Способ прогнозирования эффективной мобилизации гемопоэтических стволовых клеток у пациентов с множественной миеломой



Способ прогнозирования эффективной мобилизации гемопоэтических стволовых клеток у пациентов с множественной миеломой
Способ прогнозирования эффективной мобилизации гемопоэтических стволовых клеток у пациентов с множественной миеломой
G01N2800/52 - Исследование или анализ материалов путем определения их химических или физических свойств (разделение материалов вообще B01D,B01J,B03,B07; аппараты, полностью охватываемые каким-либо подклассом, см. в соответствующем подклассе, например B01L; измерение или испытание с помощью ферментов или микроорганизмов C12M,C12Q; исследование грунта основания на стройплощадке E02D 1/00;мониторинговые или диагностические устройства для оборудования для обработки выхлопных газов F01N 11/00; определение изменений влажности при компенсационных измерениях других переменных величин или для коррекции показаний приборов при изменении влажности, см. G01D или соответствующий подкласс, относящийся к измеряемой величине; испытание

Владельцы патента RU 2757964:

Федеральное государственное бюджетное учреждение науки "Кировский научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови Федерального медико-биологического агентства" (RU)

Изобретение относится к области медицины. Предложен способ прогнозирования эффективной мобилизации аутологичных гемопоэтических стволовых клеток (ГСК) в периферическую кровь пациентов с множественной миеломой. Определяют уровень секреции мезенхимальными клетками стромы костного мозга интерлейкина-12 и фактора некроза опухоли α. При продукции интерлейкина-12 более 0,136 пг/мл/сут и фактора некроза опухолей α более 0,165 пг/мл/сут у пациентов с множественной миеломой прогнозируют эффективную мобилизацию аутологичных ГСК в периферическую кровь. Изобретение обеспечивает повышение эффективности процесса заготовки ГСК за счет использования экспериментально установленных контрольных количественных параметров - содержания ряда цитокинов, продуцируемых МСК костного мозга. 2 табл., 1 пр.

 

Способ прогнозирования эффективной мобилизации гемопоэтических стволовых клеток (ГСК) у пациентов с множественной миеломой, отличающийся тем, что устанавливается прогностически значимая концентрация цитокинов, секретируемых культурой мезенхимальных клеток стромы костного мозга, коррелирующая с выходом ГСК в периферическую кровь. Изобретение относится к области медицины и касается прогнозирования эффективной мобилизации ГСК.

Костный мозг - орган, в котором сосуществуют и функционально взаимодействуют друг с другом два различных типа клеток - гемопоэтические и мезенхимальные стромальные клетки. ГСК являются предшественниками всех форменных элементов периферической крови (эритроцитов, лейкоцитов, тромбоцитов и пр.). При этом в костном мозге гемопоэтические клетки-предшественники находятся в кроветворных нишах, сформированных из мезенхимальных стромальных клеток (МСК), поддерживающих функционирование ГСК. Костномозговая строма регулирует кроветворение как локально (в кроветворных нишах), так и дистанционно, продуцируя цитокины и ростовые факторы (интерлейкины 1, 4, 6, трансформирующий фактор роста β и т.д.).

Высокодозная химиотерапия с трансплантацией ГСК с успехом используется в лечении пациентов с заболеваниями системы крови. Для этих целей ГСК могут быть выделены из двух источников - костного мозга или периферической крови Выделение ГСК из периферической крови требует предварительной их мобилизации (стимуляции выхода из костномозговых ниш в кровеносное русло). В настоящее время остается ряд нерешенных вопросов, в частности, невозможность заготовки достаточного количества ГСК, отсутствие единого мнения об оптимальном способе мобилизации стволовых клеток перед проведением трансплантации у пациентов с онкогематологическими заболеваниями.

Известны два основных подхода к мобилизации стволовых клеток: введение пациенту гранулоцитарных колониестимулирующих факторов (Г-КСФ) в монорежиме, а также Г-КСФ в сочетании с химиотерапией. Препараты Г-КСФ с целью мобилизации ГСК используют, как правило, в дозах 10 мкг/кг веса пациента, подкожно, ежедневно, в течение 5 дней. Проведение аферезов ГСК начинают при числе CD34+ клеток более 0,01×106 в 1 мл периферической крови [1].

В качестве прототипов использованы работы О.В. Федык [1] и А.Ю. Попова [2], в которых в качестве прогностических факторов, ассоциированных с количеством заготовленных гемопоэтических предшественников, рассмотрены возраст пациентов - доноров аутологичных ГСК, вариант основного заболевания, количество предшествующих циклов химио- и лучевой терапии. Существенным недостатком прототипов является то, что не рассмотрены критерии, позволяющие еще до начала мобилизации ГСК прогнозировать их конечное содержание в периферической крови и трансплантационном материале.

Изобретение направлено на решение проблемы прогнозирования количества мобилизованных в периферическую кровь ГСК в зависимости от функционального состояния стромы костного мозга доноров.

Изобретение обеспечивает повышение эффективности процесса заготовки ГСК за счет использования экспериментально установленных контрольных количественных параметров - содержания ряда цитокинов, продуцируемых МСК костного мозга. Изобретение относится к медицине, в частности к лабораторной технологии, и может быть использовано в процессе получения ГСК.

ПРИМЕР ИСПОЛЬЗОВАНИЯ СПОСОБА

Способ осуществляют следующим образом. Объектом исследования являются МСК костного мозга пациентов с множественной миеломой (n=15). Медиана возраста больных составила 61 год (42-65 лет). Пациенты получили однотипную индукционную терапию до начала мобилизации ГСК (4-6 курсов VCD). Миелоэксфузию выполняли до начала мобилизации ГСК. Выделение ядерных клеток костного мозга производили путем фракционирования на градиенте плотности «Lympholyte» (ρ=1,077 при температуре 22°C, «Cedarlane Laboratories Ltd», США). МСК культивировали в полной питательной среде, содержащей следующие компоненты: среду αМЕМ («StemCells», Канада), богатую тромбоцитами плазму (4%), гепарин 2 Ед/мл («Sigma», США), L-глутамин 2 мМ («StemCells», Канада). Плотность первичного посева составляла 5-10×104 миелокариоцитов на см2. МСК культивировали в СОг-инкубаторе Sanyo-5AC («Sanyo», Япония) в атмосфере 5% углекислого газа при температуре 37°C. Полную замену питательной среды производили каждые 4-5 сут. Культивирование осуществляли до достижения культурой МСК степени покрытия площади флакона 90-95%, после чего в супернатантах первичных культур МСК определяли уровень интерлейкинов (ИЛ) 1β, 2, 6, 12, фактора некроза опухоли α (ФНОα), трансформирующего фактора роста β (TGFβ) методом твердофазного иммуноферментного анализа с использованием наборов реагентов АО «Вектор-Бест», Россия (ИЛ-1β, ИЛ-2, ИЛ-6, ФНОα) и Invitrogen («Thermo Fisher Scientific», США; ИЛ-12 и TGF β).

Мобилизацию ГСК в периферическую кровь пациентов с множественной миеломой осуществляли путем проведения курса винорельбина в дозе 35 мг/м2 площади поверхности тела однократно с последующим назначением препарата гранулоцитарного колониестимулирующего фактора (10 мкг/кг подкожно, ежедневно, в течение 5 дней). Мониторинг уровня ГСК в периферической крови осуществляли ежедневно после введения Г-КСФ. Количество ГСК определяли по экспрессии на их поверхности маркера CD34 согласно протоколу ISHAGE, методом проточной цитометрии с использованием лазерного проточного цитофлуориметра «FACS Canto II» («Becton Dickinson», США).

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Экспериментальные исследования выполнены на базе лабораторий ФГБУН КНИИГиПК ФМБА России (клеточных технологий, клеточной и молекулярной иммунологии). Результаты анализа уровня продукции цитокинов мезенхимальными клетками и количества ГСК в периферической крови пациентов представлены в таблице 1.

Количество CD34+ клеток в периферической крови больных ММ варьировало в пределах 5-75 клеток/мкл (медиана - 22). Продукция цитокинов мезенхимальными клетками колебалась в диапазоне: ИЛ-1β - 0,632 - 0,653 (медиана - 0,642), ИЛ-2 - 0,366-0,490 (медиана - 0,389), ИЛ-6 - 71,52 - 132,72 (медиана - 95,12), ИЛ-12 - 0.06 - 0.416 (медиана - 0,136), ФНОα - 0,095 - 0,765 (медиана - 0,165), TGF β - 1,28 - 16,97 (медиана - 1,89) пг/мл/сут.

Для определения корреляции между количеством CD34+ клеток в 1 мкл периферической крови пациентов и концентрацией цитокинов в супернатанте культуры МСК костного мозга рассчитывали коэффициент корреляции Пирсона (r): для ИЛ-1β r составил минус 0,17, ИЛ-2 - 0,22, ИЛ-6 - 0,02, ИЛ-12 - 0,78, ФНОα - 0,84, TGFβ - минус 0,21. Обнаружена прямая корреляционная зависимость между уровнями ИЛ-12 и ФНОα и числом мобилизированных ГСК. Кроме того, проведен анализ мобилизации ГСК у пациентов с ММ в зависимости от уровня продукции ИЛ-12 и ФНОα МСК костного мозга (таблица 2).

При продукции мезенхимальными клетками ИЛ-12 более 0,136 пг/мл/сут, а ФНОα более 0,165 пг/мл/сут наблюдали достоверно большее количество ГСК, мобилизованных в периферическую кровь (критерий Манна-Уитни, р=0,02). Таким образом, концентрации ИЛ-12 и ФНОα в супернатантах культур МСК можно считать факторами прогноза эффективной мобилизации ГСК в периферическую кровь у пациентов с множественной миеломой.

Новизна данного технического решения заключается в использовании количественных величин цитокинсекретирующей способности мезенхимальных клеток костного мозга пациентов с множественной миеломой, которые позволяют прогнозировать уровень ГСК, мобилизованных в периферическую кровь.

Литература

1. Высокодозная химиотерапия и аутологичная трансплантация у пациентов с лимфомами и множественной миеломой: всем ли удается получить достаточное количество периферических стволовых кроветворных клеток? / Федык О.В., Саржевский В.О., Мельниченко В.Я., Дубинина Ю.Н. [и др.] // Вестник Национального медико-хирургического Центра им. Н И. Пирогова. - 2018. - Т. 13, №3. - С 67-71.

2. Факторы прогноза эффективности получения аутологичных клеток-предшественников гемопоэза для последующей трансплантации после высокодозной химиотерапии Обзор литературы и собственные данные / А.Ю. Попов, Н.В. Жуков, С.В. Миненко, Л.Ю Андреева, В.В. Птушкин // Онкогематология. - 2008. - №3. - С. 34-44.

Способ прогнозирования эффективной мобилизации аутологичных гемопоэтических стволовых клеток (ГСК) в периферическую кровь пациентов с множественной миеломой, характеризующийся определением уровня секреции мезенхимальными клетками стромы костного мозга интерлейкина-12 и фактора некроза опухоли α, при продукции интерлейкина-12 более 0,136 пг/мл/сут и фактора некроза опухолей α более 0,165 пг/мл/сут у пациентов с множественной миеломой прогнозируют эффективную мобилизацию аутологичных ГСК в периферическую кровь.



 

Похожие патенты:

Группа изобретений относится к области связанного с имплантом риска повторной операции. Способ диагностики связанного с имплантом риска повторной операции включает выявление в биологическом образце от субъекта с имплантом уровня полипептида, выбранного из кальпротектина, S100A8 и S100A9; сравнение уровня полипептида в биологическом образце с уровнем полипептида в контрольном образце; контрольный образец представляет собой образец синовиальной жидкости от субъекта, не страдающего от связанного с имплантом риска повторной операции; где повышенный уровень полипептида указывает на связанный с имплантом риск повторной операции; или больший или равный 4 мг/л уровень полипептида указывает на диагноз связанного с имплантом риска повторной операции; биологический образец представляет собой синовиальную жидкость; полипептид, подлежащий выявлению, представляет собой секретированный полипептид, а не внутриклеточный полипептид интактных клеток, присутствующих в образце.

Группа изобретений относится к области химии, а именно к способу неразрушающей идентификации половой характеристики эмбриона Gallus gallus domesticus in ovo и к способу селективной инкубации птенцов видов яйцекладущих со специфической половой характеристикой.

Настоящее изобретение относится к области иммунологии. Предложен способ улучшения фармакокинетики антитела, включающий замену по меньшей мере одной аминокислоты вариабельной области указанного антитела на гистидин.
Изобретение относится к медицине, а именно к неврологии и офтальмологии, и может быть использовано для прогнозирования развития FUS-ассоциированных нейродегенеративных нарушений у трансгенных мышей.
Изобретение относится к медицине, а именно к неврологии и офтальмологии, и может быть использовано для прогнозирования развития FUS-ассоциированных нейродегенеративных нарушений у трансгенных мышей.

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использовано для прогнозирования степени риска развития гематогенных метастазов при инвазивной карциноме неспецифического типа молочной железы на основе оценки экспрессии белка LIMCH1.

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использовано для прогнозирования степени риска развития гематогенных метастазов при инвазивной карциноме неспецифического типа молочной железы на основе оценки экспрессии белка LIMCH1.
Изобретение относится к медицине, а именно к неонатологии, и может быть использовано для ранней диагностики неонатального сепсиса. Проводят забор биологического материала у новорожденного.
Изобретение относится к медицине, а именно к неонатологии, и может быть использовано для ранней диагностики неонатального сепсиса. Проводят забор биологического материала у новорожденного.
Изобретение относится к медицине, а именно к неонатологии и педиатрии, и может быть использовано для прогнозирования тяжелого течения неонатального дистрибутивного шока у глубоконедоношенных детей с массой тела при рождении менее 1500 г.

Предложено устройство для анализа жидкости, содержащее устройство для обработки жидкости, подлежащей анализу, в частности, подходящее для подключения к анализатору содержания по меньшей мере одного загрязняющего вещества в криогенной жидкости, содержащее цилиндрическую камеру (Е), имеющую резервуар, кольцевую камеру (V), расположенную вокруг цилиндрической камеры.

Изобретение относится к области медицины. Предложен способ прогнозирования эффективной мобилизации аутологичных гемопоэтических стволовых клеток в периферическую кровь пациентов с множественной миеломой. Определяют уровень секреции мезенхимальными клетками стромы костного мозга интерлейкина-12 и фактора некроза опухоли α. При продукции интерлейкина-12 более 0,136 пгмлсут и фактора некроза опухолей α более 0,165 пгмлсут у пациентов с множественной миеломой прогнозируют эффективную мобилизацию аутологичных ГСК в периферическую кровь. Изобретение обеспечивает повышение эффективности процесса заготовки ГСК за счет использования экспериментально установленных контрольных количественных параметров - содержания ряда цитокинов, продуцируемых МСК костного мозга. 2 табл., 1 пр.

Наверх