Комбинированные терапии для лечения рака
Группа изобретений относится к медицине и касается способа лечения миелодиспластического синдрома (MDS), включающего введение терапевтически эффективного количества комбинированной терапии, содержащей децитабин или его фармацевтически приемлемую соль и альвоцидиб или его фармацевтически приемлемую соль нуждающемуся в этом человеку, где децитабин или его фармацевтически приемлемую соль вводят человеку перед альвоцидибом или его фармацевтически приемлемой соли. Группа изобретений также касается способа лечения MDS, включающего введение терапевтически эффективного количества комбинированной терапии, содержащей азацитидин или его фармацевтически приемлемую соль и альвоцидиб или его фармацевтически приемлемую соль человеку; набора для лечения MDS, содержащего комбинацию, включающую альвоцидиб или его фармацевтически приемлемую соль и децитабин или азацитидин или их фармацевтически приемлемые соли; и инструкции. Группа изобретений обеспечивает синергетический эффект при лечении MDS. 5 н. и 6 з.п. ф-лы, 5 ил., 4 пр.
Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение в целом относится к способам лечения рака путем введения ингибитора циклин-зависимой киназы и ингибитора метилтрансферазы ДНК.
ОПИСАНИЕ ПРЕДШЕСТВУЮЩЕГО УРОВНЯ ТЕХНИКИ
Миелодиспластический синдром (MDS) представляет собой группу разнообразных заболеваний костного мозга, характеризующуюся неспособностью производить нормальное количество клеток крови. Часто (примерно в 30%) MDS прогрессирует до острого миелоидного лейкоза (AML), который в значительной степени остается неизлечимым состоянием с относительно невысокой выживаемостью. Одним из вариантов лечения MDS являются гипометилирующие агенты азацитидин и дезоксиазацитидин (децитабин), действующие по двум основным механизмам: 1)ингибирование ДНК-метилтрансфераз, что приводит к активации основных генов-супрессоров опухолей; и 2)непосредственное повреждение ДНК после встраивания в цепи ДНК при репликации. Второй из этих механизмов активирует запрограммированный путь самоуничтожения клеток (апоптоз), и этот путь, как было показано, каким-то образом зависит от степени экспрессии основных регуляторных белков апоптоза, включая MCL-1, антиапоптотический член семейства BH3 апоптотических регулирующих белков.
Циклин-зависимые киназы (CDK) являются важными регуляторами, контролирующими синхронизацию и координацию клеточного цикла. CDK образуют обратимые комплексы c их облигатными партнерами-циклинами для контроля перехода через ключевые точки клеточного цикла. Также, в дополнение к регуляции прогрессирования клеточного цикла, некоторые члены семейства CDK играют активную роль в транскрипции, например, CDK7 и CDK9. В частности, CDK9 непосредственно фосфорилирует РНК-полимеразу II и способствует продуктивной транскрипции. Было показано, что агенты, ингибирующие CDK9, ингибируют экспрессию MCL-1, важного белка апоптотического пути, активируемого ингибиторами метилтрансферазы ДНК. Одним из таких ингибиторов CDK является альвоцидиб, являющийся мощным селективным ингибитором CDK (например, CDK-9) и обладающий противоопухолевой активностью в различных линиях опухолевых клеток. Также известно, что альвоцидиб быстро снижает уровень экспрессии MCL-1.
На сегодняшний день нет сообщений о комбинациях ингибиторов метилтрансферазы ДНК и ингибиторов циклин-зависимой киназы в лечении рака, такого как MDS и/или AML. Несмотря на достигнутый прогресс, в данной области техники существует потребность в улучшении комбинированной терапии для лечения различных видов рака. Настоящее изобретение удовлетворяет эту потребность и обеспечивает соответствующие преимущества.
Сущность изобретения
В кратком изложении, варианты осуществления настоящего изобретения предоставляют способы лечения рака, включающие введение двух разных терапевтических агентов. В одном варианте осуществления раскрывается способ лечения рака у млекопитающего, в этом нуждающегося, способ, включающий введение млекопитающему эффективного количества следующих терапевтических агентов:
i. ингибитор циклин-зависимой киназы и
ii. ингибитор метилтрансферазы ДНК.
Наборы, содержащие ингибитор циклин-зависимой киназы, ингибитор метилтрансферазы ДНК и инструкции для введения ингибитора циклин-зависимой киназы и ингибитора метилтрансферазы ДНК млекопитающему, нуждающемуся в лечении рака, как и фармацевтические композиции, применимые для раскрытых способов, также предоставляются.
Эти и другие аспекты изобретения станут очевидными при обращении к последующему подробному описанию. С этой целью в данном описании представлены различные ссылки, более подробно описывающие некоторую исходную информацию, процедуры, соединения и/или композиции и, таким образом, каждый компонент включается в данное описание посредством ссылки во всей своей полноте.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ
На чертежах идентичные ссылочные позиции определяют аналогичные элементы. Размеры и относительные положения элементов на чертежах необязательно приводятся в масштабе, а некоторые из этих элементов произвольно увеличены и позиционированы для улучшения ясности чертежа. Кроме того, конкретные формы элементов не предназначены для передачи какой-либо информации относительно фактической формы конкретных элементов и были выбраны исключительно для удобства распознавания на чертежах.
На Фиг.1А представлены относительные уровни экспрессии MCL-1 по сравнению с β-актином в клетках MV4-11 в диапазоне доз альвоцидиба.
Фиг.1B представляет собой гель, показывающий относительные уровни экспрессии MCL-1 по сравнению с β-актином в клетках MV4-11 в диапазоне нескольких временных интервалов.
Фиг.2 представляет собой график, демонстрирующий синергический эффект комбинации альвоцидиба и азацитидина в ингибировании роста клеток MV4-11.
Фиг.3 показывает активность каспазы 3/7 по отношению к концентрации комбинаций альвоцидиба с азацитидином по логарифмической шкале при индуцировании апоптоза в клетках MV4-11.
На Фиг.4A-D представлены гистограммы, содержащие данные обработки клеток MV4-11 альвоцидибом или азацитидином по отдельности или в комбинации при различных концентрациях азацитидина.
На Фиг.5А-B представлены данные комбинированной обработки клеток MV4-11 альвоцидибом и децитабином.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ
В нижеследующем описании определенные конкретные детали изложены с целью обеспечения полного понимания различных вариантов осуществления изобретения. Однако специалист в данном уровне техники поймет, что изобретение может быть осуществлено на практике без этих подробностей.
Если контекст не требует иного, в настоящем описании и формуле изобретения слово «содержать» и его варианты, такие как «содержит» и «содержащий» должны толковаться в общем, инклюзивном смысле, то есть «включая, но не ограничиваясь».
Ссылка на протяжении всего описания к «одному варианту осуществления» или «варианту осуществления» означает, что конкретный признак, структура или характеристика, описанные в связи с вариантом осуществления, включены, по меньшей мере, в один вариант осуществления настоящего изобретения. Таким образом, фразы «в одном варианте осуществления» или «в варианте осуществления» находящиеся в разных местах полного описания необязательно относятся к одному и тому же варианту осуществления. Кроме того, конкретные признаки или характеристики могут быть объединены любым подходящим способом в одном или нескольких вариантах осуществления.
«Ингибитор метилтрансферазы ДНК» представляет собой агент, имеющий двойную активность: как в качестве ингибитора метилтрансферазы ДНК (то есть гипометилирующего агента) так и в качестве ДНК-повреждающего агента. Типичные ингибиторы метилтрансферазы ДНК включаются в ДНК (например, в ДНК раковой клетки), тем самым ингибируя ДНК-метилтрансферазу и приводя к повреждению ДНК и апоптозу. Типичные ингибиторы метилтрансферазы ДНК включают нуклеозидные аналоги, такие как азануклеозиды.
«Циклин-зависимый ингибитор киназы» представляет собой агент, ингибирующий активность циклин-зависимых киназ (CDK), включая CDK1, CDK2, CDK3, CDK4, CDK5, CDK6, CDK7, CDK8, CDK9 и CDK11. Типичные ингибиторы CDK ингибируют экспрессию MCL-1. Типичные ингибиторы CDK включают альвоцидиб, динациклиб, оломуцин, росковитин, пурвалонол, пауллоны, палбоциклиб, тио/оксофлавопиридолы, оксиндолы, аминотиазолы, бензокарбазолы, пиримидины и селициклиб, но не ограничиваются данным списком.
«Альвоцидиб» (также известный как «Флавопиридол») представляет собой синтетический флавон, имеющий следующую структуру:
«Азануклеозиды» представляют собой аналоги природных нуклеозидов, в которых по меньшей мере один атом углерода замещен атомом азота. Типичные азануклеозиды включают азацитидин и децитабин, имеющие следующие структуры, соответственно:
«Млекопитающее» включает как человека, так и домашних животных, таких как лабораторные животные и животные-компаньоны (например, кошки, собаки, свиньи, крупный рогатый скот, овцы, козы, лошади, кролики), а также неодомашненных, диких животных, таких как обитающих в дикой природе и тому подобных.
«Фармацевтическая композиция» относится к составу, состоящего из соединения соответственно изобретению и средства, общеупотребительного в данной области для введения биологически активного соединения млекопитающим, например человеку. Такое средство включает все фармацевтически приемлемые носители, разбавители или эксципиенты, для этого предназначенные.
«Эффективное количество» или «терапевтически эффективное количество» соответствует такому количеству соединения по изобретению, которое, при введении млекопитающему, предпочтительно человеку, является достаточным для осуществления лечения рака у млекопитающего, предпочтительно человека, как определено ниже. Количество соединения по изобретению, являющееся «терапевтически эффективным количеством», будет варьироваться в зависимости от соединения, состояния и его тяжести, способа введения и возраста млекопитающего, подлежащего лечению, но может быть определено обычным путем специалистом в данной области техники, полагаясь на его собственный опыт и в соответствии с данным раскрытием.
«Обработка» или «лечение», как используется в данном описании, охватывает лечение заболевания или состояния, представляющего интерес, у млекопитающего, предпочтительно человека, имеющего рак, заболевание, или состояние, представляющее интерес, и включает в себя:
(i) предотвращение возникновения рака, заболевания или состояния у млекопитающего, особенно если такое млекопитающее предрасположено к этому состоянию, хотя его наличие пока не было диагностировано;
(ii) ингибирование рака, заболевания или состояния, т.е. прекращение его развития;
(iii) облегчение рака, заболевания или состояния, т.е. обеспечение регресса болезни или состояния; или
(vi) облегчение симптомов, вызванных раком, заболеванием или состоянием, то есть облегчение боли без устранения основного заболевания или состояния.
Как используется в данном описании, термины «заболевание» и «состояние» могут быть использованы как взаимозаменяемые, так и отличаться тем, что конкретное заболевание или состояние может не иметь известного возбудителя (при неразработанной этиологии), и, вследствие этого, пока еще не признаваться заболеванием как таковым, а нежелательным состоянием или синдромом, для которого врачами идентифицирован более или менее специфический набор симптомов.
I.Способы
В некоторых вариантах осуществления способы применимы для лечения раковых клеток и/или для профилактики, лечения или ослабления рака и/или их симптомов у млекопитающего, предпочтительно человека. Соответственно, в одном варианте осуществления раскрытие представляет способ лечения рака у млекопитающего, в этом нуждающегося, способ, включающий введение млекопитающему терапевтически эффективного количества следующих терапевтических агентов:
(i) ингибитора циклин-зависимой киназы и
(ii) ингибитора метилтрансферазы ДНК.
В некоторых вариантах осуществления ингибитор циклин-зависимой киназы ингибирует белки циклин-зависимых киназ (Cdk), такие как Cdk4, Cdk6, Cdk7, Cdk8, Cdk9, Cdk10 и/или Cdk11. В некоторых вариантах осуществления ингибитор циклин-зависимой киназы ингибирует Cdk7, Cdk9 или обе. В других вариантах осуществления ингибитор циклин-зависимой киназы ингибирует экспрессию MCL-1. В некоторых вариантах осуществления ингибитор циклин-зависимой киназы представляет собой альвоцидиб или динациклиб или их фармацевтически приемлемые соли. Например, в некоторых более конкретных вариантах осуществления ингибитор циклин-зависимой киназы является альвоцидибом или его фармацевтически приемлемой солью. В некоторых других конкретных вариантах осуществления ингибитор циклин-зависимой киназы представляет собой динациклиб или его фармацевтически приемлемую соль.
В некоторых вариантах осуществления метилтрансфераза ДНК способна включаться в РНК и/или ДНК. В других вариантах осуществления ингибитор метилтрансферазы ДНК активирует апоптоз вследствие повреждения ДНК. В других отличных вариантах осуществления ингибитор метилтрансферазы ДНК представляет собой нуклеозидный аналог. В других вариантах осуществления ингибитор метилтрансферазы ДНК представляет собой азануклеозид, такой как азацитидин или децитабин, или их фармацевтически приемлемые соли. В некоторых более конкретных вариантах осуществления ингибитор метилтрансферазы ДНК представляет собой азацитидин или его фармацевтически приемлемую соль. В некоторых отличных вариантах осуществления ингибитор метилтрансферазы ДНК представляет собой децитабин или его фармацевтически приемлемую соль.
В дополнительных вариантах осуществления вышеизложенного, ингибитор циклин-зависимой киназы представляет собой альвоцидиб или его фармацевтически приемлемую соль, а ингибитор метилтрансферазы ДНК представляет собой азацитидин или его фармацевтически приемлемую соль. В других различных вариантах осуществления ингибитор циклин-зависимой киназы представляет собой альвоцидиб или его фармацевтически приемлемую соль, а ингибитор метилтрансферазы ДНК представляет собой децитабин или его фармацевтически приемлемую соль.
Циклин-зависимый ингибитор киназы и ингибитор метилтрансферазы ДНК могут быть введены одновременно или последовательно. Например, в некоторых вариантах осуществления вводится ингибитор циклин-зависимой киназы и через достаточный период времени вводится ингибитор метилтрансферазы ДНК. В некоторых других вариантах осуществления вводится ингибитор метилтрансферазы ДНК, и после достаточного периода времени вводится ингибитор циклин-зависимой киназы. Специалист в данной области техники может разработать соответствующий режим дозировки, на основе общепринятых методик и знаний.
В некоторых вариантах осуществления ингибитор циклин-зависимой киназы вводят млекопитающему до введения ингибитора метилтрансферазы ДНК. Например, в некоторых вариантах осуществления ингибитор метилтрансферазы ДНК вводят в течение примерно от 24 до 48 часов после введения ингибитора циклин-зависимой киназы. В некоторых других вариантах осуществления ингибитор метилтрансферазы ДНК вводят млекопитающему до введения ингибитора циклин-зависимой киназы.
Широкое разнообразие раковых образований, включая твердые опухоли и лейкемии (например, острый миелоидный лейкоз), поддается лечению способами, раскрытыми в данном описании. Типы рака, которые можно лечить в различных вариантах осуществления, включают: аденокарциному груди, простаты и толстой кишки; все формы бронхогенной карциномы легкого; миелоидный лейкоз, меланому; гепатому; нейробластому; папиллому; апудому; хористому; бранхиогенную опухоль; злокачественный карциноидный синдром; карциноидную болезнь сердца; и карциному (например, карциному Уокера, базальноклеточную, базосквамозный (метатипический) рак, карциному Брауна-Пирс, протоковую, опухоль Эрлиха (асцитную карциному Эрлиха), карциному КРЕБС-2, карциному из клеток Меркеля, муциноз, немелкоклеточный рак легкого, мелкоклеточный рак легкого, папиллярную, скиррозный рак, бронхоальвеолярную опухоль, бронхогенную карциному (рак легкого), карциному плоскоклеточную, переходно-клеточную (рак мочевого пузыря)), но не ограничиваются данным списком. К дополнительным видам рака, которые можно лечить, относятся: гистиоцитарные расстройства; лейкемия; гистиоцитоз злокачественный; Болезнь Ходжкина; иммунопролиферативное заболевание тонкой кишки; неходжкинская лимфома; плазмоцитома; ретикулоэндотелиоз; меланома; хондробластома; хондрома; хондросаркома; фиброма; фибросаркома; опухоли гигантских клеток; гистиоцитома; липома; липосаркома; мезотелиома; миксома; миксосаркома; остеома; остеосаркома; хордома; краниофарингиома; дисгерминома; гамартома; мезенхимома; мезонефроидная аденокарцинома; миосаркома; адамантинома; цементома; одонтома; тератома; тимома; трофобластическая опухоль. Далее, следующие виды рака также рассматриваются как поддающиеся лечению: аденома; холангиома; холестеатома; цилиндрома; цистаденокарцинома; цистоаденома; гранулезноклеточная опухоль; гинандробластома; гепатома; гидраденома; опухоль островковых клеток; опухоль из клеток Лейдига; папиллома; опухоль клеток Сертоли; Тека-клеточная опухоль; леймиома; леймиосаркома; миобластома; миома; миосаркома; рабдомиома; рабдомиосаркома; эпендимома; ганглионеврома; глиома; медуллобластома; менингиома; неврилеммома; нейробластома; нейроэпителиома; нейрофиброма; неврома; параганглиома; нехромаффинная параганглиома. Виды рака, которые можно лечить, также включают ангиокератому; ангиолимфоидную гиперплязию с эозинофилией; ангиому склерозирующую; ангиоматоз; гломангиому; гемангиоэндотелиому; гемангиому; гемангиоперицитому; гемангиосаркому; лимфангиому; лимфангиомиому; лимфангиосаркому; пинеалому; карциносаркому; хондросаркому; листовидную цистосаркому; фибросаркому; гемангиосаркому; леймиосаркому; лейкосаркому; липосаркому; лимфангиосаркому; миосаркому; миксосаркому; карциному яичника; рабдомиосаркому; саркому; новообразования; нейрофиброматоз; и дисплазию шейки матки, но не ограничиваются данным списком.
В некоторых более конкретных вариантах осуществления рак представляет собой гематологический рак. Например, в некоторых вариантах гематологический рак (лейкоз) является одним из списка: острая миелогенная лейкемия (AML), множественная миелома, фолликулярная лимфома, острая лимфобластная лейкемия (ALL), хроническая лимфоцитарная лейкемия (CLL) и неходжкинская лимфома. В других вариантах гематологический рак является острой миелогенной лейкемией (ALL). В некоторых других вариантах осуществления гематологический рак представляет собой миелодиспластический синдром (MDS).
II. Наборы и фармацевтические композиции.
Другие варианты осуществления предусмотрены для наборов, применимых для реализации раскрытых способов. Например, в некоторых вариантах осуществления предоставлен набор, содержащий ингибитор циклин-зависимой киназы, ингибитор метилтрансферазы ДНК и инструкции для введения ингибитора циклин-зависимой киназы и ингибитора метилтрансферазы ДНК млекопитающему, нуждающемуся в лечении рака. В некоторых вариантах осуществления ингибитор циклин-зависимой киназы, присутствующий в наборе, является таким, как определено в любом из вышеперечисленных вариантов осуществления. В других вариантах осуществления ингибитор метилтрансферазы ДНК, присутствующий в наборе, является таким, как определено в любом из вышеприведенных вариантов осуществления. В других вариантах осуществления рак, для обработки которого могут быть применены наборы, является таким, как определено в любом из вышеприведенных вариантов осуществления.
В других вариантах осуществления предоставлены фармацевтические композиции. Например, в некоторых вариантах осуществления фармацевтическая композиция содержит фармацевтически приемлемый носитель или эксципиент и следующие терапевтические агенты:
(i) ингибитор циклин-зависимой киназы и
(ii) ингибитор метилтрансферазы ДНК.
Терапевтические агенты, присутствующие в фармацевтических композициях, могут быть любыми из описанных в данном описании или известных в данной области техники. В некоторых вариантах осуществления композиция содержит альвоцидиб. В некоторых других вариантах осуществления композиция содержит азацитидин. В некоторых вариантах осуществления композиция содержит децитабин. В некоторых других вариантах осуществления фармацевтическая композиция содержит фармацевтически приемлемый носитель или эксципиент, альвоцидиб и азацитидин. В различных вариантах осуществления фармацевтическая композиция содержит фармацевтически приемлемый носитель или эксципиент, альвоцидиб и децитабин.
В некоторых вариантах осуществления фармацевтическая композиция составлена для перорального введения. В других вариантах осуществления фармацевтическая композиция составлена для инъекций.
Подходящие способы введения включают: пероральный, внутривенный, ректальный, аэрозольный, парентеральный, офтальмологический, легочный, трансмукозный, трансдермальный, вагинальный, ушной, назальный и местное применение, но не ограничиваются данным списком. Кроме того, и только в качестве возможного примера, парентеральное введение включает внутримышечные, подкожные, внутривенные, интрамедуллярные инъекции, а также интратекальные, прямые внутрижелудочковые, внутрибрюшинные, эндо(интра)лимфатические и интраназальные инъекции.
В некоторых вариантах осуществления одно или несколько соединений, как описано в данном описании (т.е. ингибитор циклин-зависимой киназы и/или ингибитор метилтрансферазы ДНК, называемые в данном описании «соединениями») вводят локальным, а не системным способом, например, путем инъекции соединения непосредственно в орган, часто в качестве депо-инъекции или препарата с пролонгированным высвобождением. В конкретных вариантах осуществления композиции длительного действия вводят путем имплантации (например, подкожно или внутримышечно) или путем внутримышечной инъекции. Далее, в других вариантах осуществления одно или несколько соединений поставляются в целевой системе доставки лекарственного средства, например, в липосоме, покрытой органоспецифическим антителами. В таких вариантах осуществления липосомы нацелены на определенный орган и избирательно захватываются органом. В других вариантах осуществления одно или несколько соединений предоставляются в форме композиции с быстрым высвобождением, в форме композиции с пролонгированным высвобождением, или в форме препарата моментального высвобождения. В других вариантах осуществления одно или несколько соединений применяют местно.
Соединения эффективны в широком диапазоне доз. Например, для лечения взрослых людей дозировки от 0,01 до 1000 мг, от 0,5 до 100 мг, от 1 до 50 мг в день и от 5 до 40 мг в день являются примерами дозировки, используемой в некоторых вариантах осуществления. Примерная дозировка составляет от 10 до 30 мг в день. Точная дозировка будет зависеть от того, каким образом осуществляется введение, от формы, в которой вводится соединение, от субъекта, подлежащему лечению, от массы тела подлежащего лечению субъекту и от предпочтения и опыта лечащего врача.
В некоторых вариантах осуществления одно или несколько соединений вводят в однократной дозе. Как правило, такое введение осуществляется путем инъекции, например внутривенной инъекции, для быстрого введения агента. Тем не менее, другие способы введения используются как подходящие. Однократная доза соединений может также применяться для лечения острых состояний.
В некоторых вариантах осуществления одно или несколько соединений вводят многократно. В некоторых вариантах дозирование составляет один, два, три, четыре, пять, шесть или более шести раз в день. В других вариантах осуществления дозирование составляет один раз в месяц, один раз в две недели, один раз в неделю или один раз через день. В другом варианте осуществления соединения вводят вместе примерно от одного до 6 раз в день. В другом варианте введение соединений продолжается менее семи дней. В еще одном варианте осуществления введение продолжается более чем 6, 10, 14, 28 дней, два месяца, шесть месяцев или один год. В некоторых случаях непрерывное дозирование достигается и поддерживается до тех пор, пока это необходимо.
Введение соединений может продолжаться до тех пор, пока это необходимо. В некоторых вариантах осуществления соединения вводятся на протяжение более чем 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 14 или 28 дней. В некоторых вариантах осуществления соединения вводятся на протяжении менее чем 28, 14, 7, 6, 5, 4, 3, 2 или 1 дней. В некоторых вариантах осуществления соединения вводят длительно на постоянной основе, например, для лечения хронических эффектов.
В некоторых вариантах осуществления соединения вводят дозированно. Из-за интерсубъектной изменчивости в фармакокинетике соединений, индивидуальный режим дозирования предусмотрен в определенных вариантах осуществления. Дозирование соединений можно определить путем рутинного эксперимента при постоянном наблюдении эффекта и/или оно может быть определено обычным специалистом в данной области техники.
В некоторых вариантах осуществления соединения введены в состав фармацевтических композиций. В конкретных вариантах осуществления фармацевтические композиции составляются обычным способом при применении одного или нескольких физиологически приемлемых носителей, содержащих эксципиенты и вспомогательные вещества, облегчающие введение активных соединений в препараты для фармацевтического применения. Составление правильной композиции зависит от выбранной системы доставки лекарства. Фармацевтически приемлемые методы, носители и эксципиенты, применимые как подходящие для составления фармацевтических композиций, описаны в данной работе: Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Nineteenth Ed (Easton, Pa.: Mack Publishing Company, 1995); Hoover, John E., Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, Pennsylvania 1975; Liberman, H.A. and Lachman, L., Eds., Pharmaceutical Dosage Forms, Marcel Decker, New York, N.Y., 1980; and Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, Seventh Ed. (Lippincott Williams & Wilkins1999).
Фармацевтическая композиция, как используется в данном описании, относится к смеси одного или нескольких соединений с другими химическими компонентами, такими как носители, стабилизаторы, разбавители, диспергирующие агенты, суспендирующие агенты, загустители и/или эксципиенты. В некоторых вариантах осуществления фармацевтическая композиция облегчает введение соединений в организм. В некоторых вариантах осуществления, при использовании способов лечения или применения, описанных в данном описании, терапевтически эффективные количества ингибиторов циклинзависимой киназы и/или метилтрансферазы, представленные в данном описании, вводят в фармацевтической композиции млекопитающему, имеющему рак, заболевание, расстройство или состояние здоровья, требующее лечения. В конкретных вариантах осуществления млекопитающее представлено человеком. В некоторых вариантах осуществления терапевтически эффективные количества варьируются в зависимости от тяжести рака или заболевания, возраста и относительного здоровья субъекта, эффективности используемого соединения и других факторов. Соединения используются в комбинации друг с другом или как компоненты смесей.
В одном варианте осуществления ингибиторы циклин-зависимой киназы и/или компоненты ингибитора метилтрансферазы ДНК составлены в водном растворе. В конкретных вариантах осуществления к качестве водного раствора выбирают, только в качестве возможного примера, физиологически совместимый буфер, такой как раствор Хэнкса, раствор Рингера или буферный физиологический раствор. В других вариантах осуществления ингибиторы циклин-зависимой киназы и/или ингибиторы метилтрансферазы ДНК представлены в составе для трансмукозного введения (через слизистую оболочку). В конкретных вариантах осуществления композиции для трансмукозного введения включают в себя пенетранты, обеспечивающие проницаемость барьера. В других вариантах осуществления, где соединения включены в состав для других парентеральных инъекций, подходящие составы включают водные или неводные растворы. В конкретных вариантах осуществления такие растворы включают в себя физиологически совместимые буферы и/или эксципиенты.
В другом варианте осуществления соединения включены в состав для перорального введения. Композиции составлены путем объединения соединений с, например, фармацевтически приемлемыми носителями или эксципиентами. В различных вариантах осуществления композиции составлены в виде пероральных лекарственных форм, которые, только для возможного примера включают: таблетки, порошки, пилюли, драже, капсулы, жидкости, гели, сиропы, эликсиры, дисперсии, суспензии, и т.п.
В некоторых вариантах осуществления, фармацевтические препараты для перорального применения получают путем смешивания одного или нескольких твердых эксципиентов с одним или несколькими соединениями, при необязательном измельчении полученной смеси и обработки смеси гранул, после добавления подходящих вспомогательных веществ для получения таблеток или корпуса драже, по желанию. Подходящими эксципиентами являются, в частности, наполнители, такие как сахара, включая лактозу, сахарозу, маннит или сорбит; целлюлозные препараты, такие как, например, кукурузный крахмал, пшеничный крахмал, рисовый крахмал, картофельный крахмал, желатин, трагакантовая камедь, метилцеллюлоза, микрокристаллическая целлюлоза, гидроксипропилметилцеллюлоза, натрий карбоксиметилцеллюлоза; или другие, такие как: поливинилпирролидон (ПВП или повидон) или фосфат кальция. В конкретных вариантах осуществления необязательно добавляют дезинтегрирующие агенты (разрыхлители). Дезинтегрирующие агенты (разрыхлители) включают, только в качестве возможного примера: поперечно-сшитую кроскармеллозу натрия, поливинилпирролидон, агар или альгиновую кислоту или их соли, такие как альгинат натрия.
В одном варианте осуществления лекарственные формы, такие как корпуса драже и таблетки, снабжены одним или более подходящим покрытием. В конкретных вариантах осуществления для покрытия лекарственной формы используются концентрированные растворы сахара. Сахарные растворы необязательно содержат дополнительные компоненты, такие как, только в качестве возможного примера, гуммиарабик, тальк, поливинилпирролидон, гели на основе карбопола, полиэтиленгликоль и/или диоксид титана, растворы для глазировки и подходящие органические растворители или смеси растворителей. Красители и/или пигменты также необязательно добавляются в покрытия для идентификации. Кроме того, красители и/или пигменты необязательно используются для характеристики различных комбинаций дозы соединений.
В некоторых вариантах осуществления терапевтически эффективные количества соединений составлены в виде других пероральных лекарственных форм. Пероральные лекарственные формы включают твердые капсулы из двух частей, изготовленные из желатина, а также мягкие герметичные капсулы из желатина и пластификатора, таких как глицерин или сорбит. В конкретных вариантах осуществления твердые капсулы из двух частей содержат активные ингредиенты в смеси с одним или несколькими наполнителями. Наполнители включают, только в качестве возможного примера, лактозу, связующие, такие как крахмалы, и/или смазывающие вещества, такие как тальк или стеарат магния и, необязательно, стабилизаторы. В других вариантах осуществления мягкие капсулы содержат одно или несколько активных соединений, растворенных или суспендированных в подходящей жидкости. Подходящие жидкости включают, только в качестве возможного примера, одно или несколько жирных масел, жидкий парафин или жидкий полиэтиленгликоль. Дополнительно, необязательно добавляются стабилизаторы.
В других вариантах осуществления терапевтически эффективные количества соединений включены в состав для буккального или сублингвального введения. Препараты, подходящие для буккального или сублингвального введения, включают, только в качестве возможного примера, таблетки, пастилки или гели. В других вариантах осуществления соединения включены в состав для парентеральной инъекции, включая составы, подходящие для болюсной инъекции или непрерывной инфузии. В конкретных вариантах осуществления составы для инъекций представлены в форме единичной дозы (например, в ампулах) или в контейнерах с несколькими дозами. Консерванты, необязательно, добавляются к препаратам для инъекций. В других вариантах осуществления фармацевтические композиции составлены в форме, подходящей для парентеральной инъекции, в виде стерильных суспензий, растворов или эмульсий в масляных или водных носителях. Парентеральные инъекционные препараты необязательно содержат такие средства, как суспендирующие, стабилизирующие и/или диспергирующие агенты. В конкретных вариантах осуществления фармацевтические составы для парентерального введения включают водные растворы активных соединений в водорастворимой форме. В дополнительных вариантах осуществления суспензии соединений приготовляют в виде приемлемых масляных суспензий для инъекций. Подходящие липофильные растворители или носители для использования в фармацевтических композициях, описанных в данном описании, включают, только в качестве возможного примера, жирные масла, такие как кунжутное масло или синтетические сложные эфиры жирных кислот, такие как этилолеат или триглицериды, или липосомы. В некоторых конкретных вариантах осуществления водные суспензии для инъекций содержат вещества, увеличивающие вязкость суспензии, такие как натрий карбоксиметилцеллюлоза, сорбит или декстран. Необязательно, суспензия содержит подходящие стабилизаторы или агенты, увеличивающие растворимость соединений, для обеспечения получения высококонцентрированных растворов. Альтернативно, в других вариантах осуществления, активный ингредиент находится в форме порошка для смешивания с подходящим средством доставки лекарства, например стерильной беспирогенной воды, перед применением.
В других вариантах осуществления терапевтически эффективные количества соединений применяются местно. В некоторых вариантах осуществления соединения составлены в виде разнообразных композиций местного применения, таких как растворы, суспензии, лосьоны, гели, пасты, медицинские (лекарственные) карандаши, бальзамы, кремы или мази. Такие фармацевтические композиции необязательно содержат солюбилизаторы, стабилизаторы, агенты повышающие тоничность, буферы и консерванты.
В других вариантах осуществления терапевтически эффективное количество соединений представлено в составе для трансдермального введения. В конкретных вариантах осуществления трансдермальные препараты вводятся с помощью трансдермальных устройств системы доставки и трансдермальных пластырей и могут быть липофильными эмульсиями или забуференными водными растворами, растворенными и/или диспергированными в полимере или адгезивном компоненте. В различных вариантах осуществления такие пластыри сконструированы для непрерывного, пульсирующего, или «по требованию» высвобождения фармацевтических агентов. В дополнительных вариантах осуществления трансдермальная доставка терапевтически эффективных количеств соединений осуществляется с помощью ионофоретических пластырей и тому подобных. В определенных вариантах осуществления трансдермальные пластыри обеспечивают контролируемую доставку терапевтически эффективных количеств соединений, описанных в данном описании. В конкретных вариантах осуществления скорость абсорбции замедлена при использовании регулирующих скорость мембран или при заключении соединения в полимерную матрицу или гель. В альтернативных вариантах осуществления для увеличения поглощения используются усилители абсорбции. Усилители абсорбции или носители включают абсорбируемые фармацевтически приемлемые растворители, способствующие проникновению через кожу. Например, в одном варианте осуществления трансдермальные устройства представлены в форме повязки, содержащей опорный элемент, резервуар, содержащий соединение, необязательно с носителями, и, необязательно, регулирующую скорость проникновения мембрану для доставки соединения к коже хозяина с контролируемой и предопределенной скоростью в течение длительного периода времени, а также средства для крепления устройства на коже.
В других вариантах осуществления терапевтически эффективные количества соединений включены в состав для введения путем ингаляции. Различные формы, подходящие для введения путем ингаляции, включают аэрозоли, дисперсии или порошки, но не ограничиваются данным списком. Фармацевтические композиции терапевтически эффективных количеств соединений удобно доставляются в форме аэрозольного распыления из упаковок под давлением или небулайзера при применении подходящего пропеллента (например, дихлордифторметана, трихлорфторметана, дихлортетрафторэтана, диоксида углерода или другого подходящего газа). В конкретных вариантах осуществления единичная доза в форме сжиженного аэрозоля обеспечивается при применении клапанно-распылительной системы для доставки отмеренного количества. В некоторых вариантах осуществления капсулы и картриджи, сделанные, только в качестве возможного примера, из желатина для использования в ингаляторе или аппарате для вдувания, содержат порошковую смесь соединения и подходящую порошковую основу, такую как лактоза или крахмал.
В других вариантах осуществления терапевтически эффективные количества соединений введены в состав композиций для ректального введения, таких как клизмы, ректальные гели, ректальные пены, ректальные аэрозоли, суппозитории, ректальные свечи на гелевой основе или удерживающие клизмы, и содержащих обычную суппозиторную основу, такую как масло какао или другие глицериды, а также синтетические полимеры, такие как поливинилпирролидон, ПЭГ и тому подобное. В суппозиторных формах композиций сначала плавится низкоплавкий воск, представляющий собой смесь глицеридов жирных кислот, необязательно в сочетании с маслом какао, но не ограничивающийся данным составом.
В определенных вариантах осуществления фармацевтические композиции составляются любым обычным способом с применением одного или несколько физиологически приемлемых носителей, содержащих эксципиенты и вспомогательные вещества, которые облегчают включение соединений в препараты, применяемые в фармацевтике. Правильное составление зависит от выбранного пути введения. Любые фармацевтически приемлемые способы, носители и эксципиенты необязательно используются в качестве подходящих. Фармацевтические композиции, содержащие ингибиторы, нацеленные, по меньшей мере, на два супер-энхансерных компонента, производятся обычным способом, как, например, только в качестве возможного примера, путем обычного смешивания, растворения, гранулирования, дражирования, растирания в порошок, эмульгирования, инкапсуляции, заключения в оболочку или при помощи процессов компрессии.
Фармацевтические композиции включают по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель или эксципиент и терапевтически эффективные количества одного или нескольких соединений в качестве активного ингредиента. Активный ингредиент находится в форме свободной кислоты или свободной щелочи или в форме фармацевтически приемлемой соли. Кроме того, описанные в данном описании способы и фармацевтические композиции включают применение N-оксидов, кристаллических форм (также известных как полиморфы), а также активных метаболитов этих соединений, имеющих тот же тип активности. Все таутомеры соединений включены в перечень соединений, представленных в данном описании. Кроме того, соединения включают несольватированные, а также сольватированные формы с фармацевтически приемлемыми растворителями, такими как вода, этанол и тому подобное. Сольватированные формы терапевтически эффективных количеств соединений также считаются раскрытыми в данном описании. Кроме того, фармацевтические композиции необязательно включают другие лекарственные или фармацевтические агенты, носители, вспомогательные средства, такие как консервирующие, стабилизирующие, смачивающие или эмульгирующие агенты, вспомогательные вещества, обеспечивающие формирование раствора, соли для регуляции осмотического давления, буферы и/или другие терапевтически значимые вещества.
Методы для приготовления композиций, содержащих терапевтически эффективные количества соединений, включают составление сочетания соединений с одним или несколькими инертными, фармацевтически приемлемыми эксципиентами или носителями для образования твердого, полутвердого или жидкого вещества. Твердые композиции включают порошки, таблетки, диспергируемые гранулы, капсулы, облатки и суппозитории, но не ограничиваются данным списком. Жидкие композиции включают растворы, в которых растворено соединение, эмульсии, содержащие соединение, или раствор, содержащий липосомы, мицеллы или наночастицы, содержащие соединение, раскрытое в данном описании. Полутвердые композиции включают гели, суспензии и кремы, но не ограничиваются данным списком. Формы описанных в данном описании фармацевтических композиций включают жидкие растворы или суспензии, твердые формы, подходящие для растворения или образования суспензии в жидкости перед применением, либо эмульсии. Эти композиции также необязательно содержат незначительные количества нетоксичных вспомогательных веществ, таких как смачивающие или эмульгирующие агенты, буферные агенты для поддержания рН и т.д.
В некоторых вариантах осуществления фармацевтическая композиция, содержащая терапевтически эффективные количества соединений, описанных в данном описании, для иллюстрации представлена в форме жидкости, где агенты присутствуют в растворе, в суспензии или в обоих. В обычном случае, когда композицию вводят в виде раствора или суспензии, первая порция агента присутствует в растворе, а вторая порция агента присутствует в виде частиц, суспендированных в жидкой среде. В некоторых вариантах осуществления жидкая композиция включает гелевую композицию. В других вариантах осуществления жидкая композиция является водной.
В некоторых вариантах осуществления применимые водные суспензии содержат один или несколько полимеров в качестве суспендирующих агентов. Применимые полимеры включают водорастворимые полимеры, такие как целлюлозные полимеры, например, гидроксипропилметилцеллюлозу, и водонерастворимые полимеры, такие как поперечно сшитые карбоксилсодержащие полимеры. Определенные фармацевтические композиции, описанные в данном описании, содержат мукоадгезивный полимер, например, любой из представленных в данном списке: карбоксиметилцеллюлоза, карбомер (полимер акриловой кислоты), полиметилметакрилат, полиакриламид, поликарбофил, сополимер акриловой кислоты и бутилакрилата, альгинат натрия и декстран.
Применимые фармацевтические композиции также необязательно включают солюбилизирующие агенты для облегчения растворения терапевтически эффективных количеств соединений, описанных в данном описании. Термин «солюбилизирующий агент» обычно включает агенты, приводящие к образованию мицеллярного раствора или истинного раствора агента. Определенные приемлемые неионогенные поверхностно-активные вещества, например, полисорбат 80, применимы в качестве солюбилизирующих агентов, также как и офтальмологически приемлемые гликоли, полигликоли, например, полиэтиленгликоль (ПЭГ 400), и гликолевые эфиры.
Кроме того, применимые фармацевтические композиции необязательно включают один или несколько регуляторов рН или буферных агентов, включая кислоты, такие как уксусная, борная, лимонная, молочная, фосфорная и соляная кислоты; основания, такие как гидроксид натрия, фосфат натрия, борат натрия, цитрат натрия, ацетат натрия, лактат натрия и трис(гидроксиметил)аминометан; и буферы, такие как цитрат декстроза, буфер бикарбоната натрия и буферный раствор хлорида аммония. Такие кислоты, основания и буферы включены в объеме, необходимом для поддержания рН композиции в приемлемом диапазоне.
Другие применимые фармацевтические композиции необязательно включают один или несколько консервантов для ингибирования микробной активности. Подходящие консерванты включают ртуть-содержащие вещества, такие как мерфен и тиомерсал; стабилизированный диоксид хлора; и соединения четвертичного аммония, такие как хлорид бензалкония, бромид цетилтриметиламмония и хлорид цетилпиридиния.
Остальные применимые композиции включают одно или несколько поверхностно-активных веществ для повышения физической стабильности или для других целей. Подходящие неионогенные поверхностно-активные вещества включают глицериды полиоксиэтиленовых жирных кислот и растительные масла, например полиоксиэтиленовое (60) гидрированное касторовое масло; и полиоксиэтиленовые алкиловые и алкилфениловые эфиры, например, октоксинол-10 и октоксинол-40.
Остальные применимые композиции включают один или несколько антиоксидантов для повышения химической стабильности там, где это необходимо. Подходящие антиоксиданты включают, только в качестве возможного примера, аскорбиновую кислоту и метабисульфит натрия.
В некоторых вариантах осуществления, однократную дозу композиции в форме водной суспензии упаковывают в одноразовые контейнеры. Альтернативно используются закрываемые мультидозовые контейнеры, и в этом случае типично включение консерванта в композицию.
В альтернативных вариантах осуществления для гидрофобных фармацевтических соединений используются другие системы доставки лекарств. Липосомы и эмульсии являются примерами средств доставки лекарств, или носителей, применимых в данном случае. В некоторых вариантах осуществления также используются органические растворители, такие как N-метилпирролидон. В дополнительных вариантах осуществления описанные в данном описании соединения доставляются путем применения систем с пролонгированным высвобождением, таких как полупроницаемые матрицы твердых гидрофобных полимеров, содержащих терапевтический агент. Для этой цели могут применятся различные материалы, обеспечивающие пролонгированное высвобождение. В некоторых вариантах осуществления капсулы с пролонгированным высвобождением высвобождают соединения в течение от нескольких недель до более чем 100 дней. В зависимости от химической природы и биологической стабильности терапевтического реагента применяются дополнительные стратегии стабилизации белка.
В некоторых вариантах осуществления описанные в данном описании композиции содержат один или несколько антиоксидантов, хелатирующие агенты металлов, тиосодержащие соединения и/или другие обычные стабилизирующие агенты. Примеры таких стабилизирующих агентов включают: (а)глицерин, в примерно от 0,5% до 2% массо-объемной концентрации, (б)метионин, в примерно от 0,1% до 1% массо-объемной концентрации, (в)монотиоглицерин, в примерно от 0,1% до 2% массо-объемной концентрации, (г)ЭДТА, в концентрации примерно от 1 мМ до 10 мМ, (д)аскорбиновую кислоту в примерно от 0,01% до 2% массо-объемной концентрации, (д)полисорбат80 в примерно от 0,003% до 0,02% массо-объемной концентрации, (е)полисорбат20 в примерно от 0,001% до 0,05% массо-объемной концентрации, (ж)аргинин, (з)гепарин, (и)декстрансульфат, (к)циклодекстрины, (л)пентозановый полисульфат и другие гепариноиды, (м)двухвалентные катионы, такие как магний и цинк; или (н)их комбинации, но не ограничиваются данным списком.
В некоторых вариантах осуществления концентрация одного или нескольких соединений, представленных в фармацевтических композициях по настоящему изобретению, составляет менее 100%, 90%, 80%, 70%, 60%, 50% 40%, 30%, 20%, 19%, 18%, 17%, 16%, 15%, 14%, 13%, 12%, 11%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,5%, 0,4%, 0,3%, 0,2%, 0,1%, 0,09%, 0,08%, 0,07%, 0,06%, 0,05%, 0,04%, 0,03%, 0,02%, 0,01%, 0,009%, 0,008%, 0,007%, 0,006%, 0,005%, 0,004%, 0,003%, 0,002%, 0,001%, 0,0009%, 0,0008%, 0,0007%, 0,0006%, 0,0005% 0,0004%, 0,0003%, 0,0002% или 0,0001%. Проценты могут быть весовыми, массо-объемными или объемными.
В некоторых вариантах осуществления концентрация одного или нескольких соединений составляет более 90%, 80%, 70%, 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 19,75%, 19,50%, 19,25% 19%, 18,75%, 18,50%, 18,25% 18%, 17,75%, 17,50%, 17,25% 17%, 16,75% 16.50%, 16.25% 16%, 15.75%, 15.50%, 15.25% 15%, 14.75%, 14.50%, 14.25% 14%, 13.75%, 13.50%, 13.25% 13%, 12.75%, 12.50%, 12.25% 12%, 11,75%, 11,50%, 11,25% 11%, 10,75%, 10,50%, 10,25% 10%, 9,75%, 9,50%, 9,2 5% 9%, 8,75%, 8,50%, 8,25% 8%, 7,75%, 7,50%, 7,25% 7%, 6,75%, 6,50%, 6,25% 6%, 5,75%, 5,50%, 5,25% 5%, 4,75%, 4,50%, 4,25%, 4%, 3,75%, 3,50%, 3,25%, 3%, 2,75%, 2,50%, 2,25%, 2%, 1,75%, 1,50%, 125%, 1%, 0,5% 0,4%, 0,3%, 0,2%, 0,1%, 0,09%, 0,08%, 0,07%, 0,06%, 0,05%, 0,04%, 0,03%, 0,02%, 0,01%, 0,009%, 0,008%, 0,007%, 0,006%, 0,005%, 0,004%, 0,003%, 0,002%, 0,001%, 0,0009%, 0,0008%, 0,0007%, 0,0006%, 0,0005%, 0,0004%, 0,0003%, 0,0002% или 0,0001%. Проценты могут быть весовыми, массо-объемными или объемными.
В некоторых вариантах концентрация одного или нескольких соединений находится в диапазоне от приблизительно 0,0001% до приблизительно 50%, приблизительно от 0,001% до приблизительно 40%, приблизительно от 0,01% до приблизительно 30%, приблизительно от 0,02% до приблизительно 29%, приблизительно от 0,03% до приблизительно 28%, приблизительно от 0,04% до приблизительно 27%, от м 0,05% до м 26%, от приблизительно 0,06% до приблизительно 25%, от приблизительно 0,07% до приблизительно 24%, приблизительно от 0,08% до приблизительно 23%, приблизительно 0,09% до приблизительно 22%, приблизительно от 0,1 до приблизительно 21%, приблизительно от 0,2% до приблизительно 20%, от приблизительно 0,3% до приблизительно 19%, приблизительно от 0,4% до приблизительно 18%, от приблизительно 0,5% до приблизительно 17%, приблизительно от 0,6% 16%, приблизительно от 0,7% до приблизительно 15%, приблизительно от 0,8% до приблизительно 14%, приблизительно от 0,9% до приблизительно 12%, от приблизительно 1% до приблизительно 10%. Проценты могут быть весовыми, массо-объемными или объемными.
В некоторых вариантах осуществления концентрация одного или более одного или нескольких соединений находится в диапазоне от приблизительно 0,001% до приблизительно 10%, приблизительно от 0,01% до приблизительно 5%, приблизительно от 0,02% до приблизительно 4,5%, приблизительно от 0,03% до приблизительно 4%, приблизительно от 0,04% приблизительно до 3,5%, приблизительно от 0,05% до приблизительно 3%, приблизительно от 0,06% до приблизительно 2,5%, от приблизительно 0,07% до приблизительно 2%, приблизительно от 0,08% до приблизительно 1,5%, приблизительно от 0,09% до приблизительно 1%, приблизительно от 0,1% до приближенный 0,9%. Проценты могут быть весовыми, массо-объемными или объемными.
В некоторых вариантах осуществления количество одного или нескольких соединений меньше или равно 10 г, 9,5 г, 9,0 г, 8,5 г, 8,0 г, 7,5 г, 7,0 г, 6,5 г, 6,0 г, 5,5 г, 5,0 г, 4,5 г, 4,0 г, 3,5 г, 3,0 г, 2,5 г, 2,0 г, 1,5 г, 1,0 г, 0,95 г, 0,9 г, 0,85 г, 0,8 г, 0,75 г, 0,7 г, 0,65 г, 0,6 г, 0,55 г, 0,5 г, 0,45 г, 0,4 г, 0,35 г, 0,3 г, 0,25 г, 0,2 г, 0,15 г, 0,1 г, 0,09 г, 0,08 г, 0,07 г, 0,06 г, 0,05 г, 0,04 г, 0,03 г, 0,02 г, 0,01 г, 0,009 г, 0,008 г, 0,007 г, 0,006 г, 0,005 г, 0,004 г, 0,003 г, 0,002 г, 0,001 г, 0,0009 г, 0,0008 г, 0,0007 г, 0,0006 г, 0,0005 г, 0,0004 г, 0,0003 г, 0,0002 г или 0,0001 г.
В некоторых вариантах количество одного или более соединений составляет более 0,0001 г, 0,0002 г, 0,0003 г, 0,0004 г, 0,0005 г, 0,0006 г, 0,0007 г, 0,0008 г, 0,0009 г, 0,001 г, 0,0015 г, 0,002 г, 0,0025 г, 0,003 г, 0,0035 г, 0,004 г, 0,0045 г, 0,005 г, 0,0055 г, 0,006 г, 0,0065 г, 0,007 г, 0,0075 г, 0,008 г, 0,0085 г, 0,009 г, 0,0095 г, 0,01 г, 0,015 г, 0,02 г, 0,025 г, 0,03 г, 0,035 г, 0,04 г, 0,045 г, 0,05 г, 0,055 г, 0,06 г, 0,065 г, 0,07 г, 0,075 г, 0,08 г, 0,085 г, 0,09 г, 0,095 г, 0,1 г, 0,15 г, 0,2 г, 0,25 г, 0,3 г, 0,35 г, 0,4 г, 0,45 г, 0,5 г, 0,55 г, 0,6 г, 0,65 г, 0,7 г, 0,75 г, 0,8 г, 0,85 г, 0,9 г, 0,95 г, 1 г, 1,5 г, 2 г, 2,5, 3 г, 3,5, 4 г, 4,5 г, 5 г, 5,5 г, 6 г, 6,5 г, 7 г, 7,5 г, 8 г, 8,5 г, 9 г, 9,5 г или 10 г.
В некоторых вариантах осуществления количество одного или нескольких соединений находится в диапазоне 0,0001-10 г, 0,0005-9 г, 0,001- 8 г, 0,005-7 г, 0,01-6 г, 0,05-5 г, 0,1-4 г, 0,5-4 г или 1-3 г.
ПРИМЕРЫ ВАРИАНТОВ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ
ПРИМЕР 1.
АЛЬВОЦИДИБ СНИЖАЕТ ЭКСПРЕССИЮ MCL-1 В ЗАВИСИМОСТИ ОТ ДОЗЫ и ВРЕМЕНИ
Линия клеток AML, MV-4-11 экспрессирует MCL-1. MCL-1 является ключевым антиапоптотическим белком в клетках MV-4-11. Альвоцидиб, ингибитор CDK9, снижает экспрессию MCL-1, что уже хорошо документировано в литературе. Альвоцидиб снижает экспрессию MCL-1 в зависимости от дозы (Фиг.1A). Зависимость от дозы наблюдается при сравнении уровня относительной экспрессии MCL-1 по отношению к β-актину, при обработке клеток дозами альвоцидиба в концентрациях 0-8мкМ. Клетки MV4-11 обрабатывали альвоцидибом в течение 16 часов in vitro. По завершению обработки клетки собирали и подготавливали для анализа стандартным методом вестерн-блоттинга с целью иммунодетекции экспрессии MCL-1 и β-актина. 0,1 мкМ доза альвоцидиба уменьшала экспрессию MCL-1, тогда как 1 мкМ доза альвоцидиба полностью блокировала экспрессию через 16 часов.
Кроме того, альвоцидиб также снижает экспрессию MCL-1 в зависимости от времени (Фиг.1B). Временная зависимость наблюдалась при наблюдении уровня относительной экспрессии MCL-1 по отношению к β-актину, в течение времени. Относительную экспрессию MCL-1 измеряли через 0,5-48 часов после обработки клеток 80 нМ альвоцидиба.
Клетки MV4-11 обрабатывали in vitro альвоцидибом в концентрации 80 нМ в течение указанного времени. После завершения обработки клетки собирали и подготавливали для анализа стандартным методом вестерн-блоттинга с целью иммунодетекции экспрессии MCL-1 и β-актина. Альвоцидиб уменьшал экспрессию MCL-1 уже через 1 час после обработки, при этом экспрессия MCL-1 почти полностью блокировалась через 16 часов. Такое ингибирование экспрессии сохранялось в течение 48 часов после обработки. Относительная экспрессия MCL-1 показывает, что альвоцидиб снижает экспрессию MCL-1 в клетках MV4-11.
ПРИМЕР 2.
ОБРАБОТКА КОМБИНАЦИЕЙ СОЕДИНЕНИЙ АЛКОЦИДИБА И АЗАТИЦИДА И ЕЕ ЭФФЕКТ НА ЖИЗНЕСПОСОБНОСТЬ КЛЕТОК
Размножение клеток AML путем новообразований ингибируется синергически при обработке дозами альвоцидиба и азацитидина. Альвоцидиб использовали отдельно и в комбинации с азацитидином для определения эффекта лекарственного средства на жизнеспособность клеток как отдельно, так и в комбинации с азацитидином. Значительное изменение в жизнеспособности клеток наблюдалось при обработке клеток комбинацией альвоцидиба и азацитидина по сравнению с клетками, обработанными только азацитидином.
Клетки MV4-11 обрабатывали сначала альвоцидибом (80 нМ) или ДМСО в течение 24 часов, после чего промывали. После стадии промывки клетки обрабатывали азацитином (от 30 мкМ до 0,001 мкМ) в течение дополнительных 72 часов. Измерение жизнеспособности клеток было сделано через 96 часов после первоначальной обработки (через 72 часа после стадии промывки) и нормализовано по отношению к клеткам, обработанным только альвоцидибом. Жизнеспособность клеток затем оценивали по методу CellTiter-Glo assay в соответствии с протоколом производителя. Зависимость жизнеспособности клеток от концентрации (выраженной как логарифм дозы) представлена кривой доза-ответ (Фиг.2). Добавление 80nM альвоцидиба приводит к сдвигу кривой доза-ответ IC50 влево при нормализации данных по отношению к клеткам обработанных только альвоцидибом, что указывает на проявляющуюся синергическую активность 5-азацитидина при обработке комбинацией. Результирующая EC50 снижается с 1,779 мкМ для клеток, обработанных только одним азацитидином, до 0,6408 мкМ для клеток, также обработанных альвоцидибом.
Эти результаты свидетельствуют о повышенной активности (т.е. синергии) комбинации альвоцидиба и азацитидина по сравнению с действием индивидуальных агентов.
ПРИМЕР 3.
ВЛИЯНИЕ ОБРАБОТКИ КОМБИНАЦИЕЙ СОЕДИНЕНИЙ НА АКТИВНОСТЬ КАСПАЗЫ 3/7 И АПОПТОЗ
Альвоцидиб использовали в комбинации с азацитидином для обработки клеток MV4-11. Обработку клеток комбинацией соединений сравнивали с обработкой с применением одного азацитидина. Сравнение проводилось с целью оценки синергического эффекта комбинации на активность каспазы 3/7 и апоптоза. Добавление 80 нМ дозы альвоцидиба в обработку клеток 5-азацитидином приводит к синергическому увеличению активности каспазы в клетках MV4-11.
Сначала клетки были обработаны альвоцидибом в течение 24 часов с последующей стадией промывки. Далее клетки были обработаны азацитидином в течение 24 часов. Активность Каспазы 3/7 измеряли через 48 часов после начальной дозы альвоцидиба (через 24 часа после стадии промывки и обработки азацитидином). Нормализованная активность каспазы 3/7 в клетках, обработанных комбинацией альвоцидиба (FVP) и азацитидина в зависимости от концентрации азацитидина изображена на Фиг.3. Доза альвоцидиба оставалась постоянной (80 нМ) в диапазоне доз азацитидина (0,3мкМ-30мкМ). Далее, апоптоз оценивали по методу Caspase-Glo в соответствии с протоколом производителя.
Для оценки синергического эффекта комбинации альвоцидиба и азацитидина, активность каспазы 3/7 для необработанных клеток представлена на графике (гистограмме) наряду с клетками, обработанными только одним агентом, а также клетками, обработанными комбинацией альвоцидиба и азацитидина. Клетки, обработанные одним агентом, обрабатывали либо альвоцидибом (80 нМ), либо азацитидином+DMSO (0,3 мкМ-30 мкМ) в течение 48 часов. Клетки, обработанные комбинацией альвоцидиба и азацитидина, сначала обрабатывали альвоцидибом (80 нМ) в течение 24 часов. Затем клетки промывали и обрабатывали азацитином (0,3 мкМ-30 мкМ) в течение 24 часов. Результаты для различных концентраций азацитидина приведены на Фиг.4А-4D. Сравнение показывает, что при тестируемых концентрациях азацитидина и альвоцидиба, обработка клеток комбинацией соединений приводит к синергическому увеличению активности каспазы 3/7/апоптозу по сравнению с необработанными клетками или клетками, обработанными только одним агентом.
ПРИМЕР 4.
ОБРАБОТКА КЛЕТОК КОМБИНАЦИЕЙ АЛЬВОЦИДИБА И ДЕЦИТАБИНА И ЕЕ ВЛИЯНИЕ НА ЖИЗНЕСПОСОБНОСТЬ КЛЕТОК
На Фиг.5А-В представлены данные комбинированной обработки клеток MV4-11 альвоцидибом и децитабином. Сначала клетки MV4-11 обрабатывали в течение 96 часов альвоцидибом+децитабином в соответствии с общими процедурами описанными в Примере 2 в концентрациях, указанных на Фиг.5А. Небольшое снижение IC50 (мкМ) наблюдалось с добавлением альвоцидиба. В другом случае, клетки MV4-11 были предварительно обработаны альвоцидибом в течение 24 часов, а затем подверглись обработке децитабином еще в течение 72 часов (общее количество 96 часов, Фиг. 5B). В данном случае, 10-кратное уменьшение IC50 (мкМ), полученное при обработке децитабином с добавлением альвоцидиба (100нм) наблюдалось при применении альвоцидиба до децитабина.
Все патенты США, в частности патентная заявка США № 62/200,499, публикации патентных заявок США, заявки на патент США, иностранные патенты, заявки на иностранные патенты и непатентные публикации, упомянутые в этом описании, включены в данное описание посредством ссылки во всей своей полноте и в пределах, не противоречащих настоящему описанию.
Исходя из вышеизложенного, просим принять во внимание, что, хотя конкретные варианты осуществления изобретения описаны в данном описании с целью продемонстрировать изобретение, различные модификации могут быть сделаны без отклонения от сущности и объема настоящего изобретения. Соответственно, изобретение ничем не ограничено, кроме как прилагаемой формулой изобретения.
1. Способ лечения миелодиспластического синдрома (MDS), включающий введение терапевтически эффективного количества комбинированной терапии, содержащей децитабин или его фармацевтически приемлемую соль и альвоцидиб или его фармацевтически приемлемую соль нуждающемуся в этом человеку, где децитабин или его фармацевтически приемлемую соль вводят человеку перед альвоцидибом или его фармацевтически приемлемой соли.
2. Способ лечения миелодиспластического синдрома (MDS), включающий введение терапевтически эффективного количества комбинированной терапии, содержащей азацитидин или его фармацевтически приемлемую соль и альвоцидиб или его фармацевтически приемлемую соль человеку, нуждающемуся в этом, где азацитидин или его фармацевтически приемлемую соль вводят человеку перед альвоцидибом или его фармацевтически приемлемой соли.
3. Способ лечения субъекта с миелодиспластическим синдромом (MDS), включающий лечение субъекта терапевтически эффективным количеством комбинированной терапии, содержащей децитабин или азацитидин и альвоцидиб, где децитабин или азацитидин вводят субъекту перед альвоцидибом.
4. Способ по п.3, где комбинированная терапия содержит децитабин и альвоцидиб.
5. Способ по п.3, где комбинированная терапия содержит азацитидин и альвоцидиб.
6. Способ лечения субъекта с миелодиспластическим синдромом (MDS), включающий введение субъекту терапевтически эффективного количества комбинированной терапии, содержащей децитабин или азацитидин или их фармацевтически приемлемых солей и альвоцидиб или его фармацевтически приемлемую соль, где децитабин или азацитидин, или их фармацевтически приемлемые соли вводят субъекту перед альвоцидибом или его фармацевтически приемлемой соли.
7. Способ по п.6, где комбинированная терапия содержит децитабин или его фармацевтически приемлемую соль и альвоцидиб или его фармацевтически приемлемую соль.
8. Способ по п.6, где комбинированная терапия содержит азацитидин или его фармацевтически приемлемую соль и альвоцидиб или его фармацевтически приемлемую соль.
9. Набор для лечения миелодиспластического синдрома (MDS), содержащий комбинацию, включающую альвоцидиб или его фармацевтически приемлемую соль и децитабин или азацитидин или их фармацевтически приемлемые соли; и инструкции для введения альвоцидиба или его фармацевтически приемлемой соли и децитабина или азацитидина или их фармацевтически приемлемые соли млекопитающему, нуждающемуся в лечении MDS.
10. Набор по п.9, где комбинация включает альвоцидиб или его фармацевтически приемлемую соль и децитабин или его фармацевтически приемлемую соль.
11. Набор по п.9, где комбинация включает альвоцидиб или его фармацевтически приемлемую соль и азацитидин или его фармацевтически приемлемую соль.
