg ggatcaaacc gcgcgtcagg agtgcctgac 660

cggttctccg gctcgggcag cggtaccgat ttcaccctga aaatctccag ggtggaggca 720

gaggacgtgg gagtgtatta ctgtatgcag gcgctgcaga ctccgtacac atttgggcag 780

ggcaccaagc tggagatcaa gaccactacc ccagcaccga ggccacccac cccggctcct 840

accatcgcct cccagcctct gtccctgcgt ccggaggcat gtagacccgc agctggtggg 900

gccgtgcata cccggggtct tgacttcgcc tgcgatatct acatttgggc ccctctggct 960

ggtacttgcg gggtcctgct gctttcactc gtgatcactc tttactgtaa gcgcggtcgg 1020

aagaagctgc tgtacatctt taagcaaccc ttcatgaggc ctgtgcagac tactcaagag 1080

gaggacggct gttcatgccg gttcccagag gaggaggaag gcggctgcga actgcgcgtg 1140

aaattcagcc gcagcgcaga tgctccagcc tacaagcagg ggcagaacca gctctacaac 1200

gaactcaatc ttggtcggag agaggagtac gacgtgctgg acaagcggag aggacgggac 1260

ccagaaatgg gcgggaagcc gcgcagaaag aatccccaag agggcctgta caacgagctc 1320

caaaaggata agatggcaga agcctatagc gagattggta tgaaagggga acgcagaaga 1380

ggcaaaggcc acgacggact gtaccaggga ctcagcaccg ccaccaagga cacctatgac 1440

gctcttcaca tgcaggccct gccgcctcgg 1470

<210> 237

<211> 1452

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полинуклеотид

<400> 237

atggccctcc ctgtcaccgc cctgctgctt ccgctggctc ttctgctcca cgccgctcgg 60

cccgaagtcc agctcgtgga gtccggcgga ggccttgtga agcctggagg ttcgctgaga 120

ctgtcctgcg ccgcctccgg cttcaccttc tccgactact acatgtcctg gatcagacag 180

gccccgggaa agggcctgga atgggtgtcc tacatctcgt catcgggcag cactatctac 240

tacgcggact cagtgaaggg gcggttcacc atttcccggg ataacgcgaa gaactcgctg 300

tatctgcaaa tgaactcact gagggccgag gacaccgccg tgtactactg cgcccgcgat 360

ctccgcgggg catttgacat ctggggacag ggaaccatgg tcacagtgtc cagcggaggg 420

ggaggatcgg gtggcggagg ttccgggggt ggaggctcct cctacgtgct gactcagagc 480

ccaagcgtca gcgctgcgcc cggttacacg gcaaccatct cctgtggcgg aaacaacatt 540

gggaccaagt ctgtgcactg gtatcagcag aagccgggcc aagctcccct gttggtgatc 600

cgcgatgact ccgtgcggcc tagcaaaatt ccgggacggt tctccggctc caacagcggc 660

aatatggcca ctctcaccat ctcgggagtg caggccggag atgaagccga cttctactgc 720

caagtctggg actcagactc cgagcatgtg gtgttcgggg gcggaaccaa gctgactgtg 780

ctcaccacta ccccagcacc gaggccaccc accccggctc ctaccatcgc ctcccagcct 840

ctgtccctgc gtccggaggc atgtagaccc gcagctggtg gggccgtgca tacccggggt 900

cttgacttcg cctgcgatat ctacatttgg gcccctctgg ctggtacttg cggggtcctg 960

ctgctttcac tcgtgatcac tctttactgt aagcgcggtc ggaagaagct gctgtacatc 1020

tttaagcaac ccttcatgag gcctgtgcag actactcaag aggaggacgg ctgttcatgc 1080

cggttcccag aggaggagga aggcggctgc gaactgcgcg tgaaattcag ccgcagcgca 1140

gatgctccag cctacaagca ggggcagaac cagctctaca acgaactcaa tcttggtcgg 1200

agagaggagt acgacgtgct ggacaagcgg agaggacggg acccagaaat gggcgggaag 1260

ccgcgcagaa agaatcccca agagggcctg tacaacgagc tccaaaagga taagatggca 1320

gaagcctata gcgagattgg tatgaaaggg gaacgcagaa gaggcaaagg ccacgacgga 1380

ctgtaccagg gactcagcac cgccaccaag gacacctatg acgctcttca catgcaggcc 1440

ctgccgcctc gg 1452

<210> 238

<211> 1455

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полинуклеотид

<400> 238

atggccctcc ctgtcaccgc cctgctgctt ccgctggctc ttctgctcca cgccgctcgg 60

ccccaagtgc agctggtgca gagcggggcc gaagtcaaga agccgggagc ctccgtgaaa 120

gtgtcctgca agccttcggg atacaccgtg acctcccact acattcattg ggtccgccgc 180

gcccccggcc aaggactcga gtggatgggc atgatcaacc ctagcggcgg agtgaccgcg 240

tacagccaga cgctgcaggg acgcgtgact atgacctcgg atacctcctc ctccaccgtc 300

tatatggaac tgtccagcct gcggtccgag gataccgcca tgtactactg cgcccgggaa 360

ggatcaggct ccgggtggta tttcgacttc tggggaagag gcaccctcgt gactgtgtca 420

tctgggggag ggggttccgg tggtggcgga tcgggaggag gcggttcatc ctacgtgctg 480

acccagccac cctccgtgtc cgtgagcccc ggccagactg catcgattac atgtagcggc 540

gacggcctct ccaagaaata cgtgtcgtgg taccagcaga aggccggaca gagcccggtg 600

gtgctgatct caagagataa ggagcggcct agcggaatcc cggacaggtt ctcgggttcc 660

aactccgcgg acactgctac tctgaccatc tcggggaccc aggctatgga cgaagccgat 720

tactactgcc aagcctggga cgacactact gtcgtgtttg gagggggcac caagttgacc 780

gtccttacca ctaccccagc accgaggcca cccaccccgg ctcctaccat cgcctcccag 840

cctctgtccc tgcgtccgga ggcatgtaga cccgcagctg gtggggccgt gcatacccgg 900

ggtcttgact tcgcctgcga tatctacatt tgggcccctc tggctggtac ttgcggggtc 960

ctgctgcttt cactcgtgat cactctttac tgtaagcgcg gtcggaagaa gctgctgtac 1020

atctttaagc aacccttcat gaggcctgtg cagactactc aagaggagga cggctgttca 1080

tgccggttcc cagaggagga ggaaggcggc tgcgaactgc gcgtgaaatt cagccgcagc 1140

gcagatgctc cagcctacaa gcaggggcag aaccagctct acaacgaact caatcttggt 1200

cggagagagg agtacgacgt gctggacaag cggagaggac gggacccaga aatgggcggg 1260

aagccgcgca gaaagaatcc ccaagagggc ctgtacaacg agctccaaaa ggataagatg 1320

gcagaagcct atagcgagat tggtatgaaa ggggaacgca gaagaggcaa aggccacgac 1380

ggactgtacc agggactcag caccgccacc aaggacacct atgacgctct tcacatgcag 1440

gccctgccgc ctcgg 1455

<210> 239

<211> 1467

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полинуклеотид

<400> 239

atggccctcc ctgtcaccgc cctgctgctt ccgctggctc ttctgctcca cgccgctcgg 60

ccccaagtgc agcttcagga gagcggcccg ggactcgtga agccgtccca gaccctgtcc 120

ctgacttgca ccgtgtcggg aggaagcatc tcgagcggag gctactattg gtcgtggatt 180

cggcagcacc ctggaaaggg cctggaatgg atcggctaca tctactactc cggctcgacc 240

tactacaacc catcgctgaa gtccagagtg acaatctcag tggacacgtc caagaatcag 300

ttcagcctga agctctcttc cgtgactgcg gccgacaccg ccgtgtacta ctgcgcacgc 360

gctggaattg ccgcccggct gaggggtgcc ttcgacattt ggggacaggg caccatggtc 420

accgtgtcct ccggcggcgg aggttccggg ggtggaggct caggaggagg ggggtccgac 480

atcgtcatga ctcagtcgcc ctcaagcgtc agcgcgtccg tcggggacag agtgatcatc 540

acctgtcggg cgtcccaggg aattcgcaac tggctggcct ggtatcagca gaagcccgga 600

aaggccccca acctgttgat ctacgccgcc tcaaacctcc aatccggggt gccgagccgc 660

ttcagcggct ccggttcggg tgccgatttc actctgacca tctcctccct gcaacctgaa 720

gatgtggcta cctactactg ccaaaagtac aactccgcac cttttacttt cggaccgggg 780

accaaagtgg acattaagac cactacccca gcaccgaggc cacccacccc ggctcctacc 840

atcgcctccc agcctctgtc cctgcgtccg gaggcatgta gacccgcagc tggtggggcc 900

gtgcataccc ggggtcttga cttcgcctgc gatatctaca tttgggcccc tctggctggt 960

acttgcgggg tcctgctgct ttcactcgtg atcactcttt actgtaagcg cggtcggaag 1020

aagctgctgt acatctttaa gcaacccttc atgaggcctg tgcagactac tcaagaggag 1080

gacggctgtt catgccggtt cccagaggag gaggaaggcg gctgcgaact gcgcgtgaaa 1140

ttcagccgca gcgcagatgc tccagcctac aagcaggggc agaaccagct ctacaacgaa 1200

ctcaatcttg gtcggagaga ggagtacgac gtgctggaca agcggagagg acgggaccca 1260

gaaatgggcg ggaagccgcg cagaaagaat ccccaagagg gcctgtacaa cgagctccaa 1320

aaggataaga tggcagaagc ctatagcgag attggtatga aaggggaacg cagaagaggc 1380

aaaggccacg acggactgta ccagggactc agcaccgcca ccaaggacac ctatgacgct 1440

cttcacatgc aggccctgcc gcctcgg 1467

<210> 240

<211> 1491

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полинуклеотид

<400> 240

atggccctcc ctgtcaccgc cctgctgctt ccgctggctc ttctgctcca cgccgctcgg 60

ccccaagtgc agctggtcca gtcgggcgcc gaggtcaaga agcccgggag ctctgtgaaa 120

gtgtcctgca aggcctccgg gggcaccttt agctcctacg ccatctcctg ggtccgccaa 180

gcaccgggtc aaggcctgga gtggatgggg ggaattatcc ctatcttcgg cactgccaac 240

tacgcccaga agttccaggg acgcgtgacc attaccgcgg acgaatccac ctccaccgct 300

tatatggagc tgtccagctt gcgctcggaa gataccgccg tgtactactg cgcccggagg 360

ggtggatacc agctgctgag atgggacgtg ggcctcctgc ggtcggcgtt cgacatctgg 420

ggccagggca ctatggtcac tgtgtccagc ggaggaggcg gatcgggagg cggcggatca 480

gggggaggcg gttccagcta cgtgcttact caaccccctt cggtgtccgt ggccccggga 540

cagaccgcca gaatcacttg cggaggaaac aacattgggt ccaagagcgt gcattggtac 600

cagcagaagc caggacaggc ccctgtgctg gtgctctacg ggaagaacaa tcggcccagc 660

ggagtgccgg acaggttctc gggttcacgc tccggtacaa ccgcttcact gactatcacc 720

ggggcccagg cagaggatga agcggactac tactgttcct cccgggattc atccggcgac 780

cacctccggg tgttcggaac cggaacgaag gtcaccgtgc tgaccactac cccagcaccg 840

aggccaccca ccccggctcc taccatcgcc tcccagcctc tgtccctgcg tccggaggca 900

tgtagacccg cagctggtgg ggccgtgcat acccggggtc ttgacttcgc ctgcgatatc 960

tacatttggg cccctctggc tggtacttgc ggggtcctgc tgctttcact cgtgatcact 1020

ctttactgta agcgcggtcg gaagaagctg ctgtacatct ttaagcaacc cttcatgagg 1080

cctgtgcaga ctactcaaga ggaggacggc tgttcatgcc ggttcccaga ggaggaggaa 1140

ggcggctgcg aactgcgcgt gaaattcagc cgcagcgcag atgctccagc ctacaagcag 1200

gggcagaacc agctctacaa cgaactcaat cttggtcgga gagaggagta cgacgtgctg 1260

gacaagcgga gaggacggga cccagaaatg ggcgggaagc cgcgcagaaa gaatccccaa 1320

gagggcctgt acaacgagct ccaaaaggat aagatggcag aagcctatag cgagattggt 1380

atgaaagggg aacgcagaag aggcaaaggc cacgacggac tgtaccaggg actcagcacc 1440

gccaccaagg acacctatga cgctcttcac atgcaggccc tgccgcctcg g 1491

<210> 241

<211> 1476

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полинуклеотид

<400> 241

atggccctcc ctgtcaccgc cctgctgctt ccgctggctc ttctgctcca cgccgctcgg 60

cccgaagtgc agctccaaca gtcaggaccg gggctcgtga agccatccca gaccctgtcc 120

ctgacttgtg ccatctcggg agatagcgtg tcatcgaact ccgccgcctg gaactggatt 180

cggcagagcc cgtcccgcgg actggagtgg cttggaagga cctactaccg gtccaagtgg 240

tactctttct acgcgatctc gctgaagtcc cgcattatca ttaaccctga tacctccaag 300

aatcagttct ccctccaact gaaatccgtc acccccgagg acacagcagt gtattactgc 360

gcacggagca gccccgaagg actgttcctg tattggtttg acccctgggg ccaggggact 420

cttgtgaccg tgtcgagcgg cggagatggg tccggtggcg gtggttcggg gggcggcgga 480

tcatcatccg aactgaccca ggacccggct gtgtccgtgg cgctgggaca aaccatccgc 540

attacgtgcc agggagactc cctgggcaac tactacgcca cttggtacca gcagaagccg 600

ggccaagccc ctgtgttggt catctacggg accaacaaca gaccttccgg catccccgac 660

cggttcagcg cttcgtcctc cggcaacact gccagcctga ccatcactgg agcgcaggcc 720

gaagatgagg ccgactacta ctgcaacagc agagactcct cgggtcatca cctcttgttc 780

ggaactggaa ccaaggtcac cgtgctgacc actaccccag caccgaggcc acccaccccg 840

gctcctacca tcgcctccca gcctctgtcc ctgcgtccgg aggcatgtag acccgcagct 900

ggtggggccg tgcatacccg gggtcttgac ttcgcctgcg atatctacat ttgggcccct 960

ctggctggta cttgcggggt cctgctgctt tcactcgtga tcactcttta ctgtaagcgc 1020

ggtcggaaga agctgctgta catctttaag caacccttca tgaggcctgt gcagactact 1080

caagaggagg acggctgttc atgccggttc ccagaggagg aggaaggcgg ctgcgaactg 1140

cgcgtgaaat tcagccgcag cgcagatgct ccagcctaca agcaggggca gaaccagctc 1200

tacaacgaac tcaatcttgg tcggagagag gagtacgacg tgctggacaa gcggagagga 1260

cgggacccag aaatgggcgg gaagccgcgc agaaagaatc cccaagaggg cctgtacaac 1320

gagctccaaa aggataagat ggcagaagcc tatagcgaga ttggtatgaa aggggaacgc 1380

agaagaggca aaggccacga cggactgtac cagggactca gcaccgccac caaggacacc 1440

tatgacgctc ttcacatgca ggccctgccg cctcgg 1476

<210> 242

<211> 1470

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полинуклеотид

<400> 242

atggccctcc ctgtcaccgc cctgctgctt ccgctggctc ttctgctcca cgccgctcgg 60

cccgaagtgc agctcgtgga gtcaggaggc ggcctggtcc agccgggagg gtcccttaga 120

ctgtcatgcg ccgcaagcgg attcactttc tcctcctatg ccatgagctg ggtccgccaa 180

gcccccggaa agggactgga atgggtgtcc gccatctcgg ggtctggagg ctcaacttac 240

tacgctgact ccgtgaaggg acggttcacc attagccgcg acaactccaa gaacaccctc 300

tacctccaaa tgaactccct gcgggccgag gataccgccg tctactactg cgccaaagtg 360

gaaggttcag gatcgctgga ctactgggga cagggtactc tcgtgaccgt gtcatcgggc 420

ggaggaggtt ccggcggtgg cggctccggc ggcggagggt cggagatcgt gatgacccag 480

agccctggta ctctgagcct ttcgccggga gaaagggcca ccctgtcctg ccgcgcttcc 540

caatccgtgt cctccgcgta cttggcgtgg taccagcaga agccgggaca gccccctcgg 600

ctgctgatca gcggggccag cacccgggca accggaatcc cagacagatt cgggggttcc 660

ggcagcggca cagatttcac cctgactatt tcgaggttgg agcccgagga ctttgcggtg 720

tattactgtc agcactacgg gtcgtccttt aatggctcca gcctgttcac gttcggacag 780

gggacccgcc tggaaatcaa gaccactacc ccagcaccga ggccacccac cccggctcct 840

accatcgcct cccagcctct gtccctgcgt ccggaggcat gtagacccgc agctggtggg 900

gccgtgcata cccggggtct tgacttcgcc tgcgatatct acatttgggc ccctctggct 960

ggtacttgcg gggtcctgct gctttcactc gtgatcactc tttactgtaa gcgcggtcgg 1020

aagaagctgc tgtacatctt taagcaaccc ttcatgaggc ctgtgcagac tactcaagag 1080

gaggacggct gttcatgccg gttcccagag gaggaggaag gcggctgcga actgcgcgtg 1140

aaattcagcc gcagcgcaga tgctccagcc tacaagcagg ggcagaacca gctctacaac 1200

gaactcaatc ttggtcggag agaggagtac gacgtgctgg acaagcggag aggacgggac 1260

ccagaaatgg gcgggaagcc gcgcagaaag aatccccaag agggcctgta caacgagctc 1320

caaaaggata agatggcaga agcctatagc gagattggta tgaaagggga acgcagaaga 1380

ggcaaaggcc acgacggact gtaccaggga ctcagcaccg ccaccaagga cacctatgac 1440

gctcttcaca tgcaggccct gccgcctcgg 1470

<210> 243

<211> 1455

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полинуклеотид

<400> 243

atggccctcc ctgtcaccgc cctgctgctt ccgctggctc ttctgctcca cgccgctcgg 60

cccgaagtgc aactggtgga aaccggtggc ggcctggtgc agcctggagg atcattgagg 120

ctgtcatgcg cggccagcgg tattaccttc tcccggtacc ccatgtcctg ggtcagacag 180

gccccgggga aagggcttga atgggtgtcc gggatctcgg actccggtgt cagcacttac 240

tacgccgact ccgccaaggg acgcttcacc atttcccggg acaactcgaa gaacaccctg 300

ttcctccaaa tgagctccct ccgggacgag gatactgcag tgtactactg cgtgacccgc 360

gccgggtccg aggcgtctga catttgggga cagggcacta tggtcaccgt gtcgtccggc 420

ggagggggct cgggaggcgg tggcagcgga ggaggagggt ccgagatcgt gctgacccaa 480

tccccggcca ccctctcgct gagccctgga gaaagggcaa ccttgtcctg tcgcgcgagc 540

cagtccgtga gcaactccct ggcctggtac cagcagaagc ccggacaggc tccgagactt 600

ctgatctacg acgcttcgag ccgggccact ggaatccccg accgcttttc ggggtccggc 660

tcaggaaccg atttcaccct gacaatctca cggctggagc cagaggattt cgccatctat 720

tactgccagc agttcggtac ttcctccggc ctgactttcg gaggcggcac gaagctcgaa 780

atcaagacca ctaccccagc accgaggcca cccaccccgg ctcctaccat cgcctcccag 840

cctctgtccc tgcgtccgga ggcatgtaga cccgcagctg gtggggccgt gcatacccgg 900

ggtcttgact tcgcctgcga tatctacatt tgggcccctc tggctggtac ttgcggggtc 960

ctgctgcttt cactcgtgat cactctttac tgtaagcgcg gtcggaagaa gctgctgtac 1020

atctttaagc aacccttcat gaggcctgtg cagactactc aagaggagga cggctgttca 1080

tgccggttcc cagaggagga ggaaggcggc tgcgaactgc gcgtgaaatt cagccgcagc 1140

gcagatgctc cagcctacaa gcaggggcag aaccagctct acaacgaact caatcttggt 1200

cggagagagg agtacgacgt gctggacaag cggagaggac gggacccaga aatgggcggg 1260

aagccgcgca gaaagaatcc ccaagagggc ctgtacaacg agctccaaaa ggataagatg 1320

gcagaagcct atagcgagat tggtatgaaa ggggaacgca gaagaggcaa aggccacgac 1380

ggactgtacc agggactcag caccgccacc aaggacacct atgacgctct tcacatgcag 1440

gccctgccgc ctcgg 1455

<210> 244

<211> 1476

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полинуклеотид

<400> 244

atggccctcc ctgtcaccgc cctgctgctt ccgctggctc ttctgctcca cgccgctcgg 60

ccccaagtgc agctcgtgga atcgggtggc ggactggtgc agccgggggg ctcacttaga 120

ctgtcctgcg cggccagcgg attcactttc tcctcctacg ccatgtcctg ggtcagacag 180

gcccctggaa agggcctgga atgggtgtcc gcaatcagcg gcagcggcgg ctcgacctat 240

tacgcggatt cagtgaaggg cagattcacc atttcccggg acaacgccaa gaactccttg 300

taccttcaaa tgaactccct ccgcgcggaa gataccgcaa tctactactg cgctcgggcc 360

acttacaaga gggaactgcg ctactactac gggatggacg tctggggcca gggaaccatg 420

gtcaccgtgt ccagcggagg aggaggatcg ggaggaggcg gtagcggggg tggagggtcg 480

gagatcgtga tgacccagtc ccccggcact gtgtcgctgt cccccggcga acgggccacc 540

ctgtcatgtc gggccagcca gtcagtgtcg tcaagcttcc tcgcctggta ccagcagaaa 600

ccgggacaag ctccccgcct gctgatctac ggagccagca gccgggccac cggtattcct 660

gaccggttct ccggttcggg gtccgggacc gactttactc tgactatctc tcgcctcgag 720

ccagaggact ccgccgtgta ttactgccag cagtaccact cctccccgtc ctggacgttc 780

ggacagggca caaggctgga gattaagacc actaccccag caccgaggcc acccaccccg 840

gctcctacca tcgcctccca gcctctgtcc ctgcgtccgg aggcatgtag acccgcagct 900

ggtggggccg tgcatacccg gggtcttgac ttcgcctgcg atatctacat ttgggcccct 960

ctggctggta cttgcggggt cctgctgctt tcactcgtga tcactcttta ctgtaagcgc 1020

ggtcggaaga agctgctgta catctttaag caacccttca tgaggcctgt gcagactact 1080

caagaggagg acggctgttc atgccggttc ccagaggagg aggaaggcgg ctgcgaactg 1140

cgcgtgaaat tcagccgcag cgcagatgct ccagcctaca agcaggggca gaaccagctc 1200

tacaacgaac tcaatcttgg tcggagagag gagtacgacg tgctggacaa gcggagagga 1260

cgggacccag aaatgggcgg gaagccgcgc agaaagaatc cccaagaggg cctgtacaac 1320

gagctccaaa aggataagat ggcagaagcc tatagcgaga ttggtatgaa aggggaacgc 1380

agaagaggca aaggccacga cggactgtac cagggactca gcaccgccac caaggacacc 1440

tatgacgctc ttcacatgca ggccctgccg cctcgg 1476

<210> 245

<211> 1476

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полинуклеотид

<400> 245

atggccctcc ctgtcaccgc cctgctgctt ccgctggctc ttctgctcca cgccgctcgg 60

cccgaggtgc agcttgtgga aaccggtggc ggactggtgc agcccggagg aagcctcagg 120

ctgtcctgcg ccgcgtccgg cttcaccttc tcctcgtacg ccatgtcctg ggtccgccag 180

gcccccggaa agggcctgga atgggtgtcc gccatctctg gaagcggagg ttccacgtac 240

tacgcggaca gcgtcaaggg aaggttcaca atctcccgcg ataattcgaa gaacactctg 300

taccttcaaa tgaacaccct gaaggccgag gacactgctg tgtactactg cgcacgggcc 360

acctacaaga gagagctccg gtactactac ggaatggacg tctggggcca gggaactact 420

gtgaccgtgt cctcgggagg gggtggctcc ggggggggcg gctccggcgg aggcggttcc 480

gagattgtgc tgacccagtc accttcaact ctgtcgctgt ccccgggaga gagcgctact 540

ctgagctgcc gggccagcca gtccgtgtcc accaccttcc tcgcctggta tcagcagaag 600

ccggggcagg caccacggct cttgatctac gggtcaagca acagagcgac cggaattcct 660

gaccgcttct cggggagcgg ttcaggcacc gacttcaccc tgactatccg gcgcctggaa 720

cccgaagatt tcgccgtgta ttactgtcaa cagtaccact cctcgccgtc ctggaccttt 780

ggccaaggaa ccaaagtgga aatcaagacc actaccccag caccgaggcc acccaccccg 840

gctcctacca tcgcctccca gcctctgtcc ctgcgtccgg aggcatgtag acccgcagct 900

ggtggggccg tgcatacccg gggtcttgac ttcgcctgcg atatctacat ttgggcccct 960

ctggctggta cttgcggggt cctgctgctt tcactcgtga tcactcttta ctgtaagcgc 1020

ggtcggaaga agctgctgta catctttaag caacccttca tgaggcctgt gcagactact 1080

caagaggagg acggctgttc atgccggttc ccagaggagg aggaaggcgg ctgcgaactg 1140

cgcgtgaaat tcagccgcag cgcagatgct ccagcctaca agcaggggca gaaccagctc 1200

tacaacgaac tcaatcttgg tcggagagag gagtacgacg tgctggacaa gcggagagga 1260

cgggacccag aaatgggcgg gaagccgcgc agaaagaatc cccaagaggg cctgtacaac 1320

gagctccaaa aggataagat ggcagaagcc tatagcgaga ttggtatgaa aggggaacgc 1380

agaagaggca aaggccacga cggactgtac cagggactca gcaccgccac caaggacacc 1440

tatgacgctc ttcacatgca ggccctgccg cctcgg 1476

<210> 246

<211> 1449

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полинуклеотид

<400> 246

atggccctcc ctgtcaccgc cctgctgctt ccgctggctc ttctgctcca cgccgctcgg 60

cccgaagtgc agctcgtgga aactggaggt ggactcgtgc agcctggacg gtcgctgcgg 120

ctgagctgcg ctgcatccgg cttcaccttc gacgattatg ccatgcactg ggtcagacag 180

gcgccaggga agggacttga gtgggtgtcc ggtatcagct ggaatagcgg ctcaatcgga 240

tacgcggact ccgtgaaggg aaggttcacc atttcccgcg acaacgccaa gaactccctg 300

tacttgcaaa tgaacagcct ccgggatgag gacactgccg tgtactactg cgcccgcgtc 360

ggaaaagctg tgcccgacgt ctggggccag ggaaccactg tgaccgtgtc cagcggcggg 420

ggtggatcgg gcggtggagg gtccggtgga gggggctcag atattgtgat gacccagacc 480

ccctcgtccc tgtccgcctc ggtcggcgac cgcgtgacta tcacatgtag agcctcgcag 540

agcatctcca gctacctgaa ctggtatcag cagaagccgg ggaaggcccc gaagctcctg 600

atctacgcgg catcatcact gcaatcggga gtgccgagcc ggttttccgg gtccggctcc 660

ggcaccgact tcacgctgac catttcttcc ctgcaacccg aggacttcgc cacttactac 720

tgccagcagt cctactccac cccttactcc ttcggccaag gaaccaggct ggaaatcaag 780

accactaccc cagcaccgag gccacccacc ccggctccta ccatcgcctc ccagcctctg 840

tccctgcgtc cggaggcatg tagacccgca gctggtgggg ccgtgcatac ccggggtctt 900

gacttcgcct gcgatatcta catttgggcc cctctggctg gtacttgcgg ggtcctgctg 960

ctttcactcg tgatcactct ttactgtaag cgcggtcgga agaagctgct gtacatcttt 1020

aagcaaccct tcatgaggcc tgtgcagact actcaagagg aggacggctg ttcatgccgg 1080

ttcccagagg aggaggaagg cggctgcgaa ctgcgcgtga aattcagccg cagcgcagat 1140

gctccagcct acaagcaggg gcagaaccag ctctacaacg aactcaatct tggtcggaga 1200

gaggagtacg acgtgctgga caagcggaga ggacgggacc cagaaatggg cgggaagccg 1260

cgcagaaaga atccccaaga gggcctgtac aacgagctcc aaaaggataa gatggcagaa 1320

gcctatagcg agattggtat gaaaggggaa cgcagaagag gcaaaggcca cgacggactg 1380

taccagggac tcagcaccgc caccaaggac acctatgacg ctcttcacat gcaggccctg 1440

ccgcctcgg 1449

<210> 247

<211> 1470

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полинуклеотид

<400> 247

atggccctcc ctgtcaccgc cctgctgctt ccgctggctc ttctgctcca cgccgctcgg 60

cccgaagtgc agctcgtgga gagcggggga ggattggtgc agcccggaag gtccctgcgg 120

ctctcctgca ctgcgtctgg cttcaccttc gacgactacg cgatgcactg ggtcagacag 180

cgcccgggaa agggcctgga atgggtcgcc tcaatcaact ggaagggaaa ctccctggcc 240

tatggcgaca gcgtgaaggg ccgcttcgcc atttcgcgcg acaacgccaa gaacaccgtg 300

tttctgcaaa tgaattccct gcggaccgag gataccgctg tgtactactg cgccagccac 360

cagggcgtgg catactataa ctacgccatg gacgtgtggg gaagagggac gctcgtcacc 420

gtgtcctccg ggggcggtgg atcgggtgga ggaggaagcg gtggcggggg cagcgaaatc 480

gtgctgactc agagcccggg aactctttca ctgtccccgg gagaacgggc cactctctcg 540

tgccgggcca cccagtccat cggctcctcc ttccttgcct ggtaccagca gaggccagga 600

caggcgcccc gcctgctgat ctacggtgct tcccaacgcg ccactggcat tcctgaccgg 660

ttcagcggca gagggtcggg aaccgatttc acactgacca tttcccgggt ggagcccgaa 720

gattcggcag tctactactg tcagcattac gagtcctccc cttcatggac cttcggtcaa 780

gggaccaaag tggagatcaa gaccactacc ccagcaccga ggccacccac cccggctcct 840

accatcgcct cccagcctct gtccctgcgt ccggaggcat gtagacccgc agctggtggg 900

gccgtgcata cccggggtct tgacttcgcc tgcgatatct acatttgggc ccctctggct 960

ggtacttgcg gggtcctgct gctttcactc gtgatcactc tttactgtaa gcgcggtcgg 1020

aagaagctgc tgtacatctt taagcaaccc ttcatgaggc ctgtgcagac tactcaagag 1080

gaggacggct gttcatgccg gttcccagag gaggaggaag gcggctgcga actgcgcgtg 1140

aaattcagcc gcagcgcaga tgctccagcc tacaagcagg ggcagaacca gctctacaac 1200

gaactcaatc ttggtcggag agaggagtac gacgtgctgg acaagcggag aggacgggac 1260

ccagaaatgg gcgggaagcc gcgcagaaag aatccccaag agggcctgta caacgagctc 1320

caaaaggata agatggcaga agcctatagc gagattggta tgaaagggga acgcagaaga 1380

ggcaaaggcc acgacggact gtaccaggga ctcagcaccg ccaccaagga cacctatgac 1440

gctcttcaca tgcaggccct gccgcctcgg 1470

<210> 248

<211> 1455

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полинуклеотид

<400> 248

atggccctcc ctgtcaccgc cctgctgctt ccgctggctc ttctgctcca cgccgctcgg 60

cccgaggtgc agttggtcga aagcgggggc gggcttgtgc agcctggcgg atcactgcgg 120

ctgtcctgcg cggcatcagg cttcacgttt tcttcctacg ccatgtcctg ggtgcgccag 180

gcccctggaa agggactgga atgggtgtcc gcgatttcgg ggtccggcgg gagcacctac 240

tacgccgatt ccgtgaaggg ccgcttcact atctcgcggg acaactccaa gaacaccctc 300

tacctccaaa tgaatagcct gcgggccgag gataccgccg tctactattg cgctaaggtc 360

gtgcgcgacg gaatggacgt gtggggacag ggtaccaccg tgacagtgtc ctcgggggga 420

ggcggtagcg gcggaggagg aagcggtggt ggaggttccg agattgtgct gactcaatca 480

cccgcgaccc tgagcctgtc ccccggcgaa agggccactc tgtcctgtcg ggccagccaa 540

tcagtctcct cctcgtacct ggcctggtac cagcagaagc caggacaggc tccgagactc 600

cttatctatg gcgcatcctc ccgcgccacc ggaatcccgg ataggttctc gggaaacgga 660

tcggggaccg acttcactct caccatctcc cggctggaac cggaggactt cgccgtgtac 720

tactgccagc agtacggcag cccgcctaga ttcactttcg gccccggcac caaagtggac 780

atcaagacca ctaccccagc accgaggcca cccaccccgg ctcctaccat cgcctcccag 840

cctctgtccc tgcgtccgga ggcatgtaga cccgcagctg gtggggccgt gcatacccgg 900

ggtcttgact tcgcctgcga tatctacatt tgggcccctc tggctggtac ttgcggggtc 960

ctgctgcttt cactcgtgat cactctttac tgtaagcgcg gtcggaagaa gctgctgtac 1020

atctttaagc aacccttcat gaggcctgtg cagactactc aagaggagga cggctgttca 1080

tgccggttcc cagaggagga ggaaggcggc tgcgaactgc gcgtgaaatt cagccgcagc 1140

gcagatgctc cagcctacaa gcaggggcag aaccagctct acaacgaact caatcttggt 1200

cggagagagg agtacgacgt gctggacaag cggagaggac gggacccaga aatgggcggg 1260

aagccgcgca gaaagaatcc ccaagagggc ctgtacaacg agctccaaaa ggataagatg 1320

gcagaagcct atagcgagat tggtatgaaa ggggaacgca gaagaggcaa aggccacgac 1380

ggactgtacc agggactcag caccgccacc aaggacacct atgacgctct tcacatgcag 1440

gccctgccgc ctcgg 1455

<210> 249

<211> 1458

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полинуклеотид

<400> 249

atggccctcc ctgtcaccgc cctgctgctt ccgctggctc ttctgctcca cgccgctcgg 60

cccgaagtgc agctgctgga gtccggcggt ggattggtgc aaccgggggg atcgctcaga 120

ctgtcctgtg cggcgtcagg cttcaccttc tcgagctacg ccatgtcatg ggtcagacag 180

gcccctggaa agggtctgga atgggtgtcc gccatttccg ggagcggggg atctacatac 240

tacgccgata gcgtgaaggg ccgcttcacc atttcccggg acaactccaa gaacactctc 300

tatctgcaaa tgaactccct ccgcgctgag gacactgccg tgtactactg cgccaaaatc 360

cctcagaccg gcaccttcga ctactgggga caggggactc tggtcaccgt cagcagcggt 420

ggcggaggtt cggggggagg aggaagcggc ggcggagggt ccgagattgt gctgacccag 480

tcacccggca ctttgtccct gtcgcctgga gaaagggcca ccctttcctg ccgggcatcc 540

caatccgtgt cctcctcgta cctggcctgg taccagcaga ggcccggaca ggccccacgg 600

cttctgatct acggagcaag cagccgcgcg accggtatcc cggaccggtt ttcgggctcg 660

ggctcaggaa ctgacttcac cctcaccatc tcccgcctgg aacccgaaga tttcgctgtg 720

tattactgcc agcactacgg cagctccccg tcctggacgt tcggccaggg aactcggctg 780

gagatcaaga ccactacccc agcaccgagg ccacccaccc cggctcctac catcgcctcc 840

cagcctctgt ccctgcgtcc ggaggcatgt agacccgcag ctggtggggc cgtgcatacc 900

cggggtcttg acttcgcctg cgatatctac atttgggccc ctctggctgg tacttgcggg 960

gtcctgctgc tttcactcgt gatcactctt tactgtaagc gcggtcggaa gaagctgctg 1020

tacatcttta agcaaccctt catgaggcct gtgcagacta ctcaagagga ggacggctgt 1080

tcatgccggt tcccagagga ggaggaaggc ggctgcgaac tgcgcgtgaa attcagccgc 1140

agcgcagatg ctccagccta caagcagggg cagaaccagc tctacaacga actcaatctt 1200

ggtcggagag aggagtacga cgtgctggac aagcggagag gacgggaccc agaaatgggc 1260

gggaagccgc gcagaaagaa tccccaagag ggcctgtaca acgagctcca aaaggataag 1320

atggcagaag cctatagcga gattggtatg aaaggggaac gcagaagagg caaaggccac 1380

gacggactgt accagggact cagcaccgcc accaaggaca cctatgacgc tcttcacatg 1440

caggccctgc cgcctcgg 1458

<210> 250

<211> 1476

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полинуклеотид

<400> 250

atggccctcc ctgtcaccgc cctgctgctt ccgctggctc ttctgctcca cgccgctcgg 60

cccgaagtgc aactggtgga aaccggtgga ggactcgtgc agcctggcgg cagcctccgg 120

ctgagctgcg ccgcttcggg attcaccttt tcctcctacg cgatgtcttg ggtcagacag 180

gcccccggaa aggggctgga atgggtgtca gccatctccg gctccggcgg atcaacgtac 240

tacgccgact ccgtgaaagg ccggttcacc atgtcgcgcg agaatgacaa gaactccgtg 300

ttcctgcaaa tgaactccct gagggtggag gacaccggag tgtactattg tgcgcgcgcc 360

aactacaaga gagagctgcg gtactactac ggaatggacg tctggggaca gggaactatg 420

gtgaccgtgt catccggtgg agggggaagc ggcggtggag gcagcggggg cgggggttca 480

gaaattgtca tgacccagtc cccgggaact ctttccctct cccccgggga atccgcgact 540

ttgtcctgcc gggccagcca gcgcgtggcc tcgaactacc tcgcatggta ccagcataag 600

ccaggccaag ccccttccct gctgatttcc ggggctagca gccgcgccac tggcgtgccg 660

gataggttct cgggaagcgg ctcgggtacc gatttcaccc tggcaatctc gcggctggaa 720

ccggaggatt cggccgtgta ctactgccag cactatgact catccccctc ctggacattc 780

ggacagggca ccaaggtcga gatcaagacc actaccccag caccgaggcc acccaccccg 840

gctcctacca tcgcctccca gcctctgtcc ctgcgtccgg aggcatgtag acccgcagct 900

ggtggggccg tgcatacccg gggtcttgac ttcgcctgcg atatctacat ttgggcccct 960

ctggctggta cttgcggggt cctgctgctt tcactcgtga tcactcttta ctgtaagcgc 1020

ggtcggaaga agctgctgta catctttaag caacccttca tgaggcctgt gcagactact 1080

caagaggagg acggctgttc atgccggttc ccagaggagg aggaaggcgg ctgcgaactg 1140

cgcgtgaaat tcagccgcag cgcagatgct ccagcctaca agcaggggca gaaccagctc 1200

tacaacgaac tcaatcttgg tcggagagag gagtacgacg tgctggacaa gcggagagga 1260

cgggacccag aaatgggcgg gaagccgcgc agaaagaatc cccaagaggg cctgtacaac 1320

gagctccaaa aggataagat ggcagaagcc tatagcgaga ttggtatgaa aggggaacgc 1380

agaagaggca aaggccacga cggactgtac cagggactca gcaccgccac caaggacacc 1440

tatgacgctc ttcacatgca ggccctgccg cctcgg 1476

<210> 251

<211> 1464

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полинуклеотид

<400> 251

atggccctcc ctgtcaccgc cctgctgctt ccgctggctc ttctgctcca cgccgctcgg 60

cccgaagtgc agctgctcga aaccggtgga gggctggtgc agccaggggg ctccctgagg 120

ctttcatgcg ccgctagcgg attctccttc tcctcttacg ccatgtcgtg ggtccgccaa 180

gcccctggaa aaggcctgga atgggtgtcc gcgatttccg ggagcggagg ttcgacctat 240

tacgccgact ccgtgaaggg ccgctttacc atctcccggg ataactccaa gaacactctg 300

tacctccaaa tgaactcgct gagagccgag gacaccgccg tgtattactg cgcgaaggcg 360

ctggtcggcg cgactggggc attcgacatc tggggacagg gaactcttgt gaccgtgtcg 420

agcggaggcg gcggctccgg cggaggaggg agcgggggcg gtggttccga aatcgtgttg 480

actcagtccc cgggaaccct gagcttgtca cccggggagc gggccactct ctcctgtcgc 540

gcctcccaat cgctctcatc caatttcctg gcctggtacc agcagaagcc cggacaggcc 600

ccgggcctgc tcatctacgg cgcttcaaac tgggcaacgg gaacccctga tcggttcagc 660

ggaagcggat cgggtactga ctttaccctg accatcacca gactggaacc ggaggacttc 720

gccgtgtact actgccagta ctacggcacc tcccccatgt acacattcgg acagggtacc 780

aaggtcgaga ttaagaccac taccccagca ccgaggccac ccaccccggc tcctaccatc 840

gcctcccagc ctctgtccct gcgtccggag gcatgtagac ccgcagctgg tggggccgtg 900

catacccggg gtcttgactt cgcctgcgat atctacattt gggcccctct ggctggtact 960

tgcggggtcc tgctgctttc actcgtgatc actctttact gtaagcgcgg tcggaagaag 1020

ctgctgtaca tctttaagca acccttcatg aggcctgtgc agactactca agaggaggac 1080

ggctgttcat gccggttccc agaggaggag gaaggcggct gcgaactgcg cgtgaaattc 1140

agccgcagcg cagatgctcc agcctacaag caggggcaga accagctcta caacgaactc 1200

aatcttggtc ggagagagga gtacgacgtg ctggacaagc ggagaggacg ggacccagaa 1260

atgggcggga agccgcgcag aaagaatccc caagagggcc tgtacaacga gctccaaaag 1320

gataagatgg cagaagccta tagcgagatt ggtatgaaag gggaacgcag aagaggcaaa 1380

ggccacgacg gactgtacca gggactcagc accgccacca aggacaccta tgacgctctt 1440

cacatgcagg ccctgccgcc tcgg 1464

<210> 252

<211> 1464

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полинуклеотид

<400> 252

atggccctcc ctgtcaccgc cctgctgctt ccgctggctc ttctgctcca cgccgctcgg 60

cccgaagtgc agctgcttga gagcggtgga ggtctggtgc agcccggggg atcactgcgc 120

ctgtcctgtg ccgcgtccgg tttcactttc tcctcgtacg ccatgtcgtg ggtcagacag 180

gcaccgggaa agggactgga atgggtgtca gccatttcgg gttcgggggg cagcacctac 240

tacgctgact ccgtgaaggg ccggttcacc atttcccgcg acaactccaa gaacaccttg 300

tacctccaaa tgaactccct gcgggccgaa gataccgccg tgtattactg cgtgctgtgg 360

ttcggagagg gattcgaccc gtggggacaa ggaacactcg tgactgtgtc atccggcgga 420

ggcggcagcg gtggcggcgg ttccggcggc ggcggatctg acatcgtgtt gacccagtcc 480

cctctgagcc tgccggtcac tcctggcgaa ccagccagca tctcctgccg gtcgagccag 540

tccctcctgc actccaatgg gtacaactac ctcgattggt atctgcaaaa gccgggccag 600

agcccccagc tgctgatcta ccttgggtca aaccgcgctt ccggggtgcc tgatagattc 660

tccgggtccg ggagcggaac cgactttacc ctgaaaatct cgagggtgga ggccgaggac 720

gtcggagtgt actactgcat gcaggcgctc cagactcccc tgaccttcgg aggaggaacg 780

aaggtcgaca tcaagaccac taccccagca ccgaggccac ccaccccggc tcctaccatc 840

gcctcccagc ctctgtccct gcgtccggag gcatgtagac ccgcagctgg tggggccgtg 900

catacccggg gtcttgactt cgcctgcgat atctacattt gggcccctct ggctggtact 960

tgcggggtcc tgctgctttc actcgtgatc actctttact gtaagcgcgg tcggaagaag 1020

ctgctgtaca tctttaagca acccttcatg aggcctgtgc agactactca agaggaggac 1080

ggctgttcat gccggttccc agaggaggag gaaggcggct gcgaactgcg cgtgaaattc 1140

agccgcagcg cagatgctcc agcctacaag caggggcaga accagctcta caacgaactc 1200

aatcttggtc ggagagagga gtacgacgtg ctggacaagc ggagaggacg ggacccagaa 1260

atgggcggga agccgcgcag aaagaatccc caagagggcc tgtacaacga gctccaaaag 1320

gataagatgg cagaagccta tagcgagatt ggtatgaaag gggaacgcag aagaggcaaa 1380

ggccacgacg gactgtacca gggactcagc accgccacca aggacaccta tgacgctctt 1440

cacatgcagg ccctgccgcc tcgg 1464

<210> 253

<211> 1485

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полинуклеотид

<400> 253

atggccctcc ctgtcaccgc cctgctgctt ccgctggctc ttctgctcca cgccgctcgg 60

ccccaagtgc agctcgtgga gtcaggcgga ggactggtgc agcccggggg ctccctgaga 120

ctttcctgcg cggcatcggg ttttaccttc tcctcctatg ctatgtcctg ggtgcgccag 180

gccccgggaa agggactgga atgggtgtcc gcaatcagcg gtagcggggg ctcaacatac 240

tacgccgact ccgtcaaggg tcgcttcact atttcccggg acaactccaa gaataccctg 300

tacctccaaa tgaacagcct cagggccgag gatactgccg tgtactactg cgccaaagtc 360

ggatacgata gctccggtta ctaccgggac tactacggaa tggacgtgtg gggacagggc 420

accaccgtga ccgtgtcaag cggcggaggc ggttcaggag ggggaggctc cggcggtgga 480

gggtccgaaa tcgtcctgac tcagtcgcct ggcactctgt cgttgtcccc gggggagcgc 540

gctaccctgt cgtgtcgggc gtcgcagtcc gtgtcgagct cctacctcgc gtggtaccag 600

cagaagcccg gacaggcccc tagacttctg atctacggca cttcttcacg cgccaccggg 660

atcagcgaca ggttcagcgg ctccggctcc gggaccgact tcaccctgac cattagccgg 720

ctggagcctg aagatttcgc cgtgtattac tgccaacact acggaaactc gccgccaaag 780

ttcacgttcg gacccggaac caagctggaa atcaagacca ctaccccagc accgaggcca 840

cccaccccgg ctcctaccat cgcctcccag cctctgtccc tgcgtccgga ggcatgtaga 900

cccgcagctg gtggggccgt gcatacccgg ggtcttgact tcgcctgcga tatctacatt 960

tgggcccctc tggctggtac ttgcggggtc ctgctgcttt cactcgtgat cactctttac 1020

tgtaagcgcg gtcggaagaa gctgctgtac atctttaagc aacccttcat gaggcctgtg 1080

cagactactc aagaggagga cggctgttca tgccggttcc cagaggagga ggaaggcggc 1140

tgcgaactgc gcgtgaaatt cagccgcagc gcagatgctc cagcctacaa gcaggggcag 1200

aaccagctct acaacgaact caatcttggt cggagagagg agtacgacgt gctggacaag 1260

cggagaggac gggacccaga aatgggcggg aagccgcgca gaaagaatcc ccaagagggc 1320

ctgtacaacg agctccaaaa ggataagatg gcagaagcct atagcgagat tggtatgaaa 1380

ggggaacgca gaagaggcaa aggccacgac ggactgtacc agggactcag caccgccacc 1440

aaggacacct atgacgctct tcacatgcag gccctgccgc ctcgg 1485

<210> 254

<211> 1470

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полинуклеотид

<400> 254

atggccctcc ctgtcaccgc cctgctgctt ccgctggctc ttctgctcca cgccgctcgg 60

cccgaagtcc aactggtgga gtccggggga gggctcgtgc agcccggagg cagccttcgg 120

ctgtcgtgcg ccgcctccgg gttcacgttc tcatcctacg cgatgtcgtg ggtcagacag 180

gcaccaggaa agggactgga atgggtgtcc gccattagcg gctccggcgg tagcacctac 240

tatgccgact cagtgaaggg aaggttcact atctcccgcg acaacagcaa gaacaccctg 300

tacctccaaa tgaactctct gcgggccgag gataccgcgg tgtactattg cgccaagatg 360

ggttggtcca gcggatactt gggagccttc gacatttggg gacagggcac tactgtgacc 420

gtgtcctccg ggggtggcgg atcgggaggc ggcggctcgg gtggaggggg ttccgaaatc 480

gtgttgaccc agtcaccggg aaccctctcg ctgtccccgg gagaacgggc tacactgtca 540

tgtagagcgt cccagtccgt ggcttcctcg ttcctggcct ggtaccagca gaagccggga 600

caggcacccc gcctgctcat ctacggagcc agcggccggg cgaccggcat ccctgaccgc 660

ttctccggtt ccggctcggg caccgacttt actctgacca ttagcaggct tgagcccgag 720

gattttgccg tgtactactg ccaacactac ggggggagcc ctcgcctgac cttcggaggc 780

ggaactaagg tcgatatcaa aaccactacc ccagcaccga ggccacccac cccggctcct 840

accatcgcct cccagcctct gtccctgcgt ccggaggcat gtagacccgc agctggtggg 900

gccgtgcata cccggggtct tgacttcgcc tgcgatatct acatttgggc ccctctggct 960

ggtacttgcg gggtcctgct gctttcactc gtgatcactc tttactgtaa gcgcggtcgg 1020

aagaagctgc tgtacatctt taagcaaccc ttcatgaggc ctgtgcagac tactcaagag 1080

gaggacggct gttcatgccg gttcccagag gaggaggaag gcggctgcga actgcgcgtg 1140

aaattcagcc gcagcgcaga tgctccagcc tacaagcagg ggcagaacca gctctacaac 1200

gaactcaatc ttggtcggag agaggagtac gacgtgctgg acaagcggag aggacgggac 1260

ccagaaatgg gcgggaagcc gcgcagaaag aatccccaag agggcctgta caacgagctc 1320

caaaaggata agatggcaga agcctatagc gagattggta tgaaagggga acgcagaaga 1380

ggcaaaggcc acgacggact gtaccaggga ctcagcaccg ccaccaagga cacctatgac 1440

gctcttcaca tgcaggccct gccgcctcgg 1470

<210> 255

<211> 122

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 255

Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Asp Leu Lys Lys Pro Gly Glu

1 5 10 15

Thr Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Phe

20 25 30

Gly Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Phe Lys Trp Met

35 40 45

Ala Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Ser Tyr Phe Ala Asp Asp Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Val Glu Thr Ser Ala Thr Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Glu Ile Tyr Tyr Gly Tyr Asp Gly Gly Phe Ala Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala

115 120

<210> 256

<211> 117

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 256

Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu

1 5 10 15

Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Ser Ile Asn Trp Val Lys Arg Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Asn Thr Glu Thr Arg Glu Pro Ala Tyr Ala Tyr Asp Phe

50 55 60

Arg Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Tyr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Leu Asp Tyr Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 257

<211> 117

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 257

Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu

1 5 10 15

Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Arg His Tyr

20 25 30

Ser Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met

35 40 45

Gly Arg Ile Asn Thr Glu Ser Gly Val Pro Ile Tyr Ala Asp Asp Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Val Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Val Ile Asn Asn Leu Lys Asp Glu Asp Thr Ala Ser Tyr Phe Cys

85 90 95

Ser Asn Asp Tyr Leu Tyr Ser Leu Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Ala

100 105 110

Leu Thr Val Ser Ser

115

<210> 258

<211> 117

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 258

Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu

1 5 10 15

Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr His Tyr

20 25 30

Ser Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met

35 40 45

Gly Arg Ile Asn Thr Glu Thr Gly Glu Pro Leu Tyr Ala Asp Asp Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Val Ile Asn Asn Leu Lys Asn Glu Asp Thr Ala Thr Phe Phe Cys

85 90 95

Ser Asn Asp Tyr Leu Tyr Ser Cys Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr

100 105 110

Leu Thr Val Ser Ser

115

<210> 259

<211> 107

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 259

Asp Val Val Met Thr Gln Ser His Arg Phe Met Ser Thr Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala

20 25 30

Val Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Phe Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Ala Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala

65 70 75 80

Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Trp

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Asp Ile Lys

100 105

<210> 260

<211> 111

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 260

Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Met Ser Leu Gly

1 5 10 15

Lys Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Ser Val Ile

20 25 30

Gly Ala His Leu Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro

35 40 45

Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ala

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asp

65 70 75 80

Pro Val Glu Glu Asp Asp Val Ala Ile Tyr Ser Cys Leu Gln Ser Arg

85 90 95

Ile Phe Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 261

<211> 111

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 261

Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Pro Ser Leu Ala Met Ser Leu Gly

1 5 10 15

Lys Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Thr Ile Leu

20 25 30

Gly Ser His Leu Ile Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro

35 40 45

Thr Leu Leu Ile Gln Leu Ala Ser Asn Val Gln Thr Gly Val Pro Ala

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asp

65 70 75 80

Pro Val Glu Glu Asp Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Ser Arg

85 90 95

Thr Ile Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 262

<211> 111

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 262

Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Pro Ser Leu Ala Met Ser Leu Gly

1 5 10 15

Lys Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Thr Ile Leu

20 25 30

Gly Ser His Leu Ile Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro

35 40 45

Thr Leu Leu Ile Gln Leu Ala Ser Asn Val Gln Thr Gly Val Pro Ala

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asp

65 70 75 80

Pro Val Glu Glu Asp Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Ser Arg

85 90 95

Thr Ile Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 263

<211> 244

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 263

Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Asp Leu Lys Lys Pro Gly Glu

1 5 10 15

Thr Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Phe

20 25 30

Gly Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Phe Lys Trp Met

35 40 45

Ala Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Ser Tyr Phe Ala Asp Asp Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Val Glu Thr Ser Ala Thr Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Glu Ile Tyr Tyr Gly Tyr Asp Gly Gly Phe Ala Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala Gly Gly Gly Gly Ser Gly

115 120 125

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Val Val Met Thr Gln Ser

130 135 140

His Arg Phe Met Ser Thr Ser Val Gly Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys

145 150 155 160

Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala Val Ser Trp Tyr Gln Gln Lys

165 170 175

Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Phe Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr

180 185 190

Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Ala Asp Phe

195 200 205

Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr

210 215 220

Cys Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys

225 230 235 240

Leu Asp Ile Lys

<210> 264

<211> 249

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 264

Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu

1 5 10 15

Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Ser Ile Asn Trp Val Lys Arg Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Asn Thr Glu Thr Arg Glu Pro Ala Tyr Ala Tyr Asp Phe

50 55 60

Arg Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Tyr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Leu Asp Tyr Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

115 120 125

Gly Gly Gly Ser Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys

130 135 140

Lys Pro Gly Glu Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr

145 150 155 160

Phe Thr Asp Tyr Ser Ile Asn Trp Val Lys Arg Ala Pro Gly Lys Gly

165 170 175

Leu Lys Trp Met Gly Trp Ile Asn Thr Glu Thr Arg Glu Pro Ala Tyr

180 185 190

Ala Tyr Asp Phe Arg Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala

195 200 205

Ser Thr Ala Tyr Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Tyr Glu Asp Thr Ala

210 215 220

Thr Tyr Phe Cys Ala Leu Asp Tyr Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly

225 230 235 240

Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser

245

<210> 265

<211> 243

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 265

Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu

1 5 10 15

Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Arg His Tyr

20 25 30

Ser Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met

35 40 45

Gly Arg Ile Asn Thr Glu Ser Gly Val Pro Ile Tyr Ala Asp Asp Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Val Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Val Ile Asn Asn Leu Lys Asp Glu Asp Thr Ala Ser Tyr Phe Cys

85 90 95

Ser Asn Asp Tyr Leu Tyr Ser Leu Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Ala

100 105 110

Leu Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

115 120 125

Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Pro Ser Leu Ala

130 135 140

Met Ser Leu Gly Lys Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser

145 150 155 160

Val Thr Ile Leu Gly Ser His Leu Ile Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro

165 170 175

Gly Gln Pro Pro Thr Leu Leu Ile Gln Leu Ala Ser Asn Val Gln Thr

180 185 190

Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr

195 200 205

Leu Thr Ile Asp Pro Val Glu Glu Asp Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys

210 215 220

Leu Gln Ser Arg Thr Ile Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu

225 230 235 240

Glu Ile Lys

<210> 266

<211> 243

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 266

Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu

1 5 10 15

Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr His Tyr

20 25 30

Ser Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met

35 40 45

Gly Arg Ile Asn Thr Glu Thr Gly Glu Pro Leu Tyr Ala Asp Asp Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Val Ile Asn Asn Leu Lys Asn Glu Asp Thr Ala Thr Phe Phe Cys

85 90 95

Ser Asn Asp Tyr Leu Tyr Ser Cys Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr

100 105 110

Leu Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

115 120 125

Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Pro Ser Leu Ala

130 135 140

Met Ser Leu Gly Lys Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser

145 150 155 160

Val Thr Ile Leu Gly Ser His Leu Ile Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro

165 170 175

Gly Gln Pro Pro Thr Leu Leu Ile Gln Leu Ala Ser Asn Val Gln Thr

180 185 190

Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr

195 200 205

Leu Thr Ile Asp Pro Val Glu Glu Asp Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys

210 215 220

Leu Gln Ser Arg Thr Ile Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu

225 230 235 240

Glu Ile Lys

<210> 267

<211> 467

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 267

Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Asp Leu Lys Lys Pro Gly Glu

1 5 10 15

Thr Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Phe

20 25 30

Gly Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Phe Lys Trp Met

35 40 45

Ala Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Ser Tyr Phe Ala Asp Asp Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Val Glu Thr Ser Ala Thr Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Glu Ile Tyr Tyr Gly Tyr Asp Gly Gly Phe Ala Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala Gly Gly Gly Gly Ser Gly

115 120 125

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Val Val Met Thr Gln Ser

130 135 140

His Arg Phe Met Ser Thr Ser Val Gly Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys

145 150 155 160

Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala Val Ser Trp Tyr Gln Gln Lys

165 170 175

Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Phe Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr

180 185 190

Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Ala Asp Phe

195 200 205

Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr

210 215 220

Cys Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys

225 230 235 240

Leu Asp Ile Lys Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala

245 250 255

Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg

260 265 270

Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys

275 280 285

Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu

290 295 300

Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu

305 310 315 320

Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln

325 330 335

Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly

340 345 350

Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr

355 360 365

Lys Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg

370 375 380

Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met

385 390 395 400

Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu

405 410 415

Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys

420 425 430

Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu

435 440 445

Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu

450 455 460

Pro Pro Arg

465

<210> 268

<211> 472

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 268

Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu

1 5 10 15

Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Ser Ile Asn Trp Val Lys Arg Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Asn Thr Glu Thr Arg Glu Pro Ala Tyr Ala Tyr Asp Phe

50 55 60

Arg Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Tyr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Leu Asp Tyr Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

115 120 125

Gly Gly Gly Ser Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys

130 135 140

Lys Pro Gly Glu Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr

145 150 155 160

Phe Thr Asp Tyr Ser Ile Asn Trp Val Lys Arg Ala Pro Gly Lys Gly

165 170 175

Leu Lys Trp Met Gly Trp Ile Asn Thr Glu Thr Arg Glu Pro Ala Tyr

180 185 190

Ala Tyr Asp Phe Arg Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala

195 200 205

Ser Thr Ala Tyr Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Tyr Glu Asp Thr Ala

210 215 220

Thr Tyr Phe Cys Ala Leu Asp Tyr Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly

225 230 235 240

Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg

245 250 255

Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg

260 265 270

Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly

275 280 285

Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr

290 295 300

Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg

305 310 315 320

Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro

325 330 335

Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu

340 345 350

Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala

355 360 365

Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu

370 375 380

Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly

385 390 395 400

Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu

405 410 415

Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser

420 425 430

Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly

435 440 445

Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu

450 455 460

His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

465 470

<210> 269

<211> 466

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 269

Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu

1 5 10 15

Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Arg His Tyr

20 25 30

Ser Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met

35 40 45

Gly Arg Ile Asn Thr Glu Ser Gly Val Pro Ile Tyr Ala Asp Asp Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Val Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Val Ile Asn Asn Leu Lys Asp Glu Asp Thr Ala Ser Tyr Phe Cys

85 90 95

Ser Asn Asp Tyr Leu Tyr Ser Leu Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Ala

100 105 110

Leu Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

115 120 125

Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Pro Ser Leu Ala

130 135 140

Met Ser Leu Gly Lys Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser

145 150 155 160

Val Thr Ile Leu Gly Ser His Leu Ile Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro

165 170 175

Gly Gln Pro Pro Thr Leu Leu Ile Gln Leu Ala Ser Asn Val Gln Thr

180 185 190

Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr

195 200 205

Leu Thr Ile Asp Pro Val Glu Glu Asp Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys

210 215 220

Leu Gln Ser Arg Thr Ile Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu

225 230 235 240

Glu Ile Lys Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro

245 250 255

Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro

260 265 270

Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp

275 280 285

Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu

290 295 300

Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu

305 310 315 320

Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu

325 330 335

Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys

340 345 350

Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys

355 360 365

Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu

370 375 380

Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly

385 390 395 400

Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu

405 410 415

Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly

420 425 430

Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser

435 440 445

Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro

450 455 460

Pro Arg

465

<210> 270

<211> 466

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 270

Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu

1 5 10 15

Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr His Tyr

20 25 30

Ser Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met

35 40 45

Gly Arg Ile Asn Thr Glu Thr Gly Glu Pro Leu Tyr Ala Asp Asp Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Val Ile Asn Asn Leu Lys Asn Glu Asp Thr Ala Thr Phe Phe Cys

85 90 95

Ser Asn Asp Tyr Leu Tyr Ser Cys Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr

100 105 110

Leu Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

115 120 125

Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Pro Ser Leu Ala

130 135 140

Met Ser Leu Gly Lys Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser

145 150 155 160

Val Thr Ile Leu Gly Ser His Leu Ile Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro

165 170 175

Gly Gln Pro Pro Thr Leu Leu Ile Gln Leu Ala Ser Asn Val Gln Thr

180 185 190

Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr

195 200 205

Leu Thr Ile Asp Pro Val Glu Glu Asp Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys

210 215 220

Leu Gln Ser Arg Thr Ile Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu

225 230 235 240

Glu Ile Lys Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro

245 250 255

Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro

260 265 270

Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp

275 280 285

Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu

290 295 300

Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu

305 310 315 320

Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu

325 330 335

Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys

340 345 350

Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys

355 360 365

Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu

370 375 380

Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly

385 390 395 400

Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu

405 410 415

Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly

420 425 430

Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser

435 440 445

Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro

450 455 460

Pro Arg

465

<210> 271

<211> 249

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 271

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Asn Tyr

20 25 30

Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Ala Thr Tyr Arg Gly His Ser Asp Thr Tyr Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Ala Ile Tyr Asn Gly Tyr Asp Val Leu Asp Asn Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly

115 120 125

Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln

130 135 140

Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val

145 150 155 160

Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr Leu Asn Trp

165 170 175

Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Tyr Thr

180 185 190

Ser Asn Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser

195 200 205

Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe

210 215 220

Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Arg Lys Leu Pro Trp Thr Phe Gly

225 230 235 240

Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg

245

<210> 272

<211> 747

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полинуклеотид

<400> 272

caggtgcagc tggtccagag cggcgccgaa gtgaagaagc ccggcagctc cgtgaaagtg 60

agctgcaagg ccagcggcgg caccttcagc aactactgga tgcactgggt gaggcaggcc 120

cccggacagg gcctggagtg gatgggcgcc acctacaggg gccacagcga cacctactac 180

aaccagaagt tcaagggccg ggtgaccatc accgccgaca agagcaccag caccgcctac 240

atggaactga gcagcctcag gagcgaggac accgctgtgt attactgcgc caggggcgcc 300

atctacaacg gctacgacgt gctggacaac tggggccagg gcacactagt gaccgtgtcc 360

agcggtggag gaggtagcgg aggaggcggg agcggtggag gtggctctgg aggtggcgga 420

agcgacatcc agatgaccca gagccctagc tcactgagcg ccagcgtggg cgacagggtg 480

accattacct gctccgccag ccaggacatc agcaactacc tgaactggta ccagcagaag 540

cccggcaagg cccccaagct gctgatctac tacacctcca acctgcactc cggcgtgccc 600

agcaggttca gcggaagcgg cagcggcacc gatttcaccc tgaccatctc cagcctgcag 660

cccgaggact tcgccaccta ctactgccag cagtacagga agctcccctg gactttcggc 720

cagggcacca aactggagat caagcgt 747

<210> 273

<211> 249

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 273

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr

20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Tyr Thr Ser Asn Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Arg Lys Leu Pro Trp

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Gly Gly Gly Gly

100 105 110

Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

115 120 125

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

130 135 140

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Asn Tyr

145 150 155 160

Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

165 170 175

Gly Ala Thr Tyr Arg Gly His Ser Asp Thr Tyr Tyr Asn Gln Lys Phe

180 185 190

Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

195 200 205

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

210 215 220

Ala Arg Gly Ala Ile Tyr Asn Gly Tyr Asp Val Leu Asp Asn Trp Gly

225 230 235 240

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

245

<210> 274

<211> 747

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полинуклеотид

<400> 274

gacatccaga tgacccagag ccctagctca ctgagcgcca gcgtgggcga cagggtgacc 60

attacctgct ccgccagcca ggacatcagc aactacctga actggtacca gcagaagccc 120

ggcaaggccc ccaagctgct gatctactac acctccaacc tgcactccgg cgtgcccagc 180

aggttcagcg gaagcggcag cggcaccgat ttcaccctga ccatctccag cctgcagccc 240

gaggacttcg ccacctacta ctgccagcag tacaggaagc tcccctggac tttcggccag 300

ggcaccaaac tggagatcaa gcgtggtgga ggaggtagcg gaggaggcgg gagcggtgga 360

ggtggctctg gaggtggcgg aagccaggtg cagctggtcc agagcggcgc cgaagtgaag 420

aagcccggca gctccgtgaa agtgagctgc aaggccagcg gcggcacctt cagcaactac 480

tggatgcact gggtgaggca ggcccccgga cagggcctgg agtggatggg cgccacctac 540

aggggccaca gcgacaccta ctacaaccag aagttcaagg gccgggtgac catcaccgcc 600

gacaagagca ccagcaccgc ctacatggaa ctgagcagcc tcaggagcga ggacaccgct 660

gtgtattact gcgccagggg cgccatctac aacggctacg acgtgctgga caactggggc 720

cagggcacac tagtgaccgt gtccagc 747

<210> 275

<211> 132

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 275

Asp Val Pro Asp Tyr Ala Ser Leu Gly Gly Pro Ser Ser Pro Lys Lys

1 5 10 15

Lys Arg Lys Val Ser Arg Gly Val Gln Val Glu Thr Ile Ser Pro Gly

20 25 30

Asp Gly Arg Thr Phe Pro Lys Arg Gly Gln Thr Cys Val Val His Tyr

35 40 45

Thr Gly Met Leu Glu Asp Gly Lys Lys Phe Asp Ser Ser Arg Asp Arg

50 55 60

Asn Lys Pro Phe Lys Phe Met Leu Gly Lys Gln Glu Val Ile Arg Gly

65 70 75 80

Trp Glu Glu Gly Val Ala Gln Met Ser Val Gly Gln Arg Ala Lys Leu

85 90 95

Thr Ile Ser Pro Asp Tyr Ala Tyr Gly Ala Thr Gly His Pro Gly Ile

100 105 110

Ile Pro Pro His Ala Thr Leu Val Phe Asp Val Glu Leu Leu Lys Leu

115 120 125

Glu Thr Ser Tyr

130

<210> 276

<211> 108

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 276

Val Gln Val Glu Thr Ile Ser Pro Gly Asp Gly Arg Thr Phe Pro Lys

1 5 10 15

Arg Gly Gln Thr Cys Val Val His Tyr Thr Gly Met Leu Glu Asp Gly

20 25 30

Lys Lys Phe Asp Ser Ser Arg Asp Arg Asn Lys Pro Phe Lys Phe Met

35 40 45

Leu Gly Lys Gln Glu Val Ile Arg Gly Trp Glu Glu Gly Val Ala Gln

50 55 60

Met Ser Val Gly Gln Arg Ala Lys Leu Thr Ile Ser Pro Asp Tyr Ala

65 70 75 80

Tyr Gly Ala Thr Gly His Pro Gly Ile Ile Pro Pro His Ala Thr Leu

85 90 95

Val Phe Asp Val Glu Leu Leu Lys Leu Glu Thr Ser

100 105

<210> 277

<211> 93

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 277

Ile Leu Trp His Glu Met Trp His Glu Gly Leu Glu Glu Ala Ser Arg

1 5 10 15

Leu Tyr Phe Gly Glu Arg Asn Val Lys Gly Met Phe Glu Val Leu Glu

20 25 30

Pro Leu His Ala Met Met Glu Arg Gly Pro Gln Thr Leu Lys Glu Thr

35 40 45

Ser Phe Asn Gln Ala Tyr Gly Arg Asp Leu Met Glu Ala Gln Glu Trp

50 55 60

Cys Arg Lys Tyr Met Lys Ser Gly Asn Val Lys Asp Leu Thr Gln Ala

65 70 75 80

Trp Asp Leu Tyr Tyr His Val Phe Arg Arg Ile Ser Lys

85 90

<210> 278

<211> 95

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 278

Ile Leu Trp His Glu Met Trp His Glu Gly Leu Ile Glu Ala Ser Arg

1 5 10 15

Leu Tyr Phe Gly Glu Arg Asn Val Lys Gly Met Phe Glu Val Leu Glu

20 25 30

Pro Leu His Ala Met Met Glu Arg Gly Pro Gln Thr Leu Lys Glu Thr

35 40 45

Ser Phe Asn Gln Ala Tyr Gly Arg Asp Leu Met Glu Ala Gln Glu Trp

50 55 60

Cys Arg Lys Tyr Met Lys Ser Gly Asn Val Lys Asp Leu Thr Gln Ala

65 70 75 80

Trp Asp Leu Tyr Tyr His Val Phe Arg Arg Ile Ser Lys Thr Ser

85 90 95

<210> 279

<211> 95

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 279

Ile Leu Trp His Glu Met Trp His Glu Gly Leu Leu Glu Ala Ser Arg

1 5 10 15

Leu Tyr Phe Gly Glu Arg Asn Val Lys Gly Met Phe Glu Val Leu Glu

20 25 30

Pro Leu His Ala Met Met Glu Arg Gly Pro Gln Thr Leu Lys Glu Thr

35 40 45

Ser Phe Asn Gln Ala Tyr Gly Arg Asp Leu Met Glu Ala Gln Glu Trp

50 55 60

Cys Arg Lys Tyr Met Lys Ser Gly Asn Val Lys Asp Leu Thr Gln Ala

65 70 75 80

Trp Asp Leu Tyr Tyr His Val Phe Arg Arg Ile Ser Lys Thr Ser

85 90 95

<210> 280

<211> 95

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 280

Ile Leu Trp His Glu Met Trp His Glu Gly Leu Glu Glu Ala Ser Arg

1 5 10 15

Leu Tyr Phe Gly Glu Arg Asn Val Lys Gly Met Phe Glu Val Leu Glu

20 25 30

Pro Leu His Ala Met Met Glu Arg Gly Pro Gln Thr Leu Lys Glu Thr

35 40 45

Ser Phe Asn Gln Ala Tyr Gly Arg Asp Leu Met Glu Ala Gln Glu Trp

50 55 60

Cys Arg Lys Tyr Met Lys Ser Gly Asn Val Lys Asp Leu Leu Gln Ala

65 70 75 80

Trp Asp Leu Tyr Tyr His Val Phe Arg Arg Ile Ser Lys Thr Ser

85 90 95

<210> 281

<211> 95

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (12)..(12)

<223> Любая аминокислота

<220>

<221> MOD_RES

<222> (78)..(78)

<223> Любая аминокислота

<400> 281

Ile Leu Trp His Glu Met Trp His Glu Gly Leu Xaa Glu Ala Ser Arg

1 5 10 15

Leu Tyr Phe Gly Glu Arg Asn Val Lys Gly Met Phe Glu Val Leu Glu

20 25 30

Pro Leu His Ala Met Met Glu Arg Gly Pro Gln Thr Leu Lys Glu Thr

35 40 45

Ser Phe Asn Gln Ala Tyr Gly Arg Asp Leu Met Glu Ala Gln Glu Trp

50 55 60

Cys Arg Lys Tyr Met Lys Ser Gly Asn Val Lys Asp Leu Xaa Gln Ala

65 70 75 80

Trp Asp Leu Tyr Tyr His Val Phe Arg Arg Ile Ser Lys Thr Ser

85 90 95

<210> 282

<211> 95

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 282

Ile Leu Trp His Glu Met Trp His Glu Gly Leu Ile Glu Ala Ser Arg

1 5 10 15

Leu Tyr Phe Gly Glu Arg Asn Val Lys Gly Met Phe Glu Val Leu Glu

20 25 30

Pro Leu His Ala Met Met Glu Arg Gly Pro Gln Thr Leu Lys Glu Thr

35 40 45

Ser Phe Asn Gln Ala Tyr Gly Arg Asp Leu Met Glu Ala Gln Glu Trp

50 55 60

Cys Arg Lys Tyr Met Lys Ser Gly Asn Val Lys Asp Leu Leu Gln Ala

65 70 75 80

Trp Asp Leu Tyr Tyr His Val Phe Arg Arg Ile Ser Lys Thr Ser

85 90 95

<210> 283

<211> 95

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 283

Ile Leu Trp His Glu Met Trp His Glu Gly Leu Leu Glu Ala Ser Arg

1 5 10 15

Leu Tyr Phe Gly Glu Arg Asn Val Lys Gly Met Phe Glu Val Leu Glu

20 25 30

Pro Leu His Ala Met Met Glu Arg Gly Pro Gln Thr Leu Lys Glu Thr

35 40 45

Ser Phe Asn Gln Ala Tyr Gly Arg Asp Leu Met Glu Ala Gln Glu Trp

50 55 60

Cys Arg Lys Tyr Met Lys Ser Gly Asn Val Lys Asp Leu Leu Gln Ala

65 70 75 80

Trp Asp Leu Tyr Tyr His Val Phe Arg Arg Ile Ser Lys Thr Ser

85 90 95

<210> 284

<211> 1132

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 284

Met Pro Arg Ala Pro Arg Cys Arg Ala Val Arg Ser Leu Leu Arg Ser

1 5 10 15

His Tyr Arg Glu Val Leu Pro Leu Ala Thr Phe Val Arg Arg Leu Gly

20 25 30

Pro Gln Gly Trp Arg Leu Val Gln Arg Gly Asp Pro Ala Ala Phe Arg

35 40 45

Ala Leu Val Ala Gln Cys Leu Val Cys Val Pro Trp Asp Ala Arg Pro

50 55 60

Pro Pro Ala Ala Pro Ser Phe Arg Gln Val Ser Cys Leu Lys Glu Leu

65 70 75 80

Val Ala Arg Val Leu Gln Arg Leu Cys Glu Arg Gly Ala Lys Asn Val

85 90 95

Leu Ala Phe Gly Phe Ala Leu Leu Asp Gly Ala Arg Gly Gly Pro Pro

100 105 110

Glu Ala Phe Thr Thr Ser Val Arg Ser Tyr Leu Pro Asn Thr Val Thr

115 120 125

Asp Ala Leu Arg Gly Ser Gly Ala Trp Gly Leu Leu Leu Arg Arg Val

130 135 140

Gly Asp Asp Val Leu Val His Leu Leu Ala Arg Cys Ala Leu Phe Val

145 150 155 160

Leu Val Ala Pro Ser Cys Ala Tyr Gln Val Cys Gly Pro Pro Leu Tyr

165 170 175

Gln Leu Gly Ala Ala Thr Gln Ala Arg Pro Pro Pro His Ala Ser Gly

180 185 190

Pro Arg Arg Arg Leu Gly Cys Glu Arg Ala Trp Asn His Ser Val Arg

195 200 205

Glu Ala Gly Val Pro Leu Gly Leu Pro Ala Pro Gly Ala Arg Arg Arg

210 215 220

Gly Gly Ser Ala Ser Arg Ser Leu Pro Leu Pro Lys Arg Pro Arg Arg

225 230 235 240

Gly Ala Ala Pro Glu Pro Glu Arg Thr Pro Val Gly Gln Gly Ser Trp

245 250 255

Ala His Pro Gly Arg Thr Arg Gly Pro Ser Asp Arg Gly Phe Cys Val

260 265 270

Val Ser Pro Ala Arg Pro Ala Glu Glu Ala Thr Ser Leu Glu Gly Ala

275 280 285

Leu Ser Gly Thr Arg His Ser His Pro Ser Val Gly Arg Gln His His

290 295 300

Ala Gly Pro Pro Ser Thr Ser Arg Pro Pro Arg Pro Trp Asp Thr Pro

305 310 315 320

Cys Pro Pro Val Tyr Ala Glu Thr Lys His Phe Leu Tyr Ser Ser Gly

325 330 335

Asp Lys Glu Gln Leu Arg Pro Ser Phe Leu Leu Ser Ser Leu Arg Pro

340 345 350

Ser Leu Thr Gly Ala Arg Arg Leu Val Glu Thr Ile Phe Leu Gly Ser

355 360 365

Arg Pro Trp Met Pro Gly Thr Pro Arg Arg Leu Pro Arg Leu Pro Gln

370 375 380

Arg Tyr Trp Gln Met Arg Pro Leu Phe Leu Glu Leu Leu Gly Asn His

385 390 395 400

Ala Gln Cys Pro Tyr Gly Val Leu Leu Lys Thr His Cys Pro Leu Arg

405 410 415

Ala Ala Val Thr Pro Ala Ala Gly Val Cys Ala Arg Glu Lys Pro Gln

420 425 430

Gly Ser Val Ala Ala Pro Glu Glu Glu Asp Thr Asp Pro Arg Arg Leu

435 440 445

Val Gln Leu Leu Arg Gln His Ser Ser Pro Trp Gln Val Tyr Gly Phe

450 455 460

Val Arg Ala Cys Leu Arg Arg Leu Val Pro Pro Gly Leu Trp Gly Ser

465 470 475 480

Arg His Asn Glu Arg Arg Phe Leu Arg Asn Thr Lys Lys Phe Ile Ser

485 490 495

Leu Gly Lys His Ala Lys Leu Ser Leu Gln Glu Leu Thr Trp Lys Met

500 505 510

Ser Val Arg Gly Cys Ala Trp Leu Arg Arg Ser Pro Gly Val Gly Cys

515 520 525

Val Pro Ala Ala Glu His Arg Leu Arg Glu Glu Ile Leu Ala Lys Phe

530 535 540

Leu His Trp Leu Met Ser Val Tyr Val Val Glu Leu Leu Arg Ser Phe

545 550 555 560

Phe Tyr Val Thr Glu Thr Thr Phe Gln Lys Asn Arg Leu Phe Phe Tyr

565 570 575

Arg Lys Ser Val Trp Ser Lys Leu Gln Ser Ile Gly Ile Arg Gln His

580 585 590

Leu Lys Arg Val Gln Leu Arg Glu Leu Ser Glu Ala Glu Val Arg Gln

595 600 605

His Arg Glu Ala Arg Pro Ala Leu Leu Thr Ser Arg Leu Arg Phe Ile

610 615 620

Pro Lys Pro Asp Gly Leu Arg Pro Ile Val Asn Met Asp Tyr Val Val

625 630 635 640

Gly Ala Arg Thr Phe Arg Arg Glu Lys Arg Ala Glu Arg Leu Thr Ser

645 650 655

Arg Val Lys Ala Leu Phe Ser Val Leu Asn Tyr Glu Arg Ala Arg Arg

660 665 670

Pro Gly Leu Leu Gly Ala Ser Val Leu Gly Leu Asp Asp Ile His Arg

675 680 685

Ala Trp Arg Thr Phe Val Leu Arg Val Arg Ala Gln Asp Pro Pro Pro

690 695 700

Glu Leu Tyr Phe Val Lys Val Asp Val Thr Gly Ala Tyr Asp Thr Ile

705 710 715 720

Pro Gln Asp Arg Leu Thr Glu Val Ile Ala Ser Ile Ile Lys Pro Gln

725 730 735

Asn Thr Tyr Cys Val Arg Arg Tyr Ala Val Val Gln Lys Ala Ala His

740 745 750

Gly His Val Arg Lys Ala Phe Lys Ser His Val Ser Thr Leu Thr Asp

755 760 765

Leu Gln Pro Tyr Met Arg Gln Phe Val Ala His Leu Gln Glu Thr Ser

770 775 780

Pro Leu Arg Asp Ala Val Val Ile Glu Gln Ser Ser Ser Leu Asn Glu

785 790 795 800

Ala Ser Ser Gly Leu Phe Asp Val Phe Leu Arg Phe Met Cys His His

805 810 815

Ala Val Arg Ile Arg Gly Lys Ser Tyr Val Gln Cys Gln Gly Ile Pro

820 825 830

Gln Gly Ser Ile Leu Ser Thr Leu Leu Cys Ser Leu Cys Tyr Gly Asp

835 840 845

Met Glu Asn Lys Leu Phe Ala Gly Ile Arg Arg Asp Gly Leu Leu Leu

850 855 860

Arg Leu Val Asp Asp Phe Leu Leu Val Thr Pro His Leu Thr His Ala

865 870 875 880

Lys Thr Phe Leu Arg Thr Leu Val Arg Gly Val Pro Glu Tyr Gly Cys

885 890 895

Val Val Asn Leu Arg Lys Thr Val Val Asn Phe Pro Val Glu Asp Glu

900 905 910

Ala Leu Gly Gly Thr Ala Phe Val Gln Met Pro Ala His Gly Leu Phe

915 920 925

Pro Trp Cys Gly Leu Leu Leu Asp Thr Arg Thr Leu Glu Val Gln Ser

930 935 940

Asp Tyr Ser Ser Tyr Ala Arg Thr Ser Ile Arg Ala Ser Leu Thr Phe

945 950 955 960

Asn Arg Gly Phe Lys Ala Gly Arg Asn Met Arg Arg Lys Leu Phe Gly

965 970 975

Val Leu Arg Leu Lys Cys His Ser Leu Phe Leu Asp Leu Gln Val Asn

980 985 990

Ser Leu Gln Thr Val Cys Thr Asn Ile Tyr Lys Ile Leu Leu Leu Gln

995 1000 1005

Ala Tyr Arg Phe His Ala Cys Val Leu Gln Leu Pro Phe His Gln

1010 1015 1020

Gln Val Trp Lys Asn Pro Thr Phe Phe Leu Arg Val Ile Ser Asp

1025 1030 1035

Thr Ala Ser Leu Cys Tyr Ser Ile Leu Lys Ala Lys Asn Ala Gly

1040 1045 1050

Met Ser Leu Gly Ala Lys Gly Ala Ala Gly Pro Leu Pro Ser Glu

1055 1060 1065

Ala Val Gln Trp Leu Cys His Gln Ala Phe Leu Leu Lys Leu Thr

1070 1075 1080

Arg His Arg Val Thr Tyr Val Pro Leu Leu Gly Ser Leu Arg Thr

1085 1090 1095

Ala Gln Thr Gln Leu Ser Arg Lys Leu Pro Gly Thr Thr Leu Thr

1100 1105 1110

Ala Leu Glu Ala Ala Ala Asn Pro Ala Leu Pro Ser Asp Phe Lys

1115 1120 1125

Thr Ile Leu Asp

1130

<210> 285

<211> 4027

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полинуклеотид

<400> 285

caggcagcgt ggtcctgctg cgcacgtggg aagccctggc cccggccacc cccgcgatgc 60

cgcgcgctcc ccgctgccga gccgtgcgct ccctgctgcg cagccactac cgcgaggtgc 120

tgccgctggc cacgttcgtg cggcgcctgg ggccccaggg ctggcggctg gtgcagcgcg 180

gggacccggc ggctttccgc gcgctggtgg cccagtgcct ggtgtgcgtg ccctgggacg 240

cacggccgcc ccccgccgcc ccctccttcc gccaggtgtc ctgcctgaag gagctggtgg 300

cccgagtgct gcagaggctg tgcgagcgcg gcgcgaagaa cgtgctggcc ttcggcttcg 360

cgctgctgga cggggcccgc gggggccccc ccgaggcctt caccaccagc gtgcgcagct 420

acctgcccaa cacggtgacc gacgcactgc gggggagcgg ggcgtggggg ctgctgttgc 480

gccgcgtggg cgacgacgtg ctggttcacc tgctggcacg ctgcgcgctc tttgtgctgg 540

tggctcccag ctgcgcctac caggtgtgcg ggccgccgct gtaccagctc ggcgctgcca 600

ctcaggcccg gcccccgcca cacgctagtg gaccccgaag gcgtctggga tgcgaacggg 660

cctggaacca tagcgtcagg gaggccgggg tccccctggg cctgccagcc ccgggtgcga 720

ggaggcgcgg gggcagtgcc agccgaagtc tgccgttgcc caagaggccc aggcgtggcg 780

ctgcccctga gccggagcgg acgcccgttg ggcaggggtc ctgggcccac ccgggcagga 840

cgcgtggacc gagtgaccgt ggtttctgtg tggtgtcacc tgccagaccc gccgaagaag 900

ccacctcttt ggagggtgcg ctctctggca cgcgccactc ccacccatcc gtgggccgcc 960

agcaccacgc gggcccccca tccacatcgc ggccaccacg tccctgggac acgccttgtc 1020

ccccggtgta cgccgagacc aagcacttcc tctactcctc aggcgacaag gagcagctgc 1080

ggccctcctt cctactcagc tctctgaggc ccagcctgac tggcgctcgg aggctcgtgg 1140

agaccatctt tctgggttcc aggccctgga tgccagggac tccccgcagg ttgccccgcc 1200

tgccccagcg ctactggcaa atgcggcccc tgtttctgga gctgcttggg aaccacgcgc 1260

agtgccccta cggggtgctc ctcaagacgc actgcccgct gcgagctgcg gtcaccccag 1320

cagccggtgt ctgtgcccgg gagaagcccc agggctctgt ggcggccccc gaggaggagg 1380

acacagaccc ccgtcgcctg gtgcagctgc tccgccagca cagcagcccc tggcaggtgt 1440

acggcttcgt gcgggcctgc ctgcgccggc tggtgccccc aggcctctgg ggctccaggc 1500

acaacgaacg ccgcttcctc aggaacacca agaagttcat ctccctgggg aagcatgcca 1560

agctctcgct gcaggagctg acgtggaaga tgagcgtgcg gggctgcgct tggctgcgca 1620

ggagcccagg ggttggctgt gttccggccg cagagcaccg tctgcgtgag gagatcctgg 1680

ccaagttcct gcactggctg atgagtgtgt acgtcgtcga gctgctcagg tctttctttt 1740

atgtcacgga gaccacgttt caaaagaaca ggctcttttt ctaccggaag agtgtctgga 1800

gcaagttgca aagcattgga atcagacagc acttgaagag ggtgcagctg cgggagctgt 1860

cggaagcaga ggtcaggcag catcgggaag ccaggcccgc cctgctgacg tccagactcc 1920

gcttcatccc caagcctgac gggctgcggc cgattgtgaa catggactac gtcgtgggag 1980

ccagaacgtt ccgcagagaa aagagggccg agcgtctcac ctcgagggtg aaggcactgt 2040

tcagcgtgct caactacgag cgggcgcggc gccccggcct cctgggcgcc tctgtgctgg 2100

gcctggacga tatccacagg gcctggcgca ccttcgtgct gcgtgtgcgg gcccaggacc 2160

cgccgcctga gctgtacttt gtcaaggtgg atgtgacggg cgcgtacgac accatccccc 2220

aggacaggct cacggaggtc atcgccagca tcatcaaacc ccagaacacg tactgcgtgc 2280

gtcggtatgc cgtggtccag aaggccgccc atgggcacgt ccgcaaggcc ttcaagagcc 2340

acgtctctac cttgacagac ctccagccgt acatgcgaca gttcgtggct cacctgcagg 2400

agaccagccc gctgagggat gccgtcgtca tcgagcagag ctcctccctg aatgaggcca 2460

gcagtggcct cttcgacgtc ttcctacgct tcatgtgcca ccacgccgtg cgcatcaggg 2520

gcaagtccta cgtccagtgc caggggatcc cgcagggctc catcctctcc acgctgctct 2580

gcagcctgtg ctacggcgac atggagaaca agctgtttgc ggggattcgg cgggacgggc 2640

tgctcctgcg tttggtggat gatttcttgt tggtgacacc tcacctcacc cacgcgaaaa 2700

ccttcctcag gaccctggtc cgaggtgtcc ctgagtatgg ctgcgtggtg aacttgcgga 2760

agacagtggt gaacttccct gtagaagacg aggccctggg tggcacggct tttgttcaga 2820

tgccggccca cggcctattc ccctggtgcg gcctgctgct ggatacccgg accctggagg 2880

tgcagagcga ctactccagc tatgcccgga cctccatcag agccagtctc accttcaacc 2940

gcggcttcaa ggctgggagg aacatgcgtc gcaaactctt tggggtcttg cggctgaagt 3000

gtcacagcct gtttctggat ttgcaggtga acagcctcca gacggtgtgc accaacatct 3060

acaagatcct cctgctgcag gcgtacaggt ttcacgcatg tgtgctgcag ctcccatttc 3120

atcagcaagt ttggaagaac cccacatttt tcctgcgcgt catctctgac acggcctccc 3180

tctgctactc catcctgaaa gccaagaacg cagggatgtc gctgggggcc aagggcgccg 3240

ccggccctct gccctccgag gccgtgcagt ggctgtgcca ccaagcattc ctgctcaagc 3300

tgactcgaca ccgtgtcacc tacgtgccac tcctggggtc actcaggaca gcccagacgc 3360

agctgagtcg gaagctcccg gggacgacgc tgactgccct ggaggccgca gccaacccgg 3420

cactgccctc agacttcaag accatcctgg actgatggcc acccgcccac agccaggccg 3480

agagcagaca ccagcagccc tgtcacgccg ggctctacgt cccagggagg gaggggcggc 3540

ccacacccag gcccgcaccg ctgggagtct gaggcctgag tgagtgtttg gccgaggcct 3600

gcatgtccgg ctgaaggctg agtgtccggc tgaggcctga gcgagtgtcc agccaagggc 3660

tgagtgtcca gcacacctgc cgtcttcact tccccacagg ctggcgctcg gctccacccc 3720

agggccagct tttcctcacc aggagcccgg cttccactcc ccacatagga atagtccatc 3780

cccagattcg ccattgttca cccctcgccc tgccctcctt tgccttccac ccccaccatc 3840

caggtggaga ccctgagaag gaccctggga gctctgggaa tttggagtga ccaaaggtgt 3900

gccctgtaca caggcgagga ccctgcacct ggatgggggt ccctgtgggt caaattgggg 3960

ggaggtgctg tgggagtaaa atactgaata tatgagtttt tcagttttga aaaaaaaaaa 4020

aaaaaaa 4027

<210> 286

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический олигонуклеотид

<400> 286

ggaggtccct caccttcta 19

<210> 287

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический олигонуклеотид

<400> 287

cggaggatct tatgctgaa 19

<210> 288

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический олигонуклеотид

<400> 288

cccgcttcca gatcataca 19

<210> 289

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический олигонуклеотид

<400> 289

ggagacctca acaagatat 19

<210> 290

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический олигонуклеотид

<400> 290

aaggcatggt cattggtat 19

<210> 291

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический олигонуклеотид

<400> 291

gcatggtcat tggtatcat 19

<210> 292

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический олигонуклеотид

<400> 292

ggtcattggt atcatgagt 19

<210> 293

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический олигонуклеотид

<400> 293

cctagtgggt atccctgta 19

<210> 294

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический олигонуклеотид

<400> 294

gaggatggac attgttctt 19

<210> 295

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический олигонуклеотид

<400> 295

gcatgcaggc tacagttca 19

<210> 296

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический олигонуклеотид

<400> 296

ccagcacatg cactgttga 19

<210> 297

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический олигонуклеотид

<400> 297

cacatgcact gttgagtga 19

<210> 298

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический олигонуклеотид

<400> 298

ctggaggtcc ctcaccttct a 21

<210> 299

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический олигонуклеотид

<400> 299

gtcggaggat cttatgctga a 21

<210> 300

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический олигонуклеотид

<400> 300

tgcccgcttc cagatcatac a 21

<210> 301

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический олигонуклеотид

<400> 301

ctggagacct caacaagata t 21

<210> 302

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический олигонуклеотид

<400> 302

tcaaggcatg gtcattggta t 21

<210> 303

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический олигонуклеотид

<400> 303

aggcatggtc attggtatca t 21

<210> 304

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический олигонуклеотид

<400> 304

atggtcattg gtatcatgag t 21

<210> 305

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический олигонуклеотид

<400> 305

gccctagtgg gtatccctgt a 21

<210> 306

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический олигонуклеотид

<400> 306

atgaggatgg acattgttct t 21

<210> 307

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический олигонуклеотид

<400> 307

gagcatgcag gctacagttc a 21

<210> 308

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический олигонуклеотид

<400> 308

ttccagcaca tgcactgttg a 21

<210> 309

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический олигонуклеотид

<400> 309

agcacatgca ctgttgagtg a 21

<210> 310

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический олигонуклеотид

<400> 310

tagaaggtga gggacctcca g 21

<210> 311

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический олигонуклеотид

<400> 311

ttcagcataa gatcctccga c 21

<210> 312

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический олигонуклеотид

<400> 312

tgtatgatct ggaagcgggc a 21

<210> 313

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический олигонуклеотид

<400> 313

atatcttgtt gaggtctcca g 21

<210> 314

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический олигонуклеотид

<400> 314

ataccaatga ccatgccttg a 21

<210> 315

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический олигонуклеотид

<400> 315

atgataccaa tgaccatgcc t 21

<210> 316

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический олигонуклеотид

<400> 316

atggtcattg gtatcatgag t 21

<210> 317

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический олигонуклеотид

<400> 317

gccctagtgg gtatccctgt a 21

<210> 318

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический олигонуклеотид

<400> 318

atgaggatgg acattgttct t 21

<210> 319

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический олигонуклеотид

<400> 319

gagcatgcag gctacagttc a 21

<210> 320

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический олигонуклеотид

<400> 320

ttccagcaca tgcactgttg a 21

<210> 321

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический олигонуклеотид

<400> 321

agcacatgca ctgttgagtg a 21

<210> 322

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический олигонуклеотид

<400> 322

tagaaggtga gggacctcc 19

<210> 323

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический олигонуклеотид

<400> 323

ttcagcataa gatcctccg 19

<210> 324

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический олигонуклеотид

<400> 324

tgtatgatct ggaagcggg 19

<210> 325

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический олигонуклеотид

<400> 325

atatcttgtt gaggtctcc 19

<210> 326

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический олигонуклеотид

<400> 326

ataccaatga ccatgcctt 19

<210> 327

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический олигонуклеотид

<400> 327

atgataccaa tgaccatgc 19

<210> 328

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический олигонуклеотид

<400> 328

atggtcattg gtatcatga 19

<210> 329

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический олигонуклеотид

<400> 329

gccctagtgg gtatccctg 19

<210> 330

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический олигонуклеотид

<400> 330

atgaggatgg acattgttc 19

<210> 331

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический олигонуклеотид

<400> 331

gagcatgcag gctacagtt 19

<210> 332

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический олигонуклеотид

<400> 332

ttccagcaca tgcactgtt 19

<210> 333

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический олигонуклеотид

<400> 333

agcacatgca ctgttgagt 19

<210> 334

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический олигонуклеотид

<400> 334

ggccaggatg gttcttaga 19

<210> 335

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический олигонуклеотид

<400> 335

gcttcgtgct aaactggta 19

<210> 336

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический олигонуклеотид

<400> 336

gggcgtgact tccacatga 19

<210> 337

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический олигонуклеотид

<400> 337

caggcctaga gaagtttca 19

<210> 338

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический олигонуклеотид

<400> 338

cttggaaccc attcctgaa 19

<210> 339

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический олигонуклеотид

<400> 339

ggaacccatt cctgaaatt 19

<210> 340

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический олигонуклеотид

<400> 340

gaacccattc ctgaaatta 19

<210> 341

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический олигонуклеотид

<400> 341

aacccattcc tgaaattat 19

<210> 342

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический олигонуклеотид

<400> 342

acccattcct gaaattatt 19

<210> 343

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический олигонуклеотид

<400> 343

cccattcctg aaattattt 19

<210> 344

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический олигонуклеотид

<400> 344

ctgtggttct attatatta 19

<210> 345

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический олигонуклеотид

<400> 345

aaatatgaga gcatgctaa 19

<210> 346

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический олигонуклеотид

<400> 346

tctaagaacc atcctggcc 19

<210> 347

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический олигонуклеотид

<400> 347

taccagttta gcacgaagc 19

<210> 348

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический олигонуклеотид

<400> 348

tcatgtggaa gtcacgccc 19

<210> 349

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический олигонуклеотид

<400> 349

tgaaacttct ctaggcctg 19

<210> 350

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический олигонуклеотид

<400> 350

ttcaggaatg ggttccaag 19

<210> 351

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический олигонуклеотид

<400> 351

aatttcagga atgggttcc 19

<210> 352

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический олигонуклеотид

<400> 352

taatttcagg aatgggttc 19

<210> 353

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический олигонуклеотид

<400> 353

ataatttcag gaatgggtt 19

<210> 354

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический олигонуклеотид

<400> 354

aataatttca ggaatgggt 19

<210> 355

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический олигонуклеотид

<400> 355

aaataatttc aggaatggg 19

<210> 356

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический олигонуклеотид

<400> 356

taatataata gaaccacag 19

<210> 357

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический олигонуклеотид

<400> 357

ttagcatgct ctcatattt 19

<210> 358

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический олигонуклеотид

<400> 358

gcggccagga tggttcttag a 21

<210> 359

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический олигонуклеотид

<400> 359

gagcttcgtg ctaaactggt a 21

<210> 360

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический олигонуклеотид

<400> 360

acgggcgtga cttccacatg a 21

<210> 361

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический олигонуклеотид

<400> 361

tgcaggccta gagaagtttc a 21

<210> 362

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический олигонуклеотид

<400> 362

tccttggaac ccattcctga a 21

<210> 363

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический олигонуклеотид

<400> 363

ttggaaccca ttcctgaaat t 21

<210> 364

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический олигонуклеотид

<400> 364

tggaacccat tcctgaaatt a 21

<210> 365

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический олигонуклеотид

<400> 365

ggaacccatt cctgaaatta t 21

<210> 366

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический олигонуклеотид

<400> 366

gaacccattc ctgaaattat t 21

<210> 367

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический олигонуклеотид

<400> 367

aacccattcc tgaaattatt t 21

<210> 368

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический олигонуклеотид

<400> 368

ccctgtggtt ctattatatt a 21

<210> 369

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический олигонуклеотид

<400> 369

ttaaatatga gagcatgcta a 21

<210> 370

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический олигонуклеотид

<400> 370

tctaagaacc atcctggccg c 21

<210> 371

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический олигонуклеотид

<400> 371

taccagttta gcacgaagct c 21

<210> 372

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический олигонуклеотид

<400> 372

tcatgtggaa gtcacgcccg t 21

<210> 373

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический олигонуклеотид

<400> 373

tgaaacttct ctaggcctgc a 21

<210> 374

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический олигонуклеотид

<400> 374

ttcaggaatg ggttccaagg a 21

<210> 375

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический олигонуклеотид

<400> 375

aatttcagga atgggttcca a 21

<210> 376

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический олигонуклеотид

<400> 376

taatttcagg aatgggttcc a 21

<210> 377

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический олигонуклеотид

<400> 377

ataatttcag gaatgggttc c 21

<210> 378

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический олигонуклеотид

<400> 378

aataatttca ggaatgggtt c 21

<210> 379

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический олигонуклеотид

<400> 379

aaataatttc aggaatgggt t 21

<210> 380

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический олигонуклеотид

<400> 380

taatataata gaaccacagg g 21

<210> 381

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический олигонуклеотид

<400> 381

ttagcatgct ctcatattta a 21

<210> 382

<211> 150

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полинуклеотид

<400> 382

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 60

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 120

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 150

<210> 383

<211> 4

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 383

Arg Gly Asp Ser

1

<210> 384

<211> 5

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 384

Asn Tyr Ala Met Ser

1 5

<210> 385

<211> 5

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 385

Asp Tyr Ala Met His

1 5

<210> 386

<211> 5

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 386

Asn His Gly Met Ser

1 5

<210> 387

<211> 5

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 387

Asn Phe Gly Ile Asn

1 5

<210> 388

<211> 5

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 388

Ser Asp Ala Met Thr

1 5

<210> 389

<211> 5

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 389

Asn Tyr Gly Ile Thr

1 5

<210> 390

<211> 5

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 390

Asn His Gly Met Ser

1 5

<210> 391

<211> 5

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 391

Asn His Gly Met Ser

1 5

<210> 392

<211> 5

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 392

Asn His Gly Met Ser

1 5

<210> 393

<211> 5

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 393

Asp Tyr Tyr Met Ser

1 5

<210> 394

<211> 5

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 394

Asn His Gly Met Ser

1 5

<210> 395

<211> 5

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 395

Asp Tyr Tyr Met Ser

1 5

<210> 396

<211> 5

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 396

Asn His Gly Met Ser

1 5

<210> 397

<211> 5

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 397

Asn His Gly Met Ser

1 5

<210> 398

<211> 5

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 398

Asn His Gly Met Ser

1 5

<210> 399

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 399

Ser Ser Tyr Tyr Tyr Trp Gly

1 5

<210> 400

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 400

Thr Ser Gly Met Cys Val Ser

1 5

<210> 401

<211> 5

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 401

Ser Tyr Ser Met Asn

1 5

<210> 402

<211> 5

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 402

Asp Tyr Tyr Met Ser

1 5

<210> 403

<211> 5

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 403

Ser His Tyr Ile His

1 5

<210> 404

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 404

Ser Gly Gly Tyr Tyr Trp Ser

1 5

<210> 405

<211> 5

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 405

Ser Tyr Ala Ile Ser

1 5

<210> 406

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 406

Ser Asn Ser Ala Ala Trp Asn

1 5

<210> 407

<211> 5

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 407

Ser Tyr Ala Met Ser

1 5

<210> 408

<211> 5

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 408

Arg Tyr Pro Met Ser

1 5

<210> 409

<211> 5

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 409

Ser Tyr Ala Met Ser

1 5

<210> 410

<211> 5

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 410

Ser Tyr Ala Met Ser

1 5

<210> 411

<211> 5

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 411

Asp Tyr Ala Met His

1 5

<210> 412

<211> 5

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 412

Asp Tyr Ala Met His

1 5

<210> 413

<211> 5

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 413

Ser Tyr Ala Met Ser

1 5

<210> 414

<211> 5

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 414

Ser Tyr Ala Met Ser

1 5

<210> 415

<211> 5

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 415

Ser Tyr Ala Met Ser

1 5

<210> 416

<211> 5

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 416

Ser Tyr Ala Met Ser

1 5

<210> 417

<211> 5

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 417

Ser Tyr Ala Met Ser

1 5

<210> 418

<211> 5

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 418

Ser Tyr Ala Met Ser

1 5

<210> 419

<211> 5

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 419

Ser Tyr Ala Met Ser

1 5

<210> 420

<211> 5

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 420

Asn Phe Gly Met Asn

1 5

<210> 421

<211> 5

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 421

Asp Tyr Ser Ile Asn

1 5

<210> 422

<211> 5

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 422

His Tyr Ser Met Asn

1 5

<210> 423

<211> 5

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 423

His Tyr Ser Met Asn

1 5

<210> 424

<211> 17

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 424

Gly Ile Ser Arg Ser Gly Glu Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 425

<211> 17

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 425

Gly Ile Ser Trp Asn Ser Gly Ser Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 426

<211> 16

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 426

Gly Ile Val Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ala Ser Val Lys Gly

1 5 10 15

<210> 427

<211> 17

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 427

Trp Ile Asn Pro Lys Asn Asn Asn Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 428

<211> 17

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 428

Val Ile Ser Gly Ser Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 429

<211> 17

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 429

Trp Ile Ser Ala Tyr Asn Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 430

<211> 16

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 430

Gly Ile Val Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ala Ser Val Lys Gly

1 5 10 15

<210> 431

<211> 16

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 431

Gly Ile Val Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ala Ser Val Lys Gly

1 5 10 15

<210> 432

<211> 16

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 432

Gly Ile Val Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ala Ser Val Lys Gly

1 5 10 15

<210> 433

<211> 17

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 433

Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 434

<211> 16

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 434

Gly Ile Val Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ala Ser Val Lys Gly

1 5 10 15

<210> 435

<211> 17

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 435

Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Asn Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 436

<211> 16

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 436

Gly Ile Val Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ala Ser Val Lys Gly

1 5 10 15

<210> 437

<211> 16

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 437

Gly Ile Val Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ala Ser Val Lys Gly

1 5 10 15

<210> 438

<211> 16

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 438

Gly Ile Val Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ala Ser Val Lys Gly

1 5 10 15

<210> 439

<211> 16

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 439

Ser Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Ala Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 440

<211> 16

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 440

Arg Ile Asp Trp Asp Glu Asp Lys Phe Tyr Ser Thr Ser Leu Lys Thr

1 5 10 15

<210> 441

<211> 17

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 441

Ser Ile Ser Ser Ser Ser Ser Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 442

<211> 17

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 442

Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 443

<211> 17

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 443

Met Ile Asn Pro Ser Gly Gly Val Thr Ala Tyr Ser Gln Thr Leu Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 444

<211> 16

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 444

Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 445

<211> 17

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 445

Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 446

<211> 18

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 446

Arg Thr Tyr Tyr Arg Ser Lys Trp Tyr Ser Phe Tyr Ala Ile Ser Leu

1 5 10 15

Lys Ser

<210> 447

<211> 17

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 447

Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 448

<211> 17

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 448

Gly Ile Ser Asp Ser Gly Val Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Ala Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 449

<211> 17

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 449

Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 450

<211> 17

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 450

Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 451

<211> 17

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 451

Gly Ile Ser Trp Asn Ser Gly Ser Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 452

<211> 17

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 452

Ser Ile Asn Trp Lys Gly Asn Ser Leu Ala Tyr Gly Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 453

<211> 17

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 453

Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 454

<211> 17

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 454

Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 455

<211> 17

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 455

Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 456

<211> 17

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 456

Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 457

<211> 17

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 457

Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 458

<211> 17

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 458

Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 459

<211> 17

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 459

Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 460

<211> 17

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 460

Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Ser Tyr Phe Ala Asp Asp Phe Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 461

<211> 17

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 461

Trp Ile Asn Thr Glu Thr Arg Glu Pro Ala Tyr Ala Tyr Asp Phe Arg

1 5 10 15

Gly

<210> 462

<211> 17

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 462

Arg Ile Asn Thr Glu Ser Gly Val Pro Ile Tyr Ala Asp Asp Phe Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 463

<211> 17

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 463

Arg Ile Asn Thr Glu Thr Gly Glu Pro Leu Tyr Ala Asp Asp Phe Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 464

<211> 11

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 464

Ser Pro Ala His Tyr Tyr Gly Gly Met Asp Val

1 5 10

<210> 465

<211> 6

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 465

His Ser Phe Leu Ala Tyr

1 5

<210> 466

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 466

His Gly Gly Glu Ser Asp Val

1 5

<210> 467

<211> 11

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 467

Gly Pro Tyr Tyr Tyr Gln Ser Tyr Met Asp Val

1 5 10

<210> 468

<211> 14

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 468

Leu Asp Ser Ser Gly Tyr Tyr Tyr Ala Arg Gly Pro Arg Tyr

1 5 10

<210> 469

<211> 9

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 469

Gly Pro Tyr Tyr Tyr Tyr Met Asp Val

1 5

<210> 470

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 470

His Gly Gly Glu Ser Asp Val

1 5

<210> 471

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 471

His Gly Gly Glu Ser Asp Val

1 5

<210> 472

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 472

His Gly Gly Glu Ser Asp Val

1 5

<210> 473

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 473

Glu Ser Gly Asp Gly Met Asp Val

1 5

<210> 474

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 474

His Gly Gly Glu Ser Asp Val

1 5

<210> 475

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 475

Ser Thr Met Val Arg Glu Asp Tyr

1 5

<210> 476

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 476

His Gly Gly Glu Ser Asp Val

1 5

<210> 477

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 477

His Gly Gly Glu Ser Asp Val

1 5

<210> 478

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 478

His Gly Gly Glu Ser Asp Val

1 5

<210> 479

<211> 11

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 479

His Trp Gln Glu Trp Pro Asp Ala Phe Asp Ile

1 5 10

<210> 480

<211> 13

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 480

Ser Gly Ala Gly Gly Thr Ser Ala Thr Ala Phe Asp Ile

1 5 10

<210> 481

<211> 10

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 481

Thr Ile Ala Ala Val Tyr Ala Phe Asp Ile

1 5 10

<210> 482

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 482

Asp Leu Arg Gly Ala Phe Asp Ile

1 5

<210> 483

<211> 11

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 483

Glu Gly Ser Gly Ser Gly Trp Tyr Phe Asp Phe

1 5 10

<210> 484

<211> 13

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 484

Ala Gly Ile Ala Ala Arg Leu Arg Gly Ala Phe Asp Ile

1 5 10

<210> 485

<211> 20

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 485

Arg Gly Gly Tyr Gln Leu Leu Arg Trp Asp Val Gly Leu Leu Arg Ser

1 5 10 15

Ala Phe Asp Ile

20

<210> 486

<211> 13

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 486

Ser Ser Pro Glu Gly Leu Phe Leu Tyr Trp Phe Asp Pro

1 5 10

<210> 487

<211> 9

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 487

Val Glu Gly Ser Gly Ser Leu Asp Tyr

1 5

<210> 488

<211> 9

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 488

Arg Ala Gly Ser Glu Ala Ser Asp Ile

1 5

<210> 489

<211> 15

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 489

Ala Thr Tyr Lys Arg Glu Leu Arg Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val

1 5 10 15

<210> 490

<211> 15

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 490

Ala Thr Tyr Lys Arg Glu Leu Arg Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val

1 5 10 15

<210> 491

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 491

Val Gly Lys Ala Val Pro Asp Val

1 5

<210> 492

<211> 13

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 492

His Gln Gly Val Ala Tyr Tyr Asn Tyr Ala Met Asp Val

1 5 10

<210> 493

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 493

Val Val Arg Asp Gly Met Asp Val

1 5

<210> 494

<211> 9

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 494

Ile Pro Gln Thr Gly Thr Phe Asp Tyr

1 5

<210> 495

<211> 15

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 495

Ala Asn Tyr Lys Arg Glu Leu Arg Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val

1 5 10 15

<210> 496

<211> 11

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 496

Ala Leu Val Gly Ala Thr Gly Ala Phe Asp Ile

1 5 10

<210> 497

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 497

Trp Phe Gly Glu Gly Phe Asp Pro

1 5

<210> 498

<211> 17

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 498

Val Gly Tyr Asp Ser Ser Gly Tyr Tyr Arg Asp Tyr Tyr Gly Met Asp

1 5 10 15

Val

<210> 499

<211> 13

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 499

Met Gly Trp Ser Ser Gly Tyr Leu Gly Ala Phe Asp Ile

1 5 10

<210> 500

<211> 13

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 500

Gly Glu Ile Tyr Tyr Gly Tyr Asp Gly Gly Phe Ala Tyr

1 5 10

<210> 501

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 501

Asp Tyr Ser Tyr Ala Met Asp Tyr

1 5

<210> 502

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 502

Asp Tyr Leu Tyr Ser Leu Asp Phe

1 5

<210> 503

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 503

Asp Tyr Leu Tyr Ser Cys Asp Tyr

1 5

<210> 504

<211> 12

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 504

Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Ser Phe Leu Ala

1 5 10

<210> 505

<211> 16

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 505

Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp

1 5 10 15

<210> 506

<211> 16

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 506

Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Arg Asn Asp Gly Lys Thr Pro Leu Tyr

1 5 10 15

<210> 507

<211> 16

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 507

Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asn

1 5 10 15

<210> 508

<211> 11

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 508

Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Asn

1 5 10

<210> 509

<211> 16

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 509

Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser Asn Gly Tyr Asn Tyr Val Asp

1 5 10 15

<210> 510

<211> 11

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 510

Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn Leu Ala

1 5 10

<210> 511

<211> 11

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 511

Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Lys Leu Ala

1 5 10

<210> 512

<211> 12

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 512

Arg Ala Ser Gln Ser Val Gly Ser Thr Asn Leu Ala

1 5 10

<210> 513

<211> 11

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 513

Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Asn

1 5 10

<210> 514

<211> 11

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 514

Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Asn

1 5 10

<210> 515

<211> 16

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 515

Lys Ser Ser Glu Ser Leu Val His Asn Ser Gly Lys Thr Tyr Leu Asn

1 5 10 15

<210> 516

<211> 11

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 516

Gln Ala Ser Glu Asp Ile Asn Lys Phe Leu Asn

1 5 10

<210> 517

<211> 11

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 517

Arg Ala Ser Gln Ser Val Gly Ser Asn Leu Ala

1 5 10

<210> 518

<211> 12

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 518

Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Ser Ser Ser Leu Ala

1 5 10

<210> 519

<211> 11

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 519

Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asp Asp Ala Met Asn

1 5 10

<210> 520

<211> 11

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 520

Arg Ala Ser Gln Asp Ile Tyr Asn Asn Leu Ala

1 5 10

<210> 521

<211> 16

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 521

Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp

1 5 10 15

<210> 522

<211> 11

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 522

Gly Gly Asn Asn Ile Gly Thr Lys Ser Val His

1 5 10

<210> 523

<211> 11

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 523

Ser Gly Asp Gly Leu Ser Lys Lys Tyr Val Ser

1 5 10

<210> 524

<211> 11

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 524

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Trp Leu Ala

1 5 10

<210> 525

<211> 11

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 525

Gly Gly Asn Asn Ile Gly Ser Lys Ser Val His

1 5 10

<210> 526

<211> 11

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 526

Gln Gly Asp Ser Leu Gly Asn Tyr Tyr Ala Thr

1 5 10

<210> 527

<211> 12

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 527

Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ala Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 528

<211> 11

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 528

Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Asn Ser Leu Ala

1 5 10

<210> 529

<211> 12

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 529

Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser Phe Leu Ala

1 5 10

<210> 530

<211> 12

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 530

Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Thr Thr Phe Leu Ala

1 5 10

<210> 531

<211> 11

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 531

Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Asn

1 5 10

<210> 532

<211> 12

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 532

Arg Ala Thr Gln Ser Ile Gly Ser Ser Phe Leu Ala

1 5 10

<210> 533

<211> 12

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 533

Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 534

<211> 12

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 534

Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 535

<211> 12

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 535

Arg Ala Ser Gln Arg Val Ala Ser Asn Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 536

<211> 12

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 536

Arg Ala Ser Gln Ser Leu Ser Ser Asn Phe Leu Ala

1 5 10

<210> 537

<211> 16

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 537

Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp

1 5 10 15

<210> 538

<211> 12

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 538

Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 539

<211> 12

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 539

Arg Ala Ser Gln Ser Val Ala Ser Ser Phe Leu Ala

1 5 10

<210> 540

<211> 11

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 540

Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala Val Ser

1 5 10

<210> 541

<211> 15

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 541

Arg Ala Ser Glu Ser Val Ser Val Ile Gly Ala His Leu Ile His

1 5 10 15

<210> 542

<211> 15

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 542

Arg Ala Ser Glu Ser Val Thr Ile Leu Gly Ser His Leu Ile Tyr

1 5 10 15

<210> 543

<211> 15

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 543

Arg Ala Ser Glu Ser Val Thr Ile Leu Gly Ser His Leu Ile Tyr

1 5 10 15

<210> 544

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 544

Gly Ala Ser Arg Arg Ala Thr

1 5

<210> 545

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 545

Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser

1 5

<210> 546

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 546

Glu Val Ser Asn Arg Phe Ser

1 5

<210> 547

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 547

Leu Gly Ser Lys Arg Ala Ser

1 5

<210> 548

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 548

Gly Ala Ser Thr Leu Ala Ser

1 5

<210> 549

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 549

Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser

1 5

<210> 550

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 550

Gly Ala Ser Thr Arg Ala Ser

1 5

<210> 551

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 551

Gly Ala Ser Ile Arg Ala Thr

1 5

<210> 552

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 552

Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr

1 5

<210> 553

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 553

Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser

1 5

<210> 554

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 554

Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser

1 5

<210> 555

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 555

Glu Val Ser Asn Arg Asp Ser

1 5

<210> 556

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 556

Asp Ala Ser Thr Leu Gln Thr

1 5

<210> 557

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 557

Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr

1 5

<210> 558

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 558

Gly Ala Ser Ser Arg Ala Ser

1 5

<210> 559

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 559

Ser Ala Thr Ser Pro Val Pro

1 5

<210> 560

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 560

Ala Ala Asn Lys Ser Gln Ser

1 5

<210> 561

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 561

Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser

1 5

<210> 562

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 562

Asp Asp Ser Val Arg Pro Ser

1 5

<210> 563

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 563

Arg Asp Lys Glu Arg Pro Ser

1 5

<210> 564

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 564

Ala Ala Ser Asn Leu Gln Ser

1 5

<210> 565

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 565

Gly Lys Asn Asn Arg Pro Ser

1 5

<210> 566

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 566

Gly Thr Asn Asn Arg Pro Ser

1 5

<210> 567

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 567

Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr

1 5

<210> 568

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 568

Asp Ala Ser Ser Arg Ala Thr

1 5

<210> 569

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 569

Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr

1 5

<210> 570

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 570

Gly Ser Ser Asn Arg Ala Thr

1 5

<210> 571

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 571

Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser

1 5

<210> 572

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 572

Gly Ala Ser Gln Arg Ala Thr

1 5

<210> 573

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 573

Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr

1 5

<210> 574

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 574

Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr

1 5

<210> 575

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 575

Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr

1 5

<210> 576

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 576

Gly Ala Ser Asn Trp Ala Thr

1 5

<210> 577

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 577

Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser

1 5

<210> 578

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 578

Gly Thr Ser Ser Arg Ala Thr

1 5

<210> 579

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 579

Gly Ala Ser Gly Arg Ala Thr

1 5

<210> 580

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 580

Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr

1 5

<210> 581

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 581

Leu Ala Ser Asn Leu Glu Thr

1 5

<210> 582

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 582

Leu Ala Ser Asn Val Gln Thr

1 5

<210> 583

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 583

Leu Ala Ser Asn Val Gln Thr

1 5

<210> 584

<211> 10

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 584

Gln Gln Tyr His Ser Ser Pro Ser Trp Thr

1 5 10

<210> 585

<211> 9

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 585

Met Gln Ala Leu Gln Thr Pro Tyr Thr

1 5

<210> 586

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 586

Met Gln Asn Ile Gln Phe Pro Ser

1 5

<210> 587

<211> 9

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 587

Met Gln Ala Leu Gln Thr Pro Tyr Thr

1 5

<210> 588

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 588

Gln Gln Ser Tyr Lys Arg Ala Ser

1 5

<210> 589

<211> 9

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 589

Met Gln Gly Arg Gln Phe Pro Tyr Ser

1 5

<210> 590

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 590

Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Leu Thr

1 5

<210> 591

<211> 9

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 591

Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Ser Trp Thr

1 5

<210> 592

<211> 10

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 592

Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro Pro Trp Thr

1 5 10

<210> 593

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 593

Gln Gln Ser Tyr Thr Leu Ala

1 5

<210> 594

<211> 9

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 594

Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Tyr Thr

1 5

<210> 595

<211> 9

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 595

Met Gln Gly Thr His Trp Pro Gly Thr

1 5

<210> 596

<211> 9

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 596

Gln Gln Tyr Glu Ser Leu Pro Leu Thr

1 5

<210> 597

<211> 10

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 597

Gln Gln Tyr Asn Asp Trp Leu Pro Val Thr

1 5 10

<210> 598

<211> 10

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 598

Gln Gln Tyr Ala Gly Ser Pro Pro Phe Thr

1 5 10

<210> 599

<211> 9

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 599

Leu Gln His Asp Asn Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 600

<211> 9

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 600

Gln His Tyr Tyr Arg Phe Pro Tyr Ser

1 5

<210> 601

<211> 9

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 601

Met Gln Ala Leu Gln Thr Pro Tyr Thr

1 5

<210> 602

<211> 11

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 602

Gln Val Trp Asp Ser Asp Ser Glu His Val Val

1 5 10

<210> 603

<211> 9

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 603

Gln Ala Trp Asp Asp Thr Thr Val Val

1 5

<210> 604

<211> 9

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 604

Gln Lys Tyr Asn Ser Ala Pro Phe Thr

1 5

<210> 605

<211> 12

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 605

Ser Ser Arg Asp Ser Ser Gly Asp His Leu Arg Val

1 5 10

<210> 606

<211> 11

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 606

Asn Ser Arg Asp Ser Ser Gly His His Leu Leu

1 5 10

<210> 607

<211> 14

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 607

Gln His Tyr Gly Ser Ser Phe Asn Gly Ser Ser Leu Phe Thr

1 5 10

<210> 608

<211> 10

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 608

Gln Gln Phe Gly Thr Ser Ser Gly Leu Thr

1 5 10

<210> 609

<211> 10

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 609

Gln Gln Tyr His Ser Ser Pro Ser Trp Thr

1 5 10

<210> 610

<211> 10

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 610

Gln Gln Tyr His Ser Ser Pro Ser Trp Thr

1 5 10

<210> 611

<211> 9

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 611

Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Tyr Ser

1 5

<210> 612

<211> 10

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 612

Gln His Tyr Glu Ser Ser Pro Ser Trp Thr

1 5 10

<210> 613

<211> 10

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 613

Gln Gln Tyr Gly Ser Pro Pro Arg Phe Thr

1 5 10

<210> 614

<211> 10

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 614

Gln His Tyr Gly Ser Ser Pro Ser Trp Thr

1 5 10

<210> 615

<211> 10

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 615

Gln His Tyr Asp Ser Ser Pro Ser Trp Thr

1 5 10

<210> 616

<211> 10

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 616

Gln Tyr Tyr Gly Thr Ser Pro Met Tyr Thr

1 5 10

<210> 617

<211> 9

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 617

Met Gln Ala Leu Gln Thr Pro Leu Thr

1 5

<210> 618

<211> 11

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 618

Gln His Tyr Gly Asn Ser Pro Pro Lys Phe Thr

1 5 10

<210> 619

<211> 10

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 619

Gln His Tyr Gly Gly Ser Pro Arg Leu Thr

1 5 10

<210> 620

<211> 9

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 620

Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Trp Thr

1 5

<210> 621

<211> 9

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 621

Leu Gln Ser Arg Ile Phe Pro Arg Thr

1 5

<210> 622

<211> 9

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 622

Leu Gln Ser Arg Thr Ile Pro Arg Thr

1 5

<210> 623

<211> 9

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 623

Leu Gln Ser Arg Thr Ile Pro Arg Thr

1 5

<210> 624

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 624

Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr

1 5

<210> 625

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 625

Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr

1 5

<210> 626

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 626

Gly Phe Ala Leu Ser Asn His

1 5

<210> 627

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 627

Gly Tyr Ile Phe Asp Asn Phe

1 5

<210> 628

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 628

Gly Phe Thr Phe Ser Ser Asp

1 5

<210> 629

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 629

Gly Tyr Thr Phe Ser Asn Tyr

1 5

<210> 630

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 630

Gly Phe Ala Leu Ser Asn His

1 5

<210> 631

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 631

Gly Phe Ala Leu Ser Asn His

1 5

<210> 632

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 632

Gly Phe Ala Leu Ser Asn His

1 5

<210> 633

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 633

Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr

1 5

<210> 634

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 634

Gly Phe Ala Leu Ser Asn His

1 5

<210> 635

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 635

Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr

1 5

<210> 636

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 636

Gly Phe Ala Leu Ser Asn His

1 5

<210> 637

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 637

Gly Phe Ala Leu Ser Asn His

1 5

<210> 638

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 638

Gly Phe Ala Leu Ser Asn His

1 5

<210> 639

<211> 9

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 639

Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser Tyr Tyr

1 5

<210> 640

<211> 9

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 640

Gly Phe Ser Leu Arg Thr Ser Gly Met

1 5

<210> 641

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 641

Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

1 5

<210> 642

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 642

Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr

1 5

<210> 643

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 643

Gly Tyr Thr Val Thr Ser His

1 5

<210> 644

<211> 9

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 644

Gly Gly Ser Ile Ser Ser Gly Gly Tyr

1 5

<210> 645

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 645

Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr

1 5

<210> 646

<211> 9

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 646

Gly Asp Ser Val Ser Ser Asn Ser Ala

1 5

<210> 647

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 647

Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

1 5

<210> 648

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 648

Gly Ile Thr Phe Ser Arg Tyr

1 5

<210> 649

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 649

Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

1 5

<210> 650

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 650

Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

1 5

<210> 651

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 651

Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr

1 5

<210> 652

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 652

Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr

1 5

<210> 653

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 653

Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

1 5

<210> 654

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 654

Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

1 5

<210> 655

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 655

Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

1 5

<210> 656

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 656

Gly Phe Ser Phe Ser Ser Tyr

1 5

<210> 657

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 657

Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

1 5

<210> 658

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 658

Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

1 5

<210> 659

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 659

Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

1 5

<210> 660

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 660

Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Phe

1 5

<210> 661

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 661

Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

1 5

<210> 662

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 662

Gly Tyr Thr Phe Arg His Tyr

1 5

<210> 663

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 663

Gly Tyr Thr Phe Thr His Tyr

1 5

<210> 664

<211> 6

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 664

Ser Arg Ser Gly Glu Asn

1 5

<210> 665

<211> 6

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 665

Ser Trp Asn Ser Gly Ser

1 5

<210> 666

<211> 5

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 666

Val Tyr Ser Gly Ser

1 5

<210> 667

<211> 6

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 667

Asn Pro Lys Asn Asn Asn

1 5

<210> 668

<211> 6

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 668

Ser Gly Ser Gly Gly Thr

1 5

<210> 669

<211> 6

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 669

Ser Ala Tyr Asn Gly Asn

1 5

<210> 670

<211> 5

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 670

Val Tyr Ser Gly Ser

1 5

<210> 671

<211> 5

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 671

Val Tyr Ser Gly Ser

1 5

<210> 672

<211> 5

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 672

Val Tyr Ser Gly Ser

1 5

<210> 673

<211> 6

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 673

Ser Ser Ser Gly Ser Thr

1 5

<210> 674

<211> 5

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 674

Val Tyr Ser Gly Ser

1 5

<210> 675

<211> 6

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 675

Ser Ser Ser Gly Asn Thr

1 5

<210> 676

<211> 5

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 676

Val Tyr Ser Gly Ser

1 5

<210> 677

<211> 5

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 677

Val Tyr Ser Gly Ser

1 5

<210> 678

<211> 5

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 678

Val Tyr Ser Gly Ser

1 5

<210> 679

<211> 5

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 679

Tyr Tyr Ser Gly Ser

1 5

<210> 680

<211> 5

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 680

Asp Trp Asp Glu Asp

1 5

<210> 681

<211> 6

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 681

Ser Ser Ser Ser Ser Tyr

1 5

<210> 682

<211> 6

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 682

Ser Ser Ser Gly Ser Thr

1 5

<210> 683

<211> 6

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 683

Asn Pro Ser Gly Gly Val

1 5

<210> 684

<211> 5

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 684

Tyr Tyr Ser Gly Ser

1 5

<210> 685

<211> 6

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 685

Ile Pro Ile Phe Gly Thr

1 5

<210> 686

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 686

Tyr Tyr Arg Ser Lys Trp Tyr

1 5

<210> 687

<211> 6

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 687

Ser Gly Ser Gly Gly Ser

1 5

<210> 688

<211> 6

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 688

Ser Asp Ser Gly Val Ser

1 5

<210> 689

<211> 6

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 689

Ser Gly Ser Gly Gly Ser

1 5

<210> 690

<211> 6

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 690

Ser Gly Ser Gly Gly Ser

1 5

<210> 691

<211> 6

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 691

Ser Trp Asn Ser Gly Ser

1 5

<210> 692

<211> 6

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 692

Asn Trp Lys Gly Asn Ser

1 5

<210> 693

<211> 6

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 693

Ser Gly Ser Gly Gly Ser

1 5

<210> 694

<211> 6

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 694

Ser Gly Ser Gly Gly Ser

1 5

<210> 695

<211> 6

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 695

Ser Gly Ser Gly Gly Ser

1 5

<210> 696

<211> 6

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 696

Ser Gly Ser Gly Gly Ser

1 5

<210> 697

<211> 6

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 697

Ser Gly Ser Gly Gly Ser

1 5

<210> 698

<211> 6

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 698

Ser Gly Ser Gly Gly Ser

1 5

<210> 699

<211> 6

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 699

Ser Gly Ser Gly Gly Ser

1 5

<210> 700

<211> 6

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 700

Asn Thr Tyr Thr Gly Glu

1 5

<210> 701

<211> 6

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 701

Asn Thr Glu Thr Arg Glu

1 5

<210> 702

<211> 6

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 702

Asn Thr Glu Ser Gly Val

1 5

<210> 703

<211> 6

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 703

Asn Thr Glu Thr Gly Glu

1 5

<210> 704

<211> 11

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 704

Ser Pro Ala His Tyr Tyr Gly Gly Met Asp Val

1 5 10

<210> 705

<211> 6

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 705

His Ser Phe Leu Ala Tyr

1 5

<210> 706

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 706

His Gly Gly Glu Ser Asp Val

1 5

<210> 707

<211> 11

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 707

Gly Pro Tyr Tyr Tyr Gln Ser Tyr Met Asp Val

1 5 10

<210> 708

<211> 14

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 708

Leu Asp Ser Ser Gly Tyr Tyr Tyr Ala Arg Gly Pro Arg Tyr

1 5 10

<210> 709

<211> 9

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 709

Gly Pro Tyr Tyr Tyr Tyr Met Asp Val

1 5

<210> 710

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 710

His Gly Gly Glu Ser Asp Val

1 5

<210> 711

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 711

His Gly Gly Glu Ser Asp Val

1 5

<210> 712

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 712

His Gly Gly Glu Ser Asp Val

1 5

<210> 713

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 713

Glu Ser Gly Asp Gly Met Asp Val

1 5

<210> 714

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 714

His Gly Gly Glu Ser Asp Val

1 5

<210> 715

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 715

Ser Thr Met Val Arg Glu Asp Tyr

1 5

<210> 716

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 716

His Gly Gly Glu Ser Asp Val

1 5

<210> 717

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 717

His Gly Gly Glu Ser Asp Val

1 5

<210> 718

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 718

His Gly Gly Glu Ser Asp Val

1 5

<210> 719

<211> 11

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 719

His Trp Gln Glu Trp Pro Asp Ala Phe Asp Ile

1 5 10

<210> 720

<211> 13

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 720

Ser Gly Ala Gly Gly Thr Ser Ala Thr Ala Phe Asp Ile

1 5 10

<210> 721

<211> 10

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 721

Thr Ile Ala Ala Val Tyr Ala Phe Asp Ile

1 5 10

<210> 722

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 722

Asp Leu Arg Gly Ala Phe Asp Ile

1 5

<210> 723

<211> 11

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 723

Glu Gly Ser Gly Ser Gly Trp Tyr Phe Asp Phe

1 5 10

<210> 724

<211> 13

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 724

Ala Gly Ile Ala Ala Arg Leu Arg Gly Ala Phe Asp Ile

1 5 10

<210> 725

<211> 20

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 725

Arg Gly Gly Tyr Gln Leu Leu Arg Trp Asp Val Gly Leu Leu Arg Ser

1 5 10 15

Ala Phe Asp Ile

20

<210> 726

<211> 13

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 726

Ser Ser Pro Glu Gly Leu Phe Leu Tyr Trp Phe Asp Pro

1 5 10

<210> 727

<211> 9

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 727

Val Glu Gly Ser Gly Ser Leu Asp Tyr

1 5

<210> 728

<211> 9

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 728

Arg Ala Gly Ser Glu Ala Ser Asp Ile

1 5

<210> 729

<211> 15

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 729

Ala Thr Tyr Lys Arg Glu Leu Arg Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val

1 5 10 15

<210> 730

<211> 15

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 730

Ala Thr Tyr Lys Arg Glu Leu Arg Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val

1 5 10 15

<210> 731

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 731

Val Gly Lys Ala Val Pro Asp Val

1 5

<210> 732

<211> 13

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 732

His Gln Gly Val Ala Tyr Tyr Asn Tyr Ala Met Asp Val

1 5 10

<210> 733

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 733

Val Val Arg Asp Gly Met Asp Val

1 5

<210> 734

<211> 9

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 734

Ile Pro Gln Thr Gly Thr Phe Asp Tyr

1 5

<210> 735

<211> 15

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 735

Ala Asn Tyr Lys Arg Glu Leu Arg Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val

1 5 10 15

<210> 736

<211> 11

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 736

Ala Leu Val Gly Ala Thr Gly Ala Phe Asp Ile

1 5 10

<210> 737

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 737

Trp Phe Gly Glu Gly Phe Asp Pro

1 5

<210> 738

<211> 17

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 738

Val Gly Tyr Asp Ser Ser Gly Tyr Tyr Arg Asp Tyr Tyr Gly Met Asp

1 5 10 15

Val

<210> 739

<211> 13

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 739

Met Gly Trp Ser Ser Gly Tyr Leu Gly Ala Phe Asp Ile

1 5 10

<210> 740

<211> 13

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 740

Gly Glu Ile Tyr Tyr Gly Tyr Asp Gly Gly Phe Ala Tyr

1 5 10

<210> 741

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 741

Asp Tyr Ser Tyr Ala Met Asp Tyr

1 5

<210> 742

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 742

Asp Tyr Leu Tyr Ser Leu Asp Phe

1 5

<210> 743

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 743

Asp Tyr Leu Tyr Ser Cys Asp Tyr

1 5

<210> 744

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 744

Ser Gln Ser Ile Ser Ser Ser Phe

1 5

<210> 745

<211> 12

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 745

Ser Gln Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Tyr Asn Tyr

1 5 10

<210> 746

<211> 12

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 746

Ser Gln Ser Leu Leu Arg Asn Asp Gly Lys Thr Pro

1 5 10

<210> 747

<211> 12

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 747

Ser Gln Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Tyr Asn Tyr

1 5 10

<210> 748

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 748

Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr

1 5

<210> 749

<211> 12

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 749

Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser Asn Gly Tyr Asn Tyr

1 5 10

<210> 750

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 750

Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn

1 5

<210> 751

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 751

Ser Gln Ser Val Ser Ser Lys

1 5

<210> 752

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 752

Ser Gln Ser Val Gly Ser Thr Asn

1 5

<210> 753

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 753

Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr

1 5

<210> 754

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 754

Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr

1 5

<210> 755

<211> 12

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 755

Ser Glu Ser Leu Val His Asn Ser Gly Lys Thr Tyr

1 5 10

<210> 756

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 756

Ser Glu Asp Ile Asn Lys Phe

1 5

<210> 757

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 757

Ser Gln Ser Val Gly Ser Asn

1 5

<210> 758

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 758

Ser Gln Ser Ile Gly Ser Ser Ser

1 5

<210> 759

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 759

Ser Gln Asp Ile Asp Asp Ala

1 5

<210> 760

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 760

Ser Gln Asp Ile Tyr Asn Asn

1 5

<210> 761

<211> 12

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 761

Ser Gln Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Tyr Asn Tyr

1 5 10

<210> 762

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 762

Asn Asn Ile Gly Thr Lys Ser

1 5

<210> 763

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 763

Asp Gly Leu Ser Lys Lys Tyr

1 5

<210> 764

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 764

Ser Gln Gly Ile Arg Asn Trp

1 5

<210> 765

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 765

Asn Asn Ile Gly Ser Lys Ser

1 5

<210> 766

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 766

Asp Ser Leu Gly Asn Tyr Tyr

1 5

<210> 767

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 767

Ser Gln Ser Val Ser Ser Ala Tyr

1 5

<210> 768

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 768

Ser Gln Ser Val Ser Asn Ser

1 5

<210> 769

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 769

Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser Phe

1 5

<210> 770

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 770

Ser Gln Ser Val Ser Thr Thr Phe

1 5

<210> 771

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 771

Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr

1 5

<210> 772

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 772

Thr Gln Ser Ile Gly Ser Ser Phe

1 5

<210> 773

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 773

Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser Tyr

1 5

<210> 774

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 774

Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser Tyr

1 5

<210> 775

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 775

Ser Gln Arg Val Ala Ser Asn Tyr

1 5

<210> 776

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 776

Ser Gln Ser Leu Ser Ser Asn Phe

1 5

<210> 777

<211> 12

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 777

Ser Gln Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Tyr Asn Tyr

1 5 10

<210> 778

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 778

Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser Tyr

1 5

<210> 779

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 779

Ser Gln Ser Val Ala Ser Ser Phe

1 5

<210> 780

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 780

Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala

1 5

<210> 781

<211> 11

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 781

Ser Glu Ser Val Ser Val Ile Gly Ala His Leu

1 5 10

<210> 782

<211> 11

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 782

Ser Glu Ser Val Thr Ile Leu Gly Ser His Leu

1 5 10

<210> 783

<211> 11

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 783

Ser Glu Ser Val Thr Ile Leu Gly Ser His Leu

1 5 10

<210> 784

<211> 3

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 784

Gly Ala Ser

1

<210> 785

<211> 3

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 785

Leu Gly Ser

1

<210> 786

<211> 3

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 786

Glu Val Ser

1

<210> 787

<211> 3

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 787

Leu Gly Ser

1

<210> 788

<211> 3

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 788

Gly Ala Ser

1

<210> 789

<211> 3

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 789

Leu Gly Ser

1

<210> 790

<211> 3

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 790

Gly Ala Ser

1

<210> 791

<211> 3

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 791

Gly Ala Ser

1

<210> 792

<211> 3

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 792

Asp Ala Ser

1

<210> 793

<211> 3

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 793

Ala Ala Ser

1

<210> 794

<211> 3

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 794

Ala Ala Ser

1

<210> 795

<211> 3

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 795

Glu Val Ser

1

<210> 796

<211> 3

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 796

Asp Ala Ser

1

<210> 797

<211> 3

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 797

Gly Ala Ser

1

<210> 798

<211> 3

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 798

Gly Ala Ser

1

<210> 799

<211> 3

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 799

Ser Ala Thr

1

<210> 800

<211> 3

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 800

Ala Ala Asn

1

<210> 801

<211> 3

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 801

Leu Gly Ser

1

<210> 802

<211> 3

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 802

Asp Asp Ser

1

<210> 803

<211> 3

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 803

Arg Asp Lys

1

<210> 804

<211> 3

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 804

Ala Ala Ser

1

<210> 805

<211> 3

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 805

Gly Lys Asn

1

<210> 806

<211> 3

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 806

Gly Thr Asn

1

<210> 807

<211> 3

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 807

Gly Ala Ser

1

<210> 808

<211> 3

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 808

Asp Ala Ser

1

<210> 809

<211> 3

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 809

Gly Ala Ser

1

<210> 810

<211> 3

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 810

Gly Ser Ser

1

<210> 811

<211> 3

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 811

Ala Ala Ser

1

<210> 812

<211> 3

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 812

Gly Ala Ser

1

<210> 813

<211> 3

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 813

Gly Ala Ser

1

<210> 814

<211> 3

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 814

Gly Ala Ser

1

<210> 815

<211> 3

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 815

Gly Ala Ser

1

<210> 816

<211> 3

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 816

Gly Ala Ser

1

<210> 817

<211> 3

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 817

Leu Gly Ser

1

<210> 818

<211> 3

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 818

Gly Thr Ser

1

<210> 819

<211> 3

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 819

Gly Ala Ser

1

<210> 820

<211> 3

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 820

Ser Ala Ser

1

<210> 821

<211> 3

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 821

Leu Ala Ser

1

<210> 822

<211> 3

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 822

Leu Ala Ser

1

<210> 823

<211> 3

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 823

Leu Ala Ser

1

<210> 824

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 824

Tyr His Ser Ser Pro Ser Trp

1 5

<210> 825

<211> 6

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 825

Ala Leu Gln Thr Pro Tyr

1 5

<210> 826

<211> 5

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 826

Asn Ile Gln Phe Pro

1 5

<210> 827

<211> 6

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 827

Ala Leu Gln Thr Pro Tyr

1 5

<210> 828

<211> 5

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 828

Ser Tyr Lys Arg Ala

1 5

<210> 829

<211> 6

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 829

Gly Arg Gln Phe Pro Tyr

1 5

<210> 830

<211> 5

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 830

Tyr Gly Ser Ser Leu

1 5

<210> 831

<211> 6

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 831

Tyr Gly Ser Ser Ser Trp

1 5

<210> 832

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 832

Tyr Gly Ser Ser Pro Pro Trp

1 5

<210> 833

<211> 4

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 833

Ser Tyr Thr Leu

1

<210> 834

<211> 6

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 834

Ser Tyr Ser Thr Pro Tyr

1 5

<210> 835

<211> 6

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 835

Gly Thr His Trp Pro Gly

1 5

<210> 836

<211> 6

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 836

Tyr Glu Ser Leu Pro Leu

1 5

<210> 837

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 837

Tyr Asn Asp Trp Leu Pro Val

1 5

<210> 838

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 838

Tyr Ala Gly Ser Pro Pro Phe

1 5

<210> 839

<211> 6

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 839

His Asp Asn Phe Pro Leu

1 5

<210> 840

<211> 6

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 840

Tyr Tyr Arg Phe Pro Tyr

1 5

<210> 841

<211> 6

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 841

Ala Leu Gln Thr Pro Tyr

1 5

<210> 842

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 842

Trp Asp Ser Asp Ser Glu His Val

1 5

<210> 843

<211> 6

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 843

Trp Asp Asp Thr Thr Val

1 5

<210> 844

<211> 6

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 844

Tyr Asn Ser Ala Pro Phe

1 5

<210> 845

<211> 9

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 845

Arg Asp Ser Ser Gly Asp His Leu Arg

1 5

<210> 846

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 846

Arg Asp Ser Ser Gly His His Leu

1 5

<210> 847

<211> 11

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 847

Tyr Gly Ser Ser Phe Asn Gly Ser Ser Leu Phe

1 5 10

<210> 848

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 848

Phe Gly Thr Ser Ser Gly Leu

1 5

<210> 849

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 849

Tyr His Ser Ser Pro Ser Trp

1 5

<210> 850

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 850

Tyr His Ser Ser Pro Ser Trp

1 5

<210> 851

<211> 6

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 851

Ser Tyr Ser Thr Pro Tyr

1 5

<210> 852

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 852

Tyr Glu Ser Ser Pro Ser Trp

1 5

<210> 853

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 853

Tyr Gly Ser Pro Pro Arg Phe

1 5

<210> 854

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 854

Tyr Gly Ser Ser Pro Ser Trp

1 5

<210> 855

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 855

Tyr Asp Ser Ser Pro Ser Trp

1 5

<210> 856

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 856

Tyr Gly Thr Ser Pro Met Tyr

1 5

<210> 857

<211> 6

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 857

Ala Leu Gln Thr Pro Leu

1 5

<210> 858

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 858

Tyr Gly Asn Ser Pro Pro Lys Phe

1 5

<210> 859

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 859

Tyr Gly Gly Ser Pro Arg Leu

1 5

<210> 860

<211> 6

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 860

His Tyr Ser Thr Pro Trp

1 5

<210> 861

<211> 6

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 861

Ser Arg Ile Phe Pro Arg

1 5

<210> 862

<211> 6

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 862

Ser Arg Thr Ile Pro Arg

1 5

<210> 863

<211> 6

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 863

Ser Arg Thr Ile Pro Arg

1 5

<210> 864

<211> 10

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 864

Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Ala Met Ser

1 5 10

<210> 865

<211> 10

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 865

Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr Ala Met His

1 5 10

<210> 866

<211> 10

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 866

Gly Phe Ala Leu Ser Asn His Gly Met Ser

1 5 10

<210> 867

<211> 10

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 867

Gly Tyr Ile Phe Asp Asn Phe Gly Ile Asn

1 5 10

<210> 868

<211> 10

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 868

Gly Phe Thr Phe Ser Ser Asp Ala Met Thr

1 5 10

<210> 869

<211> 10

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 869

Gly Tyr Thr Phe Ser Asn Tyr Gly Ile Thr

1 5 10

<210> 870

<211> 10

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 870

Gly Phe Ala Leu Ser Asn His Gly Met Ser

1 5 10

<210> 871

<211> 10

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 871

Gly Phe Ala Leu Ser Asn His Gly Met Ser

1 5 10

<210> 872

<211> 10

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 872

Gly Phe Ala Leu Ser Asn His Gly Met Ser

1 5 10

<210> 873

<211> 10

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 873

Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Tyr Met Ser

1 5 10

<210> 874

<211> 10

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 874

Gly Phe Ala Leu Ser Asn His Gly Met Ser

1 5 10

<210> 875

<211> 10

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 875

Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Tyr Met Ser

1 5 10

<210> 876

<211> 10

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 876

Gly Phe Ala Leu Ser Asn His Gly Met Ser

1 5 10

<210> 877

<211> 10

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 877

Gly Phe Ala Leu Ser Asn His Gly Met Ser

1 5 10

<210> 878

<211> 10

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 878

Gly Phe Ala Leu Ser Asn His Gly Met Ser

1 5 10

<210> 879

<211> 12

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 879

Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser Tyr Tyr Tyr Trp Gly

1 5 10

<210> 880

<211> 12

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 880

Gly Phe Ser Leu Arg Thr Ser Gly Met Cys Val Ser

1 5 10

<210> 881

<211> 10

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 881

Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ser Met Asn

1 5 10

<210> 882

<211> 10

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 882

Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Tyr Met Ser

1 5 10

<210> 883

<211> 10

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 883

Gly Tyr Thr Val Thr Ser His Tyr Ile His

1 5 10

<210> 884

<211> 12

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 884

Gly Gly Ser Ile Ser Ser Gly Gly Tyr Tyr Trp Ser

1 5 10

<210> 885

<211> 10

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 885

Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Ile Ser

1 5 10

<210> 886

<211> 12

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 886

Gly Asp Ser Val Ser Ser Asn Ser Ala Ala Trp Asn

1 5 10

<210> 887

<211> 10

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 887

Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ser

1 5 10

<210> 888

<211> 10

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 888

Gly Ile Thr Phe Ser Arg Tyr Pro Met Ser

1 5 10

<210> 889

<211> 10

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 889

Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ser

1 5 10

<210> 890

<211> 10

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 890

Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ser

1 5 10

<210> 891

<211> 10

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 891

Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr Ala Met His

1 5 10

<210> 892

<211> 10

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 892

Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr Ala Met His

1 5 10

<210> 893

<211> 10

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 893

Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ser

1 5 10

<210> 894

<211> 10

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 894

Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ser

1 5 10

<210> 895

<211> 10

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 895

Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ser

1 5 10

<210> 896

<211> 10

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 896

Gly Phe Ser Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ser

1 5 10

<210> 897

<211> 10

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 897

Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ser

1 5 10

<210> 898

<211> 10

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 898

Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ser

1 5 10

<210> 899

<211> 10

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 899

Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ser

1 5 10

<210> 900

<211> 10

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 900

Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Phe Gly Met Asn

1 5 10

<210> 901

<211> 10

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 901

Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr Ser Ile Asn

1 5 10

<210> 902

<211> 10

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 902

Gly Tyr Thr Phe Arg His Tyr Ser Met Asn

1 5 10

<210> 903

<211> 10

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 903

Gly Tyr Thr Phe Thr His Tyr Ser Met Asn

1 5 10

<210> 904

<211> 17

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 904

Gly Ile Ser Arg Ser Gly Glu Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 905

<211> 17

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 905

Gly Ile Ser Trp Asn Ser Gly Ser Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 906

<211> 16

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 906

Gly Ile Val Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ala Ser Val Lys Gly

1 5 10 15

<210> 907

<211> 17

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 907

Trp Ile Asn Pro Lys Asn Asn Asn Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 908

<211> 17

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 908

Val Ile Ser Gly Ser Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 909

<211> 17

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 909

Trp Ile Ser Ala Tyr Asn Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 910

<211> 16

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 910

Gly Ile Val Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ala Ser Val Lys Gly

1 5 10 15

<210> 911

<211> 16

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 911

Gly Ile Val Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ala Ser Val Lys Gly

1 5 10 15

<210> 912

<211> 16

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 912

Gly Ile Val Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ala Ser Val Lys Gly

1 5 10 15

<210> 913

<211> 17

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 913

Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 914

<211> 16

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 914

Gly Ile Val Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ala Ser Val Lys Gly

1 5 10 15

<210> 915

<211> 17

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 915

Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Asn Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 916

<211> 16

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 916

Gly Ile Val Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ala Ser Val Lys Gly

1 5 10 15

<210> 917

<211> 16

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 917

Gly Ile Val Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ala Ser Val Lys Gly

1 5 10 15

<210> 918

<211> 16

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 918

Gly Ile Val Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ala Ser Val Lys Gly

1 5 10 15

<210> 919

<211> 16

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 919

Ser Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Ala Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 920

<211> 16

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 920

Arg Ile Asp Trp Asp Glu Asp Lys Phe Tyr Ser Thr Ser Leu Lys Thr

1 5 10 15

<210> 921

<211> 17

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 921

Ser Ile Ser Ser Ser Ser Ser Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 922

<211> 17

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 922

Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 923

<211> 17

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 923

Met Ile Asn Pro Ser Gly Gly Val Thr Ala Tyr Ser Gln Thr Leu Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 924

<211> 16

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 924

Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 925

<211> 17

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 925

Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 926

<211> 18

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 926

Arg Thr Tyr Tyr Arg Ser Lys Trp Tyr Ser Phe Tyr Ala Ile Ser Leu

1 5 10 15

Lys Ser

<210> 927

<211> 17

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 927

Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 928

<211> 17

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 928

Gly Ile Ser Asp Ser Gly Val Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Ala Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 929

<211> 17

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 929

Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 930

<211> 17

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 930

Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 931

<211> 17

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 931

Gly Ile Ser Trp Asn Ser Gly Ser Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 932

<211> 17

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 932

Ser Ile Asn Trp Lys Gly Asn Ser Leu Ala Tyr Gly Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 933

<211> 17

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 933

Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 934

<211> 17

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 934

Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 935

<211> 17

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 935

Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 936

<211> 17

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 936

Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 937

<211> 17

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 937

Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 938

<211> 17

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 938

Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 939

<211> 17

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 939

Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 940

<211> 17

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 940

Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Ser Tyr Phe Ala Asp Asp Phe Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 941

<211> 17

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 941

Trp Ile Asn Thr Glu Thr Arg Glu Pro Ala Tyr Ala Tyr Asp Phe Arg

1 5 10 15

Gly

<210> 942

<211> 17

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 942

Arg Ile Asn Thr Glu Ser Gly Val Pro Ile Tyr Ala Asp Asp Phe Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 943

<211> 17

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 943

Arg Ile Asn Thr Glu Thr Gly Glu Pro Leu Tyr Ala Asp Asp Phe Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 944

<211> 11

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 944

Ser Pro Ala His Tyr Tyr Gly Gly Met Asp Val

1 5 10

<210> 945

<211> 6

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 945

His Ser Phe Leu Ala Tyr

1 5

<210> 946

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 946

His Gly Gly Glu Ser Asp Val

1 5

<210> 947

<211> 11

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 947

Gly Pro Tyr Tyr Tyr Gln Ser Tyr Met Asp Val

1 5 10

<210> 948

<211> 14

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 948

Leu Asp Ser Ser Gly Tyr Tyr Tyr Ala Arg Gly Pro Arg Tyr

1 5 10

<210> 949

<211> 9

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 949

Gly Pro Tyr Tyr Tyr Tyr Met Asp Val

1 5

<210> 950

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 950

His Gly Gly Glu Ser Asp Val

1 5

<210> 951

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 951

His Gly Gly Glu Ser Asp Val

1 5

<210> 952

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 952

His Gly Gly Glu Ser Asp Val

1 5

<210> 953

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 953

Glu Ser Gly Asp Gly Met Asp Val

1 5

<210> 954

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 954

His Gly Gly Glu Ser Asp Val

1 5

<210> 955

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 955

Ser Thr Met Val Arg Glu Asp Tyr

1 5

<210> 956

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 956

His Gly Gly Glu Ser Asp Val

1 5

<210> 957

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 957

His Gly Gly Glu Ser Asp Val

1 5

<210> 958

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 958

His Gly Gly Glu Ser Asp Val

1 5

<210> 959

<211> 11

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 959

His Trp Gln Glu Trp Pro Asp Ala Phe Asp Ile

1 5 10

<210> 960

<211> 13

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 960

Ser Gly Ala Gly Gly Thr Ser Ala Thr Ala Phe Asp Ile

1 5 10

<210> 961

<211> 10

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 961

Thr Ile Ala Ala Val Tyr Ala Phe Asp Ile

1 5 10

<210> 962

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 962

Asp Leu Arg Gly Ala Phe Asp Ile

1 5

<210> 963

<211> 11

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 963

Glu Gly Ser Gly Ser Gly Trp Tyr Phe Asp Phe

1 5 10

<210> 964

<211> 13

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 964

Ala Gly Ile Ala Ala Arg Leu Arg Gly Ala Phe Asp Ile

1 5 10

<210> 965

<211> 20

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 965

Arg Gly Gly Tyr Gln Leu Leu Arg Trp Asp Val Gly Leu Leu Arg Ser

1 5 10 15

Ala Phe Asp Ile

20

<210> 966

<211> 13

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 966

Ser Ser Pro Glu Gly Leu Phe Leu Tyr Trp Phe Asp Pro

1 5 10

<210> 967

<211> 9

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 967

Val Glu Gly Ser Gly Ser Leu Asp Tyr

1 5

<210> 968

<211> 9

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 968

Arg Ala Gly Ser Glu Ala Ser Asp Ile

1 5

<210> 969

<211> 15

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 969

Ala Thr Tyr Lys Arg Glu Leu Arg Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val

1 5 10 15

<210> 970

<211> 15

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 970

Ala Thr Tyr Lys Arg Glu Leu Arg Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val

1 5 10 15

<210> 971

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 971

Val Gly Lys Ala Val Pro Asp Val

1 5

<210> 972

<211> 13

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 972

His Gln Gly Val Ala Tyr Tyr Asn Tyr Ala Met Asp Val

1 5 10

<210> 973

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 973

Val Val Arg Asp Gly Met Asp Val

1 5

<210> 974

<211> 9

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 974

Ile Pro Gln Thr Gly Thr Phe Asp Tyr

1 5

<210> 975

<211> 15

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 975

Ala Asn Tyr Lys Arg Glu Leu Arg Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val

1 5 10 15

<210> 976

<211> 11

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 976

Ala Leu Val Gly Ala Thr Gly Ala Phe Asp Ile

1 5 10

<210> 977

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 977

Trp Phe Gly Glu Gly Phe Asp Pro

1 5

<210> 978

<211> 17

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 978

Val Gly Tyr Asp Ser Ser Gly Tyr Tyr Arg Asp Tyr Tyr Gly Met Asp

1 5 10 15

Val

<210> 979

<211> 13

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 979

Met Gly Trp Ser Ser Gly Tyr Leu Gly Ala Phe Asp Ile

1 5 10

<210> 980

<211> 13

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 980

Gly Glu Ile Tyr Tyr Gly Tyr Asp Gly Gly Phe Ala Tyr

1 5 10

<210> 981

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 981

Asp Tyr Ser Tyr Ala Met Asp Tyr

1 5

<210> 982

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 982

Asp Tyr Leu Tyr Ser Leu Asp Phe

1 5

<210> 983

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 983

Asp Tyr Leu Tyr Ser Cys Asp Tyr

1 5

<210> 984

<211> 12

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 984

Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Ser Phe Leu Ala

1 5 10

<210> 985

<211> 16

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 985

Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp

1 5 10 15

<210> 986

<211> 16

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 986

Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Arg Asn Asp Gly Lys Thr Pro Leu Tyr

1 5 10 15

<210> 987

<211> 16

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 987

Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asn

1 5 10 15

<210> 988

<211> 11

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 988

Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Asn

1 5 10

<210> 989

<211> 16

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 989

Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser Asn Gly Tyr Asn Tyr Val Asp

1 5 10 15

<210> 990

<211> 11

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 990

Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn Leu Ala

1 5 10

<210> 991

<211> 11

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 991

Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Lys Leu Ala

1 5 10

<210> 992

<211> 12

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 992

Arg Ala Ser Gln Ser Val Gly Ser Thr Asn Leu Ala

1 5 10

<210> 993

<211> 11

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 993

Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Asn

1 5 10

<210> 994

<211> 11

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 994

Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Asn

1 5 10

<210> 995

<211> 16

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 995

Lys Ser Ser Glu Ser Leu Val His Asn Ser Gly Lys Thr Tyr Leu Asn

1 5 10 15

<210> 996

<211> 11

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 996

Gln Ala Ser Glu Asp Ile Asn Lys Phe Leu Asn

1 5 10

<210> 997

<211> 11

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 997

Arg Ala Ser Gln Ser Val Gly Ser Asn Leu Ala

1 5 10

<210> 998

<211> 12

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 998

Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Ser Ser Ser Leu Ala

1 5 10

<210> 999

<211> 11

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 999

Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asp Asp Ala Met Asn

1 5 10

<210> 1000

<211> 11

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1000

Arg Ala Ser Gln Asp Ile Tyr Asn Asn Leu Ala

1 5 10

<210> 1001

<211> 16

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1001

Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp

1 5 10 15

<210> 1002

<211> 11

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1002

Gly Gly Asn Asn Ile Gly Thr Lys Ser Val His

1 5 10

<210> 1003

<211> 11

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1003

Ser Gly Asp Gly Leu Ser Lys Lys Tyr Val Ser

1 5 10

<210> 1004

<211> 11

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1004

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Trp Leu Ala

1 5 10

<210> 1005

<211> 11

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1005

Gly Gly Asn Asn Ile Gly Ser Lys Ser Val His

1 5 10

<210> 1006

<211> 11

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1006

Gln Gly Asp Ser Leu Gly Asn Tyr Tyr Ala Thr

1 5 10

<210> 1007

<211> 12

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1007

Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ala Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 1008

<211> 11

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1008

Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Asn Ser Leu Ala

1 5 10

<210> 1009

<211> 12

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1009

Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser Phe Leu Ala

1 5 10

<210> 1010

<211> 12

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1010

Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Thr Thr Phe Leu Ala

1 5 10

<210> 1011

<211> 11

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1011

Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Asn

1 5 10

<210> 1012

<211> 12

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1012

Arg Ala Thr Gln Ser Ile Gly Ser Ser Phe Leu Ala

1 5 10

<210> 1013

<211> 12

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1013

Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 1014

<211> 12

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1014

Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 1015

<211> 12

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1015

Arg Ala Ser Gln Arg Val Ala Ser Asn Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 1016

<211> 12

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1016

Arg Ala Ser Gln Ser Leu Ser Ser Asn Phe Leu Ala

1 5 10

<210> 1017

<211> 16

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1017

Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp

1 5 10 15

<210> 1018

<211> 12

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1018

Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 1019

<211> 12

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1019

Arg Ala Ser Gln Ser Val Ala Ser Ser Phe Leu Ala

1 5 10

<210> 1020

<211> 11

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1020

Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala Val Ser

1 5 10

<210> 1021

<211> 15

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1021

Arg Ala Ser Glu Ser Val Ser Val Ile Gly Ala His Leu Ile His

1 5 10 15

<210> 1022

<211> 15

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1022

Arg Ala Ser Glu Ser Val Thr Ile Leu Gly Ser His Leu Ile Tyr

1 5 10 15

<210> 1023

<211> 15

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1023

Arg Ala Ser Glu Ser Val Thr Ile Leu Gly Ser His Leu Ile Tyr

1 5 10 15

<210> 1024

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1024

Gly Ala Ser Arg Arg Ala Thr

1 5

<210> 1025

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1025

Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser

1 5

<210> 1026

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1026

Glu Val Ser Asn Arg Phe Ser

1 5

<210> 1027

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1027

Leu Gly Ser Lys Arg Ala Ser

1 5

<210> 1028

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1028

Gly Ala Ser Thr Leu Ala Ser

1 5

<210> 1029

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1029

Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser

1 5

<210> 1030

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1030

Gly Ala Ser Thr Arg Ala Ser

1 5

<210> 1031

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1031

Gly Ala Ser Ile Arg Ala Thr

1 5

<210> 1032

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1032

Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr

1 5

<210> 1033

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1033

Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser

1 5

<210> 1034

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1034

Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser

1 5

<210> 1035

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1035

Glu Val Ser Asn Arg Asp Ser

1 5

<210> 1036

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1036

Asp Ala Ser Thr Leu Gln Thr

1 5

<210> 1037

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1037

Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr

1 5

<210> 1038

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1038

Gly Ala Ser Ser Arg Ala Ser

1 5

<210> 1039

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1039

Ser Ala Thr Ser Pro Val Pro

1 5

<210> 1040

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1040

Ala Ala Asn Lys Ser Gln Ser

1 5

<210> 1041

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1041

Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser

1 5

<210> 1042

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1042

Asp Asp Ser Val Arg Pro Ser

1 5

<210> 1043

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1043

Arg Asp Lys Glu Arg Pro Ser

1 5

<210> 1044

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1044

Ala Ala Ser Asn Leu Gln Ser

1 5

<210> 1045

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1045

Gly Lys Asn Asn Arg Pro Ser

1 5

<210> 1046

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1046

Gly Thr Asn Asn Arg Pro Ser

1 5

<210> 1047

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1047

Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr

1 5

<210> 1048

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1048

Asp Ala Ser Ser Arg Ala Thr

1 5

<210> 1049

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1049

Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr

1 5

<210> 1050

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1050

Gly Ser Ser Asn Arg Ala Thr

1 5

<210> 1051

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1051

Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser

1 5

<210> 1052

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1052

Gly Ala Ser Gln Arg Ala Thr

1 5

<210> 1053

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1053

Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr

1 5

<210> 1054

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1054

Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr

1 5

<210> 1055

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1055

Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr

1 5

<210> 1056

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1056

Gly Ala Ser Asn Trp Ala Thr

1 5

<210> 1057

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1057

Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser

1 5

<210> 1058

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1058

Gly Thr Ser Ser Arg Ala Thr

1 5

<210> 1059

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1059

Gly Ala Ser Gly Arg Ala Thr

1 5

<210> 1060

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1060

Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr

1 5

<210> 1061

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1061

Leu Ala Ser Asn Leu Glu Thr

1 5

<210> 1062

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1062

Leu Ala Ser Asn Val Gln Thr

1 5

<210> 1063

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1063

Leu Ala Ser Asn Val Gln Thr

1 5

<210> 1064

<211> 10

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1064

Gln Gln Tyr His Ser Ser Pro Ser Trp Thr

1 5 10

<210> 1065

<211> 9

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1065

Met Gln Ala Leu Gln Thr Pro Tyr Thr

1 5

<210> 1066

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1066

Met Gln Asn Ile Gln Phe Pro Ser

1 5

<210> 1067

<211> 9

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1067

Met Gln Ala Leu Gln Thr Pro Tyr Thr

1 5

<210> 1068

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1068

Gln Gln Ser Tyr Lys Arg Ala Ser

1 5

<210> 1069

<211> 9

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1069

Met Gln Gly Arg Gln Phe Pro Tyr Ser

1 5

<210> 1070

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1070

Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Leu Thr

1 5

<210> 1071

<211> 9

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1071

Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Ser Trp Thr

1 5

<210> 1072

<211> 10

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1072

Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro Pro Trp Thr

1 5 10

<210> 1073

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1073

Gln Gln Ser Tyr Thr Leu Ala

1 5

<210> 1074

<211> 9

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1074

Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Tyr Thr

1 5

<210> 1075

<211> 9

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1075

Met Gln Gly Thr His Trp Pro Gly Thr

1 5

<210> 1076

<211> 9

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1076

Gln Gln Tyr Glu Ser Leu Pro Leu Thr

1 5

<210> 1077

<211> 10

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1077

Gln Gln Tyr Asn Asp Trp Leu Pro Val Thr

1 5 10

<210> 1078

<211> 10

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1078

Gln Gln Tyr Ala Gly Ser Pro Pro Phe Thr

1 5 10

<210> 1079

<211> 9

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1079

Leu Gln His Asp Asn Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 1080

<211> 9

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1080

Gln His Tyr Tyr Arg Phe Pro Tyr Ser

1 5

<210> 1081

<211> 9

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1081

Met Gln Ala Leu Gln Thr Pro Tyr Thr

1 5

<210> 1082

<211> 11

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1082

Gln Val Trp Asp Ser Asp Ser Glu His Val Val

1 5 10

<210> 1083

<211> 9

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1083

Gln Ala Trp Asp Asp Thr Thr Val Val

1 5

<210> 1084

<211> 9

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1084

Gln Lys Tyr Asn Ser Ala Pro Phe Thr

1 5

<210> 1085

<211> 12

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1085

Ser Ser Arg Asp Ser Ser Gly Asp His Leu Arg Val

1 5 10

<210> 1086

<211> 11

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1086

Asn Ser Arg Asp Ser Ser Gly His His Leu Leu

1 5 10

<210> 1087

<211> 14

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1087

Gln His Tyr Gly Ser Ser Phe Asn Gly Ser Ser Leu Phe Thr

1 5 10

<210> 1088

<211> 10

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1088

Gln Gln Phe Gly Thr Ser Ser Gly Leu Thr

1 5 10

<210> 1089

<211> 10

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1089

Gln Gln Tyr His Ser Ser Pro Ser Trp Thr

1 5 10

<210> 1090

<211> 10

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1090

Gln Gln Tyr His Ser Ser Pro Ser Trp Thr

1 5 10

<210> 1091

<211> 9

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1091

Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Tyr Ser

1 5

<210> 1092

<211> 10

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1092

Gln His Tyr Glu Ser Ser Pro Ser Trp Thr

1 5 10

<210> 1093

<211> 10

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1093

Gln Gln Tyr Gly Ser Pro Pro Arg Phe Thr

1 5 10

<210> 1094

<211> 10

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1094

Gln His Tyr Gly Ser Ser Pro Ser Trp Thr

1 5 10

<210> 1095

<211> 10

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1095

Gln His Tyr Asp Ser Ser Pro Ser Trp Thr

1 5 10

<210> 1096

<211> 10

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1096

Gln Tyr Tyr Gly Thr Ser Pro Met Tyr Thr

1 5 10

<210> 1097

<211> 9

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1097

Met Gln Ala Leu Gln Thr Pro Leu Thr

1 5

<210> 1098

<211> 11

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1098

Gln His Tyr Gly Asn Ser Pro Pro Lys Phe Thr

1 5 10

<210> 1099

<211> 10

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1099

Gln His Tyr Gly Gly Ser Pro Arg Leu Thr

1 5 10

<210> 1100

<211> 9

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1100

Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Trp Thr

1 5

<210> 1101

<211> 9

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1101

Leu Gln Ser Arg Ile Phe Pro Arg Thr

1 5

<210> 1102

<211> 9

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1102

Leu Gln Ser Arg Thr Ile Pro Arg Thr

1 5

<210> 1103

<211> 9

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1103

Leu Gln Ser Arg Thr Ile Pro Arg Thr

1 5

<210> 1104

<211> 41

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 1104

Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr

1 5 10 15

Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro

20 25 30

Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser

35 40

<210> 1105

<211> 123

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полинуклеотид

<400> 1105

aggagtaaga ggagcaggct cctgcacagt gactacatga acatgactcc ccgccgcccc 60

gggcccaccc gcaagcatta ccagccctat gccccaccac gcgacttcgc agcctatcgc 120

tcc 123

<210> 1106

<211> 35

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 1106

Thr Lys Lys Lys Tyr Ser Ser Ser Val His Asp Pro Asn Gly Glu Tyr

1 5 10 15

Met Phe Met Arg Ala Val Asn Thr Ala Lys Lys Ser Arg Leu Thr Asp

20 25 30

Val Thr Leu

35

<210> 1107

<211> 105

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полинуклеотид

<400> 1107

acaaaaaaga agtattcatc cagtgtgcac gaccctaacg gtgaatacat gttcatgaga 60

gcagtgaaca cagccaaaaa atccagactc acagatgtga cccta 105

<210> 1108

<211> 18

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 1108

Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 1109

<211> 521

<212> ДНК

<213> Unknown

<220>

<223> Описание неизвестного: полинуклеотид промотора PGK дикого типа

<400> 1109

acccctctct ccagccacta agccagttgc tccctcggct gacggctgca cgcgaggcct 60

ccgaacgtct tacgccttgt ggcgcgcccg tccttgtccc gggtgtgatg gcggggtgtg 120

gggcggaggg cgtggcgggg aagggccggc gacgagagcc gcgcgggacg actcgtcggc 180

gataaccggt gtcgggtagc gccagccgcg cgacggtaac gagggaccgc gacaggcaga 240

cgctcccatg atcactctgc acgccgaagg caaatagtgc aggccgtgcg gcgcttggcg 300

ttccttggaa gggctgaatc cccgcctcgt ccttcgcagc ggccccccgg gtgttcccat 360

cgccgcttct aggcccactg cgacgcttgc ctgcacttct tacacgctct gggtcccagc 420

cgcggcgacg caaagggcct tggtgcgggt ctcgtcggcg cagggacgcg tttgggtccc 480

gacggaacct tttccgcgtt ggggttgggg caccataagc t 521

<210> 1110

<211> 118

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полинуклеотид

<400> 1110

acccctctct ccagccacta agccagttgc tccctcggct gacggctgca cgcgaggcct 60

ccgaacgtct tacgccttgt ggcgcgcccg tccttgtccc gggtgtgatg gcggggtg 118

<210> 1111

<211> 221

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полинуклеотид

<400> 1111

acccctctct ccagccacta agccagttgc tccctcggct gacggctgca cgcgaggcct 60

ccgaacgtct tacgccttgt ggcgcgcccg tccttgtccc gggtgtgatg gcggggtgtg 120

gggcggaggg cgtggcgggg aagggccggc gacgagagcc gcgcgggacg actcgtcggc 180

gataaccggt gtcgggtagc gccagccgcg cgacggtaac g 221

<210> 1112

<211> 324

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полинуклеотид

<400> 1112

acccctctct ccagccacta agccagttgc tccctcggct gacggctgca cgcgaggcct 60

ccgaacgtct tacgccttgt ggcgcgcccg tccttgtccc gggtgtgatg gcggggtgtg 120

gggcggaggg cgtggcgggg aagggccggc gacgagagcc gcgcgggacg actcgtcggc 180

gataaccggt gtcgggtagc gccagccgcg cgacggtaac gagggaccgc gacaggcaga 240

cgctcccatg atcactctgc acgccgaagg caaatagtgc aggccgtgcg gcgcttggcg 300

ttccttggaa gggctgaatc cccg 324

<210> 1113

<211> 422

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полинуклеотид

<400> 1113

acccctctct ccagccacta agccagttgc tccctcggct gacggctgca cgcgaggcct 60

ccgaacgtct tacgccttgt ggcgcgcccg tccttgtccc gggtgtgatg gcggggtgtg 120

gggcggaggg cgtggcgggg aagggccggc gacgagagcc gcgcgggacg actcgtcggc 180

gataaccggt gtcgggtagc gccagccgcg cgacggtaac gagggaccgc gacaggcaga 240

cgctcccatg atcactctgc acgccgaagg caaatagtgc aggccgtgcg gcgcttggcg 300

ttccttggaa gggctgaatc cccgcctcgt ccttcgcagc ggccccccgg gtgttcccat 360

cgccgcttct aggcccactg cgacgcttgc ctgcacttct tacacgctct gggtcccagc 420

cg 422

<210> 1114

<211> 21

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(3)

<223> Может присутствовать или не присутствовать

<400> 1114

Gly Ser Gly Glu Gly Arg Gly Ser Leu Leu Thr Cys Gly Asp Val Glu

1 5 10 15

Glu Asn Pro Gly Pro

20

<210> 1115

<211> 22

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(3)

<223> May or may not be present

<400> 1115

Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val

1 5 10 15

Glu Glu Asn Pro Gly Pro

20

<210> 1116

<211> 23

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(3)

<223> May or may not be present

<400> 1116

Gly Ser Gly Gln Cys Thr Asn Tyr Ala Leu Leu Lys Leu Ala Gly Asp

1 5 10 15

Val Glu Ser Asn Pro Gly Pro

20

<210> 1117

<211> 25

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(3)

<223> May or may not be present

<400> 1117

Gly Ser Gly Val Lys Gln Thr Leu Asn Phe Asp Leu Leu Lys Leu Ala

1 5 10 15

Gly Asp Val Glu Ser Asn Pro Gly Pro

20 25

<---

1. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая химерный антигенный рецептор (CAR), где CAR содержит связывающий домен против B-клеточного антигена созревания (BCMA), трансмембранный домен и внутриклеточный сигнальный домен и где указанный связывающий домен против BCMA содержит:

(i) определяющую комплементарность область тяжелой цепи 1 (HC CDR1), содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 394, определяющую комплементарность область тяжелой цепи 2 (HC CDR2), содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 434, определяющую комплементарность область тяжелой цепи 3 (HC CDR3), содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 474, определяющую комплементарность область легкой цепи 1 (LC CDR1), содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 514, определяющую комплементарность область легкой цепи 2 (LC CDR2), содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 554, и определяющую комплементарность область легкой цепи 3 (LC CDR3), содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 594;

(ii) HC CDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 634, HC CDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 674, HC CDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 714, LC CDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 754, LC CDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 794, и LC CDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 834;

(iii) HC CDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 874, HC CDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 914, HC CDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 954, LC CDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 994, LC CDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1034, и LC CDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1074;

(iv) HC CDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 396, HC CDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 436, HC CDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 476, LC CDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 516, LC CDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 556, и LC CDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 596;

(v) HC CDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 636, HC CDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 676, HC CDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 716, LC CDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 756, LC CDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 796, и LC CDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 836;

(vi) HC CDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 876, HC CDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 916, HC CDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 956, LC CDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 996, LC CDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1036, и LC CDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1076;

(vii) HC CDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 398, HC CDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 438, HC CDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 478, LC CDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 518, LC CDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 558, и LC CDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 598;

(viii) HC CDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 638, HC CDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 678, HC CDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 718, LC CDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 758, LC CDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 798, и LC CDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 838;

(ix) HC CDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 878, HC CDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 918, HC CDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 958, LC CDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 998, LC CDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1038, и LC CDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1078;

(x) HC CDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 384, HC CDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 424, HC CDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 464, LC CDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 504, LC CDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 544, и LC CDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 584;

(xi) HC CDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 624, HC CDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 664, HC CDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 704, LC CDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 744, LC CDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 784, и LC CDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 824; или

(xii) HC CDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 864, HC CDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 904, HC CDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 944, LC CDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 984, LC CDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1024, и LC CDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1064.

2. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по п. 1, где указанный CAR содержит вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 94, 96, 98 или 84.

3. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по п. 1, где указанный CAR содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 79, 81, 83 или 69.

4. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по п. 1, где указанный CAR содержит:

(i) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 79, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 94;

(ii) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 81, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 96;

(iii) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 83, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 98; или

(iv) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 69, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 84.

5. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по п. 1, где CAR содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 53 и SEQ ID NO: 39, или аминокислотную последовательность с 95-99% идентичности по отношению к ним.

6. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по п. 1, содержащая нуклеотидную последовательность, выбранную из группы, состоящей SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 68 и SEQ ID NO: 54, или нуклеотидную последовательность с 95-99% идентичности по отношению к ним.

7. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по п. 1, где указанный CAR содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 109, SEQ ID NO: 111, SEQ ID NO: 113 или SEQ ID NO: 99 или аминокислотную последовательность с 95-99% идентичности по отношению к ним с лидерной последовательностью, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1, или без нее.

8. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по п. 1, содержащая нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 124, SEQ ID NO: 126, SEQ ID NO: 128 или SEQ ID NO: 114 или нуклеотидную последовательность с 95-99% идентичности по отношению к ним.

9. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-8, где:

(i) трансмембранный домен содержит трансмембранный домен белка, выбранного из группы, состоящей из альфа-, бета- или дзета-цепи T-клеточного рецептора, CD28, CD3 эпсилон, CD45, CD4, CD5, CD8, CD9, CD16, CD22, CD33, CD37, CD64, CD80, CD86, CD134, CD137 и CD154;

(ii) трансмембранный домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6 или аминокислотную последовательность с 95-99% идентичности по отношению к ней; или

(iii) молекула нуклеиновой кислоты содержит нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 17 или последовательность с 95-99% идентичности по отношению к ней.

10. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-8, где связывающий домен против BCMA соединяют с трансмембранным доменом посредством шарнирной области, где:

(i) шарнирная область содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2 или аминокислотную последовательность с 95-99% идентичности по отношению к ней; или

(ii) молекула нуклеиновой кислоты содержит нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 13 или нуклеотидную последовательность с 95-99% идентичности по отношению к ней.

11. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-8, где внутриклеточный сигнальный домен содержит костимуляторный домен, где:

(i) кодируемый костимуляторный домен содержит функциональный сигнальный домен, полученный из белка, выбранного из группы, состоящей из молекулы MHC класса I, белков рецепторов ФНО, иммуноглобулин-подобных белков, рецепторов цитокинов, интегринов, сигнальных молекул активации лимфоцитов, активирующих рецепторов NK-клеток, BTLA, рецептора Толл-лиганда, OX40, CD2, CD7, CD27, CD28, CD30, CD40, CDS, ICAM-1, LFA-1, 4-1BB, B7-H3, CDS, ICAM-1, ICOS, GITR, BAFFR, LIGHT, HVEM, KIRDS2, SLAMF7, NKp80, NKp44, NKp30, NKp46, CD19, CD4, CD8 альфа, CD8 бета, IL2R бета, IL2R гамма, IL7R альфа, ITGA4, VLA1, CD49a, ITGA4, IA4, CD49D, ITGA6, VLA-6, CD49f, ITGAD, CD11d, ITGAE, CD103, ITGAL, CD11a, LFA-1, ITGAM, CD11b, ITGAX, CD11c, ITGB1, CD29, ITGB2, CD18, LFA-1, ITGB7, NKG2D, NKG2C, TNFR2, TRANCE/RANKL, DNAM1, SLAMF4, CD84, CD96, CEACAM1, CRTAM, Ly9, CD160, PSGL1, CD100, CD69, SLAMF6, SLAM, BLAME, SELPLG, LTBR, LAT, GADS, SLP-76, PAG/Cbp, CD19a и лиганда, специфически связывающегося с CD83;

(ii) костимуляторный домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7 или аминокислотную последовательность с 95-99% идентичности по отношению к ней; или

(iii) молекула нуклеиновой кислоты содержит нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 18 или нуклеотидную последовательность с 95-99% идентичности по отношению к ней.

12. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-8, где:

(i) внутриклеточный сигнальный домен содержит функциональный сигнальный домен 4-1BB и/или функциональный сигнальный домен CD3 дзета;

(ii) внутриклеточный сигнальный домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7 и/или аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9 или SEQ ID NO: 10 или аминокислотную последовательность с 95-99% идентичности по отношению к аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 7 и/или аминокислотную последовательность с 95-99% идентичности по отношению к аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 9 или SEQ ID NO: 10;

(iii) внутриклеточный сигнальный домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7 и аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9 или SEQ ID NO: 10, где последовательности, содержащие внутриклеточный сигнальный домен, экспрессируются в одной и той же рамке считывания и в виде единой полипептидной цепи; или

(iv) молекула нуклеиновой кислоты содержит нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 18 или нуклеотидную последовательность с 95-99% идентичности по отношению к ней и/или нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 20 или SEQ ID NO: 21 или нуклеотидную последовательность с 95-99% идентичности по отношению к ним.

13. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-8, содержащая лидерную последовательность, кодирующую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1.

14. Выделенный полипептид химерного антигенного рецептора (CAR), который связывается с BCMA, кодируемый молекулой нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-8.

15. Выделенный полипептид химерного антигенного рецептора (CAR), который связывается с BCMA, где указанный полипептид CAR содержит связывающий домен против B-клеточного антигена созревания (BCMA), трансмембранный домен и внутриклеточный сигнальный домен, где указанный связывающий домен против BCMA содержит:

(i) определяющую комплементарность область тяжелой цепи 1 (HC CDR1), содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 394, определяющую комплементарность область тяжелой цепи 2 (HC CDR2), содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 434, определяющую комплементарность область тяжелой цепи 3 (HC CDR3), содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 474, определяющую комплементарность область легкой цепи 1 (LC CDR1), содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 514, определяющую комплементарность область легкой цепи 2 (LC CDR2), содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 554, и определяющую комплементарность область легкой цепи 3 (LC CDR3), содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 594;

(ii) HC CDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 634, HC CDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 674, HC CDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 714, LC CDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 754, LC CDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 794, и LC CDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 834;

(iii) HC CDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 874, HC CDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 914, HC CDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 954, LC CDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 994, LC CDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1034, и LC CDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1074;

(iv) HC CDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 396, HC CDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 436, HC CDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 476, LC CDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 516, LC CDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 556, и LC CDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 596;

(v) HC CDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 636, HC CDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 676, HC CDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 716, LC CDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 756, LC CDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 796, и LC CDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 836;

(vi) HC CDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 876, HC CDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 916, HC CDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 956, LC CDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 996, LC CDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1036, и LC CDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1076;

(vii) HC CDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 398, HC CDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 438, HC CDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 478, LC CDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 518, LC CDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 558, и LC CDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 598;

(viii) HC CDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 638, HC CDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 678, HC CDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 718, LC CDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 758, LC CDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 798, и LC CDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 838;

(ix) HC CDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 878, HC CDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 918, HC CDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 958, LC CDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 998, LC CDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1038, и LC CDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1078;

(x) HC CDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 384, HC CDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 424, HC CDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 464, LC CDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 504, LC CDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 544, и LC CDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 584;

(xi) HC CDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 624, HC CDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 664, HC CDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 704, LC CDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 744, LC CDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 784, и LC CDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 824; или

(xii) HC CDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 864, HC CDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 904, HC CDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 944, LC CDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 984, LC CDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1024, и LC CDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1064.

16. Выделенный полипептид CAR по п. 15, содержащий вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 94, 96, 98 или 84.

17. Выделенный полипептид CAR по п. 15, содержащий вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 79, 81, 83 или 69.

18. Выделенный полипептид CAR по п. 15, содержащий:

(i) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 79, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 94;

(ii) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 81, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 96;

(iii) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 83, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 98; или

(iv) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 69, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 84.

19. Выделенный полипептид CAR по п. 15, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 53 и SEQ ID NO: 39, или аминокислотную последовательность с 95-99% идентичности по отношению к ним.

20. Выделенный полипептид CAR по п. 15, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 109, SEQ ID NO: 111, SEQ ID NO: 113 или SEQ ID NO: 99 или аминокислотную последовательность с 95-99% идентичности по отношению к ним с лидерной последовательностью, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:1, или без нее.

21. Выделенный полипептид CAR по любому из пп. 15-20, где:

(i) трансмембранный домен содержит трансмембранный домен из белка, выбранного из группы, состоящей из альфа-, бета- или дзета-цепи T-клеточного рецептора, CD28, CD3 эпсилон, CD45, CD4, CD5, CD8, CD9, CD16, CD22, CD33, CD37, CD64, CD80, CD86, CD134, CD137 и CD154; или

(ii) трансмембранный домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6 или аминокислотную последовательность с 95-99% идентичности по отношению к ней.

22. Выделенный полипептид CAR по любому из пп. 15-20, где связывающий домен против BCMA соединяют с трансмембранным доменом посредством шарнирной области, где шарнирная область содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2 или SEQ ID NO: 36 или аминокислотную последовательность с 95-99% идентичности по отношению к ним.

23. Выделенный полипептид CAR по любому из пп. 15-20, где внутриклеточный сигнальный домен содержит костимуляторный домен, где:

(i) костимуляторный домен содержит функциональный сигнальный домен, полученный из белка, выбранного из группы, состоящей из молекулы MHC класса I, белков рецепторов ФНО, иммуноглобулин-подобных белков, рецепторов цитокинов, интегринов, сигнальных молекул активации лимфоцитов, активирующих рецепторов NK-клеток, BTLA, рецептора Толл-лиганда, OX40, CD2, CD7, CD27, CD28, CD30, CD40, CDS, ICAM-1, LFA-1, 4-1BB, B7-H3, CDS, ICAM-1, ICOS, GITR, BAFFR, LIGHT, HVEM, KIRDS2, SLAMF7, NKp80, NKp44, NKp30, NKp46, CD19, CD4, CD8 альфа, CD8 бета, IL2R бета, IL2R гамма, IL7R альфа, ITGA4, VLA1, CD49a, ITGA4, IA4, CD49D, ITGA6, VLA-6, CD49f, ITGAD, CD11d, ITGAE, CD103, ITGAL, CD11a, LFA-1, ITGAM, CD11b, ITGAX, CD11c, ITGB1, CD29, ITGB2, CD18, LFA-1, ITGB7, NKG2D, NKG2C, TNFR2, TRANCE/RANKL, DNAM1, SLAMF4, CD84, CD96, CEACAM1, CRTAM, Ly9, CD160, PSGL1, CD100, CD69, SLAMF6, SLAM, BLAME, SELPLG, LTBR, LAT, GADS, SLP-76, PAG/Cbp, CD19a и лиганда, специфически связывающегося с CD83; или

(ii) костимуляторный домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7 или аминокислотную последовательность с 95-99% идентичности по отношению к ней.

24. Выделенный полипептид CAR по любому из пп. 15-20, где:

(i) внутриклеточный сигнальный домен содержит функциональный сигнальный домен 4-1BB и/или функциональный сигнальный домен CD3 дзета;

(ii) внутриклеточный сигнальный домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7 и/или аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9 или SEQ ID NO: 10 или аминокислотную последовательность с 95-99% идентичности по отношению к аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 7 и/или аминокислотную последовательность с 95-99% идентичности по отношению к аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 9 или SEQ ID NO: 10; или

(iii) внутриклеточный сигнальный домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7 и аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9 или SEQ ID NO: 10, где последовательности, содержащие внутриклеточный сигнальный домен, экспрессируются в одной и той же рамке считывания и в виде единой полипептидной цепи.

25. Выделенный полипептид CAR по любому из пп. 15-20, содержащий лидерную последовательность, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1.

26. Выделенный связывающий домен против B-клеточного антигена созревания (BCMA), который связывается с BCMA, содержащий:

(i) определяющую комплементарность область тяжелой цепи 1 (HC CDR1), содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 394, определяющую комплементарность область тяжелой цепи 2 (HC CDR2), содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 434, определяющую комплементарность область тяжелой цепи 3 (HC CDR3), содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 474, определяющую комплементарность область легкой цепи 1 (LC CDR1), содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 514, определяющую комплементарность область легкой цепи 2 (LC CDR2), содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 554, и определяющую комплементарность область легкой цепи 3 (LC CDR3), содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 594;

(ii) HC CDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 634, HC CDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 674, HC CDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 714, LC CDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 754, LC CDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 794, и LC CDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 834;

(iii) HC CDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 874, HC CDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 914, HC CDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 954, LC CDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 994, LC CDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1034, и LC CDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1074;

(iv) HC CDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 396, HC CDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 436, HC CDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 476, LC CDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 516, LC CDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 556, и LC CDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 596;

(v) HC CDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 636, HC CDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 676, HC CDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 716, LC CDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 756, LC CDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 796, и LC CDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 836;

(vi) HC CDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 876, HC CDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 916, HC CDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 956, LC CDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 996, LC CDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1036, и LC CDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1076;

(vii) HC CDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 398, HC CDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 438, HC CDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 478, LC CDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 518, LC CDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 558, и LC CDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 598;

(viii) HC CDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 638, HC CDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 678, HC CDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 718, LC CDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 758, LC CDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 798, и LC CDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 838;

(ix) HC CDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 878, HC CDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 918, HC CDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 958, LC CDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 998, LC CDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1038, и LC CDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1078;

(x) HC CDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 384, HC CDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 424, HC CDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 464, LC CDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 504, LC CDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 544, и LC CDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 584;

(xi) HC CDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 624, HC CDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 664, HC CDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 704, LC CDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 744, LC CDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 784, и LC CDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 824; или

(xii) HC CDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 864, HC CDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 904, HC CDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 944, LC CDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 984, LC CDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1024, и LC CDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1064.

27. Выделенный связывающий домен против BCMA по п. 26, содержащий вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 94, 96, 98 или 84.

28. Выделенный связывающий домен против BCMA по п. 26, содержащий вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 79, 81, 83 или 69.

29. Выделенный связывающий домен против BCMA по п. 26, содержащий:

(i) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 79, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 94;

(ii) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 81, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 96;

(iii) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 83, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 98; или

(iv) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 69, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 84.

30. Выделенный связывающий домен против BCMA по п. 26, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 53 и SEQ ID NO: 39, или аминокислотную последовательность с 95-99% идентичности по отношению к ним.

31. Вектор для получения полипептида CAR, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую полипептид CAR по любому из пп. 15-25, где вектор выбран из группы, состоящей из ДНК-вектора, РНК-вектора, плазмиды, лентивирусного вектора, аденовирусного вектора или ретровирусного вектора.

32. Вектор по п. 31, дополнительно содержащий промотор EF-1, содержащий последовательность SEQ ID NO: 11.

33. Клетка для экспрессии полипептида CAR по любому из пп. 15-25, содержащая молекулу нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-13 или вектор по любому из пп. 31 или 32.

34. Способ получения иммунной эффекторной клетки, включающий трансдукцию иммунной эффекторной клетки с использованием вектора по п. 31 или 32.

35. Способ получения популяции РНК-сконструированных клеток, включающий встраивание транскрибируемой in vitro РНК или синтетической РНК в клетку, где РНК содержит молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую полипептид CAR по любому из пп. 15-25.

36. Способ достижения противоопухолевого иммунитета у млекопитающего, имеющего заболевание, ассоциированное с экспрессией BCMA, включающий введение млекопитающему эффективного количества иммунных эффекторных клеток, содержащих молекулу нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-13 или полипептид CAR по любому из пп. 15-25.

37. Способ по п. 36, где иммунная эффекторная клетка является аутологичной T-клеткой или аллогенной T-клеткой.

38. Способ лечения млекопитающего, имеющего заболевание, ассоциированное с экспрессией BCMA, включающий введение млекопитающему эффективного количества иммунных эффекторных клеток, содержащих молекулу нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-13 или полипептид CAR по любому из пп. 15-25.

39. Способ по п. 38, где заболевание, ассоциированное с экспрессией BCMA, является:

(i) злокачественным новообразованием или предраковым состоянием, выбранным из одного или более из миелодисплазии, миелодиспластического синдрома или предлейкоза; или

(ii) несвязанным со злокачественным новообразованием показанием, ассоциированным с экспрессией BCMA.

40. Способ по п. 38, где заболевание является гемобластозом.

41. Способ по п. 38, где заболевание является острым лейкозом, выбранным из одного или более из острого B-клеточного лимфоидного лейкоза, острого T-клеточного лимфоидного лейкоза, острого лимфоидного лейкоза, хронического миелогенного лейкоза, хронического лимфоцитарного лейкоза, B-клеточного пролимфоцитарного лейкоза, неоплазии из бластных плазмацитоидных дендритных клеток, лимфомы Беркитта, диффузной крупноклеточной B-клеточной лимфомы, фолликулярной лимфомы, волосатоклеточного лейкоза, мелкоклеточной или крупноклеточной фолликулярной лимфомы, злокачественных лимфопролиферативных состояний, MALT-лимфомы, лимфомы из клеток мантийной зоны, лимфомы из клеток маргинальной зоны, множественной миеломы, миелодисплазии и миелодиспластического синдрома, неходжкинской лимфомы, плазмобластной лимфомы, неоплазии из плазмацитоидных дендритных клеток, макроглобулинемии Вальденстрема, рака предстательной железы, рака поджелудочной железы, рака легких, бессимптомной миеломы, моноклональной гаммапатии неустановленной этиологии, макроглобулинемии Вальденстрема, плазмоцитомы, системного амилоидоза легких цепей или POEMS-синдрома или их комбинации.

42. Способ по любому из пп. 38-41, где клетку вводят в комбинации с одним или более из:

(i) средства, повышающего эффективность клетки, содержащей нуклеиновую кислоту CAR или полипептид CAR;

(ii) средства, улучшающего один или более побочный эффект, ассоциированный с введением клетки, содержащей нуклеиновую кислоту CAR или полипептид CAR;

(iii) средства, с помощью которого лечат заболевание, ассоциированное с BCMA.

43. Способ по любому из пп. 38-41, где иммунную эффекторную клетку вводят в комбинации с ингибитором PD-L1, например антителом против PD-L1.

44. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-13, выделенный полипептид CAR по любому из пп. 15-25, вектор по п. 31 или 32 или клетка по п. 33 для применения в качестве лекарственного средства для млекопитающего, имеющего заболевание, ассоциированное с экспрессией BCMA.

45. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-13, выделенный полипептид CAR по любому из пп. 15-25, вектор по п. 31 или 32 или клетка по п. 33 для применения в лечении заболевания, ассоциированного с экспрессией BCMA.

46. Клетка по п. 33, дополнительно экспрессирующая ингибиторную молекулу, содержащую первый полипептид, содержащий по меньшей мере часть ингибиторной молекулы, ассоциированной со вторым полипептидом, содержащим костимуляторный домен и первичный сигнальный домен.

47. Клетка по п. 46, где первый полипептид содержит по меньшей мере часть PD-1.

48. Способ по п. 42, где средство является ингибитором mTOR и индивидууму вводят низкую, усиливающую иммунитет дозу ингибитора mTOR, например RAD001 или рапамицина.

49. Способ по п. 48, где ингибитор mTOR вводят в течение периода времени, достаточного для снижения доли PD-1-положительных T-клеток, повышения доли PD-1-отрицательных T-клеток или повышения соотношения PD-1-отрицательных T-клеток/PD-1-положительных T-клеток в периферической крови индивидуума или в препарате T-клеток, выделенных из индивидуума.

50. Способ по любому из пп. 38-41, где клетку, экспрессирующую молекулу CAR, вводят в комбинации с клеткой, содержащей молекулу CAR CD19.

51. Способ по п. 50, где заболевание, ассоциированное с BCMA, является множественной миеломой.

52. Способ по п. 51, где множественная миелома является CD19-отрицательной множественной миеломой.

53. Способ по любому из пп. 38-41, 51 или 52, где клетку, экспрессирующую молекулу CAR, вводят индивидууму посредством фракционирования дозы, например одного, двух, трех или более отдельных введений частичной дозы,

необязательно, где первую процентную долю общей дозы вводят в первый день лечения, а вторую процентную долю общей дозы вводят в последующий день лечения и, необязательно, третью процентную долю общей дозы вводят в еще более поздний день лечения,

необязательно, где 10% общей дозы клеток вводят в первый день, 30% общей дозы клеток вводят во второй день и остальные 60% общей дозы клеток вводят в третий день лечения и,

необязательно, где общая доза клеток содержит от 1 до 5×10⁷ или от 1 до 5×10⁸ клеток.