Композиция на основе липосомальной формы доцетаксела для инъекций с высоким содержанием лекарственного средства
Настоящее изобретение относится к липосомальной фармацевтической композиции, содержащей от приблизительно 0,8 мас.% до приблизительно 1 мас.% доцетаксела, от приблизительно 30 мас.% до приблизительно 38 мас.% соевого фосфатидилхолина, от приблизительно 0,2 мас.% до приблизительно 0,8 мас.% натрия холестерилсульфата, от приблизительно 61 мас.% до приблизительно 68 мас.% сахарозы и регулятор рН, где рН липосомальной композиции составляет менее 3,5, а также к способу ее получения. 2 н. и 5 з.п. ф-лы, 7 пр.
ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ
Настоящее изобретение относится к содержащим доцетаксел липосомам для инъекций, которые будут использовать для нацеливания на участок опухоли. Настоящее изобретение относится к увеличению времени удерживания лекарственного средства в крови. Настоящее изобретение также предусматривает достижение содержания (нагрузки) лекарственного средства более 90% с использованием комбинации ряда растворителей.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
Доцетаксел представляет собой противоопухолевое средство, относящееся к семейству таксоидов, представленное на рынке компанией «Санофи-Авентис» под торговым наименованием Таксотер® (Taxotere®). Его получают путем полусинтеза, начиная с предшественника, извлекаемого из возобновляемой биомассы хвои тисовых растений. Химическое название доцетаксела представляет собой (2R,3S)-N-карбокси-3-фенилизосерин-N-трет-бутил-13-5бета,20-эпокси-1,2α,4,7β,10β13α-гексагидрокситакс-11-ен-9-он-4-ацетат-2-бензоата тригидрат. Доцетаксел характеризуется следующей структурной формулой:
Доцетаксел связывается со свободным тубулином и стимулирует сборку микротрубочек, что снижает доступность тубулина и тем самым предотвращает клеточное деление. В то же время доцетаксел ингибирует деполимеризацию микротрубочек, вызывающую апоптоз. См. инструкцию по применению лекарственного препарата Таксотер®.
Доцетаксел представлен на рынке в виде лекарственного препарата Таксотер®, который утвержден Управлением по контролю качества пищевых продуктов и лекарственных средств (FDA) США для лечения рака груди, немелкоклеточного рака легкого, гормонорефрактерного рака предстательной железы, аденокарциномы желудка и плоскоклеточной карциномы головы и рака шеи. Лекарственный препарат Таксотер доступен в виде стерильного раствора доцетаксела в укупоренном флаконе, т.е. в виде концентрата для приготовления раствора для инфузий в одном флаконе, содержащем 20 мг/мл доцетаксела; 0,54 г/мл полисорбата 80 и 0,395 г/мл раствора абсолютного спирта. Для введения пациентам некоторое количество лекарственного препарата Таксотер, концентрат для приготовления раствора для инфузий, вводят в инфузионный мешок или флакон вместимостью 250 мл, либо с 0,9% раствором натрия хлорида, либо 5% раствором декстрозы для получения конечной концентрации 0,3-0,74 мг/мл. Рекомендуемая терапия предусматривает шесть циклов введения доцетаксела с приемом один раз каждые три недели. См. там же.
Однако присутствие полисорбата 80 в лекарственном препарате Таксотер чаще всего приводит к тяжелым побочным эффектам. У пациентов были отмечены такие реакции, характеризующиеся проявлением крапивницы/эритемы, гипотензии и/или бронхоспазма или очень редко фатальной анафилаксии. При проявлении реакций гиперчувствительности требуются немедленное прекращение инфузии лекарственного препарата Таксотер и введение надлежащего терапевтического средства.
С целью снижения побочных эффектов, обусловленных полисорбатом 80, пациенты принимают дексаметазон в течение трех дней до начала терапии. Дексаметазон представляет собой стероид, который подавляет иммунный ответ у пациентов, что может особенно отрицательно сказываться на пациентах, с раком, проходящих, курс химиотерапии, чей иммунитет может быть уже нарушен в результате разрушения здоровых клеток, обусловленного химиотерапевтическим лечением. В результате такие пациенты могут быть подвержены бактериальным и грибковым инфекциям. Кроме того, несмотря на получение рекомендуемой 3-дневной премедикации с использованием дексаметазона, у пациентов все еще отмечаются побочные эффекты в виде проявления гиперчувствительности в результате приема лекарственного препарата Таксотер.
Из-за таких побочных эффектов большинство пациентов приостанавливает терапию с использованием лекарственного препарата Таксотер к концу второго или третьего цикла, пропускают дозу или продолжают дальнейшую терапию при пониженной дозе. Подобным образом другие солюбилизирующие средства, такие как КРЕМОФОР EL® (CREMOPHOR EL®), который представляет собой полиэтоксилированное касторовое масло, используемое вместе с представленным на рынке лекарственным препаратом паклитаксела ТАКСОЛ® (TAXOL®), вызывают подобные аллергические реакции, требующие премедикации с использованием стероида.
Недавно D-α-токоферил ПЭГ 1000 сукцинат (TPGS), производное витамина Е, было успешно использовано в ряде составов носителей лекарственных средств, таких как микроэмульсии, мицеллы, глицеросомы, наночастицы и твердые дисперсии. Он представляет собой утвержденное FDA вспомогательное вещество с гидрофильной полярной головкой и гидрофобной неполярной алкильной цепью, полученное путем эстерификации витамина Е с использованием полиэтиленгликоля с молекулярной массой 1000 Да. Преимущественно его используют в качестве солюбилизатора, эмульгатора и носителя в липидных составах. Недавнее применение TPGS включает применение в качестве способствующего пероральному всасыванию вещества, обеспечивающего иыгибирование эффлюксыого P-gp со стимуляцией клеточного поглощения и всасывания лекарственного средства. Кроме того, TPGS обеспечивает улучшенное стабилизирующее действие на мембраны в липидном бислое по сравнению с вариантами ПЭГ, обеспечивающими улучшенный гидрофильно-липофильный баланс в молекуле.
В патенте US №8591942 раскрыт способ получения липосом, содержащих, доцетаксел, при этом способ включает диспергирование соевого фосфатидилхолина и натрия олеата в водной среде с получением диспергированных липосом.
В патенте US №9655846 раскрыта суспензия липосом в водной среде, при этом в липосомах инкапсулирован и солюбилизирован доцетаксел при концентрации по меньшей мере приблизительно 5 мг доцетаксела на мл водной среды.
В патенте US №8912228 раскрыт стерильный фармацевтический состав для применения в лечении пациента, нуждающегося в этом, содержащий доцетаксел или его фармацевтически приемлемую соль, один или несколько солюбилизаторов, α-липоевую кислоту, TPGS, одно или несколько гидротропных веществ и необязательно одно или несколько средств с pKa От приблизительно 3 до приблизительно 6.
В заявке на патент США US 20080166403 раскрыта длительно циркулирующая липосома, содержащая фосфолипидный бислой и гидрофильное ядро, при этом фосфолипидный бислой содержит производное витамина Е (D-альфа-токоферил полиэтиленгликоль 1000 сукцинат, TPGS).
В публикации заявки на патент № WO 2014167435 А2, поданной в соответствии с требованиями договора РСТ, раскрыт состав на основе липосом с функционализированной поверхностью, содержащий противораковое средство в качестве активного ингредиента, липосомы, окруженные функциональным покрытием на основе D-α-токоферил полиэтиленгликоль 1000 сукцината (TPGS), при этом противораковое средство включено в липосомы и при этом, кроме того, указанный состав характеризуется эффективностью включения > 70%.
В патенте CN №101991538 раскрыто применение композиции на основе TPGS-содержащих липосом в получении липосом с нагрузкой лекарственного средства.
Muthu et al.; Biomaterials. 2012 Apr; 33(12):3494-501 недавно раскрыли покрытые TPGS липосомы для доставки в головной мозг доцетаксела, полученные с помощью способа введения растворителя. Представленные составы характеризуются эффективностью включения приблизительно 64,10%±0,57%, которая значительно ниже эффективности включения в соответствии с настоящим изобретением (эффективность включения ~83,63%±1,16%). Возможные причины такого повышения эффективности включения в настоящем изобретении могут быть обусловлены исчерпывающей оптимизацией ряда технологических параметров, состава вспомогательных веществ и способа получения липосом. Эта же группа в последующем продолжении работы улучшила терапевтическую эффективность доцетаксела с помощью комбинированной терапии с использованием квантовых точек. Однако настоящее изобретение не предусматривает какую-либо подобную комбинированную терапию.
Однако существует необходимость разработки липосомального состава на основе доцетаксела для инъекций с целью исключения таких побочных эффектов, необходимости премедикации и проблем нарушения режима терапии у пациентов, связанных с составом используемого в настоящее время представленного на рынке лекарственного препарата Таксотер.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Касательно одного объекта настоящего изобретения, представленного в данном документе, предусмотрены липосомальные композиции для инъекций, по сути состоящие из терапевтически эффективного количества доцетаксела и вспомогательного вещества, которое способствует внутривенному введению, которые при этом будут использовать для нацеливания на участок опухоли. Настоящее изобретение относится к увеличению времени удерживания лекарственного средства в крови. Настоящее изобретение также предусматривает достижение содержания лекарственного средства более 90% с использованием комбинации ряда растворителей, предпочтительно метанола и третичного бутанола (трет-бутанола или третичного бутилового спирта) в соотношении 1:1.
В отношении другого объекта настоящее изобретение предусматривает липосомальную форму доцетаксела для инъекций, по сути состоящую из доцетаксела, фосфолипидов, холестерина, лиопротектора и регулятора рН.
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ВЫБРАННЫХ ТЕРМИНОВ
При описании и заявлении объектов настоящего изобретения будет использоваться следующая терминология в соответствии с определениями, указанными ниже.
Термин «липосомы» относится к везикулам, состоящим из одного или нескольких концентрических липидных бислоев, которые содержат некоторый объем включенной водной фазы. Бислой состоят из двух липидных монослоев, содержащих гидрофобный участок «хвост» и гидрофильный участок «головку», где гидрофобные участки направлены к центру бислоя, а гидрофильные участки направлены к внутренней или внешней водной фазе.
Используемый в данном документе вместе с числовыми значениями термин «приблизительно» относится к отклонению±10% от указанного значения, включая указанное значение.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Настоящего изобретение, представленное в данном документе, предусматривает композиции, по сути состоящие из терапевтически эффективного количества доцетаксела и вспомогательного вещества, которое способствует внутривенному введению, которые при этом будут использовать для нацеливания на участок опухоли. Настоящее изобретение относится к увеличению времени удерживания лекарственного средства в крови. Настоящее изобретение также предусматривает достижение содержания лекарственного средства более 90% с использованием комбинации ряда растворителей, предпочтительно метанола и третичного бутанола (трет-бутанола или третичного бутилового спирта) в соотношении 1:1.
В предпочтительном варианте осуществления фармацевтическая композиция, согласно настоящему изобретению, является липосомальной для инъекций.
В наиболее предпочтительном варианте осуществления липосомальная фармацевтическая композиция для инъекций содержит доцетаксел и фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества.
Доцетаксел, предпочтительно используемый в липосомальной фармацевтической композиции согласно настоящему изобретению, составляет от приблизительно 0,8% масс. (w/w, м/м, в весовом соотношении) до приблизительно 1% масс. в пересчете на общую массу композиции. Предпочтительная концентрация доцетаксела в композиции составляет от приблизительно 0,85% масс. до приблизительно 0,95% масс. в пересчете на общую массу композиции. Наиболее предпочтительно доцетаксел используют в композиции в количестве приблизительно 0,9% масс. в пересчете на общую массу композиции.
В дополнительном варианте осуществления липосомальная фармацевтическая композиция содержит доцетаксел, фосфолипиды, холестерин, лиопротектор и регулятор рН, где рН липосомальной композиции составляет менее 3,5.
В еще одном варианте осуществления настоящее изобретение дополнительно предусматривает липосомальную композицию на основе доцетаксела, содержащую доцетаксел, фосфолипиды, холестерин, солюбилизатор, лиопротектор и регулятор рН.
Примеры фосфолипидов выбраны из группы, состоящей из природного фосфолипида, синтетического фосфолипида и их комбинации. Лецитин представляет собой один из природных источников фосфолипида. Лецитин представляет собой смесь, которая находится в яичном желтке и сое. Он содержит ряд фосфолипидов, включающий фосфатидилхолин (PC, соевый фосфатидилхолин), фосфатидилэтаноламин (РЕ) и фосфатидилинозитол (PI). Природные фосфолипиды также включают, например, соевый фосфатидилхолин (SPC), сфингомиелин и фосфатидилглицерин (PG). Синтетические фосфолипиды включают без ограничения производные фосфохолина (например, DDPC, DLPC, DMPC, DPPC, DSPC, DOPC, РОРС, DEPC), производные фосфоглицерина (например, DMPG, DPPG, DSPG, POPG, DSPG-NA, DSPG-NH4), производные фосфатидной кислоты (например, DMPA, DPPA, DSPA), производные фосфоэтаноламина (например, DMPE, DPPE, DSPE DOPE), производные фосфосерина (например, DOPS), производные фосфолипида с ПЭГ (например, mPEG-фосфолипид, mPEG 2000-DSPE, полиглицерин-фосфолипид, функционализированный фосфолипид и фосфолипид с активированной концевой группой) и любые их смеси. Предпочтительно фосфолипид выбирают из соевого фосфатидилхолина (SPC), а смеси фосфолипидов выбирают из соевого фосфатидилхолина (SPC) и N-карбонилметоксиполиэтиленгликоль-2000)-1,2-дистеароил-sn-глицеро-3-фосфоэтаноламина (MPEG2000-DSPE). Фосфолипиды, предпочтительно используемые в липосомальной фармацевтической композиции согласно настоящему изобретению, представляют собой соевый фосфатидилхолин. Соевый фосфатидилхолин, используемый в настоящем изобретении, составляет от приблизительно 30% масс. до приблизительно 40% масс. в пересчете на общую массу композиции, предпочтительно от приблизительно 30% масс. до приблизительно 38% масс. в пересчете на общую массу композиции, еще более предпочтительно от приблизительно 31% масс. до приблизительно 36% масс. в пересчете на общую массу композиции и наиболее предпочтительно в количестве приблизительно 32% масс. в пересчете на общую массу композиции.
Примеры холестерина выбраны из группы, состоящей из холестерина, холестерилсульфата и его солей (например, натриевой соли), холестерилгемисукцината, холестерилсукцината, холестерилолеата, производных полиэтиленгликоля с холестерином (холестерин-ПЭГ), копростанола, холестанола, холестана, холевой кислоты, кортизола, кортикостерона, гидрокортизона и кальциферола. Предпочтительно холестерин выбран из натрия холестерилсульфата. Натрия холестерилсульфат предпочтительно используют в количестве в диапазоне от приблизительно 0,2% масс. до приблизительно 0,8% масс. в пересчете на общую массу композиции, более предпочтительно от приблизительно 0,4% масс. до приблизительно 0,6% масс. в пересчете на общую массу композиции и наиболее предпочтительно в количестве приблизительно 0,5% масс. в пересчете на общую массу композиции.
Примеры солюбилизатора выбраны из группы, состоящей из TPGS витамина Е, полиэтиленгликоля (ПЭГ) 400 и пропиленгликоля (PG) твин 80, твин 20, глицерина спан 80 и глюкофурола. Предпочтительно солюбилизатор выбирают из TPGS витамина Е. Солюбилизатор, предпочтительно используемый в липосомальной фармацевтической композиции для инъекций, составляет от приблизительно 0,1% до приблизительно 1,5% в пересчете на общую массу композиции.
Примеры лиопротектора выбирают из группы, состоящей из сахарозы, трегалозы, арабинозы, эритрита, фруктозы, галактозы, глюкозы, лактозы, мальтита, мальтозы, мальтотриозы, маннита, маннобиозы, маннозы, рибозы, сорбита, сахарозы, ксилита, ксилозы, декстрана или их смеси. Лиопротектор предпочтительно выбирают из сахарозы. Сахароза, предпочтительно используемая в липосомальной фармацевтической композиции, составляет от приблизительно 61% до приблизительно 68% в пересчете на общую массу композиции, более предпочтительно от приблизительно 62% до приблизительно 66% в пересчете на общую массу композиции и наиболее предпочтительно составляет приблизительно 66,5% масс. в пересчете на общую массу композиции.
Примером регуляторов рН, используемых в липосомальной композиции согласно настоящему изобретению, является хлористоводородная кислота. Регулятор рН используют для регуляции рН липосомальной композиции до рН приблизительно менее 3,5, более предпочтительно до рН приблизительно 3. Авторы настоящего изобретения неожиданно обнаружили, что при рН менее 3,5 в липосомах имела место высокая нагрузка лекарственного средства более 90% доцетаксела (более 90% доцетаксела включено в липосомы в виде связанного лекарственного средства и менее 10% доцетаксела присутствует в виде свободного лекарственного средства).
В вариантах осуществления настоящего изобретения оно предусматривает липосомальную фармацевтическую композицию, содержащую от приблизительно 0,8% масс. до приблизительно 1% масс. доцетаксела, от приблизительно 30% масс. до приблизительно 38% масс. соевого фосфатидилхолина, от приблизительно 0,2% масс. до приблизительно 0,8% масс. натрия холестерилсульфата, от приблизительно 61% масс. до приблизительно 68% масс. сахарозы и регулятор рН, где рН липосомальной композиции составляет менее 3,5.
В дополнительном варианте осуществления настоящего изобретения оно предусматривает липосомальную фармацевтическую композицию, по сути состоящую из от приблизительно 0,8% масс. до приблизительно 1% масс. доцетаксела, от приблизительно 30% масс. до приблизительно 38% масс. соевого фосфатидилхолина, от приблизительно 0,2% масс. до приблизительно 0,8% масс. натрия холестерилсульфата, от приблизительно 61% масс. до приблизительно 68% масс. сахарозы и регулятора рН, где рН липосомальной композиции составляет менее 3,5.
В другом варианте осуществления настоящего изобретения оно предусматривает липосомальную фармацевтическую композицию, по сути состоящую из от приблизительно 0,8% масс. до приблизительно 1% масс. доцетаксела, от приблизительно 30% масс. до приблизительно 38% масс. соевого фосфатидилхолина, от приблизительно 0,2% масс. до приблизительно 0,8% масс. натрия холестерилсульфата, от приблизительно 61% масс. до приблизительно 68% масс. сахарозы и регулятора рН, где рН липосомальной композиции составляет менее 3,5.
В конкретном варианте осуществления настоящее изобретение предусматривает липосомальную фармацевтическую композицию, содержащую приблизительно 0,9% масс. доцетаксела, приблизительно 32% масс. соевого фосфатидилхолина, приблизительно 0,5% масс. натрия холестерилсульфата, приблизительно 66,5% масс. сахарозы и регулятор рН, где рН липосомальной композиции составляет приблизительно 3.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение предусматривает липосомальную фармацевтическую композицию, по сути состоящую из приблизительно 0,9% масс. доцетаксела, приблизительно 32% масс. соевого фосфатидилхолина, приблизительно 0,5% масс. натрия холестерилсульфата, приблизительно 66,5% масс. сахарозы и регулятора рН, где рН липосомальной композиции составляет приблизительно 3.
В дополнительном варианте осуществления настоящее изобретение предусматривает липосомальную фармацевтическую композицию, по сути состоящую из приблизительно 0,9% масс. доцетаксела, приблизительно 32% масс. соевого фосфатидилхолина, приблизительно 0,5% масс. натрия холестерилсульфата, приблизительно 66,5% масс. сахарозы и регулятора рН, где рН липосомальной композиции составляет приблизительно 3.
В конкретном варианте осуществления настоящее изобретение предусматривает липосомальную фармацевтическую композицию, содержащую приблизительно 0,9% масс. доцетаксела, приблизительно 32% масс. соевого фосфатидилхолина, приблизительно 0,5% масс. натрия холестерилсульфата, приблизительно 66,5% масс. сахарозы и регулятор рН, где рН липосомальной композиции составляет от приблизительно 2,5 до приблизительно 3,2.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение предусматривает липосомальную фармацевтическую композицию, по сути состоящую из приблизительно 0,9% масс. доцетаксела, приблизительно 32% масс. соевого фосфатидилхолина, приблизительно 0,5% масс. натрия холестерилсульфата, приблизительно 66,5% масс. сахарозы и регулятора рН, где рН липосомальной композиции составляет от приблизительно 2,5 до приблизительно 3,2.
В дополнительном варианте осуществления настоящее изобретение предусматривает липосомальную фармацевтическую композицию, по сути состоящую из приблизительно 0,9% масс. доцетаксела, приблизительно 32% масс. соевого фосфатидилхолина, приблизительно 0,5% масс. натрия холестерилсульфата, приблизительно 66,5% масс. сахарозы и регулятора рН, где рН липосомальной композиции составляет от приблизительно 2,5 до приблизительно 3,2.
Липосомальная фармацевтическая композиция, согласно настоящему изобретению, содержит липосомы с размером b90 менее 200 нм, размером d50 менее 150 нм и размером d10 менее 100 нм.
Содержащие доцетаксел липосомы, согласно настоящему изобретению, получены с помощью способа, включающего следующие стадии:
a. диспергирование соевого фосфатидилхолина в смеси растворителей с солюбилизацией соевого фосфатидилхолина;
b. добавление натрия холестерилсульфата к солюбилизированному соевому фосфатидилхолину;
c. добавление доцетаксела к содержимому со стадии b;
d. получение раствора сахарозы путем растворения сахарозы в воде очищенной и добавление регулятора рН с образованием раствора сахарозы, где рН раствора сахарозы составляет приблизительно 3;
e. добавление содержимого со стадии с к содержимому со стадии d и перемешивание с большим усилием сдвига при 8000 об/мин в течение 15 мин;
f. выпаривание в роторном испарителе;
g. добавление регулятора рН до рН приблизительно 3;
h. экструдирование содержащих доцетаксел липосом до размера частиц d90 менее 200 нм;
i. фильтрование;
j. лиофилизация.
Примеры растворителей выбраны из группы, состоящей из метанола, этанола (абсолютного спирта), пропанола, бутанола (трет-бутанола, третичного бутилового спирта), хлороформа, изоамилового спирта, изопропанола, 2-метоксиэтаыола, тетрагидрофураыа, ДМСО, ацетона, ацетонитрила и любых их комбинаций. Растворители, предпочтительно используемые для получения липосомальной композиции, представляют собой третичный бутиловый спирт и метанол в соотношении 1:1.
В предпочтительном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу получения липосомальной композиции, включающему следующие стадии:
a. диспергирование соевого фосфатидилхолина в смеси растворителей из метанола и третичного бутилового спирта с солюбилизацией соевого фосфатидилхолина;
b. добавление натрия холестерилсульфата к солюбилизированному соевому фосфатидилхолину;
c. добавление доцетаксела к содержимому со стадии b;
d. получение раствора сахарозы путем растворения сахарозы в воде очищенной и добавление регулятора рН с образованием раствора сахарозы, где рН раствора сахарозы составляет приблизительно 3;
e. добавление содержимого со стадии с к содержимому со стадии d и перемешивание с большим усилием сдвига при 8000 об/мин в течение 15 мин;
f. выпаривание в роторном испарителе;
g. добавление регулятора рН до рН приблизительно 3;
h. экструдирование содержащих доцетаксел липосом до размера частиц d90 менее 200 нм;
i. фильтрование;
j. лиофилизация.
В более предпочтительном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу получения липосомальной композиции, включающему следующие стадии:
a. диспергирование соевого фосфатидилхолина в смеси растворителей из метанола и третичного бутилового спирта в соотношении 1:1 с солюбилизацией соевого фосфатидилхолина;
b. добавление натрия холестерилсульфата к солюбилизированному соевому фосфатидилхолину;
c. добавление доцетаксела к содержимому со стадии b;
d. получение раствора сахарозы путем растворения сахарозы в воде очищенной и добавление регулятора рН с образованием раствора сахарозы, где рН раствора сахарозы составляет приблизительно 3;
e. добавление содержимого со стадии с к содержимому со стадии d и перемешивание с большим усилием сдвига при 8000 об/мин в течение 15 мин;
f. выпаривание в роторном испарителе;
g. добавление регулятора рН до рН приблизительно 3;
h. экструдирование содержащих доцетаксел липосом до размера частиц d90 менее 200 нм;
i. фильтрование;
j. лиофилизация.
В другом варианте осуществления жидкий фильтрат липосомальной формы доцетаксела лиофилизируют с включением стадий замораживания фильтрата при температуре в диапазоне от приблизительно -5°С до приблизительно -50°С в течение продолжительности времени в диапазоне от приблизительно 10 часов до приблизительно 20 часов; высушивания под вакуумом при температуре в диапазоне от приблизительно -50°С до приблизительно 40°С в течение продолжительности времени в диапазоне от приблизительно 40 часов до приблизительно 80 часов.
В другом конкретном варианте осуществления жидкий фильтрат липосомальной формы доцетаксела лиофилизируют с включением следующих стадий:
a. загрузка фильтрата в наполненные флаконы при температуре -5°С ± 2°С;
b. замораживание состава с фильтратом при температуре -5°С ± 2°С в течение 100 мин ± 20 мин;
c. поддержание температуры замораживания в течение еще 300 мин ± 20 мин;
d. понижение температуры до -25°С ± 2°С в течение 50 мин ± 10 мин;
e. поддержание пониженной температуры в течение еще 90 мин ± 10 мин;
f. понижение температуры до -50°С ± 2°С в течение 60 мин ± 10 мин;
g. поддержание пониженной температуры в течение еще 300 мин ± 10 мин;
h. откачивание фильтрата путем создания вакуума при 750 мТорр с получением замороженного состава;
i. высушивание замороженного состава при температуре - 50°С ± 2°С путем создания вакуума при 750 мТорр в течение 30 мин ± 10 мин;
j. высушивание замороженного состава при температуре 35°С ± 2°С путем создания вакуума при 400 мТорр в течение 120 мин ± 10 мин;
k. поддержание высушивания в течение еще 1255 мин ± 20 мин при температуре -35°С ± 2°С и под вакуумом при 400 мТорр;
1. высушивание замороженного состава при температуре 25°С ± 2°С путем создания вакуума при 300 мТорр в течение 150 мин ± 10 мин;
m. поддержание высушивания в течение еще 600 мин ± 20 мин при температуре -25°С ± 2°С и под вакуумом при 300 мТорр;
n. высушивание замороженного состава при температуре -5°С ± 2°С путем создания вакуума при 200 мТорр в течение 150 мин ± 10 мин;
о. поддержание высушивания в течение еще 900 мин ± 20 мин при температуре -5°С ± 2°С и под вакуумом при 200 мТорр;
р. высушивание замороженного состава при температуре 20°С ± 2°С путем создания вакуума при 100 мТорр в течение 150 мин ± 10 мин;
q. поддержание высушивания в течение еще 300 мин ± 20 мин при температуре 20°С ± 2°С и под вакуумом при 100 мТорр;
r. высушивание замороженного состава при температуре 25°С ± 2°С путем создания вакуума при 100 мТорр в течение 30 мин ± 10 мин;
s. поддержание высушивания в течение еще 150 мин ± 20 мин при температуре 25°С ± 2°С и под вакуумом при 100 мТорр;
t. высушивание замороженного состава при температуре 40°С ± 2°С путем создания вакуума при 100 мТорр в течение 30 мин ± 10 мин;
u. поддержание высушивания в течение еще 120 мин ± 20 мин при температуре 40°С ± 2°С и под вакуумом при 100 мТорр;
v. высушивание замороженного состава при температуре 25°С ± 2°С путем создания вакуума при 100 мТорр в течение 30 мин ± 10 мин;
w. поддержание высушивания в течение еще 60 мин ± 20 мин при температуре 25°С ± 2°С и под вакуумом при 100 мТорр.
В вариантах. осуществления настоящего изобретения лиофилизированную композицию, согласно настоящему изобретению, вводят внутривенно пациентам для лечения рака груди, немелкоклеточного рака легкого, кастрационно-резистентного рака предстательной железы, аденокарциномы желудка и плоскоклеточной карциномы головы и рака шеи.
В вариантах осуществления настоящего изобретения, касающихся внутривенного введения, лиофилизированную композицию восстанавливают с использованием воды очищенной и дополнительно разводят либо 0,9% раствором натрия хлорида, либо 5% раствором декстрозы.
В вариантах осуществления настоящего изобретения липосомальную композицию на основе доцетаксела, согласно настоящему изобретению, используют для лечения рака груди, немелкоклеточного рака легкого, кастрационно-резистентного рака предстательной железы, аденокарциномы желудка и плоскоклеточной карциномы головы и рака шеи, при котором не требуется премедикация с использованием преднизона.
В вариантах осуществления настоящего изобретения рекомендуемая доза липосомальной композиции, согласно настоящему изобретению, составляет от 60 до 100 мг/м2 при введении внутривенно в течение 1 часа каждые 3 недели.
Следующие примеры представлены для иллюстрации настоящего изобретения. Однако следует понимать, что настоящее изобретение не ограничено конкретными условиями или подробной информацией, описанными в примерах ниже. Примеры не следует рассматривать как ограничивающие настоящее изобретение, поскольку примеры представляют лишь конкретную методику, полезную для понимания и практического осуществления настоящего изобретения и его различных, аспектов. Несмотря на то, что некоторые предпочтительные и альтернативные варианты осуществления настоящего изобретения были изложены для целей раскрытия настоящего изобретения, специалисты в данной области техники могут принять решение касательно модификации раскрытых вариантов осуществления.
Примеры 1-3
Получают липосомальную инъекцию со следующим составом.
Такие липосомальыые инъекции получают следующим образом:
1. Получают смесь растворителей для солюбилизации липидов и лекарственного средства посредством перемешивания смеси метанола и трет-бутанола 50:50 (v/v, об/об, объемное содержание).
2. К 4 мл смеси растворителей со стадии 1 добавляют навеску соевого фосфатидилхолина и солюбилизируют при температуре 60-65°С.
3. К липидному раствору со стадии 2 добавляют навеску натрия холестерилсульфата и солюбилизируют при температуре 60-65°С.
4. К липидному раствору со стадии 3 добавляют навеску MPEG 2000 DSPE/витамина Е TPGS и солюбилизируют при температуре 60-65°С (необязательно).
5. К липидному раствору со стадии 4 добавляют навеску доцетаксела и солюбилизируют при температуре 60-65°С.
6. Перемешивают содержимое со стадии 4 в течение 10 минут при температуре 60-65°С до однородного связывания доцетаксела с липидами.
7. Получают раствор сахарозы путем растворения навески сахарозы в воде очищенной, эквивалентный 75% от размера партии.
8. Получают раствор 0,1 н. раствор хлористоводородной кислоты путем разведения необходимого количества 37% концентрированной HCl.
9. Регулируют рН раствора сахарозы, полученного на стадии 7, в диапазоне рН 3,0-4,0 с использованием 0,1 н. раствора HCl.
10. Нагревают раствор сахарозы со стадии 8 до температуры 60-65°С.
11. Добавляют смесь лекарственного средства с липидами в раствор сахарозы при перемешивании с большим усилием сдвига при 5000-20000 об/мин с использованием метода инжекции этанола и промывают емкость, содержащую смесь лекарственного средства с липидами, с использованием 1 мл смеси растворителей и осуществляют перемешивание в течение 2-30 минут.
12. Доводят объем липосомального состава со стадии 11 до метки водой очищенной и при необходимости регулируют рН в диапазоне 3,0-4,0.
13. Выполняют уменьшение размера частиц в липосомальном составе со стадии 12 путем экструдирования с использованием поликарбонатных фильтров с размером пор 400 нм, 200 нм, 100 нм и 50 нм.
14. После уменьшения размера частиц проводят стерилизующее фильтрование липосомального состава с использованием фильтра с размером пор 0,22 мкм.
15. После стерилизующего фильтрования образцы лиофилизируют с получением сухого липосомального лиофилизата для приготовления раствора для инъекций.
Пример 4
Способ получения липосом с инкапсулированным доцетакселом
1. 14,46 г (32,05% масс.) соевого фосфатидилхолина диспергировали в 8 мл смеси растворителей (4 мл третичного бутилового спирта и 4 мл метанола в соотношении 1:1) и перемешивали с использованием магнитной мешалки на водяной бане при температуре 47°С в течение 25 минут с солюбилизацией соевого фосфатидилхолина.
2. В раствор солюбилизированного натрия фосфатидилхолина со стадии 1 добавляли 226,6 мг (0,5% масс.) натрия холестерилсульфата и солюбилизировали с использованием магнитной мешалки на водяной бане при температуре 49°С в течение 45 минут с образованием диспергированных липосом.
3. К содержимому со стадии 3 добавляли 412,1 мг (0,91% масс.) доцетаксела безводного в виде твердого вещества и солюбилизировали с использованием магнитной мешалки на водяной бане при температуре 46°С в течение 10 минут с образованием диспергированных липосом, содержащих доцетаксел.
4. Содержимое со стадии 3 добавляли в раствор сахарозы (раствор сахарозы получали путем растворения 30,02 г [66,54% масс] сахарозы в необходимом количестве воды очищенной с использованием магнитной мешалки на водяной бане при температуре 45°С в течение 2 минут и затем регулировали рН до 2,7 с использованием 0,1 н. раствора хлористоводородной кислоты) с использованием гомогенизатора с большим усилием сдвига ultra-turrax Т-25 digital при 8000 об/мин в течение 15 минут.
5. Содержимое со стадии 4 подвергали выпариванию в роторном испарителе при температуре обратного холодильника 2°С, температуре бани 46°С под вакуумом.
6. После выпаривания в роторном испарителе к содержимому со стадии 5 добавляли необходимое количество воды очищенной и регулировали рН до 3 с использованием 0,1 н. раствора хлористоводородной кислоты.
7. Содержимое со стадии 6 экструдировали с помощью поликарбонатных мембран с размером пор 200 нм, 100 нм, 80 нм и 50 нм с использованием экструдера lipex при температуре 47°С.Три цикла пропускания обеспечивали получение липосом с размером частиц d90 менее 200 нм (т.е. 178 нм), d50 менее 150 нм (т.е. 113 нм) и d10 менее 100 нм (т.е. 73 нм).
8. Содержимое со стадии 7 фильтровали с использованием мембранного фильтра с размером пор 0,2 мкм.
9. Фильтратом со стадии 8 наполняли формованные флаконы вместимостью 30 мл и лиофилизировали с использованием следующего цикла лиофилизации:
a. загрузка фильтрата в наполненные флаконы при температуре - 5°С ± 2°С;
b. замораживание состава с фильтратом при температуре -5°С ± 2°С в течение 100 мин ± 20 мин;
c. поддержание температуры замораживания в течение еще 300 мин ± 20 мин;
d. понижение температуры до -25°С ± 2°С в течение 50 мин ± 10 мин;
e. поддержание пониженной температуры в течение еще 90 мин ± 10 мин;
f. понижение температуры до -50°С ± 2°С в течение 60 мин ± 10 мин;
g. поддержание пониженной температуры в течение еще 300 мин ± 10 мин;
h. откачивание фильтрата путем создания вакуума при 750 мТорр с получением замороженного состава;
i. высушивание замороженного состава при температуре 50°С ± 2°С путем создания вакуума при 750 мТорр в течение 30 мин ± 10 мин;
j. высушивание замороженного состава при температуре 35°С ± 2°С путем создания вакуума при 400 мТорр в течение 120 мин ± 10 мин;
k. поддержание высушивания в течение еще 1255 мин ± 20 мин при температуре -35°С ± 2°С и под вакуумом при 400 мТорр;
l. высушивание замороженного состава при температуре 25°С ± 2°С путем создания вакуума при 300 мТорр в течение 150 мин ± 10 мин;
m. поддержание высушивания в течение еще 600 мин ± 20 мин при температуре -25°С ± 2°С и под вакуумом при 300 мТорр;
n. высушивание замороженного состава при температуре -5°С ± 2°С путем создания вакуума при 200 мТорр в течение 150 мин ±10 мин;
о. поддержание высушивания в течение еще 900 мин ± 20 мин при температуре -5°С ± 2°С и под вакуумом при 200 мТорр;
р. высушивание замороженного состава при температуре 20°С ± 2°С путем создания вакуума при 100 мТорр в течение 150 мин ± 10 мин;
q. поддержание высушивания в течение еще 300 мин ± 20 мин при температуре 20°С ± 2°С и под вакуумом при 100 мТорр;
r. высушивание замороженного состава при температуре 25°С ± 2°С путем создания вакуума при 100 мТорр в течение 30 мин ± 10 мин;
s. поддержание высушивания в течение еще 150 мин ± 20 мин при температуре 25°С ± 2°С и под вакуумом при 100 мТорр;
t. высушивание замороженного состава при температуре 40°С ± 2°С путем создания вакуума при 100 мТорр в течение 30 мин ± 10 мин;
u. поддержание высушивания в течение еще 120 мин ± 20 мин при температуре 40°С ± 2°С и под вакуумом при 100 мТорр;
v. высушивание замороженного состава при температуре 25°С ± 2°С путем создания вакуума при 100 мТорр в течение 30 мин ± 10 мин;
w. поддержание высушивания в течение еще 60 мин ± 20 мин при температуре 25°С ± 2°С и под вакуумом при 100 мТорр.
Сравнительный пример 1
Способ получения аналогичен способу из примера 4 со следующими изменениями: в смеси растворителей метанол и этанол находятся в соотношении 1:1, рН составляет 4, отсутствует процесс выпаривания в роторном испарителе (стадия 5) и с изменением в цикле лиофилизации (отсутствуют стадии t и u высушивания при температуре 40°С).
Сравнительный пример 2
Способ получения аналогичен способу из примера 4 со следующими изменениями: рН состава регулируют до 4,5.
Сравнительный пример 3
Способ получения аналогичен способу из примера 4 с изменением в цикле лиофилизации (отсутствуют стадии t и u высушивания при температуре 40°С).
Пример 5. Свободное лекарственное средство, включенное лекарственное средство, количественное определение, рН, остаточные органические растворители для примера 4, сравнительных примеров 1, 2 и 3.
Для измерения рН лиофилизат из примера 4, в соответствии с настоящим изобретением, из флакона восстанавливали с использованием воды очищенной с получением 2 мг/мл липосомального состава на основе доцетаксела.
Анализ по показателям «Свободное лекарственное средство», «Включенное лекарственное средство», «Количественное определение» липосомального состава на основе доцетаксела проводили методом ВЭЖХ, а анализ по показателю «Остаточные органические растворители» проводили методом газовой хроматографии в соответствии с требованиями методик, доступных в литературе для специалистов в данной области техники.
Авторы настоящего изобретения неожиданно обнаружили, что состав в примере 4 характеризуется высокой степенью нагрузки лекарственного средства (приблизительно 95%) при использовании растворителей метанола и третичного бутанола в соотношении 1:1, выпаривании в роторном испарителе, с рН состава приблизительно 3 и, кроме того, с меньшим содержанием (в пределах норм в соответствии с требованиями ICH) остаточных органических растворителей (метанола и третичного бутанола) по сравнению со сравнительным примером 1 (содержащим смесь растворителей этанола и метанола в соотношении 1:1 при рН 4,1), сравнительным примером 2 (содержащим метанол и трет-бутанол в соотношении 1:1 при рН 4,7) и сравнительным примером 3 (содержащим метанол и трет-бутанол в соотношении 1:1 при рН 3, без стадии высушивания при температуре 40°С на стадиях t и u лиофилизации из примера 4).
1. Липосомальная фармацевтическая композиция, содержащая от 0,8 до 1 мас.% доцетаксела, от 30 до 38 мас.% соевого фосфатидилхолина, от 0,2 до 0,8 мас.% натрия холестерилсульфата, от 61 до 68 мас.% сахарозы и регулятор рН, где рН липосомальной композиции составляет от 2,5 до 3,5.
2. Липосомальная фармацевтическая композиция по п. 1, где рН липосомальной композиции составляет 3.
3. Липосомальная фармацевтическая композиция по п. 1, где размер d90 липосом составляет менее 200 нм.
4. Способ получения липосомальной композиции по п. 1, где способ включает следующие стадии:
a) диспергирование соевого фосфатидилхолина в смеси растворителей из метанола и третичного бутилового спирта с солюбилизацией соевого фосфатидилхолина;
b) добавление натрия холестерилсульфата к солюбилизированному соевому фосфатидилхолину;
c) добавление доцетаксела к содержимому со стадии b;
d) получение раствора сахарозы путем растворения сахарозы в воде очищенной и добавление регулятора рН с образованием раствора сахарозы, где рН раствора сахарозы составляет 3;
e) добавление содержимого со стадии с к содержимому со стадии d и перемешивание с большим усилием сдвига при 8000 об/мин в течение 15 мин;
f) выпаривание в роторном испарителе;
g) добавление регулятора рН до рН 3;
h) экструдирование содержащих доцетаксел липосом до размера частиц d90 менее 200 нм;
i) фильтрование;
j) лиофилизация.
5. Способ по п. 4, где в смеси растворителей метанол и третичный бутиловый спирт находятся в соотношении 1:1.
6. Способ по п. 4, где лиофилизация фильтрата включает стадии замораживания фильтрата при температуре в диапазоне от -5 до -50°С в течение продолжительности времени в диапазоне от 10 до 20 часов; высушивания под вакуумом при температуре в диапазоне от -50 до 40°С в течение продолжительности времени в диапазоне от 40 до 80 часов.
7. Способ по п. 4, где цикл лиофилизации включает следующие стадии:
a) загрузка фильтрата в наполненные флаконы при температуре -5±2°С;
b) замораживание состава с фильтратом при температуре -5±2°С в течение 100±20 мин;
c) поддержание температуры замораживания в течение еще 300±20 мин;
d) понижение температуры до -25±2°С в течение 50±10 мин;
e) поддержание пониженной температуры в течение еще 90±10 мин;
f) понижение температуры до -50±2°С в течение 60±10 мин;
g) поддержание пониженной температуры в течение еще 300±10 мин;
h) откачивание фильтрата путем создания вакуума при 750 мТорр с получением замороженного состава;
i) высушивание замороженного состава при температуре -50±2°С путем создания вакуума при 750 мТорр в течение 30 мин±10 мин;
j) высушивание замороженного состава при температуре -35±2°С путем создания вакуума при 400 мТорр в течение 120 мин±10 мин;
k) поддержание высушивания в течение еще 1255±20 мин при температуре -35±2°С и под вакуумом при 400 мТорр;
l) высушивание замороженного состава при температуре -25±2°С путем создания вакуума при 300 мТорр в течение 150±10 мин;
m) поддержание высушивания в течение еще 600±20 мин при температуре -25±2°С и под вакуумом при 300 мТорр;
n) высушивание замороженного состава при температуре -5±2°С путем создания вакуума при 200 мТорр в течение 150±10 мин;
о) поддержание высушивания в течение еще 900±20 мин при температуре -5±2°С и под вакуумом при 200 мТорр;
р) высушивание замороженного состава при температуре 20±2°С путем создания вакуума при 100 мТорр в течение 150±10 мин;
q) поддержание высушивания в течение еще 300±20 мин при температуре 20±2°С и под вакуумом при 100 мТорр;
r) высушивание замороженного состава при температуре 25±2°С путем создания вакуума при 100 мТорр в течение 30±10 мин;
s) поддержание высушивания в течение еще 150±20 мин при температуре 25±2°С и под вакуумом при 100 мТорр;
t) высушивание замороженного состава при температуре 40±2°С путем создания вакуума при 100 мТорр в течение 30±10 мин;
u) поддержание высушивания в течение еще 120±20 мин при температуре 40±2°С и под вакуумом при 100 мТорр;
v) высушивание замороженного состава при температуре 25±2°С путем создания вакуума при 100 мТорр в течение 30±10 мин;
w) поддержание высушивания в течение еще 60±20 мин при температуре 25±2°С и под вакуумом при 100 мТорр.
