Способы и композиции для лечения хореи гентингтона

Авторы патента:

C12N15/63 - введение чужеродного генетического материала с использованием векторов; векторы; использование их хозяев; регулирование экспрессии

C07H21/02 - с рибозилом в качестве сахаридного радикала

A61K48/00 - Лекарственные препараты, содержащие генетический материал, который включен в клетки живого организма для лечения генетических заболеваний; для генной терапии

A61K31/713 - двунитевые нуклеиновые кислоты или олигонуклеотиды

Владельцы патента RU 2764587:

ВОЯДЖЕР ТЕРАПЬЮТИКС, ИНК. (US)

Изобретение относится к биотехнологии. Описан полинуклеотид для модуляции экспрессии гена гентингтина (HTT), содержащий последовательность смысловой цепи и последовательность антисмысловой цепи миРНК-дуплекса, где последовательность смысловой цепи содержит по меньшей мере 19 последовательных нуклеотидов из последовательности смысловой цепи SEQ ID NO:168 или 171 и последовательность антисмысловой цепи содержит по меньшей мере 19 последовательных нуклеотидов из последовательности антисмысловой цепи SEQ ID NO:7. Также описан полинуклеотид для модуляции экспрессии гена гентингтина (HTT), содержащий последовательность смысловой цепи и последовательность антисмысловой цепи миРНК-дуплекса, где последовательность смысловой цепи содержит по меньшей мере 19 смежных нуклеотидов из последовательности смысловой цепи SEQ ID NO:133 и последовательность антисмысловой цепи содержит по меньшей мере 19 смежных нуклеотидов из последовательности антисмысловой цепи SEQ ID NO:9. Также описан вирусный геном AAV для модуляции экспрессии гена гентингтина (HTT), содержащий последовательность нуклеиновой кислоты, расположенную между двумя инвертированными концевыми повторами (ITR), кодирующую указанный полинуклеотид. Также представлены полинуклеотид для модуляции экспрессии гена HTT, содержащий любую из последовательностей SEQ ID NO:349, 368, 347. Также описана соответствующая частица рекомбинантного аденоассоциированного вируса. Представлена фармацевтическая композиция для лечения болезни Гентингтона (HD), содержащая указанный полинуклеотид, вирусный геном AAV или частицу рекомбинантного AAV и фармацевтически приемлемый наполнитель. Представлен соответствующий способ ингибирования экспрессии гена HTT, мРНК и/или белка в клетке и способ лечения болезни Гентингтона (HD) у индивида. Изобретение расширяет арсенал средств для лечения болезни Гентингтона. 22 н. и 48 з.п. ф-лы, 27 табл., 8 пр.

ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА СВЯЗАННЫЕ ЗАЯВКИ

[0001] По настоящей заявке испрашивается приоритет временной патентной заявки США № 62/338113, поданной 18 мая 2016 года, которая озаглавлена «Compositions and Methods of Treating Huntington's Disease», и временной патентной заявки США № 62/485049, поданной 13 апреля 2017 года, которая озаглавлена «Compositions and Methods of Treating Huntington's Disease», содержание каждой из которых включено в настоящее описание в качестве ссылки в полном объеме.

ССЫЛКА НА СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

[0002] Настоящую заявку подают вместе со списком последовательностей в электронном формате. Информация о списке последовательностей в электронном формате включена в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме.

ОБЛАСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[0003] Настоящее изобретение относится к композициям, способам и процессам для создания, получения, изготовления, применения и/или формулирования модулирующих полинуклеотидов, например, полинуклеотидов, кодирующих молекулы малой интерферирующей РНК (миРНК), которые нацелены на ген гентингтина (HTT) (например, ген дикого типа или мутантный ген HTT с экспансией CAG). Нацеленное воздействие на мутантный ген HTT может препятствовать экспрессии гена HTT и заключительной продукции белка HTT. Модулирующие полинуклеотиды, кодирующие молекулы миРНК, могут быть встроены в рекомбинантные аденоассоциированные вирусные (AAV) векторы. Также раскрыты способы использования молекул миРНК для ингибирования экспрессии гена HTT у индивида, страдающего нейродегенеративным заболеванием (например, хореей Гентингтона (HD)).

ПРЕДПОСЫЛКИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[0004] Хорея Гентингтона (HD) представляет собой моногенное смертельное нейродегенеративное заболевание, которое отличается прогрессирующей хореей, нарушением нейропсихиатрических и когнитивных функций. Известно, что хорея Гентингтона обусловлена экспансией аутосомных доминантных триплетных (CAG) повторов в экзоне 1 гена гентингтина (htt), который кодирует белок гентингтон (HTT), несущий удлиненный полиглутаминовый тракт на своем N-конце. Это увеличение повторов ведет к приобретению токсической функции HTT и в конечном итоге ведет к стриарной нейродегенерации, которая прогрессирует до обширной атрофии головного мозга. Симптомы обычно возникают в возрасте между 35 и 44 годами, и средняя ожидаемая продолжительность жизни после начала заболевания составляет 10-25 лет. Что интересно, длина экспансии CAG коррелирует с возрастом начала и скоростью прогрессирования заболевания, причем более длинные экспансии связаны с большей тяжестью заболевания и более короткой выживаемостью. В небольшой процентной доле популяции с HD (~6%), начало заболевания наступает в возрасте 2-20 лет с возникновением акинетико-ригидного синдрома. При этих случаях усиливается прогрессирование по сравнению со случаями с поздним началом, и их классифицируют как ювенильный или вестфальский вариант HD. По оценкам, приблизительно 35000-70000 пациентов в настоящее время страдают HD в США И Европе. В настоящее время только симптоматическое облегчение и поддерживающая терапия доступны для лечения HD, а способ излечения еще предстоит найти. В конечном итоге, индивидуумы с HD умирают от других заболеваний (например, пневмонии, сердечной недостаточности), удушья, асфиксии или других осложнений, таких как физические повреждения при падениях.

[0005] Механизмы, посредством которых htt с экспансией повтора CAG ведет вызывает нейротоксичность, не вполне поняты. Белок гентингтин экспрессируется во всех клетках, хотя его концентрация выше всего в головном мозге. Нормальная функция HTT не известна, но в головном мозге пациентов с HD HTT агрегирует в аномальные ядерные включения. Сейчас полагают, что это связано с нарушением укладки и агрегацией вместе с ассоциированными белковыми промежуточными соединениями (то есть, растворимые частицы и токсичные N-концевые фрагменты).

[0006] Исследования на животных моделях HD показали, что реверсия фенотипа возможна, например, после выключения гена в моделях с регулируемой экспрессией. Кроме того, животные модели, в которых тестировали сайленсинг HTT, демонстрировали многообещающие результаты, причем терапия хорошо переносится и показывает потенциальный терапевтический эффект. Эти данные показывают, что сайленсинг HTT может служить в качестве потенциальной терапевтической мишени для лечения HD.

[0007] В настоящем изобретении разработан подход на основе РНК-интерференции, новые двухцепочечные конструкции РНК (дцРНК) и конструкции миРНК и способы их разработки для ингибирования или предотвращения экспрессии HTT с полиглутаминовой экспансией у пациентов с HD для лечения заболевания. Кроме того, эти новые конструкции миРНК могут представлять собой синтетические молекулы или могут быть кодироваться экспрессирующим вектором (одна или обе цепи) для доставки в клетки. Такие векторы включают, но не ограничиваясь этим, аденоассоциированные вирусные векторы, такие как векторные геномы любого серотипа AAV или других вирусных носителей доставки, таких как лентивирусы, и тому подобное.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[0008] Настоящее изобретение относится к опосредованной молекулами РНК геноспецифической интерференции с экспрессией гена и продуцированием белка. Способы лечения нейродегенеративных заболеваний, таких как хорея Гентингтона, также включены в настоящее изобретение. миРНК, входящие в состав композиций, отмеченные в настоящем документе, охватывают дцРНК с антисмысловой цепью (которая составляет 30 нуклеотидов или меньше, в целом 19-24 нуклеотидов в длину), которая по существу комплементарна по меньшей мере части мРНК транскрипта мутантного гена HTT.

[0009] Настоящее изобретение относится к коротким двухцепочечным молекулам РНК, таким как дуплексы малой интерферирующей РНК (миРНК), которые нецелены на мРНК HTT и препятствуют экспрессии гена HTT и/или продуцированию белка HTT. МиРНК-дуплексы по настоящему изобретению могут взаимодействовать с геном HTT и, в частности, могут взаимодействовать с геном HTT, который имеет мутации, вызывающие хорею Гентингтона.

[0010] В некоторых вариантах осуществления такие молекулы миРНК или одноцепочную одноцепочечные молекулы миРНК встраивают в (AAV) аденоассоциированные вирусные векторы для введения в клетки, в частности, стриарные или кортикальные нейроны и/или другие окружающие клетки в центральной нервной системе. AAV вектор может содержать последовательности, кодирующие 1, 2, 3, 4 или больше 4 дуплексов миРНК.

[0011] МиРНК-дуплекс по настоящему изобретению содержит антисмысловую цепь и смысловую цепь, гибридизованные вместе с образованием дуплексной структуры, в которой антисмысловая цепь комплементарна последовательности нуклеиновой кислоты гена HTT, и в которой смысловая цепь гомологична последовательности нуклеиновой кислоты гена HTT. В некоторых аспектах 5'-конец антисмысловой цепи имеет 5'-фосфатную группу, и 3'-конец смысловой цепи содержит 3'-гидроксильную группу. В других аспектах, на 3’-конце каждой цепи отсутствуют выступы, или выступ состоит из 1 или 2 нуклеотидов.

[0012] В соответствии с настоящим изобретением, каждая цепь миРНК-дуплекса, направленного на ген HTT, составляет приблизительно 19-25 нуклеотидов в длину, предпочтительно приблизительно 19 нуклеотидов, 20 нуклеотидов, 21 нуклеотид, 22 нуклеотида, 23 нуклеотида, 24 нуклеотида или 25 нуклеотидов в длину. В некоторых аспектах, миРНК может представлять собой немодифицированные молекулы РНК.

[0013] В других аспектах миРНК может содержать по меньшей мере один модифицированный нуклеотид, например, модификацию основания, сахара или остова.

[0014] В одном из вариантов осуществления миРНК или дцРНК содержит по меньшей мере две последовательности, которые комплементарны друг другу. дцРНК содержит смысловую цепь, имеющую первую последовательность, и антисмысловую цепь, имеющую вторую последовательность. Антисмысловая цепь содержит нуклеотидную последовательность, которая по существу комплементарна по меньшей мере части мРНК, кодирующей белок HTT, и область комплементарности составляет 30 нуклеотидов или меньше и по меньшей мере 15 нуклеотидов в длину. В целом, дцРНК составляет 19-24, например, 19-21 нуклеотида в длину. В некоторых вариантах осуществления дцРНК составляет приблизительно от 15 приблизительно до 25 нуклеотидов в длину и в других вариантах осуществления дцРНК составляет приблизительно от 25 приблизительно до 30 нуклеотидов в длину.

[0015] дцРНК, либо при контакте с клеткой, экспрессирующей белок HTT, либо при транскрипции в клетке, экспрессирующей белок HTT, ингибирует или супрессирует экспрессию гена HTT по меньшей мере на 10%, по меньшей мере на 20%, по меньшей мере на 25%, по меньшей мере на 30%, по меньшей мере на 35% или по меньшей мере на 40% или больше, например, при анализе способом, раскрытым в настоящем документе.

[0016] В соответствии с настоящим изобретением, получают AAV векторы, содержащие нуклеиновые кислоты, кодирующие миРНК-дуплексы, одну цепь миРНК-дуплекса или дцРНК, нацеленные на ген HTT, серотип AAV вектора может представлять собой AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV9.47, AAV9(hu14), AAV10, AAV11, AAV12, AAVrh8, AAVrh10, AAV-DJ8, AAV-DJ, AAV-PHP.A (PHP.A) и/или AAV-PHP.B (PHP.B) и их варианты. В качестве неограничивающего примера, серотип AAV вектора представляет собой AAV1. В качестве другого неограничивающего примера, серотип AAV представляет собой AAV-DJ8. В качестве другого неограничивающего примера, серотип AAV представляет собой AAV-PHP.A (PHP.A). В качестве другого неограничивающего примера, серотип AAV представляет собой AAV-PHP.B (PHP.B).

[0017] В одном из вариантов осуществления получают AAV векторы, содержащие нуклеиновые кислоты, кодирующие миРНК-дуплексы, одну цепь миРНК-дуплекса или дцРНК, нацеленные на ген HTT, которые могут быть выбраны на основе тропизма к шипиковым стриарным нейронам среднего размера, кортикальным нейронам и/или астроцитам. В качестве неограничивающего примера, AAV вектор выбран на основании уровня экспрессии в клетках желаемого типа, таких как, но ими не ограничиваясь, шипиковые стриарные нейроны среднего размера, кортикальные нейроны и/или астроциты.

[0018] В соответствии с настоящим изобретением, миРНК-дуплексы или дцРНК, нацеленные на ген HTT при HD, выбраны из дуплексов миРНК, перечисленных в таблицах 3, 4 или 5. Предпочтительно, миРНК-дуплексы или дцРНК, нацеленные на ген HTT при HD, выбраны из группы, состоящей из дуплексов миРНК: с D-3500 до D-3570.

[0019] Настоящее изобретение также относится к фармацевтическим композициям, содержащим по меньшей мере один миРНК-дуплекс, направленный на ген HTT, и фармацевтически приемлемый носитель. В некоторых аспектах, последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую миРНК-дуплекс, встраивают в AAV вектор.

[0020] В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к способам ингибирования/сайленсинга экспрессии гена HTT в клетке. Соответственно, миРНК-дуплексы или дцРНК можно использовать по существу для ингибирования экспрессии гена HTT в клетке. Клеткой может быть нейрон (например, шипиковые стриарные нейроны среднего размера, хвоста или полосатого тела и кортикальные нейроны в коре головного мозга), астроцит (например, астроцит в полосатом теле, корктикальные астроциты в коре головного мозга) и/или олигодендроциты. В качестве неограничивающего примера, ингибирование (или снижение) экспрессии гена HTT в скорлупе, хвосте и коре снижает эффект хореи Гентингтона у индивида. В качестве другого неограничивающего примера, ингибирование (или снижение) экспрессии гена HTT в шипиковых стриарных нейронах среднего размера снижает эффект хореи Гентингтона у индивида. В качестве еще одного другого неограничивающего примера, ингибирование (или снижение) экспрессии гена HTT в астроцитах в полосатом теле снижает эффект хореи Гентингтона у индивида. В некоторых аспектах, ингибирование экспрессии гена HTT означает ингибирование или снижение по меньшей мере приблизительно на 20%, предпочтительно по меньшей мере приблизительно на 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 95% и 100%. Соответственно, белковый продукт целевого гена можно ингибировать по меньшей мере приблизительно на 20%, предпочтительно по меньшей мере приблизительно на 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 95% и 100%.

[0021] В одном из вариантов осуществления настоящее изобретение относится к способам ингибирования/сайленсинга экспрессии гена HTT по меньшей мере приблизительно на 40% в клетке с использованием дуплексов миРНК или дцРНК. Клетка может представлять собой нейрон (например, средние шипиковые стриарные нейроны или полосатого тела и кортикальные нейроны в коре головного мозга), астроцит (например, астроцит в полосатом теле, кортикальные астроциты в коре головного мозга) и/или олигодендроциты. В качестве неограничивающего примера, по меньшей мере 40% ингибирование (или снижение) экспрессии гена HTT в скорлупе и коре снижает эффект хореи Гентингтона у индивида. В качестве другого неограничивающего примера, по меньшей мере 40% ингибирование (или снижение) экспрессии гена HTT в шипиковых стриарных нейронах среднего размера снижает эффект хореи Гентингтона у индивида. В качестве другого неограничивающего примера, по меньшей мере 40% ингибирование (или снижение) экспрессии гена HTT в скорлупе и по меньшей мере 20% ингибирование (или снижение) экспрессии гена HTT в коре снижает эффект хореи Гентингтона у индивида. В качестве еще одного неограничивающего примера, по меньшей мере 40% ингибирование (или снижение) экспрессии гена HTT в астроцитах в полосатом теле снижает эффект хореи Гентингтона у индивида.

[0022] В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к способам лечения или устранения клинических проявлений хореи Гентингтона, связанной с геном HTT (например, геном HTT с экспансией CAG) и возникающим в результате белком HTT (например, поли-Q белком), у индивида, нуждающегося в лечении, способ включает введение индивиду фармацевтически эффективного количества по меньшей мере одного миРНК-дуплекса, нацеленного на ген HTT (например, ген HTT с экспансией CAG), доставку указанного миРНК-дуплекса в целевые клетки, ингибирование экспрессии гена HTT (например, гена HTT с экспансией CAG) и итоговой продукции белка и улучшение симптомов HD у индивида.

[0023] В некоторых вариантах осуществления AAV вектор, содержащий последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере один миРНК-дуплекс, нацеленный на ген HTT, вводят индивиду, нуждающемуся в лечении и/или улучшении HD. Серотип AAV вектора может быть выбран из группы, состоящей из AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV9.47, AAV9(hu14), AAV10, AAV11, AAV12, AAVrh8, AAVrh10, AAV-DJ8, AAV-DJ, AAV-PHP.A (PHP.A) и/или AAV-PHP.B (PHP.B) и их вариантов.

[0024] В некоторых вариантах осуществления миРНК-дуплексы или дцРНК, нацеленные на ген HTT, или AAV векторы, содержащие такие миРНК-кодирующие молекулы, можно вводить непосредственно в центральную нервную систему индивида, например, посредством внутричерепной инъекции.

[0025] В некоторых вариантах осуществления фармацевтическую композицию по настоящему изобретению используют в качестве монотерапии. В других вариантах осуществления фармацевтическую композицию по настоящему изобретению используют в комбинированной терапии. Комбинированная терапия может быть в комбинации с одним или несколькими нейропротективными средствами, такими как низкомолекулярные соединения, факторы роста и гормоны, которые тестировали на их нейропротективный эффект при дегенерации нейронов.

[0026] В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к способам лечения или улучшения клинических проявлений хореи Гентингтона путем введения нуждающемуся в этом индивиду терапевтически эффективного количества плазмиды или AAV вектора, описанных в настоящем документе.

[0027] В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к способу ингибирования экспрессии гена HTT в области центральной нервной системы индивида путем введения индивиду композиции с по меньшей мере одним аденоассоциированным вирусным (AAV) вектором с последовательностью нуклеиновой кислоты, расположенной между двумя инвертированными концевыми повторами (ITR). Последовательность нуклеиновой кислоты, расположенная между двумя инвертированными концевыми повторами (ITR), может содержать антисмысловую цепь и смысловую цепь, которые могут образовывать миРНК-дуплекс, который при экспрессии ингибирует или супрессирует экспрессию HTT у индивида. Экспрессия может быть снижена у индивида в такой области, как, но не ограничиваясь этим, передний мозг индивида или область переднего мозга, такая как, но не ограничиваясь этим, скорлупа. Экспрессия HTT в переднем мозге или области переднего мозга (например, скорлупе) может быть снижена на 40-70%, 40-60%, 50-70%, 50-60% или ее можно снижать на 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59% или 60%.

[0028] В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение предусматривает способ лечения хореи Гентингтона (HD) у индивида, нуждающегося в лечении. Способ позволяет ингибировать экспрессию гена HTT в области центральной нервной системы индивида, включая введение индивиду композиции, содержащей по меньшей мере один аденоассоциированный вирусный (AAV) вектор, содержащий последовательность нуклеиновой кислоты, расположенную между двумя инвертированными концевыми повторами (ITR). Последовательность нуклеиновой кислоты может содержать антисмысловую цепь и смысловую цепь, которые могут образовывать миРНК-дуплекс, который при экспрессии ингибирует или супрессирует экспрессию HTT у указанного индивида. Экспрессию можно снижать у индивида в такой области, как, но не ограничиваясь этим, передний мозг индивида или область переднего мозга, такая как, но не ограничиваясь этим, скорлупа. Экспрессию HTT в переднем мозге или области переднего мозга (например, скорлупе) можно снижать на 40-70%, 40-60%, 50-70%, 50-60% или ее можно снижать на 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59% или 60%.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[0029] Настоящее изобретение относится к модулирующим полинуклеотидам, например, молекулам РНК или ДНК, в качестве терапевтических средств. Опосредованный РНК-интерференцией сайленсинг генов, в частности, позволяет ингибировать экспрессию целевого гена. Как используют в настоящем документе, «модулирующий полинуклеотид» представляет собой любую последовательность нуклеиновой кислоты, которая выполняет функцию модулирования (повышения или снижения) уровня или количества целевого гена, например, уровней мРНК или белка. Также настоящее изобретение относится к малым молекулам двухцепочечной РНК (дцРНК) (малая интерферирующая РНК, миРНК), нацеленным на ген HTT, к фармацевтическим композициям, содержащим такую миРНК, а также к способам их создания. Настоящее изобретение также относится к способам их применения для ингибирования экспрессии гена HTT и продуцкции белка, для лечения нейродегенеративного заболевания, в частности, хореи Гентингтона (HD).

[0030] Настоящее изобретение относится к дуплексам малой интерферирующей РНК (миРНК) (и модулирующим полинуклеотидам, кодирующим их), которые нацелены на мРНК HTT и препятствуют экспрессии гена HTT и/или продукции белка HTT.

[0031] В некоторых вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую такие молекулы миРНК или одноцепочную молекул миРНК, встраивают в аденоассоциированные вирусные векторы и вводят в клетки, в частности, нейроны и/или другие окружающие клетки в центральной нервной системе.

[0032] Кодируемый миРНК-дуплекс по настоящему изобретению содержит антисмысловую цепь и смысловую цепь, гибридизованные вместе с образованием дуплексной структуры, в которой антисмысловая цепь комплементарна последовательности нуклеиновой кислоты целевого гена HTT, и в которой смысловая цепь гомологична последовательности нуклеиновой кислоты целевого гена HTT. В некоторых аспектах, 5'-конец антисмысловой цепи имеет 5'-фосфатную группу и 3'-конец смысловой цепи содержит 3'-гидроксильную группу. В других аспектах на 3'-конце каждой цепи присуствуют выступы из 0, 1 и 2 нуклеотидов.

[0033] В соответствии с настоящим изобретением, каждая цепь миРНК-дуплекса, нацеленного на ген HTT, составляет приблизительно от 19 до 25, от 19 до 24 или от 19 до 21 нуклеотида в длину, предпочтительно приблизительно 19 нуклеотидов, 20 нуклеотидов, 21 нуклеотид, 22 нуклеотида, 23 нуклеотида, 24 нуклеотида или 25 нуклеотидов в длину. В некоторых аспектах, миРНК может представлять собой немодифицированные молекулы РНК.

[0034] В других аспектах, миРНК может содержать по меньшей мере один модифицированный нуклеотид, например, модификацию основания, сахара или остова.

[0035] В одном из вариантов осуществления миРНК или дцРНК включает по меньшей мере две последовательности, которые комплементарны друг другу. дцРНК содержит смысловую цепь, имеющую первую последовательность, и антисмысловую цепь, имеющую вторую последовательность. Антисмысловая цепь содержит нуклеотидную последовательность, которая по существу комплементарна по меньшей мере части мРНК, кодирующей HTT, и область комплементарности составляет 30 нуклеотидов или меньше и по меньшей мере 15 нуклеотидов в длину. В целом, дцРНК составляет от 19 до 25, от 19 до 24 или от 19 до 21 нуклеотида в длину. В некоторых вариантах осуществления дцРНК составляет приблизительно от 15 приблизительно до 25 нуклеотидов в длину и в других вариантах осуществления дцРНК составляет приблизительно от 25 приблизительно до 30 нуклеотидов в длину.

[0036] дцРНК, непосредственно вводимая или закодированная в экспрессирующем векторе, при контакте с клеткой, экспрессирующей белок HTT, ингибирует экспрессию белка HTT по меньшей мере на 10%, по меньшей мере на 20%, по меньшей мере на 25%, по меньшей мере на 30%, по меньшей мере на 35% или по меньшей мере на 40% или больше, например, когда анализируют с помощью способа, как раскрыто в настоящем документе.

[0037] Молекулы миРНК, входящие в композиции, отмеченные в настоящем документе, включают дцРНК, имеющую антисмысловую цепь (определенную антисмысловую цепь), имеющую область, которая составляет 30 нуклеотидов или меньше, в целом от 19 до 25, от 19 до 24 или от 19 до 21 нуклеотида в длину, которая по существу комплементарна по меньшей мере части мРНК транскрипта гена HTT.

[0038] В соответствии с настоящим изобретением, получают AAV векторы, содержащие нуклеиновые кислоты дуплексов миРНК, одну цепь миРНК-дуплекса или дцРНК, нацеленные на ген HTT, где серотипы AAV вектора могут представлять собой AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV9.47, AAV9(hu14), AAV10, AAV11, AAV12, AAVrh8, AAVrh10, AAV-DJ8, AAV-DJ, AAV-PHP.A (PHP.A) и/или AAV-PHP.B (PHP.B) и их варианты.

[0039] В соответствии с настоящим изобретением, миРНК-дуплексы или кодируемую дцРНК, нацеленные на ген HTT при HD, выбраны из дуплексов миРНК, перечисленных в таблице 7 или таблице 8. В некоторых вариантах осуществления миРНК-дуплексы или дцРНК, направленные на HTT при HD, представляют собой с D-3500 до D-3570.

[0040] Настоящее изобретение также относится к фармацевтическим композициям, содержащим по меньшей мере один миРНК-дуплекс, нацеленный на ген HTT, и фармацевтически приемлемый носитель. В некоторых аспектах, миРНК-дуплекс кодируют с помощью AAV вектора.

[0041] В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение предусматривает способы ингибирования/сайленсинга экспрессии гена HTT в клетке. Соответственно, миРНК-дуплексы или кодируемую дцРНК можно использовать для того, чтобы по существу ингибировать экспрессию гена HTT в клетке, в частности, в нейроне. В некоторых аспектах, ингибирование экспрессии гена HTT относится к ингибированию по меньшей мере приблизительно на 15%, например, по меньшей мере приблизительно на 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59%, 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 85%, 90%, 95% и 100% или по меньшей мере на 15-20%, 15-30%, 15-40%, 15-50%, 15-60%, 15-70%, 15-80%, 15-90%, 15-95%, 20-30%, 20-40%, 20-50%, 20-60%, 20-70%, 20-80%, 20-90%, 20-95%, 20-100%, 30-40%, 30-50%, 30-60%, 30-70%, 30-80%, 30-90%, 30-95%, 30-100%, 40-50%, 40-60%, 40-70%, 40-80%, 40-90%, 40-95%, 40-100%, 50-60%, 50-70%, 50-80%, 50-90%, 50-95%, 50-100%, 55-60%, 55-70%, 55-80%, 55-90%, 55-95%, 55-100%, 60-70%, 60-80%, 60-90%, 60-95%, 60-100%, 70-80%, 70-90%, 70-95%, 70-100%, 80-90%, 80-95%, 80-100%, 90-95%, 90-100% или 95-100%. Соответственно, белковый продукт целевого гена можно ингибировать по меньшей мере приблизительно на 15%, предпочтительно по меньшей мере приблизительно на 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59%, 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 85%, 90%, 95% и 100% или по меньшей мере на 15-20%, 15-30%, 15-40%, 15-50%, 15-60%, 15-70%, 15-80%, 15-90%, 15-95%, 20-30%, 20-40%, 20-50%, 20-60%, 20-70%, 20-80%, 20-90%, 20-95%, 20-100%, 30-40%, 30-50%, 30-60%, 30-70%, 30-80%, 30-90%, 30-95%, 30-100%, 40-50%, 40-60%, 40-70%, 40-80%, 40-90%, 40-95%, 40-100%, 50-60%, 50-70%, 50-80%, 50-90%, 50-95%, 50-100%, 60-70%, 60-80%, 60-90%, 60-95%, 60-100%, 70-80%, 70-90%, 70-95%, 70-100%, 80-90%, 80-95%, 80-100%, 90-95%, 90-100% или 95-100%.

[0042] В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к способам ингибирования/сайленсинга экспрессии гена HTT в клетке, в частности, в шипиковом нейроне среднего размера. В некоторых аспектах, ингибирование экспрессии гена HTT относится к ингибированию по меньшей мере приблизительно на 15%, например, по меньшей мере приблизительно на 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59%, 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 85%, 90%, 95% и 100% или по меньшей мере на 15-20%, 15-30%, 15-40%, 15-50%, 15-60%, 15-70%, 15-80%, 15-90%, 15-95%, 20-30%, 20-40%, 20-50%, 20-60%, 20-70%, 20-80%, 20-90%, 20-95%, 20-100%, 30-40%, 30-50%, 30-60%, 30-70%, 30-80%, 30-90%, 30-95%, 30-100%, 40-50%, 40-60%, 40-70%, 40-80%, 40-90%, 40-95%, 40-100%, 50-60%, 50-70%, 50-80%, 50-90%, 50-95%, 50-100%, 55-60%, 55-70%, 55-80%, 55-90%, 55-95%, 55-100%, 60-70%, 60-80%, 60-90%, 60-95%, 60-100%, 70-80%, 70-90%, 70-95%, 70-100%, 80-90%, 80-95%, 80-100%, 90-95%, 90-100% или 95-100%. Соответственно, белковый продукт целевого гена можно ингибировать по меньшей мере приблизительно на 15%, предпочтительно по меньшей мере приблизительно на 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59%, 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 85%, 90%, 95% и 100% или по меньшей мере на 15-20%, 15-30%, 15-40%, 15-50%, 15-60%, 15-70%, 15-80%, 15-90%, 15-95%, 20-30%, 20-40%, 20-50%, 20-60%, 20-70%, 20-80%, 20-90%, 20-95%, 20-100%, 30-40%, 30-50%, 30-60%, 30-70%, 30-80%, 30-90%, 30-95%, 30-100%, 40-50%, 40-60%, 40-70%, 40-80%, 40-90%, 40-95%, 40-100%, 50-60%, 50-70%, 50-80%, 50-90%, 50-95%, 50-100%, 55-60%, 55-70%, 55-80%, 55-90%, 55-95%, 55-100%, 60-70%, 60-80%, 60-90%, 60-95%, 60-100%, 70-80%, 70-90%, 70-95%, 70-100%, 80-90%, 80-95%, 80-100%, 90-95%, 90-100% или 95-100%.

[0043] В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к способам ингибирования/сайленсинга экспрессии гена в клетке, в частности, в двигательном нейроне. В некоторых аспектах, ингибирование экспрессии гена относится к ингибированию по меньшей мере приблизительно на 15%, например, по меньшей мере приблизительно на 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59%, 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 85%, 90%, 95% и 100% или по меньшей мере на 15-20%, 15-30%, 15-40%, 15-50%, 15-60%, 15-70%, 15-80%, 15-90%, 15-95%, 20-30%, 20-40%, 20-50%, 20-60%, 20-70%, 20-80%, 20-90%, 20-95%, 20-100%, 30-40%, 30-50%, 30-60%, 30-70%, 30-80%, 30-90%, 30-95%, 30-100%, 40-50%, 40-60%, 40-70%, 40-80%, 40-90%, 40-95%, 40-100%, 50-60%, 50-70%, 50-80%, 50-90%, 50-95%, 50-100%, 55-60%, 55-70%, 55-80%, 55-90%, 55-95%, 55-100%, 60-70%, 60-80%, 60-90%, 60-95%, 60-100%, 70-80%, 70-90%, 70-95%, 70-100%, 80-90%, 80-95%, 80-100%, 90-95%, 90-100% или 95-100%. Соответственно, белковый продукт целевого гена можно ингибировать по меньшей мере приблизительно на 15%, предпочтительно по меньшей мере приблизительно на 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59%, 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 85%, 90%, 95% и 100% или по меньшей мере на 15-20%, 15-30%, 15-40%, 15-50%, 15-60%, 15-70%, 15-80%, 15-90%, 15-95%, 20-30%, 20-40%, 20-50%, 20-60%, 20-70%, 20-80%, 20-90%, 20-95%, 20-100%, 30-40%, 30-50%, 30-60%, 30-70%, 30-80%, 30-90%, 30-95%, 30-100%, 40-50%, 40-60%, 40-70%, 40-80%, 40-90%, 40-95%, 40-100%, 50-60%, 50-70%, 50-80%, 50-90%, 50-95%, 50-100%, 55-60%, 55-70%, 55-80%, 55-90%, 55-95%, 55-100%, 60-70%, 60-80%, 60-90%, 60-95%, 60-100%, 70-80%, 70-90%, 70-95%, 70-100%, 80-90%, 80-95%, 80-100%, 90-95%, 90-100% или 95-100%.

[0044] В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к способам ингибирования/сайленсинга экспрессии гена HTT в клетке, в частности, в астроците. В некоторых аспектах, ингибирование экспрессии гена HTT относится к ингибированию по меньшей мере приблизительно на 15%, например, по меньшей мере приблизительно на 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59%, 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 85%, 90%, 95% и 100% или по меньшей мере на 15-20%, 15-30%, 15-40%, 15-50%, 15-60%, 15-70%, 15-80%, 15-90%, 15-95%, 20-30%, 20-40%, 20-50%, 20-60%, 20-70%, 20-80%, 20-90%, 20-95%, 20-100%, 30-40%, 30-50%, 30-60%, 30-70%, 30-80%, 30-90%, 30-95%, 30-100%, 40-50%, 40-60%, 40-70%, 40-80%, 40-90%, 40-95%, 40-100%, 50-60%, 50-70%, 50-80%, 50-90%, 50-95%, 50-100%, 55-60%, 55-70%, 55-80%, 55-90%, 55-95%, 55-100%, 60-70%, 60-80%, 60-90%, 60-95%, 60-100%, 70-80%, 70-90%, 70-95%, 70-100%, 80-90%, 80-95%, 80-100%, 90-95%, 90-100% или 95-100%. Соответственно, белковый продукт целевого гена можно ингибировать по меньшей мере приблизительно на 15%, предпочтительно по меньшей мере приблизительно на 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59%, 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 85%, 90%, 95% и 100% или по меньшей мере на 15-20%, 15-30%, 15-40%, 15-50%, 15-60%, 15-70%, 15-80%, 15-90%, 15-95%, 20-30%, 20-40%, 20-50%, 20-60%, 20-70%, 20-80%, 20-90%, 20-95%, 20-100%, 30-40%, 30-50%, 30-60%, 30-70%, 30-80%, 30-90%, 30-95%, 30-100%, 40-50%, 40-60%, 40-70%, 40-80%, 40-90%, 40-95%, 40-100%, 50-60%, 50-70%, 50-80%, 50-90%, 50-95%, 50-100%, 55-60%, 55-70%, 55-80%, 55-90%, 55-95%, 55-100%, 60-70%, 60-80%, 60-90%, 60-95%, 60-100%, 70-80%, 70-90%, 70-95%, 70-100%, 80-90%, 80-95%, 80-100%, 90-95%, 90-100% или 95-100%.

[0045] В одном из вариантов осуществления миРНК-дуплексы или кодируемую дцРНК можно использовать для снижения экспрессии белка HTT по меньшей мере приблизительно на 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59%, 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 85%, 90%, 95% и 100% или по меньшей мере на 15-20%, 15-30%, 15-40%, 15-50%, 15-60%, 15-70%, 15-80%, 15-90%, 15-95%, 20-30%, 20-40%, 20-50%, 20-60%, 20-70%, 20-80%, 20-90%, 20-95%, 20-100%, 30-40%, 30-50%, 30-60%, 30-70%, 30-80%, 30-90%, 30-95%, 30-100%, 40-50%, 40-60%, 40-70%, 40-80%, 40-90%, 40-95%, 40-100%, 50-60%, 50-70%, 50-80%, 50-90%, 50-95%, 50-100%, 55-60%, 55-70%, 55-80%, 55-90%, 55-95%, 55-100%, 60-70%, 60-80%, 60-90%, 60-95%, 60-100%, 70-80%, 70-90%, 70-95%, 70-100%, 80-90%, 80-95%, 80-100%, 90-95%, 90-100% или 95-100%. В качестве неограничивающего примера, экспрессия белка HTT может быть снижена на 50-90%. В качестве неограничивающего примера, экспрессия белка HTT может быть снижена на 30-70%. В качестве неограничивающего примера, экспрессия белка может быть снижена на 20-70%. В качестве неограничивающего примера, экспрессия белка может быть снижена на 15-30%.

[0046] В одном из вариантов осуществления миРНК-дуплексы или кодируемую дцРНК можно использовать для снижения экспрессии мРНК HTT по меньшей мере приблизительно на 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59%, 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 85%, 90%, 95% и 100% или по меньшей мере на 15-20%, 15-30%, 15-40%, 15-50%, 15-60%, 15-70%, 15-80%, 15-90%, 15-95%, 20-30%, 20-40%, 20-50%, 20-60%, 20-70%, 20-80%, 20-90%, 20-95%, 20-100%, 30-40%, 30-50%, 30-60%, 30-70%, 30-80%, 30-90%, 30-95%, 30-100%, 40-50%, 40-60%, 40-70%, 40-80%, 40-90%, 40-95%, 40-100%, 50-60%, 50-70%, 50-80%, 50-90%, 50-95%, 50-100%, 55-60%, 55-70%, 55-80%, 55-90%, 55-95%, 55-100%, 60-70%, 60-80%, 60-90%, 60-95%, 60-100%, 70-80%, 70-90%, 70-95%, 70-100%, 80-90%, 80-95%, 80-100%, 90-95%, 90-100% или 95-100%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию мРНК HTT можно снижать на 50-90%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию мРНК HTT можно снижать на 30-70%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию мРНК HTT можно снижать на 20-70%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию мРНК HTT можно снижать на 15-30%.

[0047] В одном из вариантов осуществления миРНК-дуплексы или кодируемую дцРНК можно использовать для снижения экспрессии белка HTT и/или мРНК по меньшей мере в одной области CNS, такой как, но не ограничиваясь этим, средний мозг. Экспрессию белка HTT и/или мРНК снижают по меньшей мере приблизительно на 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59%, 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 85%, 90%, 95% и 100% или по меньшей мере на 15-20%, 15-30%, 15-40%, 15-50%, 15-60%, 15-70%, 15-80%, 15-90%, 15-95%, 20-30%, 20-40%, 20-50%, 20-60%, 20-70%, 20-80%, 20-90%, 20-95%, 20-100%, 30-40%, 30-50%, 30-60%, 30-70%, 30-80%, 30-90%, 30-95%, 30-100%, 40-50%, 40-60%, 40-70%, 40-80%, 40-90%, 40-95%, 40-100%, 50-60%, 50-70%, 50-80%, 50-90%, 50-95%, 50-100%, 55-60%, 55-70%, 55-80%, 55-90%, 55-95%, 55-100%, 60-70%, 60-80%, 60-90%, 60-95%, 60-100%, 70-80%, 70-90%, 70-95%, 70-100%, 80-90%, 80-95%, 80-100%, 90-95%, 90-100% или 95-100% по меньшей мере в одной области CNS. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в полосатом теле и/или коре снижают на 50-90%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в полосатом теле снижают на 40-50%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в полосатом теле снижают на 20-50%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в полосатом теле снижают на 15-50%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в коре снижают на 40-50%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в коре снижают на 30-70%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в коре снижают на 20-70%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка и мРНК в коре снижают на 15-70%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка и мРНК в коре снижают на 20-70%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка и мРНК в полосатом теле и/или коре снижают на 15-70%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в полосатом теле и/или коре снижают на 40-70%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в полосатом теле и/или коре снижают на 40-50%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в полосатом теле и/или коре снижают на 50-70%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в полосатом теле и/или коре снижают на 50-60%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в полосатом теле и/или коре снижают на 50%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в полосатом теле и/или коре снижают на 51%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в полосатом теле и/или коре снижают на 52%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в полосатом теле и/или коре снижают на 53%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в полосатом теле и/или коре снижают на 54%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в полосатом теле и/или коре снижают на 55%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в полосатом теле и/или коре снижают на 56%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в полосатом теле и/или коре снижают на 57%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в полосатом теле и/или коре снижают на 58%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в полосатом теле и/или коре снижают на 59%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в полосатом теле и/или коре снижают на 60%.

[0048] В одном из вариантов осуществления миРНК-дуплексы или кодируемую дцРНК можно использовать для снижения экспрессии белка HTT и/или мРНК по меньшей мере в одной области CNS, такой как, но не ограничиваясь этим, передний мозг. Экспрессию белка HTT и/или мРНК снижают по меньшей мере приблизительно на 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59%, 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 85%, 90%, 95% и 100% или по меньшей мере на 15-20%, 15-30%, 15-40%, 15-50%, 15-60%, 15-70%, 15-80%, 15-90%, 15-95%, 20-30%, 20-40%, 20-50%, 20-60%, 20-70%, 20-80%, 20-90%, 20-95%, 20-100%, 30-40%, 30-50%, 30-60%, 30-70%, 30-80%, 30-90%, 30-95%, 30-100%, 40-50%, 40-60%, 40-70%, 40-80%, 40-90%, 40-95%, 40-100%, 50-60%, 50-70%, 50-80%, 50-90%, 50-95%, 50-100%, 55-60%, 55-70%, 55-80%, 55-90%, 55-95%, 55-100%, 60-70%, 60-80%, 60-90%, 60-95%, 60-100%, 70-80%, 70-90%, 70-95%, 70-100%, 80-90%, 80-95%, 80-100%, 90-95%, 90-100% или 95-100% по меньшей мере в одной области CNS. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в скорлупе снижают на 50-90%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в полосатом теле снижают на 40-50%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в коре снижают на 40-50%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в коре снижают на 30-70%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в коре снижают на 20-70%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка и мРНК в коре снижают на 15-70%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка и мРНК в полосатом теле и/или коре снижают на 15-70%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка и мРНК в полосатом теле и/или коре снижают на 20-70%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в полосатом теле и/или коре снижают на 40-70%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в полосатом теле и/или коре снижают на 40-50%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в полосатом теле и/или коре снижают на 50-70%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в полосатом теле и/или коре снижают на 50-60%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в полосатом теле и/или коре снижают на 50%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в полосатом теле и/или коре снижают на 51%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в полосатом теле и/или коре снижают на 52%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в полосатом теле и/или коре снижают на 53%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в полосатом теле и/или коре снижают на 54%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в полосатом теле и/или коре снижают на 55%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в полосатом теле и/или коре снижают на 56%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в полосатом теле и/или коре снижают на 57%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в полосатом теле и/или коре снижают на 58%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в полосатом теле и/или коре снижают на 59%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в полосатом теле и/или коре снижают на 60%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка и мРНК в полосатом теле и/или коре снижают на 61%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка и мРНК в полосатом теле и/или коре снижают на 62%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка и мРНК в полосатом теле и/или коре снижают на 63%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка и мРНК в полосатом теле и/или коре снижают на 64%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка и мРНК в полосатом теле и/или коре снижают на 65%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка и мРНК в полосатом теле и/или коре снижают на 66%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка и мРНК в полосатом теле и/или коре снижают на 67%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка и мРНК в полосатом теле и/или коре снижают на 68%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка и мРНК в полосатом теле и/или коре снижают на 69%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка и мРНК в полосатом теле и/или коре снижают на 70%.

[0049] В одном из вариантов осуществления миРНК-дуплексы или кодируемую дцРНК можно использовать для снижения экспрессии белка HTT и/или мРНК в скорлупе. Экспрессию белка HTT и/или мРНК снижают по меньшей мере приблизительно на 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59%, 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 85%, 90%, 95% и 100% или по меньшей мере на 15-20%, 15-30%, 15-40%, 15-50%, 15-60%, 15-70%, 15-80%, 15-90%, 15-95%, 20-30%, 20-40%, 20-50%, 20-60%, 20-70%, 20-80%, 20-90%, 20-95%, 20-100%, 30-40%, 30-50%, 30-60%, 30-70%, 30-80%, 30-90%, 30-95%, 30-100%, 40-50%, 40-60%, 40-70%, 40-80%, 40-90%, 40-95%, 40-100%, 50-60%, 50-70%, 50-80%, 50-90%, 50-95%, 50-100%, 55-60%, 55-70%, 55-80%, 55-90%, 55-95%, 55-100%, 60-70%, 60-80%, 60-90%, 60-95%, 60-100%, 70-80%, 70-90%, 70-95%, 70-100%, 80-90%, 80-95%, 80-100%, 90-95%, 90-100% или 95-100% по меньшей мере в одной области CNS. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в скорлупе снижают на 40-70%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в скорлупе снижают на 40-50%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в скорлупе снижают на 50-70%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в скорлупе снижают на 50-60%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в скорлупе снижают на 50%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в скорлупе снижают на 51%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в скорлупе снижают на 52%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в скорлупе снижают на 53%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в скорлупе снижают на 54%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в скорлупе снижают на 55%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в скорлупе снижают на 56%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в скорлупе снижают на 57%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в скорлупе снижают на 58%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в скорлупе снижают на 59%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в скорлупе снижают на 60%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка и мРНК в скорлупе снижают на 61%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка и мРНК в скорлупе снижают на 62%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка и мРНК в скорлупе снижают на 63%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка и мРНК в скорлупе снижают на 64%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка и мРНК в скорлупе снижают на 65%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка и мРНК в скорлупе снижают на 66%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка и мРНК в скорлупе снижают на 67%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка и мРНК в скорлупе снижают на 68%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка и мРНК в скорлупе снижают на 69%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка и мРНК в скорлупе снижают на 70%.

[0050] В одном из вариантов осуществления миРНК-дуплексы или кодируемую дцРНК можно использовать для снижения экспрессии белка HTT и/или мРНК в коре. Экспрессию белка HTT и/или мРНК снижают по меньшей мере приблизительно на 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59%, 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 85%, 90%, 95% и 100% или по меньшей мере на 15-20%, 15-30%, 15-40%, 15-50%, 15-60%, 15-70%, 15-80%, 15-90%, 15-95%, 20-30%, 20-40%, 20-50%, 20-60%, 20-70%, 20-80%, 20-90%, 20-95%, 20-100%, 30-40%, 30-50%, 30-60%, 30-70%, 30-80%, 30-90%, 30-95%, 30-100%, 40-50%, 40-60%, 40-70%, 40-80%, 40-90%, 40-95%, 40-100%, 50-60%, 50-70%, 50-80%, 50-90%, 50-95%, 50-100%, 60-70%, 60-80%, 60-90%, 60-95%, 60-100%, 70-80%, 70-90%, 70-95%, 70-100%, 80-90%, 80-95%, 80-100%, 90-95%, 90-100% или 95-100%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в коре снижают на 40-50%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в коре снижают на 30-70%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в коре снижают на 20-70%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в коре снижают на 15-70%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в коре снижают по меньшей мере на 30%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в коре снижают на 40-70%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в коре снижают на 40-50%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в коре снижают на 50-70%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в коре снижают на 50-60%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в коре снижают на 50%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в коре снижают на 51%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в коре снижают на 52%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в коре снижают на 53%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в коре снижают на 54%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в коре снижают на 55%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в коре снижают на 56%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в коре снижают на 57%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в коре снижают на 58%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в коре снижают на 59%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в коре снижают на 60%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка и мРНК в коре снижают на 61%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка и мРНК в коре снижают на 62%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка и мРНК в коре снижают на 63%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка и мРНК в коре снижают на 64%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка и мРНК в коре снижают на 65%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка и мРНК в коре снижают на 66%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка и мРНК в коре снижают на 67%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка и мРНК в коре снижают на 68%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка и мРНК в коре снижают на 69%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка и мРНК в коре снижают на 70%.

[0051] В одном из вариантов осуществления миРНК-дуплексы или кодируемую дцРНК можно использовать для снижения экспрессии белка HTT и/или мРНК в двигательной коре. Экспрессию белка HTT и/или мРНК снижают по меньшей мере приблизительно на 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59%, 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 85%, 90%, 95% и 100% или по меньшей мере на 15-20%, 15-30%, 15-40%, 15-50%, 15-60%, 15-70%, 15-80%, 15-90%, 15-95%, 20-30%, 20-40%, 20-50%, 20-60%, 20-70%, 20-80%, 20-90%, 20-95%, 20-100%, 30-40%, 30-50%, 30-60%, 30-70%, 30-80%, 30-90%, 30-95%, 30-100%, 40-50%, 40-60%, 40-70%, 40-80%, 40-90%, 40-95%, 40-100%, 50-60%, 50-70%, 50-80%, 50-90%, 50-95%, 50-100%, 60-70%, 60-80%, 60-90%, 60-95%, 60-100%, 70-80%, 70-90%, 70-95%, 70-100%, 80-90%, 80-95%, 80-100%, 90-95%, 90-100% или 95-100%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в двигательной коре снижают на 40-50%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в двигательной коре снижают на 30-70%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в двигательной коре снижают на 20-70%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в двигательной коре снижают на 15-70%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в двигательной коре снижают по меньшей мере на 30%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в двигательной коре снижают на 40-70%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в двигательной коре снижают на 50-70%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в двигательной коре снижают на 50-60%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в двигательной коре снижают на 50%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в двигательной коре снижают на 51%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в двигательной коре снижают на 52%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в двигательной коре снижают на 53%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в двигательной коре снижают на 54%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в двигательной коре снижают на 55%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в двигательной коре снижают на 56%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в двигательной коре снижают на 57%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в двигательной коре снижают на 58%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в двигательной коре снижают на 59%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в двигательной коре снижают на 60%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка и мРНК в двигательной коре снижают на 61%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка и мРНК в двигательной коре снижают на 62%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка и мРНК в двигательной коре снижают на 63%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка и мРНК в двигательной коре снижают на 64%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка и мРНК в двигательной коре снижают на 65%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка и мРНК в двигательной коре снижают на 66%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка и мРНК в двигательной коре снижают на 67%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка и мРНК в двигательной коре снижают на 68%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка и мРНК в двигательной коре снижают на 69%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка и мРНК в двигательной коре снижают на 70%.

[0052] В одном из вариантов осуществления миРНК-дуплексы или кодируемую дцРНК можно использовать для снижения экспрессии белка HTT и/или мРНК в соматосенсорной коре. Экспрессию белка HTT и/или мРНК снижают по меньшей мере приблизительно на 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59%, 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 85%, 90%, 95% и 100% или по меньшей мере на 15-20%, 15-30%, 15-40%, 15-50%, 15-60%, 15-70%, 15-80%, 15-90%, 15-95%, 20-30%, 20-40%, 20-50%, 20-60%, 20-70%, 20-80%, 20-90%, 20-95%, 20-100%, 30-40%, 30-50%, 30-60%, 30-70%, 30-80%, 30-90%, 30-95%, 30-100%, 40-50%, 40-60%, 40-70%, 40-80%, 40-90%, 40-95%, 40-100%, 50-60%, 50-70%, 50-80%, 50-90%, 50-95%, 50-100%, 60-70%, 60-80%, 60-90%, 60-95%, 60-100%, 70-80%, 70-90%, 70-95%, 70-100%, 80-90%, 80-95%, 80-100%, 90-95%, 90-100% или 95-100%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в соматосенсорной коре снижают на 40-50%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в соматосенсорной коре снижают на 30-70%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в соматосенсорной коре снижают на 20-70%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в соматосенсорной коре снижают на 15-70%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в соматосенсорной коре снижают по меньшей мере на 30%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в соматосенсорной коре снижают на 40-70%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в соматосенсорной коре снижают на 40-50%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в соматосенсорной коре снижают на 50-70%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в соматосенсорной коре снижают на 50-60%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в соматосенсорной коре снижают на 50%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в соматосенсорной коре снижают на 51%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в соматосенсорной коре снижают на 52%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в соматосенсорной коре снижают на 53%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в соматосенсорной коре снижают на 54%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в соматосенсорной коре снижают на 55%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в соматосенсорной коре снижают на 56%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в соматосенсорной коре снижают на 57%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в соматосенсорной коре снижают на 58%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в соматосенсорной коре снижают на 59%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в соматосенсорной коре снижают на 60%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка и мРНК в соматосенсорной коре снижают на 61%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка и мРНК в соматосенсорной коре снижают на 62%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка и мРНК в соматосенсорной коре снижают на 63%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка и мРНК в соматосенсорной коре снижают на 64%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка и мРНК в соматосенсорной коре снижают на 65%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка и мРНК в соматосенсорной коре снижают на 66%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка и мРНК в соматосенсорной коре снижают на 67%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка и мРНК в соматосенсорной коре снижают на 68%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка и мРНК в соматосенсорной коре снижают на 69%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка и мРНК в соматосенсорной коре снижают на 70%.

[0053] В одном из вариантов осуществления миРНК-дуплексы или кодируемую дцРНК можно использовать для снижения экспрессии белка HTT и/или мРНК в височной коре. Экспрессию белка HTT и/или мРНК снижают по меньшей мере приблизительно на 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59%, 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 85%, 90%, 95% и 100% или по меньшей мере на 15-20%, 15-30%, 15-40%, 15-50%, 15-60%, 15-70%, 15-80%, 15-90%, 15-95%, 20-30%, 20-40%, 20-50%, 20-60%, 20-70%, 20-80%, 20-90%, 20-95%, 20-100%, 30-40%, 30-50%, 30-60%, 30-70%, 30-80%, 30-90%, 30-95%, 30-100%, 40-50%, 40-60%, 40-70%, 40-80%, 40-90%, 40-95%, 40-100%, 50-60%, 50-70%, 50-80%, 50-90%, 50-95%, 50-100%, 60-70%, 60-80%, 60-90%, 60-95%, 60-100%, 70-80%, 70-90%, 70-95%, 70-100%, 80-90%, 80-95%, 80-100%, 90-95%, 90-100% или 95-100%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в височной коре снижают на 40-50%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в височной коре снижают на 30-70%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в височной коре снижают на 20-70%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в височной коре снижают на 15-70%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в височной коре снижают по меньшей мере на 30%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в височной коре снижают на 40-70%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в височной коре снижают на 50-70%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в височной коре снижают на 50-60%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в височной коре снижают на 50%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в височной коре снижают на 51%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в височной коре снижают на 52%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в височной коре снижают на 53%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в височной коре снижают на 54%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в височной коре снижают на 55%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в височной коре снижают на 56%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в височной коре снижают на 57%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в височной коре снижают на 58%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в височной коре снижают на 59%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка HTT и мРНК в височной коре снижают на 60%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка и мРНК в височной коре снижают на 61%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка и мРНК в височной коре снижают на 62%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка и мРНК в височной коре снижают на 63%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка и мРНК в височной коре снижают на 64%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка и мРНК в височной коре снижают на 65%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка и мРНК в височной коре снижают на 66%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка и мРНК в височной коре снижают на 67%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка и мРНК в височной коре снижают на 68%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка и мРНК в височной коре снижают на 69%. В качестве неограничивающего примера, экспрессию белка и мРНК в височной коре снижают на 70%.

[0054] В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение предусматривает способы лечения или улучшения хореи Гентингтона, связанной с геном HTT и/или белком HTT, у индивида, нуждающегося в лечении, способ включает введение индивиду фармацевтически эффективного количества по меньшей мере одного миРНК-дуплекса или нуклеиновой кислоты, кодирующей миРНК-дуплекс, направленный на ген HTT, доставку указанного миРНК-дуплекса (или кодируемого дуплекса) в целевые клетки, ингибирование экспрессии гена HTT и продуцирования белка и улучшение симптомов HD у индивида.

[0055] В некоторых вариантах осуществления AAV вектор, содержащий последовательность нуклеиновой кислоты по меньшей мере одного миРНК-дуплекса, нацеленный на ген HTT, вводят индивиду, нуждающемуся в лечении и/или улучшении HD. Серотип AAV вектора может быть выбран из группы, состоящей из AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV9.47, AAV9(hu14), AAV10, AAV11, AAV12, AAVrh8, AAVrh10, AAV-DJ8 (AAVDJ8), AAV-DJ (AAVDJ), AAV-PHP.A (PHP.A) и/или AAV-PHP.B (PHP.B) и их вариантов. В одном из вариантов осуществления серотип AAV вектора представляет собой AAV1. В одном из вариантов осуществления серотип AAV вектора представляет собой AAV2. В другом варианте осуществления серотип AAV вектора представляет собой AAV5 (например, как описано в Miniarikova et al. MolTher (2016) 5, e297 и международной публикации № WO2016102664; содержание каждого из которых включено в настоящее описание посредством ссылки во всей их полноте). В другом варианте осуществления AAV вектор представляет собой AAV-DJ. В еще одном другом варианте осуществления, серотип AAV вектора представляет собой AAV-DJ8.

[0056] В одном из вариантов осуществления серотип, который можно использовать в настоящем изобретении, может представлять собой AAV-DJ8. Аминокислотная последовательность AAV-DJ8 может содержать две или больше мутаций для того, чтобы удалять гепаринсвязывающий домен (HBD). В качестве неограничивающего примера, последовательность AAV-DJ8, описанная как SEQ ID NO:1 в патенте США № 7588772, содержание которого включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме, может содержать две мутации: (1) R587Q, где аргинин (R; Arg) в аминокислоте 587 изменяют на глутамин (Q; Gln) и (2) R590T, где аргинин (R; Arg) в аминокислоте 590 изменяют на треонин (T; Thr). В качестве другого неограничивающего примера, может содержать три мутации: (1) K406R, где лизин (K; Lys) в аминокислоте 406 изменяют на аргинин (R; Arg), (2) R587Q, где аргинин (R; Arg) в аминокислоте 587 изменяют на глутамин (Q; Gln) и (3) R590T, где аргинин (R; Arg) в аминокислоте 590 изменяют на треонин (T; Thr).

[0057] В некоторых вариантах осуществления молекулы миРНК или AAV векторы, содержащие такие молекулы миРНК, можно вводить непосредственно в центральную нервную систему индивида, например, посредством инфузии в скорлупу.

[0058] В некоторых вариантах осуществления молекулы миРНК или AAV векторы, содержащие такие молекулы миРНК, можно вводить непосредственно в центральную нервную систему индивида, например, посредством инфузии в таламус индивида. Без ограничения теорией, таламус представляет собой область головного мозга, которая относительно сохранена у субъектов с хореей Гентингтона, что обозначает то, что она может допускать более обширную корковую трансдукцию через аксональный транспорт AAV векторов.

[0059] В некоторых вариантах осуществления молекулы миРНК или AAV векторы, содержащие такие молекулы миРНК, можно вводить опосредованно в центральную нервную систему индивида, например, посредством внутривенного введения.

[0060] В некоторых вариантах осуществления молекулы миРНК или AAV векторы, содержащие такие молекулы миРНК, можно вводить непосредственно в центральную нервную систему индивида, например, посредством инфузии в белое вещество индивида. Без ограничения теорией, распределение через прямую инфузию в белое вещество может не зависеть от механизмов аксонального транспорта, которые могут быть ослаблены у субъектов с хореей Гентингтона, что обозначает то, что инфузия в белое вещество может допускать больше транспорта AAV векторов.

[0061] В некоторых вариантах осуществления фармацевтическую композицию по настоящему изобретению используют в качестве монотерапии. В других вариантах осуществления фармацевтическую композицию по настоящему изобретению используют в комбинированной терапии. Комбинированная терапия может быть в комбинации с одним или несколькими нейропротективными средствами, такими как низкомолекулярные соединения, факторы роста и гормоны, которые тестировали на их нейропротективный эффект, оказываемый на дегенерацию нейронов.

[0062] В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение предусматривает способы лечения или улучшения хореи Гентингтона (HD) посредством введения нуждающемуся в этом индивиду терапевтически эффективного количества плазмиды или AAV вектора, описанных в настоящем документе.

[0063] Подробности об одним или нескольких вариантах осуществления изобретения изложены далее в сопутствующем описании. Несмотря на то, что любые материалы и способы, подобные или эквивалентные тем, которые описаны в настоящем документе, можно использовать при практической реализации или тестировании настоящего изобретения, предпочтительные материалы и способы описаны здесь. Другие признаки, цели и преимущества изобретения видны из описания. В описании формы единственного числа также включают множественное число, пока контекст явно не диктует иное. Пока не определено иное, все технические и научные термины, используемые в настоящем документе, имеют то же значение, как их обычно понимает специалист в области, к которой относится это изобретение. В случае противоречия настоящее описание имеет решающее значение.

I. КОМПОЗИЦИИ ПО ИЗОБРЕТЕНИЮ

Хорея Гентингтона (HD)

[0064] Хорея Гентингтона (HD) представляет собой моногенное смертельное нейродегенеративное заболевание, которое отличается прогрессирующей хореей, нарушением нейропсихиатрических и когнитивных функций. Известно, что хорея Гентингтона обусловлена экспансией аутосомных доминантных триплетных (CAG) повторов в экзоне 1 гена гентингтина (HTT), который кодирует белок HTT с полиглутаминовым участком на его N-конце. Эта экспансия повторов ведет к приобретению токсичной функции HTT и в конечном итоге ведет к стриарной нейродегенерации, которая прогрессирует до обширной атрофии головного мозга. Похоже, что средние шипиковые нейроны полосатого тела особенно уязвимы при HD, с потерей вплоть до 95%, тогда как промежуточные нейроны главным образом сохранены.

[0065] Хорея Гентингтона оказывает сильное влияние на качество жизни. Симптомы обычно возникают в возрасте между 35 и 44 годами и усредненная ожидаемая продолжительность жизни после начала заболевания составляет 10-25 лет. В малой процентной доле популяции с HD (~6%) начало заболевания наступает до возраста 21 год с возникновением акинетико-ригидного синдрома. Эти случаи склонны прогрессировать быстрее, чем те, у которых более позднее начало, и их классифицируют как ювенильный или вестфальский вариант HD. По оценкам, приблизительно 35000-70000 пациентов в настоящее время страдают HD в США И Европе. В настоящее время только симптоматическое облегчение и поддерживающая терапия доступны для лечения HD, а излечение еще предстоит идентифицировать. В конечном итоге, индивидуумы с HD погибают от пневмонии, сердечной недостаточности или других осложнений, таких как физические повреждения при падениях.

[0066] Без ограничения теорией, функция белка HTT дикого типа может служить в качестве каркаса для того, чтобы координировать комплексы других белков. HTT представляет собой очень большой белок (67 экзонов, 3144 аминокислоты, ~350 кДа), который проходит обширную посттрансляционную модификацию и имеет множество сайтов для взаимодействия с другими белками, в частности на своем N-конце (в то же время, область, которая несет повторы при HD). HTT локализован в первую очередь в цитоплазме, но показано, что он перемещается в ядро, где он может регулировать транскрипцию генов. Также предполагают, что HTT играет определенную роль в везикулярном транспорте и регулирует направленную миграцию РНК.

[0067] В качестве неограничивающего примера, последовательность белка HTT представляет собой SEQ ID NO:1 (NCBI NP_002102.4) и последовательность нуклеиновой кислоты HTT представляет собой SEQ ID NO:2 (NCBI NM_002111.7).

[0068] Изначально полагали, что механизмы, посредством которых белок HTT с полиглутаминовой экспансией нарушает нормальную функцию HTT и ведет к нейротоксичности, представляют собой заболевание гаплонедостаточности, эту теорию опровергли, когда концевая делеция гена HTT у человека не привела к развитию HD, что подсказывает, что полностью экспрессированный белок HTT не критичен для выживаемости. Однако условный нокаут HTT у мышей привел к нейродегенерации, указывая на то, что некоторое количество HTT необходимо для выживаемости клетки. Белок гентингтин экспрессируют все клетки, хотя его концентрация выше всего в головном мозге, где в ядрах нейронов находят большие агрегаты аномального HTT. В головном мозге пациентов с HD, HTT агрегирует в аномальные ядерные включения. Теперь полагают, что к нейротоксичности ведет этот процесс нарушения укладки и агрегации вместе с ассоциированными белковыми промежуточными соединениями (то есть, растворимыми частицами и токсичными N-концевыми фрагментами). Фактически, HD относится к семейству из девяти дополнительных генетических нарушений человека, все они отличаются генами с экспансией CAG и получаемыми полиглутаминовыми (поли-Q) белковыми продуктами с последующим формированием внутринейронных агрегатов. Что интересно, во всех этих заболеваниях длина экспансии коррелирует с возрастом начала и скоростью прогрессирования заболевания, причем более длинные экспансии связаны с большей тяжестью заболевания.

[0069] Гипотезы о молекулярных механизмах лежащих в основе нейротоксичности белка HTT с полиглутаминовой экспансией и его образующихся агрегатов сильно разнятся, но включают активацию каспаз, дисрегуляцию транскрипционных путей, увеличенное образование реакционноспособных частиц кислорода, нарушение функции митохондрий, нарушенный аксональный транспорт и/или ингибирование систем разрушения белков в клетке. HTT с полиглутаминовой экспансией может не только приобретать токсичную функцию, но также проявлять доминантный негативный эффект посредством препятствования нормальной функции других клеточных белков и процессов. HTT также вовлечен в неклеточную автономную нейротоксичность, в соответствии с чем клетка, содержащая HTT, распространяет HTT на другие нейроны по соседству.

[0070] Исследования в животных моделях HD показали, что реверсия фенотипа возможна, например, после выключения гена в моделях с регулируемой экспрессией. В мышиной модели, позволяющей выключать экспрессию белка HTT с 94-полиглутаминовым повтором, наступала не только реверсия клинического синдрома, но также устранение внутриклеточных агрегатов. Кроме того, животные модели, в которых тестировали сайленсинг HTT, демонстрировали перспективные результаты, причем терапия хорошо переносилась и показывала потенциальный терапевтический эффект.

[0071] Настоящее изобретение предусматривает модулирующие полинуклеотиды, например, молекулы миРНК, нацеленные на ген HTT, и способы их разработки и изготовления. Без ограничения одной теорией реализуемости, изобретение относится к модулирующим полинуклеотидам, в том числе миРНК, которые препятствуют экспрессии HTT, в том числе экспрессии гена мутантного HTT и/или гена HTT дикого типа. В частности, в настоящем изобретении используют вирусные векторы, такие как аденоассоциированные вирусные (AAV) векторы, содержащие последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую молекулы миРНК по настоящему изобретению. AAV векторы, содержащие последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую молекулы миРНК по настоящему изобретению, могут увеличивать доставку активных средств в нейроны, представляющие интерес, такие как средние шипиковые нейроны полосатого тела и кортикальные нейроны. МиРНК-дуплексы или кодирующие дцРНК, нацеленные на ген HTT, могут быть способны значительно ингибировать экспрессию гена HTT (например, уровень мРНК) внутри клеток; следовательно, улучшая стресс, индуцированный экспрессией HTT, внутри клеток, такой как агрегирование белка и формирование включение, увеличенные свободные радикалы, нарушение функции митохондрий и метаболизм РНК.

[0072] Симптомы HD могут включать признаки, относимые к дегенерации CNS, такие как, но не ограничиваясь этим, хорея, дистония, брадикинезия, нарушение координации, раздражительность и депрессия, трудности с решением проблем, снижение способности человека функционировать в своей нормальной повседневной жизни, ослабленная речь и затруднения при глотании, а также признаки, не относимые к дегенерации CNS, такие как, но не ограничиваясь этим, потеря массы, мышечная атрофия, нарушение метаболических функций и эндокринные нарушения.

[0073] Такую миРНК-опосредованное ингибирование экспрессии HTT можно использовать для лечения HD. В соответствии с настоящим изобретением, способы лечения и/или улучшения HD у пациента включают введение пациенту эффективного количества AAV вектора, содержащего последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую молекулы миРНК по настоящему изобретению, в клетки. Введение AAV вектора, содержащего такую последовательность нуклеиновой кислоты, будет кодировать молекулы миРНК, которые вызывают ингибирование/сайленсинг экспрессии гена HTT.

[0074] В одном из вариантов осуществления вектор, например, AAV векторы, снижает количество HTT у нуждающегося в этом индивида и, таким образом, обеспечивает терапевтический эффект, как раскрыто в настоящем документе.

[0075] В одном из вариантов осуществления субъект имеет полностью пенетрантную HD, где ген HTT имеет 41 или больше повторов CAG (например, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90 или больше чем 90 повторов CAG).

[0076] В одном из вариантов осуществления субъект имеет неполную пенетрантность, где ген HTT имеет между 36 и 40 повторами CAG (например, 36, 37, 38, 39 и 40 повторов CAG).

[0077] Модельные системы для изучения хореи Гентингтона, которые можно использовать с миРНК и векторами, описанными в настоящем документе, включают, но не ограничиваясь этим, клеточные модели (например, первичные нейроны и индуцированные плюрипотентные стволовые клетки), беспозвоночные модели (например, дрозофила или Caenorhabditis elegans), мышиные модели (например, мышиная модель YAC128; мышиная модель R6/2; BAC, YAC и мышиная модель с нокином), крысиные модели (например, BAC) и модели на крупных млекопитающих (например, свиньях, овцах или обезьянах).

Модулирующие полинуклеотиды

[0078] В одном из вариантов осуществления модулирующие полинуклеотиды, например, молекулы РНК или ДНК, можно использовать для того, чтобы лечить нейродегенеративное заболевание, в частности, хорею Гентингтона (HD). Как используют в настоящем документе, «модулирующий полинуклеотид» представляет собой любую последовательность(и) нуклеиновой кислоты, которая функционирует для того, чтобы модулировать (повышать или снижать) уровень или количество целевого гена, например, уровни мРНК или белка.

[0079] В одном из вариантов осуществления модулирующие полинуклеотиды могут содержать по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну молекулу миРНК. Нуклеиновые кислоты могут независимо, если имеет место больше чем одна, кодировать 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, или больше чем 9 молекул миРНК.

Молекулы миРНК

[0080] Настоящее изобретение относится к индуцированному РНК-интерференцией (RNAi) ингибированию экспрессии гена для лечения нейродегенеративных нарушений. В настоящем документе предусмотрены миРНК-дуплексы или кодируемая дцРНК, которые нацелены на ген HTT (обозначены в настоящем документе совместно как «молекулы миРНК»). Такие миРНК-дуплексы или кодируемая дцРНК могут снижать или вызывать сайленсинг экспрессии гена HTT в клетках, например, шипиковых нейронах среднего размера, кортикальных нейронах и/или астроцитах, тем самым, улучшая симптомы хореи Гентингтона (HD).

[0081] RNAi (также известная как посттранскрипционный сайленсинг генов (PTGS), тушение или совместная супрессия) представляет собой процесс посттранскрипционного сайленсинга генов, в котором молекулы РНК, со специфичностью к определенным последовательностям, ингибируют экспрессию гена, обычно, вызывая разрушение конкретных молекул РНК. Активными компонентами RNAi являются короткая/малая двухцепочечная РНК (дцРНК), называемая малой интерферирующей РНК (миРНК), которая обычно содержит 15-30 нуклеотидов (например, от 19 до 25, от 19 до 24 или 19-21 нуклеотид) и 2 нуклеотида, свисающих с 3'-конца, и которая соответствует последовательности нуклеиновой кислоты целевого гена. Эти короткие частицы РНК можно получать естественным путем in vivo с помощью дайсер-опосредованного расщепления более крупной дцРНК, и они функциональны в клетках млекопитающих.

[0082] Экспрессируемые в природе малые молекулы РНК, называемые микроРНК (мкРНК), вызывают сайленсинг генов посредством регуляции экспрессии мРНК. мкРНК-содержащий РНК-индуцированный комплекс сайленсинга (RISC) направлен на мРНК и предоставляет безупречную комплементарность последовательностей с нуклеотидами 2-7 в 5'-области мкРНК, которую называют областью затравки, и другими парами оснований в своей 3'-области. мкРНК-опосредованная понижающая регуляция экспрессии гена может быть обусловлена расщеплением целевых мРНК, трансляционным ингибированием целевых мРНК или распадом мРНК. Направляющие последовательности мкРНК обычно располагаются в 3'-UTR целевых мРНК. Одна мкРНК может направленно воздействовать больше чем на 100 транскриптов из различных генов и на одну мРНК могут направленно воздействовать различные мкРНК.

[0083] МиРНК-дуплексы или дцРНК, направленные на конкретную мРНК, можно разрабатывать и синтезировать in vitro и вводить в клетки для активации процессов RNAi. Elbashir et al. показали, что 21-нуклеотидные миРНК-дуплексы (называемые малыми интерферирующими РНК) способны вызывать сильный и специфичный нокдаун гена без индукции иммунного ответа в клетках млекопитающих (Elbashir SM et al., Nature, 2001411494-498). После этого начального сообщения, посттранскрипционный сайленсинг генов с помощью миРНК быстро стал мощным инструментом для генетического анализа в клетках млекопитающих и обладает потенциалом для получения новых терапевтических средств.

[0084] Молекулы RNAi, которые разрабатывали для направленного воздействия на последовательность нуклеиновой кислоты, которая кодирует белки с полиглутаминовыми повторами, которые вызывают заболевания полиглутаминовой экспансии, такие как хорея Гентингтона, описаны в патенте США № 9169483 и 9181544 и международной публикации патента № WO2015179525, содержание каждого из которых включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме. Каждое из патентов США №№ 9169483 и 9181544 и международной публикации патента № WO2015179525 предусматривает выделенные дуплексы РНК, содержащие первую цепь РНК (например, 15 смежных нуклеотидов) и вторую цепь РНК (например, комплементарную по меньшей мере 12 непрерывным нуклеотидам первой цепи), где дуплекс РНК составляет приблизительно от 15 до 30 пар оснований в длину. Первую цепь РНК и вторую цепь РНК можно функционально связывать с помощью РНК петли (от ~4 до 50 нуклеотидов) для того, чтобы формировать шпилечную структуру, которую можно вставлять в экспрессирующую кассету. Неограничивающие примеры петлевых частей включают SEQ ID NO:9-14 из патента США № 9169483, содержание которого включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме. Неограничивающие примеры цепей РНК, которые можно использовать, или полная последовательность или часть последовательности, чтобы формировать дуплексы РНК, включают SEQ ID NO:1-8 из патента США № 9169483 и SEQ ID NO:1-11, 33-59, 208-210, 213-215 и 218-221 из патента США № 9181544, содержание каждого из которых включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме. Неограничивающие примеры молекул RNAi включают SEQ ID NO:1-8 из патента США № 9169483, SEQ ID NO:1-11, 33-59, 208-210, 213-215 и 218-221 из патента США № 9181544 и SEQ ID NO:1, 6, 7 и 35-38 из международной публикации патента № WO2015179525, содержание каждого из которых включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме.

[0085] Синтезированные in vitro молекулы миРНК можно вводить в клетки для того, чтобы активировать RNAi. Экзогенный миРНК-дуплекс, когда его вводят в клетки, подобно эндогенной дцРНК, может собираться для того, чтобы формировать РНК-индуцированный комплекс сайленсинга (RISC), многокомпонентный комплекс, который взаимодействует с последовательностями РНК, которые комплементарны одной из двух цепей миРНК-дуплекса (то есть, антисмысловой цепи). Во время процесса, смысловая цепь (или сопровождающая цепь) миРНК утрачивается из комплекса, тогда как антисмысловая цепь (или направляющая цепь) миРНК спаривается с комплементарной ей РНК. В частности, мишенями миРНК-содержащих RISC комплексов являются мРНК, предоставляющие безупречную комплементарность последовательностей. Затем опосредованный миРНК сайленсинг генов происходит посредством расщепления, высвобождения и разрушения мишени.

[0086] МиРНК-дуплекс, состоящий из смысловой цепи, гомологичной целевой мРНК, и антисмысловой цепи, которая комплементарна целевой мРНК, предлагает значительно больше преимуществ в отношении эффективности для разрушения целевой РНК по сравнению с использованием одноцепочечной (оц) миРНК (например, РНК антисмысловой цепи или антисмысловые олигонуклеотиды). Во многих случаях, это требует более высокой концентрации оц-миРНК для достижения активности эффективного сайленсинга генов для соответствующего дуплекса.

[0087] Любые из вышеуказанных молекул можно кодировать с помощью AAV вектора или генома вектора.

Разработка и последовательности миРНК-дуплекса, нацеленного на ген HTT

[0088] В данной области предложены некоторые руководства по разработке миРНК. Эти руководства в целом рекомендуют создавать 19-нуклеотидную дуплексную область, симметричные 2-3 нуклеотидные свисающие 3'-концы, 5'-фосфатные и 3'-гидроксильные группы, направленные на область в гене, подлежащем сайленсингу. Другие правила, которыми можно руководствоваться для предпочтения последовательности миРНК, включают, но не ограничиваясь этим (i) A/U на 5′-конце антисмысловой цепи; (ii) G/C на 5′-конце смысловой цепи; (iii) по меньшей мере пять остатков A/U в 5′-концевой трети антисмысловой цепи; и (iv) отсутствие любых GC фрагментов больше 9 нуклеотидов в длину. В соответствии с такими соображениями, вместе с конкретной последовательностью целевого гена, можно легко разрабатывать высокоэффективные молекулы миРНК, необходимые для супрессии экспрессии гена-мишени млекопитающего.

[0089] В соответствии с настоящим изобретением, разрабатывают молекулы миРНК (например, миРНК-дуплексы или кодируемая дцРНК), которые нацелены на ген HTT. Такие молекулы миРНК, в частности, могут супрессировать экспрессию гена HTT и продуцирование белка. В некоторых аспектах, молекулы миРНК разрабатывают и используют для того, чтобы избирательно «нокаутировать» варианты гена HTT в клетках, то есть, мутантные транскрипты HTT, которые идентифицируют у пациентов с заболеванием HD. В некоторых аспектах, молекулы миРНК разрабатывают и используют для того, чтобы избирательно осуществлять «нокдаун» вариантов гена HTT в клетках. В других аспектах, молекулы миРНК способны ингибировать или супрессировать и ген HTT дикого типа и мутантный ген HTT.

[0090] В одном из вариантов осуществления молекула миРНК по настоящему изобретению содержит смысловую цепь и комплементарную антисмысловую цепь, где обе цепи гибридизуют вместе для того, чтобы формировать структуру дуплекса. Антисмысловая цепь обладает достаточной комплементарностью с последовательностью мРНК HTT, чтобы направлять RNAi конкретной мишени, то есть, молекула миРНК имеет последовательность, достаточную для того, чтобы запускать разрушение целевой мРНК с помощью механизма или процесса RNAi.

[0091] В одном из вариантов осуществления молекула миРНК по настоящему изобретению содержит смысловую цепь и комплементарную антисмысловую цепь, где обе цепи гибридизуют вместе для того, чтобы формировать структуру дуплекса и где начальный сайт гибридизации с мРНК HTT находится между нуклеотидами 100 и 7000 в последовательности мРНК HTT. В качестве неограничивающего примера, начальный сайт может находиться между нуклеотидами 100-150, 150-200, 200-250, 250-300, 300-350, 350-400, 400-450, 450-500, 500-550, 550-600, 600-650, 650-700, 700-70, 750-800, 800-850, 850-900, 900-950, 950-1000, 1000-1050, 1050-1100, 1100-1150, 1150-1200, 1200-1250, 1250-1300, 1300-1350, 1350-1400, 1400-1450, 1450-1500, 1500-1550, 1550-1600, 1600-1650, 1650-1700, 1700-1750, 1750-1800, 1800-1850, 1850-1900, 1900-1950, 1950-2000, 2000-2050, 2050-2100, 2100-2150, 2150-2200, 2200-2250, 2250-2300, 2300-2350, 2350-2400, 2400-2450, 2450-2500, 2500-2550, 2550-2600, 2600-2650, 2650-2700, 2700-2750, 2750-2800, 2800-2850, 2850-2900, 2900-2950, 2950-3000, 3000-3050, 3050-3100, 3100-3150, 3150-3200, 3200-3250, 3250-3300, 3300-3350, 3350-3400, 3400-3450, 3450-3500, 3500-3550, 3550-3600, 3600-3650, 3650-3700, 3700-3750, 3750-3800, 3800-3850, 3850-3900, 3900-3950, 3950-4000, 4000-4050, 4050-4100, 4100-4150, 4150-4200, 4200-4250, 4250-4300, 4300-4350, 4350-4400, 4400-4450, 4450-4500, 4500-4550, 4550-4600, 4600-4650, 4650-4700, 4700-4750, 4750-4800, 4800-4850, 4850-4900, 4900-4950, 4950-5000, 5000-5050, 5050-5100, 5100-5150, 5150-5200, 5200-5250, 5250-5300, 5300-5350, 5350-5400, 5400-5450, 5450-5500, 5500-5550, 5550-5600, 5600-5650, 5650-5700, 5700-5750, 5750-5800, 5800-5850, 5850-5900, 5900-5950, 5950-6000, 6000-6050, 6050-6100, 6100-6150, 6150-6200, 6200-6250, 6250-6300, 6300-6350, 6350-6400, 6400-6450, 6450-6500, 6500-6550, 6550-6600, 6600-6650, 6650-6700, 6700-6750, 6750-6800, 6800-6850, 6850-6900, 6900-6950, 6950-7000, 7000-7050, 7050-7100, 7100-7150, 7150-7200, 7200-7250, 7250-7300, 7300-7350, 7350-7400, 7400-7450, 7450-7500, 7500-7550, 7550-7600, 7600-7650, 7650-7700, 7700-7750, 7750-7800, 7800-7850, 7850-7900, 7900-7950, 7950-8000, 8000-8050, 8050-8100, 8100-8150, 8150-8200, 8200-8250, 8250-8300, 8300-8350, 8350-8400, 8400-8450, 8450-8500, 8500-8550, 8550-8600, 8600-8650, 8650-8700, 8700-8750, 8750-8800, 8800-8850, 8850-8900, 8900-8950, 8950-9000, 9000-9050, 9050-9100, 9100-9150, 9150-9200, 9200-9250, 9250-9300, 9300-9350, 9350-9400, 9400-9450, 9450-9500, 9500-9550, 9550-9600, 9600-9650, 9650-9700, 9700-9750, 9750-9800, 9800-9850, 9850-9900, 9900-9950, 9950-10000, 10000-10050, 10050-10100, 10100-10150, 10150-10200, 10200-10250, 10250-10300, 10300-10350, 10350-10400, 10400-10450, 10450-10500, 10500-10550, 10550-10600, 10600-10650, 10650-10700, 10700-10750, 10750-10800, 10800-10850, 10850-10900, 10900-10950, 10950-11000, 11050-11100, 11100-11150, 11150-11200, 11200-11250, 11250-11300, 11300-11350, 11350-11400, 11400-11450, 11450-11500, 11500-11550, 11550-11600, 11600-11650, 11650-11700, 11700-11750, 11750-11800, 11800-11850, 11850-11900, 11900-11950, 11950-12000, 12000-12050, 12050-12100, 12100-12150, 12150-12200, 12200-12250, 12250-12300, 12300-12350, 12350-12400, 12400-12450, 12450-12500, 12500-12550, 12550-12600, 12600-12650, 12650-12700, 12700-12750, 12750-12800, 12800-12850, 12850-12900, 12900-12950, 12950-13000, 13050-13100, 13100-13150, 13150-13200, 13200-13250, 13250-13300, 13300-13350, 13350-13400, 13400-13450 и 13450-13500 в последовательности мРНК HTT. В качестве еще одного другого неограничивающего примера, начальный сайт может представлять собой нуклеотид 315, 316, 317, 318, 319, 320, 321, 322, 323, 324, 325, 326, 327, 328, 329, 330, 331, 332, 333, 334, 335, 336, 337, 338, 339, 340, 341, 342, 343, 344, 345, 346, 347, 348, 349, 350, 595, 596, 597, 598, 599, 600, 601, 602, 603, 604, 605, 606, 607, 608, 609, 610, 611, 612, 613, 614, 615, 616, 617, 618, 619, 620, 621, 622, 623, 624, 625, 715, 716, 717, 718, 719, 720, 721, 722, 723, 724, 725, 875, 876, 877, 878, 879, 880, 881, 882, 883, 884, 885, 886, 887, 888, 889, 890, 891, 892, 893, 894, 895, 896, 897, 898, 899, 900, 1375, 1376, 1377, 1378, 1379, 1380, 1381, 1382, 1383, 1384, 1385, 1386, 1387, 1388, 1389, 1390, 1391, 1392, 1393, 1394, 1395, 1396, 1397, 1398, 1399, 1400, 1401, 1402, 1403, 1404, 1405, 1406, 1407, 1408, 1409, 1410, 1411, 1412, 1413, 1414, 1415, 1416, 1417, 1418, 1419, 1420, 1421, 1422, 1423, 1424, 1425, 1426, 1427, 1428, 1429, 1430, 1431, 1432, 1433, 1434, 1435, 1436, 1437, 1438, 1439, 1440, 1441, 1442, 1443, 1444, 1445, 1446, 1447, 1448, 1449, 1450, 1660, 1661, 1662, 1663, 1664, 1665, 1666, 1667, 1668, 1669, 1670, 1671, 1672, 1673, 1674, 1675, 2050, 2051, 2052, 2053, 2054, 2055, 2056, 2057, 2058, 2059, 2060, 2061, 2062, 2063, 2064, 2065, 2066, 2067, 2068, 2069, 2070, 2071, 2072, 2073, 2074, 2075, 2076, 2077, 2078, 2079, 2080, 2081, 2082, 2083, 2084, 2085, 2086, 2087, 2088, 2089, 2090, 2091, 2092, 2093, 2094, 2095, 2096, 2097, 2098, 2099, 2100, 2580, 2581, 2582, 2583, 2584, 2585, 2586, 2587, 2588, 2589, 2590, 2591, 2592, 2593, 2594, 2595, 2596, 2597, 2598, 2599, 2600, 2601, 2602, 2603, 2604, 2605, 4525, 4526, 4527, 4528, 4529, 4530, 4531, 4532, 4533, 4534, 4535, 4536, 4537, 4538, 4539, 4540, 4541, 4542, 4543, 4544, 4545, 4546, 4547, 4548, 4549, 4550, 4575, 4576, 4577, 4578, 4579, 4580, 4581, 4582, 4583, 4584, 4585, 4586, 4587, 4588, 4589, 4590, 4591, 4592, 4593, 4594, 4595, 4596, 4597, 4598, 4599, 4600, 4850, 4851, 4852, 4853, 4854, 4855, 4856, 4857, 4858, 4859, 4860, 4861, 4862, 4863, 4864, 4865, 4866, 4867, 4868, 4869, 4870, 4871, 4872, 4873, 4874, 4875, 4876, 4877, 4878, 4879, 4880, 4881, 4882, 4883, 4884, 4885, 4886, 4887, 4888, 4889, 4890, 4891, 4892, 4893, 4894, 4895, 4896, 4897, 4898, 4899, 4900, 5460, 5461, 5462, 5463, 5464, 5465, 5466, 5467, 5468, 5469, 5470, 5471, 5472, 5473, 5474, 5475, 5476, 5477, 5478, 5479, 5480, 6175, 6176, 6177, 6178, 6179, 6180, 6181, 6182, 6183, 6184, 6185, 6186, 6187, 6188, 6189, 6190, 6191, 6192, 6193, 6194, 6195, 6196, 6197, 6198, 6199, 6200, 6315, 6316, 6317, 6318, 6319, 6320, 6321, 6322, 6323, 6324, 6325, 6326, 6327, 6328, 6329, 6330, 6331, 6332, 6333, 6334, 6335, 6336, 6337, 6338, 6339, 6340, 6341, 6342, 6343, 6344, 6345, 6600, 6601, 6602, 6603, 6604, 6605, 6606, 6607, 6608, 6609, 6610, 6611, 6612, 6613, 6614, 6615, 6725, 6726, 6727, 6728, 6729, 6730, 6731, 6732, 6733, 6734, 6735, 6736, 6737, 6738, 6739, 6740, 6741, 6742, 6743, 6744, 6745, 6746, 6747, 6748, 6749, 6750, 6751, 6752, 6753, 6754, 6755, 6756, 6757, 6758, 6759, 6760, 6761, 6762, 6763, 6764, 6765, 6766, 6767, 6768, 6769, 6770, 6771, 6772, 6773, 6774, 6775, 7655, 7656, 7657, 7658, 7659, 7660, 7661, 7662, 7663, 7664, 7665, 7666, 7667, 7668, 7669, 7670, 7671, 7672, 8510, 8511, 8512, 8513, 8514, 8515, 8516, 8715, 8716, 8717, 8718, 8719, 8720, 8721, 8722, 8723, 8724, 8725, 8726, 8727, 8728, 8729, 8730, 8731, 8732, 8733, 8734, 8735, 8736, 8737, 8738, 8739, 8740, 8741, 8742, 8743, 8744, 8745, 9250, 9251, 9252, 9253, 9254, 9255, 9256, 9257, 9258, 9259, 9260, 9261, 9262, 9263, 9264, 9265, 9266, 9267, 9268, 9269, 9270, 9480, 9481, 9482, 9483, 9484, 9485, 9486, 9487, 9488, 9489, 9490, 9491, 9492, 9493, 9494, 9495, 9496, 9497, 9498, 9499, 9500, 9575, 9576, 9577, 9578, 9579, 9580, 9581, 9582, 9583, 9584, 9585, 9586, 9587, 9588, 9589, 9590, 10525, 10526, 10527, 10528, 10529, 10530, 10531, 10532, 10533, 10534, 10535, 10536, 10537, 10538, 10539, 10540, 11545, 11546, 11547, 11548, 11549, 11550, 11551, 11552, 11553, 11554, 11555, 11556, 11557, 11558, 11559, 11560, 11875, 11876, 11877, 11878, 11879, 11880, 11881, 11882, 11883, 11884, 11885, 11886, 11887, 11888, 11889, 11890, 11891, 11892, 11893, 11894, 11895, 11896, 11897, 11898, 11899, 11900, 11915, 11916, 11917, 11918, 11919, 11920, 11921, 11922, 11923, 11924, 11925, 11926, 11927, 11928, 11929, 11930, 11931, 11932, 11933, 11934, 11935, 11936, 11937, 11938, 11939, 11940, 13375, 13376, 13377, 13378, 13379, 13380, 13381, 13382, 13383, 13384, 13385, 13386, 13387, 13388, 13389 и 13390 в последовательности мРНК HTT.

[0092] В некоторых вариантах осуществления последовательности антисмысловой цепи и целевой мРНК комплементарны на 100%. Антисмысловая цепь может быть комплементарной любой части последовательности целевой мРНК.

[0093] В других вариантах осуществления последовательности антисмысловой цепи и целевой мРНК содержат по меньшей мере одно несовпадение. В качестве неограничивающего примера, антисмысловая цепь и последовательность целевой мРНК обладают по меньшей мере 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% или по меньшей мере 20-30%, 20-40%, 20-50%, 20-60%, 20-70%, 20-80%, 20-90%, 20-95%, 20-99%, 30-40%, 30-50%, 30-60%, 30-70%, 30-80%, 30-90%, 30-95%, 30-99%, 40-50%, 40-60%, 40-70%, 40-80%, 40-90%, 40-95%, 40-99%, 50-60%, 50-70%, 50-80%, 50-90%, 50-95%, 50-99%, 60-70%, 60-80%, 60-90%, 60-95%, 60-99%, 70-80%, 70-90%, 70-95%, 70-99%, 80-90%, 80-95%, 80-99%, 90-95%, 90-99% или 95-99% комплементарностью.

[0094] В соответствии с настоящим изобретением, молекула миРНК имеет длину приблизительно 10-50 или больше нуклеотидов, то есть, каждая цепь содержит 10-50 нуклеотидов (или нуклеотидных аналогов). Предпочтительно, молекулы миРНК имеют длину приблизительно 15-30, например, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 или 30 нуклеотидов в каждой цепи, где одна из цепей обладает достаточной комплементарностью к целевой области. В одном из вариантов осуществления молекула миРНК имеет длину приблизительно от 19 до 25, от 19 до 24 или от 19 до 21 нуклеотида.

[0095] В некоторых вариантах осуществления молекулы миРНК по настоящему изобретению могут представлять собой синтетические дуплексы РНК, содержащие приблизительно от 19 нуклеотидов приблизительно до 25 нуклеотидов и два свисающих нуклеотида на 3'-конце. В некоторых аспектах, молекулы миРНК могут представлять собой немодифицированные молекулы РНК. В других аспектах, молекулы миРНК могут содержать по меньшей мере один модифицированный нуклеотид, например, модификации основания, сахара или остова.

[0096] В одном из вариантов осуществления молекулы миРНК по настоящему изобретению могут содержать нуклеотидную последовательность, такую как, но не ограничиваясь этим, антисмысловые (направляющие) последовательности в таблице 1 или их фрагмент или вариант. В качестве неограничивающего примера, антисмысловая последовательность, используемая в молекуле миРНК по настоящему изобретению, представляет собой по меньшей мере 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% или по меньшей мере 20-30%, 20-40%, 20-50%, 20-60%, 20-70%, 20-80%, 20-90%, 20-95%, 20-99%, 30-40%, 30-50%, 30-60%, 30-70%, 30-80%, 30-90%, 30-95%, 30-99%, 40-50%, 40-60%, 40-70%, 40-80%, 40-90%, 40-95%, 40-99%, 50-60%, 50-70%, 50-80%, 50-90%, 50-95%, 50-99%, 60-70%, 60-80%, 60-90%, 60-95%, 60-99%, 70-80%, 70-90%, 70-95%, 70-99%, 80-90%, 80-95%, 80-99%, 90-95%, 90-99% или 95-99% нуклеотидной последовательности в таблице 1. В качестве другого неограничивающего примера, антисмысловая последовательность, используемая в молекуле миРНК по настоящему изобретению, содержит по меньшей мере 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 или больше чем 21 последовательный нуклеотид нуклеотидной последовательности в таблице 1. В качестве еще одного другого неограничивающего примера, антисмысловая последовательность, используемая в молекуле миРНК по настоящему изобретению, содержит нуклеотиды 1-22, 1-21, 1-20, 1-19, 1-18, 1-17, 1-16, 1-15, 1-14, 1-13, 1-12, 1-11, 1-10, 1-9, 1-8, 2-22, 2-21, 2-20, 2-19, 2-18, 2-17, 2-16, 2-15, 2-14, 2-13, 2-12, 2-11, 2-10, 2-9, 2-8, 3-22, 3-21, 3-20, 3-19, 3-18, 3-17, 3-16, 3-15, 3-14, 3-13, 3-12, 3-11, 3-10, 3-9, 3-8, 4-22, 4-21, 4-20, 4-19, 4-18, 4-17, 4-16, 4-15, 4-14, 4-13, 4-12, 4-11, 4-10, 4-9, 4-8, 5-22, 5-21, 5-20, 5-19, 5-18, 5-17, 5-16, 5-15, 5-14, 5-13, 5-12, 5-11, 5-10, 5-9, 5-8, 6-22, 6-21, 6-20, 6-19, 6-18, 6-17, 6-16, 6-15, 6-14, 6-13, 6-12, 6-11, 6-10, 7-22, 7-21, 7-20, 7-19, 7-18, 7-17, 7-16, 7-15, 7-14, 7-13, 7-12, 8-22, 8-21, 8-20, 8-19, 8-18, 8-17, 8-16, 8-15, 8-14, 8-13, 8-12, 9-22, 9-21, 9-20, 9-19, 9-18, 9-17, 9-16, 9-15, 9-14, 10-22, 10-21, 10-20, 10-19, 10-18, 10-17, 10-16, 10-15, 10-14, 11-22, 11-21, 11-20, 11-19, 11-18, 11-17, 11-16, 11-15, 11-14, 12-22, 12-21, 12-20, 12-19, 12-18, 12-17, 12-16, 13-22, 13-21, 13-20, 13-19, 13-18, 13-17, 13-16, 14-22, 14-21, 14-20, 14-19, 14-18, 14-17, 15-22, 15-21, 15-20, 15-19, 15-18, 16-22, 16-21, 16-20, 17-22, 17-21 или 18-22 из последовательностей в таблице 1.

Таблица 1. Антисмысловые последовательности

ID антисмысловой	Последовательность	SEQ ID NO:
A-2000	UUAACGUCAGUUCAUAAACUU	3
A-2000dt	UUAACGUCAGUUCAUAAACdTdT	4
A-2001	UGUCGGUACCGUCUAACACUU	5
A-2001dt	UGUCGGUACCGUCUAACACdTdT	6
A-2002	UAAGCAUGGAGCUAGCAGGUU	7
A-2002dt	UAAGCAUGGAGCUAGCAGGdTdT	8
A-2003	UACAACGAGACUGAAUUGCUU	9
A-2003dt	UACAACGAGACUGAAUUGCdTdT	10
A-2004	UUCAGUUCAUAAACCUGGAUU	11
A-2004dt	UUCAGUUCAUAAACCUGGAdTdT	12
A-2005	UAACGUCAGUUCAUAAACCUU	13
A-2005dt	UAACGUCAGUUCAUAAACCdTdT	14
A-2006	UCCGGUCACAACAUUGUGGUU	15
A-2006dt	UCCGGUCACAACAUUGUGGdTdT	16
A-2007	UUGCACGGUUCUUUGUGACUU	17
A-2007dt	UUGCACGGUUCUUUGUGACdTdT	18
A-2008	UUUUAUAACAAGAGGUUCAUU	19
A-2008dt	UUUUAUAACAAGAGGUUCAdTdT	20
A-2009	UCCAAAUACUGGUUGUCGGUU	21
A-2009dt	UCCAAAUACUGGUUGUCGGdTdT	22
A-2010	UAUUUUAGGAAUUCCAAUGUU	23
A-2010dt	UAUUUUAGGAAUUCCAAUGdTdT	24
A-2011	UUUAGGAAUUCCAAUGAUCUU	25
A-2011dt	UUUAGGAAUUCCAAUGAUCdTdT	26
A-2012dt	UUAAUCUCUUUACUGAUAUdTdT	27
A-2013dt	GAUUUUAGGAAUUCCAAUGdTdT	28
A-2014	UAAGCAUGGAGCUAGCAGGCUU	29
A-2015	UAAGCAUGGAGCUAGCAGGGU	30
A-2016	AAGGACUUGAGGGACUCGAAGU	31
A-2017	AAGGACUUGAGGGACUCGAAG	32
A-2018	AAGGACUUGAGGGACUCGA	33
A-2019	AGGACUUGAGGGACUCGAAGU	34
A-2020	GAGGACUUGAGGGACUCGAAGU	35
A-2021	AAGGACUUGAGGGACUCGAAGU	36
A-2022	AAGGACUUGAGGGACUCGAAGUU	37
A-2023	AAGGACUUGAGGGACUCGAAG	38
A-2024	AAGGACUUGAGGGACUCGA	39
A-2025	AAGGACUUGAGGGACUCGAAGG	40
A-2026	AAGGACUUGAGGGACUCGAAU	41
A-2027	AAGGACUUGAGGGACUCGAAGA	42
A-2028	AAGGACUUGAGGGACUCGAAGG	43
A-2029	AAGGACUUGAGGGACUCGAAGGU	44
A-2030	AAGGACUUGAGGGACUCGAAGGA	45
A-2031	AAGGACUUGAGGGACUCGAAG	46
A-2032	AAGGACUUGAGGGACUCGAAGU	47
A-2033	AAGGACUUGAGGGACUCGA	48
A-2034	AAGGACUUGAGGGACUCGAAGGA	49
A-2035	AAGGACUUGAGGGACUCGAAGG	50
A-2036	AAGGACUUGAGGGACUCGAAGGAU	51
A-2037	AAGGACUUGAGGGACUCGAAGGAUU	52
A-2038	AAGGACUUGAGGGACUCGAAG	53
A-2039	AAGGACUUGAGGGACUCGAAGGAA	54
A-2040	GAUGAAGUGCACACAUUGGAUGA	55
A-2041	GAUGAACUGCACACAUUGGAUG	56
A-2042	GAUGAAUUGCACACAGUAGAUGA	57
A-2043	AAGGACUUGAGGGACUCGAAGGUU	58
A-2044	AAGGACUUGAGGGACUCGAAGGUUU	59
A-2045	AAGGACUUGAGGGACUCGAAGGU	60
A-2046	AAGGACUUGAGGGACUCGAAGGUUUU	61
A-2047	AAGGACUUGAGGGACUCGAAGGUUUUU	62
A-2048	AAGGACUUGAGGGACUCGAAGG	63
A-2049	UAAGGACUUGAGGGACUCGAAG	64
A-2050	AAGGACUUGAGGGACUCGAAG	65
A-2051	AAGGACUUGAGGGACUCGAAGU	66
A-2052	AAGGACUUGAGGGACUCGAAGACGAGUCCC	67
A-2053	AAGGACUUGAGGGACUCGAAGACGAGUCCCA	68
A-2054	AAGGACUUGAGGGACUCGAAGACGAGUCCCU	69
A-2055	GAUGAAGUGCACACAUUGGAUAC	70
A-2056	GAUGAAGUGCACACAUUGGAUACA	71
A-2057	GAUGAAGUGCACACAUUGGAUACAAUGUGU	72
A-2058	GAUGAAGUGCACACAUUGGAU	73
A-2059	GAUGAAGUGCACACAUUGGAUA	74
A-2060	GAUGAAUUGCACACAGUAGAUAU	75
A-2061	GAUGAAUUGCACACAGUAGAUAUAC	76
A-2062	GAUGAAUUGCACACAGUAGAUAUACUGUGU	77
A-2063	GAUGAAUUGCACACAGUAGAUAUA	78
A-2064	AUGAAUUGCACACAGUAGAUAUAC	79
A-2065	GAUGAAUUGCACACAGUAGAUA	80
A-2066	GAUGAAUUGCACACAGUAGAUAUACUGUGU	81
A-2067	UACAACGAGACUGAAUUGCU	82
A-2068	ACAACGAGACUGAAUUGCUU	83
A-2069	UCCGGUCACAACAUUGUGGUUC	84
A-2070	UCCGGUCACAACAUUGUGGU	85
A-2071	UCCGGUCACAACAUUGUG	86
A-2072	CCGGUCACAACAUUGUGGUU	87
A-2073	UUUUAUAACAAGAGGUUCAU	88
A-2074	UUUAUAACAAGAGGUUCAUU	89
A-2075	UAAGCAUGGAGCUAGCAGGU	90
A-2076	AAGCAUGGAGCUAGCAGGUU	91
A-2077	CCAAAUACUGGUUGUCGGUU	92
A-2078	UACAACGAGACUGAAUUGCUUU	93
A-2079	UAACGUCAGUUCAUAAACCUUU	94
A-2080	GUCCGGUCACAACAUUGUGGUU	95
A-2081	UCCGGUCACAACAUUGUGGUUUG	96
A-2082	UCCGGUCACAACAUUGUGGUUU	97
A-2083	UCCGGUCACAACAUUGUGG	98
A-2084	UAAGCAUGGAGCUAGCAGGUUU	99
A-2085	AAGCAUGGAGCUAGCAGGUUU	100
A-2086	UCCAAAUACUGGUUGUCGGUUU	101
A-2087	CCAAAUACUGGUUGUCGGUUU	102

[0097] В одном из вариантов осуществления молекулы миРНК по настоящему изобретению могут содержать нуклеотидную последовательность, такую как, но не ограничиваясь этим, смысловые (сопровождающие) последовательности в таблице 2 или их фрагмент или вариант. В качестве неограничивающего примера, смысловая последовательность, используемая в молекуле миРНК по настоящему изобретению, представляет собой по меньшей мере 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% или по меньшей мере 20-30%, 20-40%, 20-50%, 20-60%, 20-70%, 20-80%, 20-90%, 20-95%, 20-99%, 30-40%, 30-50%, 30-60%, 30-70%, 30-80%, 30-90%, 30-95%, 30-99%, 40-50%, 40-60%, 40-70%, 40-80%, 40-90%, 40-95%, 40-99%, 50-60%, 50-70%, 50-80%, 50-90%, 50-95%, 50-99%, 60-70%, 60-80%, 60-90%, 60-95%, 60-99%, 70-80%, 70-90%, 70-95%, 70-99%, 80-90%, 80-95%, 80-99%, 90-95%, 90-99% или 95-99% нуклеотидной последовательности в таблице 2. В качестве другого неограничивающего примера, смысловая последовательность, используемая в молекуле миРНК по настоящему изобретению, содержит по меньшей мере 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 или больше чем 21 последовательный нуклеотид нуклеотидной последовательности в таблице 2. В качестве еще одного другого неограничивающего примера, смысловая последовательность, используемая в молекуле миРНК по настоящему изобретению, содержит нуклеотиды 1-22, 1-21, 1-20, 1-19, 1-18, 1-17, 1-16, 1-15, 1-14, 1-13, 1-12, 1-11, 1-10, 1-9, 1-8, 2-22, 2-21, 2-20, 2-19, 2-18, 2-17, 2-16, 2-15, 2-14, 2-13, 2-12, 2-11, 2-10, 2-9, 2-8, 3-22, 3-21, 3-20, 3-19, 3-18, 3-17, 3-16, 3-15, 3-14, 3-13, 3-12, 3-11, 3-10, 3-9, 3-8, 4-22, 4-21, 4-20, 4-19, 4-18, 4-17, 4-16, 4-15, 4-14, 4-13, 4-12, 4-11, 4-10, 4-9, 4-8, 5-22, 5-21, 5-20, 5-19, 5-18, 5-17, 5-16, 5-15, 5-14, 5-13, 5-12, 5-11, 5-10, 5-9, 5-8, 6-22, 6-21, 6-20, 6-19, 6-18, 6-17, 6-16, 6-15, 6-14, 6-13, 6-12, 6-11, 6-10, 7-22, 7-21, 7-20, 7-19, 7-18, 7-17, 7-16, 7-15, 7-14, 7-13, 7-12, 8-22, 8-21, 8-20, 8-19, 8-18, 8-17, 8-16, 8-15, 8-14, 8-13, 8-12, 9-22, 9-21, 9-20, 9-19, 9-18, 9-17, 9-16, 9-15, 9-14, 10-22, 10-21, 10-20, 10-19, 10-18, 10-17, 10-16, 10-15, 10-14, 11-22, 11-21, 11-20, 11-19, 11-18, 11-17, 11-16, 11-15, 11-14, 12-22, 12-21, 12-20, 12-19, 12-18, 12-17, 12-16, 13-22, 13-21, 13-20, 13-19, 13-18, 13-17, 13-16, 14-22, 14-21, 14-20, 14-19, 14-18, 14-17, 15-22, 15-21, 15-20, 15-19, 15-18, 16-22, 16-21, 16-20, 17-22, 17-21 или 18-22 из последовательностей в таблице 2.

Таблица 2. Смысловые последовательности

ID смысловой	Последовательность	SEQ ID NO:
S-1000	GUUUAUGAACUGAUCUUACCC	103
S-1001	GUGUUAGACGGUACUGAUCCC	104
S-1002	CCUGCUAGCUCCAUGCUUCCC	105
S-1003	GUUUAUGAACUGAUCUUAGCC	106
S-1004	GUGUUAGACGGUACUGAUGCC	107
S-1005	CCUGCUAGCUCCAUGCUUGCC	108
S-1006	GUUUAUGAAGUGAUCUUAACC	109
S-1007	GUGUUAGACCGUACUGAUACC	110
S-1008	CCUGCUAGCACCAUGCUUACC	111
S-1009	GUUUAUGAACUGAUCUUAACC	112
S-1010	GUGUUAGACGGUACUGAUACC	113
S-1011	CCUGCUAGCUCCAUGCUUACC	114
S-1011dt	CCUGCUAGCUCCAUGCUUAdTdT	115
S-1012	GUUUAUGAACUGAUCUUGCCC	116
S-1013	GUUUAUGAACUGAUCUUGGCC	117
S-1014	GUUUAUGAACUGAUCUUGACC	118
S-1015	GCAAUUCAGUCUCGUUGUCCC	119
S-1016	UCCAGGUUUAUGAACUGACCC	120
S-1017	GGUUUAUGAACUGACGUUCCC	121
S-1018	CCACAAUGUUGUGACUGGCCC	122
S-1019	GUCACAAAGAACCGUGUACCC	123
S-1020	UGAACCUCUUGUUAUAAACCC	124
S-1021	CCGACAACCAGUAUUUGGCCC	125
S-1022	GCAAUUCAGUCUCGUUGUGCC	126
S-1023	UCCAGGUUUAUGAACUGAGCC	127
S-1024	GGUUUAUGAACUGACGUUGCC	128
S-1025	CCACAAUGUUGUGACUGGGCC	129
S-1026	GUCACAAAGAACCGUGUAGCC	130
S-1027	UGAACCUCUUGUUAUAAAGCC	131
S-1028	CCGACAACCAGUAUUUGGGCC	132
S-1029	GCAAUUCAGUCUCGUUGUACC	133
S-1029dt	GCAAUUCAGUCUCGUUGUAdTdT	134
S-1030	UCCAGGUUUAUGAACUGAACC	135
S-1030dt	UCCAGGUUUAUGAACUGAAdTdT	136
S-1031	GGUUUAUGAACUGACGUUACC	137
S-1032	CCACAAUGUUGUGACUGGACC	138
S-1033	GUCACAAAGAACCGUGUAACC	139
S-1034	UGAACCUCUUGUUAUAAAACC	140
S-1034dt	UGAACCUCUUGUUAUAAAAdTdT	141
S-1035	CCGACAACCAGUAUUUGGACC	142
S-1035dt	CCGACAACCAGUAUUUGGAdTdT	143
S-1036	GCAAUUCAGACUCGUUGUACC	144
S-1037	UCCAGGUUUUUGAACUGAACC	145
S-1038	GGUUUAUGAUCUGACGUUACC	146
S-1039	CCACAAUGUAGUGACUGGACC	147
S-1040	GUCACAAAGUACCGUGUAACC	148
S-1041	UGAACCUCUAGUUAUAAAACC	149
S-1042	CCGACAACCUGUAUUUGGACC	150
S-1043	CAUUGGAAUUCCUAAAAUUCC	151
S-1044	GAUCAUUGGAAUUCCUAAUCC	152
S-1045	CAUUGGAAUUCCUAAAAUGCC	153
S-1046	GAUCAUUGGAAUUCCUAAGCC	154
S-1047	CAUUGGAAUUCCUAAAAUACC	155
S-1047dt	CAUUGGAAUUCCUAAAAUAdTdT	156
S-1048	GAUCAUUGGAAUUCCUAAACC	157
S-1048dt	GAUCAUUGGAAUUCCUAAAdTdT	158
S-1049	CAUUGGAAUACCUAAAAUACC	159
S-1050	GAUCAUUGGUAUUCCUAAACC	160
S-1051dt	GUUUAUGAACUGACGUUAAdTdT	161
S-1052dt	GUGUUAGACGGUACCGACAdTdT	162
S-1053dt	AUAUCAGUAAAGAGAUUAAdTdT	163
S-1054dt	GGUUUAUGAACUGACGUUAdTdT	164
S-1055dt	CCACAAUGUUGUGACCGGAdTdT	165
S-1056dt	GUCACAAAGAACCGUGCAAdTdT	166
S-1057dt	CAUUGGAAUUCCUAAAAUCdTdT	167
S-1058	CCUGCUAGCUCCAUGCUUGCU	168
S-1059	CCUGCUAGCUCCAUGCUUGAU	169
S-1060	CCUGCUAGCUCCAUGCUUAUU	170
S-1061	CCUGCUAGCUCCAUGCUUGUU	171
S-1062	UUCGAGUCCCUCAAGUAGCU	172
S-1063	UUCGAGUCCCUCAAGUAGCUUU	173
S-1064	UCGAGUCCCUCAAGUCCAUUCU	174
S-1065	UUCCAGUCCAUCAAGUCAAUU	175
S-1066	UUCCGAGUCUAAAAGUCCUUGG	176
S-1067	UUCCGAGUCUAAAAGUCCUUGGC	177
S-1068	CUUCCGAGUCUAAAAGUCCUUGG	178
S-1069	UUCCGAGUCUAAAAGUCCUUGGU	179
S-1070	UUCCGAGUCUAAAAGUCCUUGGCU	180
S-1071	UCCAAUGUGAAACUUCAUCGGCU	181
S-1072	UCCAAUGUGAAACUUCAUCGGC	182
S-1073	AUCCAAUGUGAAACUUCAUCGU	183
S-1074	AUCCAAUGUGAAACUUCAUCGGU	184
S-1075	UCCAAUGUGAAACUUCAUCGGU	185
S-1076	UCCAAUGUGAAACUUCAUCGGCUU	186
S-1077	AUCUACUGUGAAAAUUCAUCGG	187
S-1078	UCUACUGUGAAAAUUCAUCGG	188
S-1079	UCUACUGUGAAAAUUCAUCGGC	189
S-1080	AUCUACUGUGAAAAUUCAUCGGU	190
S-1081	UCUACUGUGAAAAUUCAUCGGU	191
S-1082	UCUACUGUGAAAAUUCAUCGGCU	192
S-1083	CCUUCGGUCCUCAAGUCCUUCA	193
S-1084	UUCGAGUCCAUCAAAUCCUAUAGU	194
S-1085	UACAAUGUGUGCACUUCAUAU	195
S-1086	UAUACUGUGUGCAAUUCAUUUCU	196
S-1087	GCAAUUCAGUCUCGUUGUCC	197
S-1088	GCAAUUCAGUCUCGUUGUC	198
S-1089	CAAUUCAGUCUCGUUGUCCC	199
S-1090	CAAUUCAGUCUCGUUGUCC	200
S-1091	GCAAUUCAGUCUCGUUGUGC	201
S-1092	CAAUUCAGUCUCGUUGUGCC	202
S-1093	CCACAAUGUUGUGACUGGGCCU	203
S-1094	CCACAAUGUUGUGACUGGGC	204
S-1095	CACAAUGUUGUGACUGGGCC	205
S-1096	UGAACCUCUUGUUAUAAAGCCU	206
S-1097	UGAACCUCUUGUUAUAAAGC	207
S-1098	GAACCUCUUGUUAUAAAGCC	208
S-1099	CCUGCUAGCUCCAUGCUUGCCU	209
S-1100	CCUGCUAGCUCCAUGCUUGC	210
S-1101	CCUGCUAGCUCCAUGCUUG	211
S-1102	CUGCUAGCUCCAUGCUUGCC	212
S-1103	CCGACAACCAGUAUUUGGGCCU	213
S-1104	CCGACAACCAGUAUUUGGGC	214
S-1105	CCGACAACCAGUAUUUGGG	215
S-1106	CGACAACCAGUAUUUGGGCC	216
S-1107	CGACAACCAGUAUUUGGGC	217
S-1108	GCAAUUCAGUCUCGUUGUACCU	218
S-1109	GCAAUUCAGUCUCGUUGUAC	219
S-1110	GCAAUUCAGUCUCGUUGUA	220
S-1111	CAAUUCAGUCUCGUUGUACC	221
S-1112	GCAAUUCAGACUCGUUGUACCU	222
S-1113	GCAAUUCAGACUCGUUGUAC	223
S-1114	GCAAUUCAGACUCGUUGUA	224
S-1115	CAAUUCAGACUCGUUGUACC	225
S-1116	AGCAAUUCAGUCUCGUUGUACC	226
S-1117	AGCAAUUCAGUCUCGUUGUAC	227
S-1118	AGGUUUAUGAACUGACGUUAC	228
S-1119	AGGUUUAUGAACUGACGUUACC	229
S-1120	ACCACAAUGUUGUGACUGGAC	230
S-1121	ACCACAAUGUUGUGACUGGACC	231
S-1122	CCACAAUGUUGUGACUGGACCGU	232
S-1123	CCACAAUGUUGUGACUGGACCG	233
S-1124	CCACAAUGUUGUGACUGGAC	234
S-1125	CACAAUGUUGUGACUGGACC	235
S-1126	ACCUGCUAGCUCCAUGCUUCCC	236
S-1127	ACCUGCUAGCUCCAUGCUUCC	237
S-1128	ACCUGCUAGCUCCAUGCUUC	238
S-1129	CCUGCUAGCUCCAUGCUUCC	239
S-1130	CCUGCUAGCUCCAUGCUUC	240
S-1131	CUGCUAGCUCCAUGCUUCCC	241
S-1132	CUGCUAGCUCCAUGCUUCC	242
S-1133	ACCGACAACCAGUAUUUGGACC	243
S-1134	ACCGACAACCAGUAUUUGGAC	244
S-1135	CCGACAACCAGUAUUUGGACCGU	245
S-1136	CCGACAACCAGUAUUUGGACCGU	246
S-1137	CCGACAACCAGUAUUUGGAC	247
S-1138	CGACAACCAGUAUUUGGACC	248
S-1139	CCUGCUAGCACCGUGCUUACC	249

[0098] В одном из вариантов осуществления молекулы миРНК по настоящему изобретению могут содержать антисмысловую последовательность из таблицы 1 и смысловую последовательность из таблицы 2 или ее фрагмент или вариант. В качестве неограничивающего примера, антисмысловая последовательность и смысловая последовательность обладают по меньшей мере 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% или по меньшей мере 20-30%, 20-40%, 20-50%, 20-60%, 20-70%, 20-80%, 20-90%, 20-95%, 20-99%, 30-40%, 30-50%, 30-60%, 30-70%, 30-80%, 30-90%, 30-95%, 30-99%, 40-50%, 40-60%, 40-70%, 40-80%, 40-90%, 40-95%, 40-99%, 50-60%, 50-70%, 50-80%, 50-90%, 50-95%, 50-99%, 60-70%, 60-80%, 60-90%, 60-95%, 60-99%, 70-80%, 70-90%, 70-95%, 70-99%, 80-90%, 80-95%, 80-99%, 90-95%, 90-99% или 95-99% комплементарностью.

[0099] В одном из вариантов осуществления молекулы миРНК по настоящему изобретению могут содержать дуплекс смысловой и антисмысловой миРНК, как приведено в таблицах 3-5. В качестве неограничивающего примера, эти миРНК-дуплексы можно тестировать in vitro на активность ингибирования эндогенной экспрессии гена HTT.

Таблица 3. Последовательности смысловых и антисмысловых цепей дцРНК HTT

ID миРНК-дуплекса	ID смысл. ц.	Старт смысл.ц.	Посл. смысл. цепи (5'-3')	SEQ ID смысл. ц.	ID анти смысл. ц.	Старт анти смысл. ц.	Посл. анти смысл. цепи (5'-3')	SEQ ID анти смысл.ц.
D-3566	S-1058	6751	CCUGCUAGCUCCAUGC UUGCU	168	A-2002	6751	UAAGCAUGGAGCUAGCA GGUU	7
D-3567	S-1058	6751	CCUGCUAGCUCCAUGC UUGCU	168	A-2014	6748	UAAGCAUGGAGCUAGCA GGCUU	29
D-3568	S-1059	6751	CCUGCUAGCUCCAUGC UUGAU	169	A-2002	6751	UAAGCAUGGAGCUAGCA GGUU	7
D-3569	S-1060	6751	CCUGCUAGCUCCAUGC UUAUU	170	A-2015	6751	UAAGCAUGGAGCUAGCA GGGU	30
D-3570	S-1061	6751	CCUGCUAGCUCCAUGC UUGUU	171	A-2002	6751	UAAGCAUGGAGCUAGCA GGUU	7
D-3500	S-1016	1386	UCCAGGUUUAUGAACU GACCC	120	A-2004	1386	UUCAGUUCAUAAACCUG GAUU	11
D-3501	S-1023	1386	UCCAGGUUUAUGAACU GAGCC	127	A-2004	1386	UUCAGUUCAUAAACCUG GAUU	11
D-3502	S-1030	1386	UCCAGGUUUAUGAACU GAACC	135	A-2004	1386	UUCAGUUCAUAAACCUG GAUU	11
D-3503	S-1037	1386	UCCAGGUUUUUGAACU GAACC	145	A-2004	1386	UUCAGUUCAUAAACCUG GAUU	11
D-3504	S-1030	1386	UCCAGGUUUAUGAACU GAACC	135	A-2001	2066	UGUCGGUACCGUCUAAC ACUU	5
D-3505	S-1017	1390	GGUUUAUGAACUGACG UUCCC	121	A-2005	1389	UAACGUCAGUUCAUAAA CCUU	13
D-3506	S-1024	1390	GGUUUAUGAACUGACG UUGCC	128	A-2005	1389	UAACGUCAGUUCAUAAA CCUU	13
D-3507	S-1031	1390	GGUUUAUGAACUGACG UUACC	137	A-2005	1389	UAACGUCAGUUCAUAAA CCUU	13
D-3508	S-1038	1390	GGUUUAUGAUCUGACG UUACC	146	A-2005	1389	UAACGUCAGUUCAUAAA CCUU	13
D-3509	S-1000	1391	GUUUAUGAACUGAUCU UACCC	103	A-2000	1391	UUAACGUCAGUUCAUAA ACUU	3
D-3510	S-1003	1391	GUUUAUGAACUGAUCU UAGCC	106	A-2000	1391	UUAACGUCAGUUCAUAA ACUU	3
D-3511	S-1006	1391	GUUUAUGAAGUGAUCU UAACC	109	A-2000	1391	UUAACGUCAGUUCAUAA ACUU	3
D-3512	S-1009	1391	GUUUAUGAACUGAUCU UAACC	112	A-2000	1391	UUAACGUCAGUUCAUAA ACUU	3
D-3513	S-1012	1391	GUUUAUGAACUGAUCU UGCCC	116	A-2000	1391	UUAACGUCAGUUCAUAA ACUU	3
D-3514	S-1013	1391	GUUUAUGAACUGAUCU UGGCC	117	A-2000	1391	UUAACGUCAGUUCAUAA ACUU	3
D-3515	S-1014	1391	GUUUAUGAACUGAUCU UGACC	118	A-2000	1391	UUAACGUCAGUUCAUAA ACUU	3
D-3516	S-1018	1429	CCACAAUGUUGUGACU GGCCC	122	A-2006	1428	UCCGGUCACAACAUUGU GGUU	15
D-3517	S-1025	1429	CCACAAUGUUGUGACU GGGCC	129	A-2006	1428	UCCGGUCACAACAUUGU GGUU	15
D-3518	S-1032	1429	CCACAAUGUUGUGACU GGACC	138	A-2006	1428	UCCGGUCACAACAUUGU GGUU	15
D-3519	S-1039	1429	CCACAAUGUAGUGACU GGACC	147	A-2006	1428	UCCGGUCACAACAUUGU GGUU	15
D-3520	S-1001	2066	GUGUUAGACGGUACUG AUCCC	104	A-2001	2066	UGUCGGUACCGUCUAAC ACUU	5
D-3521	S-1004	2066	GUGUUAGACGGUACUG AUGCC	107	A-2001	2066	UGUCGGUACCGUCUAAC ACUU	5
D-3522	S-1007	2066	GUGUUAGACCGUACUG AUACC	110	A-2001	2066	UGUCGGUACCGUCUAAC ACUU	5
D-3523	S-1010	2066	GUGUUAGACGGUACUG AUACC	113	A-2001	2066	UGUCGGUACCGUCUAAC ACUU	5
D-3524	S-1021	2079	CCGACAACCAGUAUUU GGCCC	125	A-2009	2078	UCCAAAUACUGGUUGUC GGUU	21
D-3525	S-1028	2079	CCGACAACCAGUAUUU GGGCC	132	A-2009	2078	UCCAAAUACUGGUUGUC GGUU	21
D-3526	S-1035	2079	CCGACAACCAGUAUUU GGACC	142	A-2009	2078	UCCAAAUACUGGUUGUC GGUU	21
D-3527	S-1042	2079	CCGACAACCUGUAUUU GGACC	150	A-2009	2078	UCCAAAUACUGGUUGUC GGUU	21
D-3528	S-1019	4544	GUCACAAAGAACCGUG UACCC	123	A-2007	4544	UUGCACGGUUCUUUGUG ACUU	17
D-3529	S-1026	4544	GUCACAAAGAACCGUG UAGCC	130	A-2007	4544	UUGCACGGUUCUUUGUG ACUU	17
D-3530	S-1033	4544	GUCACAAAGAACCGUG UAACC	139	A-2007	4544	UUGCACGGUUCUUUGUG ACUU	17
D-3531	S-1040	4544	GUCACAAAGUACCGUG UAACC	148	A-2007	4544	UUGCACGGUUCUUUGUG ACUU	17
D-3532	S-1020	4597	UGAACCUCUUGUUAUA AACCC	124	A-2008	4597	UUUUAUAACAAGAGGUU CAUU	19
D-3533	S-1027	4597	UGAACCUCUUGUUAUA AAGCC	131	A-2008	4597	UUUUAUAACAAGAGGUU CAUU	19
D-3534	S-1034	4597	UGAACCUCUUGUUAUA AAACC	140	A-2008	4597	UUUUAUAACAAGAGGUU CAUU	19
D-3535	S-1041	4597	UGAACCUCUAGUUAUA AAACC	149	A-2008	4597	UUUUAUAACAAGAGGUU CAUU	19
D-3536	S-1044	4861	GAUCAUUGGAAUUCCU AAUCC	152	A-2011	4860	UUUAGGAAUUCCAAUGA UCUU	25
D-3537	S-1046	4861	GAUCAUUGGAAUUCCU AAGCC	154	A-2011	4860	UUUAGGAAUUCCAAUGA UCUU	25
D-3538	S-1048	4861	GAUCAUUGGAAUUCCU AAACC	157	A-2011	4860	UUUAGGAAUUCCAAUGA UCUU	25
D-3539	S-1050	4861	GAUCAUUGGUAUUCCU AAACC	160	A-2011	4860	UUUAGGAAUUCCAAUGA UCUU	25
D-3540	S-1043	4864	CAUUGGAAUUCCUAAA AUUCC	151	A-2010	4864	UAUUUUAGGAAUUCCAA UGUU	23
D-3541	S-1045	4864	CAUUGGAAUUCCUAAA AUGCC	153	A-2010	4864	UAUUUUAGGAAUUCCAA UGUU	23
D-3542	S-1047	4864	CAUUGGAAUUCCUAAA AUACC	155	A-2010	4864	UAUUUUAGGAAUUCCAA UGUU	23
D-3543	S-1049	4864	CAUUGGAAUACCUAAA AUACC	159	A-2010	4864	UAUUUUAGGAAUUCCAA UGUU	23
D-3544	S-1015	6188	GCAAUUCAGUCUCGUU GUCCC	119	A-2003	6188	UACAACGAGACUGAAUU GCUU	9
D-3545	S-1022	6188	GCAAUUCAGUCUCGUU GUGCC	126	A-2003	6188	UACAACGAGACUGAAUU GCUU	9
D-3546	S-1029	6188	GCAAUUCAGUCUCGUU GUACC	133	A-2003	6188	UACAACGAGACUGAAUU GCUU	9
D-3547	S-1036	6188	GCAAUUCAGACUCGUU GUACC	144	A-2003	6188	UACAACGAGACUGAAUU GCUU	9
D-3548	S-1002	6751	CCUGCUAGCUCCAUGC UUCCC	105	A-2002	6751	UAAGCAUGGAGCUAGCA GGUU	7
D-3549	S-1005	6751	CCUGCUAGCUCCAUGC UUGCC	108	A-2002	6751	UAAGCAUGGAGCUAGCA GGUU	7
D-3550	S-1008	6751	CCUGCUAGCACCAUGC UUACC	111	A-2002	6751	UAAGCAUGGAGCUAGCA GGUU	7
D-3551	S-1011	6751	CCUGCUAGCUCCAUGC UUACC	114	A-2002	6751	UAAGCAUGGAGCUAGCA GGUU	7

Таблица 4. Последовательности смысловых и антисмысловых цепей дцРНК HTT

ID миРНК-дуплекса	ID смысл. ц.	Старт смысл. ц.	Последовательность смысловой цепи (5'-3')	SEQ ID смысл. ц.	ID а-смысл. ц.	Старт а-смысл. ц.	Последовательность антисмысловой цепи (5'-3')	SEQ ID а-смысл. ц.
D-3552	S-1051dt	1391	GUUUAUGAACUGACGUU AAdTdT	161	A-2000dt	1391	UUAACGUCAGUUCAUAA ACdTdT	4
D-3553	S-1052dt	2066	GUGUUAGACGGUACCGA CAdTdT	162	A-2001dt	2066	UGUCGGUACCGUCUAAC ACdTdT	6
D-3554	S-1011dt	6751	CCUGCUAGCUCCAUGCU UAdTdT	115	A-2002dt	6751	UAAGCAUGGAGCUAGCA GGdTdT	8
D-3555	S-1053dt	10322	AUAUCAGUAAAGAGAUU AAdTdT	163	A-2012dt	10322	UUAAUCUCUUUACUGAU AUdTdT	27
D-3556	S-1030dt	1386	UCCAGGUUUAUGAACUG AAdTdT	136	A-2004dt	1386	UUCAGUUCAUAAACCUG GAdTdT	12
D-3557	S-1054dt	1390	GGUUUAUGAACUGACGU UAdTdT	164	A-2005dt	1390	UAACGUCAGUUCAUAAA CCdTdT	14
D-3558	S-1055dt	1429	CCACAAUGUUGUGACCG GAdTdT	165	A-2006dt	1429	UCCGGUCACAACAUUGU GGdTdT	16
D-3559	S-1035dt	2079	CCGACAACCAGUAUUUG GAdTdT	143	A-2009dt	2079	UCCAAAUACUGGUUGUC GGdTdT	22
D-3560	S-1056dt	4544	GUCACAAAGAACCGUGC AAdTdT	166	A-2007dt	4544	UUGCACGGUUCUUUGUG ACdTdT	18
D-3561	S-1034dt	4597	UGAACCUCUUGUUAUAA AAdTdT	141	A-2008dt	4597	UUUUAUAACAAGAGGUU CAdTdT	20
D-3562	S-1029dt	6188	GCAAUUCAGUCUCGUUG UAdTdT	134	A-2003dt	6188	UACAACGAGACUGAAUU GCdTdT	10
D-3563	S-1047dt	4864	CAUUGGAAUUCCUAAAA UAdTdT	156	A-2010dt	4864	UAUUUUAGGAAUUCCAA UGdTdT	24
D-3564	S-1048dt	4861	GAUCAUUGGAAUUCCUA AAdTdT	158	A-2011dt	4861	UUUAGGAAUUCCAAUGA UCdTdT	26
D-3565	S-1057dt	4864	CAUUGGAAUUCCUAAAA UCdTdT	167	A-2013dt	4864	GAUUUUAGGAAUUCCAA UGdTdT	28

Таблица 5. Последовательности антисмысловых и смысловых цепей дцРНК HTT

ID миРНК-дуплекса	ID а-смысл. ц.	Старт а-смысл. ц.	Последовательность антисмысловой цепи (5'-3')	SEQ ID а-смысл. ц.	ID смысл. ц.	Старт смысл. ц.	Последовательность смысловой цепи (5'-3')	SEQ ID смысл. ц.
D-3569	S-1060	6751	CCUGCUAGCUCCAUG CUUAUU	170	A-2015	6751	UAAGCAUGGAGC UAGCAGGGU	30
D-3570	S-1061	6751	CCUGCUAGCUCCAUG CUUGUU	171	A-2002	6751	UAAGCAUGGAGC UAGCAGGUU	7

[00100] В других вариантах осуществления молекулы миРНК по настоящему изобретению можно кодировать в плазмидных векторах, вирусных векторах (например, AAV векторах), геномных или других экспрессирующих векторах из нуклеиновых кислот для доставки в клетку.

[00101] ДНК экспрессирующие плазмиды можно использовать для стабильной экспрессии дуплексов миРНК или дцРНК по настоящему изобретению в клетках и достижения долгосрочного ингибирования экспрессии гена-мишени. В одном из аспектов, смысловые и антисмысловые цепи миРНК-дуплекса обычно связывают с помощью короткой спейсерной последовательности, ведущей к экспрессии структуры «стебель-петля», называемой короткой шпилечной РНК (кшРНК). Шпильку распознает и расщепляет дайсер, таким образом создавая зрелые молекулы миРНК.

[00102] В одном из вариантов осуществления смысловые и антисмысловые цепи миРНК-дуплекса можно соединять посредством короткой спейсерной последовательности, которую необязательно можно связывать с дополнительной фланкирующей последовательностью, что ведет к экспрессии структуры фланкирующее плечо-»стебель-петля», называемой первичной микроРНК (первичной мкРНК). Первичную мкРНК могут распознавать и расщеплять Drosha и дайсер, таким образом, создавая зрелые молекулы миРНК.

[00103] В соответствии с настоящим изобретением, получают AAV векторы, содержащие нуклеиновые кислоты, кодирующие молекулы миРНК, направленные на мРНК HTT, серотипы AAV вектора могут представлять собой AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV9.47, AAV9(hu14), AAV10, AAV11, AAV12, AAVrh8, AAVrh10, AAV-DJ8, AAV-DJ, AAV-PHP.A (PHP.A) и/или AAV-PHP.B (PHP.B) и их варианты.

[00104] В некоторых вариантах осуществления миРНК-дуплексы или кодируемая дцРНК по настоящему изобретению супрессируют (или разрушают) целевую мРНК (например, HTT). Соответственно, миРНК-дуплексы или кодируемую дцРНК можно использовать для того, чтобы по существу ингибировать экспрессию гена HTT в клетке, например, нейроне. В некоторых аспектах, ингибирование экспрессии гена HTT относится к ингибированию по меньшей мере приблизительно на 20%, предпочтительно по меньшей мере приблизительно на 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 95% и 100% или по меньшей мере на 20-30%, 20-40%, 20-50%, 20-60%, 20-70%, 20-80%, 20-90%, 20-95%, 20-100%, 30-40%, 30-50%, 30-60%, 30-70%, 30-80%, 30-90%, 30-95%, 30-100%, 40-50%, 40-60%, 40-70%, 40-80%, 40-90%, 40-95%, 40-100%, 50-60%, 50-70%, 50-80%, 50-90%, 50-95%, 50-100%, 60-70%, 60-80%, 60-90%, 60-95%, 60-100%, 70-80%, 70-90%, 70-95%, 70-100%, 80-90%, 80-95%, 80-100%, 90-95%, 90-100% или 95-100%. Соответственно, белковый продукт целевого гена можно ингибировать по меньшей мере приблизительно на 20%, предпочтительно по меньшей мере приблизительно на 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 95% и 100% или по меньшей мере на 20-30%, 20-40%, 20-50%, 20-60%, 20-70%, 20-80%, 20-90%, 20-95%, 20-100%, 30-40%, 30-50%, 30-60%, 30-70%, 30-80%, 30-90%, 30-95%, 30-100%, 40-50%, 40-60%, 40-70%, 40-80%, 40-90%, 40-95%, 40-100%, 50-60%, 50-70%, 50-80%, 50-90%, 50-95%, 50-100%, 60-70%, 60-80%, 60-90%, 60-95%, 60-100%, 70-80%, 70-90%, 70-95%, 70-100%, 80-90%, 80-95%, 80-100%, 90-95%, 90-100% или 95-100%.

[00105] В соответствии с настоящим изобретением, молекулы миРНК разрабатывают и тестируют на их способность снижать уровни мРНК HTT в культивируемых клетках. Такие молекулы миРНК могут формировать дуплекс, такой как, но не ограничиваясь этим, включают те, что перечислены в таблице 3, таблице 4 или таблице 5. В качестве неограничивающего примера, миРНК-дуплексы могут представлять собой ID дуплексов миРНК: с D-3500 до D-3570.

[00106] В одном из вариантов осуществления молекулы миРНК содержат затравочное совпадение мкРНК для мишени (например, HTT), расположенное в направляющей цепи. В другом варианте осуществления молекулы миРНК содержат затравочное совпадение мкРНК для мишени (например, HTT), расположенное в сопровождающей цепи. В еще одном другом варианте осуществления, миРНК-дуплексы или кодируемая дцРНК, нацеленные на ген HTT, не содержат затравочное совпадение для мишени (например, HTT), расположенное в направляющей или сопровождающей цепи.

[00107] В одном из вариантов осуществления миРНК-дуплексы или кодируемая дцРНК, нацеленные на ген HTT, могут почти не иметь значимых полноразмерных ложных мишеней для направляющей цепи. В другом варианте осуществления миРНК-дуплексы или кодируемая дцРНК, нацеленные на ген HTT, могут почти не иметь значимых эффектов полноразмерных ложных мишеней для сопровождающей цепи. МиРНК-дуплексы или кодируемая дцРНК, нацеленные на ген HTT, могут иметь меньше чем 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%,11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 1-5%, 2-6%, 3-7%, 4-8%, 5-9%, 5-10%, 6-10%, 5-15%, 5-20%, 5-25% 5-30%, 10-20%, 10-30%, 10-40%, 10-50%, 15-30%, 15-40%, 15-45%, 20-40%, 20-50%, 25-50%, 30-40%, 30-50%, 35-50%, 40-50%, 45-50% эффектов полноразмерных ложных мишеней для сопровождающей цепи. В еще одном другом варианте осуществления, миРНК-дуплексы или кодируемая дцРНК, нацеленные на ген HTT, могут почти не иметь значимых полноразмерных ложных мишеней для направляющей цепи или сопровождающей цепи. МиРНК-дуплексы или кодируемая дцРНК, нацеленные на ген HTT, могут иметь меньше чем 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%,11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 1-5%, 2-6%, 3-7%, 4-8%, 5-9%, 5-10%, 6-10%, 5-15%, 5-20%, 5-25% 5-30%, 10-20%, 10-30%, 10-40%, 10-50%, 15-30%, 15-40%, 15-45%, 20-40%, 20-50%, 25-50%, 30-40%, 30-50%, 35-50%, 40-50%, 45-50% эффектов полноразмерных ложных мишеней для направляющей или сопровождающей цепи.

[00108] В одном из вариантов осуществления миРНК-дуплексы или кодируемая дцРНК, нацеленные на ген HTT, могут иметь высокую активность in vitro. В другом варианте осуществления молекулы миРНК могут иметь низкую активность in vitro. В еще одном другом варианте осуществления, миРНК-дуплексы или дцРНК, нацеленные на ген HTT, могут иметь высокую активность направляющей цепи и низкую активность сопровождающей цепи in vitro.

[00109] В одном из вариантов осуществления молекулы миРНК имеют высокую активность направляющей цепи и низкую активность сопровождающей цепи in vitro. Нокдаун мишени (KD) с помощью направляющей цепи может составлять по меньшей мере 40%, 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99%, 99,5% или 100%. Нокдаун мишени с помощью направляющей цепи может составлять 40-50%, 45-50%, 50-55%, 50-60%, 60-65%, 60-70%, 60-75%, 60-80%, 60-85%, 60-90%, 60-95%, 60-99%, 60-99,5%, 60-100%, 65-70%, 65-75%, 65-80%, 65-85%, 65-90%, 65-95%, 65-99%, 65-99,5%, 65-100%, 70-75%, 70-80%, 70-85%, 70-90%, 70-95%, 70-99%, 70-99,5%, 70-100%, 75-80%, 75-85%, 75-90%, 75-95%, 75-99%, 75-99,5%, 75-100%, 80-85%, 80-90%, 80-95%, 80-99%, 80-99,5%, 80-100%, 85-90%, 85-95%, 85-99%, 85-99,5%, 85-100%, 90-95%, 90-99%, 90-99,5%, 90-100%, 95-99%, 95-99,5%, 95-100%, 99-99,5%, 99-100% или 99,5-100%. В качестве неограничивающего примера, нокдаун мишени (KD) с помощью направляющей цепи составляет больше чем 70%. В качестве неограничивающего примера, нокдаун мишени (KD) с помощью направляющей цепи составляет больше чем 60%.

[00110] В одном из вариантов осуществления миРНК-дуплекс разрабатывают так, что отсутствует затравочное совпадение мкРНК для смысловой или антисмысловой последовательности с последовательностями не Htt.

[00111] В одном из вариантов осуществления IC₅₀ направляющей цепи для ближайшей ложной мишени больше чем в 100 раз превышает IC₅₀ направляющей цепи для мишени. В качестве неограничивающего примера, если IC₅₀ направляющей цепи для ближайшей ложной мишени больше чем в 100 раз превышает IC₅₀ направляющей цепи для мишени, то молекулу миРНК называют обладающей высокой избирательностью направляющей цепи для ингибирования Htt in vitro.

[00112] В одном из вариантов осуществления 5'-процессинг направляющей цепи имеет правильный старт (n) на 5'-конце по меньшей мере 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99% или 100% времени in vitro или in vivo. В качестве неограничивающего примера, 5'-процессинг направляющей цепи является точным и имеет правильный старт (n) на 5'-конце по меньшей мере 99% времени in vitro. В качестве неограничивающего примера, 5'-процессинг направляющей цепи является точным и имеет правильный старт (n) на 5'-конце по меньшей мере 99% времени in vivo. В качестве неограничивающего примера, 5'-процессинг направляющей цепи является точным и имеет правильный старт (n) на 5'-конце по меньшей мере 90% времени in vitro. В качестве неограничивающего примера, 5'-процессинг направляющей цепи является точным и имеет правильный старт (n) на 5'-конце по меньшей мере 90% времени in vivo. В качестве неограничивающего примера, 5'-процессинг направляющей цепи является точным и имеет правильный старт (n) на 5'-конце по меньшей мере 85% времени in vitro. В качестве неограничивающего примера, 5'-процессинг направляющей цепи является точным и имеет правильный старт (n) на 5'-конце по меньшей мере 85% времени in vivo.

[00113] В одном из вариантов осуществления выраженное соотношение направляющих и сопровождающих (G:P) цепей (также обозначаемых как антисмысловые и смысловые) составляет 1:10, 1:9, 1:8, 1:7, 1:6, 1:5, 1:4, 1:3, 1:2, 1;1, 2:10, 2:9, 2:8, 2:7, 2:6, 2:5, 2:4, 2:3, 2:2, 2:1, 3:10, 3:9, 3:8, 3:7, 3:6, 3:5, 3:4, 3:3, 3:2, 3:1, 4:10, 4:9, 4:8, 4:7, 4:6, 4:5, 4:4, 4:3, 4:2, 4:1, 5:10, 5:9, 5:8, 5:7, 5:6, 5:5, 5:4, 5:3, 5:2, 5:1, 6:10, 6:9, 6:8, 6:7, 6:6, 6:5, 6:4, 6:3, 6:2, 6:1, 7:10, 7:9, 7:8, 7:7, 7:6, 7:5, 7:4, 7:3, 7:2, 7:1, 8:10, 8:9, 8:8, 8:7, 8:6, 8:5, 8:4, 8:3, 8:2, 8:1, 9:10, 9:9, 9:8, 9:7, 9:6, 9:5, 9:4, 9:3, 9:2, 9:1, 10:10, 10:9, 10:8, 10:7, 10:6, 10:5, 10:4, 10:3, 10:2, 10:1, 1:99, 5:95, 10:90, 15:85, 20:80, 25:75, 30:70, 35:65, 40:60, 45:55, 50:50, 55:45, 60:40, 65:35, 70:30, 75:25, 80:20, 85:15, 90:10, 95:5 или 99:1 in vitro или in vivo. Соотношение направляющих и сопровождающих относится к соотношению направляющих цепей и сопровождающих цепей после внутриклеточного процессинга первичной микроРНК. Например, соотношение направляющих и сопровождающих 80:20 обозначает 8 направляющих цепей на каждые 2 сопровождающие цепи, процессированные из предшественника. В качестве неограничивающего примера, соотношение направляющих и сопровождающих цепей составляет 8:2 in vitro. В качестве неограничивающего примера, соотношение направляющих и сопровождающих цепей составляет 8:2 in vivo. В качестве неограничивающего примера, соотношение направляющих и сопровождающих цепей составляет 9:1 in vitro. В качестве неограничивающего примера, соотношение направляющих и сопровождающих цепей составляет 9:1 in vivo.

[00114] В одном из вариантов осуществления выраженное соотношение направляющих и сопровождающих (G:P) (также обозначаемых как антисмысловые и смысловые) цепей составляет больше чем 1.

[00115] В одном из вариантов осуществления выраженное соотношение направляющих и сопровождающих (G:P) (также обозначаемых как антисмысловые и смысловые) цепей составляет больше чем 2.

[00116] В одном из вариантов осуществления выраженное соотношение направляющих и сопровождающих (G:P) (также обозначаемых как антисмысловые и смысловые) цепей составляет больше чем 5.

[00117] В одном из вариантов осуществления выраженное соотношение направляющих и сопровождающих (G:P) (также обозначаемых как антисмысловые и смысловые) цепей составляет больше чем 10.

[00118] В одном из вариантов осуществления выраженное соотношение направляющих и сопровождающих (G:P) (также обозначаемых как антисмысловые и смысловые) цепей составляет больше чем 20.

[00119] В одном из вариантов осуществления выраженное соотношение направляющих и сопровождающих (G:P) (также обозначаемых как антисмысловые и смысловые) цепей составляет больше чем 50.

[00120] В одном из вариантов осуществления выраженное соотношение направляющих и сопровождающих (G:P) (также обозначаемых как антисмысловые и смысловые) цепей составляет по меньшей мере 3:1.

[00121] В одном из вариантов осуществления выраженное соотношение направляющих и сопровождающих (G:P) (также обозначаемых как антисмысловые и смысловые) цепей составляет по меньшей мере 5:1.

[00122] В одном из вариантов осуществления выраженное соотношение направляющих и сопровождающих (G:P) (также обозначаемых как антисмысловые и смысловые) цепей составляет по меньшей мере 10:1.

[00123] В одном из вариантов осуществления выраженное соотношение направляющих и сопровождающих (G:P) (также обозначаемых как антисмысловые и смысловые) цепей составляет по меньшей мере 20:1.

[00124] В одном из вариантов осуществления выраженное соотношение направляющих и сопровождающих (G:P) (также обозначаемых как антисмысловые и смысловые) цепей составляет по меньшей мере 50:1.

[00125] В одном из вариантов осуществления выраженное соотношение сопровождающих и направляющих (P:G) (также обозначаемых как смысловые и антисмысловые) цепей составляет 1:10, 1:9, 1:8, 1:7, 1:6, 1:5, 1:4, 1:3, 1:2, 1;1, 2:10, 2:9, 2:8, 2:7, 2:6, 2:5, 2:4, 2:3, 2:2, 2:1, 3:10, 3:9, 3:8, 3:7, 3:6, 3:5, 3:4, 3:3, 3:2, 3:1, 4:10, 4:9, 4:8, 4:7, 4:6, 4:5, 4:4, 4:3, 4:2, 4:1, 5:10, 5:9, 5:8, 5:7, 5:6, 5:5, 5:4, 5:3, 5:2, 5:1, 6:10, 6:9, 6:8, 6:7, 6:6, 6:5, 6:4, 6:3, 6:2, 6:1, 7:10, 7:9, 7:8, 7:7, 7:6, 7:5, 7:4, 7:3, 7:2, 7:1, 8:10, 8:9, 8:8, 8:7, 8:6, 8:5, 8:4, 8:3, 8:2, 8:1, 9:10, 9:9, 9:8, 9:7, 9:6, 9:5, 9:4, 9:3, 9:2, 9:1, 10:10, 10:9, 10:8, 10:7, 10:6, 10:5, 10:4, 10:3, 10:2, 10:1, 1:99, 5:95, 10:90, 15:85, 20:80, 25:75, 30:70, 35:65, 40:60, 45:55, 50:50, 55:45, 60:40, 65:35, 70:30, 75:25, 80:20, 85:15, 90:10, 95:5 или 99:1 in vitro или in vivo. Соотношение сопровождающих и направляющих относится к соотношению сопровождающих цепей и направляющих цепей после вырезания направляющей цепи. Например, соотношение сопровождающих и направляющих 80:20 обозначает 8 сопровождающих цепей на каждые 2 направляющие цепи, процессированные из предшественника. В качестве неограничивающего примера, соотношение сопровождающих и направляющих цепей составляет 80:20 in vitro. В качестве неограничивающего примера, соотношение сопровождающих и направляющих цепей составляет 80:20 in vivo. В качестве неограничивающего примера, соотношение сопровождающих и направляющих цепей составляет 8:2 in vitro. В качестве неограничивающего примера, соотношение сопровождающих и направляющих цепей составляет 8:2 in vivo. В качестве неограничивающего примера, соотношение сопровождающих и направляющих цепей составляет 9:1 in vitro. В качестве неограничивающего примера, соотношение сопровождающих и направляющих цепей составляет 9:1 in vivo.

[00126] В одном из вариантов осуществления выраженное соотношение сопровождающих и направляющих (P:G) (также обозначаемых как смысловые и антисмысловые) цепей составляет больше чем 1.

[00127] В одном из вариантов осуществления выраженное соотношение сопровождающих и направляющих (P:G) (также обозначаемых как смысловые и антисмысловые) цепей составляет больше чем 2.

[00128] В одном из вариантов осуществления выраженное соотношение сопровождающих и направляющих (P:G) (также обозначаемых как смысловые и антисмысловые) цепей составляет больше чем 5.

[00129] В одном из вариантов осуществления выраженное соотношение сопровождающих и направляющих (P:G) (также обозначаемых как смысловые и антисмысловые) цепей составляет больше чем 10.

[00130] В одном из вариантов осуществления выраженное соотношение сопровождающих и направляющих (P:G) (также обозначаемых как смысловые и антисмысловые) цепей составляет больше чем 20.

[00131] В одном из вариантов осуществления выраженное соотношение сопровождающих и направляющих (P:G) (также обозначаемых как смысловые и антисмысловые) цепей составляет больше чем 50.

[00132] В одном из вариантов осуществления выраженное соотношение сопровождающих и направляющих (P:G) (также обозначаемых как смысловые и антисмысловые) цепей составляет по меньшей мере 3:1.

[00133] В одном из вариантов осуществления выраженное соотношение сопровождающих и направляющих (P:G) (также обозначаемых как смысловые и антисмысловые) цепей составляет по меньшей мере 5:1.

[00134] В одном из вариантов осуществления выраженное соотношение сопровождающих и направляющих (P:G) (также обозначаемых как смысловые и антисмысловые) цепей составляет по меньшей мере 10:1.

[00135] В одном из вариантов осуществления выраженное соотношение сопровождающих и направляющих (P:G) (также обозначаемых как смысловые и антисмысловые) цепей составляет по меньшей мере 20:1.

[00136] В одном из вариантов осуществления выраженное соотношение сопровождающих и направляющих (P:G) (также обозначаемых как смысловые и антисмысловые) цепей составляет по меньшей мере 50:1.

[00137] В одном из вариантов осуществления дуплекс сопровождающей и направляющей цепей считают эффективным, когда первичные или пре-микроРНК демонстрируют, с помощью способов, известных в данной области и описанных в настоящем документе, больше чем 2-кратное соотношение направляющих и сопровождающих цепей при измерении процессинга. В качестве неограничивающих примеров, первичные или пре-микроРНК демонстрируют более чем 2-кратное, 3-кратное, 4-кратное, 5-кратное, 6-кратное, 7-кратное, 8-кратное, 9-кратное, 10-кратное, 11-кратное, 12-кратное, 13-кратное, 14-кратное, 15-кратное, или 2-5-кратное, 2-10-кратное, 2-15-кратное, 3-5-кратное, 3-10-кратное, 3-15-кратное, 4-5-кратное, 4-10-кратное, 4-15-кратное, 5-10-кратное, 5-15-кратное, 6-10-кратное, 6-15-кратное, 7-10-кратное, 7-15-кратное, 8-10-кратное, 8-15-кратное, 9-10-кратное, 9-15-кратное, 10-15-кратное, 11-15-кратное, 12-15-кратное, 13-15-кратное или 14-15-кратное соотношение направляющих и сопровождающих цепей при измерении процессинга.

[00138] В одном из вариантов осуществления геном вектора, кодирующий дцРНК, содержит последовательность, которая представляет собой по меньшей мере 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99% или больше чем 99% полной длины конструкции. В качестве неограничивающего примера, геном вектора содержит последовательность, которая представляет собой по меньшей мере 80% полной длины последовательности конструкции.

[00139] В одном из вариантов осуществления молекулы миРНК можно использовать для сайленсинга HTT дикого типа или мутантного HTT посредством направленного воздействия по меньшей мере на один экзон в последовательности htt. Экзон может представлять собой экзон 1, экзон 2, экзон 3, экзон 4, экзон 5, экзон 6, экзон 7, экзон 8, экзон 9, экзон 10, экзон 11, экзон 12, экзон 13, экзон 14, экзон 15, экзон 16, экзон 17, экзон 18, экзон 19, экзон 20, экзон 21, экзон 22, экзон 23, экзон 24, экзон 25, экзон 26, экзон 27, экзон 28, экзон 29, экзон 30, экзон 31, экзон 32, экзон 33, экзон 34, экзон 35, экзон 36, экзон 37, экзон 38, экзон 39, экзон 40, экзон 41, экзон 42, экзон 43, экзон 44, экзон 45, экзон 46, экзон 47, экзон 48, экзон 49, экзон 50, экзон 51, экзон 52, экзон 53, экзон 54, экзон 55, экзон 56, экзон 57, экзон 58, экзон 59, экзон 60, экзон 61, экзон 62, экзон 63, экзон 64, экзон 65, экзон 66 и/или экзон 67. В качестве неограничивающего примера, молекулы миРНК можно использовать для сайленсинга HTT дикого типа или мутантного HTT посредством направленного воздействия на экзон 1. В качестве другого неограничивающего примера, молекулы миРНК можно использовать для сайленсинга HTT дикого типа или мутантного HTT посредством направленного воздействия на экзон, отличный от экзона 1. В качестве другого неограничивающего примера, молекулы миРНК можно использовать для сайленсинга HTT дикого типа или мутантного HTT посредством направленного воздействия на экзон 50. В качестве другого неограничивающего примера, молекулы миРНК можно использовать для сайленсинга HTT дикого типа или мутантного HTT посредством направленного воздействия на экзон 67.

[00140] В одном из вариантов осуществления молекулы миРНК можно использовать для сайленсинга HTT дикого типа и/или мутантного HTT посредством направленного воздействия по меньшей мере на один экзон в последовательности htt. Экзон может представлять собой экзон 1, экзон 2, экзон 3, экзон 4, экзон 5, экзон 6, экзон 7, экзон 8, экзон 9, экзон 10, экзон 11, экзон 12, экзон 13, экзон 14, экзон 15, экзон 16, экзон 17, экзон 18, экзон 19, экзон 20, экзон 21, экзон 22, экзон 23, экзон 24, экзон 25, экзон 26, экзон 27, экзон 28, экзон 29, экзон 30, экзон 31, экзон 32, экзон 33, экзон 34, экзон 35, экзон 36, экзон 37, экзон 38, экзон 39, экзон 40, экзон 41, экзон 42, экзон 43, экзон 44, экзон 45, экзон 46, экзон 47, экзон 48, экзон 49, экзон 50, экзон 51, экзон 52, экзон 53, экзон 54, экзон 55, экзон 56, экзон 57, экзон 58, экзон 59, экзон 60, экзон 61, экзон 62, экзон 63, экзон 64, экзон 65, экзон 66 и/или экзон 67. В качестве неограничивающего примера, молекулы миРНК можно использовать для сайленсинга HTT дикого типа и/или мутантного HTT посредством направленного воздействия на экзон 1. В качестве другого неограничивающего примера, молекулы миРНК можно использовать для сайленсинга HTT дикого типа и/или мутантного HTT посредством направленного воздействия на экзон, отличный от экзона 1. В качестве другого неограничивающего примера, молекулы миРНК можно использовать для сайленсинга HTT дикого типа и/или мутантного HTT посредством направленного воздействия на экзон 50. В качестве другого неограничивающего примера, молекулы миРНК можно использовать для сайленсинга HTT дикого типа и/или мутантного HTT посредством направленного воздействия на экзон 67.

Модификация миРНК

[00141] В некоторых вариантах осуществления молекулы миРНК по настоящему изобретению, когда не доставляют в виде предшественника или ДНК, можно химически модифицировать для того, чтобы модулировать некоторые признаки молекул РНК, такие как, но не ограничиваясь этим, увеличение стабильности миРНК in vivo. Химически модифицированные молекулы миРНК можно использовать в терапевтических применениях у человека, и их усовершенствуют без нарушения активности RNAi молекул миРНК. В качестве неограничивающего примера, молекулы миРНК модифицированы как по 3′-, так и по 5′-концу как смысловой цепи, так и антисмысловой цепи.

[00142] В некоторых аспектах, миРНК-дуплексы по настоящему изобретению могут содержать один или несколько модифицированных нуклеотидов, таких как, но не ограничиваясь этим, нуклеотиды с модифицированными сахарами, модификации нуклеиновых оснований и/или модификации остова. В некоторых аспектах, молекула миРНК может содержать комбинированные модификации, например, комбинированные модификации нуклеинового основания и остова.

[00143] В одном из вариантов осуществления модифицированный нуклеотид может представлять собой нуклеотид с модифицированным сахаром. Нуклеотиды с модифицированными сахарами включают, но не ограничиваясь этим, 2′-фтор-, 2′-амино- и 2′-тиомодифицированные рибонуклеотиды, например, 2′-фтормодифицированные рибонуклеотиды. Модифицированные нуклеотиды можно модифицировать по фрагменту сахара, а также нуклеотиды, имеющие сахара или их аналоги, которые не являются рибозилом. Например, фрагменты сахаров могут представлять собой или могут быть на основе манноз, арабиноз, глюкопираноз, галактопираноз, 4′-тиорибоз и других сахаров, гетероциклов или карбоциклов.

[00144] В одном из вариантов осуществления модифицированный нуклеотид может представлять собой нуклеотид с модифицированным нуклеиновым основанием.

[00145] В одном из вариантов осуществления модифицированный нуклеотид может представлять собой нуклеотид с модифицированным остовом. В некоторых вариантах осуществления миРНК-дуплексы по настоящему изобретению дополнительно могут содержать другие модификации в остове. Нормальный «остов», как используют в настоящем документе, относится к повторяющимся чередующимся сахар-фосфатным последовательностям в молекуле ДНК или РНК. Сахара дезоксирибозу/рибозу соединяют 3'-гидроксилными и 5'-гидроксильными группами с фосфатными группами в сложных эфирных связях, также известных как «фосфодиэфирная» связь/линкер (PO связь). PO остовы можно модифицировать в качестве «фосфотиоатного остова (PS связь). В некоторых случаях, природные фосфодиэфирные связи можно заменить на амидные связи, но сохранять четыре атома между двумя сахарными звеньями. Такие амидные модификации могут облегчать твердофазный синтез олигонуклеотидов и увеличивать термодинамическую стабильность дуплекса, образуемого с миРНК комплементом. См., например, Mesmaeker et al., Pure & Appl. Chem., 1997, 3, 437-440; содержание которого включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме.

[00146] Модифицированные основания относятся к нуклеотидным основаниям, таким как, например, аденин, гуанин, цитозин, тимин, урацил, ксантин, инозин и квеуозин, которые модифицировали посредством замены или добавления одного или нескольких атомов или групп. Некоторые примеры модификаций фрагментов нуклеиновых оснований включают, но не ограничиваясь этим, алкилированные, галогенированные, тиолированные, аминированные, амидированные или ацетилированные основания, индивидуально или в комбинации. Более конкретные примеры включают, например, 5-пропинилуридин, 5-пропинилцитидин, 6-метиладенин, 6-метилгуанин, N,N-диметиладенин, 2-пропиладенин, 2-пропилгуанин, 2-аминоаденин, 1-метилинозин, 3-метилуридин, 5-метилцитидин, 5-метилуридин и другие нуклеотиды, имеющие модификации в 5 положении, 5-(2-амино)пропилуридин, 5-галогеноцитидин, 5-галогеноуридин, 4-ацетилцитидин, 1-метиладенозин, 2-метиладенозин, 3-метилцитидин, 6-метилуридин, 2-метилгуанозин, 7-метилгуанозин, 2,2-диметилгуанозин, 5-метиламиноэтилуридин, 5-метилоксиуридин, деазануклеотиды, такие как 7-деазааденозин, 6-азоуридин, 6-азоцитидин, 6-азотимидин, 5-метил-2-тиоуридин, другие тиооснования, такие как 2-тиоуридин и 4-тиоуридин и 2-тиоцитидин, дигидроуридин, псевдоуридин, квеуозин, археозин, нафтиловые и замещенные нафтиловые группы, любые O- и N-алкилированные пурины и пиримидины, такие как N6-метиладенозин, 5-метилкарбонилметилуридин, уридин 5-оксиуксусная кислота, пиридин-4-он, пиридин-2-он, фенильные и модифицированные фенильные группы, такие как аминофенол или 2,4,6-триметоксибензол, модифицированные цитозины, которые действуют в качестве нуклеотидов «G-clamp», 8-замещенные аденины и гуанины, 5-замещенные урацилы и тимины, азапиримидины, карбоксигидроксиалкилированные нуклеотиды, карбоксиалкиламиноалкилированные нуклеотиды и алкилкарбонилалкилированные нуклеотиды.

[00147] В одном из вариантов осуществления модифицированные нуклеотиды могут быть только в смысловой цепи.

[00148] В другом варианте осуществления модифицированные нуклеотиды могут быть только в антисмысловой цепи.

[00149] В некоторых вариантах осуществления модифицированные нуклеотиды могут быть как смысловых, так и в антисмысловых цепях.

[00150] В некоторых вариантах осуществления химически модифицированный нуклеотид не влияет на способность антисмысловой цепи образовывать пару с целевой последовательностью мРНК, такой как последовательность мРНК HTT.

Молекулярный каркас

[00151] В одном из вариантов осуществления молекулы миРНК можно кодировать в модулирующем полинуклеотиде, который также содержит молекулярный каркас. Как используют в настоящем документе, «молекулярный каркас» представляет собой каркас или стартовую молекулу, которая формирует последовательность или структурную основу, на которой разрабатывают или создают последующую молекулу.

[00152] В одном из вариантов осуществления молекулярный каркас содержит по меньшей мере одну 5'-фланкирующую область. В качестве неограничивающего примера, 5'-фланкирующая область может содержать 5'-фланкирующую последовательность, которая может быть любой длины и которую можно извлекать целиком или частично из последовательности микроРНК дикого типа или которая может представляют собой полностью искусственную последовательность.

[00153] В одном из вариантов осуществления молекулярный каркас содержит по меньшей мере одну 3'-фланкирующую область. В качестве неограничивающего примера, 3'-фланкирующая область может содержать 3'-фланкирующую последовательность, которая может быть любой длины и которую можно извлекать целиком или частично из последовательности микроРНК дикого типа или которая может представлять собой полностью искусственную последовательность.

[00154] В одном из вариантов осуществления молекулярный каркас содержит по меньшей мере одну область мотива петли. В качестве неограничивающего примера, область мотива петли может содержать последовательность, которая может быть любой длины.

[00155] В одном из вариантов осуществления молекулярный каркас содержит 5'-фланкирующую область, область мотива петли и/или 3'-фланкирующую область.

[00156] В одном из вариантов осуществления по меньшей мере одну полезную нагрузку (например, миРНК, мкРНК или другое средство RNAi, описанное в настоящем документе) можно кодировать модулирующим полинуклеотидом, который также может содержать по меньшей мере один молекулярный каркас. Молекулярный каркас может содержать 5'-фланкирующую последовательность, которая может быть любой длины и которую можно извлекать целиком или частично из последовательности микроРНК дикого типа или которая может быть полностью искусственной. 3'-фланкирующая последовательность может зеркально отражать 5'-фланкирующую последовательность и/или 3'-фланкирующую последовательность по размеру и точке начала репликации. Любая фланкирующая последовательность может отсутствовать. 3'-фланкирующая последовательность необязательно может содержать один или несколько мотивов CNNC, где «N» представляет любой нуклеотид.

[00157] Формирование стебля в структуре «стебель-петля» является минимумом модулирующего полинуклеотида, кодирующего по меньшей мере одну последовательность полезной нагрузки. В некоторых вариантах осуществления последовательность полезной нагрузки содержит по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, которая отчасти комплементарна с или образует гибрид с целевой последовательностью. В некоторых вариантах осуществления полезная нагрузка представляет собой молекулу миРНК или фрагмент молекулы миРНК.

[00158] В некоторых вариантах осуществления 5'-плечо структуры «стебель-петля» модулирующего полинуклеотида содержит последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую смысловую последовательность. Неограничивающие примеры смысловых последовательностей или их фрагментов или вариантов, которые можно кодировать модулирующим полинуклеотидом, описаны в таблице 2.

[00159] В некоторых вариантах осуществления 3'-плечо стебля-петли модулирующего полинуклеотида содержит последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую антисмысловую последовательность. Антисмысловая последовательность, в некоторых случаях, содержит нуклеотид «G» на самом 5'-конце. Неограничивающие примеры антисмысловых последовательностей или их фрагментов или вариантов, которые можно кодировать модулирующим полинуклеотидом, описаны в таблице 3.

[00160] В других вариантах осуществления смысловая последовательность может находиться на 3'-плече, тогда как антисмысловая последовательность находится на 5'-плече стебля структуры «стебель-петля» модулирующего полинуклеотида. Неограничивающие примеры смысловых и антисмысловых последовательностей, которые можно кодировать модулирующим полинуклеотидом, описаны в таблицах 2 и 3.

[00161] В одном из вариантов осуществления смысловые и антисмысловые последовательности могут быть полностью комплементарны на протяжении существенной части их длины. В других вариантах осуществления смысловая последовательность и антисмысловая последовательность может обладать по меньшей мере 70, 80, 90, 95 или 99% комплементарностью на протяжении независимо по меньшей мере 50, 60, 70, 80, 85, 90, 95 или 99% длины цепей.

[00162] Ни идентичность смысловой последовательности, ни гомология антисмысловой последовательности, не обязаны соответствовать 100% комплементарности с целевой последовательностью.

[00163] В одном из вариантов осуществления смысловую и антисмысловую последовательность структуры «стебель-петля» модулирующего полинуклеотида разделяет последовательность петли (также известная как мотив петли, линкер или линкерный мотив). Последовательность петли может быть любой длины, 4-30 нуклеотидов, 4-20 нуклеотидов, 4-15 нуклеотидов, 5-15 нуклеотидов, 6-12 нуклеотидов, 6 нуклеотидов, 7 нуклеотидов, 8 нуклеотидов, 9 нуклеотидов, 10 нуклеотидов, 11 нуклеотидов, 12 нуклеотидов, 13 нуклеотидов, 14 нуклеотидов и/или 15 нуклеотидов.

[00164] В некоторых вариантах осуществления последовательность петли содержит последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере один мотив UGUG. В некоторых вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая мотив UGUG, расположена на 5'-конце последовательности петли.

[00165] В одном из вариантов осуществления спейсерные области могут присутствовать в модулирующем полинуклеотиде для того, чтобы отделять один или несколько модулей (например, 5'-фланкирующую область, область мотива петли, 3'-фланкирующую область, смысловую последовательность, антисмысловую последовательность) друг от друга. Может присутствовать одна или несколько таких спейсерных областей.

[00166] В одном из вариантов осуществления спейсерная область в 8-20, то есть, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20 нуклеотидов может присутствовать между смысловой последовательностью и последовательностью фланкирующей области.

[00167] В одном из вариантов осуществления длина спейсерной области составляет 13 нуклеотидов, и она располагается между 5'-концом смысловой последовательности и 3'-концом фланкирующей последовательности. В одном из вариантов осуществления спейсер имеет достаточную длину для того, чтобы формировать приблизительно один оборот спирали последовательности.

[00168] В одном из вариантов осуществления спейсерная область в 8-20, то есть, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20 нуклеотидов может присутствовать между антисмысловой последовательностью и фланкирующей последовательностью.

[00169] В одном из вариантов осуществления спейсерная последовательность представляет собой 10-13, то есть, 10, 11, 12 или 13 нуклеотидов и расположена между 3'-концом антисмысловой последовательности и 5'-концом фланкирующей последовательности. В одном из вариантов осуществления спейсер имеет достаточную длину для того, чтобы формировать приблизительно один оборот спирали последовательности.

[00170] В одном из вариантов осуществления модулирующий полинуклеотид в направлении от 5' к 3' содержит 5'-фланкирующую последовательность, 5'-плечо, мотив петли, 3'-плечо и 3'-фланкирующую последовательность. В качестве неограничивающего примера, 5'-плечо может содержать смысловую последовательность и 3'-плечо содержит антисмысловую последовательность. В другом неограничивающем примере 5'-плечо содержит антисмысловую последовательность и 3'-плечо содержит смысловую последовательность.

[00171] В одном из вариантов осуществления последовательность 5'-плеча, полезной нагрузки (например, смысловой и/или антисмысловой последовательности), мотива петли и/или 3'-плеча можно изменять (например, заменяя 1 или больше нуклеотидов, добавляя нуклеотиды и/или удаляя нуклеотиды). Изменение может вызывать полезное изменение функции конструкции (например, увеличение нокдауна целевой последовательности, снижение разрушения конструкции, снижение эффекта ложной мишени, увеличение эффективности полезной нагрузки и снижение разрушения полезной нагрузки).

[00172] В одном из вариантов осуществления молекулярный каркас модулирующих полинуклеотидов выравнивают для того, чтобы иметь частоту вырезания направляющей цепи больше частоты вырезания сопровождающей цепи. Частота вырезания направляющей или сопровождающей цепи может составлять, независимо, 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99% или больше чем 99%. В качестве неограничивающего примера, частота вырезания направляющей цепи составляет по меньшей мере 80%. В качестве другого неограничивающего примера, частота вырезания направляющей цепи составляет по меньшей мере 90%.

[00173] В одном из вариантов осуществления частота вырезания направляющей цепи составляет больше частоты вырезания сопровождающей цепи. В одном из аспектов, частота вырезания направляющей цепи может быть по меньшей мере на 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99% или больше чем 99% больше, чем у сопровождающей цепи.

[00174] В одном из вариантов осуществления эффективность вырезания направляющей цепи составляет по меньшей мере 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99% или больше чем 99%. В качестве неограничивающего примера, эффективность вырезания направляющей цепи составляет больше чем 80%.

[00175] В одном из вариантов осуществления эффективность вырезания направляющей цепи составляет больше вырезания сопровождающей цепи из молекулярного каркаса. Вырезание направляющей цепи может быть в 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или больше чем 10 раз более эффективным, чем вырезание сопровождающей цепи из молекулярного каркаса.

[00176] В одном из вариантов осуществления молекулярный каркас содержит двухфункциональный направляющий модулирующий полинуклеотид. Как используют в настоящем документе, «двухфункциональный направляющий» модулирующий полинуклеотид представляет собой полинуклеотид, где и направляющие и сопровождающие цепи осуществляют нокдаун одной и той же мишени или направляющая и сопровождающая цепи осуществляют нокдаун различных мишеней.

[00177] В одном из вариантов осуществления молекулярный каркас модулирующих полинуклеотидов, описанных в настоящем документе, может содержать 5'-фланкирующую область, область мотива петли и 3'-фланкирующую область. Неограничивающие примеры последовательностей для 5'-фланкирующей области, области мотива петли (также можно обозначать как линкерной области) и 3'-фланкирующей области, которые можно кодировать модулирующими полинуклеотидами, описанными в настоящем документе, представлены в таблицах 6-8.

Таблица 6. 5'-фланкирующие области для молекулярного каркаса

Название 5'-фланкирующей области	Последовательность 5'-фланкирующей области	SEQ ID 5'-фланкирующей области
5F3	GUGCUGGGCGGGGGGCGGCGGGCCCUCCCGCAGAACACCAUGCGCUCCACGGAA	252
5F1	GUGCUGGGCGGGGGGCGGCGGGCCCUCCCGCAGAACACCAUGCGCUCUUCGGAA	250
5F2	GAAGCAAAGAAGGGGCAGAGGGAGCCCGUGAGCUGAGUGGGCCAGGGACUGGGAGAAGGAGUGAGGAGGCAGGGCCGGCAUGCCUCUGCUGCUGGCCAGA	251
5F4	GGGCCCUCCCGCAGAACACCAUGCGCUCCACGGAA	253
5F5	CUCCCGCAGAACACCAUGCGCUCCACGGAA	254
5F6	GUGCUGGGCGGGGGGCGGCGGGCCCUCCCGCAGAACACCAUGCGCUCCACGGAAG	255
5F7	GUGCUGGGCGGGGGGCGGCGGGCCCUCCCGCAGAACACCAUGCGCUCCUCGGAA	256

Таблица 7. Области мотива петли для молекулярного каркаса

Название области мотива петли	Последовательность области мотива петли	SEQ ID области мотива петли
L5	GUGGCCACUGAGAAG	261
L1	UGUGACCUGG	257
L2	UGUGAUUUGG	258
L3	GUCUGCACCUGUCACUAG	259
L4	GUGACCCAAG	260
L6	GUGACCCAAU	262
L7	GUGACCCAAC	263
L8	GUGGCCACUGAGAAA	264

Таблица 8. 3'-фланкирующие области для молекулярного каркаса

Название 3'-фланкирующей области	Последовательность 3'-фланкирующей области	SEQ ID 3'-фланкирующей области
3F1	CUGAGGAGCGCCUUGACAGCAGCCAUGGGAGGGCCGCCCCCUACCUCAGUGA	265
3F2	CUGUGGAGCGCCUUGACAGCAGCCAUGGGAGGGCCGCCCCCUACCUCAGUGA	266
3F3	UGGCCGUGUAGUGCUACCCAGCGCUGGCUGCCUCCUCAGCAUUGCAAUUCCUCUCCCAUCUGGGCACCAGUCAGCUACCCUGGUGGGAAUCUGGGUAGCC	267
3F4	CUGAGGAGCGCCUUGACAGCAGCCAUGGGAGGGCC	268
3F5	CUGCGGAGCGCCUUGACAGCAGCCAUGGGAGGGCCGCCCCCUACCUCAGUGA	269

[00178] Любые из областей или их фрагментов, которые описаны в таблицах 6-8, где U представляет собой T, можно использовать в качестве модулей в молекулярных каркасах, описанных в настоящем документе.

[00179] В одном из вариантов осуществления молекулярный каркас может содержать по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующей по меньшей мере одну 5'-фланкирующую область, перечисленную в таблице 6. В качестве неограничивающего примера, 5'-фланкирующая область может представлять собой 5F1, 5F2, 5F3, 5F4, 5F5, 5F6 или 5F7.

[00180] В одном из вариантов осуществления молекулярный каркас может содержать по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну фланкирующую область 5F1.

[00181] В одном из вариантов осуществления молекулярный каркас может содержать по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну фланкирующую область 5F2.

[00182] В одном из вариантов осуществления молекулярный каркас может содержать по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну фланкирующую область 5F3.

[00183] В одном из вариантов осуществления молекулярный каркас может содержать по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну фланкирующую область 5F4.

[00184] В одном из вариантов осуществления молекулярный каркас может содержать по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну фланкирующую область 5F5.

[00185] В одном из вариантов осуществления молекулярный каркас может содержать по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну фланкирующую область 5F6.

[00186] В одном из вариантов осуществления молекулярный каркас может содержать по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну фланкирующую область 5F7.

[00187] В одном из вариантов осуществления молекулярный каркас может содержать по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну область мотива петли, перечисленную в таблице 7. В качестве неограничивающего примера, область мотива петли может представлять собой L1, L2, L3, L4, L5, L6, L7 или L8.

[00188] В одном из вариантов осуществления молекулярный каркас может содержать по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну область мотива петли L1.

[00189] В одном из вариантов осуществления молекулярный каркас может содержать по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну область мотива петли L2.

[00190] В одном из вариантов осуществления молекулярный каркас может содержать по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну область мотива петли L3.

[00191] В одном из вариантов осуществления молекулярный каркас может содержать по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну область мотива петли L4.

[00192] В одном из вариантов осуществления молекулярный каркас может содержать по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну область мотива петли L5.

[00193] В одном из вариантов осуществления молекулярный каркас может содержать по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну область мотива петли L6.

[00194] В одном из вариантов осуществления молекулярный каркас может содержать по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну область мотива петли L7.

[00195] В одном из вариантов осуществления молекулярный каркас может содержать по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну область мотива петли L8.

[00196] В одном из вариантов осуществления молекулярный каркас может содержать по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну 3'-фланкирующую область, перечисленную в таблице 8. В качестве неограничивающего примера, 3'-фланкирующая область может представлять собой 3F1, 3F2, 3F3, 3F4 или 3F5.

[00197] В одном из вариантов осуществления молекулярный каркас может содержать по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну фланкирующую область 3F1.

[00198] В одном из вариантов осуществления молекулярный каркас может содержать по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну фланкирующую область 3F2.

[00199] В одном из вариантов осуществления молекулярный каркас может содержать по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну фланкирующую область 3F3.

[00200] В одном из вариантов осуществления молекулярный каркас может содержать по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну фланкирующую область 3F4.

[00201] В одном из вариантов осуществления молекулярный каркас может содержать по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну фланкирующую область 3F5.

[00202] В одном из вариантов осуществления молекулярный каркас может содержать по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну 5'-фланкирующую область и по меньшей мере одну область мотива петли, как приведено в таблицах 6 и 7. В качестве неограничивающего примера, 5'-фланкирующая область и область мотива петли могут представлять собой 5F1 и L1, 5F1 и L2, 5F1 и L3, 5F1 и L4, 5F1 и L5, 5F1 и L6, 5F1 и L7, 5F1 и L8, 5F2 и L1, 5F2 и L2, 5F2 и L3, 5F2 и L4, 5F2 и L5, 5F2 и L6, 5F2 и L7, 5F2 и L8, 5F3 и L1, 5F3 и L2, 5F3 и L3, 5F3 и L4, 5F3 и L5, 5F3 и L6, 5F3 и L7, 5F3 и L8, 5F4 и L1, 5F4 и L2, 5F4 и L3, 5F4 и L4, 5F4 и L5, 5F4 и L6, 5F4 и L7, 5F4 и L8, 5F5 и L1, 5F5 и L2, 5F5 и L3, 5F5 и L4, 5F5 и L5, 5F5 и L6, 5F5 и L7, 5F5 и L8, 5F6 и L1, 5F6 и L2, 5F6 и L3, 5F6 и L4, 5F6 и L5, 5F6 и L6, 5F6 и L7, 5F6 и L8, 5F7 и L1, 5F7 и L2, 5F7 и L3, 5F7 и L4, 5F7 и L5, 5F7 и L6, 5F7 и L7 и 5F7 и L8.

[00203] В одном из вариантов осуществления молекулярный каркас может содержать по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну фланкирующую область 5F2, и по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну область мотива петли L1.

[00204] В одном из вариантов осуществления молекулярный каркас может содержать по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну фланкирующую область 5F1, и по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну область мотива петли L4.

[00205] В одном из вариантов осуществления молекулярный каркас может содержать по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну фланкирующую область 5F7, и по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну область мотива петли L8.

[00206] В одном из вариантов осуществления молекулярный каркас может содержать по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну фланкирующую область 5F3, и по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну область мотива петли L4.

[00207] В одном из вариантов осуществления молекулярный каркас может содержать по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну фланкирующую область 5F3, и по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну область мотива петли L5.

[00208] В одном из вариантов осуществления молекулярный каркас может содержать по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну фланкирующую область 5F4, и по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну область мотива петли L4.

[00209] В одном из вариантов осуществления молекулярный каркас может содержать по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну фланкирующую область 5F3, и по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну область мотива петли L7.

[00210] В одном из вариантов осуществления молекулярный каркас может содержать по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну фланкирующую область 5F5, и по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну область мотива петли L4.

[00211] В одном из вариантов осуществления молекулярный каркас может содержать по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну фланкирующую область 5F6, и по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну область мотива петли L4.

[00212] В одном из вариантов осуществления молекулярный каркас может содержать по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну фланкирующую область 5F3, и по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну область мотива петли L6.

[00213] В одном из вариантов осуществления молекулярный каркас может содержать по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну фланкирующую область 5F7, и по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну область мотива петли L4.

[00214] В одном из вариантов осуществления молекулярный каркас может содержать по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну фланкирующую область 5F2, и по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну область мотива петли L2.

[00215] В одном из вариантов осуществления молекулярный каркас может содержать по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну фланкирующую область 5F1, и по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну область мотива петли L1.

[00216] В одном из вариантов осуществления молекулярный каркас может содержать по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну фланкирующую область 5F1, и по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну область мотива петли L2.

[00217] В одном из вариантов осуществления молекулярный каркас может содержать по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну 3'-фланкирующую область, и по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну область мотива петли, как приведено в таблицах 7 и 8. В качестве неограничивающего примера, 3'-фланкирующая область и область мотива петли могут представлять собой 3F1 и L1, 3F1 и L2, 3F1 и L3, 3F1 и L4, 3F1 и L5, 3F1 и L6, 3F1 и L7, 3F1 и L8, 3F2 и L1, 3F2 и L2, 3F2 и L3, 3F2 и L4, 3F2 и L5, 3F2 и L6, 3F2 и L7, 3F2 и L8, 3F3 и L1, 3F3 и L2, 3F3 и L3, 3F3 и L4, 3F3 и L5, 3F3 и L6, 3F3 и L7, 3F3 и L8, 3F4 и L1, 3F4 и L2, 3F4 и L3, 3F4 и L4, 3F4 и L5, 3F4 и L6, 3F4 и L7, 3F4 и L8, 3F5 и L1, 3F5 и L2, 3F5 и L3, 3F5 и L4, 3F5 и L5, 3F5 и L6, 3F5 и L7 и 3F5 и L8.

[00218] В одном из вариантов осуществления молекулярный каркас может содержать по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну область мотива петли L1, и по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну фланкирующую область 3F2.

[00219] В одном из вариантов осуществления молекулярный каркас может содержать по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну область мотива петли L4, и по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну фланкирующую область 3F1.

[00220] В одном из вариантов осуществления молекулярный каркас может содержать по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну область мотива петли L8, и по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну фланкирующую область 3F5.

[00221] В одном из вариантов осуществления молекулярный каркас может содержать по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну область мотива петли L5, и по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну фланкирующую область 3F1.

[00222] В одном из вариантов осуществления молекулярный каркас может содержать по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну область мотива петли L4, и по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну фланкирующую область 3F4.

[00223] В одном из вариантов осуществления молекулярный каркас может содержать по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну область мотива петли L7, и по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну фланкирующую область 3F1.

[00224] В одном из вариантов осуществления молекулярный каркас может содержать по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну область мотива петли L6, и по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну фланкирующую область 3F1.

[00225] В одном из вариантов осуществления молекулярный каркас может содержать по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну область мотива петли L4, и по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну фланкирующую область 3F5.

[00226] В одном из вариантов осуществления молекулярный каркас может содержать по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну область мотива петли L2, и по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну фланкирующую область 3F2.

[00227] В одном из вариантов осуществления молекулярный каркас может содержать по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну область мотива петли L1, и по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну фланкирующую область 3F3.

[00228] В одном из вариантов осуществления молекулярный каркас может содержать по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну область мотива петли L5, и по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну фланкирующую область 3F4.

[00229] В одном из вариантов осуществления молекулярный каркас может содержать по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну область мотива петли L1, и по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну фланкирующую область 3F1.

[00230] В одном из вариантов осуществления молекулярный каркас может содержать по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну область мотива петли L2, и по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну фланкирующую область 3F1.

[00231] В одном из вариантов осуществления молекулярный каркас может содержать по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну 5'-фланкирующую область, и по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере 3'-фланкирующую область, как приведено в таблицах 6 и 8. В качестве неограничивающего примера, фланкирующие области могут представлять собой 5F1 и 3F1, 5F1 и 3F2, 5F1 и 3F3, 5F1 и 3F4, 5F1 и 3F5, 5F2 и 3F1, 5F2 и 3F2, 5F2 и 3F3, 5F2 и 3F4, 5F2 и 3F5, 5F3 и 3F1, 5F3 и 3F2, 5F3 и 3F3, 5F3 и 3F4, 5F3 и 3F5, 5F4 и 3F1, 5F4 и 3F2, 5F4 и 3F3, 5F4 и 3F4, 5F4 и 3F5, 5F5 и 3F1, 5F5 и 3F2, 5F5 и 3F3, 5F5 и 3F4, 5F5 и 3F5, 5F6 и 3F1, 5F6 и 3F2, 5F6 и 3F3, 5F6 и 3F4, 5F6 и 3F5, 5F7 и 3F1, 5F7 и 3F2, 5F7 и 3F3, 5F7 и 3F4 и 5F7 и 3F5.

[00232] В одном из вариантов осуществления молекулярный каркас может содержать по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну 5'-фланкирующую область 5F2, и по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну 3'-фланкирующую область 3F2.

[00233] В одном из вариантов осуществления молекулярный каркас может содержать по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну 5'-фланкирующую область 5F1, и по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну 3'-фланкирующую область 3F1.

[00234] В одном из вариантов осуществления молекулярный каркас может содержать по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну 5'-фланкирующую область 5F7, и по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну 3'-фланкирующую область 3F5.

[00235] В одном из вариантов осуществления молекулярный каркас может содержать по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну 5'-фланкирующую область 5F3, и по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну 3'-фланкирующую область 3F1.

[00236] В одном из вариантов осуществления молекулярный каркас может содержать по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну 5'-фланкирующую область 5F4, и по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну 3'-фланкирующую область 3F4.

[00237] В одном из вариантов осуществления молекулярный каркас может содержать по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну 5'-фланкирующую область 5F5, и по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну 3'-фланкирующую область 3F4.

[00238] В одном из вариантов осуществления молекулярный каркас может содержать по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну 5'-фланкирующую область 5F6, и по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну 3'-фланкирующую область 3F1.

[00239] В одном из вариантов осуществления молекулярный каркас может содержать по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну 5'-фланкирующую область 5F2, и по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну 3'-фланкирующую область 3F3.

[00240] В одном из вариантов осуществления молекулярный каркас может содержать по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну 5'-фланкирующую область 5F3, и по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну 3'-фланкирующую область 3F4.

[00241] В одном из вариантов осуществления молекулярный каркас может содержать по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну 5'-фланкирующую область 5F1, и по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну 3'-фланкирующую область 3F2.

[00242] В одном из вариантов осуществления молекулярный каркас может содержать по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну 5'-фланкирующую область, по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну область мотива петли, и по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну 3'-фланкирующую область, как приведено в таблицах 6-8. В качестве неограничивающего примера, фланкирующие области и область мотива петли могут представлять собой 5F1, L1 и 3F1; 5F1, L1 и 3F2; 5F1, L1 и 3F3; 5F1, L1 и 3F4; 5F1, L1 и 3F5; 5F2, L1 и 3F1; 5F2, L1 и 3F2; 5F2, L1 и 3F3; 5F2, L1 и 3F4; 5F2, L1 и 3F5; 5F3, L1 и 3F3; 5F3, L1 и 3F2; 5F3, L1 и 3F3; 5F3, L1 и 3F4; 5F3, L1 и 3F5; 5F4, L1 и 3F4; 5F4, L1 и 3F2; 5F4, L1 и 3F3; 5F4, L1 и 3F4; 5F4, L1 и 3F5; 5F5, L1 и 3F1; 5F5, L1 и 3F2; 5F5, L1 и 3F3; 5F5, L1 и 3F4; 5F5, L1 и 3F5; 5F6, L1 и 3F1; 5F6, L1 и 3F2; 5F6, L1 и 3F3; 5F6, L1 и 3F4; 5F6, L1 и 3F5; 5F7, L1 и 3F1; 5F7, L1 и 3F2; 5F7, L1 и 3F3; 5F7, L1 и 3F4; 5F7, L1 и 3F5; 5F1, L2 и 3F1; 5F1, L2 и 3F2; 5F1, L2 и 3F3; 5F1, L2 и 3F4; 5F1, L2 и 3F5; 5F2, L2 и 3F1; 5F2, L2 и 3F2; 5F2, L2 и 3F3; 5F2, L2 и 3F4; 5F2, L2 и 3F5; 5F3, L2 и 3F1; 5F3, L2 и 3F2; 5F3, L2 и 3F3; 5F3, L2 и 3F4; 5F3, L2 и 3F5; 5F4, L2 и 3F1; 5F4, L2 и 3F2; 5F4, L2 и 3F3; 5F4, L2 и 3F4; 5F4, L2 и 3F5; 5F5, L2 и 3F1; 5F5, L2 и 3F2; 5F5, L2 и 3F3; 5F5, L2 и 3F4; 5F5, L2 и 3F5; 5F6, L2 и 3F1; 5F6, L2 и 3F2; 5F6, L2 и 3F3; 5F6, L2 и 3F4; 5F6, L2 и 3F5; 5F7, L2 и 3F1; 5F7, L2 и 3F2; 5F7, L2 и 3F3; 5F7, L2 и 3F4; 5F7, L2 и 3F5; 5F1, L3 и 3F1; 5F1, L3 и 3F2; 5F1, L3 и 3F3; 5F1, L3 и 3F4; 5F1, L3 и 3F5; 5F2, L3 и 3F1; 5F2, L3 и 3F2; 5F2, L3 и 3F3; 5F2, L3 и 3F4; 5F2, L3 и 3F5; 5F3, L3 и 3F1; 5F3, L3 и 3F2; 5F3, L3 и 3F3; 5F3, L3 и 3F4; 5F3, L3 и 3F5; 5F4, L3 и 3F1; 5F4, L3 и 3F2; 5F4, L3 и 3F3; 5F4, L3 и 3F4; 5F4, L3 и 3F5; 5F5, L3 и 3F1; 5F5, L3 и 3F2; 5F5, L3 и 3F3; 5F5, L3 и 3F4; 5F5, L3 и 3F5; 5F6, L3 и 3F1; 5F6, L3 и 3F2; 5F6, L3 и 3F3; 5F6, L3 и 3F4; 5F6, L3 и 3F5; 5F7, L3 и 3F1; 5F7, L3 и 3F2; 5F7, L3 и 3F3; 5F7, L3 и 3F4; 5F7, L3 и 3F5; 5F1, L4 и 3F1; 5F1, L4 и 3F2; 5F1, L4 и 3F3; 5F1, L4 и 3F4; 5F1, L4 и 3F5; 5F2, L4 и 3F1; 5F2, L4 и 3F2; 5F2, L4 и 3F3; 5F2, L4 и 3F4; 5F2, L4 и 3F5; 5F3, L4 и 3F1; 5F3, L4 и 3F2; 5F3, L4 и 3F3; 5F3, L4 и 3F4; 5F3, L4 и 3F5; 5F4, L4 и 3F1; 5F4, L4 и 3F2; 5F4, L4 и 3F3; 5F4, L4 и 3F4; 5F4, L4 и 3F5; 5F5, L4 и 3F1; 5F5, L4 и 3F2; 5F5, L4 и 3F3; 5F5, L4 и 3F4; 5F5, L4 и 3F5; 5F6, L4 и 3F1; 5F6, L4 и 3F2; 5F6, L4 и 3F3; 5F6, L4 и 3F4; 5F6, L4 и 3F5; 5F7, L4 и 3F1; 5F7, L4 и 3F2; 5F7, L4 и 3F3; 5F7, L4 и 3F4; 5F7, L4 и 3F5; 5F1, L5 и 3F1; 5F1, L5 и 3F2; 5F1, L5 и 3F3; 5F1, L5 и 3F4; 5F1, L5 и 3F5; 5F2, L5 и 3F1; 5F2, L5 и 3F2; 5F2, L5 и 3F3; 5F2, L5 и 3F4; 5F2, L5 и 3F5; 5F3, L5 и 3F1; 5F3, L5 и 3F2; 5F3, L5 и 3F3; 5F3, L5 и 3F4; 5F3, L5 и 3F5; 5F4, L5 и 3F1; 5F4, L5 и 3F2; 5F4, L5 и 3F3; 5F4, L5 и 3F4; 5F4, L5 и 3F5; 5F5, L5 и 3F1; 5F5, L5 и 3F2; 5F5, L5 и 3F3; 5F5, L5 и 3F4; 5F5, L5 и 3F5; 5F6, L5 и 3F1; 5F6, L5 и 3F2; 5F6, L5 и 3F3; 5F6, L5 и 3F4; 5F6, L5 и 3F5; 5F7, L5 и 3F1; 5F7, L5 и 3F2; 5F7, L5 и 3F3; 5F7, L5 и 3F4; 5F7, L5 и 3F5; 5F1, L6 и 3F1; 5F1, L6 и 3F2; 5F1, L6 и 3F3; 5F1, L6 и 3F4; 5F1, L6 и 3F5; 5F2, L6 и 3F1; 5F2, L6 и 3F2; 5F2, L6 и 3F3; 5F2, L6 и 3F4; 5F2, L6 и 3F5; 5F3, L6 и 3F1; 5F3, L6 и 3F2; 5F3, L6 и 3F3; 5F3, L6 и 3F4; 5F3, L6 и 3F5; 5F4, L6 и 3F1; 5F4, L6 и 3F2; 5F4, L6 и 3F3; 5F4, L6 и 3F4; 5F4, L6 и 3F5; 5F5, L6 и 3F1; 5F5, L6 и 3F2; 5F5, L6 и 3F3; 5F5, L6 и 3F4; 5F5, L6 и 3F5; 5F6, L6 и 3F1; 5F6, L6 и 3F2; 5F6, L6 и 3F3; 5F6, L6 и 3F4; 5F6, L6 и 3F5; 5F7, L6 и 3F1; 5F7, L6 и 3F2; 5F7, L6 и 3F3; 5F7, L6 и 3F4; 5F7, L6 и 3F5; 5F1, L7 и 3F1; 5F1, L7 и 3F2; 5F1, L7 и 3F3; 5F1, L7 и 3F4; 5F1, L7 и 3F5; 5F2, L7 и 3F1; 5F2, L7 и 3F2; 5F2, L7 и 3F3; 5F2, L7 и 3F4; 5F2, L7 и 3F5; 5F3, L7 и 3F1; 5F3, L7 и 3F2; 5F3, L7 и 3F3; 5F3, L7 и 3F4; 5F3, L7 и 3F5; 5F4, L7 и 3F1; 5F4, L7 и 3F2; 5F4, L7 и 3F3; 5F4, L7 и 3F4; 5F4, L7 и 3F5; 5F5, L7 и 3F1; 5F5, L7 и 3F2; 5F5, L7 и 3F3; 5F5, L7 и 3F4; 5F5, L7 и 3F5; 5F6, L7 и 3F1; 5F6, L7 и 3F2; 5F6, L7 и 3F3; 5F6, L7 и 3F4; 5F6, L7 и 3F5; 5F7, L7 и 3F1; 5F7, L7 и 3F2; 5F7, L7 и 3F3; 5F7, L7 и 3F4; 5F7, L7 и 3F5; 5F1, L8 и 3F1; 5F1, L8 и 3F2; 5F1, L8 и 3F3; 5F1, L8 и 3F4; 5F1, L8 и 3F5; 5F2, L8 и 3F1; 5F2, L8 и 3F2; 5F2, L8 и 3F3; 5F2, L8 и 3F4; 5F2, L8 и 3F5; 5F3, L8 и 3F1; 5F3, L8 и 3F2; 5F3, L8 и 3F3; 5F3, L8 и 3F4; 5F3, L8 и 3F5; 5F4, L8 и 3F1; 5F4, L8 и 3F2; 5F4, L8 и 3F3; 5F4, L8 и 3F4; 5F4, L8 и 3F5; 5F5, L8 и 3F1; 5F5, L8 и 3F2; 5F5, L8 и 3F3; 5F5, L8 и 3F4; 5F5, L8 и 3F5; 5F6, L8 и 3F1; 5F6, L8 и 3F2; 5F6, L8 и 3F3; 5F6, L8 и 3F4; 5F6, L8 и 3F5; 5F7, L8 и 3F1; 5F7, L8 и 3F2; 5F7, L8 и 3F3; 5F7, L8 и 3F4; и 5F7, L8 и 3F5.

[00243] В одном из вариантов осуществления молекулярный каркас может содержать по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну 5'-фланкирующую область 5F2, по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну область мотива петли L1, и по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну 3'-фланкирующую область 3F2.

[00244] В одном из вариантов осуществления молекулярный каркас может содержать по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну 5'-фланкирующую область 5F1, по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну область мотива петли L4, и по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну 3'-фланкирующую область 3F1.

[00245] В одном из вариантов осуществления молекулярный каркас может содержать по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну 5'-фланкирующую область 5F7, по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну область мотива петли L8, и по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну 3'-фланкирующую область 3F5.

[00246] В одном из вариантов осуществления молекулярный каркас может содержать по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну 5'-фланкирующую область 5F3, по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну область мотива петли L4, и по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну 3'-фланкирующую область 3F1.

[00247] В одном из вариантов осуществления молекулярный каркас может содержать по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну 5'-фланкирующую область 5F3, по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну область мотива петли L5, и по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну 3'-фланкирующую область 3F1.

[00248] В одном из вариантов осуществления молекулярный каркас может содержать по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну 5'-фланкирующую область 5F4, по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну область мотива петли L4, и по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну 3'-фланкирующую область 3F4.

[00249] В одном из вариантов осуществления молекулярный каркас может содержать по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну 5'-фланкирующую область 5F3, по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну область мотива петли L7, и по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну 3'-фланкирующую область 3F1.

[00250] В одном из вариантов осуществления молекулярный каркас может содержать по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну 5'-фланкирующую область 5F5, по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну область мотива петли L4, и по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну 3'-фланкирующую область 3F4.

[00251] В одном из вариантов осуществления молекулярный каркас может содержать по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну 5'-фланкирующую область 5F6, по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну область мотива петли L4, и по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну 3'-фланкирующую область 3F1.

[00252] В одном из вариантов осуществления молекулярный каркас может содержать по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну 5'-фланкирующую область 5F3, по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну область мотива петли L6, и по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну 3'-фланкирующую область 3F1.

[00253] В одном из вариантов осуществления молекулярный каркас может содержать по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну 5'-фланкирующую область 5F7, по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну область мотива петли L4, и по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну 3'-фланкирующую область 3F5.

[00254] В одном из вариантов осуществления молекулярный каркас может содержать по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну 5'-фланкирующую область 5F2, по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну область мотива петли L2, и по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну 3'-фланкирующую область 3F2.

[00255] В одном из вариантов осуществления молекулярный каркас может содержать по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну 5'-фланкирующую область 5F2, по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну область мотива петли L1, и по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну 3'-фланкирующую область 3F3.

[00256] В одном из вариантов осуществления молекулярный каркас может содержать по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну 5'-фланкирующую область 5F3, по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну область мотива петли L5, и по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну 3'-фланкирующую область 3F4.

[00257] В одном из вариантов осуществления молекулярный каркас может содержать по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну 5'-фланкирующую область 5F1, по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну область мотива петли L1, и по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну 3'-фланкирующую область 3F1.

[00258] В одном из вариантов осуществления молекулярный каркас может содержать по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну 5'-фланкирующую область 5F1, по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну область мотива петли L2, и по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну 3'-фланкирующую область 3F1.

[00259] В одном из вариантов осуществления молекулярный каркас может содержать по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну 5'-фланкирующую область 5F1, по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну область мотива петли L1, и по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну 3'-фланкирующую область 3F2.

[00260] В одном из вариантов осуществления молекулярный каркас может содержать по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну 5'-фланкирующую область 5F2, по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну область мотива петли L3, и по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну 3'-фланкирующую область 3F3.

[00261] В одном из вариантов осуществления модулирующий полинуклеотид может содержать последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующие 5'- и 3'-фланкирующие области, область мотива петли, смысловую последовательность и антисмысловую последовательность, как приведено в таблицах 9 и 10. В таблицах 9 и 10 приведены сопровождающие и направляющие цепи, а также 5'- и 3'-фланкирующие области и область петли (также обозначаемая как линкерная область). В таблицах 9 и 10, компонент «miR» в названии последовательности не обязательно соответствует нумерации последовательностей генов мкРНК (например, VOYHTmiR-102 представляет собой название последовательности и не обозначает, что miR-102 обязательно является частью последовательности).

Таблица 9. Кассеты первичной мкРНК, содержащие сопровождающие и направляющие последовательности (5'-3')

Название	SEQ ID NO: 5'-3'-фланк. области	SEQ ID NO: 5'-фланк. области	SEQ ID NO: сопров. области	SEQ ID NO: петли (линкера)	SEQ ID NO: направл.области	SEQ ID NO:3'-фланкир. области
VOYHTmiR-102.214	270	250	120	257	11	265
VOYHTmiR-104.214	271	250	127	257	11	265
VOYHTmiR-109.214	272	250	135	258	11	265
VOYHTmiR-114.214	273	250	145	257	11	266
VOYHTmiR-116.214	274	250	135	257	11	266
VOYHTmiR-127.214	275	251	135	259	5	267
VOYHTmiR-102.218	276	250	121	257	13	265
VOYHTmiR-104.218	277	250	128	257	13	265
VOYHTmiR-109.218	278	250	137	258	13	265
VOYHTmiR-114.218	279	250	146	257	13	266
VOYHTmiR-116.218	280	250	137	257	13	266
VOYHTmiR-127.218	281	251	137	259	13	267
VOYHTmiR-102.219.o	282	250	103	257	3	265
VOYHTmiR-104.219.o	283	250	106	257	3	265
VOYHTmiR-109.219.o	284	250	103	258	3	265
VOYHTmiR-114.219	285	250	109	257	3	266
VOYHTmiR-116.219.o	286	250	112	257	3	266
VOYHTmiR-127.219.o	287	251	103	259	3	267
VOYHTmiR-102.219.n	288	250	116	257	3	265
VOYHTmiR-104.219.n	289	250	117	257	3	265
VOYHTmiR-109.219.n	290	250	116	258	3	265
VOYHTmiR-116.219.n	291	250	118	257	3	266
VOYHTmiR-127.219.n	292	251	116	259	3	267
VOYHTmiR-102.257	293	250	122	257	15	265
VOYHTmiR-104.257	294	250	129	257	15	265
VOYHTmiR-109.257	295	250	138	258	15	265
VOYHTmiR-114.257	296	250	147	257	15	266
VOYHTmiR-116.257	297	250	138	257	15	266
VOYHTmiR-127.257	298	251	138	259	15	267
VOYHTmiR-102.894	299	250	104	257	5	265
VOYHTmiR-104.894	300	250	107	257	5	265
VOYHTmiR-109.894	301	250	104	258	5	265
VOYHTmiR-114.894	302	250	110	257	5	266
VOYHTmiR-116.894	303	250	113	257	5	266
VOYHTmiR-127.894	304	251	104	259	5	267
VOYHTmiR-102.907	305	250	125	257	21	265
VOYHTmiR-104.907	306	250	132	257	21	265
VOYHTmiR-109.907	307	250	142	258	21	265
VOYHTmiR-114.907	308	250	150	257	21	266
VOYHTmiR-116.907	309	250	142	257	21	266
VOYHTmiR-127.907	310	251	142	259	21	267
VOYHTmiR-102.372	311	250	123	257	17	265
VOYHTmiR-104.372	312	250	130	257	17	265
VOYHTmiR-109.372	313	250	139	258	17	265
VOYHTmiR-114.372	314	250	148	257	17	266
VOYHTmiR-116.372	315	250	139	257	17	266
VOYHTmiR-127.372	316	251	139	259	17	267
VOYHTmiR-102.425	317	250	124	257	19	265
VOYHTmiR-104.425	318	250	131	257	19	265
VOYHTmiR-109.425	319	250	140	258	19	265
VOYHTmiR-114.425	320	250	149	257	19	266
VOYHTmiR-116.425	321	250	140	257	19	266
VOYHTmiR-127.425	322	251	140	259	19	267
VOYHTmiR-102.032	323	250	152	257	25	265
VOYHTmiR-104.032	324	250	154	257	25	265
VOYHTmiR-109.032	325	250	157	258	25	265
VOYHTmiR-114.032	326	250	160	257	25	266
VOYHTmiR-116.032	327	250	157	257	25	266
VOYHTmiR-127.032	328	251	157	259	25	267
VOYHTmiR-102.020	329	250	151	257	23	265
VOYHTmiR-104.020	330	250	153	257	23	265
VOYHTmiR-109.020	331	250	155	258	23	265
VOYHTmiR-114.020	332	250	159	257	23	266
VOYHTmiR-116.020	333	250	155	257	23	266
VOYHTmiR-127.020	334	251	155	259	23	267
VOYHTmiR-102.016	335	250	119	257	9	265
VOYHTmiR-104.016	336	250	126	257	9	265
VOYHTmiR-109.016	337	250	133	258	9	265
VOYHTmiR-114.016	338	250	144	257	9	266
VOYHTmiR-116.016	339	250	133	257	9	266
VOYHTmiR-127.016	340	251	133	259	9	267
VOYHTmiR-102.579	341	250	105	257	7	265
VOYHTmiR-104.579	342	250	108	257	7	265
VOYHTmiR-109.579	343	250	105	258	7	265
VOYHTmiR-114.579	344	250	111	257	7	266
VOYHTmiR-116.579	345	250	114	257	7	266
VOYHTmiR-127.579	346	251	105	259	7	267
VOYHTmiR-104.579.1	347	250	168	260	7	265
VOYHTmiR-104.579.2	348	252	168	260	7	265
VOYHTmiR-104.579.3	349	252	168	261	7	265
VOYHTmiR-104.579.4	350	253	168	260	7	268
VOYHTmiR-104.579.6	351	254	168	260	7	268
VOYHTmiR-104.579.7	352	255	168	260	29	265
VOYHTmiR-104.579.8	353	252	169	262	7	265
VOYHTmiR-104.579.9	354	256	168	260	7	269
VOYHTmiR-102.020	355	250	151	257	23	265
VOYHTmiR-102.032	356	250	152	257	25	265
VOYHTmiR-104.020	357	250	153	257	23	265
VOYHTmiR-104.032	358	250	154	257	25	265
VOYHTmiR-109.020	359	250	155	258	23	265
VOYHTmiR-109.032	360	250	157	258	25	265
VOYHTmiR-114.020	361	250	159	257	23	266
VOYHTmiR-114.032	362	250	160	257	25	266
VOYHTmiR-116.020	363	250	155	257	23	266
VOYHTmiR-116.032	364	250	157	257	25	266
VOYHTmiR-127.020	365	251	155	259	23	267
VOYHTmiR-127.032	366	251	157	259	25	267

Таблица 10. Кассеты первичной мкРНК, содержащие направляющие и сопровождающие Последовательности (5'-3')

Название	SEQ ID NO: 5'-3'-фланк. область	SEQ ID NO: 5'-фланк. область	SEQ ID NO: направл. область	SEQ ID NO: петли	SEQ ID NO: сопров. область	SEQ ID NO:3'-фланк. область
VOYHTmiR-104.579.5	367	252	170	263	30	265
VOYHTmiR-104.579.10	368	256	171	264	7	279

[00262] В одном из вариантов осуществления молекулярный каркас может содержать один или несколько линкеров, известных в данной области. Линкеры могут разделять области или один молекулярный каркас от другого. В качестве неограничивающего примера, молекулярный каркас может быть полицистронным.

[00263] В одном из вариантов осуществления модулирующий полинуклеотид разрабатывают с использованием по меньшей мере одного из следующих свойств: вариант петли, вариант несовпадения/выпячивания/качания затравки, несовпадение стебля, вариант петли и вариант несовпадения основания стебля, несовпадение затравки и вариант несовпадения основания стебля, несовпадение стебля и вариант несовпадения основания стебля, качание затравки и вариант качания основания стебля или вариант последовательности стебля.

[00264] В одном из вариантов осуществления молекулярный каркас может представлять собой природный каркас первичной мкРНК. В качестве неограничивающего примера, молекулярный каркас может представлять собой каркас, полученный из каркаса miR155 человека.

[00265] В одном из вариантов осуществления молекулярный каркас можно располагать ниже промотора CMV, его фрагмента или варианта.

[00266] В одном из вариантов осуществления молекулярный каркас можно располагать ниже промотора CBA, его фрагмента или варианта.

[00267] В одном из вариантов осуществления молекулярный каркас может представлять собой природный каркас первичной мкРНК, расположенный ниже а CMV. В качестве неограничивающего примера, природный каркас первичной мкРНК извлекают из каркаса miR155 человека.

[00268] В одном из вариантов осуществления молекулярный каркас может представлять собой природный каркас первичной мкРНК, расположенный ниже CBA.

[00269] В одном из вариантов осуществления выбор молекулярного каркаса и модулирующего полинуклеотида определяют с помощью способа сравнения модулирующих полинуклеотидов в первичной мкРНК (см., например, способ, описанный в Miniarikova et al. Design, Characterization, and Lead Selection of Therapeutic miRNAs Targeting Huntingtin for Development of Gene Therapy for Huntington's Disease. Molecular Therapy-Nucleic Acids (2016) 5, e297 и международной публикации № WO2016102664; содержание каждого из которых включено в настоящее описание посредством ссылки во всей их полноте). Модулирующий полинуклеотид может быть направлен, но без ограничения, на экзон 1, повторы CAG, SNP rs362331 в экзоне 50 и/или SNP rs362307 в экзоне 67. Для того чтобы оценивать активности модулирующих полинуклеотидов использовали молекулярный каркас, который можно использовать в каркасе первичной мкРНК человека (например, каркас miR155), и промотор может представлять собой CMV. Активность можно определять in vitro с использованием клеток HEK293T и репортера (например, люциферазы). Для направленного воздействия на экзон 1, модулирующий полинуклеотид определяют как эффективный при нокдауне HTT, если нокдаун составляет 80% или больше. Для направленного воздействия на CAG модулирующий полинуклеотид определяют как эффективный при нокдауне HTT, если нокдаун составляет по меньшей мере 60%. Для направленного воздействия на SNP, модулирующий полинуклеотид определяют как эффективный при нокдауне HTT, если нокдаун составляет по меньшей мере 60%. Для аллельной избирательности к повторам CAG или SNP, направляющие модулирующие полинуклеотиды могут содержать по меньшей мере 1 замену для того, чтобы усовершенствовать аллельную избирательность. В качестве неограничивающего примера, замена может представлять собой G или C, замененные на T или соответствующий U и A, или T/U, замененные на C.

[00270] Для того чтобы оценивать оптимальный молекулярный каркас для модулирующего полинуклеотида, модулирующий полинуклеотид используют в каркасах первичной мкРНК с промотором CAG. Конструкции трансфицируют совместно с репортером (например, люциферазным репортером) в количестве 50 нг. Конструкции с больше чем 80% нокдауном при совместной трансфекции 50 нг считают эффективными. В одном из аспектов, предпочтительны конструкции с высокой активностью направляющей цепи. В одном из аспектов, предпочтительны конструкции с высокой активностью сопровождающей цепи. Молекулярные каркасы можно процессировать в клетках HEK293T с помощью NGS для того, чтобы определять соотношения направляющих и сопровождающих и вариабельность процессинга.

[00271] Для того чтобы оценивать молекулярные каркасы и модулирующие полинуклеотиды in vivo, молекулярные каркасы, содержащие модулирующие полинуклеотиды, упаковывают в AAV (например, серотип может быть AAV5 (см., например, способ и конструкции, описанные в WO2015060722, содержание которой включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме)) и вводят в модель in vivo (например, HD мышь Hu128/21), и соотношения направляющих и сопровождающих, процессинг 5'- и 3'-концов, обратное направляющих и сопровождающих цепей и нокдаун можно определять в различных областях модели.

[00272] В одном из вариантов осуществления выбор молекулярного каркаса и модулирующего полинуклеотида определяют с помощью способа сравнения модулирующих полинуклеотидов в природной первичной мкРНК и синтетической первичной мкРНК. Модулирующий полинуклеотид можно направлять, но без ограничения, на экзон, отличный от экзона 1. Для того чтобы оценивать активности модулирующих полинуклеотидов, используют молекулярный каркас с промотором CBA. В одном из аспектов, активность можно определять in vitro с использованием клеток HEK293T, клеток HeLa и репортера (например, люциферазы), и модулирующие полинуклеотиды с эффективным нокдауном демонстрировали нокдаун HTT по меньшей мере 80% в тестируемых клетках. Дополнительно, модулирующие полинуклеотиды, которые считают наиболее эффективными, демонстрировали низкую или нулевую значимую активность сопровождающей цепи (p-цепи). В другом аспекте эффект эндогенного нокдауна HTT оценивают посредством трансфекции in vitro с использованием клеток HEK293T, клеток HeLa и репортера. Эффективные модулирующие полинуклеотиды демонстрируют больше чем 50% эндогенный нокдаун HTT. В еще одном аспекте эффект эндогенного нокдауна HTT оценивают в клетках различных типов (например, HEK293, HeLa, первичных астроцитах, астроцитах U251, нейронах SH-SY5Y и фибробластах от пациентов с HD) посредством инфекции (например, AAV2). Эффективные модулирующие полинуклеотиды демонстрируют больше чем 60% эндогенный нокдаун HTT.

[00273] Для того чтобы оценивать молекулярные каркасы и модулирующие полинуклеотиды in vivo, молекулярные каркасы, содержащие модулирующие полинуклеотиды, упаковывают в AAV и вводят в модель in vivo (например, HD мышь YAC128), и соотношения направляющих и сопровождающих, процессинг 5'- и 3'-концов, соотношение направляющих и сопровождающих цепей и нокдаун можно определять в различных областях модели (например, тканевых областях). Молекулярные каркасы из образцов in vivo можно процессировать с помощью NGS для того, чтобы определять соотношения направляющих и сопровождающих и вариабельность процессинга.

Векторы

[00274] В некоторых вариантах осуществления молекулы миРНК, описанные в настоящем документе, можно кодировать с помощью векторов, таких как плазмиды или вирусные векторы. В одном из вариантов осуществления молекулы миРНК кодируют с помощью вирусных векторов. Вирусные векторы могут представлять собой, но не ограничиваясь этим, герпесвирусные (HSV) векторы, ретровирусные векторы, аденовирусные векторы, аденоассоциированные вирусные векторы, лентивирусные векторы и т. п. В некоторых конкретных вариантах осуществления вирусные векторы представляют собой AAV векторы.

Ретровирусные векторы

[00275] В некоторых вариантах осуществления миРНК-дуплекс, направленный на ген HTT, можно кодировать с помощью ретровирусного вектора (см., например, патенты США №№ 5399346; 5124263; 4650764 и 4980289; содержание каждого из которых включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме).

Аденовирусные векторы

[00276] Аденовирусы представляют собой эукариотические ДНК вирусы, которые можно модифицировать для эффективной доставки нуклеиновой кислоты в клетки различных типов in vivo и которые широко использовали в протоколах генной терапии, в том числе чтобы направлять гены в нервные клетки. Описаны различные репликационно-дефектные аденовирусные и минимальные аденовирусные векторы для терапевтических средств из нуклеиновых кислот (см., например, публикацию патента PCT №№ WO199426914, WO 199502697, WO199428152, WO199412649, WO199502697 и WO199622378; содержание каждого из которых включено посредством ссылки в полном объеме). Такие аденовирусные векторы также можно использовать для того, чтобы доставлять молекулы миРНК по настоящему изобретению в клетки.

Аденоассоциированные вирусные (AAV) векторы

[00277] Аденоассоциированный вирус (AAV) представляет собой зависимый парвовирус (подобно другим парвовирусам), который представляет собой одноцепочечный безоболочечный ДНК вирус, имеющий геном приблизительно 5000 нуклеотидов в длину и содержащий две открытые рамки считывания, кодирующие белки, отвечающие за репликацию (Rep) и структурный белок капсида (Cap). Открытые рамки считывания фланкированы двумя последовательностями инвертированных концевых повторов (ITR), которые служат в качестве участка начала репликации вирусного генома. Кроме того, геном AAV содержит упаковочную последовательность, позволяющую упаковывать вирусный геном в капсид AAV. AAV вектору нужен помощник (например, аденовирус), чтобы подвергаться продуктивной инфекции в инфицированных клетках. В отсутствие таких хелперных функций, вирионы AAV по существу проникают в клетки-хозяева, но не встраиваются в геном клетки.

[00278] В силу нескольких уникальных признаков, проводили исследования AAV векторов для доставки миРНК. Неограничивающие примеры признаков включают (i) способность инфицировать делящиеся и не делящиеся клетки; (ii) широкий спектр хозяев для инфекционности, в том числе клетки человека; (iii) AAV дикого типа не связан с каким-либо заболеванием и не демонстрирует репликацию в инфицированных клетках; (iv) отсутствие клеточно-опосредованного иммунного ответа против вектора и (v) неспособность встраиваться в хромосому организма-хозяина, тем самым снижая потенциал долгосрочных генетических изменений. Кроме того, инфекция AAV векторами оказывает минимальное влияние на изменение паттерна экспрессии генов клетки (Stilwell and Samulski et al., Biomethods, 2003, 34, 148).

[00279] Обычно, AAV векторы для доставки миРНК могут представлять собой рекомбинантные вирусные векторы, которые репликационно-дефектны, поскольку у них отсутствуют последовательности, кодирующие функциональные белки Rep и Cap в вирусном геноме. В некоторых случаях, дефектные AAV векторы могут не содержать большинство или все кодирующие последовательности и по существу только содержат одну или две последовательности ITR AAV и упаковочную последовательность.

[00280] В одном из вариантов осуществления AAV векторы, содержащие последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую молекулы миРНК по настоящему изобретению, можно вводить в клетки млекопитающих.

[00281] AAV векторы можно модифицировать для того, чтобы повышать эффективность доставки. Таие модифицированные AAV векторы, содержащие последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую молекулы миРНК по настоящему изобретению, можно эффективно упаковывать и использовать для успешного инфицирования целевых клеток с высокой частотой и минимальной токсичностью.

[00282] В некоторых вариантах осуществления AAV вектор, содержащий последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую молекулы миРНК по настоящему изобретению, может представлять собой AAV вектор серотипа человека. Такой AAV вектор человека можно извлекать из любого известного серотипа, например, из любого одного из серотипов AAV1-AAV11. В качестве неограничивающих примеров, AAV векторы могут представлять собой векторы, содержащие полученный из AAV1 геном в полученном из AAV1 капсиде; векторы, содержащие полученный из AAV2 геном в полученном из AAV2 капсиде; векторы, содержащие полученный из AAV4 геном в полученном из AAV4 капсиде; векторы, содержащие полученный из AAV6 геном в полученном из AAV6 капсиде, или векторы, содержащие полученный из AAV9 геном в полученном из AAV9 капсиде.

[00283] В других вариантах осуществления AAV вектор, содержащий последовательность нуклеиновой кислоты для кодирования молекулы миРНК по настоящему изобретению, может представлять собой псевдотипированный гибридный или химерный AAV вектор, который содержит последовательности и/или компоненты, происходящие из по меньшей мере двух различных серотипов AAV. Псевдотипированные AAV векторы могут представлять собой векторы, содержащие геном AAV, полученный из AAV одного серотипа, и капсидный белок, полученный по меньшей мере частично из AAV другого серотипа. В качестве неограничивающих примеров, такие псевдотипированные AAV векторы могут представлять собой векторы, содержащие полученный из AAV2 геном в полученном из AAV1 капсиде; или векторы, содержащие полученный из AAV2 геном в полученном из AAV6 капсиде; или векторы, содержащие полученный из AAV2 геном в полученном из AAV4 капсиде; или полученный из AAV2 геном в полученном из AAV9 капсиде. Схожим образом, настоящее изобретение предусматривает любой гибридный или химерный AAV вектор.

[00284] В других вариантах осуществления AAV векторы, содержащие последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую молекулы миРНК по настоящему изобретению, можно использовать для того, чтобы доставлять молекулы миРНК в центральную нервную систему (например, патент США № 6180613; содержание которого включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме).

[00285] В некоторых аспектах AAV векторы, содержащие последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую молекулы миРНК по настоящему изобретению, дополнительно могут содержать модифицированный капсид, содержащий пептиды не вирусного происхождения. В других аспектах, AAV вектор может содержать химерный капсид со специфичностью к CNS, чтобы содействовать доставке кодируемых дуплексов миРНК в головной мозг и спинной мозг. Например, можно создавать выравнивание нуклеотидных последовательностей cap из вариантов AAV, проявляющих тропизм к CNS, чтобы идентифицировать последовательность и структуру вариабельной области (VR).

[00286] В одном из вариантов осуществления AAV вектор, содержащий последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую молекулы миРНК по настоящему изобретению, может кодировать молекулы миРНК, которые представляют собой полицистронные молекулы. Молекулы миРНК дополнительно могут содержать один или несколько линкеров между областями молекул миРНК.

Самокомплементарные и одноцепочечные векторы

[00287] В одном из вариантов осуществления AAV вектор, используемый в настоящем изобретении, представляет собой одноцепочечный вектор (ssAAV).

[00288] В другом варианте осуществления AAV векторы могут представлять собой самокомплементарные AAV векторы (scAAV). scAAV векторы содержат обе цепи ДНК, которые ренатурируют друг с другом с образованием двухцепочечной ДНК. Пропуская синтез второй цепи, scAAV делают возможной быструю экспрессию в клетке.

[00289] В одном из вариантов осуществления AAV вектор, используемый в настоящем изобретении, представляет собой scAAV.

[00290] В данной области раскрыты способы получения и/или модификации AAV векторов, таких как псевдотипированные AAV векторы (международные публикации патентов №№ WO200028004; WO200123001; WO2004112727; WO 2005005610 и WO 2005072364, содержание каждого из которых включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме).

Серотипы AAV

[00291] AAV частицы по настоящему изобретению могут содержать любой природный или рекомбинантный серотип AAV или могут быть получены из него. В соответствии с настоящим изобретением, в AAV частицах можно использовать или их можно основывать на серотипе, выбранном из любых из следующих AAV1, AAV2, AAV2G9, AAV3, AAV3a, AAV3b, AAV3-3, AAV4, AAV4-4, AAV5, AAV6, AAV6.1, AAV6.2, AAV6.1.2, AAV7, AAV7.2, AAV8, AAV9, AAV9.11, AAV9.13, AAV9.16, AAV9.24, AAV9.45, AAV9.47, AAV9.61, AAV9.68, AAV9.84, AAV9.9, AAV10, AAV11, AAV12, AAV16.3, AAV24.1, AAV27.3, AAV42.12, AAV42-1b, AAV42-2, AAV42-3a, AAV42-3b, AAV42-4, AAV42-5a, AAV42-5b, AAV42-6b, AAV42-8, AAV42-10, AAV42-11, AAV42-12, AAV42-13, AAV42-15, AAV42-aa, AAV43-1, AAV43-12, AAV43-20, AAV43-21, AAV43-23, AAV43-25, AAV43-5, AAV44.1, AAV44.2, AAV44.5, AAV223.1, AAV223.2, AAV223.4, AAV223.5, AAV223.6, AAV223.7, AAV1-7/rh.48, AAV1-8/rh.49, AAV2-15/rh.62, AAV2-3/rh.61, AAV2-4/rh.50, AAV2-5/rh.51, AAV3.1/hu.6, AAV3.1/hu.9, AAV3-9/rh.52, AAV3-11/rh.53, AAV4-8/r11.64, AAV4-9/rh.54, AAV4-19/rh.55, AAV5-3/rh.57, AAV5-22/rh.58, AAV7.3/hu.7, AAV16.8/hu.10, AAV16.12/hu.11, AAV29.3/bb.1, AAV29.5/bb.2, AAV106.1/hu.37, AAV114.3/hu.40, AAV127.2/hu.41, AAV127.5/hu.42, AAV128.3/hu.44, AAV130.4/hu.48, AAV145.1/hu.53, AAV145.5/hu.54, AAV145.6/hu.55, AAV161.10/hu.60, AAV161.6/hu.61, AAV33.12/hu.17, AAV33.4/hu.15, AAV33.8/hu.16, AAV52/hu.19, AAV52.1/hu.20, AAV58.2/hu.25, AAVA3.3, AAVA3.4, AAVA3.5, AAVA3.7, AAVC1, AAVC2, AAVC5, AAV-DJ, AAV-DJ8, AAVF3, AAVF5, AAVH2, AAVrh.72, AAVhu.8, AAVrh.68, AAVrh.70, AAVpi.1, AAVpi.3, AAVpi.2, AAVrh.60, AAVrh.44, AAVrh.65, AAVrh.55, AAVrh.47, AAVrh.69, AAVrh.45, AAVrh.59, AAVhu.12, AAVH6, AAVLK03, AAVH-1/hu.1, AAVH-5/hu.3, AAVLG-10/rh.40, AAVLG-4/rh.38, AAVLG-9/hu.39, AAVN721-8/rh.43, AAVCh.5, AAVCh.5R1, AAVcy.2, AAVcy.3, AAVcy.4, AAVcy.5, AAVCy.5R1, AAVCy.5R2, AAVCy.5R3, AAVCy.5R4, AAVcy.6, AAVhu.1, AAVhu.2, AAVhu.3, AAVhu.4, AAVhu.5, AAVhu.6, AAVhu.7, AAVhu.9, AAVhu.10, AAVhu.11, AAVhu.13, AAVhu.15, AAVhu.16, AAVhu.17, AAVhu.18, AAVhu.20, AAVhu.21, AAVhu.22, AAVhu.23.2, AAVhu.24, AAVhu.25, AAVhu.27, AAVhu.28, AAVhu.29, AAVhu.29R, AAVhu.31, AAVhu.32, AAVhu.34, AAVhu.35, AAVhu.37, AAVhu.39, AAVhu.40, AAVhu.41, AAVhu.42, AAVhu.43, AAVhu.44, AAVhu.44R1, AAVhu.44R2, AAVhu.44R3, AAVhu.45, AAVhu.46, AAVhu.47, AAVhu.48, AAVhu.48R1, AAVhu.48R2, AAVhu.48R3, AAVhu.49, AAVhu.51, AAVhu.52, AAVhu.54, AAVhu.55, AAVhu.56, AAVhu.57, AAVhu.58, AAVhu.60, AAVhu.61, AAVhu.63, AAVhu.64, AAVhu.66, AAVhu.67, AAVhu.14/9, AAVhu.t 19, AAVrh.2, AAVrh.2R, AAVrh.8, AAVrh.8R, AAVrh.10, AAVrh.12, AAVrh.13, AAVrh.13R, AAVrh.14, AAVrh.17, AAVrh.18, AAVrh.19, AAVrh.20, AAVrh.21, AAVrh.22, AAVrh.23, AAVrh.24, AAVrh.25, AAVrh.31, AAVrh.32, AAVrh.33, AAVrh.34, AAVrh.35, AAVrh.36, AAVrh.37, AAVrh.37R2, AAVrh.38, AAVrh.39, AAVrh.40, AAVrh.46, AAVrh.48, AAVrh.48.1, AAVrh.48.1.2, AAVrh.48.2, AAVrh.49, AAVrh.51, AAVrh.52, AAVrh.53, AAVrh.54, AAVrh.56, AAVrh.57, AAVrh.58, AAVrh.61, AAVrh.64, AAVrh.64R1, AAVrh.64R2, AAVrh.67, AAVrh.73, AAVrh.74, AAVrh8R, мутант A586R AAVrh8R, мутант R533A AAVrh8R, AAAV, BAAV, AAV козы, AAV коровы, AAVhE1.1, AAVhEr1.5, AAVhER1.14, AAVhEr1.8, AAVhER1.16, AAVhER1.18, AAVhEr1.35, AAVhEr1.7, AAVhEr1.36, AAVhEr2.29, AAVhEr2.4, AAVhEr2.16, AAVhEr2.30, AAVhEr2.31, AAVhEr2.36, AAVhER1.23, AAVhEr3.1, AAV2.5T, AAV-PAEC, AAV-LK01, AAV-LK02, AAV-LK03, AAV-LK04, AAV-LK05, AAV-LK06, AAV-LK07, AAV-LK08, AAV-LK09, AAV-LK10, AAV-LK11, AAV-LK12, AAV-LK13, AAV-LK14, AAV-LK15, AAV-LK16, AAV-LK17, AAV-LK18, AAV-LK19, AAV-PAEC2, AAV-PAEC4, AAV-PAEC6, AAV-PAEC7, AAV-PAEC8, AAV-PAEC11, AAV-PAEC12, AAV-2-пре-мкРНК-101, AAV-8h, AAV-8b, AAV-h, AAV-b, AAV SM 10-2, AAV Shuffle 100-1, AAV Shuffle 100-3, AAV Shuffle 100-7, AAV Shuffle 10-2, AAV Shuffle 10-6, AAV Shuffle 10-8, AAV Shuffle 100-2, AAV SM 10-1, AAV SM 10-8, AAV SM 100-3, AAV SM 100-10, BNP61 AAV, BNP62 AAV, BNP63 AAV, AAVrh.50, AAVrh.43, AAVrh.62, AAVrh.48, AAVhu.19, AAVhu.11, AAVhu.53, AAV4-8/rh.64, AAVLG-9/hu.39, AAV54.5/hu.23, AAV54.2/hu.22, AAV54.7/hu.24, AAV54.1/hu.21, AAV54.4R/hu.27, AAV46.2/hu.28, AAV46.6/hu.29, AAV128.1/hu.43, AAV подлинного типа (ttAAV), UPENN AAV 10, японских серотипов AAV 10, AAV CBr-7.1, AAV CBr-7.10, AAV CBr-7.2, AAV CBr-7.3, AAV CBr-7.4, AAV CBr-7.5, AAV CBr-7.7, AAV CBr-7.8, AAV CBr-B7.3, AAV CBr-B7.4, AAV CBr-E1, AAV CBr-E2, AAV CBr-E3, AAV CBr-E4, AAV CBr-E5, AAV CBr-e5, AAV CBr-E6, AAV CBr-E7, AAV CBr-E8, AAV CHt-1, AAV CHt-2, AAV CHt-3, AAV CHt-6.1, AAV CHt-6.10, AAV CHt-6.5, AAV CHt-6.6, AAV CHt-6.7, AAV CHt-6.8, AAV CHt-P1, AAV CHt-P2, AAV CHt-P5, AAV CHt-P6, AAV CHt-P8, AAV CHt-P9, AAV CKd-1, AAV CKd-10, AAV CKd-2, AAV CKd-3, AAV CKd-4, AAV CKd-6, AAV CKd-7, AAV CKd-8, AAV CKd-B1, AAV CKd-B2, AAV CKd-B3, AAV CKd-B4, AAV CKd-B5, AAV CKd-B6, AAV CKd-B7, AAV CKd-B8, AAV CKd-H1, AAV CKd-H2, AAV CKd-H3, AAV CKd-H4, AAV CKd-H5, AAV CKd-H6, AAV CKd-N3, AAV CKd-N4, AAV CKd-N9, AAV CLg-F1, AAV CLg-F2, AAV CLg-F3, AAV CLg-F4, AAV CLg-F5, AAV CLg-F6, AAV CLg-F7, AAV CLg-F8, AAV CLv-1, AAV CLv1-1, AAV Clv1-10, AAV CLv1-2, AAV CLv-12, AAV CLv1-3, AAV CLv-13, AAV CLv1-4, AAV Clv1-7, AAV Clv1-8, AAV Clv1-9, AAV CLv-2, AAV CLv-3, AAV CLv-4, AAV CLv-6, AAV CLv-8, AAV CLv-D1, AAV CLv-D2, AAV CLv-D3, AAV CLv-D4, AAV CLv-D5, AAV CLv-D6, AAV CLv-D7, AAV CLv-D8, AAV CLv-E1, AAV CLv-K1, AAV CLv-K3, AAV CLv-K6, AAV CLv-L4, AAV CLv-L5, AAV CLv-L6, AAV CLv-M1, AAV CLv-M11, AAV CLv-M2, AAV CLv-M5, AAV CLv-M6, AAV CLv-M7, AAV CLv-M8, AAV CLv-M9, AAV CLv-R1, AAV CLv-R2, AAV CLv-R3, AAV CLv-R4, AAV CLv-R5, AAV CLv-R6, AAV CLv-R7, AAV CLv-R8, AAV CLv-R9, AAV CSp-1, AAV CSp-10, AAV CSp-11, AAV CSp-2, AAV CSp-3, AAV CSp-4, AAV CSp-6, AAV CSp-7, AAV CSp-8, AAV CSp-8.10, AAV CSp-8.2, AAV CSp-8.4, AAV CSp-8.5, AAV CSp-8.6, AAV CSp-8.7, AAV CSp-8.8, AAV CSp-8.9, AAV CSp-9, AAV.hu.48R3, AAV.VR-355, AAV3B, AAV4, AAV5, AAVF1/HSC1, AAVF11/HSC11, AAVF12/HSC12, AAVF13/HSC13, AAVF14/HSC14, AAVF15/HSC15, AAVF16/HSC16, AAVF17/HSC17, AAVF2/HSC2, AAVF3/HSC3, AAVF4/HSC4, AAVF5/HSC5, AAVF6/HSC6, AAVF7/HSC7, AAVF8/HSC8, AAVF9/HSC9, AAV-PHP.B (PHP.B), AAV-PHP.A (PHP.A), G2B-26, G2B-13, TH1.1-32 и/или TH1.1-35 и их вариантов. В качестве неограничивающего примера, капсид рекомбинантного AAV вируса представляет собой AAV1. В качестве неограничивающего примера, капсид рекомбинантного AAV вируса представляет собой AAV2. В качестве неограничивающего примера, капсид рекомбинантного AAV вируса представляет собой AAVrh10. В качестве неограничивающего примера, капсид рекомбинантного AAV вируса представляет собой AAV9(hu14). В качестве неограничивающего примера, капсид рекомбинантного AAV вируса представляет собой AAV-DJ. В качестве неограничивающего примера, капсид рекомбинантного AAV вируса представляет собой AAV9.47. В качестве неограничивающего примера, капсид рекомбинантного AAV вируса представляет собой AAV-DJ8. В качестве неограничивающего примера, капсид рекомбинантного AAV вируса представляет собой AAV-PHP.B. В качестве неограничивающего примера, капсид рекомбинантного AAV вируса представляет собой AAV-PHP.A.

[00292] В некоторых вариантах осуществления серотип AAV может представлять собой или иметь последовательность, как описано в публикации США № US20030138772, содержание которой включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме, такую как, но не ограничиваясь этим, AAV1 (SEQ ID NO:6 и 64 из US20030138772), AAV2 (SEQ ID NO:7 и 70 из US20030138772), AAV3 (SEQ ID NO:8 и 71 из US20030138772), AAV4 (SEQ ID NO:63 из US20030138772), AAV5 (SEQ ID NO:114 из US20030138772), AAV6 (SEQ ID NO:65 из US20030138772), AAV7 (SEQ ID NO:1-3 из US20030138772), AAV8 (SEQ ID NO:4 и 95 из US20030138772), AAV9 (SEQ ID NO:5 и 100 из US20030138772), AAV10 (SEQ ID NO:117 из US20030138772), AAV11 (SEQ ID NO:118 из US20030138772), AAV12 (SEQ ID NO:119 из US20030138772), AAVrh10 (аминокислоты с 1 до 738 из SEQ ID NO:81 из US20030138772), AAV16.3 (US20030138772 SEQ ID NO:10), AAV29.3/bb.1 (US20030138772 SEQ ID NO:11), AAV29.4 (US20030138772 SEQ ID NO:12), AAV29.5/bb.2 (US20030138772 SEQ ID NO:13), AAV1.3 (US20030138772 SEQ ID NO:14), AAV13.3 (US20030138772 SEQ ID NO:15), AAV24.1 (US20030138772 SEQ ID NO:16), AAV27.3 (US20030138772 SEQ ID NO:17), AAV7.2 (US20030138772 SEQ ID NO:18), AAVC1 (US20030138772 SEQ ID NO:19), AAVC3 (US20030138772 SEQ ID NO:20), AAVC5 (US20030138772 SEQ ID NO:21), AAVF1 (US20030138772 SEQ ID NO:22), AAVF3 (US20030138772 SEQ ID NO:23), AAVF5 (US20030138772 SEQ ID NO:24), AAVH6 (US20030138772 SEQ ID NO:25), AAVH2 (US20030138772 SEQ ID NO:26), AAV42-8 (US20030138772 SEQ ID NO:27), AAV42-15 (US20030138772 SEQ ID NO:28), AAV42-5b (US20030138772 SEQ ID NO:29), AAV42-1b (US20030138772 SEQ ID NO:30), AAV42-13 (US20030138772 SEQ ID NO:31), AAV42-3a (US20030138772 SEQ ID NO:32), AAV42-4 (US20030138772 SEQ ID NO:33), AAV42-5a (US20030138772 SEQ ID NO:34), AAV42-10 (US20030138772 SEQ ID NO:35), AAV42-3b (US20030138772 SEQ ID NO:36), AAV42-11 (US20030138772 SEQ ID NO:37), AAV42-6b (US20030138772 SEQ ID NO:38), AAV43-1 (US20030138772 SEQ ID NO:39), AAV43-5 (US20030138772 SEQ ID NO:40), AAV43-12 (US20030138772 SEQ ID NO:41), AAV43-20 (US20030138772 SEQ ID NO:42), AAV43-21 (US20030138772 SEQ ID NO:43), AAV43-23 (US20030138772 SEQ ID NO:44), AAV43-25 (US20030138772 SEQ ID NO:45), AAV44.1 (US20030138772 SEQ ID NO:46), AAV44.5 (US20030138772 SEQ ID NO:47), AAV223.1 (US20030138772 SEQ ID NO:48), AAV223.2 (US20030138772 SEQ ID NO:49), AAV223.4 (US20030138772 SEQ ID NO:50), AAV223.5 (US20030138772 SEQ ID NO:51), AAV223.6 (US20030138772 SEQ ID NO:52), AAV223.7 (US20030138772 SEQ ID NO:53), AAVA3.4 (US20030138772 SEQ ID NO:54), AAVA3.5 (US20030138772 SEQ ID NO:55), AAVA3.7 (US20030138772 SEQ ID NO:56), AAVA3.3 (US20030138772 SEQ ID NO:57), AAV42.12 (US20030138772 SEQ ID NO:58), AAV44.2 (US20030138772 SEQ ID NO:59), AAV42-2 (US20030138772 SEQ ID NO:9) или их варианты.

[00293] В некоторых вариантах осуществления серотип AAV может представлять собой или иметь последовательность, как описано в публикации США № US20150159173, содержание которой включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме, такой как, но не ограничиваясь этим, AAV2 (SEQ ID NO:7 и 23 из US20150159173), rh20 (SEQ ID NO:1 из US20150159173), rh32/33 (SEQ ID NO:2 из US20150159173), rh39 (SEQ ID NO:3, 20 и 36 из US20150159173), rh46 (SEQ ID NO:4 и 22 из US20150159173), rh73 (SEQ ID NO:5 из US20150159173), rh74 (SEQ ID NO:6 из US20150159173), AAV6.1 (SEQ ID NO:29 из US20150159173), rh.8 (SEQ ID NO:41 из US20150159173), rh.48.1 (SEQ ID NO:44 из US20150159173), hu.44 (SEQ ID NO:45 из US20150159173), hu.29 (SEQ ID NO:42 из US20150159173), hu.48 (SEQ ID NO:38 из US20150159173), rh54 (SEQ ID NO:49 из US20150159173), AAV2 (SEQ ID NO:7 из US20150159173), cy.5 (SEQ ID NO:8 и 24 из US20150159173), rh.10 (SEQ ID NO:9 и 25 из US20150159173), rh.13 (SEQ ID NO:10 и 26 из US20150159173), AAV1 (SEQ ID NO:11 и 27 из US20150159173), AAV3 (SEQ ID NO:12 и 28 из US20150159173), AAV6 (SEQ ID NO:13 и 29 из US20150159173), AAV7 (SEQ ID NO:14 и 30 из US20150159173), AAV8 (SEQ ID NO:15 и 31 из US20150159173), hu.13 (SEQ ID NO:16 и 32 из US20150159173), hu.26 (SEQ ID NO:17 и 33 из US20150159173), hu.37 (SEQ ID NO:18 и 34 из US20150159173), hu.53 (SEQ ID NO:19 и 35 из US20150159173), rh.43 (SEQ ID NO:21 и 37 из US20150159173), rh2 (SEQ ID NO:39 из US20150159173), rh.37 (SEQ ID NO:40 из US20150159173), rh.64 (SEQ ID NO:43 из US20150159173), rh.48 (SEQ ID NO:44 из US20150159173), ch.5 (SEQ ID NO:46 из US20150159173), rh.67 (SEQ ID NO:47 из US20150159173), rh.58 (SEQ ID NO:48 из US20150159173) или их варианты, включая в качестве неограничивающих примеров Cy5R1, Cy5R2, Cy5R3, Cy5R4, rh.13R, rh.37R2, rh.2R, rh.8R, rh.48.1, rh.48.2, rh.48.1.2, hu.44R1, hu.44R2, hu.44R3, hu.29R, ch.5R1, rh64R1, rh64R2, AAV6.2, AAV6.1, AAV6.12, hu.48R1, hu.48R2 и hu.48R3.

[00294] В некоторых вариантах осуществления серотип AAV может представлять собой или иметь последовательность, как описано в патенте США № US 7198951, содержание которого включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме, такой как, но не ограничиваясь этим, AAV9 (SEQ ID NO:1-3 из US 7198951), AAV2 (SEQ ID NO:4 из US 7198951), AAV1 (SEQ ID NO:5 из US 7198951), AAV3 (SEQ ID NO:6 из US 7198951), и AAV8 (SEQ ID NO:7 из US7198951).

[00295] В некоторых вариантах осуществления серотип AAV может представлять собой или иметь мутацию в последовательности AAV9, как описано в N Pulicherla et al. (Molecular Therapy 19(6):1070-1078 (2011), включенном в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме), такую как, но не ограничиваясь этим, AAV9.9, AAV9.11, AAV9.13, AAV9.16, AAV9.24, AAV9.45, AAV9.47, AAV9.61, AAV9.68, AAV9.84.

[00296] В некоторых вариантах осуществления серотип AAV может представлять собой или иметь последовательность, как описано в патенте США № US 6156303, содержание которого включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме, такой как, но не ограничиваясь этим, AAV3B (SEQ ID NO:1 и 10 из US 6156303), AAV6 (SEQ ID NO:2, 7 и 11 из US 6156303), AAV2 (SEQ ID NO:3 и 8 из US 6156303), AAV3A (SEQ ID NO:4 и 9 из US 6156303) или их производные.

[00297] В некоторых вариантах осуществления серотип AAV может представлять собой или иметь последовательность, как описано в публикации США № US20140359799, содержание которой включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме, такой как, но не ограничиваясь этим, AAV8 (SEQ ID NO:1 из US20140359799), AAVDJ (SEQ ID NO:2 и 3 из US20140359799) или их варианты.

[00298] В некоторых вариантах осуществления серотип может быть AAVDJ (или AAV-DJ) или его вариантом, таким как AAVDJ8 (или AAV-DJ8), как описано в Grimm et al. (Journal of Virology 82(12): 5887-5911 (2008), включенной в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме). Аминокислотная последовательность AAVDJ8 может содержать две или больше мутаций для того, чтобы удалять гепаринсвязывающий домен (HBD). В качестве неограничивающего примера, последовательность AAV-DJ, описанная как SEQ ID NO:1 в патенте США № 7588772, содержание которого включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме, может содержать две мутации: (1) R587Q, где аргинин (R; Arg) в аминокислоте 587 изменяют на глутамин (Q; Gln) и (2) R590T, где аргинин (R; Arg) в аминокислоте 590 изменяют на треонин (T; Thr). В качестве другого неограничивающего примера, может содержать три мутации: (1) K406R, где лизин (K; Lys) в аминокислоте 406 изменяют на аргинин (R; Arg), (2) R587Q, где аргинин (R; Arg) в аминокислоте 587 изменяют на глутамин (Q; Gln) и (3) R590T, где аргинин (R; Arg) в аминокислоте 590 изменяют на треонин (T; Thr).

[00299] В некоторых вариантах осуществления серотип AAV может представлять собой или иметь последовательность AAV4, как описано в международной публикации № WO1998011244, содержание которой включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме, например, но не ограничиваясь этим, AAV4 (SEQ ID NO:1-20 из WO1998011244).

[00300] В некоторых вариантах осуществления серотип AAV может представлять собой или иметь мутацию в последовательности AAV2 для того, чтобы создавать AAV2G9, как описано в международной публикации № WO2014144229, которая включена в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме.

[00301] В некоторых вариантах осуществления серотип AAV может представлять собой или иметь последовательность, как описано в международной публикации № WO2005033321, содержание которой включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме, например, но не ограничиваясь этим, AAV3-3 (SEQ ID NO:217 из WO2005033321), AAV1 (SEQ ID NO:219 и 202 из WO2005033321), AAV106.1/hu.37 (SEQ ID NO:10 из WO2005033321), AAV114.3/hu.40 (SEQ ID NO:11 из WO2005033321), AAV127.2/hu.41 (SEQ ID NO:6 и 8 из WO2005033321), AAV128.3/hu.44 (SEQ ID NO:81 из WO2005033321), AAV130.4/hu.48 (SEQ ID NO:78 из WO2005033321), AAV145.1/hu.53 (SEQ ID NO:176 и 177 из WO2005033321), AAV145.6/hu.56 (SEQ ID NO:168 и 192 из WO2005033321), AAV16.12/hu.11 (SEQ ID NO:153 и 57 из WO2005033321), AAV16.8/hu.10 (SEQ ID NO:: 156 и 56 из WO2005033321), AAV161.10/hu.60 (SEQ ID NO:170 из WO2005033321), AAV161.6/hu.61 (SEQ ID NO:174 из WO2005033321), AAV1-7/rh.48 (SEQ ID NO:32 из WO2005033321), AAV1-8/rh.49 (SEQ ID NO:103 и 25 из WO2005033321), AAV2 (SEQ ID NO:211 и 221 из WO2005033321), AAV2-15/rh.62 (SEQ ID NO:33 и 114 из WO2005033321), AAV2-3/rh.61 (SEQ ID NO:21 из WO2005033321), AAV2-4/rh.50 (SEQ ID NO:23 и 108 из WO2005033321), AAV2-5/rh.51 (SEQ ID NO:104 и 22 из WO2005033321), AAV3.1/hu.6 (SEQ ID NO:5 и 84 из WO2005033321), AAV3.1/hu.9 (SEQ ID NO:155 и 58 из WO2005033321), AAV3-11/rh.53 (SEQ ID NO:186 и 176 из WO2005033321), AAV3-3 (SEQ ID NO:200 из WO2005033321), AAV33.12/hu.17 (SEQ ID NO:4 из WO2005033321), AAV33.4/hu.15 (SEQ ID NO:50 из WO2005033321), AAV33.8/hu.16 (SEQ ID NO:51 из WO2005033321), AAV3-9/rh.52 (SEQ ID NO:96 и 18 из WO2005033321), AAV4-19/rh.55 (SEQ ID NO:117 из WO2005033321), AAV4-4 (SEQ ID NO:201 и 218 из WO2005033321), AAV4-9/rh.54 (SEQ ID NO:116 из WO2005033321), AAV5 (SEQ ID NO:199 и 216 из WO2005033321), AAV52.1/hu.20 (SEQ ID NO:63 из WO2005033321), AAV52/hu.19 (SEQ ID NO:133 из WO2005033321), AAV5-22/rh.58 (SEQ ID NO:27 из WO2005033321), AAV5-3/rh.57 (SEQ ID NO:105 из WO2005033321), AAV5-3/rh.57 (SEQ ID NO:26 из WO2005033321), AAV58.2/hu.25 (SEQ ID NO:49 из WO2005033321), AAV6 (SEQ ID NO:203 и 220 из WO2005033321), AAV7 (SEQ ID NO:222 и 213 из WO2005033321), AAV7.3/hu.7 (SEQ ID NO:55 из WO2005033321), AAV8 (SEQ ID NO:223 и 214 из WO2005033321), AAVH-1/hu.1 (SEQ ID NO:46 из WO2005033321), AAVH-5/hu.3 (SEQ ID NO:44 из WO2005033321), AAVhu.1 (SEQ ID NO:144 из WO2005033321), AAVhu.10 (SEQ ID NO:156 из WO2005033321), AAVhu.11 (SEQ ID NO:153 из WO2005033321), AAVhu.12 (WO2005033321 SEQ ID NO:59), AAVhu.13 (SEQ ID NO:129 из WO2005033321), AAVhu.14/AAV9 (SEQ ID NO:123 и 3 из WO2005033321), AAVhu.15 (SEQ ID NO:147 из WO2005033321), AAVhu.16 (SEQ ID NO:148 из WO2005033321), AAVhu.17 (SEQ ID NO:83 из WO2005033321), AAVhu.18 (SEQ ID NO:149 из WO2005033321), AAVhu.19 (SEQ ID NO:133 из WO2005033321), AAVhu.2 (SEQ ID NO:143 из WO2005033321), AAVhu.20 (SEQ ID NO:134 из WO2005033321), AAVhu.21 (SEQ ID NO:135 из WO2005033321), AAVhu.22 (SEQ ID NO:138 из WO2005033321), AAVhu.23.2 (SEQ ID NO:137 из WO2005033321), AAVhu.24 (SEQ ID NO:136 из WO2005033321), AAVhu.25 (SEQ ID NO:146 из WO2005033321), AAVhu.27 (SEQ ID NO:140 из WO2005033321), AAVhu.29 (SEQ ID NO:132 из WO2005033321), AAVhu.3 (SEQ ID NO:145 из WO2005033321), AAVhu.31 (SEQ ID NO:121 из WO2005033321), AAVhu.32 (SEQ ID NO:122 из WO2005033321), AAVhu.34 (SEQ ID NO:125 из WO2005033321), AAVhu.35 (SEQ ID NO:164 из WO2005033321), AAVhu.37 (SEQ ID NO:88 из WO2005033321), AAVhu.39 (SEQ ID NO:102 из WO2005033321), AAVhu.4 (SEQ ID NO:141 из WO2005033321), AAVhu.40 (SEQ ID NO:87 из WO2005033321), AAVhu.41 (SEQ ID NO:91 из WO2005033321), AAVhu.42 (SEQ ID NO:85 из WO2005033321), AAVhu.43 (SEQ ID NO:160 из WO2005033321), AAVhu.44 (SEQ ID NO:144 из WO2005033321), AAVhu.45 (SEQ ID NO:127 из WO2005033321), AAVhu.46 (SEQ ID NO:159 из WO2005033321), AAVhu.47 (SEQ ID NO:128 из WO2005033321), AAVhu.48 (SEQ ID NO:157 из WO2005033321), AAVhu.49 (SEQ ID NO:189 из WO2005033321), AAVhu.51 (SEQ ID NO:190 из WO2005033321), AAVhu.52 (SEQ ID NO:191 из WO2005033321), AAVhu.53 (SEQ ID NO:186 из WO2005033321), AAVhu.54 (SEQ ID NO:188 из WO2005033321), AAVhu.55 (SEQ ID NO:187 из WO2005033321), AAVhu.56 (SEQ ID NO:192 из WO2005033321), AAVhu.57 (SEQ ID NO:193 из WO2005033321), AAVhu.58 (SEQ ID NO:194 из WO2005033321), AAVhu.6 (SEQ ID NO:84 из WO2005033321), AAVhu.60 (SEQ ID NO:184 из WO2005033321), AAVhu.61 (SEQ ID NO:185 из WO2005033321), AAVhu.63 (SEQ ID NO:195 из WO2005033321), AAVhu.64 (SEQ ID NO:196 из WO2005033321), AAVhu.66 (SEQ ID NO:197 из WO2005033321), AAVhu.67 (SEQ ID NO:198 из WO2005033321), AAVhu.7 (SEQ ID NO:150 из WO2005033321), AAVhu.8 (WO2005033321 SEQ ID NO:12), AAVhu.9 (SEQ ID NO:155 из WO2005033321), AAVLG-10/rh.40 (SEQ ID NO:14 из WO2005033321), AAVLG-4/rh.38 (SEQ ID NO:86 из WO2005033321), AAVLG-4/rh.38 (SEQ ID NO:7 из WO2005033321), AAVN721-8/rh.43 (SEQ ID NO:163 из WO2005033321), AAVN721-8/rh.43 (SEQ ID NO:43 из WO2005033321), AAVpi.1 (WO2005033321 SEQ ID NO:28), AAVpi.2 (WO2005033321 SEQ ID NO:30), AAVpi.3 (WO2005033321 SEQ ID NO:29), AAVrh.38 (SEQ ID NO:86 из WO2005033321), AAVrh.40 (SEQ ID NO:92 из WO2005033321), AAVrh.43 (SEQ ID NO:163 из WO2005033321), AAVrh.44 (WO2005033321 SEQ ID NO:34), AAVrh.45 (WO2005033321 SEQ ID NO:41), AAVrh.47 (WO2005033321 SEQ ID NO:38), AAVrh.48 (SEQ ID NO:115 из WO2005033321), AAVrh.49 (SEQ ID NO:103 из WO2005033321), AAVrh.50 (SEQ ID NO:108 из WO2005033321), AAVrh.51 (SEQ ID NO:104 из WO2005033321), AAVrh.52 (SEQ ID NO:96 из WO2005033321), AAVrh.53 (SEQ ID NO:97 из WO2005033321), AAVrh.55 (WO2005033321 SEQ ID NO:37), AAVrh.56 (SEQ ID NO:152 из WO2005033321), AAVrh.57 (SEQ ID NO:105 из WO2005033321), AAVrh.58 (SEQ ID NO:106 из WO2005033321), AAVrh.59 (WO2005033321 SEQ ID NO:42), AAVrh.60 (WO2005033321 SEQ ID NO:31), AAVrh.61 (SEQ ID NO:107 из WO2005033321), AAVrh.62 (SEQ ID NO:114 из WO2005033321), AAVrh.64 (SEQ ID NO:99 из WO2005033321), AAVrh.65 (WO2005033321 SEQ ID NO:35), AAVrh.68 (WO2005033321 SEQ ID NO:16), AAVrh.69 (WO2005033321 SEQ ID NO:39), AAVrh.70 (WO2005033321 SEQ ID NO:20), AAVrh.72 (WO2005033321 SEQ ID NO:9) или их варианты, включая в качестве неограничивающих примеров, AAVcy.2, AAVcy.3, AAVcy.4, AAVcy.5, AAVcy.6, AAVrh.12, AAVrh.17, AAVrh.18, AAVrh.19, AAVrh.21, AAVrh.22, AAVrh.23, AAVrh.24, AAVrh.25, AAVrh.25/42 15, AAVrh.31, AAVrh.32, AAVrh.33, AAVrh.34, AAVrh.35, AAVrh.36, AAVrh.37, AAVrh14. Неограничивающие примеры вариантов включают SEQ ID NO:13, 15, 17, 19, 24, 36, 40, 45, 47, 48, 51-54, 60-62, 64-77, 79, 80, 82, 89, 90, 93-95, 98, 100, 101, 109-113, 118-120, 124, 126, 131, 139, 142, 151, 154, 158, 161, 162, 165-183, 202, 204-212, 215, 219, 224-236 из WO2005033321, содержание которой включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме.

[00302] В некоторых вариантах осуществления серотип AAV может представлять собой или иметь последовательность, как описано в международной публикации № WO2015168666, содержание которой включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме, например, но не ограничиваясь этим, AAVrh8R (SEQ ID NO:9 из WO2015168666), мутант A586R AAVrh8R (SEQ ID NO:10 из WO2015168666), мутант R533A AAVrh8R (SEQ ID NO:11 из WO2015168666) или их варианты.

[00303] В некоторых вариантах осуществления серотип AAV может представлять собой или иметь последовательность, как описано в патенте США № US9233131, содержание которого включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме, например, но не ограничиваясь этим, AAVhE1.1 (SEQ ID NO:44 из US9233131), AAVhEr1.5 (SEQ ID NO:45 из US9233131), AAVhER1.14 (SEQ ID NO:46 из US9233131), AAVhEr1.8 (SEQ ID NO:47 из US9233131), AAVhER1.16 (SEQ ID NO:48 из US9233131), AAVhER1.18 (SEQ ID NO:49 из US9233131), AAVhEr1.35 (SEQ ID NO:50 из US9233131), AAVhEr1.7 (SEQ ID NO:51 из US9233131), AAVhEr1.36 (SEQ ID NO:52 из US9233131), AAVhEr2.29 (SEQ ID NO:53 из US9233131), AAVhEr2.4 (SEQ ID NO:54 из US9233131), AAVhEr2.16 (SEQ ID NO:55 из US9233131), AAVhEr2.30 (SEQ ID NO:56 из US9233131), AAVhEr2.31 (SEQ ID NO:58 из US9233131), AAVhEr2.36 (SEQ ID NO:57 из US9233131), AAVhER1.23 (SEQ ID NO:53 из US9233131), AAVhEr3.1 (SEQ ID NO:59 из US9233131), AAV2.5T (SEQ ID NO:42 из US9233131) или их варианты.

[00304] В некоторых вариантах осуществления серотип AAV может представлять собой или иметь последовательность, как описано в публикации патента США № US20150376607, содержание которой включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме, например, но не ограничиваясь этим, AAV-PAEC (SEQ ID NO:1 из US20150376607), AAV-LK01 (SEQ ID NO:2 из US20150376607), AAV-LK02 (SEQ ID NO:3 из US20150376607), AAV-LK03 (SEQ ID NO:4 из US20150376607), AAV-LK04 (SEQ ID NO:5 из US20150376607), AAV-LK05 (SEQ ID NO:6 из US20150376607), AAV-LK06 (SEQ ID NO:7 из US20150376607), AAV-LK07 (SEQ ID NO:8 из US20150376607), AAV-LK08 (SEQ ID NO:9 из US20150376607), AAV-LK09 (SEQ ID NO:10 из US20150376607), AAV-LK10 (SEQ ID NO:11 из US20150376607), AAV-LK11 (SEQ ID NO:12 из US20150376607), AAV-LK12 (SEQ ID NO:13 из US20150376607), AAV-LK13 (SEQ ID NO:14 из US20150376607), AAV-LK14 (SEQ ID NO:15 из US20150376607), AAV-LK15 (SEQ ID NO:16 из US20150376607), AAV-LK16 (SEQ ID NO:17 из US20150376607), AAV-LK17 (SEQ ID NO:18 из US20150376607), AAV-LK18 (SEQ ID NO:19 из US20150376607), AAV-LK19 (SEQ ID NO:20 из US20150376607), AAV-PAEC2 (SEQ ID NO:21 из US20150376607), AAV-PAEC4 (SEQ ID NO:22 из US20150376607), AAV-PAEC6 (SEQ ID NO:23 из US20150376607), AAV-PAEC7 (SEQ ID NO:24 из US20150376607), AAV-PAEC8 (SEQ ID NO:25 из US20150376607), AAV-PAEC11 (SEQ ID NO:26 из US20150376607), AAV-PAEC12 (SEQ ID NO:27, из US20150376607) или их варианты.

[00305] В некоторых вариантах осуществления серотип AAV может представлять собой или иметь последовательность, как описано в патенте США № US9163261, содержание которого включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме, например, но не ограничиваясь этим, AAV-2-пре-мкРНК-101 (SEQ ID NO:1 US9163261) или ее варианты.

[00306] В некоторых вариантах осуществления серотип AAV может представлять собой или иметь последовательность, как описано в публикации патента США № US20150376240, содержание которой включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме, например, но не ограничиваясь этим, AAV-8h (SEQ ID NO:6 из US20150376240), AAV-8b (SEQ ID NO:5 из US20150376240), AAV-h (SEQ ID NO:2 из US20150376240), AAV-b (SEQ ID NO:1 из US20150376240) или их варианты.

[00307] В некоторых вариантах осуществления серотип AAV может представлять собой или иметь последовательность, как описано в публикации патента США № US20160017295, содержание которой включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме, например, но не ограничиваясь этим, AAV SM 10-2 (SEQ ID NO:22 из US20160017295), AAV Shuffle 100-1 (SEQ ID NO:23 из US20160017295), AAV Shuffle 100-3 (SEQ ID NO:24 из US20160017295), AAV Shuffle 100-7 (SEQ ID NO:25 из US20160017295), AAV Shuffle 10-2 (SEQ ID NO:34 из US20160017295), AAV Shuffle 10-6 (SEQ ID NO:35 из US20160017295), AAV Shuffle 10-8 (SEQ ID NO:36 из US20160017295), AAV Shuffle 100-2 (SEQ ID NO:37 из US20160017295), AAV SM 10-1 (SEQ ID NO:38 из US20160017295), AAV SM 10-8 (SEQ ID NO:39 из US20160017295), AAV SM 100-3 (SEQ ID NO:40 из US20160017295), AAV SM 100-10 (SEQ ID NO:41 из US20160017295) или их варианты.

[00308] В некоторых вариантах осуществления серотип AAV может представлять собой или иметь последовательность, как описано в публикации патента США № US20150238550, содержание которой включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме, например, но не ограничиваясь этим, BNP61 AAV (SEQ ID NO:1 из US20150238550), BNP62 AAV (SEQ ID NO:3 из US20150238550), BNP63 AAV (SEQ ID NO:4 из US20150238550) или их варианты.

[00309] В некоторых вариантах осуществления серотип AAV может представлять собой или может иметь последовательность как описано в публикации патента США № US20150315612, содержание которой включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме, например, но не ограничиваясь этим, AAVrh.50 (SEQ ID NO:108 из US20150315612), AAVrh.43 (SEQ ID NO:163 из US20150315612), AAVrh.62 (SEQ ID NO:114 из US20150315612), AAVrh.48 (SEQ ID NO:115 из US20150315612), AAVhu.19 (SEQ ID NO:133 из US20150315612), AAVhu.11 (SEQ ID NO:153 из US20150315612), AAVhu.53 (SEQ ID NO:186 из US20150315612), AAV4-8/rh.64 (SEQ ID NO:15 из US20150315612), AAVLG-9/hu.39 (SEQ ID NO:24 из US20150315612), AAV54.5/hu.23 (SEQ ID NO:60 из US20150315612), AAV54.2/hu.22 (SEQ ID NO:67 из US20150315612), AAV54.7/hu.24 (SEQ ID NO:66 из US20150315612), AAV54.1/hu.21 (SEQ ID NO:65 из US20150315612), AAV54.4R/hu.27 (SEQ ID NO:64 из US20150315612), AAV46.2/hu.28 (SEQ ID NO:68 из US20150315612), AAV46.6/hu.29 (SEQ ID NO:69 из US20150315612), AAV128.1/hu.43 (SEQ ID NO:80 из US20150315612) или их варианты.

[00310] В некоторых вариантах осуществления серотип AAV может представлять собой или иметь последовательность, как описано в международной публикации № WO2015121501, содержание которой включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме, например, но не ограничиваясь этим, AAV подлинного типа (ttAAV) (SEQ ID NO:2 из WO2015121501), «UPenn AAV10» (SEQ ID NO:8 из WO2015121501), «японский AAV10» (SEQ ID NO:9 из WO2015121501) или их варианты.

[00311] В соответствии с настоящим изобретением, серотип капсида AAV может быть выбран или использовать из множества видов. В одном из вариантов осуществления AAV может представлять собой AAV птицы (AAAV). Серотип AAAV может представлять собой или иметь последовательность, как описано в патенте США № US 9238800, содержание которого включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме, например, но не ограничиваясь этим, AAAV (SEQ ID NO:1, 2, 4, 6, 8, 10, 12, и 14 из US 9238800) или ее варианты.

[00312] В одном из вариантов осуществления AAV может представлять собой AAV коровы (BAAV). Серотип BAAV может представлять собой или иметь последовательность, как описано в патенте США № US 9193769, содержание которого включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме, например, но не ограничиваясь этим, BAAV (SEQ ID NO:1 и 6 из US 9193769) или ее варианты. Серотип BAAV может представлять собой или иметь последовательность, как описано в патенте США № US7427396, содержание которого включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме, например, но не ограничиваясь этим, BAAV (SEQ ID NO:5 и 6 из US7427396) или ее варианты.

[00313] В одном из вариантов осуществления AAV может представлять собой AAV козы. Серотип AAV козы может представлять собой или иметь последовательность, как описано в патенте США № US7427396, содержание которого включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме, например, но не ограничиваясь этим, AAV козы (SEQ ID NO:3 из US7427396) или ее варианты.

[00314] В других вариантах осуществления AAV можно конструировать в виде гибридного AAV из двух или больше родительских серотипов. В одном из вариантов осуществления AAV может представлять собой AAV2G9, который содержит последовательности из AAV2 и AAV9. AAV2G9 серотип AAV может представлять собой или иметь последовательность, как описано в публикации патента США № US20160017005, содержание которой включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме.

[00315] В одном из вариантов осуществления AAV может представлять собой серотип, созданный с помощью библиотеки капсидов AAV9 с мутациями в аминокислотах 390-627 (нумерация VP1), как описано в Pulicherla et al. (Molecular Therapy 19(6):1070-1078 (2011), содержание которого включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме. Серотип и соответствующие замены нуклеотидов и аминокислот могут представлять собой, но не ограничиваясь этим, AAV9.1 (G1594C; D532H), AAV6.2 (T1418A и T1436X; V473D и I479K), AAV9.3 (T1238A; F413Y), AAV9.4 (T1250C и A1617T; F417S), AAV9.5 (A1235G, A1314T, A1642G, C1760T; Q412R, T548A, A587V), AAV9.6 (T1231A; F411I), AAV9.9 (G1203A, G1785T; W595C), AAV9.10 (A1500G, T1676C; M559T), AAV9.11 (A1425T, A1702C, A1769T; T568P, Q590L), AAV9.13 (A1369C, A1720T; N457H, T574S), AAV9.14 (T1340A, T1362C, T1560C, G1713A; L447H), AAV9.16 (A1775T; Q592L), AAV9.24 (T1507C, T1521G; W503R), AAV9.26 (A1337G, A1769C; Y446C, Q590P), AAV9.33 (A1667C; D556A), AAV9.34 (A1534G, C1794T; N512D), AAV9.35 (A1289T, T1450A, C1494T, A1515T, C1794A, G1816A; Q430L, Y484N, N98K, V606I), AAV9.40 (A1694T, E565V), AAV9.41 (A1348T, T1362C; T450S), AAV9.44 (A1684C, A1701T, A1737G; N562H, K567N), AAV9.45 (A1492T, C1804T; N498Y, L602F), AAV9.46 (G1441C, T1525C, T1549G; G481R, W509R, L517V), 9,47 (G1241A, G1358A, A1669G, C1745T; S414N, G453D, K557E, T582I), AAV9.48 (C1445T, A1736T; P482L, Q579L), AAV9.50 (A1638T, C1683T, T1805A; Q546H, L602H), AAV9.53 (G1301A, A1405C, C1664T, G1811T; R134Q, S469R, A555V, G604V), AAV9.54 (C1531A, T1609A; L511I, L537M), AAV9.55 (T1605A; F535L), AAV9.58 (C1475T, C1579A; T492I, H527N), AAV.59 (T1336C; Y446H), AAV9.61 (A1493T; N498I), AAV9.64 (C1531A, A1617T; L511I), AAV9.65 (C1335T, T1530C, C1568A; A523D), AAV9.68 (C1510A; P504T), AAV9.80 (G1441A, G481R), AAV9.83 (C1402A, A1500T; P468T, E500D), AAV9.87 (T1464C, T1468C; S490P), AAV9.90 (A1196T; Y399F), AAV9.91 (T1316G, A1583T, C1782G, T1806C; L439R, K528I), AAV9.93 (A1273G, A1421G, A1638C, C1712T, G1732A, A1744T, A1832T; S425G, Q474R, Q546H, P571L, G578R, T582S, D611V), AAV9.94 (A1675T; M559L) и AAV9.95 (T1605A; F535L).

[00316] В некоторых вариантах осуществления серотип AAV может представлять собой или иметь последовательность, как описано в международной публикации № WO2016049230, содержание которой включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме, например, но не ограничиваясь этим, AAVF1/HSC1 (SEQ ID NO:2 и 20 из WO2016049230), AAVF2/HSC2 (SEQ ID NO:3 и 21 из WO2016049230), AAVF3/HSC3 (SEQ ID NO:5 и 22 из WO2016049230), AAVF4/HSC4 (SEQ ID NO:6 и 23 из WO2016049230), AAVF5/HSC5 (SEQ ID NO:11 и 25 из WO2016049230), AAVF6/HSC6 (SEQ ID NO:7 и 24 из WO2016049230), AAVF7/HSC7 (SEQ ID NO:8 и 27 из WO2016049230), AAVF8/HSC8 (SEQ ID NO:9 и 28 из WO2016049230), AAVF9/HSC9 (SEQ ID NO:10 и 29 из WO2016049230), AAVF11/HSC11 (SEQ ID NO:4 и 26 из WO2016049230), AAVF12/HSC12 (SEQ ID NO:12 и 30 из WO2016049230), AAVF13/HSC13 (SEQ ID NO:14 и 31 из WO2016049230), AAVF14/HSC14 (SEQ ID NO:15 и 32 из WO2016049230), AAVF15/HSC15 (SEQ ID NO:16 и 33 из WO2016049230), AAVF16/HSC16 (SEQ ID NO:17 и 34 из WO2016049230), AAVF17/HSC17 (SEQ ID NO:13 и 35 из WO2016049230) или их варианты или производные.

[00317] В некоторых вариантах осуществления серотип AAV может представлять собой или иметь последовательность, как описано в патенте США № US 8734809, содержание которого включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме, например, но не ограничиваясь этим, AAV CBr-E1 (SEQ ID NO:13 и 87 из US8734809), AAV CBr-E2 (SEQ ID NO:14 и 88 из US8734809), AAV CBr-E3 (SEQ ID NO:15 и 89 из US8734809), AAV CBr-E4 (SEQ ID NO:16 и 90 из US8734809), AAV CBr-E5 (SEQ ID NO:17 и 91 из US8734809), AAV CBr-e5 (SEQ ID NO:18 и 92 из US8734809), AAV CBr-E6 (SEQ ID NO:19 и 93 из US8734809), AAV CBr-E7 (SEQ ID NO:20 и 94 из US8734809), AAV CBr-E8 (SEQ ID NO:21 и 95 из US8734809), AAV CLv-D1 (SEQ ID NO:22 и 96 из US8734809), AAV CLv-D2 (SEQ ID NO:23 и 97 из US8734809), AAV CLv-D3 (SEQ ID NO:24 и 98 из US8734809), AAV CLv-D4 (SEQ ID NO:25 и 99 из US8734809), AAV CLv-D5 (SEQ ID NO:26 и 100 из US8734809), AAV CLv-D6 (SEQ ID NO:27 и 101 из US8734809), AAV CLv-D7 (SEQ ID NO:28 и 102 из US8734809), AAV CLv-D8 (SEQ ID NO:29 и 103 из US8734809), AAV CLv-E1 (SEQ ID NO:13 и 87 из US8734809), AAV CLv-R1 (SEQ ID NO:30 и 104 из US8734809), AAV CLv-R2 (SEQ ID NO:31 и 105 из US8734809), AAV CLv-R3 (SEQ ID NO:32 и 106 из US8734809), AAV CLv-R4 (SEQ ID NO:33 и 107 из US8734809), AAV CLv-R5 (SEQ ID NO:34 и 108 из US8734809), AAV CLv-R6 (SEQ ID NO:35 и 109 из US8734809), AAV CLv-R7 (SEQ ID NO:36 и 110 из US8734809), AAV CLv-R8 (SEQ ID NO:37 и 111 из US8734809), AAV CLv-R9 (SEQ ID NO:38 и 112 из US8734809), AAV CLg-F1 (SEQ ID NO:39 и 113 из US8734809), AAV CLg-F2 (SEQ ID NO:40 и 114 из US8734809), AAV CLg-F3 (SEQ ID NO:41 и 115 из US8734809), AAV CLg-F4 (SEQ ID NO:42 и 116 из US8734809), AAV CLg-F5 (SEQ ID NO:43 и 117 из US8734809), AAV CLg-F6 (SEQ ID NO:43 и 117 из US8734809), AAV CLg-F7 (SEQ ID NO:44 и 118 из US8734809), AAV CLg-F8 (SEQ ID NO:43 и 117 из US8734809), AAV CSp-1 (SEQ ID NO:45 и 119 из US8734809), AAV CSp-10 (SEQ ID NO:46 и 120 из US8734809), AAV CSp-11 (SEQ ID NO:47 и 121 из US8734809), AAV CSp-2 (SEQ ID NO:48 и 122 из US8734809), AAV CSp-3 (SEQ ID NO:49 и 123 из US8734809), AAV CSp-4 (SEQ ID NO:50 и 124 из US8734809), AAV CSp-6 (SEQ ID NO:51 и 125 из US8734809), AAV CSp-7 (SEQ ID NO:52 и 126 из US8734809), AAV CSp-8 (SEQ ID NO:53 и 127 из US8734809), AAV CSp-9 (SEQ ID NO:54 и 128 из US8734809), AAV CHt-2 (SEQ ID NO:55 и 129 из US8734809), AAV CHt-3 (SEQ ID NO:56 и 130 из US8734809), AAV CKd-1 (SEQ ID NO:57 и 131 из US8734809), AAV CKd-10 (SEQ ID NO:58 и 132 из US8734809), AAV CKd-2 (SEQ ID NO:59 и 133 из US8734809), AAV CKd-3 (SEQ ID NO:60 и 134 из US8734809), AAV CKd-4 (SEQ ID NO:61 и 135 из US8734809), AAV CKd-6 (SEQ ID NO:62 и 136 из US8734809), AAV CKd-7 (SEQ ID NO:63 и 137 из US8734809), AAV CKd-8 (SEQ ID NO:64 и 138 из US8734809), AAV CLv-1 (SEQ ID NO:35 и 139 из US8734809), AAV CLv-12 (SEQ ID NO:66 и 140 из US8734809), AAV CLv-13 (SEQ ID NO:67 и 141 из US8734809), AAV CLv-2 (SEQ ID NO:68 и 142 из US8734809), AAV CLv-3 (SEQ ID NO:69 и 143 из US8734809), AAV CLv-4 (SEQ ID NO:70 и 144 из US8734809), AAV CLv-6 (SEQ ID NO:71 и 145 из US8734809), AAV CLv-8 (SEQ ID NO:72 и 146 из US8734809), AAV CKd-B1 (SEQ ID NO:73 и 147 из US8734809), AAV CKd-B2 (SEQ ID NO:74 и 148 из US8734809), AAV CKd-B3 (SEQ ID NO:75 и 149 из US8734809), AAV CKd-B4 (SEQ ID NO:76 и 150 из US8734809), AAV CKd-B5 (SEQ ID NO:77 и 151 из US8734809), AAV CKd-B6 (SEQ ID NO:78 и 152 из US8734809), AAV CKd-B7 (SEQ ID NO:79 и 153 из US8734809), AAV CKd-B8 (SEQ ID NO:80 и 154 из US8734809), AAV CKd-H1 (SEQ ID NO:81 и 155 из US8734809), AAV CKd-H2 (SEQ ID NO:82 и 156 из US8734809), AAV CKd-H3 (SEQ ID NO:83 и 157 из US8734809), AAV CKd-H4 (SEQ ID NO:84 и 158 из US8734809), AAV CKd-H5 (SEQ ID NO:85 и 159 из US8734809), AAV CKd-H6 (SEQ ID NO:77 и 151 из US8734809), AAV CHt-1 (SEQ ID NO:86 и 160 из US8734809), AAV CLv1-1 (SEQ ID NO:171 из US8734809), AAV CLv1-2 (SEQ ID NO:172 из US8734809), AAV CLv1-3 (SEQ ID NO:173 из US8734809), AAV CLv1-4 (SEQ ID NO:174 из US8734809), AAV Clv1-7 (SEQ ID NO:175 из US8734809), AAV Clv1-8 (SEQ ID NO:176 из US8734809), AAV Clv1-9 (SEQ ID NO:177 из US8734809), AAV Clv1-10 (SEQ ID NO:178 из US8734809), AAV.VR-355 (SEQ ID NO:181 из US8734809), AAV.hu.48R3 (SEQ ID NO:183 из US8734809) или их варианты или производные.

[00318] В некоторых вариантах осуществления серотип AAV может представлять собой или иметь последовательность, как описано в международной публикации № WO2016065001, содержание которой включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме, например, но не ограничиваясь этим, AAV CHt-P2 (SEQ ID NO:1 и 51 из WO2016065001), AAV CHt-P5 (SEQ ID NO:2 и 52 из WO2016065001), AAV CHt-P9 (SEQ ID NO:3 и 53 из WO2016065001), AAV CBr-7.1 (SEQ ID NO:4 и 54 из WO2016065001), AAV CBr-7.2 (SEQ ID NO:5 и 55 из WO2016065001), AAV CBr-7.3 (SEQ ID NO:6 и 56 из WO2016065001), AAV CBr-7.4 (SEQ ID NO:7 и 57 из WO2016065001), AAV CBr-7.5 (SEQ ID NO:8 и 58 из WO2016065001), AAV CBr-7.7 (SEQ ID NO:9 и 59 из WO2016065001), AAV CBr-7.8 (SEQ ID NO:10 и 60 из WO2016065001), AAV CBr-7.10 (SEQ ID NO:11 и 61 из WO2016065001), AAV CKd-N3 (SEQ ID NO:12 и 62 из WO2016065001), AAV CKd-N4 (SEQ ID NO:13 и 63 из WO2016065001), AAV CKd-N9 (SEQ ID NO:14 и 64 из WO2016065001), AAV CLv-L4 (SEQ ID NO:15 и 65 из WO2016065001), AAV CLv-L5 (SEQ ID NO:16 и 66 из WO2016065001), AAV CLv-L6 (SEQ ID NO:17 и 67 из WO2016065001), AAV CLv-K1 (SEQ ID NO:18 и 68 из WO2016065001), AAV CLv-K3 (SEQ ID NO:19 и 69 из WO2016065001), AAV CLv-K6 (SEQ ID NO:20 и 70 из WO2016065001), AAV CLv-M1 (SEQ ID NO:21 и 71 из WO2016065001), AAV CLv-M11 (SEQ ID NO:22 и 72 из WO2016065001), AAV CLv-M2 (SEQ ID NO:23 и 73 из WO2016065001), AAV CLv-M5 (SEQ ID NO:24 и 74 из WO2016065001), AAV CLv-M6 (SEQ ID NO:25 и 75 из WO2016065001), AAV CLv-M7 (SEQ ID NO:26 и 76 из WO2016065001), AAV CLv-M8 (SEQ ID NO:27 и 77 из WO2016065001), AAV CLv-M9 (SEQ ID NO:28 и 78 из WO2016065001), AAV CHt-P1 (SEQ ID NO:29 и 79 из WO2016065001), AAV CHt-P6 (SEQ ID NO:30 и 80 из WO2016065001), AAV CHt-P8 (SEQ ID NO:31 и 81 из WO2016065001), AAV CHt-6.1 (SEQ ID NO:32 и 82 из WO2016065001), AAV CHt-6.10 (SEQ ID NO:33 и 83 из WO2016065001), AAV CHt-6.5 (SEQ ID NO:34 и 84 из WO2016065001), AAV CHt-6.6 (SEQ ID NO:35 и 85 из WO2016065001), AAV CHt-6.7 (SEQ ID NO:36 и 86 из WO2016065001), AAV CHt-6.8 (SEQ ID NO:37 и 87 из WO2016065001), AAV CSp-8.10 (SEQ ID NO:38 и 88 из WO2016065001), AAV CSp-8.2 (SEQ ID NO:39 и 89 из WO2016065001), AAV CSp-8.4 (SEQ ID NO:40 и 90 из WO2016065001), AAV CSp-8.5 (SEQ ID NO:41 и 91 из WO2016065001), AAV CSp-8.6 (SEQ ID NO:42 и 92 из WO2016065001), AAV CSp-8.7 (SEQ ID NO:43 и 93 из WO2016065001), AAV CSp-8.8 (SEQ ID NO:44 и 94 из WO2016065001), AAV CSp-8.9 (SEQ ID NO:45 и 95 из WO2016065001), AAV CBr-B7.3 (SEQ ID NO:46 и 96 из WO2016065001), AAV CBr-B7.4 (SEQ ID NO:47 и 97 из WO2016065001), AAV3B (SEQ ID NO:48 и 98 из WO2016065001), AAV4 (SEQ ID NO:49 и 99 из WO2016065001), AAV5 (SEQ ID NO:50 и 100 из WO2016065001) или их варианты или производные.

[00319] В одном из вариантов осуществления AAV может представлять собой серотип, содержащий по меньшей мере один эпитоп капсида AAV для CD8+ T-клетки. В качестве неограничивающего примера, серотип может быть AAV1, AAV2 или AAV8.

[00320] В одном из вариантов осуществления AAV может представлять собой серотип, выбранный из любых, которые можно найти в в таблице 11.

[00321] В одном из вариантов осуществления AAV может содержать последовательность, ее фрагмент или вариант, из последовательностей в таблице 11.

[00322] В одном из вариантов осуществления AAV можно кодировать с помощью последовательности, фрагмента или варианта, как приведено в таблице 11.

Таблица 11. Серотипы AAV

Серотип	SEQ ID NO:	Справочная информация
AAV1	369	US20150159173 SEQ ID NO:11, US20150315612 SEQ ID NO:202
AAV1	370	US20160017295 SEQ ID NO:1US20030138772 SEQ ID NO:64, US20150159173 SEQ ID NO:27, US20150315612 SEQ ID NO:219, US7198951 SEQ ID NO:5
AAV1	371	US20030138772 SEQ ID NO:6
AAV1.3	372	US20030138772 SEQ ID NO:14
AAV10	373	US20030138772 SEQ ID NO:117
AAV10	374	WO2015121501 SEQ ID NO:9
AAV10	375	WO2015121501 SEQ ID NO:8
AAV11	376	US20030138772 SEQ ID NO:118
AAV12	377	US20030138772 SEQ ID NO:119
AAV2	378	US20150159173 SEQ ID NO:7, US20150315612 SEQ ID NO:211
AAV2	379	US20030138772 SEQ ID NO:70, US20150159173 SEQ ID NO:23, US20150315612 SEQ ID NO:221, US20160017295 SEQ ID NO:2, US6156303 SEQ ID NO:4, US7198951 SEQ ID NO:4, WO2015121501 SEQ ID NO:1
AAV2	380	US6156303 SEQ ID NO:8
AAV2	381	US20030138772 SEQ ID NO:7
AAV2	382	US6156303 SEQ ID NO:3
AAV2.5T	383	US9233131 SEQ ID NO:42
AAV223.10	384	US20030138772 SEQ ID NO:75
AAV223.2	385	US20030138772 SEQ ID NO:49
AAV223.2	386	US20030138772 SEQ ID NO:76
AAV223.4	387	US20030138772 SEQ ID NO:50
AAV223.4	388	US20030138772 SEQ ID NO:73
AAV223.5	389	US20030138772 SEQ ID NO:51
AAV223.5	390	US20030138772 SEQ ID NO:74
AAV223.6	391	US20030138772 SEQ ID NO:52
AAV223.6	392	US20030138772 SEQ ID NO:78
AAV223.7	393	US20030138772 SEQ ID NO:53
AAV223.7	394	US20030138772 SEQ ID NO:77
AAV29.3	395	US20030138772 SEQ ID NO:82
AAV29.4	396	US20030138772 SEQ ID NO:12
AAV29.5	397	US20030138772 SEQ ID NO:83
AAV29.5 (AAVbb.2)	398	US20030138772 SEQ ID NO:13
AAV3	399	US20150159173 SEQ ID NO:12
AAV3	400	US20030138772 SEQ ID NO:71, US20150159173 SEQ ID NO:28, US20160017295 SEQ ID NO:3, US7198951 SEQ ID NO:6
AAV3	401	US20030138772 SEQ ID NO:8
AAV3.3b	402	US20030138772 SEQ ID NO:72
AAV3-3	403	US20150315612 SEQ ID NO:200
AAV3-3	404	US20150315612 SEQ ID NO:217
AAV3a	405	US6156303 SEQ ID NO:5
AAV3a	406	US6156303 SEQ ID NO:9
AAV3b	407	US6156303 SEQ ID NO:6
AAV3b	408	US6156303 SEQ ID NO:10
AAV3b	409	US6156303 SEQ ID NO:1
AAV4	410	US20140348794 SEQ ID NO:17
AAV4	411	US20140348794 SEQ ID NO:5
AAV4	412	US20140348794 SEQ ID NO:3
AAV4	413	US20140348794 SEQ ID NO:14
AAV4	414	US20140348794 SEQ ID NO:15
AAV4	415	US20140348794 SEQ ID NO:19
AAV4	416	US20140348794 SEQ ID NO:12
AAV4	417	US20140348794 SEQ ID NO:13
AAV4	418	US20140348794 SEQ ID NO:7
AAV4	419	US20140348794 SEQ ID NO:8
AAV4	420	US20140348794 SEQ ID NO:9
AAV4	421	US20140348794 SEQ ID NO:2
AAV4	422	US20140348794 SEQ ID NO:10
AAV4	423	US20140348794 SEQ ID NO:11
AAV4	424	US20140348794 SEQ ID NO:18
AAV4	425	US20030138772 SEQ ID NO:63, US20160017295 SEQ ID NO:4, US20140348794 SEQ ID NO:4
AAV4	426	US20140348794 SEQ ID NO:16
AAV4	427	US20140348794 SEQ ID NO:20
AAV4	428	US20140348794 SEQ ID NO:6
AAV4	429	US20140348794 SEQ ID NO:1
AAV42.2	430	US20030138772 SEQ ID NO:9
AAV42.2	431	US20030138772 SEQ ID NO:102
AAV42.3b	432	US20030138772 SEQ ID NO:36
AAV42.3B	433	US20030138772 SEQ ID NO:107
AAV42.4	434	US20030138772 SEQ ID NO:33
AAV42.4	435	US20030138772 SEQ ID NO:88
AAV42.8	436	US20030138772 SEQ ID NO:27
AAV42.8	437	US20030138772 SEQ ID NO:85
AAV43.1	438	US20030138772 SEQ ID NO:39
AAV43.1	439	US20030138772 SEQ ID NO:92
AAV43.12	440	US20030138772 SEQ ID NO:41
AAV43.12	441	US20030138772 SEQ ID NO:93
AAV43.20	442	US20030138772 SEQ ID NO:42
AAV43.20	443	US20030138772 SEQ ID NO:99
AAV43.21	444	US20030138772 SEQ ID NO:43
AAV43.21	445	US20030138772 SEQ ID NO:96
AAV43.23	446	US20030138772 SEQ ID NO:44
AAV43.23	447	US20030138772 SEQ ID NO:98
AAV43.25	448	US20030138772 SEQ ID NO:45
AAV43.25	449	US20030138772 SEQ ID NO:97
AAV43.5	450	US20030138772 SEQ ID NO:40
AAV43.5	451	US20030138772 SEQ ID NO:94
AAV4-4	452	US20150315612 SEQ ID NO:201
AAV4-4	453	US20150315612 SEQ ID NO:218
AAV44.1	454	US20030138772 SEQ ID NO:46
AAV44.1	455	US20030138772 SEQ ID NO:79
AAV44.5	456	US20030138772 SEQ ID NO:47
AAV44.5	457	US20030138772 SEQ ID NO:80
AAV4407	458	US20150315612 SEQ ID NO:90
AAV5	459	US7427396 SEQ ID NO:1
AAV5	460	US20030138772 SEQ ID NO:114
AAV5	461	US20160017295 SEQ ID NO:5, US7427396 SEQ ID NO:2, US20150315612 SEQ ID NO:216
AAV5	462	US20150315612 SEQ ID NO:199
AAV6	463	US20150159173 SEQ ID NO:13
AAV6	464	US20030138772 SEQ ID NO:65, US20150159173 SEQ ID NO:29, US20160017295 SEQ ID NO:6, US6156303 SEQ ID NO:7
AAV6	465	US6156303 SEQ ID NO:11
AAV6	466	US6156303 SEQ ID NO:2
AAV6	467	US20150315612 SEQ ID NO:203
AAV6	468	US20150315612 SEQ ID NO:220
AAV6.1	469	US20150159173
AAV6.12	470	US20150159173
AAV6.2	471	US20150159173
AAV7	472	US20150159173 SEQ ID NO:14
AAV7	473	US20150315612 SEQ ID NO:183
AAV7	474	US20030138772 SEQ ID NO:2, US20150159173 SEQ ID NO:30, US20150315612 SEQ ID NO:181, US20160017295 SEQ ID NO:7
AAV7	475	US20030138772 SEQ ID NO:3
AAV7	476	US20030138772 SEQ ID NO:1, US20150315612 SEQ ID NO:180
AAV7	477	US20150315612 SEQ ID NO:213
AAV7	478	US20150315612 SEQ ID NO:222
AAV8	479	US20150159173 SEQ ID NO:15
AAV8	480	US20150376240 SEQ ID NO:7
AAV8	481	US20030138772 SEQ ID NO:4, US20150315612 SEQ ID NO:182
AAV8	482	US20030138772 SEQ ID NO:95, US20140359799 SEQ ID NO:1, US20150159173 SEQ ID NO:31, US20160017295 SEQ ID NO:8, US7198951 SEQ ID NO:7, US20150315612 SEQ ID NO:223
AAV8	483	US20150376240 SEQ ID NO:8
AAV8	484	US20150315612 SEQ ID NO:214
AAV-8b	485	US20150376240 SEQ ID NO:5
AAV-8b	486	US20150376240 SEQ ID NO:3
AAV-8h	487	US20150376240 SEQ ID NO:6
AAV-8h	488	US20150376240 SEQ ID NO:4
AAV9	489	US20030138772 SEQ ID NO:5
AAV9	490	US7198951 SEQ ID NO:1
AAV9	491	US20160017295 SEQ ID NO:9
AAV9	492	US20030138772 SEQ ID NO:100, US7198951 SEQ ID NO:2
AAV9	493	US7198951 SEQ ID NO:3
AAV9 (AAVhu.14)	494	US7906111 SEQ ID NO:3; WO2015038958 SEQ ID NO:11
AAV9 (AAVhu.14)	495	US7906111 SEQ ID NO:123; WO2015038958 SEQ ID NO:2
AAVA3.1	496	US20030138772 SEQ ID NO:120
AAVA3.3	497	US20030138772 SEQ ID NO:57
AAVA3.3	498	US20030138772 SEQ ID NO:66
AAVA3.4	499	US20030138772 SEQ ID NO:54
AAVA3.4	500	US20030138772 SEQ ID NO:68
AAVA3.5	501	US20030138772 SEQ ID NO:55
AAVA3.5	502	US20030138772 SEQ ID NO:69
AAVA3.7	503	US20030138772 SEQ ID NO:56
AAVA3.7	504	US20030138772 SEQ ID NO:67
AAV29.3 (AAVbb.1)	505	US20030138772 SEQ ID NO:11
AAVC2	506	US20030138772 SEQ ID NO:61
AAVCh.5	507	US20150159173 SEQ ID NO:46, US20150315612 SEQ ID NO:234
AAVcy.2 (AAV13.3)	508	US20030138772 SEQ ID NO:15
AAV24.1	509	US20030138772 SEQ ID NO:101
AAVcy.3 (AAV24.1)	510	US20030138772 SEQ ID NO:16
AAV27.3	511	US20030138772 SEQ ID NO:104
AAVcy.4 (AAV27.3)	512	US20030138772 SEQ ID NO:17
AAVcy.5	513	US20150315612 SEQ ID NO:227
AAV7.2	514	US20030138772 SEQ ID NO:103
AAVcy.5 (AAV7.2)	515	US20030138772 SEQ ID NO:18
AAV16.3	516	US20030138772 SEQ ID NO:105
AAVcy.6 (AAV16.3)	517	US20030138772 SEQ ID NO:10
AAVcy.5	518	US20150159173 SEQ ID NO:8
AAVcy.5	519	US20150159173 SEQ ID NO:24
AAVCy.5R1	520	US20150159173
AAVCy.5R2	521	US20150159173
AAVCy.5R3	522	US20150159173
AAVCy.5R4	523	US20150159173
AAVDJ	524	US20140359799 SEQ ID NO:3, US7588772 SEQ ID NO:2
AAVDJ	525	US20140359799 SEQ ID NO:2, US7588772 SEQ ID NO:1
AAVDJ-8	526	US7588772; Grimm et al 2008
AAVDJ-8	527	US7588772; Grimm et al 2008
AAVF5	528	US20030138772 SEQ ID NO:110
AAVH2	529	US20030138772 SEQ ID NO:26
AAVH6	530	US20030138772 SEQ ID NO:25
AAVhE1.1	531	US9233131 SEQ ID NO:44
AAVhER1.14	532	US9233131 SEQ ID NO:46
AAVhER1.16	533	US9233131 SEQ ID NO:48
AAVhER1.18	534	US9233131 SEQ ID NO:49
AAVhER1.23 (AAVhEr2.29)	535	US9233131 SEQ ID NO:53
AAVhEr1.35	536	US9233131 SEQ ID NO:50
AAVhEr1.36	537	US9233131 SEQ ID NO:52
AAVhEr1.5	538	US9233131 SEQ ID NO:45
AAVhEr1.7	539	US9233131 SEQ ID NO:51
AAVhEr1.8	540	US9233131 SEQ ID NO:47
AAVhEr2.16	541	US9233131 SEQ ID NO:55
AAVhEr2.30	542	US9233131 SEQ ID NO:56
AAVhEr2.31	543	US9233131 SEQ ID NO:58
AAVhEr2.36	544	US9233131 SEQ ID NO:57
AAVhEr2.4	545	US9233131 SEQ ID NO:54
AAVhEr3.1	546	US9233131 SEQ ID NO:59
AAVhu.1	547	US20150315612 SEQ ID NO:46
AAVhu.1	548	US20150315612 SEQ ID NO:144
AAVhu.10 (AAV16.8)	549	US20150315612 SEQ ID NO:56
AAVhu.10 (AAV16.8)	550	US20150315612 SEQ ID NO:156
AAVhu.11 (AAV16.12)	551	US20150315612 SEQ ID NO:57
AAVhu.11 (AAV16.12)	552	US20150315612 SEQ ID NO:153
AAVhu.12	553	US20150315612 SEQ ID NO:59
AAVhu.12	554	US20150315612 SEQ ID NO:154
AAVhu.13	555	US20150159173 SEQ ID NO:16, US20150315612 SEQ ID NO:71
AAVhu.13	556	US20150159173 SEQ ID NO:32, US20150315612 SEQ ID NO:129
AAVhu.136.1	557	US20150315612 SEQ ID NO:165
AAVhu.140.1	558	US20150315612 SEQ ID NO:166
AAVhu.140.2	559	US20150315612 SEQ ID NO:167
AAVhu.145.6	560	US20150315612 SEQ ID NO:178
AAVhu.15	561	US20150315612 SEQ ID NO:147
AAVhu.15 (AAV33.4)	562	US20150315612 SEQ ID NO:50
AAVhu.156.1	563	US20150315612 SEQ ID NO:179
AAVhu.16	564	US20150315612 SEQ ID NO:148
AAVhu.16 (AAV33.8)	565	US20150315612 SEQ ID NO:51
AAVhu.17	566	US20150315612 SEQ ID NO:83
AAVhu.17 (AAV33.12)	567	US20150315612 SEQ ID NO:4
AAVhu.172.1	568	US20150315612 SEQ ID NO:171
AAVhu.172.2	569	US20150315612 SEQ ID NO:172
AAVhu.173.4	570	US20150315612 SEQ ID NO:173
AAVhu.173.8	571	US20150315612 SEQ ID NO:175
AAVhu.18	572	US20150315612 SEQ ID NO:52
AAVhu.18	573	US20150315612 SEQ ID NO:149
AAVhu.19	574	US20150315612 SEQ ID NO:62
AAVhu.19	575	US20150315612 SEQ ID NO:133
AAVhu.2	576	US20150315612 SEQ ID NO:48
AAVhu.2	577	US20150315612 SEQ ID NO:143
AAVhu.20	578	US20150315612 SEQ ID NO:63
AAVhu.20	579	US20150315612 SEQ ID NO:134
AAVhu.21	580	US20150315612 SEQ ID NO:65
AAVhu.21	581	US20150315612 SEQ ID NO:135
AAVhu.22	582	US20150315612 SEQ ID NO:67
AAVhu.22	583	US20150315612 SEQ ID NO:138
AAVhu.23	584	US20150315612 SEQ ID NO:60
AAVhu.23.2	585	US20150315612 SEQ ID NO:137
AAVhu.24	586	US20150315612 SEQ ID NO:66
AAVhu.24	587	US20150315612 SEQ ID NO:136
AAVhu.25	588	US20150315612 SEQ ID NO:49
AAVhu.25	589	US20150315612 SEQ ID NO:146
AAVhu.26	590	US20150159173 SEQ ID NO:17, US20150315612 SEQ ID NO:61
AAVhu.26	591	US20150159173 SEQ ID NO:33, US20150315612 SEQ ID NO:139
AAVhu.27	592	US20150315612 SEQ ID NO:64
AAVhu.27	593	US20150315612 SEQ ID NO:140
AAVhu.28	594	US20150315612 SEQ ID NO:68
AAVhu.28	595	US20150315612 SEQ ID NO:130
AAVhu.29	596	US20150315612 SEQ ID NO:69
AAVhu.29	597	US20150159173 SEQ ID NO:42, US20150315612 SEQ ID NO:132
AAVhu.29	598	US20150315612 SEQ ID NO:225
AAVhu.29R	599	US20150159173
AAVhu.3	600	US20150315612 SEQ ID NO:44
AAVhu.3	601	US20150315612 SEQ ID NO:145
AAVhu.30	602	US20150315612 SEQ ID NO:70
AAVhu.30	603	US20150315612 SEQ ID NO:131
AAVhu.31	604	US20150315612 SEQ ID NO:1
AAVhu.31	605	US20150315612 SEQ ID NO:121
AAVhu.32	606	US20150315612 SEQ ID NO:2
AAVhu.32	607	US20150315612 SEQ ID NO:122
AAVhu.33	608	US20150315612 SEQ ID NO:75
AAVhu.33	609	US20150315612 SEQ ID NO:124
AAVhu.34	610	US20150315612 SEQ ID NO:72
AAVhu.34	611	US20150315612 SEQ ID NO:125
AAVhu.35	612	US20150315612 SEQ ID NO:73
AAVhu.35	613	US20150315612 SEQ ID NO:164
AAVhu.36	614	US20150315612 SEQ ID NO:74
AAVhu.36	615	US20150315612 SEQ ID NO:126
AAVhu.37	616	US20150159173 SEQ ID NO:34, US20150315612 SEQ ID NO:88
AAVhu.37 (AAV106.1)	617	US20150315612 SEQ ID NO:10, US20150159173 SEQ ID NO:18
AAVhu.38	618	US20150315612 SEQ ID NO:161
AAVhu.39	619	US20150315612 SEQ ID NO:102
AAVhu.39 (AAVLG-9)	620	US20150315612 SEQ ID NO:24
AAVhu.4	621	US20150315612 SEQ ID NO:47
AAVhu.4	622	US20150315612 SEQ ID NO:141
AAVhu.40	623	US20150315612 SEQ ID NO:87
AAVhu.40 (AAV114.3)	624	US20150315612 SEQ ID NO:11
AAVhu.41	625	US20150315612 SEQ ID NO:91
AAVhu.41 (AAV127.2)	626	US20150315612 SEQ ID NO:6
AAVhu.42	627	US20150315612 SEQ ID NO:85
AAVhu.42 (AAV127.5)	628	US20150315612 SEQ ID NO:8
AAVhu.43	629	US20150315612 SEQ ID NO:160
AAVhu.43	630	US20150315612 SEQ ID NO:236
AAVhu.43 (AAV128.1)	631	US20150315612 SEQ ID NO:80
AAVhu.44	632	US20150159173 SEQ ID NO:45, US20150315612 SEQ ID NO:158
AAVhu.44 (AAV128.3)	633	US20150315612 SEQ ID NO:81
AAVhu.44R1	634	US20150159173
AAVhu.44R2	635	US20150159173
AAVhu.44R3	636	US20150159173
AAVhu.45	637	US20150315612 SEQ ID NO:76
AAVhu.45	638	US20150315612 SEQ ID NO:127
AAVhu.46	639	US20150315612 SEQ ID NO:82
AAVhu.46	640	US20150315612 SEQ ID NO:159
AAVhu.46	641	US20150315612 SEQ ID NO:224
AAVhu.47	642	US20150315612 SEQ ID NO:77
AAVhu.47	643	US20150315612 SEQ ID NO:128
AAVhu.48	644	US20150159173 SEQ ID NO:38
AAVhu.48	645	US20150315612 SEQ ID NO:157
AAVhu.48 (AAV130.4)	646	US20150315612 SEQ ID NO:78
AAVhu.48R1	647	US20150159173
AAVhu.48R2	648	US20150159173
AAVhu.48R3	649	US20150159173
AAVhu.49	650	US20150315612 SEQ ID NO:209
AAVhu.49	651	US20150315612 SEQ ID NO:189
AAVhu.5	652	US20150315612 SEQ ID NO:45
AAVhu.5	653	US20150315612 SEQ ID NO:142
AAVhu.51	654	US20150315612 SEQ ID NO:208
AAVhu.51	655	US20150315612 SEQ ID NO:190
AAVhu.52	656	US20150315612 SEQ ID NO:210
AAVhu.52	657	US20150315612 SEQ ID NO:191
AAVhu.53	658	US20150159173 SEQ ID NO:19
AAVhu.53	659	US20150159173 SEQ ID NO:35
AAVhu.53 (AAV145.1)	660	US20150315612 SEQ ID NO:176
AAVhu.54	661	US20150315612 SEQ ID NO:188
AAVhu.54 (AAV145.5)	662	US20150315612 SEQ ID NO:177
AAVhu.55	663	US20150315612 SEQ ID NO:187
AAVhu.56	664	US20150315612 SEQ ID NO:205
AAVhu.56 (AAV145.6)	665	US20150315612 SEQ ID NO:168
AAVhu.56 (AAV145.6)	666	US20150315612 SEQ ID NO:192
AAVhu.57	667	US20150315612 SEQ ID NO:206
AAVhu.57	668	US20150315612 SEQ ID NO:169
AAVhu.57	669	US20150315612 SEQ ID NO:193
AAVhu.58	670	US20150315612 SEQ ID NO:207
AAVhu.58	671	US20150315612 SEQ ID NO:194
AAVhu.6 (AAV3.1)	672	US20150315612 SEQ ID NO:5
AAVhu.6 (AAV3.1)	673	US20150315612 SEQ ID NO:84
AAVhu.60	674	US20150315612 SEQ ID NO:184
AAVhu.60 (AAV161.10)	675	US20150315612 SEQ ID NO:170
AAVhu.61	676	US20150315612 SEQ ID NO:185
AAVhu.61 (AAV161.6)	677	US20150315612 SEQ ID NO:174
AAVhu.63	678	US20150315612 SEQ ID NO:204
AAVhu.63	679	US20150315612 SEQ ID NO:195
AAVhu.64	680	US20150315612 SEQ ID NO:212
AAVhu.64	681	US20150315612 SEQ ID NO:196
AAVhu.66	682	US20150315612 SEQ ID NO:197
AAVhu.67	683	US20150315612 SEQ ID NO:215
AAVhu.67	684	US20150315612 SEQ ID NO:198
AAVhu.7	685	US20150315612 SEQ ID NO:226
AAVhu.7	686	US20150315612 SEQ ID NO:150
AAVhu.7 (AAV7.3)	687	US20150315612 SEQ ID NO:55
AAVhu.71	688	US20150315612 SEQ ID NO:79
AAVhu.8	689	US20150315612 SEQ ID NO:53
AAVhu.8	690	US20150315612 SEQ ID NO:12
AAVhu.8	691	US20150315612 SEQ ID NO:151
AAVhu.9 (AAV3.1)	692	US20150315612 SEQ ID NO:58
AAVhu.9 (AAV3.1)	693	US20150315612 SEQ ID NO:155
AAV-LK01	694	US20150376607 SEQ ID NO:2
AAV-LK01	695	US20150376607 SEQ ID NO:29
AAV-LK02	696	US20150376607 SEQ ID NO:3
AAV-LK02	697	US20150376607 SEQ ID NO:30
AAV-LK03	698	US20150376607 SEQ ID NO:4
AAV-LK03	699	WO2015121501 SEQ ID NO:12, US20150376607 SEQ ID NO:31
AAV-LK04	700	US20150376607 SEQ ID NO:5
AAV-LK04	701	US20150376607 SEQ ID NO:32
AAV-LK05	702	US20150376607 SEQ ID NO:6
AAV-LK05	703	US20150376607 SEQ ID NO:33
AAV-LK06	704	US20150376607 SEQ ID NO:7
AAV-LK06	705	US20150376607 SEQ ID NO:34
AAV-LK07	706	US20150376607 SEQ ID NO:8
AAV-LK07	707	US20150376607 SEQ ID NO:35
AAV-LK08	708	US20150376607 SEQ ID NO:9
AAV-LK08	709	US20150376607 SEQ ID NO:36
AAV-LK09	710	US20150376607 SEQ ID NO:10
AAV-LK09	711	US20150376607 SEQ ID NO:37
AAV-LK10	712	US20150376607 SEQ ID NO:11
AAV-LK10	713	US20150376607 SEQ ID NO:38
AAV-LK11	714	US20150376607 SEQ ID NO:12
AAV-LK11	715	US20150376607 SEQ ID NO:39
AAV-LK12	716	US20150376607 SEQ ID NO:13
AAV-LK12	717	US20150376607 SEQ ID NO:40
AAV-LK13	718	US20150376607 SEQ ID NO:14
AAV-LK13	719	US20150376607 SEQ ID NO:41
AAV-LK14	720	US20150376607 SEQ ID NO:15
AAV-LK14	721	US20150376607 SEQ ID NO:42
AAV-LK15	722	US20150376607 SEQ ID NO:16
AAV-LK15	723	US20150376607 SEQ ID NO:43
AAV-LK16	724	US20150376607 SEQ ID NO:17
AAV-LK16	725	US20150376607 SEQ ID NO:44
AAV-LK17	726	US20150376607 SEQ ID NO:18
AAV-LK17	727	US20150376607 SEQ ID NO:45
AAV-LK18	728	US20150376607 SEQ ID NO:19
AAV-LK18	729	US20150376607 SEQ ID NO:46
AAV-LK19	730	US20150376607 SEQ ID NO:20
AAV-LK19	731	US20150376607 SEQ ID NO:47
AAV-PAEC	732	US20150376607 SEQ ID NO:1
AAV-PAEC	733	US20150376607 SEQ ID NO:48
AAV-PAEC11	734	US20150376607 SEQ ID NO:26
AAV-PAEC11	735	US20150376607 SEQ ID NO:54
AAV-PAEC12	736	US20150376607 SEQ ID NO:27
AAV-PAEC12	737	US20150376607 SEQ ID NO:51
AAV-PAEC13	738	US20150376607 SEQ ID NO:28
AAV-PAEC13	739	US20150376607 SEQ ID NO:49
AAV-PAEC2	740	US20150376607 SEQ ID NO:21
AAV-PAEC2	741	US20150376607 SEQ ID NO:56
AAV-PAEC4	742	US20150376607 SEQ ID NO:22
AAV-PAEC4	743	US20150376607 SEQ ID NO:55
AAV-PAEC6	744	US20150376607 SEQ ID NO:23
AAV-PAEC6	745	US20150376607 SEQ ID NO:52
AAV-PAEC7	746	US20150376607 SEQ ID NO:24
AAV-PAEC7	747	US20150376607 SEQ ID NO:53
AAV-PAEC8	748	US20150376607 SEQ ID NO:25
AAV-PAEC8	749	US20150376607 SEQ ID NO:50
AAVpi.1	750	US20150315612 SEQ ID NO:28
AAVpi.1	751	US20150315612 SEQ ID NO:93
AAVpi.2	752	US20150315612 SEQ ID NO:30
AAVpi.2	753	US20150315612 SEQ ID NO:95
AAVpi.3	754	US20150315612 SEQ ID NO:29
AAVpi.3	755	US20150315612 SEQ ID NO:94
AAVrh.10	756	US20150159173 SEQ ID NO:9
AAVrh.10	757	US20150159173 SEQ ID NO:25
AAV44.2	758	US20030138772 SEQ ID NO:59
AAVrh.10 (AAV44.2)	759	US20030138772 SEQ ID NO:81
AAV42.1B	760	US20030138772 SEQ ID NO:90
AAVrh.12 (AAV42.1b)	761	US20030138772 SEQ ID NO:30
AAVrh.13	762	US20150159173 SEQ ID NO:10
AAVrh.13	763	US20150159173 SEQ ID NO:26
AAVrh.13	764	US20150315612 SEQ ID NO:228
AAVrh.13R	765	US20150159173
AAV42.3A	766	US20030138772 SEQ ID NO:87
AAVrh.14 (AAV42.3a)	767	US20030138772 SEQ ID NO:32
AAV42.5A	768	US20030138772 SEQ ID NO:89
AAVrh.17 (AAV42.5a)	769	US20030138772 SEQ ID NO:34
AAV42.5B	770	US20030138772 SEQ ID NO:91
AAVrh.18 (AAV42.5b)	771	US20030138772 SEQ ID NO:29
AAV42.6B	772	US20030138772 SEQ ID NO:112
AAVrh.19 (AAV42.6b)	773	US20030138772 SEQ ID NO:38
AAVrh.2	774	US20150159173 SEQ ID NO:39
AAVrh.2	775	US20150315612 SEQ ID NO:231
AAVrh.20	776	US20150159173 SEQ ID NO:1
AAV42.10	777	US20030138772 SEQ ID NO:106
AAVrh.21 (AAV42.10)	778	US20030138772 SEQ ID NO:35
AAV42.11	779	US20030138772 SEQ ID NO:108
AAVrh.22 (AAV42.11)	780	US20030138772 SEQ ID NO:37
AAV42.12	781	US20030138772 SEQ ID NO:113
AAVrh.23 (AAV42.12)	782	US20030138772 SEQ ID NO:58
AAV42.13	783	US20030138772 SEQ ID NO:86
AAVrh.24 (AAV42.13)	784	US20030138772 SEQ ID NO:31
AAV42.15	785	US20030138772 SEQ ID NO:84
AAVrh.25 (AAV42.15)	786	US20030138772 SEQ ID NO:28
AAVrh.2R	787	US20150159173
AAVrh.31 (AAV223.1)	788	US20030138772 SEQ ID NO:48
AAVC1	789	US20030138772 SEQ ID NO:60
AAVrh.32 (AAVC1)	790	US20030138772 SEQ ID NO:19
AAVrh.32/33	791	US20150159173 SEQ ID NO:2
AAVrh.33 (AAVC3)	792	US20030138772 SEQ ID NO:20
AAVC5	793	US20030138772 SEQ ID NO:62
AAVrh.34 (AAVC5)	794	US20030138772 SEQ ID NO:21
AAVF1	795	US20030138772 SEQ ID NO:109
AAVrh.35 (AAVF1)	796	US20030138772 SEQ ID NO:22
AAVF3	797	US20030138772 SEQ ID NO:111
AAVrh.36 (AAVF3)	798	US20030138772 SEQ ID NO:23
AAVrh.37	799	US20030138772 SEQ ID NO:24
AAVrh.37	800	US20150159173 SEQ ID NO:40
AAVrh.37	801	US20150315612 SEQ ID NO:229
AAVrh.37R2	802	US20150159173
AAVrh.38 (AAVLG-4)	803	US20150315612 SEQ ID NO:7
AAVrh.38 (AAVLG-4)	804	US20150315612 SEQ ID NO:86
AAVrh.39	805	US20150159173 SEQ ID NO:20, US20150315612 SEQ ID NO:13
AAVrh.39	806	US20150159173 SEQ ID NO:3, US20150159173 SEQ ID NO:36, US20150315612 SEQ ID NO:89
AAVrh.40	807	US20150315612 SEQ ID NO:92
AAVrh.40 (AAVLG-10)	808	US20150315612 SEQ ID NO:14
AAVrh.43 (AAVN721-8)	809	US20150315612 SEQ ID NO:43, US20150159173 SEQ ID NO:21
AAVrh.43 (AAVN721-8)	810	US20150315612 SEQ ID NO:163, US20150159173 SEQ ID NO:37
AAVrh.44	811	US20150315612 SEQ ID NO:34
AAVrh.44	812	US20150315612 SEQ ID NO:111
AAVrh.45	813	US20150315612 SEQ ID NO:41
AAVrh.45	814	US20150315612 SEQ ID NO:109
AAVrh.46	815	US20150159173 SEQ ID NO:22, US20150315612 SEQ ID NO:19
AAVrh.46	816	US20150159173 SEQ ID NO:4, US20150315612 SEQ ID NO:101
AAVrh.47	817	US20150315612 SEQ ID NO:38
AAVrh.47	818	US20150315612 SEQ ID NO:118
AAVrh.48	819	US20150159173 SEQ ID NO:44, US20150315612 SEQ ID NO:115
AAVrh.48.1	820	US20150159173
AAVrh.48.1.2	821	US20150159173
AAVrh.48.2	822	US20150159173
AAVrh.48 (AAV1-7)	823	US20150315612 SEQ ID NO:32
AAVrh.49 (AAV1-8)	824	US20150315612 SEQ ID NO:25
AAVrh.49 (AAV1-8)	825	US20150315612 SEQ ID NO:103
AAVrh.50 (AAV2-4)	826	US20150315612 SEQ ID NO:23
AAVrh.50 (AAV2-4)	827	US20150315612 SEQ ID NO:108
AAVrh.51 (AAV2-5)	828	US20150315612 SEQ ID NO:22
AAVrh.51 (AAV2-5)	829	US20150315612 SEQ ID NO:104
AAVrh.52 (AAV3-9)	830	US20150315612 SEQ ID NO:18
AAVrh.52 (AAV3-9)	831	US20150315612 SEQ ID NO:96
AAVrh.53	832	US20150315612 SEQ ID NO:97
AAVrh.53 (AAV3-11)	833	US20150315612 SEQ ID NO:17
AAVrh.53 (AAV3-11)	834	US20150315612 SEQ ID NO:186
AAVrh.54	835	US20150315612 SEQ ID NO:40
AAVrh.54	836	US20150159173 SEQ ID NO:49, US20150315612 SEQ ID NO:116
AAVrh.55	837	US20150315612 SEQ ID NO:37
AAVrh.55 (AAV4-19)	838	US20150315612 SEQ ID NO:117
AAVrh.56	839	US20150315612 SEQ ID NO:54
AAVrh.56	840	US20150315612 SEQ ID NO:152
AAVrh.57	841	US20150315612 SEQ ID NO:26
AAVrh.57	842	US20150315612 SEQ ID NO:105
AAVrh.58	843	US20150315612 SEQ ID NO:27
AAVrh.58	844	US20150159173 SEQ ID NO:48, US20150315612 SEQ ID NO:106
AAVrh.58	845	US20150315612 SEQ ID NO:232
AAVrh.59	846	US20150315612 SEQ ID NO:42
AAVrh.59	847	US20150315612 SEQ ID NO:110
AAVrh.60	848	US20150315612 SEQ ID NO:31
AAVrh.60	849	US20150315612 SEQ ID NO:120
AAVrh.61	850	US20150315612 SEQ ID NO:107
AAVrh.61 (AAV2-3)	851	US20150315612 SEQ ID NO:21
AAVrh.62 (AAV2-15)	852	US20150315612 SEQ ID NO:33
AAVrh.62 (AAV2-15)	853	US20150315612 SEQ ID NO:114
AAVrh.64	854	US20150315612 SEQ ID NO:15
AAVrh.64	855	US20150159173 SEQ ID NO:43, US20150315612 SEQ ID NO:99
AAVrh.64	856	US20150315612 SEQ ID NO:233
AAVRh.64R1	857	US20150159173
AAVRh.64R2	858	US20150159173
AAVrh.65	859	US20150315612 SEQ ID NO:35
AAVrh.65	860	US20150315612 SEQ ID NO:112
AAVrh.67	861	US20150315612 SEQ ID NO:36
AAVrh.67	862	US20150315612 SEQ ID NO:230
AAVrh.67	863	US20150159173 SEQ ID NO:47, US20150315612 SEQ ID NO:113
AAVrh.68	864	US20150315612 SEQ ID NO:16
AAVrh.68	865	US20150315612 SEQ ID NO:100
AAVrh.69	866	US20150315612 SEQ ID NO:39
AAVrh.69	867	US20150315612 SEQ ID NO:119
AAVrh.70	868	US20150315612 SEQ ID NO:20
AAVrh.70	869	US20150315612 SEQ ID NO:98
AAVrh.71	870	US20150315612 SEQ ID NO:162
AAVrh.72	871	US20150315612 SEQ ID NO:9
AAVrh.73	872	US20150159173 SEQ ID NO:5
AAVrh.74	873	US20150159173 SEQ ID NO:6
AAVrh.8	874	US20150159173 SEQ ID NO:41
AAVrh.8	875	US20150315612 SEQ ID NO:235
AAVrh.8R	876	US20150159173, WO2015168666 SEQ ID NO:9
AAVrh.8R, мутант A586R	877	WO2015168666 SEQ ID NO:10
AAVrh.8R, мутант R533A	878	WO2015168666 SEQ ID NO:11
BAAV (AAV коровы)	879	US9193769 SEQ ID NO:8
BAAV (AAV коровы)	880	US9193769 SEQ ID NO:10
BAAV (AAV коровы)	881	US9193769 SEQ ID NO:4
BAAV (AAV коровы)	882	US9193769 SEQ ID NO:2
BAAV (AAV коровы)	883	US9193769 SEQ ID NO:6
BAAV (AAV коровы)	884	US9193769 SEQ ID NO:1
BAAV (AAV коровы)	885	US9193769 SEQ ID NO:5
BAAV (AAV коровы)	886	US9193769 SEQ ID NO:3
BAAV (AAV коровы)	887	US9193769 SEQ ID NO:11
BAAV (AAV коровы)	888	US7427396 SEQ ID NO:5
BAAV (AAV коровы)	889	US7427396 SEQ ID NO:6
BAAV (AAV коровы)	890	US9193769 SEQ ID NO:7
BAAV (AAV коровы)	891	US9193769 SEQ ID NO:9
BNP61 AAV	892	US20150238550 SEQ ID NO:1
BNP61 AAV	893	US20150238550 SEQ ID NO:2
BNP62 AAV	894	US20150238550 SEQ ID NO:3
BNP63 AAV	895	US20150238550 SEQ ID NO:4
AAV козы	896	US7427396 SEQ ID NO:3
AAV козы	897	US7427396 SEQ ID NO:4
AAV подлинного типа (ttAAV)	898	WO2015121501 SEQ ID NO:2
AAAV (AAV птицы)	899	US9238800 SEQ ID NO:12
AAAV (AAV птицы)	900	US9238800 SEQ ID NO:2
AAAV (AAV птицы)	901	US9238800 SEQ ID NO:6
AAAV (AAV птицы)	902	US9238800 SEQ ID NO:4
AAAV (AAV птицы)	903	US9238800 SEQ ID NO:8
AAAV (AAV птицы)	904	US9238800 SEQ ID NO:14
AAAV (AAV птицы)	905	US9238800 SEQ ID NO:10
AAAV (AAV птицы)	906	US9238800 SEQ ID NO:15
AAAV (AAV птицы)	907	US9238800 SEQ ID NO:5
AAAV (AAV птицы)	908	US9238800 SEQ ID NO:9
AAAV (AAV птицы)	909	US9238800 SEQ ID NO:3
AAAV (AAV птицы)	910	US9238800 SEQ ID NO:7
AAAV (AAV птицы)	911	US9238800 SEQ ID NO:11
AAAV (AAV птицы)	912	US9238800 SEQ ID NO:13
AAAV (AAV птицы)	913	US9238800 SEQ ID NO:1
AAV Shuffle 100-1	914	US20160017295 SEQ ID NO:23
AAV Shuffle 100-1	915	US20160017295 SEQ ID NO:11
AAV Shuffle 100-2	916	US20160017295 SEQ ID NO:37
AAV Shuffle 100-2	917	US20160017295 SEQ ID NO:29
AAV Shuffle 100-3	918	US20160017295 SEQ ID NO:24
AAV Shuffle 100-3	919	US20160017295 SEQ ID NO:12
AAV Shuffle 100-7	920	US20160017295 SEQ ID NO:25
AAV Shuffle 100-7	921	US20160017295 SEQ ID NO:13
AAV Shuffle 10-2	922	US20160017295 SEQ ID NO:34
AAV Shuffle 10-2	923	US20160017295 SEQ ID NO:26
AAV Shuffle 10-6	924	US20160017295 SEQ ID NO:35
AAV Shuffle 10-6	925	US20160017295 SEQ ID NO:27
AAV Shuffle 10-8	926	US20160017295 SEQ ID NO:36
AAV Shuffle 10-8	927	US20160017295 SEQ ID NO:28
AAV SM 100-10	928	US20160017295 SEQ ID NO:41
AAV SM 100-10	929	US20160017295 SEQ ID NO:33
AAV SM 100-3	930	US20160017295 SEQ ID NO:40
AAV SM 100-3	931	US20160017295 SEQ ID NO:32
AAV SM 10-1	932	US20160017295 SEQ ID NO:38
AAV SM 10-1	933	US20160017295 SEQ ID NO:30
AAV SM 10-2	934	US20160017295 SEQ ID NO:10
AAV SM 10-2	935	US20160017295 SEQ ID NO:22
AAV SM 10-8	936	US20160017295 SEQ ID NO:39
AAV SM 10-8	937	US20160017295 SEQ ID NO:31
AAV SM 100-10	928	US20160017295 SEQ ID NO:41
AAV SM 100-10	929	US20160017295 SEQ ID NO:33
AAV SM 100-3	930	US20160017295 SEQ ID NO:40
AAV SM 100-3	931	US20160017295 SEQ ID NO:32
AAV SM 10-1	932	US20160017295 SEQ ID NO:38
AAV SM 10-1	933	US20160017295 SEQ ID NO:30
AAV SM 10-2	934	US20160017295 SEQ ID NO:10
AAV SM 10-2	935	US20160017295 SEQ ID NO:22
AAV SM 10-8	936	US20160017295 SEQ ID NO:39
AAV SM 10-8	937	US20160017295 SEQ ID NO:31
AAVF1/HSC1	938	WO2016049230 SEQ ID NO:20
AAVF2/HSC2	939	WO2016049230 SEQ ID NO:21
AAVF3/HSC3	940	WO2016049230 SEQ ID NO:22
AAVF4/HSC4	941	WO2016049230 SEQ ID NO:23
AAVF5/HSC5	942	WO2016049230 SEQ ID NO:25
AAVF6/HSC6	943	WO2016049230 SEQ ID NO:24
AAVF7/HSC7	944	WO2016049230 SEQ ID NO:27
AAVF8/HSC8	945	WO2016049230 SEQ ID NO:28
AAVF9/HSC9	946	WO2016049230 SEQ ID NO:29
AAVF11/HSC11	947	WO2016049230 SEQ ID NO:26
AAVF12/HSC12	948	WO2016049230 SEQ ID NO:30
AAVF13/HSC13	949	WO2016049230 SEQ ID NO:31
AAVF14/HSC14	950	WO2016049230 SEQ ID NO:32
AAVF15/HSC15	951	WO2016049230 SEQ ID NO:33
AAVF16/HSC16	952	WO2016049230 SEQ ID NO:34
AAVF17/HSC17	953	WO2016049230 SEQ ID NO:35
AAVF1/HSC1	954	WO2016049230 SEQ ID NO:2
AAVF2/HSC2	955	WO2016049230 SEQ ID NO:3
AAVF3/HSC3	956	WO2016049230 SEQ ID NO:5
AAVF4/HSC4	957	WO2016049230 SEQ ID NO:6
AAVF5/HSC5	958	WO2016049230 SEQ ID NO:11
AAVF6/HSC6	959	WO2016049230 SEQ ID NO:7
AAVF7/HSC7	960	WO2016049230 SEQ ID NO:8
AAVF8/HSC8	961	WO2016049230 SEQ ID NO:9
AAVF9/HSC9	962	WO2016049230 SEQ ID NO:10
AAVF11/HSC11	963	WO2016049230 SEQ ID NO:4
AAVF12/HSC12	964	WO2016049230 SEQ ID NO:12
AAVF13/HSC13	965	WO2016049230 SEQ ID NO:14
AAVF14/HSC14	966	WO2016049230 SEQ ID NO:15
AAVF15/HSC15	967	WO2016049230 SEQ ID NO:16
AAVF16/HSC16	968	WO2016049230 SEQ ID NO:17
AAVF17/HSC17	969	WO2016049230 SEQ ID NO:13
AAV CBr-E1	970	US8734809 SEQ ID NO:13
AAV CBr-E2	971	US8734809 SEQ ID NO:14
AAV CBr-E3	972	US8734809 SEQ ID NO:15
AAV CBr-E4	973	US8734809 SEQ ID NO:16
AAV CBr-E5	974	US8734809 SEQ ID NO:17
AAV CBr-e5	975	US8734809 SEQ ID NO:18
AAV CBr-E6	976	US8734809 SEQ ID NO:19
AAV CBr-E7	977	US8734809 SEQ ID NO:20
AAV CBr-E8	978	US8734809 SEQ ID NO:21
AAV CLv-D1	979	US8734809 SEQ ID NO:22
AAV CLv-D2	980	US8734809 SEQ ID NO:23
AAV CLv-D3	981	US8734809 SEQ ID NO:24
AAV CLv-D4	982	US8734809 SEQ ID NO:25
AAV CLv-D5	983	US8734809 SEQ ID NO:26
AAV CLv-D6	984	US8734809 SEQ ID NO:27
AAV CLv-D7	985	US8734809 SEQ ID NO:28
AAV CLv-D8	986	US8734809 SEQ ID NO:29
AAV CLv-E1	987	US8734809 SEQ ID NO:13
AAV CLv-R1	988	US8734809 SEQ ID NO:30
AAV CLv-R2	989	US8734809 SEQ ID NO:31
AAV CLv-R3	990	US8734809 SEQ ID NO:32
AAV CLv-R4	991	US8734809 SEQ ID NO:33
AAV CLv-R5	992	US8734809 SEQ ID NO:34
AAV CLv-R6	993	US8734809 SEQ ID NO:35
AAV CLv-R7	994	US8734809 SEQ ID NO:36
AAV CLv-R8	995	US8734809 SEQ ID NO:37
AAV CLv-R9	996	US8734809 SEQ ID NO:38
AAV CLg-F1	997	US8734809 SEQ ID NO:39
AAV CLg-F2	998	US8734809 SEQ ID NO:40
AAV CLg-F3	999	US8734809 SEQ ID NO:41
AAV CLg-F4	1000	US8734809 SEQ ID NO:42
AAV CLg-F5	1001	US8734809 SEQ ID NO:43
AAV CLg-F6	1002	US8734809 SEQ ID NO:43
AAV CLg-F7	1003	US8734809 SEQ ID NO:44
AAV CLg-F8	1004	US8734809 SEQ ID NO:43
AAV CSp-1	1005	US8734809 SEQ ID NO:45
AAV CSp-10	1006	US8734809 SEQ ID NO:46
AAV CSp-11	1007	US8734809 SEQ ID NO:47
AAV CSp-2	1008	US8734809 SEQ ID NO:48
AAV CSp-3	1009	US8734809 SEQ ID NO:49
AAV CSp-4	1010	US8734809 SEQ ID NO:50
AAV CSp-6	1011	US8734809 SEQ ID NO:51
AAV CSp-7	1012	US8734809 SEQ ID NO:52
AAV CSp-8	1013	US8734809 SEQ ID NO:53
AAV CSp-9	1014	US8734809 SEQ ID NO:54
AAV CHt-2	1015	US8734809 SEQ ID NO:55
AAV CHt-3	1016	US8734809 SEQ ID NO:56
AAV CKd-1	1017	US8734809 SEQ ID NO:57
AAV CKd-10	1018	US8734809 SEQ ID NO:58
AAV CKd-2	1019	US8734809 SEQ ID NO:59
AAV CKd-3	1020	US8734809 SEQ ID NO:60
AAV CKd-4	1021	US8734809 SEQ ID NO:61
AAV CKd-6	1022	US8734809 SEQ ID NO:62
AAV CKd-7	1023	US8734809 SEQ ID NO:63
AAV CKd-8	1024	US8734809 SEQ ID NO:64
AAV CLv-1	1025	US8734809 SEQ ID NO:65
AAV CLv-12	1026	US8734809 SEQ ID NO:66
AAV CLv-13	1027	US8734809 SEQ ID NO:67
AAV CLv-2	1028	US8734809 SEQ ID NO:68
AAV CLv-3	1029	US8734809 SEQ ID NO:69
AAV CLv-4	1030	US8734809 SEQ ID NO:70
AAV CLv-6	1031	US8734809 SEQ ID NO:71
AAV CLv-8	1032	US8734809 SEQ ID NO:72
AAV CKd-B1	1033	US8734809 SEQ ID NO:73
AAV CKd-B2	1034	US8734809 SEQ ID NO:74
AAV CKd-B3	1035	US8734809 SEQ ID NO:75
AAV CKd-B4	1036	US8734809 SEQ ID NO:76
AAV CKd-B5	1037	US8734809 SEQ ID NO:77
AAV CKd-B6	1038	US8734809 SEQ ID NO:78
AAV CKd-B7	1039	US8734809 SEQ ID NO:79
AAV CKd-B8	1040	US8734809 SEQ ID NO:80
AAV CKd-H1	1041	US8734809 SEQ ID NO:81
AAV CKd-H2	1042	US8734809 SEQ ID NO:82
AAV CKd-H3	1043	US8734809 SEQ ID NO:83
AAV CKd-H4	1044	US8734809 SEQ ID NO:84
AAV CKd-H5	1045	US8734809 SEQ ID NO:85
AAV CKd-H6	1046	US8734809 SEQ ID NO:77
AAV CHt-1	1047	US8734809 SEQ ID NO:86
AAV CLv1-1	1048	US8734809 SEQ ID NO:171
AAV CLv1-2	1049	US8734809 SEQ ID NO:172
AAV CLv1-3	1050	US8734809 SEQ ID NO:173
AAV CLv1-4	1051	US8734809 SEQ ID NO:174
AAV Clv1-7	1052	US8734809 SEQ ID NO:175
AAV Clv1-8	1053	US8734809 SEQ ID NO:176
AAV Clv1-9	1054	US8734809 SEQ ID NO:177
AAV Clv1-10	1055	US8734809 SEQ ID NO:178
AAV.VR-355	1056	US8734809 SEQ ID NO:181
AAV.hu.48R3	1057	US8734809 SEQ ID NO:183
AAV CBr-E1	1058	US8734809 SEQ ID NO:87
AAV CBr-E2	1059	US8734809 SEQ ID NO:88
AAV CBr-E3	1060	US8734809 SEQ ID NO:89
AAV CBr-E4	1061	US8734809 SEQ ID NO:90
AAV CBr-E5	1062	US8734809 SEQ ID NO:91
AAV CBr-e5	1063	US8734809 SEQ ID NO:92
AAV CBr-E6	1064	US8734809 SEQ ID NO:93
AAV CBr-E7	1065	US8734809 SEQ ID NO:94
AAV CBr-E8	1066	US8734809 SEQ ID NO:95
AAV CLv-D1	1067	US8734809 SEQ ID NO:96
AAV CLv-D2	1068	US8734809 SEQ ID NO:97
AAV CLv-D3	1069	US8734809 SEQ ID NO:98
AAV CLv-D4	1070	US8734809 SEQ ID NO:99
AAV CLv-D5	1071	US8734809 SEQ ID NO:100
AAV CLv-D6	1072	US8734809 SEQ ID NO:101
AAV CLv-D7	1073	US8734809 SEQ ID NO:102
AAV CLv-D8	1074	US8734809 SEQ ID NO:103
AAV CLv-E1	1075	US8734809 SEQ ID NO:87
AAV CLv-R1	1076	US8734809 SEQ ID NO:104
AAV CLv-R2	1077	US8734809 SEQ ID NO:105
AAV CLv-R3	1078	US8734809 SEQ ID NO:106
AAV CLv-R4	1079	US8734809 SEQ ID NO:107
AAV CLv-R5	1080	US8734809 SEQ ID NO:108
AAV CLv-R6	1081	US8734809 SEQ ID NO:109
AAV CLv-R7	1082	US8734809 SEQ ID NO:110
AAV CLv-R8	1083	US8734809 SEQ ID NO:111
AAV CLv-R9	1084	US8734809 SEQ ID NO:112
AAV CLg-F1	1085	US8734809 SEQ ID NO:113
AAV CLg-F2	1086	US8734809 SEQ ID NO:114
AAV CLg-F3	1087	US8734809 SEQ ID NO:115
AAV CLg-F4	1088	US8734809 SEQ ID NO:116
AAV CLg-F5	1089	US8734809 SEQ ID NO:117
AAV CLg-F6	1090	US8734809 SEQ ID NO:117
AAV CLg-F7	1091	US8734809 SEQ ID NO:118
AAV CLg-F8	1092	US8734809 SEQ ID NO:117
AAV CSp-1	1093	US8734809 SEQ ID NO:119
AAV CSp-10	1094	US8734809 SEQ ID NO:120
AAV CSp-11	1095	US8734809 SEQ ID NO:121
AAV CSp-2	1096	US8734809 SEQ ID NO:122
AAV CSp-3	1097	US8734809 SEQ ID NO:123
AAV CSp-4	1098	US8734809 SEQ ID NO:124
AAV CSp-6	1099	US8734809 SEQ ID NO:125
AAV CSp-7	1100	US8734809 SEQ ID NO:126
AAV CSp-8	1101	US8734809 SEQ ID NO:127
AAV CSp-9	1102	US8734809 SEQ ID NO:128
AAV CHt-2	1103	US8734809 SEQ ID NO:129
AAV CHt-3	1104	US8734809 SEQ ID NO:130
AAV CKd-1	1105	US8734809 SEQ ID NO:131
AAV CKd-10	1106	US8734809 SEQ ID NO:132
AAV CKd-2	1107	US8734809 SEQ ID NO:133
AAV CKd-3	1108	US8734809 SEQ ID NO:134
AAV CKd-4	1109	US8734809 SEQ ID NO:135
AAV CKd-6	1110	US8734809 SEQ ID NO:136
AAV CKd-7	1111	US8734809 SEQ ID NO:137
AAV CKd-8	1112	US8734809 SEQ ID NO:138
AAV CLv-1	1113	US8734809 SEQ ID NO:139
AAV CLv-12	1114	US8734809 SEQ ID NO:140
AAV CLv-13	1115	US8734809 SEQ ID NO:141
AAV CLv-2	1116	US8734809 SEQ ID NO:142
AAV CLv-3	1117	US8734809 SEQ ID NO:143
AAV CLv-4	1118	US8734809 SEQ ID NO:144
AAV CLv-6	1119	US8734809 SEQ ID NO:145
AAV CLv-8	1120	US8734809 SEQ ID NO:146
AAV CKd-B1	1121	US8734809 SEQ ID NO:147
AAV CKd-B2	1122	US8734809 SEQ ID NO:148
AAV CKd-B3	1123	US8734809 SEQ ID NO:149
AAV CKd-B4	1124	US8734809 SEQ ID NO:150
AAV CKd-B5	1125	US8734809 SEQ ID NO:151
AAV CKd-B6	1126	US8734809 SEQ ID NO:152
AAV CKd-B7	1127	US8734809 SEQ ID NO:153
AAV CKd-B8	1128	US8734809 SEQ ID NO:154
AAV CKd-H1	1129	US8734809 SEQ ID NO:155
AAV CKd-H2	1130	US8734809 SEQ ID NO:156
AAV CKd-H3	1131	US8734809 SEQ ID NO:157
AAV CKd-H4	1132	US8734809 SEQ ID NO:158
AAV CKd-H5	1133	US8734809 SEQ ID NO:159
AAV CKd-H6	1134	US8734809 SEQ ID NO:151
AAV CHt-1	1135	US8734809 SEQ ID NO:160
AAV CHt-P2	1136	WO2016065001 SEQ ID NO:1
AAV CHt-P5	1137	WO2016065001 SEQ ID NO:2
AAV CHt-P9	1138	WO2016065001 SEQ ID NO:3
AAV CBr-7.1	1139	WO2016065001 SEQ ID NO:4
AAV CBr-7.2	1140	WO2016065001 SEQ ID NO:5
AAV CBr-7.3	1141	WO2016065001 SEQ ID NO:6
AAV CBr-7.4	1142	WO2016065001 SEQ ID NO:7
AAV CBr-7.5	1143	WO2016065001 SEQ ID NO:8
AAV CBr-7.7	1144	WO2016065001 SEQ ID NO:9
AAV CBr-7.8	1145	WO2016065001 SEQ ID NO:10
AAV CBr-7.10	1146	WO2016065001 SEQ ID NO:11
AAV CKd-N3	1147	WO2016065001 SEQ ID NO:12
AAV CKd-N4	1148	WO2016065001 SEQ ID NO:13
AAV CKd-N9	1149	WO2016065001 SEQ ID NO:14
AAV CLv-L4	1150	WO2016065001 SEQ ID NO:15
AAV CLv-L5	1151	WO2016065001 SEQ ID NO:16
AAV CLv-L6	1152	WO2016065001 SEQ ID NO:17
AAV CLv-K1	1153	WO2016065001 SEQ ID NO:18
AAV CLv-K3	1154	WO2016065001 SEQ ID NO:19
AAV CLv-K6	1155	WO2016065001 SEQ ID NO:20
AAV CLv-M1	1156	WO2016065001 SEQ ID NO:21
AAV CLv-M11	1157	WO2016065001 SEQ ID NO:22
AAV CLv-M2	1158	WO2016065001 SEQ ID NO:23
AAV CLv-M5	1159	WO2016065001 SEQ ID NO:24
AAV CLv-M6	1160	WO2016065001 SEQ ID NO:25
AAV CLv-M7	1161	WO2016065001 SEQ ID NO:26
AAV CLv-M8	1162	WO2016065001 SEQ ID NO:27
AAV CLv-M9	1163	WO2016065001 SEQ ID NO:28
AAV CHt-P1	1164	WO2016065001 SEQ ID NO:29
AAV CHt-P6	1165	WO2016065001 SEQ ID NO:30
AAV CHt-P8	1166	WO2016065001 SEQ ID NO:31
AAV CHt-6.1	1167	WO2016065001 SEQ ID NO:32
AAV CHt-6.10	1168	WO2016065001 SEQ ID NO:33
AAV CHt-6.5	1169	WO2016065001 SEQ ID NO:34
AAV CHt-6.6	1170	WO2016065001 SEQ ID NO:35
AAV CHt-6.7	1171	WO2016065001 SEQ ID NO:36
AAV CHt-6.8	1172	WO2016065001 SEQ ID NO:37
AAV CSp-8.10	1173	WO2016065001 SEQ ID NO:38
AAV CSp-8.2	1174	WO2016065001 SEQ ID NO:39
AAV CSp-8.4	1175	WO2016065001 SEQ ID NO:40
AAV CSp-8.5	1176	WO2016065001 SEQ ID NO:41
AAV CSp-8.6	1177	WO2016065001 SEQ ID NO:42
AAV CSp-8.7	1178	WO2016065001 SEQ ID NO:43
AAV CSp-8.8	1179	WO2016065001 SEQ ID NO:44
AAV CSp-8.9	1180	WO2016065001 SEQ ID NO:45
AAV CBr-B7.3	1181	WO2016065001 SEQ ID NO:46
AAV CBr-B7.4	1182	WO2016065001 SEQ ID NO:47
AAV3B	1183	WO2016065001 SEQ ID NO:48
AAV4	1184	WO2016065001 SEQ ID NO:49
AAV5	1185	WO2016065001 SEQ ID NO:50
AAV CHt-P2	1186	WO2016065001 SEQ ID NO:51
AAV CHt-P5	1187	WO2016065001 SEQ ID NO:52
AAV CHt-P9	1188	WO2016065001 SEQ ID NO:53
AAV CBr-7.1	1189	WO2016065001 SEQ ID NO:54
AAV CBr-7.2	1190	WO2016065001 SEQ ID NO:55
AAV CBr-7.3	1191	WO2016065001 SEQ ID NO:56
AAV CBr-7.4	1192	WO2016065001 SEQ ID NO:57
AAV CBr-7.5	1193	WO2016065001 SEQ ID NO:58
AAV CBr-7.7	1194	WO2016065001 SEQ ID NO:59
AAV CBr-7.8	1195	WO2016065001 SEQ ID NO:60
AAV CBr-7.10	1196	WO2016065001 SEQ ID NO:61
AAV CKd-N3	1197	WO2016065001 SEQ ID NO:62
AAV CKd-N4	1198	WO2016065001 SEQ ID NO:63
AAV CKd-N9	1199	WO2016065001 SEQ ID NO:64
AAV CLv-L4	1200	WO2016065001 SEQ ID NO:65
AAV CLv-L5	1201	WO2016065001 SEQ ID NO:66
AAV CLv-L6	1202	WO2016065001 SEQ ID NO:67
AAV CLv-K1	1203	WO2016065001 SEQ ID NO:68
AAV CLv-K3	1204	WO2016065001 SEQ ID NO:69
AAV CLv-K6	1205	WO2016065001 SEQ ID NO:70
AAV CLv-M1	1206	WO2016065001 SEQ ID NO:71
AAV CLv-M11	1207	WO2016065001 SEQ ID NO:72
AAV CLv-M2	1208	WO2016065001 SEQ ID NO:73
AAV CLv-M5	1209	WO2016065001 SEQ ID NO:74
AAV CLv-M6	1210	WO2016065001 SEQ ID NO:75
AAV CLv-M7	1211	WO2016065001 SEQ ID NO:76
AAV CLv-M8	1212	WO2016065001 SEQ ID NO:77
AAV CLv-M9	1213	WO2016065001 SEQ ID NO:78
AAV CHt-P1	1214	WO2016065001 SEQ ID NO:79
AAV CHt-P6	1215	WO2016065001 SEQ ID NO:80
AAV CHt-P8	1216	WO2016065001 SEQ ID NO:81
AAV CHt-6.1	1217	WO2016065001 SEQ ID NO:82
AAV CHt-6.10	1218	WO2016065001 SEQ ID NO:83
AAV CHt-6.5	1219	WO2016065001 SEQ ID NO:84
AAV CHt-6.6	1220	WO2016065001 SEQ ID NO:85
AAV CHt-6.7	1221	WO2016065001 SEQ ID NO:86
AAV CHt-6.8	1222	WO2016065001 SEQ ID NO:87
AAV CSp-8.10	1223	WO2016065001 SEQ ID NO:88
AAV CSp-8.2	1224	WO2016065001 SEQ ID NO:89
AAV CSp-8.4	1225	WO2016065001 SEQ ID NO:90
AAV CSp-8.5	1226	WO2016065001 SEQ ID NO:91
AAV CSp-8.6	1227	WO2016065001 SEQ ID NO:92
AAV CSp-8.7	1228	WO2016065001 SEQ ID NO:93
AAV CSp-8.8	1229	WO2016065001 SEQ ID NO:94
AAV CSp-8.9	1230	WO2016065001 SEQ ID NO:95
AAV CBr-B7.3	1231	WO2016065001 SEQ ID NO:96
AAV CBr-B7.4	1232	WO2016065001 SEQ ID NO:97
AAV3B	1233	WO2016065001 SEQ ID NO:98
AAV4	1234	WO2016065001 SEQ ID NO:99
AAV5	1235	WO2016065001 SEQ ID NO:100
AAVPHP.B или G2B-26	1236	WO2015038958 SEQ ID NO:8 и 13; GenBankALU85156.1
AAVPHP.B	1237	WO2015038958 SEQ ID NO:9
AAVG2B-13	1238	WO2015038958 SEQ ID NO:12
AAVTH1.1-32	1239	WO2015038958 SEQ ID NO:14
AAVTH1.1-35	1240	WO2015038958 SEQ ID NO:15

[0010] Каждое из патентов, заявок и/или публикаций, перечисленных в таблице 11, включено, таким образом, посредством ссылки в полном объеме.

[00323] В одном из вариантов осуществления серотип AAV может представлять собой или может иметь последовательность, как описано в международной публикации патента WO2015038958, содержание которой включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме, например, но не ограничиваясь этим, AAV9 (SEQ ID NO:2 и 11 из WO2015038958 или SEQ ID NO:494 и 495, соответственно, в настоящем документе), AAV-PHP.B (PHP.B) (SEQ ID NO:8 и 9 из WO2015038958, в настоящем документе SEQ ID NO:1236 и 1237), G2B-13 (SEQ ID NO:12 из WO2015038958, в настоящем документе SEQ ID NO:1238), G2B-26 (SEQ ID NO:13 из WO2015038958, в настоящем документе SEQ ID NO:1236 и 1237), TH1.1-32 (SEQ ID NO:14 из WO2015038958, в настоящем документе SEQ ID NO:1239), TH1.1-35 (SEQ ID NO:15 из WO2015038958, в настоящем документе SEQ ID NO:1240) или их варианты. Кроме того, любые из направляющих пептидов или аминокислотных вставок, описанных в WO2015038958, можно вставлять в любой родительский серотип AAV, например, но не ограничиваясь этим, AAV9 (SEQ ID NO:494 для последовательности ДНК и SEQ ID NO:495 для аминокислотной последовательности). В одном из вариантов осуществления аминокислотную вставку вставляют между аминокислотами 586-592 родительского AAV (например, AAV9). В другом варианте осуществления аминокислотную вставку вставляют между аминокислотами 588-589 родительской AAV последовательности. Аминокислотная вставка может представлять собой, но не ограничиваясь этим, любую из следующих аминокислотных последовательностей, TLAVPFK (SEQ ID NO:1 из WO2015038958; в настоящем документе SEQ ID NO:1241), KFPVALT (SEQ ID NO:3 из WO2015038958; в настоящем документе SEQ ID NO:1242), LAVPFK (SEQ ID NO:31 из WO2015038958; в настоящем документе SEQ ID NO:1243), AVPFK (SEQ ID NO:32 из WO2015038958; в настоящем документе SEQ ID NO:1244), VPFK (SEQ ID NO:33 из WO2015038958; в настоящем документе SEQ ID NO:1245), TLAVPF (SEQ ID NO:34 из WO2015038958; в настоящем документе SEQ ID NO:1246), TLAVP (SEQ ID NO:35 из WO2015038958; в настоящем документе SEQ ID NO:1247), TLAV (SEQ ID NO:36 из WO2015038958; в настоящем документе SEQ ID NO:1248), SVSKPFL (SEQ ID NO:28 из WO2015038958; в настоящем документе SEQ ID NO:1249), FTLTTPK (SEQ ID NO:29 из WO2015038958; в настоящем документе SEQ ID NO:1250), MNATKNV (SEQ ID NO:30 из WO2015038958; в настоящем документе SEQ ID NO:1251), QSSQTPR (SEQ ID NO:54 из WO2015038958; в настоящем документе SEQ ID NO:1252), ILGTGTS (SEQ ID NO:55 из WO2015038958; в настоящем документе SEQ ID NO:1253), TRTNPEA (SEQ ID NO:56 из WO2015038958; в настоящем документе SEQ ID NO:1254), NGGTSSS (SEQ ID NO:58 из WO2015038958; в настоящем документе SEQ ID NO:1255), или YTLSQGW (SEQ ID NO:60 из WO2015038958; в настоящем документе SEQ ID NO:1256). Неограничивающие примеры нуклеотидных последовательностей, которые могут кодировать аминокислотные вставки, включают следующее, AAGTTTCCTGTGGCGTTGACT (для SEQ ID NO:3 из WO2015038958; в настоящем документе SEQ ID NO:1257), ACTTTGGCGGTGCCTTTTAAG (SEQ ID NO:24 и 49 из WO2015038958; в настоящем документе SEQ ID NO:1258), AGTGTGAGTAAGCCTTTTTTG (SEQ ID NO:25 из WO2015038958; в настоящем документе SEQ ID NO:1259), TTTACGTTGACGACGCCTAAG (SEQ ID NO:26 из WO2015038958; в настоящем документе SEQ ID NO:1260), ATGAATGCTACGAAGAATGTG (SEQ ID NO:27 из WO2015038958; в настоящем документе SEQ ID NO:1261), CAGTCGTCGCAGACGCCTAGG (SEQ ID NO:48 из WO2015038958; в настоящем документе SEQ ID NO:1262), ATTCTGGGGACTGGTACTTCG (SEQ ID NO:50 и 52 из WO2015038958; в настоящем документе SEQ ID NO:1263), ACGCGGACTAATCCTGAGGCT (SEQ ID NO:51 из WO2015038958; в настоящем документе SEQ ID NO:1264), AATGGGGGGACTAGTAGTTCT (SEQ ID NO:53 из WO2015038958; в настоящем документе SEQ ID NO:1265) или TATACTTTGTCGCAGGGTTGG (SEQ ID NO:59 из WO2015038958; в настоящем документе SEQ ID NO:1266).

[00324] В одном из вариантов осуществления можно конструировать серотип AAV, который содержит по меньшей мере один эпитоп капсида AAV для CD8+ T-клетки. Hui et al. (Molecular Therapy - Methods & Clinical Development (2015) 2, 15029 doi:10.1038/mtm.2015,29; содержание которого включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме) идентифицировали специфические эпитопы капсида AAV для CD8+ T-клеток в AAV1 и AAV2 (см., например, таблица 2 в публикации). В качестве неограничивающего примера, специфический эпитоп капсида для CD8+ T-клеток может быть для серотипа AAV2. В качестве неограничивающего примера, специфический эпитоп капсида для CD8+ T-клеток может быть для серотипа AAV1.

[00325] В одном из вариантов осуществления можно конструировать серотип AAV, который содержит по меньшей мере один эпитоп капсида AAV для CD8+ T-клетки в AAV2, такой как, но не ограничиваясь этим, SADNNNSEY (SEQ ID NO:1267), LIDQYLYYL (SEQ ID NO:1268), VPQYGYLTL (SEQ ID NO:1269), TTSTRTWAL (SEQ ID NO:1270), YHLNGRDSL (SEQ ID NO:1271), SQAVGRSSF (SEQ ID NO:1272), VPANPSTTF (SEQ ID NO:1273), FPQSGVLIF (SEQ ID NO:1274), YFDFNRFHCHFSPRD (SEQ ID NO:1275), VGNSSGNWHCDSTWM (SEQ ID NO:1276), QFSQAGASDIRDQSR (SEQ ID NO:1277), GASDIRQSRNWLP (SEQ ID NO:1278) и GNRQAATADVNTQGV (SEQ ID NO:1279).

[00326] В одном из вариантов осуществления можно конструировать серотип AAV, который содержит по меньшей мере один эпитоп капсида AAV для CD8+ T-клетки в AAV1, такой как, но не ограничиваясь этим, LDRLMNPLI (SEQ ID NO:1280), TTSTRTWAL (SEQ ID NO:1270), и QPAKKRLNF (SEQ ID NO:1281)).

[00327] В одном из вариантов осуществления пептиды для включения в серотип AAV можно идентифицировать с использованием способов, описанных в Hui et al. (Molecular Therapy - Methods & Clinical Development (2015) 2, 15029 doi:10.1038/mtm.2015.29; содержание которого включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме). В качестве неограничивающего примера, процедура включает выделение спленоцитов человека, повторную стимуляцию спленоцитов in vitro с использованием индивидуальных пептидов, покрывающих аминокислотную последовательность белка капсида AAV, IFN-γ ELISpot с индивидуальными пептидами, которые используют для повторной стимуляции in vitro, биоинформационный анализ для определения HLA-рестрикции 15-меров, идентифицированных с помощью IFN-γ ELISpot, идентификацию кандидатных реактивных 9-членных эпитопов для заданного аллеля HLA, синтез кандидатных 9-меров, второй IFN-γ ELISpot скрининг спленоцитов от субъектов, несущих аллели HLA, с которыми предсказано связывание идентифицированных AAV эпитопов, определение реактивных эпитопов капсида AAV для CD8+ T-клеток и определение частоты субъектов, реагирующих на заданный эпитоп AAV.

[00328] В одном из вариантов осуществления AAV может представлять собой серотип, создаваемый с помощью направленной эволюции AAV на основе Cre-рекомбинации (CREATE), как описано в Deverman et al., (Nature Biotechnology 34(2):204-209 (2016)), содержание которой включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме. В одном из вариантов осуществления серотипы AAV, создаваемые таким образом, имеют усовершенствованную трансдукцию CNS и/или нейрональный и астроцитарный тропизм, по сравнению с другими серотипами AAV. В качестве неограничивающих примеров, серотип AAV может представлять собой PHP.B, PHP.B2, PHP.B3, PHP.A, G2A12, G2A15. В одном из вариантов осуществления эти серотипы AAV могут представлять собой производные AAV9 (SEQ ID NO:494 и 495) с 7-аминокислотной вставкой между аминокислотами 588 и 589. Неограничивающие примеры этих 7-аминокислотных вставок включают TLAVPFK (SEQ ID NO:1241), SVSKPFL (SEQ ID NO:1249), FTLTTPK (SEQ ID NO:1250), YTLSQGW (SEQ ID NO:1256), QAVRTSL (SEQ ID NO:1282) и/или LAKERLS (SEQ ID NO:1283).

[00329] В одном из вариантов осуществления серотип AAV може представлять собой то, что описано в Jackson et al (Frontiers in Molecular Neuroscience 9:154 (2016)), содержание которого включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме. В некоторых вариантах осуществления серотип AAV представляет собой PHP.B или AAV9. В некоторых вариантах осуществления серотип AAV образует пару с промотором синапсина для усиления нейрональной трансдукции, по сравнению с использованием более повсеместных промоторов (то есть, CBA или CMV).

[00330] В одном из вариантов осуществления пептиды для включения в серотип AAV можно идентифицировать посредством выделения спленоцитов человека, повторной стимуляции спленоцитов in vitro с использованием индивидуальных пептидов, покрывающих аминокислотную последовательность белка капсида AAV, IFN-γ ELISpot с индивидуальными пептидами, которые используют для повторной стимуляции in vitro, биоинформационного анализа для определения заданной аллельной рестрикции 15-меров, идентифицированных с помощью IFN-γ ELISpot, идентификации кандидатных реактивных 9-членных эпитопов для заданного аллеля, синтеза кандидатных 9-меров, второго IFN-γ ELISpot скрининга спленоцитов от индивида, несущего конкретные аллели, с которыми предсказано связывание идентифицированных AAV эпитопов, определения реактивных эпитопов капсида AAV для CD8+ T-клеток и определения частоты субъектов, реагирующих на заданный эпитоп AAV.

[00331] AAV векторы, содержащие последовательность нуклеиновой кислоты для молекул миРНК, можно получать или извлекать из различных серотипов AAV, включая в качестве неограничивающих примеров AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV9.47, AAV9(hu14), AAV10, AAV11, AAV12, AAVrh8, AAVrh10, AAV-DJ8, AAV-DJ, AAV-PHP.A (PHP.A) и/или AAV-PHP.B (PHP.B). В некоторых случаях, другие серотипы AAV можно смешивать вместе или с вирусами других типов, чтобы получать химерные AAV векторы. В качестве неограничивающего примера, AAV вектор получают из серотипа AAV9.

Компонент вирусного генома: инвертированные концевые повторы (ITR)

[00332] AAV частицы по настоящему изобретению содержат вирусный геном с по меньшей мере одной областью ITR и областью полезной нагрузки. В одном из вариантов осуществления вирусный геном содержит два ITR. Эти два ITR фланкируют область полезной нагрузки на 5'- и 3'-концах. ITR выполняют функцию участков начала репликации, которые содержат участки узнавания для репликации. ITR содержат области последовательностей, которые могут быть комплементарными и симметрично расположенными. ITR, встроенные в вирусные геномы по изобретению, могут содержать встречаемые в природе полинуклеотидные последовательности или рекомбинантно полученные полинуклеотидные последовательности.

[00333] ITR можно извлекать из того же серотипа, что и капсид, выбранного из любых серотипов, перечисленных в таблице 6, или их производных. ITR могут быть другого серотипа, нежели капсид. В одном из вариантов осуществления AAV частица имеет больше чем один ITR. В неограничивающем примере, AAV частица имеет вирусный геном, содержащий два ITR. В одном из вариантов осуществления ITR относится к тому же серотипу, что и другой ITR. В другом варианте осуществления ITR относятся к разным серотипам. Неограничивающие примеры включают 0, 1 или 2 ITR, имеющих тот же серотип, что и капсид. В одном из вариантов осуществления оба ITR вирусного генома AAV частицы представляют собой AAV2 ITR.

[00334] Независимо, каждый ITR может составлять приблизительно от 100 приблизительно до 150 нуклеотидов в длину. ITR может составлять приблизительно 100-105 нуклеотидов в длину, 106-110 нуклеотидов в длину, 111-115 нуклеотидов в длину, 116-120 нуклеотидов в длину, 121-125 нуклеотидов в длину, 126-130 нуклеотидов в длину, 131-135 нуклеотидов в длину, 136-140 нуклеотидов в длину, 141-145 нуклеотидов в длину или 146-150 нуклеотидов в длину. В одном из вариантов осуществления ITR составляют 140-142 нуклеотиды в длину. Неограничивающие примеры длины ITR представляют собой 102, 140, 141, 142, 145 нуклеотидов в длину и те, которые обладают по меньшей мере 95% идентичностью с ними.

[00335] В одном из вариантов осуществления кодируемую молекулу миРНК можно располагать около 5'-конца флип-конфигурации ITR в экспрессирующем векторе. В другом варианте осуществления кодируемую молекулу миРНК можно располагать около 3'-конца флип-конфигурации ITR в экспрессирующем векторе. В еще одном другом варианте осуществления кодируемую молекулу миРНК можно располагать около 5'-конца флоп-конфигурации ITR в экспрессирующем векторе. В еще одном другом варианте осуществления, кодируемую молекулу миРНК можно располагать около 3'-конца флоп-конфигурации ITR в экспрессирующем векторе. В одном из вариантов осуществления кодируемую молекулу миРНК можно располагать между 5'-концом флип-конфигурации ITR и 3'-концом флоп-конфигурации ITR в экспрессирующем векторе. В одном из вариантов осуществления кодируемую молекулу миРНК можно располагать между (например, посредине между 5'-концом флип-конфигурации ITR и 3'-концом флоп-конфигурации ITR или 3'-концом флоп-конфигурации ITR и 5'-концом флип-конфигурации ITR) 3'-концом флип-конфигурации ITR и 5'-концом флип-конфигурации ITR в экспрессирующем векторе. В качестве неограничивающего примера, кодируемую молекулу миРНК можно располагать в пределах 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30 или больше чем 30 нуклеотидов ниже от 5'- или 3'-конца ITR (например, флип- или флоп-конфигурации ITR) в экспрессирующем векторе. В качестве неограничивающего примера, кодируемую молекулу миРНК можно располагать в пределах 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30 или больше чем 30 нуклеотидов выше от 5'- или 3'-конца ITR (например, флип- или флоп-конфигурации ITR) в экспрессирующем векторе. В качестве другого неограничивающего примера, кодируемую молекулу миРНК можно располагать в пределах 1-5, 1-10, 1-15, 1-20, 1-25, 1-30, 5-10, 5-15, 5-20, 5-25, 5-30, 10-15, 10-20, 10-25, 10-30, 15-20, 15-25, 15-30, 20-25, 20-30 или 25-30 нуклеотидов ниже от 5'- или 3'-конца ITR (например, флип- или флоп-конфигурации ITR) в экспрессирующем векторе. В качестве другого неограничивающего примера, кодируемую молекулу миРНК можно располагать в пределах 1-5, 1-10, 1-15, 1-20, 1-25, 1-30, 5-10, 5-15, 5-20, 5-25, 5-30, 10-15, 10-20, 10-25, 10-30, 15-20, 15-25, 15-30, 20-25, 20-30 или 25-30 выше от 5'- или 3'-конца ITR (например, флип- или флоп-конфигурации ITR) в экспрессирующем векторе. В качестве неограничивающего примера, кодируемую молекулу миРНК можно располагать в пределах первых 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 15%, 20%, 25% или больше чем 25% нуклеотидов выше от 5'- или 3'-конца ITR (например, флип- или флоп-конфигурации ITR) в экспрессирующем векторе. В качестве другого неограничивающего примера, кодируемую молекулу миРНК можно располагать в пределах первых 1-5%, 1-10%, 1-15%, 1-20%, 1-25%, 5-10%, 5-15%, 5-20%, 5-25%, 10-15%, 10-20%, 10-25%, 15-20%, 15-25% или 20-25% ниже от 5'- или 3'-конца ITR (например, флип- или флоп-конфигурации ITR) в экспрессирующем векторе.

Компонент вирусного генома: промоторы

[00336] Специалист в данной области может признать, что целевая клетка может требовать конкретного промотора, включая в качестве неограничивающих примеров промотор, который обладает видовой специфичностью, специфичностью в клеточном цикле, является индуцибельным или тканеспецифическим (Parr et al., Nat. Med.3:1145-9 (1997); содержание которого включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме).

[00337] В одном из вариантов осуществления промотор представляет собой промотор, который полагают эффективным для управления экспрессией модулирующего полинуклеотида.

[00338] В одном из вариантов осуществления промотор представляет собой промотор, имеющий тропизм к клетке, подлежащей направленному воздействию.

[00339] В одном из вариантов осуществления промотор представляет собой слабый промотор, который обеспечивает экспрессию полезной нагрузки, например, модулирующего полинуклеотида, например, миРНК или дцРНК, в течение определенного периода времени в целевых тканях, таких как, но не ограничиваясь этим, ткани нервной системы. Экспрессия может происходить в течение периода в 1 час, 2, часа, 3 часа, 4 часа, 5 часов, 6 часов, 7 часов, 8 часов, 9 часов, 10 часов, 11 часов, 12 часов, 13 часов, 14 часов, 15 часов, 16 часов, 17 часов, 18 часов, 19 часов, 20 часов, 21 час, 22 часа, 23 часа, 1 сутки, 2 суток, 3 суток, 4 суток, 5 суток, 6 суток, 1 неделя, 8 суток, 9 суток, 10 суток, 11 суток, 12 суток, 13 суток, 2 недели, 15 суток, 16 суток, 17 суток, 18 суток, 19 суток, 20 суток, 3 недели, 22 суток, 23 суток, 24 суток, 25 суток, 26 суток, 27 суток, 28 суток, 29 суток, 30 суток, 31 сутки, 1 месяц, 2 месяца, 3 месяца, 4 месяца, 5 месяцев, 6 месяцев, 7 месяцев, 8 месяцев, 9 месяцев, 10 месяцев, 11 месяцев, 1 год, 13 месяцев, 14 месяцев, 15 месяцев, 16 месяцев, 17 месяцев, 18 месяцев, 19 месяцев, 20 месяцев, 21 месяц, 22 месяца, 23 месяца, 2 года, 3 года, 4 года, 5 лет, 6 лет, 7 лет, 8 лет, 9 лет, 10 лет или больше чем 10 лет. Экспрессия может происходить в течение 1-5 часов, 1-12 часов, 1-2 суток, 1-5 суток, 1-2 недель, 1-3 недель, 1-4 недель, 1-2 месяцев, 1-4 месяцев, 1-6 месяцев, 2-6 месяцев, 3-6 месяцев, 3-9 месяцев, 4-8 месяцев, 6-12 месяцев, 1-2 лет, 1-5 лет, 2-5 лет, 3-6 лет, 3-8 лет, 4-8 лет или 5-10 лет. В качестве неограничивающего примера, промотор представляет собой слабый промотор для длительной экспрессии полезной нагрузки в нервной ткани.

[00340] В одном из вариантов осуществления промотор может представлять собой промотор, который составляет меньше 1 т. о. Промотор может иметь длину 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 370, 380, 390, 400, 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480, 490, 500, 510, 520, 530, 540, 550, 560, 570, 580, 590, 600, 610, 620, 630, 640, 650, 660, 670, 680, 690, 700, 710, 720, 730, 740, 750, 760, 770, 780, 790, 800 или больше чем 800. Промотор может иметь длину 200-300, 200-400, 200-500, 200-600, 200-700, 200-800, 300-400, 300-500, 300-600, 300-700, 300-800, 400-500, 400-600, 400-700, 400-800, 500-600, 500-700, 500-800, 600-700, 600-800 или 700-800.

[00341] В одном из вариантов осуществления промотор может представлять собой комбинацию двух или больше компонентов, таких как, но не ограничиваясь этим, CMV и CBA. Каждый компонент может иметь длину 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 370, 380, 381, 382, 383, 384, 385, 386, 387, 388, 389, 390, 400, 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480, 490, 500, 510, 520, 530, 540, 550, 560, 570, 580, 590, 600, 610, 620, 630, 640, 650, 660, 670, 680, 690, 700, 710, 720, 730, 740, 750, 760, 770, 780, 790, 800 или больше чем 800. Каждый компонент может иметь длину 200-300, 200-400, 200-500, 200-600, 200-700, 200-800, 300-400, 300-500, 300-600, 300-700, 300-800, 400-500, 400-600, 400-700, 400-800, 500-600, 500-700, 500-800, 600-700, 600-800 или 700-800. В качестве неограничивающего примера, промотор представляет собой комбинацию из энхансерной последовательности CMV в 382 нуклеотида и последовательности промотора CBA в 260 нуклеотидов.

[00342] В одном из вариантов осуществления геном вектора содержит по меньшей мере один элемент для повышения специфичности мишени и экспрессии (см., например, Powell et al. Viral Expression Cassette Elements to Enhance Transgene Target Specificity and Expression in Gene Therapy, 2015; содержание которого включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме). Неограничивающие примеры элементов для увеличения специфичности мишени трансгена и экспрессии включают промоторы, эндогенную мкРНК, посттранскрипционные регуляторные элементы (PRE), последовательности сигналов полиаденилирования (полиA) и расположенные выше по направлению считывания энхансеры (USE), энхансеры CMV и интроны.

[00343] В одном из вариантов осуществления геном вектора содержит по меньшей мере один элемент для увеличения специфичности мишени и экспрессии (см., например, Powell et al. Viral Expression Cassette Elements to Enhance Transgene Target Specificity and Expression in Gene Therapy, 2015; содержание которого включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме), такой как промоторы.

[00344] Промоторы, для которых усиление экспрессии происходит в большинстве тканей, относятся к, но не ограничиваясь этим, 1α-субъединице фактора элонгации человека (EF1α), предраннему цитомегаловируса (CMV), β-актину курицы (CBA) и его производному CAG, β-глюкуронидазе (GUSB) или убиквитину C (UBC). Тканеспецифические экспрессионные элементы можно использовать для ограничения экспрессии определенными типами клеток, такими как, но не ограничиваясь этим, промоторы нервной системы, которые можно использовать для ограничения экспрессии нейронами, астроцитами или олигодендроцитами. Неограничивающий пример тканеспецифических экспрессионных элементов для нейронов включает промоторы нейрон-специфической енолазы (NSE), тромбоцитарного фактора роста (PDGF), B-цепи тромбоцитарного фактора роста (PDGF-β), синапсина (Syn), метил-CpG-связывающего белка 2 (MeCP2), CaMKII, mGluR2, NFL, NFH, nβ2, PPE, Enk и EAAT2. Неограничивающий пример тканеспецифических экспрессионных элементов для астроцитов включает промоторы глиофибриллярного кислого белка (GFAP) и EAAT2. Неограничивающий пример тканеспецифического экспрессионного элемента для олигодендроцитов включает промотор основного белка миелина (MBP).

[00345] В одном из вариантов осуществления геном вектора содержит повсеместный промотор. Неограничивающие примеры повсеместных промоторов включают H1, U6, CMV, CBA (в том числе производные CAG, CBh и т. д.), EF-1α, PGK, UBC, GUSB (hGBp) и UCOE (промотор HNRPA2B1-CBX3). Yu et al. (Molecular Pain 2011, 7:63; содержание которого включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме) оценивали экспрессию eGFP под управлением промоторов CAG, EFIα, PGK и UBC в клетках DRG крысы и первичных клетках DRG с использованием лентивирусных векторов и обнаруживали, что UBC демонстрировал более слабую экспрессию, чем другие 3 промотора, и имело место только 10-12% экспрессии в глии, которую наблюдали для всех промоторов. Soderblom et al. (E. Neuro 2015; содержание которого включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме) экспрессия eGFP в AAV8 с промоторами CMV и UBC и AAV2 с промотором CMV после инъекции в двигательную кору. Интраназальное введение плазмиды, содержащей промотор UBC или EFIα, демонстрировало длительную экспрессию в дыхательных путях, большую, чем экспрессия с использованием промотора CMV (см., например, Gill et al., Gene Therapy 2001, том 8, 1539-1546; содержание которого включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме). Husain et al. (Gene Therapy 2009; содержание которого включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме) оценивали конструкцию HβH с промотором hGUSB, промотором HSV-1LAT и промотором NSE и обнаруживали, что конструкция HβH демонстрировала более слабую экспрессию, чем NSE в головном мозге мыши. Passini and Wolfe (J. Virol. 2001, 12382-12392, содержание которого включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме) оценивали долгосрочные эффекты вектора HβH после внутрижелудочковой инъекции неонатальным мышам и обнаруживали, что имела место длительная экспрессия в течение по меньшей мере 1 года. Низкую экспрессию во всех областях головного мозга обнаруживали Xu et al. (Gene Therapy 2001, 8, 1323-1332; содержание которого включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме), когда использовали промоторы NF-L и NF-H, по сравнению с CMV-lacZ, CMV-luc, EF, GFAP, hENK, nAChR, PPE, PPE+wpre, NSE (0,3 т. о.), NSE (1,8 т. о.) и NSE (1,8 т. о.+wpre). Xu et al. обнаруживали, что активность промотора в нисходящем порядке представляла собой NSE (1,8 т. о.), EF, NSE (0,3 т. о.), GFAP, CMV, hENK, PPE, NFL и NFH. NFL представляет собой промотор из 650 нуклеотидов и NFH представляет собой промотор из 920 нуклеотидов, оба они отсутствуют в печени, но NFH распространен в чувствительных проприоцептивных нейронах, головном мозге и спинном мозге, а также NFH присутствует в сердце. Scn8a представляет собой промотор из 470 нуклеотидов, который экспрессирован на всем протяжении DRG, спинного мозга и головного мозга, при особенно высокой экспрессии, наблюдаемой в гиппокампальных нейронах и клетках Пуркинье мозжечка, коре, таламусе и гипоталамусе (см., например, Drews et al. 2007 и Raymond et al. 2004; содержание каждого из которых включено в настоящее описание посредством ссылки во всей их полноте).

[00346] В одном из вариантов осуществления геном вектора содержит промотор UBC. Промотор UBC может иметь размер 300-350 нуклеотидов. В качестве неограничивающего примера, промотор UBC составляет 332 нуклеотида.

[00347] В одном из вариантов осуществления геном вектора содержит промотор GUSB. Промотор GUSB может иметь размер 350-400 нуклеотидов. В качестве неограничивающего примера, промотор GUSB составляет 378 нуклеотидов. В качестве неограничивающего примера, конструкция может представлять собой AAV-промотор-CMV/интрон глобина-модулирующий полинуклеотид-RBG, где AAV может быть самокомплементарным и AAV может представлять собой серотип DJ.

[00348] В одном из вариантов осуществления геном вектора содержит промотор NFL. Промотор NFL может иметь размер 600-700 нуклеотидов. В качестве неограничивающего примера, промотор NFL составляет 650 нуклеотидов. В качестве неограничивающего примера, конструкция может представлять собой AAV-промотор-CMV/интрон глобина-модулирующий полинуклеотид-RBG, где AAV может быть самокомплементарным и AAV может представлять собой серотип DJ.

[00349] В одном из вариантов осуществления геном вектора содержит промотор NFH. Промотор NFH может иметь размер 900-950 нуклеотидов. В качестве неограничивающего примера, промотор NFH составляет 920 нуклеотидов. В качестве неограничивающего примера, конструкция может представлять собой AAV-промотор-CMV/интрон глобина-модулирующий полинуклеотид-RBG, где AAV может быть самокомплементарным и AAV может представлять собой серотип DJ.

[00350] В одном из вариантов осуществления геном вектора содержит промотор scn8a. Промотор scn8a может иметь размер 450-500 нуклеотидов. В качестве неограничивающего примера, промотор scn8a составляет 470 нуклеотидов. В качестве неограничивающего примера, конструкция может представлять собой AAV-промотор-CMV/интрон глобина-модулирующий полинуклеотид-RBG, где AAV может быть самокомплементарным и AAV может представлять собой серотип DJ.

[00351] В одном из вариантов осуществления геном вектора содержит промотор Pol III.

[00352] В одном из вариантов осуществления геном вектора содержит промотор P1.

[00353] В одном из вариантов осуществления геном вектора содержит промотор FXN.

[00354] В одном из вариантов осуществления геном вектора содержит промотор PGK.

[00355] В одном из вариантов осуществления геном вектора содержит промотор CBA.

[00356] В одном из вариантов осуществления геном вектора содержит промотор CMV.

[00357] В одном из вариантов осуществления геном вектора содержит промотор H1.

[00358] В одном из вариантов осуществления геном вектора содержит промотор U6.

[00359] В одном из вариантов осуществления геном вектора содержит промотор печени или скелетной мышцы. Неограничивающие примеры промоторов печени включают hAAT и TBG. Неограничивающие примеры промоторов скелетной мышцы включают десмин, MCK и C5-12.

[00360] В одном из вариантов осуществления AAV вектор содержит энхансерный элемент, промотор и/или 5'UTR интрон. Энхансер может представлять собой, но не ограничиваясь этим, энхансер CMV, промотор может представлять собой, но не ограничиваясь этим, промотор CMV, CBA, UBC, GUSB, NSE, синапсина, MeCP2 и GFAP, а 5'UTR/интрон может представлять собой, но не ограничиваясь этим, SV40 и CBA-MVM. В качестве неограничивающего примера, энхансер, промотор и/или интрон, используемые в комбинации, могут представлять собой: (1) энхансер CMV, промотор CMV, 5'UTR интрон SV40; (2) энхансер CMV, промотор CBA, 5'UTR интрон SV40; (3) энхансер CMV, промотор CBA, 5'UTR интрон CBA-MVM; (4) промотор UBC; (5) промотор GUSB; (6) Промотор NSE; (7) промотор синапсина; (8) промотор MeCP2; (9) промотор GFAP, (10) промотор H1; и (11) промотор U6.

[00361] В одном из вариантов осуществления AAV вектор имеет конструированный промотор.

Компонент вирусного генома: интроны

[00362] В одном из вариантов осуществления геном вектора содержит по меньшей мере один элемент для увеличения специфичности мишени трансгена и экспрессии (см., например, Powell et al. Viral Expression Cassette Elements to Enhance Transgene Target Specificity and Expression in Gene Therapy, 2015; содержание которого включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме), такой как интрон. Неограничивающие примеры интронов включают MVM (67-97 п. о.), F.IX усеченный интрон 1 (300 п. о.), SD β-глобина/акцепторный сайт сплайсинга тяжелой цепи иммуноглобулина (250 п. о.), аденовирусный донор сплайсированного фрагмента/акцепторный сайт сплайсинга иммуноглобина (500 п. о.), поздний донор сплайсированного фрагмента/акцепторный сайт сплайсинга SV40 (19S/16S) (180 п. о.) и гибридный аденовирусный донор сплайсированного фрагмента/акцепторный сайт сплайсинга IgG (230 п. о.).

[00363] В одном из вариантов осуществления интрон может составлять 100-500 нуклеотидов в длину. Интрон может иметь длину 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 370, 380, 390, 400, 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480, 490 или 500. Промотор может иметь длину 80-100, 80-120, 80-140, 80-160, 80-180, 80-200, 80-250, 80-300, 80-350, 80-400, 80-450, 80-500, 200-300, 200-400, 200-500, 300-400, 300-500 или 400-500.

[00364] В одном из вариантов осуществления геном AAV вектора может содержать промотор, такой как, но не ограничиваясь этим, CMV или U6. В качестве неограничивающего примера, промотором для AAV, содержащий последовательность нуклеиновой кислоты для молекул миРНК по настоящему изобретению, является промотор CMV. В качестве другого неограничивающего примера, промотором для AAV, содержащий последовательность нуклеиновой кислоты для молекул миРНК по настоящему изобретению, является промотор U6.

[00365] В одном из вариантов осуществления AAV вектор может содержать промотор CMV.

[00366] В одном из вариантов осуществления AAV вектор может содержать промотор U6.

[00367] В одном из вариантов осуществления AAV вектор может содержать промотор CMV и U6.

[00368] В одном из вариантов осуществления AAV вектор может содержать промотор H1.

[00369] В одном из вариантов осуществления AAV вектор может содержать промотор CBA.

[00370] В одном из вариантов осуществления кодируемую молекулу миРНК можно располагать в экспрессирующем векторе ниже промотора, такого как, но не ограничиваясь этим, промотор CMV, U6, H1, CBA или CBA с интроном, таким как SV40, β-глобин или другие, известные в данной области. Кроме того, кодируемую молекулу миРНК также можно располагать выше последовательности полиаденилирования в экспрессирующем векторе. В качестве неограничивающего примера, кодируемую молекулу миРНК можно располагать в пределах 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30 или больше чем 30 нуклеотидов ниже промотора и/или выше последовательности полиаденилирования в экспрессирующем векторе. В качестве другого неограничивающего примера, кодируемую молекулу миРНК можно располагать в пределах 1-5, 1-10, 1-15, 1-20, 1-25, 1-30, 5-10, 5-15, 5-20, 5-25, 5-30, 10-15, 10-20, 10-25, 10-30, 15-20, 15-25, 15-30, 20-25, 20-30 или 25-30 нуклеотидов ниже промотора и/или выше последовательности полиаденилирования в экспрессирующем векторе. В качестве неограничивающего примера, кодируемую молекулу миРНК можно располагать в пределах первых 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 15%, 20%, 25% или больше чем 25% нуклеотидов ниже промотора и/или выше последовательности полиаденилирования в экспрессирующем векторе. В качестве другого неограничивающего примера, кодируемую молекулу миРНК можно располагать в пределах первых 1-5%, 1-10%, 1-15%, 1-20%, 1-25%, 5-10%, 5-15%, 5-20%, 5-25%, 10-15%, 10-20%, 10-25%, 15-20%, 15-25% или 20-25% ниже промотора и/или выше последовательности полиаденилирования в экспрессирующем векторе.

Компонент вирусного генома: последовательность полиаденилирования

[00371] В одном из вариантов осуществления вирусный геном AAV частицы по настоящему изобретению содержит по меньшей мере одну последовательность полиаденилирования. Вирусный геном AAV частицы может содержать последовательность полиаденилирования между 3'-концом кодирующей последовательности полезной нагрузки и 5'-концом 3'ITR.

[00372] В одном из вариантов осуществления последовательность полиаденилирования или «последовательность полиA» может находиться в диапазоне от 0 приблизительно до 500 нуклеотидов в длину. Последовательность полиаденилирования может составлять, но не ограничиваясь этим, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156, 157, 158, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 193, 194, 195, 196, 197, 198, 199, 200, 201, 202, 203, 204, 205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 217, 218, 219, 220, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 228, 229, 230, 231, 232, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 239, 240, 241, 242, 243, 244, 245, 246, 247, 248, 249, 250, 251, 252, 253, 254, 255, 256, 257, 258, 259, 260, 261, 262, 263, 264, 265, 266, 267, 268, 269, 270, 271, 272, 273, 274, 275, 276, 277, 278, 279, 280, 281, 282, 283, 284, 285, 286, 287, 288, 289, 290, 291, 292, 293, 294, 295, 296, 297, 298, 299, 300, 301, 302, 303, 304, 305, 306, 307, 308, 309, 310, 311, 312, 313, 314, 315, 316, 317, 318, 319, 320, 321, 322, 323, 324, 325, 326, 327, 328, 329, 330, 331, 332, 333, 334, 335, 336, 337, 338, 339, 340, 341, 342, 343, 344, 345, 346, 347, 348, 349, 350, 351, 352, 353, 354, 355, 356, 357, 358, 359, 360, 361, 362, 363, 364, 365, 366, 367, 368, 369, 370, 371, 372, 373, 374, 375, 376, 377, 378, 379, 380, 381, 382, 383, 384, 385, 386, 387, 388, 389, 390, 391, 392, 393, 394, 395, 396, 397, 398, 399, 400, 401, 402, 403, 404, 405, 406, 407, 408, 409, 410, 411, 412, 413, 414, 415, 416, 417, 418, 419, 420, 421, 422, 423, 424, 425, 426, 427, 428, 429, 430, 431, 432, 433, 434, 435, 436, 437, 438, 439, 440, 441, 442, 443, 444, 445, 446, 447, 448, 449, 450, 451, 452, 453, 454, 455, 456, 457, 458, 459, 460, 461, 462, 463, 464, 465, 466, 467, 468, 469, 470, 471, 472, 473, 474, 475, 476, 477, 478, 479, 480, 481, 482, 483, 484, 485, 486, 487, 488, 489, 490, 491, 492, 493, 494, 495, 496, 497, 498, 499 и 500 нуклеотидов в длину.

[00373] В одном из вариантов осуществления последовательность полиаденилирования составляет 50-100 нуклеотидов в длину.

[00374] В одном из вариантов осуществления последовательность полиаденилирования составляет 50-150 нуклеотидов в длину.

[00375] В одном из вариантов осуществления последовательность полиаденилирования составляет 50-160 нуклеотидов в длину.

[00376] В одном из вариантов осуществления последовательность полиаденилирования составляет 50-200 нуклеотидов в длину.

[00377] В одном из вариантов осуществления последовательность полиаденилирования составляет 60-100 нуклеотидов в длину.

[00378] В одном из вариантов осуществления последовательность полиаденилирования составляет 60-150 нуклеотидов в длину.

[00379] В одном из вариантов осуществления последовательность полиаденилирования составляет 60-160 нуклеотидов в длину.

[00380] В одном из вариантов осуществления последовательность полиаденилирования составляет 60-200 нуклеотидов в длину.

[00381] В одном из вариантов осуществления последовательность полиаденилирования составляет 70-100 нуклеотидов в длину.

[00382] В одном из вариантов осуществления последовательность полиаденилирования составляет 70-150 нуклеотидов в длину.

[00383] В одном из вариантов осуществления последовательность полиаденилирования составляет 70-160 нуклеотидов в длину.

[00384] В одном из вариантов осуществления последовательность полиаденилирования составляет 70-200 нуклеотидов в длину.

[00385] В одном из вариантов осуществления последовательность полиаденилирования составляет 80-100 нуклеотидов в длину.

[00386] В одном из вариантов осуществления последовательность полиаденилирования составляет 80-150 нуклеотидов в длину.

[00387] В одном из вариантов осуществления последовательность полиаденилирования составляет 80-160 нуклеотидов в длину.

[00388] В одном из вариантов осуществления последовательность полиаденилирования составляет 80-200 нуклеотидов в длину.

[00389] В одном из вариантов осуществления последовательность полиаденилирования составляет 90-100 нуклеотидов в длину.

[00390] В одном из вариантов осуществления последовательность полиаденилирования составляет 90-150 нуклеотидов в длину.

[00391] В одном из вариантов осуществления последовательность полиаденилирования составляет 90-160 нуклеотидов в длину.

[00392] В одном из вариантов осуществления последовательность полиаденилирования составляет 90-200 нуклеотидов в длину.

[00393] В одном из вариантов осуществления кодируемую молекулу миРНК можно располагать выше последовательности полиаденилирования в экспрессирующем векторе. Кроме того, кодируемую молекулу миРНК можно располагать ниже промотора, такого как, но не ограничиваясь этим, промотор CMV, U6, H1, CBA или CBA с интроном SV40 или β-глобина в экспрессирующем векторе. В качестве неограничивающего примера, кодируемую молекулу миРНК можно располагать в пределах 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30 или больше чем 30 нуклеотидов ниже промотора и/или выше последовательности полиаденилирования в экспрессирующем векторе. В качестве другого неограничивающего примера, кодируемую молекулу миРНК можно располагать в пределах 1-5, 1-10, 1-15, 1-20, 1-25, 1-30, 5-10, 5-15, 5-20, 5-25, 5-30, 10-15, 10-20, 10-25, 10-30, 15-20, 15-25, 15-30, 20-25, 20-30 или 25-30 нуклеотидов ниже промотора и/или выше последовательности полиаденилирования в экспрессирующем векторе. В качестве неограничивающего примера, кодируемую молекулу миРНК можно располагать в пределах первых 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 15%, 20%, 25% или больше чем 25% нуклеотидов ниже промотора и/или выше последовательности полиаденилирования в экспрессирующем векторе. В качестве другого неограничивающего примера, кодируемую молекулу миРНК можно располагать в пределах первых 1-5%, 1-10%, 1-15%, 1-20%, 1-25%, 5-10%, 5-15%, 5-20%, 5-25%, 10-15%, 10-20%, 10-25%, 15-20%, 15-25% или 20-25% ниже промотора и/или выше последовательности полиаденилирования в экспрессирующем векторе.

Экспрессирующий вектор

[00394] В одном из вариантов осуществления экспрессирующий вектор (например, AAV вектор) может содержать по меньшей мере один из модулирующих полинуклеотидов, кодирующих по меньшей мере одну из последовательностей миРНК или дуплексов, описанных в настоящем документе.

[00395] В одном из вариантов осуществления экспрессирующий вектор может содержать, от ITR до ITR в направлении от 5' к 3', ITR, промотор, интрон, модулирующий полинуклеотид, последовательность полиA и ITR.

Размер генома

[00396] В одном из вариантов осуществления геном вектора, который содержит последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую модулирующие полинуклеотиды, описанные в настоящем документе, может представлять собой одноцепочечный или двухцепочечный геном вектора. Размер генома вектора может представлять собой малый, средний, большой или максимальный размер. Дополнительно, геном вектора может содержать промотор и хвост полиA.

[00397] В одном из вариантов осуществления геном вектора, который содержит последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую модулирующие полинуклеотиды, описанные в настоящем документе, могет представлять собой малый одноцепочечный геном вектора. Малый одноцепочечный геном вектора может составлять 2,7 до 3,5 т. о. в размере, например, приблизительно 2,7, 2,8, 2,9, 3,0, 3,1, 3,2, 3,3, 3,4 и 3,5 т. о. в размере. В качестве неограничивающего примера, малый одноцепочечный геном вектора может составлять 3,2 т. о. в размере. Дополнительно, геном вектора может содержать промотор и хвост полиA.

[00398] В одном из вариантов осуществления геном вектора, который содержит последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую модулирующие полинуклеотиды, описанные в настоящем документе, может представлять собой малый двухцепочечный геном вектора. Малый двухцепочечный геном вектора может составлять от 1,3 до 1,7 т. о. в размере, например, приблизительно 1,3, 1,4, 1,5, 1,6 и 1,7 т. о. в размере. В качестве неограничивающего примера, малый двухцепочечный геном вектора может составлять 1,6 т. о. в размере. Дополнительно, геном вектора может содержать промотор и хвост полиA.

[00399] В одном из вариантов осуществления геном вектора, который содержит последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую модулирующие полинуклеотиды, описанные в настоящем документе, например, миРНК или дцРНК, может представлять собой средний одноцепочечный геном вектора. Средний одноцепочечный геном вектора может составлять от 3,6 до 4,3 т. о. в размере, например, приблизительно 3,6, 3,7, 3,8, 3,9, 4,0, 4,1, 4,2 и 4,3 т. о. в размере. В качестве неограничивающего примера, средний одноцепочечный геном вектора может составлять 4,0 т. о. в размере. Дополнительно, геном вектора может содержать промотор и хвост полиA.

[00400] В одном из вариантов осуществления геном вектора, который содержит последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую модулирующие полинуклеотиды, описанные в настоящем документе, может представлять собой средний двухцепочечный геном вектора. Средний двухцепочечный геном вектора может составлять от 1,8 до 2,1 т. о. в размере, например, приблизительно 1,8, 1,9, 2,0 и 2,1 т. о. в размере. В качестве неограничивающего примера, средний двухцепочечный геном вектора может составлять 2,0 т. о. в размере. Дополнительно, геном вектора может содержать промотор и хвост полиA.

[00401] В одном из вариантов осуществления геном вектора, который содержит последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую модулирующие полинуклеотиды, описанные в настоящем документе, может представлять собой большой одноцепочечный геном вектора. Большой одноцепочечный геном вектора может составлять от 4,4 до 6,0 т. о. в размере, например, приблизительно 4,4, 4,5, 4,6, 4,7, 4,8, 4,9, 5,0, 5,1, 5,2, 5,3, 5,4, 5,5, 5,6, 5,7, 5,8, 5,9 и 6,0 т. о. в размере. В качестве неограничивающего примера, большой одноцепочечный геном вектора может составлять 4,7 т. о. в размере. В качестве другого неограничивающего примера, большой одноцепочечный геном вектора может составлять 4,8 т. о. в размере. В качестве еще одного другого неограничивающего примера, большой одноцепочечный геном вектора может составлять 6,0 т. о. в размере. Дополнительно, геном вектора может содержать промотор и хвост полиA.

[00402] В одном из вариантов осуществления геном вектора, который содержит последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую модулирующие полинуклеотиды, описанные в настоящем документе, может представлять собой большой двухцепочечный геном вектора. Большой двухцепочечный геном вектора может составлять от 2,2 до 3,0 т. о. в размере, например, приблизительно 2,2, 2,3, 2,4, 2,5, 2,6, 2,7, 2,8, 2,9 и 3,0 т. о. в размере. В качестве неограничивающего примера, большой двухцепочечный геном вектора может составлять 2,4 т. о. в размере. Дополнительно, геном вектора может содержать промотор и хвост полиA.

Получение вируса

[00403] Настоящее раскрытие предусматривет способ создания парвовирусных частиц, например, AAV частиц, посредством репликации вирусного генома в реплицирующей вирус клетке, который включает приведение реплицирующей вирус клетки в контакт с полинуклеотидом AAV или геномом AAV.

[00404] Настоящее раскрытие предусматривает способ получения AAV частицы, обладающей увеличенной (повышенной, усовершенствованной) эффективностью трансдукции, включающий стадии: 1) совместной трансфекции компетентных бактериальных клеток бакмидным вектором и любым из вектора вирусной конструкции и/или AAV вектором с конструкцией полезной нагрузки, 2) выделения получаемых экспрессирующего вирусную конструкцию вектора и экспрессирующего конструкцию полезной нагрузки AAV вектора и отдельной трансфекции реплицирующих вирус клеток, 3) выделения и очистки получаемых частиц с полезной нагрузкой и вирусной конструкцией, содержащих экспрессирующий вирусную конструкцию вектор или экспрессирующий конструкцию полезной нагрузки AAV вектор, 4) совместного инфицирования реплицирующей вирус клетки AAV частицами как с полезной нагрузкой, так и с вирусной конструкцией, содержащих экспрессирующий вирусную конструкцию вектор или экспрессирующий конструкцию полезной нагрузки AAV вектор, 5) сбора и очистки вирусной частицы, содержащей парвовирусный геном.

[00405] В одном из вариантов осуществления настоящее изобретение предусматривает способ получения AAV частицы, включающий стадии 1) одновременной совместной трансфекции клеток млекопитающих, таких как, но не ограничиваясь этим, клетки HEK293, с использованием области полезной нагрузки, конструкции, экспрессирующей гены rep и cap, и конструкции помощника, 2) сбора и очистки AAV частицы, содержащей вирусный геном.

Клетки

[00406] Настоящее раскрытие предусматривает клетку, содержащую полинуклеотид AAV и/или геном AAV.

[00407] Получение вируса, раскрытое в настоящем документе, описывает процессы и способы получения AAV частиц, которые приводят в контакт с целевой клеткой для того, чтобы доставлять конструкцию полезной нагрузки, например, рекомбинантную вирусную конструкцию, которая содержит полинуклеотидную последовательность, кодирующую молекулу полезной нагрузки.

[00408] В одном из вариантов осуществления AAV частицы можно получать в реплицирующей вирус клетке, которая включает клетку насекомого.

[00409] Условия роста для клеток насекомого в культуре и получение гетерологичных продуктов в клетках насекомого в культуре хорошо известны в данной области, см. патент США № 6204059, содержание которого включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме.

[00410] Любую клетку насекомого, которая допускает репликацию парвовируса и которую можно поддерживать в культуре, можно использовать в соответствии с настоящим изобретением. Можно использовать клеточные линии из Spodoptera frugiperda, включая в качестве неограничивающих примеров клеточные линии Sf9 или Sf21, клеточные линии дрозофилы или клеточные линии комара, такие как клеточные линии, полученные из Aedes albopictus. Использование клеток насекомого для экспрессии гетерологичных белков хорошо документировано в качестве способов введения нуклеиновых кислот, таких как векторы, например, векторы, совместимые с клетками насекомых, в такие клетки, и способов поддержания таких клеток в культуре. См., например, Methods in Molecular Biology, ред. Richard, Humana Press, NJ (1995); O'Reilly et al., Baculovirus Expression Vectors, A Laboratory Manual, Oxford Univ. Press (1994); Samulski et al., J. Vir.63:3822-8 (1989); Kajigaya et al., Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA 88: 4646-50 (1991); Ruffing et al., J. Vir. 66:6922-30 (1992); Kimbauer et al., Vir.219:37-44 (1996); Zhao et al., Vir.272:382-93 (2000); и Samulski et al., патент США № 6204059, содержание каждого из которых включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме.

[00411] Реплицирующую вирус клетку может быть выбран у любого биологического организма, в том числе прокариотические (например, бактериальные) клетки и эукариотические клетки, в том числе, клетки насекомого, клетки дрожжей и клетки млекопитающих. Реплицирующие вирус клетки могут включать клетки млекопитающих, такие как клетки A549, WEH1, 3T3, 10T1/2, BHK, MDCK, COS 1, COS 7, BSC 1, BSC 40, BMT 10, VERO. W138, HeLa, HEK293, Saos, C2C12, L, HT1080, HepG2 и первичные фибробласты, гепатоциты и миобластные клетки, полученные у млекопитающих. Реплицирующие вирус клетки включают клетки, получаемые у биологических видов млекопитающих, включая в качестве неограничивающих примеров человека, обезьяну, мышь, крысу, кролика и хомяка, или тип клеток, включая в качестве неограничивающих примеров фибробласты, гепатоциты, опухолевые клетки, трансформированные клетки клеточных линий и т. д.

Мелкомасштабное получение AAV частиц

[00412] Получение вируса, раскрытое в настоящем документе, описывает процессы и способы получения AAV частиц, которые приводят в контакт с целевой клеткой для того, чтобы доставлять полезную нагрузку, например, рекомбинантную вирусную конструкцию, которая содержит полинуклеотидную последовательность, кодирующую полезную нагрузку.

[00413] В одном из вариантов осуществления AAV частицы можно получать в реплицирующих вирус клетках, которые включают клетки млекопитающего.

[00414] Реплицирующие вирус клетки, широко используемые для получения рекомбинантных AAV частиц, включают, но не ограничиваясь этим, клетки 293, клетки COS, клетки HeLa, KB-клетки и другие клеточные линии млекопитающих, как описано в патентах США №№ 6156303, 5387484, 5741683, 5691176 и 5688676; патентной заявке США 2002/0081721, и международных патентных заявках WO 00/47757, WO 00/24916 и WO 96/17947, содержание каждого из которых включено в настоящее описание посредством ссылки во всей их полноте.

[00415] В одном из вариантов осуществления AAV частицы получают в клетках млекопитающего, которые экспрессируют все три белка VP при стехиометрии приблизительно 1:1:10 (VP1:VP2:VP3). Регуляторные механизмы, которые делают возможным этот контролируемый уровень экспрессии, включают получение двух мРНК, одной для VP1 и другой для VP2 и VP3, которые получают дифференциальным сплайсингом.

[00416] В другом варианте осуществления AAV частицы получают в клетках млекопитающих с использованием способа тройной трансфекции, в котором конструкция полезной нагрузки, парвовирусный Rep и парвовирусный Cap и конструкция помощника находятся в трех различных конструкциях. Способ тройной трансфекции тремя компонентами получения AAV частиц можно использовать для получения небольших партий вируса для анализов, включая эффективность трансдукции, оценку целевой ткани (тропизм) и стабильность.

Бакуловирус

[00417] Получение частиц, раскрытое в настоящем документе, описывает процессы и способы получения AAV частиц, которые приводят в контакт с целевой клеткой для того, чтобы доставлять конструкцию полезной нагрузки, которая содержит полинуклеотидную последовательность, кодирующую полезную нагрузку.

[00418] В кратком изложении, каждый из вектора вирусной конструкции и AAV вектора с конструкцией полезной нагрузки встраивают посредством транспозонной донорно-акцепторной системы в бакмиду, также известную как бакуловирусная плазмида, с помощью стандартных способов молекулярной биологии, которые знает и выполняет специалист в данной области. Трансфекция отдельных популяций реплицирующих вирус клеток дает два бакуловируса, один содержит экспрессирующий вирусную конструкцию вектор и другой содержит экспрессирующий конструкцию полезной нагрузки AAV вектор. Два бакуловируса можно использовать для того, чтобы инфицировать одну популяцию реплицирующих вирус клеток для получения AAV частиц.

[00419] Бакуловирусные экспрессирующие векторы для получения вирусных частиц в клетках насекомого, включая в качестве неограничивающих примеров клетки Spodoptera frugiperda (Sf9), обеспечивают высокие титры продукта вирусных частиц. Рекомбинантный бакуловирус, кодирующий экспрессирующий вирусную конструкцию вектор и экспрессирующий конструкцию полезной нагрузки AAV вектор, инициирует продуктивную инфекцию реплицирующих вирус клеток. Инфекционные бакуловирусные частицы, высвобождаемые после первичной инфекции, вторично инфицируют дополнительные клетки в культуре, экспоненциально инфицируя всю популяцию клеточной культуры за несколько циклов инфекции, что является функцией начальной множественности заражения, см. Urabe, M. et al., J Virol. 2006 Feb; 80 (4):1874-85, содержание которого включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме.

[00420] Получение AAV частиц с использованием бакуловируса в клеточной системе насекомого может быть направлено на известную генетическую и физическую нестабильность бакуловирусов. В одном из вариантов осуществления система получения направлена на нестабильность бакуловирусов в течение нескольких пассирований за счет использования системы сохранения инфицированных клеток и масштабирования без определения титра. Мелкомасштабные посевные культуры продуцирующих вирус клеток трансфицируют вирусными экспрессионными конструкциями, кодирующими структурные, неструктурные, компоненты вирусной частицы. Инфицированные бакуловирусами продуцирующие вирус клетки собирают в аликвоты, которые можно криосохранять в жидком азоте; аликвоты сохраняют жизнеспособность и инфекционность для инфицирования крупномасштабной продуцирующей вирус клеточной культуры Wasilko DJ et al., Protein Expr Purif. 2009 Jun; 65(2):122-32, содержание которого включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме.

[00421] Генетически стабильный бакуловирус можно использовать для получения источника одного или нескольких компонентов для получения AAV частиц в клетках беспозвоночных. В одном из вариантов осуществления дефектные бакуловирусные экспрессирующие векторы в клетках насекомого можно поддерживать эписомально. В таком варианте осуществления конструируют бакмидный вектор с управляющими репликацией элементами, включая в качестве неограничивающих примеров промоторы, энхансеры и/или регулируемые клеточным циклом репликационные элементы.

[00422] В одном из вариантов осуществления можно конструировать бакуловирусы с (не)селективным маркером для рекомбинации в локусе хитиназы/катепсина. Локус chia/v-cath не обязателен для размножения бакуловируса в тканевой культуре, а V-cath (EC 3.4.22.50) представляет собой цистеиновую эндопротеазу, которая наиболее активна на субстратах, содержащих дипептид Arg-Arg. Дипептид Arg-Arg присутствует в структурных белках капсида денсовирусов и парвовирусов, но нечасто встречается в VP1 депендовирусов.

[00423] В одном из вариантов осуществления конструируют стабильные реплицирующие вирус клетки, допускающие бакуловирусную инфекцию, с по меньшей мере одной стабильно встроенное копией любого из элементов, необходимых для репликации и образования вирусных частиц AAV, включая в качестве неограничивающих примеров, весь геном AAV, гены Rep и Cap, гены Rep, гены Cap, каждый белок Rep в виде отдельной транскрипционной кассеты, каждый белок VP в виде отдельной транскрипционной кассеты, AAP (белок активации сборки) или по меньшей мере один из бакуловирусных генов-помощников с нативными или ненативными промоторами.

Крупномасштабное получение

[00424] В некоторых вариантах осуществления получение AAV частиц можно модифицировать для увеличения масштаба получения. Способы крупромасштабного получения вируса в соответствии с настоящим раскрытием могут включать любые из тех, что изложены в патентах США №№ 5756283, 6258595, 6261551, 6270996, 6281010, 6365394, 6475769, 6482634, 6485966, 6943019, 6953690, 7022519, 7238526, 7291498 и 7491508 или международных публикациях №№ WO1996039530, WO1998010088, WO1999014354, WO1999015685, WO1999047691, WO2000055342, WO2000075353 и WO2001023597, содержание каждого из которых включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме. Способы увеличения маштаба получения вирусных частиц обычно включают увеличение числа реплицирующих вирус клеток. В некоторых вариантах осуществления реплицирующие вирус клетки включают прилипающие клетки. Для увеличения машстаба получения вирусных частиц с помощью прилипающих реплицирующих вирус клеток необходимы более крупные поверхности для клеточных культур. В некоторых случаях, способы крупномасштабного получения включают использование вращающихся флаконов для увеличения поверхностей для клеточных культур. Другие субстраты клеточных культур с увеличенной площадью поверхности известны в данной области. Примеры дополнительных прилипающих клеточных культуральных продуктов с увеличенной площадью поверхности включают, но не ограничиваясь этим, CELLSTACK®, CELLCUBE® (Corning Corp., Corning, NY) и NUNC^TM CELL FACTORY^TM (Thermo Scientific, Waltham, MA.) В некоторых случаях, крупномасштабные поверхности для прилипающих клеток могут содержать приблизительно от 1000 см² приблизительно до 100000 см². В некоторых случаях крупномасштабные прилипающие клеточные культуры могут содержать приблизительно от 10⁷ приблизительно до 10⁹ клеток, приблизительно от 10⁸ приблизительно до 10¹⁰ клеток, приблизительно от 10⁹ приблизительно до 10¹² клеток или по меньшей мере 10¹² клеток. В некоторых случаях, крупномасштабные прилипающие культуры могут продуцировать приблизительно от 10⁹ приблизительно до 10¹², приблизительно от 10¹⁰ приблизительно до 10¹³, приблизительно от 10¹¹ приблизительно до 10¹⁴, приблизительно от 10¹² приблизительно до 10¹⁵ или по меньшей мере 10¹⁵ вирусных частиц.

[00425] В некоторых вариантах осуществления способы крупномасштабного получения вируса по настоящему раскрытию могут включать использование суспензионных клеточных культур. Суспензионная клеточная культура допускает значительно увеличенное число клеток. Обычно число прилипающих клеток, которые можно выращивать приблизительно на 10-50 см² площади поверхности, можно выращивать в суспензии в объеме приблизительно 1 см³.

[00426] Трансфекцию реплицирующих клеток в формате крупномасштабной культуры можно осуществлять в соответствии с любыми способами, известными в данной области. Для крупномасштабных прилипающих клеточных культур способы трансфекции могут включать, но не ограничиваясь этим, использование неорганических соединений (например, фосфата кальция), органических соединений [например, полиэтиленимина (PEI)] или использование нехимических способов (например, электропорации). Для клеток, растущих в суспензии, способы трансфекции могут включать, но не ограничиваясь этим, использование фосфата кальция и использование PEI. В некоторых случаях трансфекцию крупномасштабных суспензионных культур можно осуществлять в соответствии с разделом, озаглавленным «Transfection Procedure», который изложен в Feng, L. et al., 2008. Biotechnol Appl. Biochem. 50:121-32, содержание которого включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме. В соответствии с такими вариантами осуществления, можно формировать комплексы PEI-ДНК для введения плазмид, подлежащих трансфекции. В некоторых случаях клетки, подлежащие трансфекции комплексами PEI-ДНК, можно «шокировать» перед трансфекцией. Это включает снижение температуры клеточной культуры до 4°C в течение периода приблизительно 1 час. В некоторых случаях клеточные культуры можно шокировать в течение периода приблизительно от 10 минут приблизительно до 5 часов. В некоторых случаях клеточные культуры можно шокировать при температуре приблизительно от 0°C приблизительно до 20°C.

[00427] В некоторых случаях трансфекция может включать один или несколько векторов для экспрессии эффекторной молекулы РНК для того, чтобы снижать экспрессию нуклеиновых кислот с одной или нескольких AAV конструкций полезной нагрузки. Такие способы позволяют увеличивать получение вирусных частиц посредством снижения клеточных ресурсов, затрачиваемых на экспрессию конструкций полезной нагрузки. В некоторых случаях такие способы можно осуществлять в соответствии с тем, что изложено в публикации США № US2014/0099666, содержание которой включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме.

Биореакторы

[00428] В некоторых вариантах осуществления биореакторы для клеточной культуры можно использовать для крупромасштабного получения вируса. В некоторых случаях, биореакторы включаютт реакторы с перемешиваемым резервуаром. Такие реакторы в целом содержат сосуд, обычно цилиндрической формы, с перемешивателем (например, импеллером). В некоторых вариантах осуществления такие сосуды биореактора можно помещать в водяную рубашку для того, чтобы управлять температурой сосуда и/или минимизировать эффекты, оказываемые изменением температуры окружающей среды. Объем сосуда биореактора может находиться в диапазоне в размере приблизительно от 500 мл приблизительно до 2 л, приблизительно от 1 л приблизительно до 5 л, приблизительно от 2,5 л приблизительно до 20 л, приблизительно от 10 л приблизительно до 50 л, приблизительно от 25 л приблизительно до 100 л, приблизительно от 75 л приблизительно до 500 л, приблизительно от 250 л приблизительно до 2000 л, приблизительно от 1000 л приблизительно до 10000 л, приблизительно от 5000 л приблизительно до 50000 л или по меньшей мере 50000 л. Дно сосуда может быть скругленным или плоским. В некоторых случаях, животное клеточные культуры можно поддерживать в биореакторах с круглодонными сосудами.

[00429] В некоторых случаях, сосуд биореактора можно нагревать через использование термоциркулятора. Термоциркуляторы прокачивают нагретую воду по водяной рубашке. В некоторых случаях, нагретую воду можно прокачивать через трубы (например, змеевики), которые присутствуют в сосуде биореактора. В некоторых случаях теплый воздух может циркулировать вокруг биореактора, включая в качестве неограничивающих примеров паровоздушное пространство непосредственно над средой для культивирования. Дополнительно, уровни pH и CO₂ можно поддерживать для того, чтобы оптимизировать жизнеспособность клеток.

[00430] В некоторых случаях, биореакторы могут включать половолоконные реакторы. Половолоконные биореакторы могут поддерживать культуру и субстратзависимых и независимых от заякоривания клеток. Кроме того, биореакторы могут включать, но не ограничиваясь этим, биореакторы с плотным слоем или неподвижным слоем. Такие биореакторы могут содержать сосуды со стеклянными гранулами для прикрепления прилипающих клеток. Кроме того, реакторы с плотным слоем могут содержать керамические гранулы.

[00431] В некоторых случаях, вирусные частицы получают с использованием одноразового биореактора. В некоторых вариантах осуществления такие биореакторы могут включать одноразовые биореакторы WAVE^TM.

[00432] В некоторых вариантах осуществления получение AAV частиц в культуре клеток животного в биореакторе можно осуществлять в соответствии со способами, изложенными в патентах США №№ 5,064764, 6194191, 6566118, 8137948 или патентной заявке США № US2011/0229971, содержание каждого из которых включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме.

Лизис клеток

[00433] Клетки по изобретению, включая в качестве неограничивающих примеров продуцирующие вирус клетки, можно подвергать лизису клеток в соответствии с любыми известными в данной области способами. Лизис клеток можно осуществлять для получения одного или нескольких средств (например, вирусных частиц), присутствующих в любых клетках по изобретению. В некоторых вариантах осуществления лизис клеток можно осуществлять в соответствии с любым из способов, перечисленных в патентах США №№ 7326555, 7579181, 7048920, 6410300, 6436394, 7732129, 7510875, 7445930, 6726907, 6194191, 7125706, 6995006, 6676935, 7968333, 5756283, 6258595, 6261551, 6270996, 6281010, 6365394, 6475769, 6482634, 6485966, 6943019, 6953690, 7022519, 7238526, 7291498 и 7491508 или международных публикациях №№ WO1996039530, WO1998010088, WO1999014354, WO1999015685, WO1999047691, WO2000055342, WO2000075353 и WO2001023597, содержание каждого из которых включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме. Способы лизиса клеток могут быть химическими или механическими. Химический лизис клеток обычно включает приведение одной или нескольких клеток в контакт с одним или несколькими лизирующими средствами. Механический лизис обычно включает воздействие на одну или несколько клеток одним или несколькими лизирующими условиями и/или одним или несколькими лизирующими усилиями.

[00434] В некоторых вариантах осуществления химический лизис можно использовать для того, чтобы лизировать клетки. Как используют в настоящем документе, термин «лизирующее средство» относится к любому средству, которое может способствовать разрушению клетки. В некоторых случаях, лизирующие средства вводят в растворы, называемые лизирующими растворами или лизирующими буферами. Как используют в настоящем документе, термин «лизирующий раствор» относится к раствору (обычно водному), содержащему одно или несколько лизирующих средств. В дополнение к лизирующим средствам, лизирующие растворы могут содержать одно или несколько из буферных средств, солюбилизирующих средств, поверхностно-активных средств, консервантов, криозащитных средств, ферментов, ингибиторов ферментов и/или хелаторов. Лизирующие буферы представляют собой лизирующие растворы, содержащие одно или несколько буферных средств. Дополнительные компоненты лизирующих растворов могут включать одно или несколько солюбилизирующих средств. Как используют в настоящем документе, термин «солюбилизирующее средство» относится к соединению, которое повышает растворимость одного или нескольких компонентов раствора и/или растворимость одной или нескольких частиц, к которым применяют растворы. В некоторых случаях солюбилизирующие средства увеличивают растворимость белков. В некоторых случаях, солюбилизирующие средства выбирают на основе их способности увеличивать растворимость белков, при этом сохраняя конформацию и/или активность белков.

[00435] Образцовые лизирующие средства могут включать любые из тех, которые описаны в патентах США №№ 8685734, 7901921, 7732129, 7223585, 7125706, 8236495, 8110351, 7419956, 7300797, 6699706 и 6143567, содержание каждого из которых включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме. В некоторых случаях, лизирующие средства может быть выбран из лизирующих солей, амфотерных средств, катионных средств, ионных детергентов и неионных детергентов. Лизирующие соли могут включать, но не ограничиваясь этим, хлорид натрия (NaCl) и хлорид калия (KCl). Кроме того, лизирующие соли могут включать любые из тех, что описаны в патентах США №№ 8614101, 7326555, 7579181, 7048920, 6410300, 6436394, 7732129, 7510875, 7445930, 6726907, 6194191, 7125706, 6995006, 6676935 и 7968333, содержание каждого из которых включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме. Концентрации солей можно увеличивать или уменьшать, чтобы достигать эффективной концентрации для разрыва клеточных мембран. Амфотерные средства, как обозначают в настоящем документе, представляют собой соединения, способные реагировать в качестве кислоты или основания. Амфотерные средства могут включать, но не ограничиваясь этим, лизофосфатидилхолин, 3-((3-холамидопропил) диметиламмоний)-1-пропансульфонат (CHAPS), ZWITTERGENT® и т. п. Катионные средства могут включать, но не ограничиваясь этим, цетилтриметиламмония бромид (C (16) TAB) и хлорид бензалкония. Лизирующие средства, содержащие детергенты, могут включать ионные детергенты или неионные детергенты. Детергенты могут выполнять функцию разрушения или растворения клеточных структур, включая в качестве неограничивающих примеров клеточные мембраны, клеточные стенки, липиды, углеводы, липопротеины и гликопротеины. Образцовые ионные детергенты включают любые из тех, что изложены в патентах США №№ 7625570 и 6593123 или публикации США № US2014/0087361, содержание каждого из которых включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме. Некоторые ионные детергенты могут включать, но не ограничиваясь этим, додецилсульфат (SDS), холат и дезоксихолат натрия. В некоторых случаях, ионные детергенты можно включать в лизирующие растворы в качестве солюбилизирующего средства. Неионные детергенты могут включать, но не ограничиваясь этим, октилглюкозид, дигитонин, люброл, C12E8, TWEEN®-20, TWEEN®-80, Triton X-100 и Noniodet P-40. Неионные детергенты обычно представляют собой более слабые лизирующие средства, но могут быть включены в качестве солюбилизирующих средств для солюбилизации клеточных и/или вирусных белков. Дополнительные лизирующие средства могут включать ферменты и мочевину. В некоторых случаях, одно или несколько лизирующих средств можно комбинировать в лизирующем растворе для того, чтобы усиливать одно или несколько из лизиса клеток и растворимости белков. В некоторых случаях, ингибиторы ферментов можно включать в лизирующие растворы для того, чтобы предотвращать протеолиз, который может быть запущен разрушением клеточных мембран.

[00436] В некоторых вариантах осуществления осуществляют механический лизис клеток. Механические способы лизиса клеток могут включать использование одного или нескольких лизирующих условий и/или одного или нескольких лизирующих усилий. Как используют в настоящем документе, термин «лизирующее условие» относится к состоянию или обстоятельству, которое способствует разрушению клеток. Лизирующие условия могут включать определенную температуру, давление, осмотическую чистоту, солесодержание и т. п. В некоторых случаях, лизирующие условия включают повышенные или пониженные температуры. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления, лизирующие условия включают изменения температуры, чтобы способствовать разрушению клеток. Лизис клеток, который осуществляют в соответствии с такими вариантами осуществления, может включать лизис замораживанием-оттаиванием. Как используют в настоящем документе, термин «лизис замораживанием-оттаиванием» относится к клеточному лизису, при котором клеточный раствор подвергают одному или нескольким циклам замораживания-оттаивания. В соответствии со способами лизиса замораживанием-оттаиванием, клетки в растворе замораживают для того, чтобы вызывать механическое разрушение клеточных мембран, обусловленное формированием и ростом кристаллов льда. Клеточные растворы, используемые в соответсвтии со способами лизиса замораживанием-оттаиванием, дополнительно могут содержать одно или несколько лизирующих средств, солюбилизирующих средств, буферных средств, криозащитных средств, поверхностно-активных средств, консервантов, ферментов, ингибиторов ферментов и/или хелаторов. Когда клеточные растворы, которые подвергали заморозке, оттаивают, такие компоненты могут увеличивать выход желаемых клеточных продуктов. В некоторых случаях, одно или несколько криозащитных средств включены в клеточные растворы, которые подвергают лизису замораживанием-оттаиванием. Как используют в настоящем документе, термин «криозащитное средство» относится к средству, используемому для того, чтобы защищать одно или несколько веществ от повреждения из-за заморозки. Криозащитные средства могут включать любое из тех, что изложены в публикации США № US2013/0323302 или патентах США №№ 6503888, 6180613, 7888096, 7091030, содержание каждого из которых включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме. В некоторых случаях, криозащитные средства могут включать, но не ограничиваясь этим, диметилсульфоксид, 1,2-пропандиол, 2,3-бутандиол, формамид, глицерин, этиленгликоль, 1,3-пропандиол и n-диметилформамид, поливинилпирролидон, гидроксиэтилкрахмал, агарозу, декстраны, инозит, глюкозу, гидроксиэтилкрахмал, лактозу, сорбит, метилглюкозу, сахарозу и мочевину. В некоторых вариантах осуществления лизис замораживанием-оттаиванием можно осуществлять в соответствии с любым из способов, описанных в патенте США № 7704721, содержание которого включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме.

[00437] Как используют в настоящем документе, термин «лизирующее усилие» относится к физической активности, используемой для того, чтобы разрушать клетку. Лизирующие усилия могут включать, но не ограничиваясь этим, механические усилия, звуковые усилия, гравитационные силы, оптические силы, электрические силы и т. п. Лизис клеток, который осуществляют посредством механического усилия, обозначают в настоящем документе как «механический лизис». Механические усилия, которые можно использовать в соответствии с механическим лизисом, могут включать большие сдвиговые усилия в текучих веществах. В соответствии с такими способами механического лизиса можно использовать микрофлюидизирующее средство. Микрофлюидизирующие средства обычно содержат впускной резервуар, куда можно вносить клеточные растворы. Затем клеточные растворы прокачивают в камеру взаимодействия через насос (например, насос высокого давления) с высокой скоростью и/или давлением для получения сдвиговых усилий в текучем веществе. Затем получаемые лизаты можно собирать в один или несколько выходных резервуаров. Скорость и/или давление насоса можно корректировать для того, чтобы модулировать лизис клеток и увеличивать выход продуктов (например, вирусных частиц). Другие способы механического лизиса могут включать физическое разрушение клеток посредством соскребания.

[00438] Способы лизиса клеток может быть выбран на основе формата клеточной культуры клеток, подлежащих лизису Например, для прилипающих клеточных культур можно использовать некоторые способы химического и механического лизиса. Такие способы механического лизиса могут включать лизис замораживанием-оттаиванием или соскребание. В другом примере, химический лизис прилипающих клеточных культур можно осуществлять через инкубацию с лизирующими растворами, содержащими поверхностно-активное средство, такое как Triton-X-100. В некоторых случаях, клеточные лизаты, создаваемые из прилипающих клеточных культур, можно обрабатывать одной или несколькими нуклеазами, чтобы снижать вязкость лизатов, обусловленную высвобожденной ДНК.

[00439] В одном из вариантов осуществления способ сбора AAV частиц без лизиса можно использовать для эффективного и масштабируемого получения AAV частиц. В неограничивающем примере, AAV частицы можно получать, культивируя AAV частицы, не имеющие сайта связывания гепарина, тем самым позволяя AAV частицам проходить в супернатант в клеточной культуре, собирая супернатант из культуры; и выделяя AAV частицы из супернатанта, как описано в патентной заявке США 20090275107, содержание которой включено в данное описание посредством ссылки в полном объеме.

Осветление

[00440] Клеточные лизаты, содержащие вирусные частицы, можно подвергать осветлению. Осветление относится к начальным стадиям, выполняемым при очистке вирусных частиц от клеточных лизатов. Осветление служит для того, чтобы получать лизаты для дальнейшей очистки посредством удаления более крупного нерастворимого дебриса. Стадии осветления могут включать, но не ограничиваясь этим, центрифугирование и фильтрование. Во время осветления центрифугирование можно осуществлять на более низких скоростях для того, чтобы удалять только более крупный дебрис. Аналогичным образом, фильтрование можно осуществлять с использованием фильтров с порами более крупных размеров, чтобы удалять только более крупный дебрис. В некоторых случаях тангенциальное поточное фильтрование можно использовать во время осветления. Оцели осветления вируса включают высокопропускной процессинг клеточных лизатов и оптимизацию конечного выхода вируса. Преимущества включения стадии осветления включают масштабируемость процессинга более крупных объемов лизата. В некоторых вариантах осуществления осветление можно осуществлять в соответствии с любым из способов, представленных в патентах США №№ 8524446, 5756283, 6258595, 6261551, 6270996, 6281010, 6365394, 6475769, 6482634, 6485966, 6943019, 6953690, 7022519, 7238526, 7291498, 7491508, публикациях США №№ US2013/0045186, US2011/0263027, US2011/0151434, US2003/0138772 и международных публикациях №№ WO2002012455, WO1996039530, WO1998010088, WO1999014354, WO1999015685, WO1999047691, WO2000055342, WO2000075353 и WO2001023597, содержание каждого из которых включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме.

[00441] Способы осветления клеточного лизата посредством фильтрования хорошо изучены в данной области, и их можно осуществлять в соответствии с различными доступными способами, включая в качестве неограничивающих примеров пассивное фильтрование и фильтрование потока. Используемые фильтры могут иметь различные материалы и размеры пор. Например, фильтры клеточного лизата могут иметь размеры пор приблизительно от 1 мкМ приблизительно до 5 мкМ, приблизительно от 0,5 мкМ приблизительно до 2 мкМ, приблизительно от 0,1 мкМ приблизительно до 1 мкМ, приблизительно от 0,05 мкМ приблизительно до 0,05 мкМ и приблизительно от 0,001 мкМ приблизительно до 0,1 мкМ. Образцовые размеры пор для фильтров клеточного лизата могут включать, но не ограничиваясь этим, 2,0, 1,9, 1,8, 1,7, 1,6, 1,5, 1,4, 1,3, 1,2, 1,1, 1, 0,9, 0,8, 0,7, 0,6, 0,5, 0,4, 0,3, 0,2, 0,1, 0,95, 0,9, 0,85, 0,8, 0,75, 0,7, 0,65, 0,6, 0,55, 0,5, 0,45, 0,4, 0,35, 0,3, 0,25, 0,2, 0,15, 0,1, 0,05, 0,22, 0,21, 0,20, 0,19, 0,18, 0,17, 0,16, 0,15, 0,14, 0,13, 0,12, 0,11, 0,1, 0,09, 0,08, 0,07, 0,06, 0,05, 0,04, 0,03, 0,02, 0,01, 0,02, 0,019, 0,018, 0,017, 0,016, 0,015, 0,014, 0,013, 0,012, 0,011, 0,01, 0,009, 0,008, 0,007, 0,006, 0,005, 0,004, 0,003, 0,002, 0,001 и 0,001 мкМ. В одном из вариантов осуществления осветление может включать фильтрование через фильтр с размером пор 2,0 мкМ для того, чтобы удалять крупный дебрис, после чего следует пропускание через фильтр с размером пор 0,45 мкМ для того, чтобы удалять интактные клетки.

[00442] Материалы фильтров могут включать различные материалы. Такие материалы могут включать, но не ограничиваясь этим, полимерные материалы и металлические материалы (например, спеченный металл и пористый алюминий.) Образцовые материалы могут включать, но не ограничиваясь этим, нейлон, целлюлозные материалы (например, ацетат целлюлозы), поливинилиденфторид (PVDF), полиэфирсульфон, полиамид, полисульфон, полипропилен и полиэтилентерефталат. В некоторых случаях, фильтры, которые можно использовать для осветления клеточных лизатов, могут включать, но не ограничиваясь этим, фильтры ULTIPLEAT PROFILE™ (Pall Corporation, Port Washington, NY), мембранные фильтры SUPOR™ (Pall Corporation, Port Washington, NY)

[00443] В некоторых случаях, фильтрование потока можно осуществлять для увеличения скорости и/или эффективности фильтрования. В некоторых случаях, фильтрование потока может включать вакуумное фильтрование. В соответствии с такими способами, вакуум создают на стороне фильтра, противоположной стороне клеточного лизата, подлежащего фильтрованию. В некоторых случаях, клеточные лизаты можно пропускать через фильтры с помощью центробежных сил. В некоторых случаях используют насос, чтобы проталкивать клеточный лизат через осветляющие фильтры. Скорость потока клеточного лизата через один или несколько фильтров можно модулировать посредством корректировки одного из размера канала и/или давления текучего вещества.

[00444] В соответствии с некоторыми вариантами осуществления, клеточные лизаты можно осветлять посредством центрифугирования. Центрифугирование можно использовать для осаждения нерастворимых частиц в лизате. Во время осветления, сила центрифугирования [выражаемая в единицах гравитации (g), которые представляют кратность стандартной гравитационной силы] может быть ниже, чем в последующих стадиях очистки. В некоторых случаях можно осуществлять центрифугирование клеточных лизатов на приблизительно от 200 g приблизительно до 800 g, приблизительно от 500 g приблизительно до 1500 g, приблизительно от 1000 g приблизительно до 5000 g, приблизительно от 1200 g приблизительно до 10000 g или приблизительно от 8000 g приблизительно до 15000 g. В некоторых вариантах осуществления центрифугирование клеточного лизата осуществляют на 8000 g в течение 15 минут. В некоторых случаях, центрифугирование в градиенте плотности можно осуществлять для того, чтобы разделять частицы в клеточном лизате по скорости седиментации. Градиенты, используемые в соответствии со способам по настоящему раскрытию, могут включать, но не ограничиваясь этим, градиенты хлорида цезия и ступенчатые градиенты йодиксанола.

Очистка: хроматография

[00445] В некоторых случаях, AAV частицы можно очищать от осветеленных клеточных лизатов с помощью одного или несколькию способов хроматографии. Хроматография относится к любому числу известных в данной области способов отделения одного или нескольких элементов от смеси. Такие способы могут включать, но не ограничиваясь этим, ионообменную хроматографию (например, катионообменную хроматографию и анионообменную хроматографию), иммуноаффинную хроматографию и эксклюзионную хроматографию. В некоторых вариантах осуществления способы вирусной хроматографии могут включать любые из тех, которые изложены в патентах США №№ 5756283, 6258595, 6261551, 6270996, 6281010, 6365394, 6475769, 6482634, 6485966, 6943019, 6953690, 7022519, 7238526, 7291498 и 7491508 или международных публикациях №№ WO1996039530, WO1998010088, WO1999014354, WO1999015685, WO1999047691, WO2000055342, WO2000075353 и WO2001023597, содержание каждого из которых включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме.

[00446] В некоторых вариантах осуществления ионообменную хроматографию можно использовать для выделения вирусных частиц. Ионообменную хроматографию используют для связывания вирусных частиц на основе взаимодействий заряд-заряд между капсидными белками и заряженными участками, присутствующими на стационарной фазе, обычно колонке, через которую пропускают препараты вируса (например, осветеленные лизаты). После внесения препаратов вируса, связанные вирусные частицы затем можно элюировать посредством внесения раствора для элюирования, чтобы нарушать взаимодействия заряд-заряд. Растворы для элюирования можно оптимизировать посредством корректировки концентрации соли и/или pH для увеличения выхода связанных вирусных частиц. В зависимости от заряда вирусных капсидов, которые выделяют, может быть выбран способы катионо- или анионообменной хроматографии. Способы ионообменной хроматографии могут включать, но не ограничиваясь этим, любые из тех, которые изложены в патентах США №№ 7419817, 6143548, 7094604, 6593123, 7015026 и 8137948, содержание каждого из которых включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме.

[00447] В некоторых вариантах осуществления можно использовать иммуноаффинную хроматографию. Иммуноаффинная хроматография представляет собой форму хроматографии, в которой используют одно или несколько иммунных соединений (например, антител или структур, родственных антителам) для удерживания вирусных частиц. Иммунные соединения могут специфически связываться с одной или несколькими структурами на поверхностях вирусных частиц, включая в качестве неограничивающих примеров один или несколько белков вирусной оболочки. В некоторых случаях, иммунные соединения могут обладать специфичностью к конкретному варианту вируса. В некоторых случаях, иммунные соединения могут связываться с несколькими вариантами вируса. В некоторых вариантах осуществления иммунные соединения могут включать рекомбинантные одноцепочечные антитела. Такие рекомбинантные одноцепочечные антитела могут включать те, которые описаны в Smith, R.H. et al., 2009. Mol. Ther. 17(11):1888-96, содержание которого включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме. Такие иммунные соединения способны связываться с несколькими вариантами капсида AAV, включая в качестве неограничивающих примеров AAV1, AAV2, AAV6 и AAV8.

[00448] В некоторых вариантах осуществления можно использовать эксклюзионную хроматографию (SEC). SEC может включать использование геля для того, чтобы разделять частицы в соответствии с размером. При очистке вирусных частиц SEC фильтрование иногда обозначают как «очистку». В некоторых случаях, SEC можно осуществлять для того, чтобы создавать конечный продукт, который является почти гомогенным. Такие конечные продукты в некоторых случаях можно использовать в доклинических исследованиях и/или клинических исследованиях (Kotin, R.M. 2011. Human Molecular Genetics. 20(1):R2-R6, содержание которого включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме). В некоторых случаях SEC можно осуществлять в соответствии с любым из способов, изложенных в патентах США №№ 6143548, 7015026, 8476418, 6410300, 8476418, 7419817, 7094604, 6593123 и 8137948, содержание каждого из которых включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме.

[00449] В одном из вариантов осуществления композиции, содержащие по меньшей мере одну AAV частицу, можно выделять или очищать с использованием способов, описанных в патенте США № US 6146874, содержание которого включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме.

[00450] В одном из вариантов осуществления композиции, содержащие по меньшей мере одну AAV частицу, можно выделять или очищать с использованием способов, описанных в патенте США № US 6660514, содержание которого включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме.

[00451] В одном из вариантов осуществления композиции, содержащие по меньшей мере одну AAV частицу, можно выделять или очищать с использованием способов, описанных в патенте США № US 8283151, содержание которого включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме.

[00452] В одном из вариантов осуществления композиции, содержащие по меньшей мере одну AAV частицу, можно выделять или очищать с использованием способов, описанных в патенте США № US 8524446, содержание которого включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме.

II. ФОРМУЛИРОВАНИЕ И ДОСТАВКА

Фармацевтические композиции и формулирование

[00453] В дополнение к фармацевтическим композициям (векторы, например, AAV векторы, которые содержат последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую молекулы миРНК), в настоящем документе предусмотрены фармацевтические композиции, которые подходят для введения человеку, специалист в данной области поймет, что такие композиции в целом подходят для введения любому другому животному, например, не относящимся к человеку животным, например, не относящимся к человеку млекопитающим. Модификация фармацевтических композиций, подходящих для введения человеку, чтобы делать композиции подходящими для введения различным животным хорошо известны, и, как правило, опытный ветеринарный фармаколог может разрабатывать и/или выполнять такую модификацию с использованием только стандартных, если это вообще нужно, экспериментов. Субъекты, которым предусмотрено введение фармацевтических композиций, включают, но не ограничиваясь этим, человека и/или других приматов; млекопитающих, в том числе коммерчески значимых млекопитающих, таких как крупных рогатй скот, свиньи, лошади, овцы, кошки, собаки, мыши и/или крысы; и/или птиц, в том числе коммерчески значимых птиц, таких как домашняя птица, курицы, утки, гуси и/или индюшки.

[00454] В некоторых вариантах осуществления композиции вводят человеку, пациентам-людям или индивидам-людям. Для целей настоящего раскрытия фраза «активный ингредиент» в целом относится к любому из синтетических дуплексов миРНК, вектора, например, AAV вектора, кодирующего миРНК-дуплексы, или молекуле миРНК, доставляемой посредством вектора, как раскрыто в настоящем документе.

[00455] Составы фармацевтических композиций, описанных в настоящем документе, можно получать любым способом, который известен или будет разработан позже в области фармакологии. В целом, такие способы получения включают стадию приведения активного ингредиента в ассоциацию с эксципиентом и/или одним или несколькими другими вспомогательными ингредиентами и затем, в случае необходимости и/или желания, деление, придание геометрической формы и/или упаковывание продукта в виде желаемой единицы с одной или несколькими дозами.

[00456] Относительные количества активного ингредиента, фармацевтически приемлемого эксципиента и/или любых дополнительных ингредиентов в фармацевтической композиции в соответствии с изобретением варьируют, в зависимости от отличительных черт, размера и/или состояния индивида, которого лечат, и, кроме того, в зависимости от пути, посредством которого композиция подлежит введению.

[00457] Векторы, например, AAV векторы, которые содержат последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую молекулы миРНК по настоящему изобретению, можно формулировать с использованием одного или нескольких эксципиентов для: (1) увеличения стабильности; (2) увеличения трансфекции или трансдукции клеток; (3) предоставления возможности длительного или отсроченного высвобождения; или (4) изменения биораспределения (например, чтобы направлять вирусный вектор в конкретные ткани или типы клеток, такие как головной мозг и нейроны).

[00458] Составы по настоящему изобретению могут включать, без ограничения, солевой раствор, липидоиды, липосомы, липидные наночастицы, полимеры, липоплексы, наночастицы ядро-оболочка, пептиды, белки, клетки, трансфицировнные вирусными векторами (например, для трансплантации индивиду), имитаторы наночастиц и их сочетания. Кроме того, вирусные векторы по настоящему изобретению можно формулировать с использованием самособирающихся наночастиц из нуклеиновых кислот.

[00459] Составы фармацевтических композиций, описанных в настоящем документе, можно получать любым способом, который известен или будет позже разработан в области фармакологии. В целом, такие способы получения включают стадию ассоциирования активного ингредиента с эксципиентом и/или одним или несколькими другими вспомогательными ингредиентами.

[00460] Фармацевтическую композицию в соответствии с настоящим раскрытием можно получать, упаковывать и/или продавать ангро, в виде отдельной стандартной дозы и/или в виде множества отдельных стандартных доз. Как используют в настоящем документе, «стандартная доза» относится к дискретному количеству фармацевтической композиции, которое содержит предварительно определяемое количество активного ингредиента. Количество активного ингредиента в целом равно дозе активного ингредиента, которую следует вводить индивиду, и/или удобной доле такой дозы, например, такой как одна вторая или одна третья такой дозы.

[00461] Относительные количества активного ингредиента, фармацевтически приемлемого эксципиента и/или любых дополнительных ингредиентов в фармацевтической композиции в соответствии с настоящим раскрытием, могут варьировать, в зависимости от отличительных черт, размера и/или состояния индивида, подлежащего лечению, и, кроме того, в зависимости от пути, посредством которого композиция подлежит введению. Например, композиция может содержать между 0,1% и 99% (масс./масс.) активного ингредиента. В качестве примера, композиция может содержать между 0,1% и 100%, например, между 0,5 и 50%, 1-30%, 5-80%, по меньшей мере 80% (масс./масс.) активного ингредиента.

[00462] В некоторых вариантах осуществления фармацевтически приемлемый эксципиент может быть чистым на по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99% или 100%. В некоторых вариантах осуществления эксципиент одобрен для использования у человека и для ветеринарного использования. В некоторых вариантах осуществления эксципиент может быть одобрен в United States Food and Drug Administration. В некоторых вариантах осуществления эксципиент может иметь фармацевтическую степень чистоты. В некоторых вариантах осуществления эксципиент может отвечать стандартам фармакопеи США (USP), европейской фармакопеи (EP), бриатнской фармакопеи и/или международной фармакопеи.

[00463] Эксципиенты, которые, как используют в настоящем документе, включают, но не ограничиваясь этим, любые и все растворители, дисперсионные среды, разбавители или другие жидкие носители, способствующие диспергировнию или суспендированию средства, поверхностно-активные средства, изотонические средства, загустители или эмульгирующие средства, консерванты и т. п., как подходит для желаемой конкретной дозированной формы. Различные эксципиенты для формулирования фармацевтических композиций и способы получения композиций известны в данной области (см. Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21-е изд., A. R. Gennaro, Lippincott, Williams & Wilkins, Baltimore, MD, 2006; включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме). Использование стандартной эксципиентной среды может быть предусмотрено в объеме настоящего раскрытия, за исключением случаев, когда любая стандартная эксципиентная среда может быть несовместимой с веществом или его производными, например, посредством создания любого нежелательного биологического эффекта или иного взаимодействия вредоносным образом с любым другим компонентом(ами) фармацевтической композиции.

[00464] Образцовые разбавители включают, но не ограничиваясь этим, карбонат кальция, карбонат натрия, фосфат кальция, фосфат дикальция, сульфат кальция, гидрофосфат кальция, фосфат натрия лактозу, сахарозу, целлюлозу, микрокристаллическую целлюлозу, каолин, маннит, сорбит, инозит, хлорид натрия, сухой крахмал, кукурузный крахмал, сахарную пудру и т. д. и/или их сочетания.

[00465] В некоторых вариантах осуществления составы могут содержать по меньшей мере один неактивный ингредиент. Как используют в настоящем документе, термин «неактивный ингредиент» относится к одому или нескольким неактивным средствам, включенным в составы. В некоторых вариантах осуществления все, ни одно или некоторые из неактивных ингредиентов, которые можно использовать в составах по настоящему изобретению, могут быть одобрены в US Food and Drug Administration (FDA).

[00466] Составы векторов, содержащих последовательность нуклеиновой кислоты для молекул миРНК по настоящему изобретению, могут содержать катионы или анионы. В одном из вариантов осуществления составы содержат катионы металлов, такие как, но не ограничиваясь этим, Zn²⁺, Ca²⁺, Cu²⁺, Mg⁺ и их сочетания.

[00467] Как используют в настоящем документе, «фармацевтически приемлемые соли» относятся к производням раскрытых соединений, в которых исходное соединение модифицируют посредством превращения существующего фрагмента кислоты и основания в его солевую форму (например, посредством реакции группы свободного основания с подходящей органической кислотой). Примеры фармацевтически приемлемых солей включают, но не ограничиваясь этим, соли минеральных или органических кислот и основных остатков, таких как амины; щелочные или органические соли кислых остатков, таких как карбоновые кислоты; и т. п. Репрезентативные кислотно-аддитивные соли включают соли ацетаты, уксусной кислоты, адипаты, альгинаты, аскорбаты, аспартаты, бензолсульфонаты, бензолсульфоновой кислоты, бензоаты, бисульфаты, бораты, бутираты, камфораты, камфорсульфонаты, цитраты, циклопентанпропионаты, диглюконаты, додецилсульфаты, этансульфонаты, фумараты, глюкогептонаты, глицерофосфаты, гемисульфаты, гептонаты, гексаноаты, гидробромиды, гидрохлориды, гидройодиды, 2-гидроксиэтансульфонаты, лактобионаты, лактаты, лаураты, лаурилсульфаты, малаты, малеаты, малонаты, метансульфонаты, 2-нафталинсульфонаты, никотинаты, нитраты, олеаты, оксалаты, пальмитаты, памоаты, пектинаты, персульфаты, 3-фенилпропионаты, фосфаты, пикраты, пивалаты, пропионаты, стеараты, сукцинаты, сульфаты, тартраты, тиоцианаты, толуолсульфонаты, ундеканоаты, валераты и т. п. Репрезентативные соли щелочных или щелочноземельных металлов включают катионы натрия, лития, калия, кальция, магния и т. п., а также нетоксичные катионы аммония, четвертичного аммония и аминов, включая в качестве неограничивающих примеров аммоний, тетраметиламмоний, тетраэтиламмоний, метиламин, диметиламин, триметиламин, триэтиламин, этиламин и т. п. Фармацевтически приемлемые соли по настоящему раскрытию включают стандартные нетоксичные соли исходного сформированного соединения, например, из нетоксичных неорганических или органических кислот. Фармацевтически приемлемые соли по настоящему раскрытию можно синтезировать из исходного соединения, которое содержит основный или кислый фрагмент, с помощью стандартных химических способов. В целом, такие соли можно получать посредством реакции форм свободных кислот или оснований этих соединений со стехиометрическим количеством подходящего основания или кислоты в воде или в органическом растворителе или в смеси этих двух; в целом, неводные среды, такие как простой эфир, этилацетат, этанол, изопропанол или ацетонитрил, являются предпочтительными. Списки подходящих солей можно найти в Remington's Pharmaceutical Sciences, 17-е изд., Mack Publishing Company, Easton, Pa., 1985, стр. 1418, Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use, P.H. Stahl и C.G. Wermuth (ред.), Wiley-VCH, 2008, и Berge et al., Journal of Pharmaceutical Science, 66, 1-19 (1977); содержание каждого из которых включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме.

[00468] Термин «фармацевтически приемлемый сольват», как используют в настоящем документе, обозначает соединение по изобретению, в котором молекулы подходящего растворителя встроены в кристаллическую решетку. Подходящий растворитель является физиологически переносимым во вводимой дозе. Например, сольваты можно получать посредством кристаллизации, перекристаллизации или преципитации из раствора, который содержит органические растворители, воду или их смесь. Примеры подходящих растворителей представляют собой этанол, воду (например, моно-, ди- и тригидраты), N-метилпирролидинон (NMP), диметилсульфоксид (DMSO), N,N'-диметилформамид (DMF), N,N'-диметилацетамид (DMAC), 1,3-диметил-2-имидазолидинон (DMEU), 1,3-диметил-3,4,5,6-тетрагидро-2-(1H)-пиримидинон (DMPU), ацетонитрил (ACN), пропиленгликоль, этилацетат, бензиловый спирт, 2-пирролидон, бензилбензоат и т. п. Когда растворителем является вода, сольват обозначают как «гидрат».

[00469] В соответствии с настоящим изобретением, вектор, например, AAV вектор, который содержит последовательность нуклеиновой кислоты для молекул миРНК по настоящему изобретению, можно формулировать для доставки в CNS. Можно использовать средства, которые пересекают гематоэнцефалический барьер (BBB). Например, некоторые пептиды, проникающие в клетки, которые могут направлять молекулы миРНК в эндотелий BBB, можно использовать для того, чтобы формулировать миРНК-дуплексы, нацеленные на ген HTT.

Неактивные ингредиенты

[00470] В некоторых вариантах осуществления составы могут содержать по меньшей мере один эксципиент, который представляет собой неактивный ингредиент. Как используют в настоящем документе, термин «неактивный ингредиент» относится к одному или нескольким неактивным средствам, включаемым в составы. В некоторых вариантах осуществления все, ни одно или некоторые из неактивных ингредиентов, которые можно использовать в составах по настоящему раскрытию, могут быть одобрены в US Food and Drug Administration (FDA).

[00471] Составы несущих AAV частицы и вирусные векторы композиций, описанных в настоящем документе, могут содержать катионы или анионы. В одном из вариантов осуществления составы содержат катионы металлов, такие как, но не ограничиваясь этим, Zn²⁺, Ca²⁺, Cu²⁺, Mg⁺ и их сочетания. В качестве неограничивающего примера, составы могут содержать полимеры и композиции, описанные в настоящем документе, в комплексе с катионом металла (см., например, патенты США №№ 6265389 и 6555525, каждый из которых включен в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме).

Доставка

[00472] В одном из вариантов осуществления содержащие вирусный вектор композиции, описанные в настоящем документе, можно вводить или доставлять с использованием способов доставки вирионов AAV, которые описаны в европейской патентной заявке № EP1857552, содержание которой включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме.

[00473] В одном из вариантов осуществления содержащие вирусный вектор композиции, описанные в настоящем документе, можно вводить или доставлять с использованием способов доставки белков, используя AAV векторы, которые описаны в европейской патентной заявке № EP2678433, содержание которой включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме.

[00474] В одном из вариантов осуществления содержащие вирусный вектор композиции, описанные в настоящем документе, можно вводить или доставлять с использованием способов доставки молекул ДНК с использованием AAV векторов, которые описаны в патенте США № US 5858351, содержание которого включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме.

[00475] В одном из вариантов осуществления содержащие вирусный вектор композиции, описанные в настоящем документе, можно вводить или доставлять с использованием способов доставки ДНК в кровоток, которые описаны в патенте США № US 6211163, содержание которого включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме.

[00476] В одном из вариантов осуществления содержащие вирусный вектор композиции, описанные в настоящем документе, можно вводить или доставлять с использованием способов доставки вирионов AAV, которые описаны в патенте США № US 6325998, содержание которого включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме.

[00477] В одном из вариантов осуществления содержащие вирусный вектор композиции, описанные в настоящем документе, можно вводить или доставлять с использованием способов доставки полезной нагрузки в центральную нервную систему, которые описаны в патенте США № US 7588757, содержание которого включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме.

[00478] В одном из вариантов осуществления содержащие вирусный вектор композиции, описанные в настоящем документе, можно вводить или доставлять с использованием способов доставки полезной нагрузки, описанных в патенте США № US 8283151, содержание которого включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме.

[00479] В одном из вариантов осуществления содержащие вирусный вектор композиции, описанные в настоящем документе, можно вводить или доставлять с использованием способов доставки полезной нагрузки с использованием вектора доставки декарбоксилазы глутаминовой кислоты (GAD), которые описаны в международной публикации патента № WO2001089583, содержание которой включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме.

[00480] В одном из вариантов осуществления содержащие вирусный вектор композиции, описанные в настоящем документе, можно вводить или доставлять с использованием способов доставки полезной нагрузки в нервные клетки, которые описаны в международной публикации патента № WO2012057363, содержание которой включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме.

Доставка в клетки

[00481] Настоящее раскрытие предусматривает способ доставки в клетку или ткань любых из описанныхвыше полинуклеотидов AAV или геномов AAV, который включает приведение клетки или ткани в контакт с указанным полинуклеотидом AAV или геномами AAV или приведение клетки или ткани в контакт с частицей, содержащей указанный полинуклеотид AAV или геном AAV, или приведение клетки или ткани в контакт с любой из описанных композиций, в том числе фармацевтических композиций. Способ доставки полинуклеотида AAV или генома AAV в клетку или ткань можно выполнять in vitro, ex vivo или in vivo.

Введение в клетки - синтетическая дцРНК

[00482] Чтобы обеспечивать химическую и биологическую стабильность молекул миРНК (например, дуплексов миРНК и дцРНК), важно доставлять молекулы миРНК внутрь целевых клеток. В некоторых вариантах осуществления клетки могут включать, но не ограничиваясь этим, клетки млекопитающего происхождения, клетки человеческого происхождения, эмбриональные стволовые клетки, индуцировнные плюрипотентные стволовые клетки, невральные стволовые клетки и невральные клетки-предшественники.

[00483] Нуклеиновые кислоты, в том числе миРНК, несут суммарный отрицательный заряд на сахарофосфатном остове при нормальных физиологических условиях. Для того чтобы попасть в клетку, молекула миРНК должна войти в контакт с липидным бислоем клеточной мембраны, у которого группы головок также заряжены отрицательно.

[00484] Можно образовывать комплексы дуплексов миРНК с носителем, которые позволяют им пересекать клеточные мембраны, такие как упаковочные частицы, чтобы содействовать захвату миРНК клетками. Упаковочные частицы могут включать, но не ограничиваясь этим, липосомы, наночастицы, катионные липиды, производные полиэтилениминов, дендримеры, углеродные нанотрубки и комбинацию углеродных наночастиц с дендримерами. Липиды могут представлять собой катионные липиды и/или нейтральные липиды. В дополнение к общепризнанным липофильным комплексами между молекулами миРНК и катионными носителями, молекулы миРНК можно конъюгировать с гидрофобным фрагментом, таким как холестерин (например, публикация патента США № 20110110937; содержание которой включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме). Этот способ доставки сохраняет потенциал усовершенствования захвата клетками in vitro и фармакологических свойств in vivo у молекул миРНК. Молекулы миРНК по настоящему изобретению также можно конъюгировать с определенными катионными пептидами, проникающими в клетки (CPP), такими как MPG, транспортан или пенетратин, ковалентно или нековалентно (например, публикация патента США № 20110086425; содержание которой включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме).

Введение в клетки - AAV векторы

[00485] Молекулы миРНК (например, миРНК-дуплексы) по настоящему изобретению можно вводить в клетки с использованием любых из множества подходов, таких как, но не ограничиваясь этим, вирусные векторы (например, AAV векторы). Эти вирусные векторы конструируют и оптимизируют для того, чтобы содействовать проникновению молекулы миРНК в клетки, которые нелегко поддаются улучшению трансфекции. Также некоторые синтетические вирусные векторы обладают способностью встраивать кшРНК в геном клетки, тем самым приводя к стабильной экспрессии миРНК и долгосрочному нокдауну целевого гена. Таким образом, вирусные векторы конструируют в качестве носителей для специфической доставки при отсутствии вредоносной репликации и/или встраивания признаков, встречаемых у вируса дикого типа.

[00486] В некоторых вариантах осуществления молекулы миРНК по настоящему изобретению вводят в клетку посредством приведения клетки в контакт с композицией, содержащей липофильный носитель и вектор, например, AAV вектор, который содержит последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую молекулы миРНК по настоящему изобретению. В других вариантах осуществления молекулу миРНК вводят в клетку посредством трансфекции или инфекции клетки вектором, например, AAV вектором, который содержит последовательности нуклеиновой кислоты, способную продуцировать молекулу миРНК при транскрипции в клетке. В некоторых вариантах осуществления молекулу миРНК вводят в клетку посредством инъекции в клетку вектора, например, AAV вектора, который содержит последовательность нуклеиновой кислоты, способную продуцировать молекулу миРНК при транскрипции в клетке.

[00487] В некоторых вариантах осуществления перед трансфекцией, вектор, например, AAV вектор, который содержит последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую молекулы миРНК по настоящему изобретению, можно трансфицировать в клетки.

[00488] В других вариантах осуществления векторы, например, AAV векторы, которые содержат последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую молекулы миРНК по настоящему изобретению, можно доставлять в клетки посредством электропорации (например, публикация патента США № 20050014264; содержание которой включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме).

[00489] Другие способы введения векторов, например, AAV векторов, которые содержат последовательность нуклеиновой кислоты для молекул миРНК, описанных в настоящем документе, могут включать фотохимическую интернализацию, как описано в публикации патента США № 20120264807; содержание которой включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме.

[00490] В некоторых вариантах осуществления составы, описанные в настоящем документе, могут содержать по меньшей мере один вектор, например, AAV векторы, которые содержат последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую молекулы миРНК, описанные в настоящем документе. В одном из вариантов осуществления молекулы миРНК могут направленно воздействовать на ген HTT в одном целевом месте. В другом варианте осуществления состав содержит множество векторов, например, AAV векторы, каждый вектор содержит последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую молекулу миРНК, направленную на ген HTT в отличающемся целевом месте. На HTT можно направленно водействовать в 2, 3, 4, 5 или больше чем 5 местах.

[00491] В одном из вариантов осуществления векторы, например, AAV векторы, из любого релевантного биологического вида, такого как, но не ограничиваясь этим, человек, собака, мышь, крыса или обезьяна, можно вводить в клетки.

[00492] В одном из вариантов осуществления векторы, например, AAV векторы, можно вводить в клетки, которые релевантны для заболевания, подлежащего лечению. В качестве неограничивающего примера, заболеванием является HD и целевыми клетками являются нейроны и астроциты. В качестве другого неограничивающего примера, заболеванием является HD и целевыми клетками являются средние шипиковые нейроны, кортикальные нейроны и астроциты.

[00493] В одном из вариантов осуществления векторы, например, AAV векторы, можно вводить в клетки, которые имеют высокий уровень эндогенной экспрессии целевой последовательности.

[00494] В другом варианте осуществления векторы, например, AAV векторы, можно вводить в клетки, которые имеют низкий уровень эндогенной экспрессии целевой последовательности.

[00495] В одном из вариантов осуществления клетки могут представлять собой те, которые имеют высокую эффективность AAV трансдукции.

Доставка индивидам

[00496] Настоящее раскрытие дополнительно предусматривает способ доставки индивиду, в том числе млекопитающему индивиду, любых описанных выше полинуклеотидов AAV или геномов AAV, включающий введение индивиду указанного полинуклеотида AAV или генома AAV или введение индивиду частицы, содержащей указанный полинуклеотид AAV или геном AAV, или введение индивиду любых описанных композиций, в том числе фармацевтических композиций.

[00497] Фармацевтические композиции вирусных векторов, которые описаны в настоящем документе, могут отличаться одним или несколькими из биодоступности, терапевтического окна и/или объема распределения.

III. ВВЕДЕНИЕ И ДОЗИРОВАНИЕ

Введение

[00498] Вектор, например, AAV вектор, который содержит последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую молекулы миРНК по настоящему изобретению, можно вводить с помощью любого пути, результатом чего является терапевтически эффективный исход. Они включают, но не ограничиваясь этим, в паренхиму органа, такого как, но не ограничиваясь этим, головной мозг (например, интрапаренхимальное), полосатое тело (интрастриарное), энтеральное (в кишечник), гастроэнтеральное, эпидуральное, оральное (через рот), трансдермальное, перидуральное, интрацеребральное (в большой мозг), интрацеребровентрикулярное (в мозговые желудочки), накожное (нанесение на кожу), внутрикожное (в собственно кожу), подкожное (под кожу), назальное введение (через нос), внутривенную (в вену), внутривенную болюсную, внутривенную капельную, внутриартериальную (в артерию), внутримышечную (в мышцы), интракардиальную (в сердце), внутрикостную инфузию (в костный мозг), интратекальную (в позвоночный канал), под мягкую оболочку мозга (между мягкой оболочкой и подлежащей тканью), интраганглионарную (в ганглий), интраперитонеальную (инфузию или инъекцию в брюшную полость), интравезикальную инфузию, интравитреальную (через глаз), внутрикавернозную инъекцию (в патологическую полость) внутриполостное (в основание пениса), интравагинальное введение, внутриматочное, экстраамниотическое введение, трансдермальное (диффузия через интактную кожу для системного распределения), чресслизистое (диффузия через слизистую оболочку), трансвагинальное, инсуфляция (нюхать), сублингвальное, сублабиальное, клизму, глазные капли (на конъюнктиву), в ушных каплях, аурикулярное (в ухо или с его помощью), буккальное (направленное к щеке), коньюнктивальное, кожное, дентальное (в зуб или зубы), электроосмотическое, эндоцервикальное, внутрь синусов, эндотрахеальное, экстракорпоральное, гемодиализное, инфильтрационное, интерстициальное, интраабдоминальное, внутриамниотическое, внутрисуставное, интрабилиарное, внутрибронхиальное, интрабурсальное, внутрихрящевое (в хрящ), интракаудальное (в конский хвост), интрацистернальное (в cisterna magna cerebellomedularis), внутрироговичное (в роговицу), дентальное внутрикоронарное, внутрикоронарное (в коронарные артерии), в пещеристое тело (в растяжимые пространства пещеристого тела пениса), внутридисковое (в диск), внутрипротоковое (в проток железы), интрадуоденальное (в двенадцатиперстную кишку), интрадуральное (в или под твердую мозговую оболочку), внутриэпидермальное (в эпидермис), внутрипищеводное (в пищевод), внутрижелудочное (в желудок), внутридесневое (в десны), внутриподвздошное (в дистальную часть тонкой кишки), внутрь повреждения (в пределах или непосредственно внутрь локализованного повреждения), внутрипросветное (в просвет трубки), интралимфатическое (в лимфу), интрамедуллярное (в полость костного мозга в кости), внутрименингиальное (в мягкие мозговые оболочки), внутриглазное (в глаз), интраовариальное (в яичник), интраперикардиальное (в перикард), внутриплевральное (в плевру), внутрипростатное (в предстательную железу), внутрилегочное (в легкие или их бронхи), внутрисинусное (в носовые или окологлазничные синусы), интраспинальное (в позвоночный столб), интрасиновиальное (в синовиальную полость сустава), внутрисухожильное (в сухожилие), интратестикулярное (в яичко), интратекальное (в цереброспинальную жидкость на любом уровне цереброспинальной оси), интраторакальное (в грудную клетку), внутритрубчатое (в трубки органа), внутриопухолевое (в опухоль), интратимпанальныоей (в среднее ухо), внутрисосудистое (в сосуд или сосуды), внутрижелудочковое (в желудочек), ионтофорез (посредством электрического тока, где ионы растворимых солей мигрируют в ткани организма), орошение (чтобы обмывать или промывать открытые раны или полости тела), ларингеальное (непосредственно в гортань), назогастральное (через нос и в желудок), способ с окклюзионной повязкой (топический путь введения, который затем покрывают повязкой, которая закрывает область), офтальмическое (на внешнюю часть глаза), орофарингеальное (непосредственно в рот и глотку), парентеральное, чрескожное, околосуставное, перидуральное, периневральное, периодонтальное, ректальное, дыхательное (в дыхательные пути посредством вдыхания перорально или назально для локальных или системных эффектов), ретробульбарное (позади варолиева моста или позади глазного яблока), в мягкую ткань, субарахноидальное, субконъюктивальное, подслизистое, топическое, трансплацентарное (через или сквозь плаценту), транстрахеальное (через стенку трахеи), транстимпаническое (сквозь или через барабанную полость), мочеточниковое (в мочеточник), уретральное (в уретру), вагинальное, каудальная блокада, диагностическое, блокада нервов, билиарная перфузия, кардиальная перфузия, фотофорез или спинальное.

[00499] В конкретных вариантах осуществления композиции вектора, например, AAV вектора, который содержит последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую молекулы миРНК по настоящему изобретению, можно вводить таким путем, который облегчает проникновение векторов или молекулы миРНК в центральную нервную систему и проникновение в средние шипиковые и/или кортикальные нейроны и/или астроциты.

[00500] В некоторых вариантах осуществления вектор, например, AAV вектор, который содержит последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую молекулы миРНК по настоящему изобретению, можно вводить посредством внутримышечной инъекции.

[00501] В одном из вариантов осуществления вектор, например, AAV вектор, который содержит последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую молекулы миРНК по настоящему изобретению, можно вводить через интрапаренхимальную инъекцию.

[00502] В одном из вариантов осуществления вектор, например, AAV вектор, который содержит последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую молекулы миРНК по настоящему изобретению, можно вводить через интрапаренхимальную инъекцию и интратекальную инъекцию.

[00503] В одном из вариантов осуществления вектор, например, AAV вектор, который содержит последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую молекулы миРНК по настоящему изобретению, можно вводить через интрастриарную инъекцию.

[00504] В одном из вариантов осуществления вектор, например, AAV вектор, который содержит последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую молекулы миРНК по настоящему изобретению, можно вводить через интрастриарную инъекцию и другой путь введения, описанный в настоящем документе.

[00505] В некоторых вариантах осуществления AAV векторы, которые экспрессируют миРНК-дуплексы по настоящему изобретению, можно вводить индивиду посредством периферических инъекций (например, внутривенных) и/или интраназальной доставки. В данной области раскрыто, что периферическое введение AAV векторов для дуплексов миРНК можно транспортировать в центральную нервную систему, например, в нейроны (например, публикации патентов США №№ 20100240739; и 20100130594; содержание каждой из которы включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме).

[00506] В других вариантах осуществления композиции, содержащие по меньшей мере один вектор, например, AAV вектор, который содержит последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую молекулы миРНК по настоящему изобретению, можно вводить индивиду посредством внутричерепной доставки (см., например, патент США № 8119611; содержание которого включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме).

[00507] Вектор, например, AAV вектор, который содержит последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую молекулы миРНК по настоящему изобретению, можно вводить в любой подходящей форме, в виде жидкого раствора или суспензии, в твердой форме, подходящей для жидкого раствора или суспензии в жидком растворе. МиРНК-дуплексы можно формулировать с любым подходящим и фармацевтически приемлемым эксципиентом.

[00508] Вектор, например, AAV вектор, который содержит последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую молекулы миРНК по настоящему изобретению, можно вводить в «терапевтически эффективном» количестве, то есть, количестве, которого достаточно для облегчения и/или предотвращения по меньшей мере одного симптома, связанного с заболеванием, или обеспечения улучшения состояния индивида.

[00509] В одном из вариантов осуществления вектор, например, AAV вектор, можно вводить в CNS в терапевтически эффективном количестве для того, чтобы усовершенствовать функцию и/или выживаемость у индивида с хореей Гентингтона (HD). В качестве неограничивающего примера, вектор можно вводить посредством прямой инфузии в полосатое тело.

[00510] В одном из вариантов осуществления вектор, например, AAV вектор, можно вводить индивиду (например, в CNS индивида через интратекальное введение) в терапевтически эффективном количестве для дуплексов миРНК или дцРНК, чтобы направленно воздействовать на средние шипиковые нейроны, кортикальные нейроны и/или астроциты. В качестве неограничивающего примера, миРНК-дуплексы или дцРНК могут снижать экспрессию белка HTT или мРНК. В качестве другого неограничивающего примера, миРНК-дуплексы или дцРНК могут супрессировать HTT и снижать опосредованную HTT токсичность. Снижение белка и/или мРНК HTT, а также опосредованной HTT токсичности можно выполнять почти без усиленного воспаления.

[00511] В одном из вариантов осуществления вектор, например, AAV вектор, можно вводить индивиду (например, в CNS индивида) в терапевтически эффективном количестве, чтобы замедлять функциональное ухудшение у индивида (например, определяемое с использованием известного способа оценки, такого как Unified Huntington's Disease Ratings Scale (UHDRS)). В качестве неограничивающего примера, вектор можно вводить через интрапаренхимальную инъекцию.

[00512] В одном из вариантов осуществления вектор, например, AAV вектор, можно вводить в cisterna magna в терапевтически эффективном количестве, для того, чтобы трансдуцировать средние шипиковые нейроны, кортикальные нейроны и/или астроциты. В качестве неограничивающего примера, вектор можно вводить интратекально.

[00513] В одном из вариантов осуществления вектор, например, AAV вектор, можно вводить с использованием интратекальной инфузии в терапевтически эффективном количестве для того, чтобы трансдуцировать средние шипиковые нейроны, кортикальные нейроны и/или астроциты. В качестве неограничивающего примера, вектор можно вводить интратекально.

[00514] В одном из вариантов осуществления вектор, например, AAV вектор, можно вводить в cisterna magna в терапевтически эффективном количестве для того, чтобы трансдуцировать средние шипиковые нейроны, кортикальные нейроны и/или астроциты. В качестве неограничивающего примера, вектор можно вводить посредством интрапаренхимальной инъекции.

[00515] В одном из вариантов осуществления можно формулировать вектор, например, AAV вектор, который содержит модулирующий полинуклеотид. В качестве неограничивающего примера баричность и/или осмоляльность состава можно оптимизировать, чтобы обеспечивать оптимальное распределение лекарственного средства в центральной нервной системе или области или компоненте центральной нервной системы.

[00516] В одном из вариантов осуществления вектор, например, AAV вектор, который содержит модулирующий полинуклеотид, можно доставлять индивиду через один путь введения.

[00517] В одном из вариантов осуществления вектор, например, AAV вектор, который содержит модулирующий полинуклеотид, можно доставлять индивиду через путь введения в нескольких местах. Индивиду можно вводить вектор, например, AAV вектор, который содержит модулирующий полинуклеотид, в 2, 3, 4, 5 или больше чем 5 местах.

[00518] В одном из вариантов осуществления индивиду можно вводить вектор, например, AAV вектор, который содержит модулирующий полинуклеотид, описанный в настоящем документе, с использованием болюсной инъекции.

[00519] В одном из вариантов осуществления индивиду можно вводить вектор, например, AAV вектор, который содержит модулирующий полинуклеотид, описанный в настоящем документе, с использованием длительной доставки в течение периода в минуты, часы или сутки. Скорость инфузии можно изменять в зависимости от индивида, распределения, состава или другого параметра доставки.

[00520] В одном из вариантов осуществления вектор, например, AAV вектор, описанный в настоящем документе, вводят через инфузию в скорлупу и хвост. В качестве неограничивающего примера, двойная инфузия обеспечивает обширное стриарное распределение, а также распределение в лобной и височной коре.

[00521] В одном из вариантов осуществления вектор, например, AAV вектор, представляет собой AAV-DJ8, который вводят через унилатеральную инфузию в скорлупу. В качестве неограничивающего примера, распределение вводимого AAV-DJ8 схоже с распределением AAV1, доставляемого через унилатеральную инфузию в скорлупу.

[00522] В одном из вариантов осуществления вектор, например, AAV вектор, описанный в настоящем документе, вводят через интратекальную (IT) инфузию в C1. Инфузия может происходить в течение 1, 2, 3, 4, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 или больше чем 15 часов.

[00523] В одном из вариантов осуществления выбор субъектов для введения вектора, например, AAV вектора, описанного в настоящем документе, и/или эффективность дозы, пути введения и/или объема введения можно оценивать с использованием визуализации периваскулярных пространств (PVS), которые также известны как пространства Вирхова-Робена. PVS окружают артериолы и венулы, как они пронизывают паренхиму головного мозга, и заполнены цереброспинальной жидкостью (CSF)/интерстициальной жидкостью. PVS являются обычными в среднем мозге, базальных ганглиях и centrum semiovale. Без ограничения теорией, PVS могут играть роль в нормальном клиренсе метаболитов и связаны с ухудшением когнитивности и несколькими состояниями заболеваний, включая болезнь Паркинсона. PVS обычно имеют нормальный размер, но они могут увеличиваться в размере при многих состояниях заболеваний. Potter et al. (Cerebrovasc Dis. 2015 Jan; 39(4): 224-231; содержание которого включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме) разработали способ градации, где они исследовали полный спектр PVS и оценивали PVS базальных ганглиев, centrum semiovale и среднего мозга. Они использовали частоту и спектр PVS, используемые у Mac and Lullich et al. (J Neurol Neurosurg Psychiatry. 2004 Nov;75(11):1519-23; содержание которого включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме), и Potter et al. присваивали 5 градаций для PVS базальных ганглиев и centrum semiovale: 0 (нет), 1 (1-10), 2 (11-20), 3 (21-40) и 4 (>40) и 2 градации для PVS среднего мозга: 0 (не видны) или 1 (видны). Пользовательское руководство по системе градации Potter et al. можно найти по адресу: www.sbirc.ed.ac.uk/documents/epvs-rating-scale-user-guide.pdf.

Дозирование

[00524] Фармацевтические композиции по настоящему изобретению можно вводить индивиду с использованием любого количества, эффективного для снижения, предотвращения и/или лечения HTT-ассоциированного нарушения (например, хореи Гентингтона (HD)). Точное требуемое количество будет варьировать от индивида к индивиду, в зависимости от биологического вида, возраста и общего состояния индивида, тяжести заболевания, конкретной композиции, способа ее введения, вида ее активности и т. п.

[00525] Композиции по настоящему изобретению обычно формулируют в стандартной дозированной форме для упрощения введения и однородности дозы. Однако следует понимать, что решение о полном суточном использовании композиций по настоящему изобретению может принимать лечащий врач в объеме здравого медицинского суждения. Конкретная терапевтическая эффективность для любого конкретного пациента зависит от различных факторов, включая нарушение, подлежащее лечению, и тяжесть нарушения; активность конкретного используемого соединения; конкретную используемую композицию; возраст, массу тела, общее состояние здоровья, пол и диету пациента; время введения, путь введения и скорость экскреции используемых дуплексов миРНК; длительность лечения; лекарственные средства, используемые в комбинации или совместно с конкретным используемым соединением; и схожие факторы, хорошо известные в области медицины.

[00526] В одном из вариантов осуществления возраст и пол индивида можно использовать для того, чтобы определять дозу композиций по настоящему изобретению. В качестве неограничивающего примера, субъект, который старше, может принимать более высокую дозу (например, больше на 5-10%, 10-20%, 15-30%, 20-50%, 25-50% или по меньшей мере на 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% или больше чем 90%) композиции по сравнению с более молодым субъектом. В качестве другого неограничивающего примера, субъект, который является более молодым, может принимать более высокую (например, больше на 5-10%, 10-20%, 15-30%, 20-50%, 25-50% или по меньшей мере на 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% или больше чем 90%) композиции по сравнению с более старшим субъектом. В качестве еще одного другого неограничивающего примера, субъект женского пола может принимать более высокую дозу (например, больше на 5-10%, 10-20%, 15-30%, 20-50%, 25-50% или по меньшей мере на 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% или больше чем 90%) композиции по сравнению с субъектом мужского пола. В качестве еще одного другого неограничивающего примера, субъект мужского пола может принимать более высокую дозу (например, больше на 5-10%, 10-20%, 15-30%,20-50%, 25-50% или по меньшей мере на 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% или больше чем 90%) композиции по сравнению с субъектом женского пола

[00527] В некоторых конкретных вариантах осуществления дозы AAV векторов для доставки дуплексов миРНК по настоящему изобретению можно адаптировать в зависимости от патологического состояния, индивида и стратегии лечения.

[00528] В одном из вариантов осуществления доставка композиций в соответствии с настоящим изобретением в клетки включает скорость доставки, определяемую с помощью [VG/час=мл/час * VG/мл], где VG представляет собой вирусные геномы, VG/мл представляет собой концентрацию композиции и мл/час представляет собой скорость пролонгированной доставки.

[00529] В одном из вариантов осуществления доставка композиций в соответствии с настоящим изобретением в клетки может включать общую концентрацию на субъект между приблизительно 1×10⁶ VG и приблизительно 1×10¹⁶ VG. В некоторых вариантах осуществления доставка может включать концентрацию композиции приблизительно 1×10⁶, 2×10⁶, 3×10⁶, 4×10⁶, 5×10⁶, 6×10⁶, 7×10⁶, 8×10⁶, 9×10⁶, 1×10⁷, 2×10⁷, 3×10⁷, 4×10⁷, 5×10⁷, 6×10⁷, 7×10⁷, 8×10⁷, 9×10⁷, 1×10⁸, 2×10⁸, 3×10⁸, 4×10⁸, 5×10⁸, 6×10⁸, 7×10⁸, 8×10⁸, 9×10⁸, 1×10⁹, 2×10⁹, 3×10⁹, 4×10⁹, 5×10⁹, 6×10⁹, 7×10⁹, 8×10⁹, 9×10⁹, 1×10¹⁰, 2×10¹⁰, 3×10¹⁰, 4×10¹⁰, 5×10¹⁰, 6×10¹⁰, 7×10¹⁰, 8×10¹⁰, 9×10¹⁰, 1×10¹¹, 1,1×10¹¹, 1,2×10¹¹, 1,3×10¹¹, 1,4×10¹¹, 1,5×10¹¹, 1,6×10¹¹, 1,7×10¹¹, 1,8×10¹¹, 1,9×10¹¹, 2×10¹¹, 2,1×10¹¹, 2,2×10¹¹, 2,3×10¹¹, 2,4×10¹¹, 2,5×10¹¹, 2,6×10¹¹, 2,7×10¹¹, 2,8×10¹¹, 2,9×10¹¹, 3×10¹¹, 4×10¹¹, 5×10¹¹, 6×10¹¹, 7×10¹¹, 7,1×10¹¹, 7,2×10¹¹, 7,3×10¹¹, 7,4×10¹¹, 7,5×10¹¹, 7,6×10¹¹, 7,7×10¹¹, 7,8×10¹¹, 7,9×10¹¹, 8×10¹¹, 9×10¹¹, 1×10¹², 1,1×10¹², 1,2×10¹², 1,3×10¹², 1,4×10¹², 1,5×10¹², 1,6×10¹², 1,7×10¹², 1,8×10¹², 1,9×10¹², 2×10¹², 2,1×10¹², 2,2×10¹², 2,3×10¹², 2,4×10¹², 2,5×10¹², 2,6×10¹², 2,7×10¹², 2,8×10¹², 2,9×10¹², 3×10¹², 3,1×10¹², 3,2×10¹², 3,3×10¹², 3,4×10¹², 3,5×10¹², 3,6×10¹², 3,7×10¹², 3,8×10¹², 3,9×10¹², 4×10¹², 4,1×10¹², 4,2×10¹², 4,3×10¹², 4,4×10¹², 4,5×10¹²,4,6×10¹², 4,7×10¹², 4,8×10¹², 4,9×10¹², 5×10¹², 6×10¹², 6,1×10¹², 6,2×10¹², 6,3×10¹², 6,4×10¹², 6,5×10¹², 6,6×10¹², 6,7×10¹², 6,8×10¹², 6,9×10¹², 7×10¹², 8×10¹², 8,1×10¹², 8,2×10¹², 8,3×10¹², 8,4×10¹², 8,5×10¹², 8,6×10¹², 8,7×10¹², 8,8×10¹², 8,9×10¹², 9×10¹², 1×10¹³, 1,1×10¹³, 1,2×10¹³, 1,3×10¹³, 1,4×10¹³, 1,5×10¹³, 1,6×10¹³, 1,7×10¹³, 1,8×10¹³, 1,9×10¹³, 2×10¹³, 3×10¹³, 4×10¹³, 5×10¹³, 6×10¹³, 6,7×10¹³, 7×10¹³, 8×10¹³, 9×10¹³, 1×10¹⁴, 2×10¹⁴, 3×10¹⁴, 4×10¹⁴, 5×10¹⁴, 6×10¹⁴, 7×10¹⁴, 8×10¹⁴, 9×10¹⁴, 1×10¹⁵, 2×10¹⁵, 3×10¹⁵, 4×10¹⁵, 5×10¹⁵, 6×10¹⁵, 7×10¹⁵, 8×10¹⁵, 9×10¹⁵ или 1×10¹⁶ VG/субъект.

[00530] В одном из вариантов осуществления доставка композиций в соответствии с настоящим изобретением в клетки может включать общую концентрацию на субъект между приблизительно 1×10⁶ VG/кг и приблизительно 1×10¹⁶ VG/кг. В некоторых вариантах осуществления доставка может включать концентрацию композиции приблизительно 1×10⁶, 2×10⁶, 3×10⁶, 4×10⁶, 5×10⁶, 6×10⁶, 7×10⁶, 8×10⁶, 9×10⁶, 1×10⁷, 2×10⁷, 3×10⁷, 4×10⁷, 5×10⁷, 6×10⁷, 7×10⁷, 8×10⁷, 9×10⁷, 1×10⁸, 2×10⁸, 3×10⁸, 4×10⁸, 5×10⁸, 6×10⁸, 7×10⁸, 8×10⁸, 9×10⁸, 1×10⁹, 2×10⁹, 3×10⁹, 4×10⁹, 5×10⁹, 6×10⁹, 7×10⁹, 8×10⁹, 9×10⁹, 1×10¹⁰, 2×10¹⁰, 3×10¹⁰, 4×10¹⁰, 5×10¹⁰, 6×10¹⁰, 7×10¹⁰, 8×10¹⁰, 9×10¹⁰, 1×10¹¹, 1,1×10¹¹, 1,2×10¹¹, 1,3×10¹¹, 1,4×10¹¹, 1,5×10¹¹, 1,6×10¹¹, 1,7×10¹¹, 1,8×10¹¹, 1,9×10¹¹, 2×10¹¹, 2,1×10¹¹, 2,2×10¹¹, 2,3×10¹¹, 2,4×10¹¹, 2,5×10¹¹, 2,6×10¹¹, 2,7×10¹¹, 2,8×10¹¹, 2,9×10¹¹, 3×10¹¹, 4×10¹¹, 5×10¹¹, 6×10¹¹, 7×10¹¹, 7,1×10¹¹, 7,2×10¹¹, 7,3×10¹¹, 7,4×10¹¹, 7,5×10¹¹, 7,6×10¹¹, 7,7×10¹¹, 7,8×10¹¹, 7,9×10¹¹, 8×10¹¹, 9×10¹¹, 1×10¹², 1,1×10¹², 1,2×10¹², 1,3×10¹², 1,4×10¹², 1,5×10¹², 1,6×10¹², 1,7×10¹², 1,8×10¹², 1,9×10¹², 2×10¹², 2,1×10¹², 2,2×10¹², 2,3×10¹², 2,4×10¹², 2,5×10¹², 2,6×10¹², 2,7×10¹², 2,8×10¹², 2,9×10¹², 3×10¹², 3,1×10¹², 3,2×10¹², 3,3×10¹², 3,4×10¹², 3,5×10¹², 3,6×10¹², 3,7×10¹², 3,8×10¹², 3,9×10¹², 4×10¹², 4,1×10¹², 4,2×10¹², 4,3×10¹², 4,4×10¹², 4,5×10¹²,4,6×10¹², 4,7×10¹², 4,8×10¹², 4,9×10¹², 5×10¹², 6×10¹², 6,1×10¹², 6,2×10¹², 6,3×10¹², 6,4×10¹², 6,5×10¹², 6,6×10¹², 6,7×10¹², 6,8×10¹², 6,9×10¹², 7×10¹², 8×10¹², 8,1×10¹², 8,2×10¹², 8,3×10¹², 8,4×10¹², 8,5×10¹², 8,6×10¹², 8,7×10¹², 8,8×10¹², 8,9×10¹², 9×10¹², 1×10¹³, 1,1×10¹³, 1,2×10¹³, 1,3×10¹³, 1,4×10¹³, 1,5×10¹³, 1,6×10¹³, 1,7×10¹³, 1,8×10¹³, 1,9×10¹³, 2×10¹³, 3×10¹³, 4×10¹³, 5×10¹³, 6×10¹³, 6,7×10¹³, 7×10¹³, 8×10¹³, 9×10¹³, 1×10¹⁴, 2×10¹⁴, 3×10¹⁴, 4×10¹⁴, 5×10¹⁴, 6×10¹⁴, 7×10¹⁴, 8×10¹⁴, 9×10¹⁴, 1×10¹⁵, 2×10¹⁵, 3×10¹⁵, 4×10¹⁵, 5×10¹⁵, 6×10¹⁵, 7×10¹⁵, 8×10¹⁵, 9×10¹⁵ или 1×10¹⁶ VG/кг.

[00531] В одном из вариантов осуществления на дозу можно вводить приблизительно от 10⁵ до 10⁶ вирусных геномов (единиц).

[00532] В одном из вариантов осуществления доставка композиций в соответствии с настоящим изобретением в клетки может включать общую концентрацию между приблизительно 1×10⁶ VG/мл и приблизительно 1×10¹⁶ VG/мл. В некоторых вариантах осуществления доставка может включать концентрацию композиции приблизительно 1×10⁶, 2×10⁶, 3×10⁶, 4×10⁶, 5×10⁶, 6×10⁶, 7×10⁶, 8×10⁶, 9×10⁶, 1×10⁷, 2×10⁷, 3×10⁷, 4×10⁷, 5×10⁷, 6×10⁷, 7×10⁷, 8×10⁷, 9×10⁷, 1×10⁸, 2×10⁸, 3×10⁸, 4×10⁸, 5×10⁸, 6×10⁸, 7×10⁸, 8×10⁸, 9×10⁸, 1×10⁹, 2×10⁹, 3×10⁹, 4×10⁹, 5×10⁹, 6×10⁹, 7×10⁹, 8×10⁹, 9×10⁹, 1×10¹⁰, 2×10¹⁰, 3×10¹⁰, 4×10¹⁰, 5×10¹⁰, 6×10¹⁰, 7×10¹⁰, 8×10¹⁰, 9×10¹⁰, 1×10¹¹, 1,1×10¹¹, 1,2×10¹¹, 1,3×10¹¹, 1,4×10¹¹, 1,5×10¹¹, 1,6×10¹¹, 1,7×10¹¹, 1,8×10¹¹, 1,9×10¹¹, 2×10¹¹, 3×10¹¹, 4×10¹¹, 5×10¹¹, 6×10¹¹, 7×10¹¹, 8×10¹¹, 9×10¹¹, 1×10¹², 1,1×10¹², 1,2×10¹², 1,3×10¹², 1,4×10¹², 1,5×10¹², 1,6×10¹², 1,7×10¹², 1,8×10¹², 1,9×10¹², 2×10¹², 2,1×10¹², 2,2×10¹², 2,3×10¹², 2,4×10¹², 2,5×10¹², 2,6×10¹², 2,7×10¹², 2,8×10¹², 2,9×10¹², 3×10¹², 3,1×10¹², 3,2×10¹², 3,3×10¹², 3,4×10¹², 3,5×10¹², 3,6×10¹², 3,7×10¹², 3,8×10¹², 3,9×10¹², 4×10¹², 4,1×10¹², 4,2×10¹², 4,3×10¹², 4,4×10¹², 4,5×10¹², 4,6×10¹², 4,7×10¹², 4,8×10¹², 4,9×10¹², 5×10¹², 6×10¹², 6,1×10¹², 6,2×10¹², 6,3×10¹², 6,4×10¹², 6,5×10¹², 6,6×10¹², 6,7×10¹², 6,8×10¹², 6,9×10¹², 7×10¹², 8×10¹², 9×10¹², 1×10¹³, 1,1×10¹³, 1,2×10¹³, 1,3×10¹³, 1,4×10¹³, 1,5×10¹³, 1,6×10¹³, 1,7×10¹³, 1,8×10¹³, 1,9×10¹³, 2×10¹³, 3×10¹³, 4×10¹³, 5×10¹³, 6×10¹³, 6,7×10¹³, 7×10¹³, 8×10¹³, 9×10¹³, 1×10¹⁴, 2×10¹⁴, 3×10¹⁴, 4×10¹⁴, 5×10¹⁴, 6×10¹⁴, 7×10¹⁴, 8×10¹⁴, 9×10¹⁴, 1×10¹⁵, 2×10¹⁵, 3×10¹⁵, 4×10¹⁵, 5×10¹⁵, 6×10¹⁵, 7×10¹⁵, 8×10¹⁵, 9×10¹⁵ или 1×10¹⁶ VG/мл.

[00533] В определенных вариантах осуществления желаемую дозу миРНК-дуплекса можно доставлять с использованием нескольких введений (например, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 или больше введений). Когда используют несколько введений, можно использовать дробные схемы дозирования, такие как те, которые описаны в настоящем документе. Как используют в настоящем документе, «дробная доза» представляет собой разделение отдельной стандартной дозы или общей суточной дозы на две или больше доз, например, два или больше введений отдельной стандартной дозы. Как используют в настоящем документе, «отдельная стандартная доза» представляет собой дозу любого модулирующего полинуклеотидного терапевтического средства, вводимого в одной дозе/в одно время/через один путь/в одной точке контакта, то есть, в одном событии введения. Как используют в настоящем документе, «общая суточная доза» представляет собой количество, даваемое или предписываемое для 24-часового периода. Его можно вводить в виде отдельной стандартной дозы. В одном из вариантов осуществления вирусные векторы, содержащие модулирующие полинуклеотиды по настоящему изобретению, вводят индивиду дробными дозами. Их можно формулировать только в буфере или в составе, описанном в настоящем документе.

[00534] В одном из вариантов осуществления доза, концентрация и/или объем композиции, описанные в настоящем документе, можно корректировать в зависимости от вклада хвоста или скорлупы в корковое и подкоровое распределение после введения. Введение может представлять собой интрацеребровентрикулярное, внутрь скорлупы, внутриталамическое, интрапаренхимальное, под мягкую мозговую оболочку и/или интратекальное введение.

[00535] В одном из вариантов осуществления дозу, концентрацию и/или объем композиции, описанные в настоящем документе, можно корректировать в зависимости от коркового и нейроаксиального распределения после введения посредством интрацеребровентрикулярной, внутрь скорлупы, внутриталамической, интрапаренхимальной, под мягкую мозговую оболочку и/или интратекальной доставки.

IV. СПОСОБЫ И ИСПОЛЬЗОВАНИЯ ДЛЯ КОМПОЗИЦИЙ ПО ИЗОБРЕТЕНИЮ

Способы лечения хореи Гентингтона

[00536] В настоящем изобретении предусмотрены способы введения векторов, например, AAV векторов, которые содержат последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую молекулы миРНК по настоящему изобретению, в клетки, способ включает введение в указанные клетки любых из векторов в количестве, достаточном для наступления разрушения целевой мРНК HTT, тем самым активируя RNAi конкретной мишени в клетках. В некоторых аспектах, клетки могут представлять собой стволовые клетки, нейроны, такие как средние шипиковые или кортикальные нейроны, мышечные клетки и глиальные клетки, такие как астроциты.

[00537] В настоящем изобретении раскрыты способы лечения хореи Гентингтона (HD), связанной с белком HTT, у индивида, нуждающегося в лечении. Способ необязательно включает введение индивиду терапевтически эффективного количества композиции, содержащей по меньшей мере векторы, например, AAV векторы, которые содержат последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую молекулы миРНК по настоящему изобретению. В качестве неограничивающего примера, молекулы миРНК могут обеспечивать сайленсинг экспрессии гена HTT, ингибировать продуцирование белка HTT и снижать один или несколько симптомов HD у индивида так, что HD лечат терапевтически.

[00538] В некоторых вариантах осуществления композицию, содержащую векторы, например, AAV векторы, которые содержат последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую молекулы миРНК по настоящему изобретению, вводят в центральную нервную систему индивида. В других вариантах осуществления композицию, содержащую векторы, например, AAV векторы, которые содержат последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую молекулы миРНК по настоящему изобретению, вводят в ткань индивида (например, головной мозг индивида).

[00539] В одном из вариантов осуществления композицию, содержащую векторы, например, AAV векторы, которые содержат последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую молекулы миРНК по настоящему изобретению, вводят в центральную нервную систему индивида через интрапаренхимальную инъекцию.

[00540] В одном из вариантов осуществления композицию, содержащую векторы, например, AAV векторы, которые содержат последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую молекулы миРНК по настоящему изобретению, вводят в центральную нервную систему индивида через интрапаренхимальную инъекцию и интратекальную инъекцию.

[00541] В одном из вариантов осуществления композицию, содержащую векторы, например, AAV векторы, которые содержат последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую молекулы миРНК по настоящему изобретению, вводят в центральную нервную систему индивида через интрапаренхимальную инъекцию и интрацеребровентрикулярную инъекцию.

[00542] В одном из вариантов осуществления векторы, например, AAV векторы, которые содержат последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую молекулы миРНК по настоящему изобретению, можно доставлять в целевые клетки конкретных типов, включая в качестве неограничивающих примеров нейроны, в том числе средние шипиковые или кортикальные нейроны; глиальные клетки, включая олигодендроциты, астроциты и микроглию; и/или другие клетки, окружающие нейроны, такие как T-клетки.

[00543] В одном из вариантов осуществления векторы, например, AAV векторы, которые содержат последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую молекулы миРНК по настоящему изобретению, можно доставлять в нейроны в полосатом теле и/или нейроны коры.

[00544] В некоторых вариантах осуществления векторы, например, AAV векторы, которые содержат последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую молекулы миРНК по настоящему изобретению, можно использовать в качестве терапии для HD.

[00545] В некоторых вариантах осуществления векторы, например, AAV векторы, которые содержат последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую молекулы миРНК по настоящему изобретению, можно использовать для супрессии белка HTT в нейронах и/или астроцитах полосатого тела и/или коры. В качестве неограничивающего примера, супрессия белка HTT происходит в шипиковых нейронах среднего размера полосатого тела и/или нейронах коры.

[00546] В некоторых вариантах осуществления векторы, например, AAV векторы, которые содержат последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую молекулы миРНК по настоящему изобретению, можно использовать для супрессии белка HTT в нейронах и/или астроцитах полосатого тела и/или коры и снижения ассоциированной нейрональной токсичности. Супрессию белка HTT в нейронах и/или астроцитах полосатого тела и/или коры можно, независимо, супрессировать на 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% или больше чем 95%, 5-15%, 5-20%, 5-25%, 5-30%, 5-35%, 5-40%, 5-45%, 5-50%, 5-55%, 5-60%, 5-65%, 5-70%, 5-75%, 5-80%, 5-85%, 5-90%, 5-95%, 10-20%, 10-25%, 10-30%, 10-35%, 10-40%, 10-45%, 10-50%, 10-55%, 10-60%, 10-65%, 10-70%, 10-75%, 10-80%, 10-85%, 10-90%, 10-95%, 15-25%, 15-30%, 15-35%, 15-40%, 15-45%, 15-50%, 15-55%, 15-60%, 15-65%, 15-70%, 15-75%, 15-80%, 15-85%, 15-90%, 15-95%, 20-30%, 20-35%, 20-40%, 20-45%, 20-50%, 20-55%, 20-60%, 20-65%, 20-70%, 20-75%, 20-80%, 20-85%, 20-90%, 20-95%, 25-35%, 25-40%, 25-45%, 25-50%, 25-55%, 25-60%, 25-65%, 25-70%, 25-75%, 25-80%, 25-85%, 25-90%, 25-95%, 30-40%, 30-45%, 30-50%, 30-55%, 30-60%, 30-65%, 30-70%, 30-75%, 30-80%, 30-85%, 30-90%, 30-95%, 35-45%, 35-50%, 35-55%, 35-60%, 35-65%, 35-70%, 35-75%, 35-80%, 35-85%, 35-90%, 35-95%, 40-50%, 40-55%, 40-60%, 40-65%, 40-70%, 40-75%, 40-80%, 40-85%, 40-90%, 40-95%, 45-55%, 45-60%, 45-65%, 45-70%, 45-75%, 45-80%, 45-85%, 45-90%, 45-95%, 50-60%, 50-65%, 50-70%, 50-75%, 50-80%, 50-85%, 50-90%, 50-95%, 55-65%, 55-70%, 55-75%, 55-80%, 55-85%, 55-90%, 55-95%, 60-70%, 60-75%, 60-80%, 60-85%, 60-90%, 60-95%, 65-75%, 65-80%, 65-85%, 65-90%, 65-95%, 70-80%, 70-85%, 70-90%, 70-95%, 75-85%, 75-90%, 75-95%, 80-90%, 80-95% или 90-95%. Снижение ассоциированной нейрональной токсичности может составлять 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% или больше чем 95%, 5-15%, 5-20%, 5-25%, 5-30%, 5-35%, 5-40%, 5-45%, 5-50%, 5-55%, 5-60%, 5-65%, 5-70%, 5-75%, 5-80%, 5-85%, 5-90%, 5-95%, 10-20%, 10-25%, 10-30%, 10-35%, 10-40%, 10-45%, 10-50%, 10-55%, 10-60%, 10-65%, 10-70%, 10-75%, 10-80%, 10-85%, 10-90%, 10-95%, 15-25%, 15-30%, 15-35%, 15-40%, 15-45%, 15-50%, 15-55%, 15-60%, 15-65%, 15-70%, 15-75%, 15-80%, 15-85%, 15-90%, 15-95%, 20-30%, 20-35%, 20-40%, 20-45%, 20-50%, 20-55%, 20-60%, 20-65%, 20-70%, 20-75%, 20-80%, 20-85%, 20-90%, 20-95%, 25-35%, 25-40%, 25-45%, 25-50%, 25-55%, 25-60%, 25-65%, 25-70%, 25-75%, 25-80%, 25-85%, 25-90%, 25-95%, 30-40%, 30-45%, 30-50%, 30-55%, 30-60%, 30-65%, 30-70%, 30-75%, 30-80%, 30-85%, 30-90%, 30-95%, 35-45%, 35-50%, 35-55%, 35-60%, 35-65%, 35-70%, 35-75%, 35-80%, 35-85%, 35-90%, 35-95%, 40-50%, 40-55%, 40-60%, 40-65%, 40-70%, 40-75%, 40-80%, 40-85%, 40-90%, 40-95%, 45-55%, 45-60%, 45-65%, 45-70%, 45-75%, 45-80%, 45-85%, 45-90%, 45-95%, 50-60%, 50-65%, 50-70%, 50-75%, 50-80%, 50-85%, 50-90%, 50-95%, 55-65%, 55-70%, 55-75%, 55-80%, 55-85%, 55-90%, 55-95%, 60-70%, 60-75%, 60-80%, 60-85%, 60-90%, 60-95%, 65-75%, 65-80%, 65-85%, 65-90%, 65-95%, 70-80%, 70-85%, 70-90%, 70-95%, 75-85%, 75-90%, 75-95%, 80-90%, 80-95% или 90-95%.

[00547] В одном из вариантов осуществления векторы, например, AAV векторы, которые содержат последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую молекулы миРНК по настоящему изобретению, можно использовать для того, чтобы снижать когнитивное и/или двигательное ухудшение у индивида с HD, где количество ухудшения определяют посредством стандартной системы оценки, такой как, но не ограничиваясь этим, Unified Huntington's Disease Ratings Scale (UHDRS) и подшкалы, и когнитивного тестирования.

[00548] В одном из вариантов осуществления векторы, например, AAV векторы, которые содержат последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую молекулы миРНК по настоящему изобретению, можно использовать для того, чтобы снижать ухудшение функциональной способности и активностей в повседневной жизни, как измеряют с помощью стандартной системы оценки, такой как, но не ограничиваясь этим, шкала общих функциональных способностей (TFC).

[00549] В некоторых вариантах осуществления данную композицию вводят в качестве единственного терапевтического средства или комбинированных терапевтических средств для лечения HD.

[00550] Векторы, например, AAV векторы, кодирующие миРНК-дуплексы, нацеленные на ген HTT, можно использовать в комбинации с одним или несколькими другими терапевтическими средствами. Под «в комбинации с» не подразумевают, что средства следует вводить одновременно и/или формулировать для доставки вместе, несмотря на то, что эти способы доставки входят в объем настоящего раскрытия. Композиции можно вводить одновременно с, до или после одного или нескольких других желаемых терапевтических средств или медицинских процедур. В целом, каждое средство вводят в дозе и/или по временной схеме, которые определены для этого средства.

[00551] Терапевтические средства, которые можно использовать в комбинации с векторами, например, AAV векторами, кодирующими последовательность нуклеиновой кислоты для молекул миРНК по настоящему изобретению, могут представлять собой низкомолекулярные соединения, которые представляют собой антиоксиданты, противовоспалительные средства, антиапоптотические средства, регуляторы кальция, антиглутаматергические средства, ингибиторы структурных белков, соединения, вовлеченные в функцию мышц, и соединения, вовлеченные в регуляцию ионов металлов.

[00552] Соединения, тестируемые для лечения HD, которые можно использовать в комбинации с векторами, описанными в настоящем документе, включают, но не ограничиваясь этим, истощающие дофамин средства (например, тетрабеназин для хореи), бензодиазепины (например, клоназепам для миоклонии, хореи, дистонии, ригидности и/или спастичности), антиконвульсанты (например, вальпроат натрия и леветирацетам для миоклонии), аминокислотные предшественники дофамина (например, леводопа для ригидность, которая, в частности, ассоциирована с ювенильной HD или паркинсоновским фенотипом с началом в молодом взрослом возрасте), релаксанты скелетных мышц (например, баклофен, тизанидин для ригидности и/или спастичности), ингибиторы высвобождения ацетилхолина в нервно-мышечном синапсе, чтобы вызывать паралич мышц (например, токсин ботулизма для бруксизма и/или дистонии), атипичные нейролептики (например, оланзапин и кветиапин для психоза и/или раздражительности, рисперидон, сульпирид и галоперидол для психоза, хореи и/или раздражительности, клозапин для психоза, устойчивого к лечению, арипипразол для психоза со значимыми негативными симптомами), средства для увеличения АТФ/клеточной энергетики (например, креатин), избирательные ингибиторы обратного захвата серотонина (SSRI) (например, циталопрам, флуоксетин, пароксетин, сертралин, миртазапин, венлафаксин для депрессии, беспокойства, обсессивно-компульсивного поведения и/или раздражительности), снотворные средства (например, зопиклон и/или золпидем для измененного цикла сна-бодрствования), антиконвульсанты (например, вальпроат натрия и карбамазепин для мании или гипомании) и стабилизаторы настроения (например, литий для мании или гипомании).

[00553] Нейротрофические факторы можно использовать в комбинированной терапии с векторами, например, AAV векторами, кодирующими последовательность нуклеиновой кислоты для молекул миРНК по настоящему изобретению, для лечения HD. В целом, нейротрофический фактор определяют как вещество, которое способствует выживаемости, росту, дифференцировке, пролиферации и/или созреванию нейрона или стимулирует увеличенную активность нейрона. В некоторых вариантах осуществления данные способы дополнительно включают доставку одного или нескольких трофических факторов индивиду, нуждающемуся в лечении. Трофические факторы могут включать, но не ограничиваясь этим, IGF-I, GDNF, BDNF, CTNF, VEGF, коливелин, ксалипроден, рилизинг-гормон тиреотрофина и ADNF, а также их варианты.

[00554] В одном из аспектов, вектор, например, AAV вектор, кодирующий последовательность нуклеиновой кислоты для по меньшей мере одного миРНК-дуплекса, направленного на ген HTT, можно совместно вводить с AAV векторами, экспрессирующими нейротрофические факторы, такими как AAV-IGF-I (см., например, Vincent et al., Neuromolecular medicine, 2004, 6, 79-85; содержание которого включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме) и AAV-GDNF (см., например, Wang et al., J Neurosci., 2002, 22, 6920-6928; содержание которого включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме).

[00555] В некоторых вариантах осуществления композиции по настоящему изобретению для лечения HD вводят нуждающемуся индивиду внутривенно, внутримышечно, подкожно, интраперитонеально, интрапаренхимально, под мягкую мозговую оболочку, интратекально и/или внутрь желудочков, что позволяет молекулам миРНК или векторам, содержащим молекулы миРНК, проходить через гематоэнцефалический барьер в головном и/или спинном мозге, или непосредственно осуществляют доступ к головному мозгу и/или спинному мозгу. В некоторых аспектах способ включает введение (например, интрапаренхимальное введение, введение под мягкую мозговую оболочку, внутрижелудочковое введение и/или интратекальное введение) непосредственно в центральную нервную систему (CNS) индивида (например, с использованием инфузионного насоса и/или каркаса для доставки) терапевтически эффективного количества композиции, содержащей векторы, например, AAV векторы, кодирующие последовательность нуклеиновой кислоты для молекул миРНК по настоящему изобретению. Векторы можно использовать для сайленсинга или супрессии экспрессии гена HTT и/или снижения одного или нескольких симптомов HD у индивида так, что HD лечат терапевтически.

[00556] В некоторых вариантах осуществления композицию по настоящему изобретению для лечения HD вводят нуждающемуся субъект посредством интрапаренхимального введения.

[00557] В определенных аспектах, симптомы HD включают поведенческие затруднения и симптомы, такие как, но не ограничиваясь этим, апатия или отсутствие инициативы, дисфория, раздражительность, возбуждение или беспокойство, плохой уход за собой, неверные суждения, негибкость, расторможенность, депрессия, суицидальные настроения, эйфория, агрессия, бредовые идеи, компульсии, гиперсексуальность, галлюцинации, нарушения речи, невнятная речь, затруднения при глотании, потеря массы, нарушение когнитивных функций, которое ослабляет управляющие функции (например, организацию, планирование, проверку или адаптацию альтернатив и задержки в приобретении новых двигательных навыков), неустойчивая походка и непреднамеренные движения (хорея). В других аспектах, композицию по настоящему изобретению применяют к одному или обоим из головного мозга и спинного мозга. В одном из вариантов осуществления выживаемость индивида пролонгируют посредством лечения любых симптомов HD, описанных в настоящем документе.

[00558] В одном из вариантов осуществления введение векторов, например, AAV векторов, кодирующих миРНК по изобретению, индивиду, может снижать HTT (например, мутантный HTT и/или HTT дикого типа) у индивида. В одном из вариантов осуществления введение векторов, например, AAV векторов, индивиду, может снижать HTT дикого типа у индивида. В одном из вариантов осуществления введение векторов, например, AAV векторов, индивиду, может снижать мутантный HTT у индивида. В еще одном другом варианте осуществления, введение векторов, например, AAV векторов, индивиду, может снижать и мутантный HTT и HTT дикого типа у индивида. Мутантный HTT и/или HTT дикого типа можно снижать приблизительно на 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 95% и 100% или по меньшей мере на 20-30%, 20-40%, 20-50%, 20-60%, 20-70%, 20-80%, 20-90%, 20-95%, 20-100%, 30-40%, 30-50%, 30-60%, 30-70%, 30-80%, 30-90%, 30-95%, 30-100%, 40-50%, 40-60%, 40-70%, 40-80%, 40-90%, 40-95%, 40-100%, 50-60%, 50-70%, 50-80%, 50-90%, 50-95%, 50-100%, 60-70%, 60-80%, 60-90%, 60-95%, 60-100%, 70-80%, 70-90%, 70-95%, 70-100%, 80-90%, 80-95%, 80-100%, 90-95%, 90-100% или 95-100% у индивида, например, но не ограничиваясь этим, в CNS, области CNS или конкретной клетке CNS индивида. В качестве неограничивающего примера, векторы, например, AAV векторы, могут снижать экспрессию HTT по меньшей мере на 50% в шипиковых нейронах среднего размера. В качестве неограничивающего примера, векторы, например, AAV векторы, могут снижать экспрессию HTT по меньшей мере на 40% в шипиковых нейронах среднего размера. В качестве неограничивающего примера, векторы, например, AAV векторы, могут снижать экспрессию HTT по меньшей мере на 40% в шипиковых нейронах среднего размера скорлупы. В качестве неограничивающего примера, векторы, например, AAV векторы, могут снижать экспрессию HTT по меньшей мере на 30% в шипиковых нейронах среднего размера скорлупы. В качестве неограничивающего примера, векторы, например, AAV векторы, могут снижать экспрессию HTT по меньшей мере на 30% в скорлупе. В качестве еще одного другого неограничивающего примера, векторы, например, AAV векторы, могут снижать экспрессию HTT в скорлупе и коре по меньшей мере на 40%. В качестве еще одного другого неограничивающего примера, векторы, например, AAV векторы, могут снижать экспрессию HTT в скорлупе и коре по меньшей мере на 30%. В качестве еще одного другого неограничивающего примера, векторы, например, AAV векторы, могут снижать экспрессию HTT в скорлупе по меньшей мере на 30% и в коре по меньшей мере на 15%.

[00559] В одном из вариантов осуществления введеник векторов, например, AAV векторов, индивиду снижает экспрессию HTT у индивида, и снижение экспрессии HTT снижает эффекты HD у индивида.

[00560] В одном из вариантов осуществления векторы, например, AAV векторы, можно вводить индивиду, который прошел оценку биологических маркеров. Потенциальные биологические маркеры в крови для предманифестации и раннего прогрессирования HD включают, но не ограничиваясь этим, маркер окислительного стресса 8-OHdG, метаболические маркеры (например, креатинкиназа, аминокислоты с разветвленной цепью), метаболиты холестерина (например, 24-OH холестерин), иммунные и воспалительные белки (например, кластерин, компоненты комплемента, интерлейкины 6 и 8), измерения экспрессии гена (например, транскриптомные маркеры), эндокринные маркеры (например, кортизол, грелин и лептин), BDNF, аденозиновые 2A рецепторы. Потенциальные биологические маркеры головного мозга для визуализации предманифестации и раннего прогрессирования HD включают, но не ограничиваясь этим, стриарный объем, объем подкорового белого вещества, толщину коры, объемы всего головного мозга и желудочков, функциональную визуализацию (например, функциональный MRI), PET (например, с фтордезоксиглюкозой) и магнитно-резонансную спектроскопию (например, лактат). Потенциальные биологические маркеры для количественных клиническиз инструментов для предманифестации и раннего прогрессирования HD включают, но не ограничиваясь этим, количественные двигательные оценки, двигательные физиологические оценки (например, транскраниальная магнитная стимуляция), и количественные измерения движений глаз. Неограничивающие примеры количественной клинической оценки биологических маркеров включают вариабельность усилия языка, отстукивание по метроному, усилие хватания, оценки движений глаз и когнитивные тесты. Неограничивающие примеры многоцентровых наблюдательных исследований включают PREDICT-HD и TRACK-HD. Субъект может иметь симптомы HD, диагноз HD или может не иметь симптомов HD.

[00561] В одном из вариантов осуществления векторы, например, AAV векторы, можно вводить индивиду, который прошел оценку биологических маркеров с использованием нейровизуализации. Субъект может иметь симптомы HD, диагноз HD или может не иметь симптомов HD.

[00562] В одном из вариантов осуществления векторы, например, AAV векторы, можно вводить индивиду, который не имеет симптомов HD. Субъект может не иметь симптомов, но мог проходить предсказательное генетическое тестирование или оценку биологических маркеров для того, чтобы определять, имеет ли место риск HD, и/или субъект может иметь члена семьи (например, мать, отца, брата, сестру, тетю, дядю, бабушку, дедушку), у которого диагностировали HD.

[00563] В одном из вариантов осуществления векторы, например, AAV векторы, можно вводить индивиду, который находится на ранних стадиях HD. На ранней стадии субъект имеет трудно уловимые изменения координации, некоторые непреднамеренные движения (хорея), изменения настроения, такие как раздражительность и депрессия, затруднения с решением проблем, снижение способности человека функционировать в своей нормальной каждодневной жизни.

[00564] В одном из вариантов осуществления векторы, например, AAV векторы, можно вводить индивиду, который находится на средних стадиях HD. На средней стадии субъект имеет увеличение нарушения движений, ослабленную речь, затруднения при глотании, а обычные активности становтся труднее осуществлять. На этой стадии субъект может иметь врача-трудотерапевта и физиотерапевта, чтобы помогать поддерживать контроль производьных движений, и субъект может иметь логопеда.

[00565] В одном из вариантов осуществления векторы, например, AAV векторы, можно вводить индивиду, который находится на поздних стадиях HD. На поздней стадии, субъект с HD почти полностью или полностью зависит от других в отношении ухода, поскольку субъект более не может ходить и не способен говорить. Субъект в целом все еще может понимать речь и быть осведомленным о семье и друзьях, но удушье является основной проблемой.

[00566] В одном из вариантов осуществления векторы, например, AAV векторы, можно использовать для того, чтобы лечить индивида, который имеет ювенильную форму HD, которая является началом HD в возрасте до 20 лет и уже в 2 года.

[00567] В одном из вариантов осуществления векторы, например, AAV векторы, можно использовать для того, чтобы лечить индивида с HD, которая имеет полностью пенетрантную HD, где ген HTT имеет 41 или больше повторов CAG (например, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90 или больше чем 90 повторов CAG).

[00568] В одном из вариантов осуществления векторы, например, AAV векторы, можно использовать для того, чтобы лечить индивида с HD, которая имеет неполную пенетрантность, где ген HTT имеет между 36 и 40 повторами CAG (например, 36, 37, 38, 39 и 40 повторов CAG).

[00569] В одном из вариантов осуществления векторы, например, AAV векторы, можно использовать для снижения белка HTT у индивида. Снижение может независимо составлять 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% или больше чем 95%, 5-15%, 5-20%, 5-25%, 5-30%, 5-35%, 5-40%, 5-45%, 5-50%, 5-55%, 5-60%, 5-65%, 5-70%, 5-75%, 5-80%, 5-85%, 5-90%, 5-95%, 10-20%, 10-25%, 10-30%, 10-35%, 10-40%, 10-45%, 10-50%, 10-55%, 10-60%, 10-65%, 10-70%, 10-75%, 10-80%, 10-85%, 10-90%, 10-95%, 15-25%, 15-30%, 15-35%, 15-40%, 15-45%, 15-50%, 15-55%, 15-60%, 15-65%, 15-70%, 15-75%, 15-80%, 15-85%, 15-90%, 15-95%, 20-30%, 20-35%, 20-40%, 20-45%, 20-50%, 20-55%, 20-60%, 20-65%, 20-70%, 20-75%, 20-80%, 20-85%, 20-90%, 20-95%, 25-35%, 25-40%, 25-45%, 25-50%, 25-55%, 25-60%, 25-65%, 25-70%, 25-75%, 25-80%, 25-85%, 25-90%, 25-95%, 30-40%, 30-45%, 30-50%, 30-55%, 30-60%, 30-65%, 30-70%, 30-75%, 30-80%, 30-85%, 30-90%, 30-95%, 35-45%, 35-50%, 35-55%, 35-60%, 35-65%, 35-70%, 35-75%, 35-80%, 35-85%, 35-90%, 35-95%, 40-50%, 40-55%, 40-60%, 40-65%, 40-70%, 40-75%, 40-80%, 40-85%, 40-90%, 40-95%, 45-55%, 45-60%, 45-65%, 45-70%, 45-75%, 45-80%, 45-85%, 45-90%, 45-95%, 50-60%, 50-65%, 50-70%, 50-75%, 50-80%, 50-85%, 50-90%, 50-95%, 55-65%, 55-70%, 55-75%, 55-80%, 55-85%, 55-90%, 55-95%, 60-70%, 60-75%, 60-80%, 60-85%, 60-90%, 60-95%, 65-75%, 65-80%, 65-85%, 65-90%, 65-95%, 70-80%, 70-85%, 70-90%, 70-95%, 75-85%, 75-90%, 75-95%, 80-90%, 80-95% или 90-95%. В качестве неограничивающего примера, субъект может иметь 50% снижение белка HTT. В качестве неограничивающего примера, субъект может иметь снижение 70% белка HTT и снижение 10% белка HTT дикого типа. В качестве неограничивающего примера, снижение HTT в шипиковых нейронах среднего размера скорлупы может составлять приблизительно 40%. В качестве неограничивающего примера, снижение HTT в скорлупе и коре может составлять приблизительно 40%. В качестве неограничивающего примера, снижение HTT в скорлупе может составлять приблизительно 30% и в коре может составлять приблизительно 15%. В качестве неограничивающего примера, снижение HTT в скорлупе и коре может составлять приблизительно 40%. В качестве неограничивающего примера, снижение HTT в шипиковых нейронах среднего размера скорлупы может составлять 40-70%. В качестве неограничивающего примера, снижение HTT в скорлупе и коре может составлять 40-70%.

[00570] В одном из вариантов осуществления векторы, например, AAV векторы, можно использовать для снижения белка HTT дикого типа у индивида. Снижение может независимо составлять 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% или больше чем 95%, 5-15%, 5-20%, 5-25%, 5-30%, 5-35%, 5-40%, 5-45%, 5-50%, 5-55%, 5-60%, 5-65%, 5-70%, 5-75%, 5-80%, 5-85%, 5-90%, 5-95%, 10-20%, 10-25%, 10-30%, 10-35%, 10-40%, 10-45%, 10-50%, 10-55%, 10-60%, 10-65%, 10-70%, 10-75%, 10-80%, 10-85%, 10-90%, 10-95%, 15-25%, 15-30%, 15-35%, 15-40%, 15-45%, 15-50%, 15-55%, 15-60%, 15-65%, 15-70%, 15-75%, 15-80%, 15-85%, 15-90%, 15-95%, 20-30%, 20-35%, 20-40%, 20-45%, 20-50%, 20-55%, 20-60%, 20-65%, 20-70%, 20-75%, 20-80%, 20-85%, 20-90%, 20-95%, 25-35%, 25-40%, 25-45%, 25-50%, 25-55%, 25-60%, 25-65%, 25-70%, 25-75%, 25-80%, 25-85%, 25-90%, 25-95%, 30-40%, 30-45%, 30-50%, 30-55%, 30-60%, 30-65%, 30-70%, 30-75%, 30-80%, 30-85%, 30-90%, 30-95%, 35-45%, 35-50%, 35-55%, 35-60%, 35-65%, 35-70%, 35-75%, 35-80%, 35-85%, 35-90%, 35-95%, 40-50%, 40-55%, 40-60%, 40-65%, 40-70%, 40-75%, 40-80%, 40-85%, 40-90%, 40-95%, 45-55%, 45-60%, 45-65%, 45-70%, 45-75%, 45-80%, 45-85%, 45-90%, 45-95%, 50-60%, 50-65%, 50-70%, 50-75%, 50-80%, 50-85%, 50-90%, 50-95%, 55-65%, 55-70%, 55-75%, 55-80%, 55-85%, 55-90%, 55-95%, 60-70%, 60-75%, 60-80%, 60-85%, 60-90%, 60-95%, 65-75%, 65-80%, 65-85%, 65-90%, 65-95%, 70-80%, 70-85%, 70-90%, 70-95%, 75-85%, 75-90%, 75-95%, 80-90%, 80-95% или 90-95%. В качестве неограничивающего примера, субъект может иметь 50% снижение белка HTT дикого типа. В качестве неограничивающего примера, снижение HTT дикого типа в шипиковых нейронах среднего размера скорлупы может составлять приблизительно 40%. В качестве неограничивающего примера, снижение HTT дикого типа в шипиковых нейронах среднего размера скорлупы может составлять приблизительно 30%. В качестве неограничивающего примера, снижение HTT дикого типа в шипиковых нейронах среднего размера скорлупы может составлять приблизительно 20%. В качестве неограничивающего примера, снижение HTT дикого типа в шипиковых нейронах среднего размера скорлупы может составлять приблизительно 15%. В качестве неограничивающего примера, снижение HTT дикого типа в скорлупе и коре может составлять приблизительно 40%. В качестве неограничивающего примера, снижение HTT дикого типа в скорлупе и коре может составлять приблизительно 30%. В качестве неограничивающего примера, снижение HTT дикого типа в скорлупе и коре может составлять приблизительно 20%. В качестве неограничивающего примера, снижение HTT дикого типа в скорлупе и коре может составлять приблизительно 15%. В качестве неограничивающего примера, снижение HTT дикого типа в шипиковых нейронах среднего размера скорлупы может составлять 40-70%. В качестве неограничивающего примера, снижение HTT дикого типа в шипиковых нейронах среднего размера скорлупы может составлять 30-70%. В качестве неограничивающего примера, снижение HTT дикого типа в шипиковых нейронах среднего размера скорлупы может составлять 20-70%. В качестве неограничивающего примера, снижение HTT дикого типа в шипиковых нейронах среднего размера скорлупы может составлять 15-70%. В качестве неограничивающего примера, снижение HTT дикого типа в скорлупе и коре может составлять 40-70%. В качестве неограничивающего примера, снижение HTT дикого типа в шипиковых нейронах среднего размера скорлупы может составлять 30-70%. В качестве неограничивающего примера, снижение HTT дикого типа в шипиковых нейронах среднего размера скорлупы может составлять 20-70%. В качестве неограничивающего примера, снижение HTT дикого типа в шипиковых нейронах среднего размера скорлупы может составлять 15-70%.

[00571] В одном из вариантов осуществления векторы, например, AAV векторы, можно использовать для снижения мутантного белка HTT у индивида. Снижение может независимо составлять 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% или больше чем 95%, 5-15%, 5-20%, 5-25%, 5-30%, 5-35%, 5-40%, 5-45%, 5-50%, 5-55%, 5-60%, 5-65%, 5-70%, 5-75%, 5-80%, 5-85%, 5-90%, 5-95%, 10-20%, 10-25%, 10-30%, 10-35%, 10-40%, 10-45%, 10-50%, 10-55%, 10-60%, 10-65%, 10-70%, 10-75%, 10-80%, 10-85%, 10-90%, 10-95%, 15-25%, 15-30%, 15-35%, 15-40%, 15-45%, 15-50%, 15-55%, 15-60%, 15-65%, 15-70%, 15-75%, 15-80%, 15-85%, 15-90%, 15-95%, 20-30%, 20-35%, 20-40%, 20-45%, 20-50%, 20-55%, 20-60%, 20-65%, 20-70%, 20-75%, 20-80%, 20-85%, 20-90%, 20-95%, 25-35%, 25-40%, 25-45%, 25-50%, 25-55%, 25-60%, 25-65%, 25-70%, 25-75%, 25-80%, 25-85%, 25-90%, 25-95%, 30-40%, 30-45%, 30-50%, 30-55%, 30-60%, 30-65%, 30-70%, 30-75%, 30-80%, 30-85%, 30-90%, 30-95%, 35-45%, 35-50%, 35-55%, 35-60%, 35-65%, 35-70%, 35-75%, 35-80%, 35-85%, 35-90%, 35-95%, 40-50%, 40-55%, 40-60%, 40-65%, 40-70%, 40-75%, 40-80%, 40-85%, 40-90%, 40-95%, 45-55%, 45-60%, 45-65%, 45-70%, 45-75%, 45-80%, 45-85%, 45-90%, 45-95%, 50-60%, 50-65%, 50-70%, 50-75%, 50-80%, 50-85%, 50-90%, 50-95%, 55-65%, 55-70%, 55-75%, 55-80%, 55-85%, 55-90%, 55-95%, 60-70%, 60-75%, 60-80%, 60-85%, 60-90%, 60-95%, 65-75%, 65-80%, 65-85%, 65-90%, 65-95%, 70-80%, 70-85%, 70-90%, 70-95%, 75-85%, 75-90%, 75-95%, 80-90%, 80-95% или 90-95%. В качестве неограничивающего примера, субъект может иметь 50% снижение мутантного белка HTT. В качестве неограничивающего примера, снижение мутантного HTT в шипиковых нейронах среднего размера скорлупы может составлять приблизительно 40%. В качестве неограничивающего примера, снижение мутантного HTT в шипиковых нейронах среднего размера скорлупы может составлять приблизительно 30%. В качестве неограничивающего примера, снижение мутантного HTT в шипиковых нейронах среднего размера скорлупы может составлять приблизительно 20%. В качестве неограничивающего примера, снижение мутантного HTT в шипиковых нейронах среднего размера скорлупы может составлять приблизительно 15%. В качестве неограничивающего примера, снижение мутантного HTT в скорлупе и коре может составлять приблизительно 40%. В качестве неограничивающего примера, снижение мутантного HTT в скорлупе и коре может составлять приблизительно 30%. В качестве неограничивающего примера, снижение мутантного HTT в скорлупе и коре может составлять приблизительно 20%. В качестве неограничивающего примера, снижение мутантного HTT в скорлупе и коре может составлять приблизительно 15%. В качестве неограничивающего примера, снижение мутантного HTT в шипиковых нейронах среднего размера скорлупы может составлять 40-70%. В качестве неограничивающего примера, снижение мутантного HTT в шипиковых нейронах среднего размера скорлупы может составлять 30-70%. В качестве неограничивающего примера, снижение мутантного HTT в шипиковых нейронах среднего размера скорлупы может составлять 20-70%. В качестве неограничивающего примера, снижение мутантного HTT в шипиковых нейронах среднего размера скорлупы может составлять 15-70%. В качестве неограничивающего примера, снижение мутантного HTT в скорлупе и коре может составлять 40-70%. В качестве неограничивающего примера, снижение мутантного HTT в шипиковых нейронах среднего размера скорлупы может составлять 30-70%. В качестве неограничивающего примера, снижение мутантного HTT в шипиковых нейронах среднего размера скорлупы может составлять 20-70%. В качестве неограничивающего примера, снижение мутантного HTT в шипиковых нейронах среднего размера скорлупы может составлять 15-70%.

[00572] AAV векторы по настоящему изобретению можно использовать в качестве способа лечения хореи Гентингтона у индивида, нуждающегося в лечении. Любой известный в данной области способ определения индивида, нуждающегося в лечении, можно использовать для того, чтобы идентифицировать указанного индивида(ов). Субъект может иметь клинический диагноз хореи Гентингтона или может быть предсимптоматическим. Можно использовать любой известный способ диагностирования HD, включая в качестве неограничивающих примеров когнитивные оценки и/или неврологические или нейропсихиатрические исследования, двигательные тесты, чувствительные тесты, психиатрические оценки, визуализацию головного мозга, семейный анамнез и/или генетическое тестирование.

[00573] В одном из вариантов осуществления выбор индивида с HD определяют с использованием использованием прогностического показателя хореи Гентингтона или его производного (Long JD et al., Movement Disorders, 2017, 32(2), 256-263, содержание которого включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме). В этом прогностическом показателе используют четыре компонента для того, чтобы предсказать вероятность двигательного диагноза, (1) общую двигательную оценку (TMS) из Unified Huntington's Disease Rating Scale (UHDRS), (2) Symbol Digit Modality Test (SDMT), (3) базового возраста и (4) цитозин-аденин-гуаниновой (CAG) экспансией.

[00574] В одном из вариантов осуществления прогностический показатель хореи Гентингтона вычисляют по следующей формуле: PIHD=51×TMS+(-34)×SDMT+7×возраст×(CAG-34), где более высокие значения PIHD указывают на более высокий риск диагностирования или начала симптомов.

[00575] В другом варианте осуществления прогностический показатель хореи Гентингтона вычисляют с использованием следующей нормализованной формулы, которая дает единицы стандартного отклонения, для интерпретации в контексте 50% 10-летней выживаемости: PINHD=(PIHD-883)/1044, где PINHD < 0 показывает больше чем 50% 10-летнюю выживаемость и PINHD > 0 показывает меньше чем 50% 10-летнюю выживаемость.

[00576] В одном из вариантов осуществления прогностический показатель можно использовать для того, чтобы идентифицировать субъектов, у которых разовьются симптомы HD в пределах нескольких лет, но которые еще не имеют клинически диагностируемые симптомы. Кроме того, этих асимптоматических пациентов может быть выбран для и получения лечения с использованием AAV векторов и композиций по настоящему изобретению во время асимптоматического периода.

V. ОПРЕДЕЛЕНИЯ

[00577] Если не установлено иное, следующие термины и фразы имеют значения, описанные далее. Подразумевают, что определения не являются ограничивающими по природе и служат для обеспечения более ясного понимания определенных аспектов настоящего изобретения.

[00578] Как используют в настоящем документе, термин «нуклеиновая кислота», «полинуклеотид» и «олигонуклеотид» относятся к любым полимерам нуклеиновых кислот, состоящим из полидезоксирибонуклеотидов (содержащих 2-дезокси-D-рибозу) или полирибонуклеотидов (содержащих D-рибозу), или полинуклеотиду любого другого типа, который представляет собой N-гликозид пуринового или пиримидинового основания или модифицированных пуриновых или пиримидиновых оснований. Не предусмотрено различий в длине между термином «нуклеиновая кислота», «полинуклеотид» и «олигонуклеотид», и эти термины используют взаимозаменяемо. Эти термины относятся только к первичной структуре молекулы. Таким образом, эти термины включают двух- и одноцепочечную ДНК, а также двух- и одноцепочечную РНК.

[00579] Как используют в настоящем документе, термин «РНК» или «молекула РНК» или «молекула рибонуклеиновой кислоты» относится к полимеру рибонуклеотидов; термин «ДНК» или «молекула ДНК» или «молекула дезоксирибонуклеиновой кислоты» относится к полимеру дезоксирибонуклеотидов. ДНК и РНК можно синтезировать в природе, например, посредством репликации ДНК и транскрипции ДНК, соответственно; или можно синтезировать химически. ДНК и РНК могут быть одноцепочечными (то есть, оцРНК или оцДНК, соответственно) или многоцепочечными (например, двухцепочечными, то есть, дцРНК и дцДНК, соответственно). Термин «мРНК» или «информационная РНК», как используют в настоящем документе, относится к одноцепочечной РНК, которая кодирует аминокислотную последовательность одной или нескольких полипептидных цепей.

[00580] Как используют в настоящем документе, термин «РНК-интерференция» или «RNAi» относится к регуляторному механизму со специфичностью к последовательности, опосредованному молекулами РНК, результатом которого является ингибирование или интерференция или «сайленсинг» экспрессии соответствующего гена, кодирующего белок. RNAi наблюдали у организмов многих типов, в том числе растений, животных и грибов. В природе RNAi возникает в клетках для того, чтобы удалять чужеродную РНК (например, вирусную РНК). Природная RNAi опосредована фрагментами, отщепленными от свободной дцРНК, которые направляют разрушающий механизм на другие схожие последовательности РНК. RNAi управляют с помощью РНК-индуцированного комплекса сайленсинга (RISC), и инициируют его с помощью коротких/малых молекул дцРНК в цитоплазме клетки, где они взаимодействуют с argonaute, каталитическим компонентом RISC. Молекулы дцРНК можно вводить в клетки экзогенно. Экзогенная дцРНК инициирует RNAi посредством активации рибонуклеазного белка дайсера, который связывает и расщепляет дцРНК с образованием двухцепочечных фрагментов из 21-25 пар оснований с несколькими не спаренными свисающими основаниями на каждом конце. Эти короткие двухцепочечные фрагменты называют малыми интерферирующими РНК (миРНК).

[00581] Как используют в настоящем документе, термины «малая интерферирующая РНК» или «миРНК» относятся к молекуле РНК (или аналогу РНК), содержащей приблизительно 5-60 нуклеотидов (или нуклеотидных аналогов), которая способна направлять или опосредовать RNAi. Предпочтительно, молекула миРНК содержит приблизительно 15-30 нуклеотидов или нуклеотидных аналогов, например, приблизительно 16-25 нуклеотидов (или нуклеотидных аналогов), приблизительно 18-23 нуклеотида (или нуклеотидных аналога), приблизительно 19-22 нуклеотида (или нуклеотидных аналога) (например, 19, 20, 21 или 22 нуклеотида или нуклеотидных аналога), приблизительно 19-25 нуклеотидов (или нуклеотидных аналогов) и приблизительно 19-24 нуклеотида (или нуклеотидных аналога). Термин «короткая» миРНК относится к миРНК, содержащей 5-23 нуклеотида, предпочтительно 21 нуклеотид (или нуклеотидный аналог), например, 19, 20, 21 или 22 нуклеотида. Термин «длинная» миРНК относится к миРНК, содержащей 24-60 нуклеотидов, предпочтительно приблизительно 24-25 нуклеотидов, например, 23, 24, 25 или 26 нуклеотидов. Короткая миРНК может, в некоторых случаях, включать меньше чем 19 нуклеотидов, например, 16, 17 или 18 нуклеотидов или всего лишь 5 нуклеотидов, при условии, что более короткая миРНК сохраняет способность опосредовать RNAi. Аналогичным образом, длинная миРНК может, в некоторых случаях, включать больше чем 26 нуклеотидов, например, 27, 28, 29, 30, 35, 40, 45, 50, 55 или даже 60 нуклеотидов, при условии, что более длинная миРНК сохраняет способность опосредовать RNAi или трансляционную репрессию в отсутствие дополнительного процессинга, например, ферментативного процессинга, в короткую миРНК. миРНК может представлять собой одноцепочечные молекулы РНК (оц-миРНК) или двухцепочечные молекулы РНК (дц-миРНК), содержащие смысловую цепь и антисмысловую цепь, которые гибридизованы для того, чтобы формировать структуру дуплекса, называемую дуплексом миРНК.

[00582] Как используют в настоящем документе, термин «антисмысловая цепь» или «первая цепь» или «направляющая цепь» молекулы миРНК относится к цепи, которая по существу комплементарна фрагменту приблизительно в 10-50 нуклеотидов, например, приблизительно 15-30, 16-25, 18-23 или 19-22 нуклеотида, в мРНК гена, на который направленно воздействуют для сайленсинга. Антисмысловая цепь или первая цепь имеет последовательность, достаточно комплементарную желаемой целевой мРНК последовательности, чтобы управлять сайленсингом конкретной мишени, например, комплементарность достаточна для того, чтобы запускать разрушение желаемой целевой мРНК посредством механизма или процесса RNAi.

[00583] Как используют в настоящем документе, термин «смысловая цепь» или «вторая цепь» или «сопровождающая цепь» молекулы миРНК относится к цепи, которая комплементарна антисмысловой цепи или первой цепи. Антисмысловые и смысловые цепи молекулы миРНК гибридизуют для того, чтобы формировать структуру дуплекса. Как используют в настоящем документе, «миРНК-дуплекс» включает миРНК цепь, обладающую достаточной комплементарностью с фрагментом приблизительно в 10-50 нуклеотидов в мРНК гена, на который направленно воздействуют для сайленсинга, и миРНК цепь, обладающую достаточной комплементарностью для того, чтобы формировать дуплекс с другой миРНК цепью.

[00584] Как используют в настоящем документе, термин «комплементарный» относится к способности полинуклеотидов формировать пары оснований друг с другом. Пары оснований обычно образуются с помощью водородных связей между нуклеотидными звеньями в антипараллельных полинуклеотидных цепях. Комплементарные полинуклеотидные цепи могут формировать пары оснований по принципу Уотсона-Крика (например, A с T, A с U, C с G) или по любому другому принципу, который допускает формирование дуплексов. Как знают специалисты в данной области, при использовании РНК в противоположность ДНК, урацил вместо тимина представляет собой основание, которое считают комплементарным аденозину. Однако, когда U приводят в контексте настоящего изобретения, подразумевается способность заменять T, если не указано иное. Безупречная комплементарность или 100% комплементарность относится к ситуации, в которой каждое нуклеотидное звено одной полинуклеотидной цепи может формировать водородную связь с нуклеотидным звеном второй полинуклеотидной цепи. Меньше чем безупречная комплементарность относится к ситуации, в которой некоторые, но не все, нуклеотидные звенья двую цепей могут формировать водородную связь друг с другом. Например, для двух 20-меров, если только две пары оснований на каждой цепи могут формировать водородную связь друг с другом, полинуклеотидные цепи демонстрируют 10% комплементарность. В том же примере, если 18 пар оснований на каждой цепи могут формировать водородные связи друг с другом, полинуклеотидные цепи проявляют 90% комплементарность.

[00585] Как используют в настоящем документе, термин «по существу комплементарный» обозначает, что миРНК имеет последовательность (например, в антисмысловой цепи), которой достаточно для связывания желаемой целевой мРНК и запуска РНК сайленсинга целевой мРНК.

[00586] Как используют в настоящем документе, «направление воздействия» обозначает процесс разработки и выбора последовательности нуклеиновой кислоты, которая образует гибрид с целевой нуклеиновой кислотой и индуцирует желаемый эффект.

[00587] Термин «экспрессия гена» относится к процессу, посредством которого последовательность нуклеиновой кислоты проходит успешную транскрипцию и в большинстве случаев трансляцию с образованием белка или пептида. Для прозрачности, когда отсылают к измерению «экспрессии гена», следует понимать, что это обозначает, что измерения могут относиться к транскрипцонному продукту нуклеиновой кислоты, например, РНК или мРНК, или аминокислотному продукту трансляции, например, полипептидам или пептидам. Способы измерения количества или уровней РНК, мРНК, полипептидов и пептидов хорошо известны в данной области.

[00588] Как используют в настоящем документе, термин «мутация» относится к любому изменению структуры гена, которое ведет к вариантной (также называемой «мутантной») форме, которая может передаваться последующим поколениям. Мутации в гене могут быть обусловленны изменением одного основания в ДНК или делецией, инсерцией или перестановкой более крупных фрагментов генов или хромосом.

[00589] Как используют в настоящем документе, термин «вектор» обозначает любую молекулу или фрагмент, который транспортирует, трансдуцирует или иным образом выполняет функцию носителя гетерологичной молекулы, такой как молекула миРНК по изобретению. «Вирусный вектор» представляет собой вектор, который содержит одну или несколько полинуклеотидных областей, кодирующих или содержащих молекулу, представляющую интерес, например, трансген, полинуклеотид, кодирующий полипептид, или мультиполипептид или модулирующую нуклеиновую кислоту, такую как малая интерферирующая РНК (миРНК). Вирусные векторы широко используются для того, чтобы доставлять генетический материал в клетки. Вирусные векторы часто модифицируют для конкретных применений. Типы вирусных векторов включают ретровирусные векторы, лентивирусные векторы, аденовирусные векторы и аденоассоциированные вирусные векторы.

[00590] Термин «аденоассоциированный вирус» или «AAV» или «AAV вектор», как используют в настоящем документе, относится к любому вектору, который содержит или происходит из компонентов аденоассоциированного вектора и подходит для того, чтобы инфицировать клетки млекопитающих, предпочтительно клетки человека. Термин AAV вектор обычно обозначает вирусную частицу или вирион типа AAV, которые содержат молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую миРНК-дуплекс. AAV вектор можно получать из различных серотипов, в том числе комбинаций серотипов (то есть, «псевдотипированный» AAV) или из различных геномов (например, одноцепочечный или самокомплементарный). Кроме того, AAV вектор может быть репликационно-дефектным и/или направленным.

[00591] Как используют в настоящем документе, фраза «ингибировать экспрессию гена» обозначает, то что вызывают снижение количества продукта экспрессии гена. Продукт экспрессии может представлять собой молекулу РНК, транскрибированную с гена (например, мРНК), или полипептид, транслированный с мРНК, транскрибированной с гена. Обычно снижение уровня мРНК ведет к снижению уровня полипептида, транслируемого с нее. Уровень экспрессии можно определять с использованием стандартных способов измерения мРНК или белка.

[00592] Как используют в настоящем документе, термин «in vitro» относится к событиям, которые происходят в искусственном окружении, например, в пробирке или реакционном сосуде, в клеточной культуре, в чашке Петри и т. д., а не в организме (например, животном, растении или микробе).

[00593] Как используют в настоящем документе, термин «in vivo» относится к событиям, которые происходят в организме (например, животном, растении или микробе, или в его клетке или ткани).

[00594] Как используют в настоящем документе, термин «модифицированный» относится к измененному состоянию или структуре молекулы по изобретению. Молекулы можно модифицировать многими путями, в том числе химически, структурно и функционально.

[00595] Как используют в настоящем документе, термин «синтетический» обозначает полученный, подготовленный и/или произведенный человеческими руками. Синтез полинуклеотидов или полипептидов или других молекул по настоящему изобретению может быть химическим или ферментативным.

[00596] Как используют в настоящем документе, термин «трансфекция» относится к способам введения экзогенных нуклеиновых кислот в клетку. Способы трансфекции включают, но не ограничиваясь этим, химические способы, физическую обработку и катионные липиды или смеси. Список средств, которые можно трансфицировать в клетку, велик и включает, но не ограничиваясь этим, миРНК, смысловые и/или антисмысловые последовательности, ДНК, кодирующую один или несколько генов и организованную в экспрессирующую плазмиду, белки, белковые фрагменты и т. д.

[00597] Как используют в настоящем документе, «ложная мишень» относится к любому непреднамеренному эффекту, оказываемому на любое одно или несколько из мишени, гена или клеточного транскрипта.

[00598] Как используют в настоящем документе, фразу «фармацевтически приемлемый» используют в настоящем документе, чтобы отослать к тем соединениям, материалам, композициям и/или дозированным формам, которые, в рамках здравого медицинского суждения, пригодны для использования в контакте с тканями человека и животных без чрезмерной токсичности, раздражения, аллергического ответа или других проблем или осложнений, сопоставимых с обоснованным соотношением эффект/риск.

[00599] Как используют в настоящем документе, термин «эффективное количество» средства представляет собой то количество, которого достаточно для того, чтобы вызывать полезные или желаемые результаты, например, клинические результаты, и, по существу, «эффективное количество» зависит от контекста, в котором его применяют. Например, в контексте введения средства, которым лечат HD, эффективное количество средства, например, представляет собой количество, достаточное для того, чтобы достигать лечения, как определено в настоящем документе, для HD, по сравнению с ответом, получаемым без введения средства.

[00600] Как используют в настоящем документе, термин «терапевтически эффективное количество» обозначает количество средства, подлежащего доставке (например, нуклеиновой кислоты, лекарственного средства, терапевтического средства, диагностического средства, профилактического средства и т. д.), которого достаточно, когда вводят индивиду, страдающего или восприимчивого к инфекции, заболеванию, нарушению и/или состоянию, чтобы лечить, усовершенствовать симптомы, диагностировать, предотвращать и/или задерживать начало инфекции, заболевания, нарушения и/или состояния.

[00601] Как используют в настоящем документе, термин «субъект» или «пациент» относится к любому организму, которому композицию в соответствии с изобретением можно вводить, например, в экспериментальных, диагностических, профилактических и/или терапевтических целях. Типичные субъекты включают животных (например, млекопитающих, таких как мыши, крысы, кролики, не являющиеся человеком приматы, такие как шимпанзе и другие человекообразные обезьяны и виды обезьян, а также человека) и/или растения.

[00602] Как используют в настоящем документе, термин «предотвращающий» или «предотвращение» относится к задержке или предвосхищению начала, развития или прогрессирования состояния или заболевания в течение определенного периода времени, в том числе недель, месяцев или лет.

[00603] Термин «лечение» или «лечащий», как используют в настоящем документе, относится к применению одной или нескольких конкретных процедур, используемых для излечения или улучшения заболевания. В определенных вариантах осуществления конкретная процедура представляет собой введение одного или нескольких фармацевтических средств. В контексте настоящего изобретения, конкретная процедура представляет собой введение одной или нескольких молекул миРНК.

[00604] Как используют в настоящем документе, термин «улучшение» или «улучшающий» относится к уменьшению тяжести по меньшей мере одного показателя состояния или заболевания. Например, в контексте нейродегенеративного нарушения, улучшение включает уменьшение потери нейронов.

[00605] Как используют в настоящем документе, термин «введение» относится к предоставлению фармацевтического средства или композиции индивиду.

[00606] Как используют в настоящем документе, термин «нейродегенерация» относится к патологическому состоянию, результатом которого является гибель нервных клеток. Большое число неврологических нарушений совместно включают нейродегенерацию в качестве общего патологического состояния. Например, болезнь Альцгеймера, болезнь Паркинсона, хорея Гентингтона и амиотрофический боковой склероз (ALS) вызывают хроническую нейродегенерацию, которая отличается медленной прогрессирующей гибелью нервных клеток в течение периода в несколько лет, тогда как острая нейродегенерация отличается внезапным началом гибели нервных клеток в результате ишемии, например, инсульта, или травмы, такой как травматическое повреждение головного мозга, или в результате поперечного разрушения аксонов посредством демиелинизации или травмы, вызванной, например, повреждением спинного мозга или рассеянным склерозом. При некоторых неврологических нарушениях, дегенеративными являются нервные клетки преимущественно одного типа, например, дегенерация средних шипиковых нейронов при ранней HD.

VI. ЭКВИВАЛЕНТЫ И ОБЪЕМ

[00607] Специалисты в данной области узнают или будут способны выяснить, используя не больше чем стандартные эксперименты, многие эквиваленты для конкретных вариантов осуществления в соответствии с изобретением, описанных в настоящем документе. Не предусмотрено, что объем настоящего изобретения ограничен вышеприведенным описанием, но скорее представляет собой то, что изложено в приложенной формуле изобретения.

[00608] В формуле изобретения, форма единственного числа может обозначать один или несколько, пока не указано противоположное или иное, очевидно следующее из контекста. Пункты формулы изобретения или описания, которые включают «или» между одним или несколькими элементами группы считают выполненными, если один, больше чем один или все элементы группы присутствуют в, использованы в или иным образом имеют отношение к данному продукту или процессу, пока не указано противоположное или иное, очевидно следующее из контекста. Изобретение включает варианты осуществления, в которых точно один элемент группы присутствует в, используется в или иным образом относится к данному продукту или процессу. Изобретение включает варианты осуществления, в которых больше чем один или все элементы группы присутствуют в, используются в или иным образом относятся к данному продукту или процессу.

[00609] Также следует отметить, что термин «содержит» предназначен в качестве открытого и допускает, но не обязательно, включение дополнительных элементов или стадий. Когда термин «содержит» используют в настоящем документе, термин «состоит из», таким образом, также охватывают и раскрывают.

[00610] Где приведены диапазоны, конечные точки включены. Кроме того, следует понимать, что если не указано иное или иное очевидно из контекста и понимания специалиста в данной области, значения, которые выражают в виде диапазонов, могут принимать любое конкретное значение или поддиапазон в пределах установленных диапазонов в различных вариантах осуществления изобретения, до десятой от единицы нижнего предела диапазона, пока контекст явно не диктует иное.

[00611] Кроме того, следует понимать, что любой конкретный вариант осуществления настоящего изобретения, который попадает в пределы известного уровня техники, может быть явно исключен из любого одного или нескольких пунктов формулы изобретения. Поскольку такие варианты осуществления полагают известными специалисту в данной области, их можно исключать, даже если исключение не приведено явно в настоящем документе. Любой конкретный вариант осуществления композиций по изобретению (например, любой антибиотик, терапевтический или активный ингредиент; любой способ получения; любой способ использования; и т. д.) можно исключать из любого одного или нескольких пунктов формулы изобретения, по любой причине, вне зависимости от связи с существованием известного уровня техники.

[00612] Следует понимать, что слова, которые использованы, являются словами описания, а не ограничения, и что изменения можно создавать в пределах содержания приложенной формулы изобретения, не отступая от истинных объема и сущности изобретения в их более широких аспектах.

[00613] Хотя настоящее изобретение описано довольно подробно и довольно конкретно в отношении нескольких описанных вариантов осуществления, не предусмотрено, что его следует ограничивать любой такой конкретикой или вариантами осуществления или любым конкретным вариантом осуществления, но его следует толковать со ссылкой на приложенную формулу изобретения с тем, чтобы обеспечивать самую широкую возможную интерпретацию таких пунктов формулы изобретения ввиду известного уровня техники и, следовательно, чтобы эффективно охватывать предполагаемый объем изобретения.

VII. ПРИМЕРЫ

Пример 1. Активность конструкций в клетках HEK293T и HeLa

A. Трансфекция

[00614] Экспрессирующие AAV-мкРНК векторы трансфицировали в клетки HEK293T и HeLa. Также оценивали обработанные mCherry клетки и необработанные клетки. После 48 часов определяли относительную экспрессию мРНК HTT. Относительную экспрессию мРНК HTT получали посредством нормализации уровня мРНК HTT по уровню мРНК гена домашнего хозяйства; затем этот нормализованный уровень мРНК HTT выражали относительно нормализованного уровня мРНК HTT в обработанных mCherry и/или необработанных клетках, как определяют посредством qRT-ПЦР. Результаты приведены в таблицах 12-14.

Таблица 12. Супрессия мРНК HTT в клетках HEK293T и HeLa после трансфекции, набор I

Название	ID дуплекса	Экспрессирующая кассета	Относительный уровень мРНК HTT
Клетки HEK293T	Клетки HeLa
VOYHTmiR-102.219.n	D-3513	288	0,65	0,8
VOYHTmiR-102.894	D-3520	299	0,55	0,76
VOYHTmiR-102.579	D-3548	341	0,47	0,5
VOYHTmiR-104.219.n	D-3514	289	0,6	0,78
VOYHTmiR-104.894	D-3521	300	0,64	0,75
VOYHTmiR-104.579	D-3549	342	0,5	0,51
VOYHTmiR-109.219.n	D-3513	290	0,63	0,75
VOYHTmiR-109.894	D-3520	301	0,7	-
VOYHTmiR-109.579	D-3548	343	0,55	0,52
VOYHTmiR-116.219.n	D-3515	291	0,63	0,75
VOYHTmiR-116.894	D-3523	303	0,65	0,6
VOYHTmiR-116.579	D-3551	345	0,63	0,65
VOYHTmiR-114.219	D-3511	285	0,6	0,65
VOYHTmiR-114.894	D-3522	302	0,6	0,6
VOYHTmiR-114.579	D-3550	344	0,57	0,45
VOYHTmiR-127.219.n	D-3513	292	0,85	0,9
VOYHTmiR-127.894	D-3520	304	0,58	0,5
VOYHTmiR-127.579	D-3548	346	0,5	0,45
mCherry	N/A	-	1,0	1,0
Без обработки	N/A	-	0,8	1,2

Таблица 13. Супрессия мРНК HTT в клетках HEK293T и HeLa после трансфекции, набор II

Название	ID дуплекса	Экспрессирующая кассета	Относительный уровень мРНК HTT
Клетки HEK293T	Клетки HeLa
VOYHTmiR-102.016	D-3544	335	0,36	0,84
VOYHTmiR-102.214	D-3500	270	0,42	0,88
VOYHTmiR-102.218	D-3505	276	0,31	0,68
VOYHTmiR-102.372	D-3528	311	0,39	0,73
VOYHTmiR-102.425	D-3532	317	0,36	0,72
VOYHTmiR-102.907	D-3524	305	0,43	0,75
VOYHTmiR-102.257	D-3516	293	0,4	0,7
VOYHTmiR-104.016	D-3545	336	0,28	0,5
VOYHTmiR-104.214	D-3501	271	0,55	0,91
VOYHTmiR-104.218	D-3506	277	0,39	0,82
VOYHTmiR-104.372	D-3529	312	0,38	0,74
VOYHTmiR-104.425	D-3533	318	0,4	0,7
VOYHTmiR-104.907	D-3525	306	0,31	0,65
VOYHTmiR-104.257	D-3517	294	0,32	0,64
VOYHTmiR-109.016	D-3546	337	0,28	0,5
VOYHTmiR-109.214	D-3502	272	0,51	0,85
VOYHTmiR-109.218	D-3507	278	0,38	0,7
VOYHTmiR-109.372	D-3530	313	0,42	0,72
VOYHTmiR-109.425	D-3534	319	00,31	0,64
VOYHTmiR-109.907	D-3526	307	0,36	0,68
VOYHTmiR-109.257	D-3518	295	0,41	0,72
VOYHTmiR-114.016	D-3547	338	0,3	0,68
VOYHTmiR-114.214	D-3503	273	0,42	0,84
VOYHTmiR-114.218	D-3508	279	0,38	0,75
VOYHTmiR-114.372	D-3531	314	0,39	0,75
VOYHTmiR-114.425	D-3535	320	0,36	0,7
VOYHTmiR-114.907	D-3527	308	0,4	0,61
VOYHTmiR-114.257	D-3519	296	0,42	0,73
VOYHTmiR-116.016	D-3546	339	0,38	0,62
VOYHTmiR-116.214	D-3502	274	0,5	0,87
VOYHTmiR-116.218	D-3507	280	0,38	0,75
VOYHTmiR-116.372	D-3530	315	0,42	0,73
VOYHTmiR-116.425	D-3534	321	0,43	0,85
VOYHTmiR-116.907	D-3526	309	0,4	0,68
VOYHTmiR-116.257	D-3518	297	0,4	0,77
VOYHTmiR-127.016	D-3546	340	0,29	0,4
VOYHTmiR-127.214	D-3504	275	0,75	1,08
VOYHTmiR-127.218	D-3507	281	0,38	0,52
VOYHTmiR-127.372	D-3530	316	0,39	0,5
VOYHTmiR-127.425	D-3534	322	0,37	0,54
VOYHTmiR-127.907	D-3526	310	0,39	0,67
VOYHTmiR-127.257	D-3518	298	0,38	0,45
mCherry	N/A	-	0,8	1,0
Без обработки	N/A	-	0,75	0,98

Таблица 14. Супрессия мРНК HTT в клетках HEK293T и HeLa после трансфекции, набор III

Название	ID дуплекса	Экспрессирующая кассета	Относительный уровень мРНК HTT
Клетки HEK293T	Клетки HeLa
VOYHTmiR-104.579	D-3549	342	0,18	0,62
VOYHTmiR-104.579.1	D-3566	347	0,15	0,58
VOYHTmiR-104.579.2	D-3566	348	0,18	0,5
VOYHTmiR-104.579.3	D-3566	349	0,15	0,52
VOYHTmiR-104.579.4	D-3566	350	0,15	0,48
VOYHTmiR-104.579.5	D-3569	367	0,16	0,8
VOYHTmiR-104.579.6	D-3566	351	0,11	0,5
VOYHTmiR-104.579.7	D-3567	352	0,19	0,65
VOYHTmiR-104.579.8	D-3568	353	0,2	0,6
VOYHTmiR-104.579.9	D-3566	354	0,19	0,73
VOYHTmiR-104.579.10	D-3570	368	0,34	0,7
mCherry	N/A	-	1,0	1,0

B. Инфекция

[00615] Экспрессирующие AAV-мкРНК векторы упаковывали в AAV2 (обозначают как экспрессирующие AAV2-мкРНК векторы) или mCherry векторы упаковывали в AAV2, для инфекции клеток HEK293T и HeLa. Также оценивали необработанные клетки. AAV2 частицы использовали для того, чтобы инфицировать клетки HEK293T при MOI 1E4 или 1E5 vg/клетка и клетки HeLa при MOI 1E5 vg/клетка.

[00616] Относительную экспрессию HTT определяли в клетках HeLa через 24 часа после инфекции экспрессирующим AAV-мкРНК вектором. Относительную экспрессию мРНК HTT получали посредством нормализации уровня мРНК HTT по уровню мРНК гена домашнего хозяйства; затем этот нормализованный уровень мРНК HTT выражали относительно нормализованного уровня мРНК HTT в обработанных mCherry и/или необработанных клетках, как определяют посредством qRT-ПЦР. Результаты приведены в таблицах 15-18. Инфекцию клеток HeLa осуществляли при MOI 1E5 vg/клетка (таблицы 15-17) или при MOI 1E4 vg/клетка (таблица 18).

[00617] Относительную экспрессию HTT определяли в клетках HEK293T через 24 часа после инфекции экспрессирующим AAV-мкРНК вектором. Относительную экспрессию мРНК HTT получали посредством нормализации уровня мРНК HTT по уровню мРНК гена домашнего хозяйства; затем этот нормализованный уровень мРНК HTT выражали относительно нормализованного уровня мРНК HTT в обработанных mCherry и/или необработанных клетках, как определяют посредством qRT-ПЦР. Результаты приведены в таблицах 15, 17 и 18. Инфекцию клеток HEK293T осуществляли при MOI 1E5 vg/клетка (таблицы 15 и 17) или при MOI 1E4 vg/клетка (таблица 18).

Таблица 15. Супрессия мРНК HTT в клетках HEK293T и HeLa после инфекции экспрессирующими AAV2-мкРНК векторами при MOI 1E5/клетка

Название	ID дуплекса	Экспрессирующая кассета	Относительный уровень мРНК HTT
Клетки HEK293T	Клетки HeLa
VOYHTmiR-102.219.n	D-3513	288	0,8	0,79
VOYHTmiR-102.894	D-3520	299	0,7	0,71
VOYHTmiR-102.579	D-3548	341	0,49	0,7
VOYHTmiR-104.219.n	D-3514	289	0,9	0,81
VOYHTmiR-104.894	D-3521	300	0,8	0,71
VOYHTmiR-104.579	D-3549	342	0,4	0,48
VOYHTmiR-109.219.n	D-3513	290	0,79	0,8
VOYHTmiR-109.894	D-3520	301	0,6	0,71
VOYHTmiR-109.579	D-3548	343	0,58	0,61
VOYHTmiR-116.219.n	D-3515	291	0,95	0,81
VOYHTmiR-116.894	D-3523	303	0,75	0,75
VOYHTmiR-116.579	D-3551	345	0,5	0,7
VOYHTmiR-114.219	D-3511	285	0,74	0,81
VOYHTmiR-114.894	D-3522	302	0,6	0,75
VOYHTmiR-114.579	D-3550	344	0,43	0,61
VOYHTmiR-127.219.n	D-3513	292	0,93	0,9
VOYHTmiR-127.894	D-3520	304	0,5	0,6
VOYHTmiR-127.579	D-3548	346	0,31	0,4
mCherry	N/A	-	1,0	1,0
Без обработки	N/A	-	0,9	0,9

Таблица 16. Супрессия мРНК HTT в клетках HeLa после инфекции экспрессирующими AAV2-мкРНК векторами при MOI 1E5/клетка

Название	ID дуплекса	Экспрессирующая кассета	Относительный уровень мРНК HTT
Клетки HeLa
VOYHTmiR-102.016	D-3544	335	0,52
VOYHTmiR-102.214	D-3500	270	0,9
VOYHTmiR-102.218	D-3505	276	0,88
VOYHTmiR-102.372	D-3528	311	0,89
VOYHTmiR-102.425	D-3532	317	0,8
VOYHTmiR-102.907	D-3524	305	0,74
VOYHTmiR-102.257	D-3516	293	0,79
VOYHTmiR-104.016	D-3545	336	0,57
VOYHTmiR-104.218	D-3506	277	0,79
VOYHTmiR-104.372	D-3529	312	0,79
VOYHTmiR-104.425	D-3533	318	0,67
VOYHTmiR-104.907	D-3525	306	0,71
VOYHTmiR-104.257	D-3517	294	0,72
VOYHTmiR-109.016	D-3546	337	0,6
VOYHTmiR-109.218	D-3507	278	0,83
VOYHTmiR-109.372	D-3530	313	0,85
VOYHTmiR-109.425	D-3534	319	0,75
VOYHTmiR-109.907	D-3526	307	0,8
VOYHTmiR-109.257	D-3518	295	0,9
VOYHTmiR-114.016	D-3547	338	0,68
VOYHTmiR-114.214	D-3503	273	0,99
VOYHTmiR-114.372	D-3531	314	0,85
VOYHTmiR-116.016	D-3546	339	0,59
VOYHTmiR-116.218	D-3507	280	0,81
VOYHTmiR-127.016	D-3546	340	0,3
VOYHTmiR-127.214	D-3504	275	1,0
VOYHTmiR-127.218	D-3507	281	0,4
VOYHTmiR-127.372	D-3530	316	0,48
VOYHTmiR-127.425	D-3534	322	0,5
VOYHTmiR-127.907	D-3526	310	0,55
VOYHTmiR-127.257	D-3518	298	0,42
mCherry	N/A	-	1,0
Без обработки	N/A	-	0,93

Таблица 17. Супрессия мРНК HTT в клетках HEK293T и HeLa после инфекции экспрессирующими AAV2-мкРНК векторами при MOI 1E5/клетка

Название	ID дуплекса	Экспрессирующая кассета	Относительный уровень мРНК HTT
Клетки HEK293T	Клетки HeLa
VOYHTmiR-104.579	D-3549	342	0,4	0,5
VOYHTmiR-104.579.1	D-3566	347	0,38	0,51
VOYHTmiR-104.579.3	D-3566	349	0,35	0,3
VOYHTmiR-104.579.5	D-3569	367	0,7	0,75
VOYHTmiR-104.579.7	D-3567	352	0,35	0,45
VOYHTmiR-104.579.9	D-3566	354	0,35	0,48
VOYHTmiR-104.579.10	D-3570	368	0,31	0,3
mCherry	N/A	-	1,0	1,0

Таблица 18. Супрессия мРНК HTT в клетках HEK293T и HeLa после инфекции экспрессирующими AAV2-мкРНК векторами при MOI 1E4/клетка

Название	ID дуплекса	Экспрессирующая кассета	Относительный уровень мРНК HTT
Клетки HEK293T	Клетки HeLa
VOYHTmiR-102.016	D-3544	335	0,5	0,51
VOYHTmiR-102.214	D-3500	270	1,08	0,9
VOYHTmiR-102.218	D-3505	276	0,82	0,9
VOYHTmiR-102.372	D-3528	311	0,9	0,9
VOYHTmiR-102.425	D-3532	317	0,7	0,8
VOYHTmiR-102.907	D-3524	305	0,7	0,71
VOYHTmiR-102.257	D-3516	293	0,7	0,8
VOYHTmiR-104.016	D-3545	336	0,51	0,59
VOYHTmiR-104.218	D-3506	277	0,8	0,8
VOYHTmiR-104.372	D-3529	312	0,8	0,8
VOYHTmiR-104.425	D-3533	318	0,6	0,65
VOYHTmiR-104.907	D-3525	306	0,7	0,7
VOYHTmiR-104.257	D-3517	294	0,85	0,71
VOYHTmiR-109.016	D-3546	337	0,5	0,6
VOYHTmiR-109.218	D-3507	278	0,8	0,81
VOYHTmiR-109.372	D-3530	313	0,91	0,88
VOYHTmiR-109.425	D-3534	319	0,7	0,71
VOYHTmiR-109.907	D-3526	307	0,85	0,8
VOYHTmiR-109.257	D-3518	295	0,85	0,91
VOYHTmiR-114.016	D-3547	338	0,6	0,68
VOYHTmiR-114.214	D-3503	273	1,1	0,98
VOYHTmiR-114.372	D-3531	314	0,82	0,88
VOYHTmiR-116.016	D-3546	339	0,69	0,59
VOYHTmiR-116.218	D-3507	280	0,91	0,81
VOYHTmiR-127.016	D-3546	340	0,39	0,3
VOYHTmiR-127.214	D-3504	275	1,2	1,0
VOYHTmiR-127.218	D-3507	281	0,41	0,41
VOYHTmiR-127.372	D-3530	316	0,5	0,5
VOYHTmiR-127.425	D-3534	322	0,58	0,57
VOYHTmiR-127.907	D-3526	310	0,6	0,59
VOYHTmiR-127.257	D-3518	298	0,5	0,41
mCherry	N/A	-	1,0	1,1
Без обработки	N/A	-	1,08	0,98

[00618] В клетках HEK293T VOYHTmiR-127.016 обеспечивал относительный уровень мРНК HTT 0,3-0,4; VOYHTmiR-127.218, VOYHTmiR-102.016, VOYHTmiR-109.016, VOYHTmiR-127.372 и VOYHTmiR-127.257 обеспечивали относительный уровень мРНК HTT 0,41-0,5; VOYHTmiR-104.016, VOYHTmiR-127.425, VOYHTmiR-104.425, VOYHTmiR-114.016 и VOYHTmiR-127.907 обеспечивали относительный уровень мРНК HTT 0,51-0,6; VOYHTmiR-116.016, VOYHTmiR-102.425, VOYHTmiR-102.907, VOYHTmiR-102.257, VOYHTmiR-104.907 и VOYHTmiR-109.425 обеспечивали относительный уровень мРНК HTT 0,61-0,7; VOYHTmiR-104.218, VOYHTmiR-104.372 и VOYHTmiR-109.218 обеспечивали относительный уровень мРНК HTT 0,71-0,8; VOYHTmiR-102.218, VOYHTmiR-114.372, VOYHTmiR-104.257, VOYHTmiR-109.907, VOYHTmiR-109.257 и VOYHTmiR-102.372 обеспечивали относительный уровень мРНК HTT 0,81-0,9; VOYHTmiR-109.372 и VOYHTmiR-116.218 обеспечивали относительный уровень мРНК HTT 0,91 через 24 часа после инфекции при MOI 1E4 vg/клетка.

[00619] В клетках HEK293T VOYHTmiR-127.579, VOYHTmiR-104.579.10, VOYHTmiR-104.579.3, VOYHTmiR-104.579.7, VOYHTmiR-104.579.9, VOYHTmiR-104.579.1 и VOYHTmiR-104.579 обеспечивали относительный уровень мРНК HTT 0,3-0,4; VOYHTmiR-114.579, VOYHTmiR-102.579, VOYHTmiR-116.579 и VOYHTmiR-127.894 обеспечивали относительный уровень мРНК HTT 0,41-0,5; VOYHTmiR-109.579, VOYHTmiR-109.894 и VOYHTmiR-114.894 обеспечивали относительный уровень мРНК HTT 0,51-0,6; VOYHTmiR-102.894 и VOYHTmiR-104.579.5 обеспечивали относительный уровень мРНК HTT 0,61-0,7; VOYHTmiR-114.219, VOYHTmiR-116.894, VOYHTmiR-109.219.n, VOYHTmiR-102.219.n и VOYHTmiR-104.894 обеспечивали относительный уровень мРНК HTT 0,71-0,8; VOYHTmiR-104.219.n обеспечивал относительный уровень мРНК HTT 0,81-0,9; VOYHTmiR-127.219.n и VOYHTmiR-116.219.n обеспечивали относительный уровень мРНК HTT 0,91-0,95 через 24 часа после инфекции при MOI 1E5 vg/клетка.

[00620] В клетках HeLa VOYHTmiR-127.016 обеспечивал относительный уровень мРНК HTT 0,3-0,4; VOYHTmiR-127.218, VOYHTmiR-127.257 и VOYHTmiR-127.372 обеспечивали относительный уровень мРНК HTT 0,41-0,5; VOYHTmiR-102.016, VOYHTmiR-127.425, VOYHTmiR-104.016, VOYHTmiR-127.907, VOYHTmiR-116.016 и VOYHTmiR-109.016 обеспечивали относительный уровень мРНК HTT 0,51-0,6; VOYHTmiR-104.425, VOYHTmiR-114.016 и VOYHTmiR-104.907 обеспечивали относительный уровень мРНК HTT 0,61-0,7; VOYHTmiR-102.907, VOYHTmiR-109.425, VOYHTmiR-104.257, VOYHTmiR-102.425, VOYHTmiR-102.257, VOYHTmiR-104.218, VOYHTmiR-104.372 и VOYHTmiR-109.907 обеспечивал относительный уровень мРНК HTT 0,71-0,8; VOYHTmiR-109.218, VOYHTmiR-116.218, VOYHTmiR-114.372, VOYHTmiR-109.372, VOYHTmiR-102.218, VOYHTmiR-102.372 и VOYHTmiR-102.214 обеспечивали относительный уровень мРНК HTT 0,81-0,9; VOYHTmiR-109.257, VOYHTmiR-114.214 и VOYHTmiR-127.214 обеспечивали относительный уровень мРНК HTT 0,91-1 через 24 часа после инфекции при MOI 1E4 vg/клетка.

[00621] В клетках HeLa VOYHTmiR-127.016, VOYHTmiR-104.579.3, VOYHTmiR-104.579.10, VOYHTmiR-127.218 и VOYHTmiR-127.579 обеспечивали относительный уровень мРНК HTT 0,3-0,4; VOYHTmiR-127.257, VOYHTmiR-104.579.7, VOYHTmiR-127.372, VOYHTmiR-104.579, VOYHTmiR-104.579.9 и VOYHTmiR-127.425 обеспечивали относительный уровень мРНК HTT 0,41-0,5; VOYHTmiR-104.579.1, VOYHTmiR-102.016, VOYHTmiR-127.907, VOYHTmiR-104.016, VOYHTmiR-116.016, VOYHTmiR-109.016 и VOYHTmiR-127.894 обеспечивали относительный уровень мРНК HTT 0,51-0,6; VOYHTmiR-109.579, VOYHTmiR-114.579, VOYHTmiR-104.425, VOYHTmiR-114.016, VOYHTmiR-102.579 и VOYHTmiR-116.579 обеспечивали относительный уровень мРНК HTT 0,61-0,7; VOYHTmiR-104.907, VOYHTmiR-102.894, VOYHTmiR-104.894, VOYHTmiR-109.894, VOYHTmiR-104.257, VOYHTmiR-102.907, VOYHTmiR-109.425, VOYHTmiR-116.894, VOYHTmiR-114.894, VOYHTmiR-104.579.5, VOYHTmiR-102.257, VOYHTmiR-104.218, VOYHTmiR-104.372, VOYHTmiR-102.219.n, VOYHTmiR-102.425, VOYHTmiR-109.907 и VOYHTmiR-109.219.n обеспечивали относительный уровень мРНК HTT 0,71-0,8; VOYHTmiR-116.218, VOYHTmiR-104.219.n, VOYHTmiR-116.219.n, VOYHTmiR-114.219, VOYHTmiR-109.218, VOYHTmiR-109.372, VOYHTmiR-114.372, VOYHTmiR-102.218, VOYHTmiR-102.372, VOYHTmiR-102.214, VOYHTmiR-109.257 и VOYHTmiR-127.219.n обеспечивали относительный уровень мРНК HTT 0,81-0,9; VOYHTmiR-114.214 и VOYHTmiR-127.214 обеспечивали относительный уровень мРНК HTT 0,91-1 через 24 часа после инфекции при MOI 1E5 vg/клетка.

Пример 2. Активность конструкций в нормальных первичных астроцитах человека, клетках U251MG, нейронально дифференцированных клетках SH-SY5Y и HD фибробластах человека

[00622] Экспрессирующие AAV-мкРНК векторы упаковывали в AAV2 и инфицировали нормальные первичные астроциты человека NHA (Lonza) (культивировали в AGM^TM Astrocyte Growth Medium, Lonza № по каталогу CC-3186), клеточную линию астроцитов человека U251MG (Sigma, № по каталогу09063001-1VL) (культивировали в DMEM/F-,12 содержащей 2 мМ добавки GLUAMAX^TM, 1× MEM раствор заменимых аминокислот, 10 мМ HEPES и 10% FBS, 2 нг/мл FGF-2 человека и 5 мкг/мл инсулина человека, все реактивы из Life Technologies), нейронально дифференцированные клетки SH-SY5Y (Sigma, № по каталогу 94030304) (культивировали в DMEM/F-12, содержащей 2 мМ добавки GLUAMAX^TM, 1× MEM раствор заменимых аминокислот, 10 мМ HEPES и 10% FBS, 2 нг/мл FGF-2 человека и 5 мкг/мл инсулина человека, все реактивы из Life Technologies) и/или первичные HD фибробласты человека (Coriell Institute, № по каталогу GM21756) (культивировали в DMEM/F-12, содержащей 2 мМ добавки GLUAMAX^TM, 1× MEM раствор заменимых аминокислот, 10 мМ HEPES и 10% FBS, 2 нг/мл FGF-2 человека и 5 мкг/мл инсулина человека, все реактивы из Life Technologies). Также оценивали контроль mCherry. Для NHA фибробласты и клетки U251MG высевали в 96-луночные планшеты (1-2E4 клеток/лунка в 200 мкл клеточной культуральной среды) и инфицировали в трех повторениях экспрессирующими AAV-мкРНК векторами или контрольным mCherry вектором, упакованными в AAV2. Клетки SH-SY5Y высевали в 96-луночные планшеты (1E4 клеток/лунка в 200 мкл клеточной культуральной среды), которые дважды покрывали с использованием 0,1 мкг/мл поли-D-лизина и 15 мкг/мл ламинина, индуцировали нейрональную дифференцировку в среде для дифференцировки в течение 4 суток и затем инфицировали в трех повторениях экспрессирующими AAV2-мкРНК векторами. Экспрессирующими AAV2-мкРНК векторами инфицировали при MOI 1E5 или 1E6 vg/клетка. Через 24-48 часов после инфекции клетки собирали для незамедлительного лизиса клеток и qRT-ПЦР.

A. Супрессия HTT через 24 часа после инфекции при MOI 1E5 vg/клетка

[00623] Относительную экспрессию мРНК HTT через 24 часа после инфекции при MOI 1E5 vg/клетка определяли посредством qRT-ПЦР для нормальных первичных астроцитов человека, клеточной линии астроцитов человека U251MG, дифференцированных нейронов SH-SY5Y и первичных HD фибробластов человека. Относительную экспрессию мРНК HTT получали посредством нормализации уровня мРНК HTT по уровню мРНК гена домашнего хозяйства, как определяют посредством qRT-ПЦР; затем этот нормализованный уровень мРНК HTT выражали относительно нормализованного уровня мРНК HTT в обработанных mCherry клетках. Результаты представлены в таблице 19.

Таблица 19. Супрессия мРНК HTT в нормальных первичных астроцитах человека, клетках U251MG, нейронально дифференцированных клетках SH-SY5Y и HD фибробластах человека через 24 часа после инфекции экспрессирующими AAV2-мкРНК векторами при MOI 1E5 vg/клетка

Название	ID дуплекса	Экспресс. кассета	Относительный уровень мРНК HTT (%) (нормализованный по mCherry)
Первичные астроциты человека (NHA)	U251MG	SH-SY5Y	HD Фибробласт
VOYHTmiR-102.219.n	D-3513	288	103	119	91	102
VOYHTmiR-102.894	D-3520	299	102	102	82	100
VOYHTmiR-102.579	D-3548	341	105	102	101	86
VOYHTmiR-104.219.n	D-3514	289	91	111	90	121
VOYHTmiR-104.894	D-3521	300	98	112	103	104
VOYHTmiR-104.579	D-3549	342	102	79	79	88
VOYHTmiR-109.219.n	D-3513	290	89	96	89	78
VOYHTmiR-109.894	D-3520	301	89	102	77	91
VOYHTmiR-109.579	D-3548	343	82	82	71	78
VOYHTmiR-116.219.n	D-3515	291	81	90	95	79
VOYHTmiR-116.894	D-3523	303	94	86	80	70
VOYHTmiR-116.579	D-3551	345	108	95	98	100
VOYHTmiR-114.219	D-3511	285	91	105	95	106
VOYHTmiR-114.894	D-3522	302	100	85	82	81
VOYHTmiR-114.579	D-3550	344	100	77	70	80
VOYHTmiR-127.219.n	D-3513	292	89	90	86	81
VOYHTmiR-127.894	D-3520	304	80	79	69	80
VOYHTmiR-127.579	D-3548	346	79	61	54	73
VOYHTmiR-102.214	D-3500	270	78	80	91	81
VOYHTmiR-102.016	D-3544	335	70	51	51	77
VOYHTmiR-102.218	D-3505	276	92	100	92	115
VOYHTmiR-102.372	D-3528	311	90	99	118	120
VOYHTmiR-102.425	D-3532	317	95	85	103	114
VOYHTmiR-102.907	D-3524	305	84	69	85	84
VOYHTmiR-102.257	D-3516	293	124	72	73	90
VOYHTmiR-104.016	D-3545	336	115	75	65	85
VOYHTmiR-104.218	D-3506	277	119	78	85	88
VOYHTmiR-104.372	D-3529	312	101	95	96	90
VOYHTmiR-104.425	D-3533	318	126	81	76	95
VOYHTmiR-104.907	D-3525	306	121	75	79	110
VOYHTmiR-104.257	D-3517	294	110	77	81	90
VOYHTmiR-109.016	D-3546	337	81	67	70	79
VOYHTmiR-109.218	D-3507	278	96	68	73	80
VOYHTmiR-109.372	D-3530	313	102	81	73	77
VOYHTmiR-109.425	D-3534	319	98	74	71	82
VOYHTmiR-109.907	D-3526	307	88	80	80	82
VOYHTmiR-109.257	D-3518	295	120	89	94	95
VOYHTmiR-114.016	D-3547	338	100	73	65	95
VOYHTmiR-114.214	D-3501	273	114	97	100	88
VOYHTmiR-114.372	D-3531	314	90	83	77	79
VOYHTmiR-116.016	D-3546	339	87	57	51	79
VOYHTmiR-116.218	D-3508	280	100	77	74	75
VOYHTmiR-127.016	D-3546	340	62	30	40	61
VOYHTmiR-127.214	D-3504	275	92	97	100	69
VOYHTmiR-127.218	D-3507	281	81	42	49	72
VOYHTmiR-127.372	D-3530	316	90	50	64	83
VOYHTmiR-127.425	D-3534	322	97	68	69	81
VOYHTmiR-127.907	D-3526	310	79	57	62	70
VOYHTmiR-127.257	D-3518	298	78	63	52	61
mCherry	N/A	-	100	100	100	100

[00624] В нормальных первичных астроцитах человека VOYHTmiR-102.016 и VOYHTmiR-127.016 вызывали приблизительно 30-40% сайленсинг мРНК HTT через 24 часа после инфекции при MOI 1E5 vg/клетка.

[00625] В клеточной линии астроцитов человека U251MG VOYHTmiR-127.579, VOYHTmiR-102.907, VOYHTmiR-102.257, VOYHTmiR-109.016, VOYHTmiR-109.218, VOYHTmiR-114.016, VOYHTmiR-127.425 и VOYHTmiR-127.257 вызывают приблизительно 30-40% сайленсинг; VOYHTmiR-102.016, VOYHTmiR-127.372, VOYHTmiR-116.016 и VOYHTmiR-127.907 вызывают 41-50% сайленсинг; VOYHTmiR-127.218 вызывает 51-60% сайленсинг; и VOYHTmiR-127.016 вызывает 61-70% сайленсинг мРНК HTT через 24 часа после инфекции при MOI 1E5 vg/клетка.

[00626] В дифференцированных нейронах SH-SY5Y VOYHTmiR-109.579, VOYHTmiR-114.579, VOYHTmiR-127.894, VOYHTmiR-102.257, VOYHTmiR-104.016, VOYHTmiR-109.016, VOYHTmiR-109.218, VOYHTmiR-109.372, VOYHTmiR-109.425, VOYHTmiR-114.016, VOYHTmiR-127.372, VOYHTmiR-127.425 и VOYHTmiR-127.907 вызывают приблизительно 30-40% сайленсинг; VOYHTmiR-127.579, VOYHTmiR-102.016, VOYHTmiR-116.016 и VOYHTmiR-127.257 вызывают приблизительно 41-50% сайленсинг; и VOYHTmiR-127.016 и VOYHTmiR-127.218 вызывают приблизительно 51-60% сайленсинг мРНК HTT через 24 часа после инфекции при MOI 1E5 vg/клетка.

[00627] В HD фибробластах человека VOYHTmiR-116.894, VOYHT-miR-127.579, VOYHTmiR-127.016, VOYHTmiR-127.214, VOYHTmiR-127.218, VOYHTmiR-127.907 и VOYHTmiR-127.257 вызывают приблизительно 30-40% сайленсинг мРНК HTT через 24 часа после инфекции при MOI 1E5 vg/клетка.

B. Супрессия HTT через 24 часа после инфекции при MOI 1E6 vg/клетка

[00628] Относительную экспрессию мРНК HTT через 24 часа после инфекции при MOI 1E6 определяли посредством qRT-ПЦР для клеточной линии астроцитов человека U251MG и нейронально дифференцированных клеток SH-SY5Y. Относительную экспрессию мРНК HTT получали посредством нормализации уровня мРНК HTT по уровню мРНК гена домашнего хозяйства, как определяют посредством qRT-ПЦР; затем этот нормализованный уровень мРНК HTT выражали относительно нормализованного уровня мРНК HTT в обработанных mCherry клетках. Результаты представлены в таблице 20.

Таблица 20. Супрессия мРНК HTT в клетках U251MG и нейронально дифференцированных клетках SH-SY5Y через 24 часа после инфекции при MOI 1E6 vg/клетка

Название	ID дуплекса	Экспрессирующая кассета	Относительный уровень мРНК HTT (%) (нормализованный по XPNPEP1)
U251MG	SH-SY5Y
VOYHTmiR-102.219.n	D-3513	288	113	69
VOYHTmiR-102.894	D-3520	299	113	58
VOYHTmiR-102.579	D-3548	341	79	56
VOYHTmiR-104.219.n	D-3514	289	119	80
VOYHTmiR-104.894	D-3521	300	125	69
VOYHTmiR-104.579	D-3549	342	69	46
VOYHTmiR-109.219.n	D-3513	290	111	70
VOYHTmiR-109.894	D-3520	301	80	57
VOYHTmiR-109.579	D-3548	343	65	50
VOYHTmiR-116.219.n	D-3515	291	92	70
VOYHTmiR-116.894	D-3523	303	86	60
VOYHTmiR-116.579	D-3551	345	90	60
VOYHTmiR-114.219	D-3511	285	108	68
VOYHTmiR-114.894	D-3522	302	83	57
VOYHTmiR-114.579	D-3550	344	60	42
VOYHTmiR-127.219.n	D-3513	292	102	87
VOYHTmiR-127.894	D-3520	304	61	47
VOYHTmiR-127.579	D-3548	346	48	42
VOYHTmiR-102.214	D-3500	270	78	115
VOYHTmiR-102.016	D-3544	335	48	45
VOYHTmiR-102.218	D-3505	276	100	90
VOYHTmiR-102.372	D3528	311	78	97
VOYHTmiR-102.425	D-3532	317	69	90
VOYHTmiR-102.907	D-3524	305	58	108
VOYHTmiR-102.257	D-3516	293	68	69
VOYHTmiR-104.016	D-3545	336	51	45
VOYHTmiR-104.218	D-3506	277	60	63
VOYHTmiR-104.372	D-3529	312	78	79
VOYHTmiR-104.425	D-3533	318	60	58
VOYHTmiR-104.907	D-3525	306	68	67
VOYHTmiR-104.257	D-3517	294	70	57
VOYHTmiR-109.016	D-3546	337	49	55
VOYHTmiR-109.218	D-3507	278	65	61
VOYHTmiR-109.372	D-3530	313	82	58
VOYHTmiR-109.425	D-3534	319	70	59
VOYHTmiR-109.907	D-3526	307	69	65
VOYHTmiR-109.257	D-3518	295	75	61
VOYHTmiR-114.016	D-3547	338	63	48
VOYHTmiR-114.214	D-3501	273	81	90
VOYHTmiR-114.372	D-3531	314	66	56
VOYHTmiR-116.016	D-3546	339	45	45
VOYHTmiR-116.218	D-3508	280	80	65
VOYHTmiR-127.016	D-3546	340	30	26
VOYHTmiR-127.214	D-3504	275	102	80
VOYHTmiR-127.218	D-3507	281	35	33
VOYHTmiR-127.372	D-3530	316	45	42
VOYHTmiR-127.425	D-3534	322	50	51
VOYHTmiR-127.907	D-3526	310	42	42
VOYHTmiR-127.257	D-3518	298	38	39
mCherry	N/A	-	100	100

[00629] В клеточной линии астроцитов человека U251MG VOYHTmiR-104.579, VOYHTmiR-109.579, VOYHTmiR-114.579, VOYHTmiR-127.894, VOYHTmiR-102.425, VOYHTmiR-102.257, VOYHTmiR-104.218, VOYHTmiR-104.425, VOYHTmiR-104.907, VOYHTmiR-104.257, VOYHTmiR-109.218, VOYHTmiR-109.425, VOYHTmiR-109.907, VOYHTmiR-114.016 и VOYHTmiR-114.372 вызывают приблизительно 30-40% сайленсинг; VOYHTmiR-102.907, VOYHTmiR-104.016, VOYHTmiR-127.425 вызывают приблизительно 41-50% сайленсинг; VOYHTmiR-127.579, VOYHTmiR-102.016, VOYHTmiR-109.016, VOYHTmiR-116.016, VOYHTmiR-127.372 и VOYHTmiR-127.907 вызывают приблизительно 51-60% сайленсинг; и VOYHTmiR-127.016, VOYHTmiR-127.218 и VOYHTmiR-127.257 вызывают приблизительно 61-70% сайленсинг мРНК HTT через 24 часа после инфекции при MOI 1E6 vg/клетка.

[00630] В нейронально дифференцированных клетках SH-SY5Y VOYHTmiR-102.219.n, VOYHTmiR-104.894, VOYHTmiR-109.219.n, VOYHTmiR-116.219.n, VOYHTmiR-116.894, VOYHTmiR-116.579, VOYHTmiR-114.219, VOYHTmiR-102.257, VOYHTmiR-104.218, VOYHTmiR-104.907, VOYHTmiR-109.218, VOYHTmiR-109.907, VOYHTmiR-109.257, VOYHTmiR-116.218 вызывают приблизительно 30-40% сайленсинг; VOYHTmiR-102.894, VOYHTmiR-102.579, VOYHTmiR-109.894, VOYHTmiR-109.579, VOYHTmiR-114.894, VOYHTmiR-104.425, VOYHTmiR-104.257, VOYHTmiR-109.016, VOYHTmiR-109.372, VOYHTmiR-109.425, VOYHTmiR-114.372, VOYHTmiR-127.425 вызывают приблизительно 41-50% сайленсинг; VOYHTmiR-104.579, VOYHTmiR-114.579, VOYHTmiR-127.894, VOYHTmiR-127.579, VOYHTmiR-102.016, VOYHTmiR-104.016, VOYHTmiR-114.016, VOYHTmiR-116.016, VOYHTmiR-127.372, VOYHTmiR-127.907 вызывают приблизительно 51-60% сайленсинг; и VOYHTmiR-127.016, VOYHTmiR-127.218 и VOYHTmiR-127.257 вызывают приблизительно 61-75% сайленсинг мРНК HTT через 24 часа после инфекции при MOI 1E6 vg/клетка.

C. Супрессия HTT через 36 часов после инфекции при MOI 1E5 vg/клетка

[00631] Через 36 часов после инфекции относительную экспрессию мРНК HTT определяли посредством qRT-ПЦР для клеточной линии астроцитов человека U251MG и нейронально дифференцированных клеток SH-SY5Y при MOI 1E5 vg/клетка. Определяли относительную экспрессию мРНК HTT посредством нормализации мРНК HTT по мРНК домашнего хозяйства и дополнительную нормализацию по обработанным mCherry клеткам; результаты представлены в таблице 21.

Таблица 21. Супрессия мРНК HTT в клетках U251MG и нейронально дифференцированных клетках SH-SY5Y при MOI 1E5 vg/клетка - 36 часов после инфекции

Название	ID дуплекса	Экспрессирующая кассета	Относительный уровень мРНК HTT (%) (нормализован по XPNPEP1)
U251MG	SH-SY5Y
VOYHTmiR-104.579.5	D-3569	367	75	70
VOYHTmiR-104.579.2	D-3566	348	70	88
VOYHTmiR-104.579.1	D-3566	347	45	53
VOYHTmiR-104.579.9	D-3566	354	40	60
VOYHTmiR-104.579	D-3549	342	37	50
VOYHTmiR-104.579.7	D-3567	352	35	44
VOYHTmiR-104.579.3	D-3566	349	25	35
VOYHTmiR-104.579.10	D-3570	368	25	38
mCherry	N/A	-	100	100

[00632] В клеточной линии астроцитов человека U251MG, VOYHTmiR-104.579.2 вызывает приблизительно 30-40% сайленсинг; VOYHTmiR-104.579.1 и VOYHTmiR-104.579.9 вызывают приблизительно 51-60% сайленсинг; VOYHTmiR-104.579 и VOYHTmiR-104.579.7 вызывают приблизительно 61-70% сайленсинг; и VOYHTmiR-104.579.3 и VOYHTmiR-104.579.10 вызывают приблизительно 71-80% сайленсинг мРНК HTT через 36 часов после инфекции при MOI 1E5 vg/клетка.

[00633] В нейронально дифференцированных SH-SY5Y VOYHTmiR-104.579.5 и VOYHTmiR-104.579.9 вызывают приблизительно 30-40% сайленсинг; VOYHTmiR-104.579.1 и VOYHTmiR-104.579 вызывают приблизительно 41-50% сайленсинг; и VOYHTmiR-104.579.7, VOYHTmiR-104.579.3 и VOYHTmiR-104.579.10 вызывают приблизительно 51-65% сайленсинг мРНК HTT через 36 часов после инфекции при MOI 1E5 vg/клетка.

D. Супрессия HTT через 36 часов после инфекции при MOI 1E6 vg/клетка

[00634] Через 36 часов после инфекции относительную экспрессию мРНК HTT определяли посредством qRT-ПЦР в нейронально дифференцированных клетках SH-SY5Y при MOI 1E6 vg/клетка. Определяли относительную экспрессию мРНК HTT посредством нормализации мРНК HTT по мРНК домашнего хозяйства и дополнительную нормализацию по обработанным mCherry клеткам; результаты представлены в таблице 22.

Таблица 22. Супрессия мРНК HTT в нейронально дифференцированных клетках SH-SY5Y при MOI 1E6-36 часов после инфекции

Название	ID дуплекса	Экспрессирующая кассета	Относительный уровень мРНК HTT (%) (нормализован по XPNPEP1)
SH-SY5Y
VOYHTmiR-104.579.5	D-3569	367	73
VOYHTmiR-104.579.2	D-3566	348	68
VOYHTmiR-104.579.1	D-3566	347	58
VOYHTmiR-104.579.9	D-3566	354	61
VOYHTmiR-104.579	D-3549	342	62
VOYHTmiR-104.579.7	D-3567	352	43
VOYHTmiR-104.579.3	D-3566	349	38
VOYHTmiR-104.579.10	D-3570	368	38
mCherry	N/A	-	100

[00635] В нейронально дифференцированных клетках SH-SY5Y, VOYHTmiR-104.579.5, VOYHTmiR-104.579.2, VOYHTmiR-104.579.9, VOYHTmiR-104.579 вызывают приблизительно 30-40% сайленсинг; VOYHTmiR-104.579.1 вызывает приблизительно 41-50% сайленсинг; и VOYHTmiR-104.579.7, VOYHTmiR-104.579.3 и VOYHTmiR-104.579.10 вызывают приблизительно 51-65% сайленсинг мРНК HTT через 36 часов после инфекции при MOI 1E6/клетка.

E. Супрессия HTT через 40 часов после инфекции - MOI 1E6

[00636] Через 40 часов после инфекции относительную экспрессию мРНК HTT определяли посредством qRT-ПЦР в клеточной линии астроцитов человека U251MG и нейронально дифференцированных клетках SH-SY5Y при MOI 1E6 vg/клетка. Определяли относительную экспрессию мРНК HTT посредством нормализации мРНК HTT по мРНК домашнего хозяйства и дополнительную нормализацию по обработанным mCherry клеткам; результаты представлены в таблице 23.

Таблица 23. Супрессия мРНК HTT в клетках U251MG и нейронально дифференцированных клетках SH-SY5Y через 40 часов после инфекции при MOI 1E6 vg/клетка

Название	ID дуплекса	Экспрессирующая кассета	Относительный уровень мРНК HTT (%) (нормализован по XPNPEP1)
U251MG	SH-SY5Y
VOYHTmiR-102.219.n	D-3513	288	111	84
VOYHTmiR-102.894	D-3520	299	94	79
VOYHTmiR-102.579	D-3548	341	97	78
VOYHTmiR-104.219.n	D-3514	289	98	85
VOYHTmiR-104.894	D-3521	300	97	78
VOYHTmiR-104.579	D-3549	342	78	64
VOYHTmiR-109.219.n	D-3513	290	106	88
VOYHTmiR-109.894	D-3520	301	90	74
VOYHTmiR-109.579	D-3548	343	87	69
VOYHTmiR-116.219.n	D-3515	291	94	85
VOYHTmiR-116.894	D-3523	303	97	84
VOYHTmiR-116.579	D-3551	345	95	76
VOYHTmiR-114.219	D-3511	285	97	76
VOYHTmiR-114.894	D-3522	302	92	74
VOYHTmiR-114.579	D-3550	344	83	71
VOYHTmiR-127.219.n	D-3513	292	105	85
VOYHTmiR-127.894	D-3520	304	85	67
VOYHTmiR-127.579	D-3548	346	74	59
VOYHTmiR-102.214	D-3500	270	66	70
VOYHTmiR-102.016	D-3544	335	94	96
VOYHTmiR-102.218	D-3505	276	95	90
VOYHTmiR-102.372	D-3528	311	91	91
VOYHTmiR-102.425	D-3532	317	86	91
VOYHTmiR-102.907	D-3524	305	87	94
VOYHTmiR-102.257	D-3516	293	92	88
VOYHTmiR-104.016	D-3545	336	71	66
VOYHTmiR-104.218	D-3506	277	85	81
VOYHTmiR-104.372
D-3529	312	95	93
VOYHTmiR-104.425	D-3533	318	80	78
VOYHTmiR-104.907
D-3525	306	77	71
VOYHTmiR-104.257
D-3517	294	76	69
VOYHTmiR-109.016	D-3546	337	76	75
VOYHTmiR-109.218	D-3507	278	88	74
VOYHTmiR-109.372	D-3530	313	89	76
VOYHTmiR-109.425	D-3534	319	84	77
VOYHTmiR-109.907	D-3526	307	84	83
VOYHTmiR-109.257	D-3518	295	92	75
VOYHTmiR-114.016	D-3547	338	72	60
VOYHTmiR-114.214	D-3501	273	93	88
VOYHTmiR-114.372	D-3531	314	90	81
VOYHTmiR-116.016	D-3546	339	75	66
VOYHTmiR-116.218	D-3508	280	91	76
VOYHTmiR-127.016	D-3546	340	55	48
VOYHTmiR-127.214	D-3504	275	99	86
VOYHTmiR-127.218	D-3507	281	59	60
VOYHTmiR-127.372	D-3530	316	63	62
VOYHTmiR-127.425	D-3534	322	71	66
VOYHTmiR-127.907	D-3526	310	74	70
VOYHTmiR-127.257	D-3518	298	62	63
mCherry	N/A	-	102	102

[00637] В клеточной линии астроцитов человека U251MG VOYHTmiR-102.214, VOYHTmiR-104.016, VOYHTmiR-114.016, VOYHTmiR-127.372, VOYHTmiR-127.425 и VOYHTmiR-127.257 вызывали приблизительно 30-40% сайленсинг; и VOYHTmiR-127.016 и VOYHTmiR-127.218 вызывали приблизительно 41-50% сайленсинг мРНК HTT через 40 часов после инфекции при MOI 1E6 vg/клетка.

[00638] В нейронально дифференцированных клетках SH-SY5Y VOYHTmiR-104.579, VOYHTmiR-109.579, VOYHTmiR-114.579, VOYHTmiR-127.894, VOYHTmiR-102.214, VOYHTmiR-104.016, VOYHTmiR-104.907, VOYHTmiR-104.257, VOYHTmiR-114.016, VOYHTmiR-116.016, VOYHTmiR-127.218, VOYHTmiR-127.372, VOYHTmiR-127.425, VOYHTmiR-127.907 и VOYHTmiR-127.257 вызывали приблизительно 30-40% сайленсинг; VOYHTmiR-127.579 вызывал приблизительно 41-50% сайленсинг; и VOYHTmiR-127.016 вызывал приблизительно 51-60% сайленсинг мРНК HTT через 40 часов после инфекции при MOI 1E6 vg/клетка.

Пример 3. Исследование супрессии HTT на мышах YAC128 in vivo, соотношение направляющих и сопровождающих и воспроизводимость процессинга 5'-конца после лечения с использованием AAV-мкРНК векторов, продуцируемых в клетках млекопитающих

[00639] На основе супрессии HTT in vitro с использованием плазмидной трансфекции и инфекции AAV упакованными экспрессирующими AAV-мкРНК векторами, выбранные экспрессирующие AAV-мкРНК векторы упаковывали в AAV1 и оценивали in vivo у мышей YAC128 для того, чтобы количественно определять супрессию мРНК HTT и оценивать соотношение направляющих и сопровождающих и воспроизводимость процессинга 5'-конца посредством глубокого секвенирования. AAV-мкРНК трансгенные геномы упаковывали в AAV1 с промотором CBA (AAV1.CBA.iHtt) и затем векторы получали посредством тройной трансфекции в клетках HEK293 или HEK293T, очищали и формулировали в фосфатно-солевом буфере (PBS) с 0,001% F-68. Векторы вводили мыша YAC128 в возрасте 7-12 недель через билатеральную интрастриарную инфузию в дозе приблизительно от 1E10 до 3E10 vg в 5 мкл в течение 10 минут на полушарие. Контрольную группу лечили носителем (PBS с 0,001% F-68). Каждая группа содержала 4 самки и 4 самца. Приблизительно через 28 суток после введения тестового изделия, пунктаты ткани полосатого тела собирали и быстро замораживали для дальнейшего анализа.

[00640] Затем образцы ткани полосатого тела гомогенизировали и очищали общую РНК. Относительную экспрессию HTT определяли посредством qRT-ПЦР. Гены домашнего хозяйства для нормализации включали XPNPEP1 мыши (X-пролиламинопептидаза 1) и HPRT мыши (гипоксантингуанинфосфорибозилтрансфераза). мРНК HTT нормализовали по экспрессии гена домашнего хозяйства и затем дополнительно нормализовали по группе носителя. Результаты приведены в таблицах 24 и 25.

Таблица 24. Супрессия мРНК HTT в полосатом теле мышей YAC128 после интрастриарной инфузии

Название	ID дуплекса	Экспресс. кассета	Относительный уровень мРНК HTT (%) (нормализован по XPNPEP1) -среднее+стандартное отклонение	Относительный уровень мРНК HTT (%) (нормализован по HPRT) -среднее+стандартное отклонение
VOYHTmiR-127.016	D-3546	340	63 ± 8	68 ± 9
VOYHTmiR-127.218	D-3507	281	85 ± 19	86 ± 22
VOYHTmiR-127.257	D-3518	298	76 ± 13	78 ± 8
VOYHTmiR-116.016	D-3546	339	99 ± 11	106 ± 18
VOYHTmiR-127.579	D-3548	346	74 ± 6	77 ± 10
VOYHTmiR-104.425	D-3533	318	83 ± 4	86 ± 7
VOYHTmiR-104.257	D-3517	294	91 ± 7	96 ± 10
VOYHTmiR-104.907	D-3525	306	103 ± 18	102 ± 14
Носитель	N/A	-	100+15	100+14

Таблица 25. Супрессия мРНК HTT в полосатом теле мышей YAC128 после интрастриарной инфузии

Название	ID дуплекса	Экспресс. кассета	Относительный уровень мРНК HTT (%) (нормализован по XPNPEP1) -среднее+стандартное отклонение	Относительный уровень мРНК HTT (%) (нормализован по HPRT) -среднее+стандартное отклонение
VOYHTmiR-104.579.3	D-3566	349	67+19	63+18
VOYHTmiR-104.579.10	D-3570	368	70+10	69+10
VOYHTmiR-102.016	D-3544	335	92+12	91+12
VOYHTmiR-104.016	D-3545	336	73+10	68+7
VOYHTmiR-114.016	D-3547	338	93+9	88+16
VOYHTmiR-127.907	D-3526	310	87+14	83+10
VOYHTmiR-109.016	D-3546	337	79+7	76+6
VOYHTmiR-104.579	D-3549	342	94+16	96+13
Носитель	N/A	-	100+6	100+8

[00641] В полосатом теле мышей YAC128 VOYHTmiR-127.016, VOYHTmiR-127.257, VOYHTmiR-127.579, VOYHTmiR-104.579.3, VOYHTmiR-104.579.10, VOYHTmiR-104.016 и VOYHTmiR-109.016 вызывали приблизительно 20-40% сайленсинг мРНК HTT приблизительно на 28 сутки после интрастриарной инфузии от 1E10 до 3E10 vg на полосатое тело.

[00642] Образцы ткани полосатого тела также оценивали на процессинг первичной мкРНК посредством глубокого секвенирования для того, чтобы оценивать соотношение направляющей:сопровождающей, относительное содержание направляющих и сопровождающих цепей относительно общего эндогенного пула мкРНК и воспроизводимость процессинга на 5'-конце направляющей цепи. Результаты представлены в таблице 26.

Таблица 26. Глубокое секвенирование стриарных образцов мышей YAC128 после интрастриарной инфузии

Название	ID дуплекса	Экспрессирующая кассета	Относительное содержание относительно пула эндогенной мкРНК (%)	Соотношение направляющей/ сопровождающей	% N (направл.)
VOYHTmiR-127.016	D-3546	340	58,13	422,9	91,5
VOYHTmiR-127.218	D-3507	281	1,49	2,44	96,2
VOYHTmiR-127.257	D-3518	298	9,66	0,04	85,7
VOYHTmiR-116.016	D-3546	339	3,09	207,8	95,9
VOYHTmiR-127.579	D-3548	346	0,05	24,28	83,2
VOYHTmiR-104.425	D-3533	318	0,12	0,32	92,7
VOYHTmiR-104.257	D-3517	294	0,07	0,38	97,1
VOYHTmiR-104.907	D-3525	306	6,45	2384	96,4
VOYHTmiR-104.579.3	D-3566	349	0,21	40	86,8
VOYHTmiR-104.579.10	D-3570	368	0,76	83	89,8
VOYHTmiR-102.016	D-3544	335	3,06	494	86,4
VOYHTmiR-104.016	D-3545	336	5,41	629	86,8
VOYHTmiR-114.016	D-3547	338	1,7	256	85,8
VOYHTmiR-127.907	D-3526	310	51,29	163	82,9
VOYHTmiR-109.016	D-3546	337	1,75	135	87,1
VOYHTmiR-104.579	D-3549	342	0,01	19	84,9

Пример 4. Последовательности HTT

[00643] Олигонуклеотиды, получаемые из HTT, синтезируют и формируют из них дуплексы, как приведено в таблице 3. Затем миРНК-дуплексы тестируют на активность ингибирования эндогенной экспрессии гена HTT in vitro.

Пример 5. Оценка in vitro экспрессирующих AAV-мкРНК векторов, содержащих направляющие цепи, направленные на HTT, и сопровождающие цепи

[00644] На основе предсказанной избирательности антисмысловой цепи к генам HTT человека, из некоторых из направляющих и сопровождающих цепей дуплексов HTT миРНК, перечисленных в таблице 3, конструируют экспрессирующие AAV-мкРНК векторы и осуществляют трансфекцию клеток центральной нервной системы, нейрональных клеточных линий или не нейрональных клеточных линий. Даже несмотря на то, что свисающий конец, используемые в исследовании миРНК нокдауна, представляет собой канонический dTdT для миРНК, свисающий конец в конструкциях может содержать любой динуклеотидный свисающий конец.

[00645] Используемые клетки могут представляют собой первичные клетки, клеточные линии или клетки, полученные из индуцированных плюрипотентных стволовых клеток (клетки iPS).

[00646] Затем измеряют нокдаун HTT и осуществляют глубокое секвенирование для того, чтобы количественно определять точные сопровождающие и направляющие цепи, процессированные в каждой конструкции, вводимой в экспрессирующем векторе.

[00647] Вычисляют соотношение направляющих и сопровождающих цепей.

[00648] 5'-конец направляющей цепи секвенируют для того, чтобы определять воспроизводимость расщепления и определять ожидаемый процент направляющей цепи в результате точного расщепления.

[00649] Экспрессирующие AAV-мкРНК векторы упаковывали в AAV2 и затем использовали для того, чтобы инфицировать клетки центральной нервной системы, нейрональные клеточные линии или не нейрональные клеточные линии, чтобы анализировать нокдаун HTT in vitro. Конструкцию mCherry или группу носителя используют в качестве отрицательного контроля.

[00650] Снова выполняют глубокое секвенирование.

Пример 6. Кассеты первичной мкРНК, содержащие направляющие последовательности, направленные на HTT, и сопровождающие последовательности

[00651] В соответствии с настоящим изобретением, разрабатывали конструкции, содержащие кассету первичной мкРНК и миРНК HTT, которые приведены в таблице 27. В таблицах описаны сопровождающие и направляющие цепи, а также 5'- и 3'-фланкирующие области и область петли (также обозначаемая как линкерная область). В таблице 27 компонент названия последовательности «miR» не обязательно соответствует нумерации последовательности в генах мкРНК (например, VOYHTmiR-102 представляет собой название последовательности и не обязательно обозначает, что miR-102 является частью последовательности).

Таблица 27. Кассеты первичной мкРНК, содержащие сопровождающие и направляющие последовательности (5'-3')

Название	SEQ ID NO: 5'-3'-фланк. область	SEQ ID NO: 5'-фланк. область	SEQ ID NO: сопров. область	SEQ ID NO: петли (линкера)	SEQ ID NO: направл. область	SEQ ID NO: 3'-фланк. область
VOYHTmiR-102.016	335	251	119	257	9	266
VOYHTmiR-102.214	270	251	120	257	11	266
VOYHTmiR-102.218	276	251	121	257	13	266
VOYHTmiR-102.219.n	288	251	116	257	3	266
VOYHTmiR-102.257	293	251	122	257	15	266
VOYHTmiR-102.372	311	251	123	257	17	266
VOYHTmiR-102.425	317	251	124	257	19	266
VOYHTmiR-102.579	341	251	105	257	7	266
VOYHTmiR-102.894	299	251	104	257	5	266
VOYHTmiR-102.907	305	251	125	257	21	266
VOYHTmiR-104.016	336	251	126	257	9	266
VOYHTmiR-104.214	271	251	127	257	11	266
VOYHTmiR-104.218	277	251	128	257	13	266
VOYHTmiR-104.219.n	289	251	117	257	3	266
VOYHTmiR-104.257	294	251	129	257	15	266
VOYHTmiR-104.372	312	251	130	257	17	266
VOYHTmiR-104.425	318	251	131	257	19	266
VOYHTmiR-104.579	342	251	108	257	7	266
VOYHTmiR-104.579.1	347	250	168	260	7	265
VOYHTmiR-104.579.10	368	256	171	264	7	269
VOYHTmiR-104.579.2	348	252	168	260	7	265
VOYHTmiR-104.579.3	349	252	168	261	7	265
VOYHTmiR-104.579.4	350	253	168	260	7	268
VOYHTmiR-104.579.5	367	252	170	263	30	265
VOYHTmiR-104.579.6	351	254	168	260	7	268
VOYHTmiR-104.579.7	352	255	168	260	29	265
VOYHTmiR-104.579.8	353	252	169	262	7	265
VOYHTmiR-104.579.9	354	256	168	260	7	269
VOYHTmiR-104.894	300	251	107	257	5	266
VOYHTmiR-104.907	306	251	132	257	21	266
VOYHTmiR-109.016	337	251	133	258	9	266
VOYHTmiR-109.214	272	251	135	258	11	266
VOYHTmiR-109.218	278	251	137	258	13	266
VOYHTmiR-109.219.n	290	251	116	258	3	266
VOYHTmiR-109.257	295	251	138	258	15	266
VOYHTmiR-109.372	313	251	139	258	17	266
VOYHTmiR-109.425	319	251	140	258	19	266
VOYHTmiR-109.579	343	251	105	258	7	266
VOYHTmiR-109.894	301	251	104	258	5	266
VOYHTmiR-109.907	307	251	142	258	21	266
VOYHTmiR-114.016	338	251	144	257	9	267
VOYHTmiR-114.214	273	251	145	257	11	267
VOYHTmiR-114.218	279	251	146	257	13	267
VOYHTmiR-114.219	285	251	109	257	3	267
VOYHTmiR-114.257	296	251	147	257	15	267
VOYHTmiR-114.372	314	251	148	257	17	267
VOYHTmiR-114.425	320	251	149	257	19	267
VOYHTmiR-114.579	344	251	111	257	7	267
VOYHTmiR-114.894	302	251	110	257	5	267
VOYHTmiR-114.907	308	251	150	257	21	267
VOYHTmiR-116.016	339	251	133	257	9	267
VOYHTmiR-116.214	274	251	135	257	11	267
VOYHTmiR-116.218	280	251	137	257	13	267
VOYHTmiR-116.219.n	291	251	118	257	3	267
VOYHTmiR-116.257	297	251	138	257	15	267
VOYHTmiR-116.372	315	251	139	257	17	267
VOYHTmiR-116.425	321	251	140	257	19	267
VOYHTmiR-116.579	345	251	114	257	7	267
VOYHTmiR-116.894	303	251	113	257	5	267
VOYHTmiR-116.907	309	251	142	257	21	267
VOYHTmiR-127.016	340	252	133	261	9	268
VOYHTmiR-127.214	275	252	135	261	5	268
VOYHTmiR-127.218	281	252	137	261	13	268
VOYHTmiR-127.219.n	292	252	116	261	3	268
VOYHTmiR-127.257	298	252	138	261	15	268
VOYHTmiR-127.372	316	252	139	261	17	268
VOYHTmiR-127.425	322	252	140	261	19	268
VOYHTmiR-127.579	346	252	105	261	7	268
VOYHTmiR-127.894	304	252	104	261	5	268
VOYHTmiR-127.907	310	252	142	261	21	268

Пример 7. Экспрессирующие AAV-мкРНК векторы

[00652] Конструкции, содержащие кассеты первичной мкРНК, которые содержат направляющие цепи, направленные на HTT, и сопровождающие цепи, конструировали в экспрессирующих AAV-мкРНК векторах (ss или sc). Конструкция экспрессирующего AAV-мкРНК вектора от ITR к ITR, в направлении от 5' к 3', содержит мутантный ITR или ITR дикого типа, любой из промотора (CMV (который включает интрон SV40), U6, H1, CBA (который включает энхансер CMVie, промотор CB и интрон SV40), кассету первичной мкРНК, содержащую направляющую последовательность, направленную на HTT, и сопровождающую последовательность (из таблицы 3), полиA глобина кролика и ITR дикого типа. Исследования in vitro и in vivo осуществляют для того, чтобы оценивать фармакологическую активность экспрессирующих AAV-мкРНК векторов.

Пример 8. Исследования экспрессирующих AAV-мкРНК векторов in vivo

A. Исследование эффекта in vivo

[00653] На основе супрессии HTT у мышей YAC128, соотношения направляющих и сопровождающих и воспроизводимости процессинга 5'-конца, выбранные экспрессирующие AAV-мкРНК векторы упаковывают в AAV1 (в виде ss или sc) с промотором CBA (AAV1.CBA.iHtt), формулируют в фосфатно-солевом буфере (PBS) с 0,001% F-68 и вводят мышам YAC128 для того, чтобы оценивать эффект. AAV1 векторы вводят мышам YAC128 в возрасте 7-12 недель через билатеральную интрастриарную инфузию в дозе приблизительно от 1E10 до 3E10 vg в 5 мкл в течение 10 минут на полушарие. Контрольную группу лечат носителем (PBS с 0,001% F-68). После введения тестового изделия осуществляют поведенческие тесты, в том числе с вращающимся стержнем и плавательный тест Порсолта, с предварительно определяемыми временными интервалами, чтобы оценивать эффект. В предварительно определяемые сутки после дозирования животных умерщвляют и пунктаты ткани полосатого тела собирают и быстро замораживают. Образцы ткани гомогенизируют и очищают общую РНК. Относительную экспрессию HTT определяют посредством qRT-ПЦР. Гены домашнего хозяйства для нормализации включали мышь XPNPEP1. HTT нормализуют по экспрессии гена домашнего хозяйства и затем дополнительно нормализуют по группе носителя. Образцы также используют для того, чтобы количественно определять белок HTT.

B. Исследование в NHP in vivo супрессии HTT, соотношения направляющих и сопровождающих и воспроизводимости процессинга 5'-конца

[00654] На основе супрессии HTT у мышей YAC128, соотношения направляющих и сопровождающих и воспроизводимости процессинга 5'-конца выбранные экспрессирующие AAV-мкРНК векторы упаковывают в AAV1 с промотором CBA (AAV1.CBA.iHtt), формулируют в фосфатно-солевом буфере (PBS) с 0,001% F-68 и вводят не являющимся человеком приматам посредством интрапаренхимальной инфузии в головной мозг. Контрольную группу лечат носителем (PBS с 0,001% F-68). Относительную экспрессию мРНК HTT, соотношение направляющих и сопровождающих и воспроизводимость процессинга 5'-конца определяют в различных образцах ткани в предварительно определяемое время после дозирования.

[00655] Хотя настоящее изобретение описано довольно подробно и с некоторой конкретикой в отношении нескольких описанных вариантов осуществления, не предусмотрено, что оно должно быть ограничено любой такой конкретикой или вариантами осуществления или любым конкретным вариантом осуществления, но его следует толковать со ссылками на приложенную формулу изобретения с тем, чтобы обеспечивать самую широкую возможную интерпретацию такой формулы изобретения ввиду известного уровня техники и, следовательно, эффективно охватывать предполагаемый объем изобретения.

[00656] Все публикации, патентные заявки, патенты и другие источники, упоминаемые в настоящем документе, включены в данное описание посредством ссылки в полном объеме. В случае противоречия, данное описание, в том числе определения, имеет решающее значение. Кроме того, заголовки разделов, материалы, способы и примеры являются только иллюстративными и не предназначены в качестве ограничения.

--->

СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> VOYAGER THERAPEUTICS, INC.

<120> СПОСОБЫ И КОМПОЗИЦИИ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ХОРЕИ ГЕНТИНГТОНА

<130> 2057.1035PCT

<140> PCT/US2017/201258

<141> 2017-05-18

<150> 62/485,049

<151> 2017-04-13

<150> 62/338,113

<151> 2016-05-18

<160> 1283

<170> PatentIn версии 3.5

<210> 1

<211> 3137

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 1

Met Ala Thr Leu Glu Lys Leu Met Lys Ala Phe Glu Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

Phe Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln

20 25 30

Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Pro Pro Pro Pro Pro Pro Pro Pro

35 40 45

Pro Pro Pro Gln Leu Pro Gln Pro Pro Pro Gln Ala Gln Pro Leu Leu

50 55 60

Pro Gln Pro Gln Pro Pro Pro Pro Pro Pro Pro Pro Pro Pro Gly Pro

65 70 75 80

Ala Val Ala Glu Glu Pro Leu His Arg Pro Lys Lys Glu Leu Ser Ala

85 90 95

Thr Lys Lys Asp Arg Val Asn His Cys Leu Thr Ile Cys Glu Asn Ile

100 105 110

Val Ala Gln Ser Val Arg Asn Ser Pro Glu Phe Gln Lys Leu Leu Gly

115 120 125

Ile Ala Met Glu Leu Phe Leu Leu Cys Ser Asp Asp Ala Glu Ser Asp

130 135 140

Val Arg Met Val Ala Asp Glu Cys Leu Asn Lys Val Ile Lys Ala Leu

145 150 155 160

Met Asp Ser Asn Leu Pro Arg Leu Gln Leu Glu Leu Tyr Lys Glu Ile

165 170 175

Lys Lys Asn Gly Ala Pro Arg Ser Leu Arg Ala Ala Leu Trp Arg Phe

180 185 190

Ala Glu Leu Ala His Leu Val Arg Pro Gln Lys Cys Arg Pro Tyr Leu

195 200 205

Val Asn Leu Leu Pro Cys Leu Thr Arg Thr Ser Lys Arg Pro Glu Glu

210 215 220

Ser Val Gln Glu Thr Leu Ala Ala Ala Val Pro Lys Ile Met Ala Ser

225 230 235 240

Phe Gly Asn Phe Ala Asn Asp Asn Glu Ile Lys Val Leu Leu Lys Ala

245 250 255

Phe Ile Ala Asn Leu Lys Ser Ser Ser Pro Thr Ile Arg Arg Thr Ala

260 265 270

Ala Gly Ser Ala Val Ser Ile Cys Gln His Ser Arg Arg Thr Gln Tyr

275 280 285

Phe Tyr Ser Trp Leu Leu Asn Val Leu Leu Gly Leu Leu Val Pro Val

290 295 300

Glu Asp Glu His Ser Thr Leu Leu Ile Leu Gly Val Leu Leu Thr Leu

305 310 315 320

Arg Tyr Leu Val Pro Leu Leu Gln Gln Gln Val Lys Thr Ser Leu Lys

325 330 335

Gly Ser Phe Gly Val Thr Arg Lys Glu Met Glu Val Ser Pro Ser Ala

340 345 350

Glu Gln Leu Val Gln Val Tyr Glu Leu Thr Leu His His Thr Gln His

355 360 365

Gln Asp His Asn Val Val Thr Gly Ala Leu Glu Leu Leu Gln Gln Leu

370 375 380

Phe Arg Thr Pro Pro Pro Glu Leu Leu Gln Thr Leu Thr Ala Val Gly

385 390 395 400

Gly Ile Gly Gln Leu Thr Ala Ala Lys Glu Glu Ser Gly Gly Arg Ser

405 410 415

Arg Ser Gly Ser Ile Val Glu Leu Ile Ala Gly Gly Gly Ser Ser Cys

420 425 430

Ser Pro Val Leu Ser Arg Lys Gln Lys Gly Lys Val Leu Leu Gly Glu

435 440 445

Glu Glu Ala Leu Glu Asp Asp Ser Glu Ser Arg Ser Asp Val Ser Ser

450 455 460

Ser Ala Leu Thr Ala Ser Val Lys Asp Glu Ile Ser Gly Glu Leu Ala

465 470 475 480

Ala Ser Ser Gly Val Ser Thr Pro Gly Ser Ala Gly His Asp Ile Ile

485 490 495

Thr Glu Gln Pro Arg Ser Gln His Thr Leu Gln Ala Asp Ser Val Asp

500 505 510

Leu Ala Ser Cys Asp Leu Thr Ser Ser Ala Thr Asp Gly Asp Glu Glu

515 520 525

Asp Ile Leu Ser His Ser Ser Ser Gln Val Ser Ala Val Pro Ser Asp

530 535 540

Pro Ala Met Asp Leu Asn Asp Gly Thr Gln Ala Ser Ser Pro Ile Ser

545 550 555 560

Asp Ser Ser Gln Thr Thr Thr Glu Gly Pro Asp Ser Ala Val Thr Pro

565 570 575

Ser Asp Ser Ser Glu Ile Val Leu Asp Gly Thr Asp Asn Gln Tyr Leu

580 585 590

Gly Leu Gln Ile Gly Gln Pro Gln Asp Glu Asp Glu Glu Ala Thr Gly

595 600 605

Ile Leu Pro Asp Glu Ala Ser Glu Ala Phe Arg Asn Ser Ser Met Ala

610 615 620

Leu Gln Gln Ala His Leu Leu Lys Asn Met Ser His Cys Arg Gln Pro

625 630 635 640

Ser Asp Ser Ser Val Asp Lys Phe Val Leu Arg Asp Glu Ala Thr Glu

645 650 655

Pro Gly Asp Gln Glu Asn Lys Pro Cys Arg Ile Lys Gly Asp Ile Gly

660 665 670

Gln Ser Thr Asp Asp Asp Ser Ala Pro Leu Val His Cys Val Arg Leu

675 680 685

Leu Ser Ala Ser Phe Leu Leu Thr Gly Gly Lys Asn Val Leu Val Pro

690 695 700

Asp Arg Asp Val Arg Val Ser Val Lys Ala Leu Ala Leu Ser Cys Val

705 710 715 720

Gly Ala Ala Val Ala Leu His Pro Glu Ser Phe Phe Ser Lys Leu Tyr

725 730 735

Lys Val Pro Leu Thr Thr Glu Tyr Pro Glu Glu Gln Tyr Val Ser Asp

740 745 750

Ile Leu Asn Tyr Ile Asp His Gly Asp Pro Gln Val Arg Gly Ala Thr

755 760 765

Ala Ile Leu Cys Gly Thr Leu Ile Cys Ser Ile Leu Ser Arg Ser Arg

770 775 780

Phe His Val Gly Asp Trp Met Gly Thr Ile Arg Thr Leu Thr Gly Asn

785 790 795 800

Thr Phe Ser Leu Ala Asp Cys Ile Pro Leu Leu Arg Lys Thr Leu Lys

805 810 815

Asp Glu Ser Ser Val Thr Cys Lys Leu Ala Cys Thr Ala Val Arg Asn

820 825 830

Cys Val Met Ser Leu Cys Ser Ser Ser Tyr Ser Glu Leu Gly Leu Gln

835 840 845

Leu Ile Ile Asp Val Leu Thr Leu Arg Asn Ser Ser Tyr Trp Leu Val

850 855 860

Arg Thr Glu Leu Leu Glu Thr Leu Ala Glu Ile Asp Phe Arg Leu Val

865 870 875 880

Ser Phe Leu Glu Ala Lys Ala Glu Asn Leu His Arg Gly Ala His His

885 890 895

Tyr Thr Gly Leu Leu Lys Leu Gln Glu Arg Val Leu Asn Asn Val Val

900 905 910

Ile His Leu Leu Gly Asp Glu Asp Pro Arg Val Arg His Val Ala Ala

915 920 925

Ala Ser Leu Ile Arg Leu Val Pro Lys Leu Phe Tyr Lys Cys Asp Gln

930 935 940

Gly Gln Ala Asp Pro Val Val Ala Val Ala Arg Asp Gln Ser Ser Val

945 950 955 960

Tyr Leu Lys Leu Leu Met His Glu Thr Gln Pro Pro Ser His Phe Ser

965 970 975

Val Ser Thr Ile Thr Arg Ile Tyr Arg Gly Tyr Asn Leu Leu Pro Ser

980 985 990

Ile Thr Asp Val Thr Met Glu Asn Asn Leu Ser Arg Val Ile Ala Ala

995 1000 1005

Val Ser His Glu Leu Ile Thr Ser Thr Thr Arg Ala Leu Thr Phe

1010 1015 1020

Gly Cys Cys Glu Ala Leu Cys Leu Leu Ser Thr Ala Phe Pro Val

1025 1030 1035

Cys Ile Trp Ser Leu Gly Trp His Cys Gly Val Pro Pro Leu Ser

1040 1045 1050

Ala Ser Asp Glu Ser Arg Lys Ser Cys Thr Val Gly Met Ala Thr

1055 1060 1065

Met Ile Leu Thr Leu Leu Ser Ser Ala Trp Phe Pro Leu Asp Leu

1070 1075 1080

Ser Ala His Gln Asp Ala Leu Ile Leu Ala Gly Asn Leu Leu Ala

1085 1090 1095

Ala Ser Ala Pro Lys Ser Leu Arg Ser Ser Trp Ala Ser Glu Glu

1100 1105 1110

Glu Ala Asn Pro Ala Ala Thr Lys Gln Glu Glu Val Trp Pro Ala

1115 1120 1125

Leu Gly Asp Arg Ala Leu Val Pro Met Val Glu Gln Leu Phe Ser

1130 1135 1140

His Leu Leu Lys Val Ile Asn Ile Cys Ala His Val Leu Asp Asp

1145 1150 1155

Val Ala Pro Gly Pro Ala Ile Lys Ala Ala Leu Pro Ser Leu Thr

1160 1165 1170

Asn Pro Pro Ser Leu Ser Pro Ile Arg Arg Lys Gly Lys Glu Lys

1175 1180 1185

Glu Pro Gly Glu Gln Ala Ser Val Pro Leu Ser Pro Lys Lys Gly

1190 1195 1200

Ser Glu Ala Ser Ala Ala Ser Arg Gln Ser Thr Ser Gly Pro Val

1205 1210 1215

Thr Thr Ser Lys Ser Ser Ser Leu Gly Ser Phe Tyr His Leu Pro

1220 1225 1230

Ser Tyr Leu Lys Leu His Asp Val Leu Lys Ala Thr His Ala Asn

1235 1240 1245

Tyr Lys Val Thr Leu Asp Leu Gln Asn Ser Thr Glu Lys Phe Gly

1250 1255 1260

Gly Phe Leu Arg Ser Ala Leu Asp Val Leu Ser Gln Ile Leu Glu

1265 1270 1275

Leu Ala Thr Leu Gln Asp Ile Gly Lys Cys Val Glu Glu Ile Leu

1280 1285 1290

Gly Tyr Leu Lys Ser Cys Phe Ser Arg Glu Pro Met Met Ala Thr

1295 1300 1305

Val Cys Val Gln Gln Leu Leu Lys Thr Leu Phe Gly Thr Asn Leu

1310 1315 1320

Ala Ser Gln Phe Asp Gly Leu Ser Ser Asn Pro Ser Lys Ser Gln

1325 1330 1335

Gly Arg Ala Gln Arg Leu Gly Ser Ser Ser Val Arg Pro Gly Leu

1340 1345 1350

Tyr His Tyr Cys Phe Met Ala Pro Tyr Thr His Phe Thr Gln Ala

1355 1360 1365

Leu Ala Asp Ala Ser Leu Arg Asn Met Val Gln Ala Glu Gln Glu

1370 1375 1380

Asn Thr Ser Gly Trp Phe Asp Val Leu Gln Lys Val Ser Thr Gln

1385 1390 1395

Leu Lys Thr Asn Leu Thr Ser Val Thr Lys Asn Arg Ala Asp Lys

1400 1405 1410

Asn Ala Ile His Asn His Ile Arg Leu Phe Glu Pro Leu Val Ile

1415 1420 1425

Lys Ala Leu Lys Gln Tyr Thr Thr Thr Thr Cys Val Gln Leu Gln

1430 1435 1440

Lys Gln Val Leu Asp Leu Leu Ala Gln Leu Val Gln Leu Arg Val

1445 1450 1455

Asn Tyr Cys Leu Leu Asp Ser Asp Gln Val Phe Ile Gly Phe Val

1460 1465 1470

Leu Lys Gln Phe Glu Tyr Ile Glu Val Gly Gln Phe Arg Glu Ser

1475 1480 1485

Glu Ala Ile Ile Pro Asn Ile Phe Phe Phe Leu Val Leu Leu Ser

1490 1495 1500

Tyr Glu Arg Tyr His Ser Lys Gln Ile Ile Gly Ile Pro Lys Ile

1505 1510 1515

Ile Gln Leu Cys Asp Gly Ile Met Ala Ser Gly Arg Lys Ala Val

1520 1525 1530

Thr His Ala Ile Pro Ala Leu Gln Pro Ile Val His Asp Leu Phe

1535 1540 1545

Val Leu Arg Gly Thr Asn Lys Ala Asp Ala Gly Lys Glu Leu Glu

1550 1555 1560

Thr Gln Lys Glu Val Val Val Ser Met Leu Leu Arg Leu Ile Gln

1565 1570 1575

Tyr His Gln Val Leu Glu Met Phe Ile Leu Val Leu Gln Gln Cys

1580 1585 1590

His Lys Glu Asn Glu Asp Lys Trp Lys Arg Leu Ser Arg Gln Ile

1595 1600 1605

Ala Asp Ile Ile Leu Pro Met Leu Ala Lys Gln Gln Met His Ile

1610 1615 1620

Asp Ser His Glu Ala Leu Gly Val Leu Asn Thr Leu Phe Glu Ile

1625 1630 1635

Leu Ala Pro Ser Ser Leu Arg Pro Val Asp Met Leu Leu Arg Ser

1640 1645 1650

Met Phe Val Thr Pro Asn Thr Met Ala Ser Val Ser Thr Val Gln

1655 1660 1665

Leu Trp Ile Ser Gly Ile Leu Ala Ile Leu Arg Val Leu Ile Ser

1670 1675 1680

Gln Ser Thr Glu Asp Ile Val Leu Ser Arg Ile Gln Glu Leu Ser

1685 1690 1695

Phe Ser Pro Tyr Leu Ile Ser Cys Thr Val Ile Asn Arg Leu Arg

1700 1705 1710

Asp Gly Asp Ser Thr Ser Thr Leu Glu Glu His Ser Glu Gly Lys

1715 1720 1725

Gln Ile Lys Asn Leu Pro Glu Glu Thr Phe Ser Arg Phe Leu Leu

1730 1735 1740

Gln Leu Val Gly Ile Leu Leu Glu Asp Ile Val Thr Lys Gln Leu

1745 1750 1755

Lys Val Glu Met Ser Glu Gln Gln His Thr Phe Tyr Cys Gln Glu

1760 1765 1770

Leu Gly Thr Leu Leu Met Cys Leu Ile His Ile Phe Lys Ser Gly

1775 1780 1785

Met Phe Arg Arg Ile Thr Ala Ala Ala Thr Arg Leu Phe Arg Ser

1790 1795 1800

Asp Gly Cys Gly Gly Ser Phe Tyr Thr Leu Asp Ser Leu Asn Leu

1805 1810 1815

Arg Ala Arg Ser Met Ile Thr Thr His Pro Ala Leu Val Leu Leu

1820 1825 1830

Trp Cys Gln Ile Leu Leu Leu Val Asn His Thr Asp Tyr Arg Trp

1835 1840 1845

Trp Ala Glu Val Gln Gln Thr Pro Lys Arg His Ser Leu Ser Ser

1850 1855 1860

Thr Lys Leu Leu Ser Pro Gln Met Ser Gly Glu Glu Glu Asp Ser

1865 1870 1875

Asp Leu Ala Ala Lys Leu Gly Met Cys Asn Arg Glu Ile Val Arg

1880 1885 1890

Arg Gly Ala Leu Ile Leu Phe Cys Asp Tyr Val Cys Gln Asn Leu

1895 1900 1905

His Asp Ser Glu His Leu Thr Trp Leu Ile Val Asn His Ile Gln

1910 1915 1920

Asp Leu Ile Ser Leu Ser His Glu Pro Pro Val Gln Asp Phe Ile

1925 1930 1935

Ser Ala Val His Arg Asn Ser Ala Ala Ser Gly Leu Phe Ile Gln

1940 1945 1950

Ala Ile Gln Ser Arg Cys Glu Asn Leu Ser Thr Pro Thr Met Leu

1955 1960 1965

Lys Lys Thr Leu Gln Cys Leu Glu Gly Ile His Leu Ser Gln Ser

1970 1975 1980

Gly Ala Val Leu Thr Leu Tyr Val Asp Arg Leu Leu Cys Thr Pro

1985 1990 1995

Phe Arg Val Leu Ala Arg Met Val Asp Ile Leu Ala Cys Arg Arg

2000 2005 2010

Val Glu Met Leu Leu Ala Ala Asn Leu Gln Ser Ser Met Ala Gln

2015 2020 2025

Leu Pro Met Glu Glu Leu Asn Arg Ile Gln Glu Tyr Leu Gln Ser

2030 2035 2040

Ser Gly Leu Ala Gln Arg His Gln Arg Leu Tyr Ser Leu Leu Asp

2045 2050 2055

Arg Phe Arg Leu Ser Thr Met Gln Asp Ser Leu Ser Pro Ser Pro

2060 2065 2070

Pro Val Ser Ser His Pro Leu Asp Gly Asp Gly His Val Ser Leu

2075 2080 2085

Glu Thr Val Ser Pro Asp Lys Asp Trp Tyr Val His Leu Val Lys

2090 2095 2100

Ser Gln Cys Trp Thr Arg Ser Asp Ser Ala Leu Leu Glu Gly Ala

2105 2110 2115

Glu Leu Val Asn Arg Ile Pro Ala Glu Asp Met Asn Ala Phe Met

2120 2125 2130

Met Asn Ser Glu Phe Asn Leu Ser Leu Leu Ala Pro Cys Leu Ser

2135 2140 2145

Leu Gly Met Ser Glu Ile Ser Gly Gly Gln Lys Ser Ala Leu Phe

2150 2155 2160

Glu Ala Ala Arg Glu Val Thr Leu Ala Arg Val Ser Gly Thr Val

2165 2170 2175

Gln Gln Leu Pro Ala Val His His Val Phe Gln Pro Glu Leu Pro

2180 2185 2190

Ala Glu Pro Ala Ala Tyr Trp Ser Lys Leu Asn Asp Leu Phe Gly

2195 2200 2205

Asp Ala Ala Leu Tyr Gln Ser Leu Pro Thr Leu Ala Arg Ala Leu

2210 2215 2220

Ala Gln Tyr Leu Val Val Val Ser Lys Leu Pro Ser His Leu His

2225 2230 2235

Leu Pro Pro Glu Lys Glu Lys Asp Ile Val Lys Phe Val Val Ala

2240 2245 2250

Thr Leu Glu Ala Leu Ser Trp His Leu Ile His Glu Gln Ile Pro

2255 2260 2265

Leu Ser Leu Asp Leu Gln Ala Gly Leu Asp Cys Cys Cys Leu Ala

2270 2275 2280

Leu Gln Leu Pro Gly Leu Trp Ser Val Val Ser Ser Thr Glu Phe

2285 2290 2295

Val Thr His Ala Cys Ser Leu Ile Tyr Cys Val His Phe Ile Leu

2300 2305 2310

Glu Ala Val Ala Val Gln Pro Gly Glu Gln Leu Leu Ser Pro Glu

2315 2320 2325

Arg Arg Thr Asn Thr Pro Lys Ala Ile Ser Glu Glu Glu Glu Glu

2330 2335 2340

Val Asp Pro Asn Thr Gln Asn Pro Lys Tyr Ile Thr Ala Ala Cys

2345 2350 2355

Glu Met Val Ala Glu Met Val Glu Ser Leu Gln Ser Val Leu Ala

2360 2365 2370

Leu Gly His Lys Arg Asn Ser Gly Val Pro Ala Phe Leu Thr Pro

2375 2380 2385

Leu Leu Arg Asn Ile Ile Ile Ser Leu Ala Arg Leu Pro Leu Val

2390 2395 2400

Asn Ser Tyr Thr Arg Val Pro Pro Leu Val Trp Lys Leu Gly Trp

2405 2410 2415

Ser Pro Lys Pro Gly Gly Asp Phe Gly Thr Ala Phe Pro Glu Ile

2420 2425 2430

Pro Val Glu Phe Leu Gln Glu Lys Glu Val Phe Lys Glu Phe Ile

2435 2440 2445

Tyr Arg Ile Asn Thr Leu Gly Trp Thr Ser Arg Thr Gln Phe Glu

2450 2455 2460

Glu Thr Trp Ala Thr Leu Leu Gly Val Leu Val Thr Gln Pro Leu

2465 2470 2475

Val Met Glu Gln Glu Glu Ser Pro Pro Glu Glu Thr Glu Arg Thr

2480 2485 2490

Gln Ile Asn Val Leu Ala Val Gln Ala Ile Thr Ser Leu Val Leu

2495 2500 2505

Ser Ala Met Thr Val Pro Val Ala Gly Asn Pro Ala Val Ser Cys

2510 2515 2520

Leu Glu Gln Gln Pro Arg Asn Lys Pro Leu Lys Ala Leu Thr Arg

2525 2530 2535

Phe Gly Arg Lys Leu Ser Ile Ile Arg Gly Ile Val Glu Gln Glu

2540 2545 2550

Ile Gln Ala Met Val Ser Lys Arg Glu Asn Ile Ala Thr His His

2555 2560 2565

Leu Tyr Gln Ala Trp Asp Pro Val Pro Ser Leu Ser Pro Ala Thr

2570 2575 2580

Thr Gly Ala Leu Ile Ser His Glu Lys Leu Leu Leu Gln Ile Asn

2585 2590 2595

Pro Glu Arg Glu Leu Gly Ser Met Ser Tyr Lys Leu Gly Gln Val

2600 2605 2610

Ser Ile His Ser Val Trp Leu Gly Asn Ser Ile Thr Pro Leu Arg

2615 2620 2625

Glu Glu Glu Trp Asp Glu Glu Glu Glu Glu Glu Ala Asp Ala Pro

2630 2635 2640

Ala Pro Ser Ser Pro Pro Thr Ser Pro Val Asn Ser Arg Lys His

2645 2650 2655

Arg Ala Gly Val Asp Ile His Ser Cys Ser Gln Phe Leu Leu Glu

2660 2665 2670

Leu Tyr Ser Arg Trp Ile Leu Pro Ser Ser Ser Ala Arg Arg Thr

2675 2680 2685

Pro Ala Ile Leu Ile Ser Glu Val Val Arg Ser Leu Leu Val Val

2690 2695 2700

Ser Asp Leu Phe Thr Glu Arg Asn Gln Phe Glu Leu Met Tyr Val

2705 2710 2715

Thr Leu Thr Glu Leu Arg Arg Val His Pro Ser Glu Asp Glu Ile

2720 2725 2730

Leu Ala Gln Tyr Leu Val Pro Ala Thr Cys Lys Ala Ala Ala Val

2735 2740 2745

Leu Gly Met Asp Lys Ala Val Ala Glu Pro Val Ser Arg Leu Leu

2750 2755 2760

Glu Ser Thr Leu Arg Ser Ser His Leu Pro Ser Arg Val Gly Ala

2765 2770 2775

Leu His Gly Val Leu Tyr Val Leu Glu Cys Asp Leu Leu Asp Thr

2780 2785 2790

Ala Lys Gln Leu Ile Pro Val Ile Ser Asp Tyr Leu Leu Ser Asn

2795 2800 2805

Leu Lys Gly Ile Ala His Cys Val Asn Ile His Ser Gln Gln His

2810 2815 2820

Val Leu Val Met Cys Ala Thr Ala Phe Tyr Leu Ile Glu Asn Tyr

2825 2830 2835

Pro Leu Asp Val Gly Pro Glu Phe Ser Ala Ser Ile Ile Gln Met

2840 2845 2850

Cys Gly Val Met Leu Ser Gly Ser Glu Glu Ser Thr Pro Ser Ile

2855 2860 2865

Ile Tyr His Cys Ala Leu Arg Gly Leu Glu Arg Leu Leu Leu Ser

2870 2875 2880

Glu Gln Leu Ser Arg Leu Asp Ala Glu Ser Leu Val Lys Leu Ser

2885 2890 2895

Val Asp Arg Val Asn Val His Ser Pro His Arg Ala Met Ala Ala

2900 2905 2910

Leu Gly Leu Met Leu Thr Cys Met Tyr Thr Gly Lys Glu Lys Val

2915 2920 2925

Ser Pro Gly Arg Thr Ser Asp Pro Asn Pro Ala Ala Pro Asp Ser

2930 2935 2940

Glu Ser Val Ile Val Ala Met Glu Arg Val Ser Val Leu Phe Asp

2945 2950 2955

Arg Ile Arg Lys Gly Phe Pro Cys Glu Ala Arg Val Val Ala Arg

2960 2965 2970

Ile Leu Pro Gln Phe Leu Asp Asp Phe Phe Pro Pro Gln Asp Ile

2975 2980 2985

Met Asn Lys Val Ile Gly Glu Phe Leu Ser Asn Gln Gln Pro Tyr

2990 2995 3000

Pro Gln Phe Met Ala Thr Val Val Tyr Lys Val Phe Gln Thr Leu

3005 3010 3015

His Ser Thr Gly Gln Ser Ser Met Val Arg Asp Trp Val Met Leu

3020 3025 3030

Ser Leu Ser Asn Phe Thr Gln Arg Ala Pro Val Ala Met Ala Thr

3035 3040 3045

Trp Ser Leu Ser Cys Phe Phe Val Ser Ala Ser Thr Ser Pro Trp

3050 3055 3060

Val Ala Ala Ile Leu Pro His Val Ile Ser Arg Met Gly Lys Leu

3065 3070 3075

Glu Gln Val Asp Val Asn Leu Phe Cys Leu Val Ala Thr Asp Phe

3080 3085 3090

Tyr Arg His Gln Ile Glu Glu Glu Leu Asp Arg Arg Ala Phe Gln

3095 3100 3105

Ser Val Leu Glu Val Val Ala Ala Pro Gly Ser Pro Tyr His Arg

3110 3115 3120

Leu Leu Thr Cys Leu Arg Asn Val His Lys Val Thr Thr Cys

3125 3130 3135

<210> 2

<211> 13669

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<400> 2

ttgctgtgtg aggcagaacc tgcgggggca ggggcgggct ggttccctgg ccagccattg 60

gcagagtccg caggctaggg ctgtcaatca tgctggccgg cgtggccccg cctccgccgg 120

cgcggccccg cctccgccgg cgcagcgtct gggacgcaag gcgccgtggg ggctgccggg 180

acgggtccaa gatggacggc cgctcaggtt ctgcttttac ctgcggccca gagccccatt 240

cattgccccg gtgctgagcg gcgccgcgag tcggcccgag gcctccgggg actgccgtgc 300

cgggcgggag accgccatgg cgaccctgga aaagctgatg aaggccttcg agtccctcaa 360

gtccttccag cagcagcagc agcagcagca gcagcagcag cagcagcagc agcagcagca 420

gcagcagcag caacagccgc caccgccgcc gccgccgccg ccgcctcctc agcttcctca 480

gccgccgccg caggcacagc cgctgctgcc tcagccgcag ccgcccccgc cgccgccccc 540

gccgccaccc ggcccggctg tggctgagga gccgctgcac cgaccaaaga aagaactttc 600

agctaccaag aaagaccgtg tgaatcattg tctgacaata tgtgaaaaca tagtggcaca 660

gtctgtcaga aattctccag aatttcagaa acttctgggc atcgctatgg aactttttct 720

gctgtgcagt gatgacgcag agtcagatgt caggatggtg gctgacgaat gcctcaacaa 780

agttatcaaa gctttgatgg attctaatct tccaaggtta cagctcgagc tctataagga 840

aattaaaaag aatggtgccc ctcggagttt gcgtgctgcc ctgtggaggt ttgctgagct 900

ggctcacctg gttcggcctc agaaatgcag gccttacctg gtgaaccttc tgccgtgcct 960

gactcgaaca agcaagagac ccgaagaatc agtccaggag accttggctg cagctgttcc 1020

caaaattatg gcttcttttg gcaattttgc aaatgacaat gaaattaagg ttttgttaaa 1080

ggccttcata gcgaacctga agtcaagctc ccccaccatt cggcggacag cggctggatc 1140

agcagtgagc atctgccagc actcaagaag gacacaatat ttctatagtt ggctactaaa 1200

tgtgctctta ggcttactcg ttcctgtcga ggatgaacac tccactctgc tgattcttgg 1260

cgtgctgctc accctgaggt atttggtgcc cttgctgcag cagcaggtca aggacacaag 1320

cctgaaaggc agcttcggag tgacaaggaa agaaatggaa gtctctcctt ctgcagagca 1380

gcttgtccag gtttatgaac tgacgttaca tcatacacag caccaagacc acaatgttgt 1440

gaccggagcc ctggagctgt tgcagcagct cttcagaacg cctccacccg agcttctgca 1500

aaccctgacc gcagtcgggg gcattgggca gctcaccgct gctaaggagg agtctggtgg 1560

ccgaagccgt agtgggagta ttgtggaact tatagctgga gggggttcct catgcagccc 1620

tgtcctttca agaaaacaaa aaggcaaagt gctcttagga gaagaagaag ccttggagga 1680

tgactctgaa tcgagatcgg atgtcagcag ctctgcctta acagcctcag tgaaggatga 1740

gatcagtgga gagctggctg cttcttcagg ggtttccact ccagggtcag caggtcatga 1800

catcatcaca gaacagccac ggtcacagca cacactgcag gcggactcag tggatctggc 1860

cagctgtgac ttgacaagct ctgccactga tggggatgag gaggatatct tgagccacag 1920

ctccagccag gtcagcgccg tcccatctga ccctgccatg gacctgaatg atgggaccca 1980

ggcctcgtcg cccatcagcg acagctccca gaccaccacc gaagggcctg attcagctgt 2040

taccccttca gacagttctg aaattgtgtt agacggtacc gacaaccagt atttgggcct 2100

gcagattgga cagccccagg atgaagatga ggaagccaca ggtattcttc ctgatgaagc 2160

ctcggaggcc ttcaggaact cttccatggc ccttcaacag gcacatttat tgaaaaacat 2220

gagtcactgc aggcagcctt ctgacagcag tgttgataaa tttgtgttga gagatgaagc 2280

tactgaaccg ggtgatcaag aaaacaagcc ttgccgcatc aaaggtgaca ttggacagtc 2340

cactgatgat gactctgcac ctcttgtcca ttgtgtccgc cttttatctg cttcgttttt 2400

gctaacaggg ggaaaaaatg tgctggttcc ggacagggat gtgagggtca gcgtgaaggc 2460

cctggccctc agctgtgtgg gagcagctgt ggccctccac ccggaatctt tcttcagcaa 2520

actctataaa gttcctcttg acaccacgga ataccctgag gaacagtatg tctcagacat 2580

cttgaactac atcgatcatg gagacccaca ggttcgagga gccactgcca ttctctgtgg 2640

gaccctcatc tgctccatcc tcagcaggtc ccgcttccac gtgggagatt ggatgggcac 2700

cattagaacc ctcacaggaa atacattttc tttggcggat tgcattcctt tgctgcggaa 2760

aacactgaag gatgagtctt ctgttacttg caagttagct tgtacagctg tgaggaactg 2820

tgtcatgagt ctctgcagca gcagctacag tgagttagga ctgcagctga tcatcgatgt 2880

gctgactctg aggaacagtt cctattggct ggtgaggaca gagcttctgg aaacccttgc 2940

agagattgac ttcaggctgg tgagcttttt ggaggcaaaa gcagaaaact tacacagagg 3000

ggctcatcat tatacagggc ttttaaaact gcaagaacga gtgctcaata atgttgtcat 3060

ccatttgctt ggagatgaag accccagggt gcgacatgtt gccgcagcat cactaattag 3120

gcttgtccca aagctgtttt ataaatgtga ccaaggacaa gctgatccag tagtggccgt 3180

ggcaagagat caaagcagtg tttacctgaa acttctcatg catgagacgc agcctccatc 3240

tcatttctcc gtcagcacaa taaccagaat atatagaggc tataacctac taccaagcat 3300

aacagacgtc actatggaaa ataacctttc aagagttatt gcagcagttt ctcatgaact 3360

aatcacatca accaccagag cactcacatt tggatgctgt gaagctttgt gtcttctttc 3420

cactgccttc ccagtttgca tttggagttt aggttggcac tgtggagtgc ctccactgag 3480

tgcctcagat gagtctagga agagctgtac cgttgggatg gccacaatga ttctgaccct 3540

gctctcgtca gcttggttcc cattggatct ctcagcccat caagatgctt tgattttggc 3600

cggaaacttg cttgcagcca gtgctcccaa atctctgaga agttcatggg cctctgaaga 3660

agaagccaac ccagcagcca ccaagcaaga ggaggtctgg ccagccctgg gggaccgggc 3720

cctggtgccc atggtggagc agctcttctc tcacctgctg aaggtgatta acatttgtgc 3780

ccacgtcctg gatgacgtgg ctcctggacc cgcaataaag gcagccttgc cttctctaac 3840

aaacccccct tctctaagtc ccatccgacg aaaggggaag gagaaagaac caggagaaca 3900

agcatctgta ccgttgagtc ccaagaaagg cagtgaggcc agtgcagctt ctagacaatc 3960

tgatacctca ggtcctgtta caacaagtaa atcctcatca ctggggagtt tctatcatct 4020

tccttcatac ctcaaactgc atgatgtcct gaaagctaca cacgctaact acaaggtcac 4080

gctggatctt cagaacagca cggaaaagtt tggagggttt ctccgctcag ccttggatgt 4140

tctttctcag atactagagc tggccacact gcaggacatt gggaagtgtg ttgaagagat 4200

cctaggatac ctgaaatcct gctttagtcg agaaccaatg atggcaactg tttgtgttca 4260

acaattgttg aagactctct ttggcacaaa cttggcctcc cagtttgatg gcttatcttc 4320

caaccccagc aagtcacaag gccgagcaca gcgccttggc tcctccagtg tgaggccagg 4380

cttgtaccac tactgcttca tggccccgta cacccacttc acccaggccc tcgctgacgc 4440

cagcctgagg aacatggtgc aggcggagca ggagaacgac acctcgggat ggtttgatgt 4500

cctccagaaa gtgtctaccc agttgaagac aaacctcacg agtgtcacaa agaaccgtgc 4560

agataagaat gctattcata atcacattcg tttgtttgaa cctcttgtta taaaagcttt 4620

aaaacagtac acgactacaa catgtgtgca gttacagaag caggttttag atttgctggc 4680

gcagctggtt cagttacggg ttaattactg tcttctggat tcagatcagg tgtttattgg 4740

ctttgtattg aaacagtttg aatacattga agtgggccag ttcagggaat cagaggcaat 4800

cattccaaac atctttttct tcttggtatt actatcttat gaacgctatc attcaaaaca 4860

gatcattgga attcctaaaa tcattcagct ctgtgatggc atcatggcca gtggaaggaa 4920

ggctgtgaca catgccatac cggctctgca gcccatagtc cacgacctct ttgtattaag 4980

aggaacaaat aaagctgatg caggaaaaga gcttgaaacc caaaaagagg tggtggtgtc 5040

aatgttactg agactcatcc agtaccatca ggtgttggag atgttcattc ttgtcctgca 5100

gcagtgccac aaggagaatg aagacaagtg gaagcgactg tctcgacaga tagctgacat 5160

catcctccca atgttagcca aacagcagat gcacattgac tctcatgaag cccttggagt 5220

gttaaataca ttatttgaga ttttggcccc ttcctccctc cgtccggtag acatgctttt 5280

acggagtatg ttcgtcactc caaacacaat ggcgtccgtg agcactgttc aactgtggat 5340

atcgggaatt ctggccattt tgagggttct gatttcccag tcaactgaag atattgttct 5400

ttctcgtatt caggagctct ccttctctcc gtatttaatc tcctgtacag taattaatag 5460

gttaagagat ggggacagta cttcaacgct agaagaacac agtgaaggga aacaaataaa 5520

gaatttgcca gaagaaacat tttcaaggtt tctattacaa ctggttggta ttcttttaga 5580

agacattgtt acaaaacagc tgaaggtgga aatgagtgag cagcaacata ctttctattg 5640

ccaggaacta ggcacactgc taatgtgtct gatccacatc ttcaagtctg gaatgttccg 5700

gagaatcaca gcagctgcca ctaggctgtt ccgcagtgat ggctgtggcg gcagtttcta 5760

caccctggac agcttgaact tgcgggctcg ttccatgatc accacccacc cggccctggt 5820

gctgctctgg tgtcagatac tgctgcttgt caaccacacc gactaccgct ggtgggcaga 5880

agtgcagcag accccgaaaa gacacagtct gtccagcaca aagttactta gtccccagat 5940

gtctggagaa gaggaggatt ctgacttggc agccaaactt ggaatgtgca atagagaaat 6000

agtacgaaga ggggctctca ttctcttctg tgattatgtc tgtcagaacc tccatgactc 6060

cgagcactta acgtggctca ttgtaaatca cattcaagat ctgatcagcc tttcccacga 6120

gcctccagta caggacttca tcagtgccgt tcatcggaac tctgctgcca gcggcctgtt 6180

catccaggca attcagtctc gttgtgaaaa cctttcaact ccaaccatgc tgaagaaaac 6240

tcttcagtgc ttggagggga tccatctcag ccagtcggga gctgtgctca cgctgtatgt 6300

ggacaggctt ctgtgcaccc ctttccgtgt gctggctcgc atggtcgaca tccttgcttg 6360

tcgccgggta gaaatgcttc tggctgcaaa tttacagagc agcatggccc agttgccaat 6420

ggaagaactc aacagaatcc aggaatacct tcagagcagc gggctcgctc agagacacca 6480

aaggctctat tccctgctgg acaggtttcg tctctccacc atgcaagact cacttagtcc 6540

ctctcctcca gtctcttccc acccgctgga cggggatggg cacgtgtcac tggaaacagt 6600

gagtccggac aaagactggt acgttcatct tgtcaaatcc cagtgttgga ccaggtcaga 6660

ttctgcactg ctggaaggtg cagagctggt gaatcggatt cctgctgaag atatgaatgc 6720

cttcatgatg aactcggagt tcaacctaag cctgctagct ccatgcttaa gcctagggat 6780

gagtgaaatt tctggtggcc agaagagtgc cctttttgaa gcagcccgtg aggtgactct 6840

ggcccgtgtg agcggcaccg tgcagcagct ccctgctgtc catcatgtct tccagcccga 6900

gctgcctgca gagccggcgg cctactggag caagttgaat gatctgtttg gggatgctgc 6960

actgtatcag tccctgccca ctctggcccg ggccctggca cagtacctgg tggtggtctc 7020

caaactgccc agtcatttgc accttcctcc tgagaaagag aaggacattg tgaaattcgt 7080

ggtggcaacc cttgaggccc tgtcctggca tttgatccat gagcagatcc cgctgagtct 7140

ggatctccag gcagggctgg actgctgctg cctggccctg cagctgcctg gcctctggag 7200

cgtggtctcc tccacagagt ttgtgaccca cgcctgctcc ctcatctact gtgtgcactt 7260

catcctggag gccgttgcag tgcagcctgg agagcagctt cttagtccag aaagaaggac 7320

aaatacccca aaagccatca gcgaggagga ggaggaagta gatccaaaca cacagaatcc 7380

taagtatatc actgcagcct gtgagatggt ggcagaaatg gtggagtctc tgcagtcggt 7440

gttggccttg ggtcataaaa ggaatagcgg cgtgccggcg tttctcacgc cattgctaag 7500

gaacatcatc atcagcctgg cccgcctgcc ccttgtcaac agctacacac gtgtgccccc 7560

actggtgtgg aagcttggat ggtcacccaa accgggaggg gattttggca cagcattccc 7620

tgagatcccc gtggagttcc tccaggaaaa ggaagtcttt aaggagttca tctaccgcat 7680

caacacacta ggctggacca gtcgtactca gtttgaagaa acttgggcca ccctccttgg 7740

tgtcctggtg acgcagcccc tcgtgatgga gcaggaggag agcccaccag aagaagacac 7800

agagaggacc cagatcaacg tcctggccgt gcaggccatc acctcactgg tgctcagtgc 7860

aatgactgtg cctgtggccg gcaacccagc tgtaagctgc ttggagcagc agccccggaa 7920

caagcctctg aaagctctcg acaccaggtt tgggaggaag ctgagcatta tcagagggat 7980

tgtggagcaa gagattcaag caatggtttc aaagagagag aatattgcca cccatcattt 8040

atatcaggca tgggatcctg tcccttctct gtctccggct actacaggtg ccctcatcag 8100

ccacgagaag ctgctgctac agatcaaccc cgagcgggag ctggggagca tgagctacaa 8160

actcggccag gtgtccatac actccgtgtg gctggggaac agcatcacac ccctgaggga 8220

ggaggaatgg gacgaggaag aggaggagga ggccgacgcc cctgcacctt cgtcaccacc 8280

cacgtctcca gtcaactcca ggaaacaccg ggctggagtt gacatccact cctgttcgca 8340

gtttttgctt gagttgtaca gccgctggat cctgccgtcc agctcagcca ggaggacccc 8400

ggccatcctg atcagtgagg tggtcagatc ccttctagtg gtctcagact tgttcaccga 8460

gcgcaaccag tttgagctga tgtatgtgac gctgacagaa ctgcgaaggg tgcacccttc 8520

agaagacgag atcctcgctc agtacctggt gcctgccacc tgcaaggcag ctgccgtcct 8580

tgggatggac aaggccgtgg cggagcctgt cagccgcctg ctggagagca cgctcaggag 8640

cagccacctg cccagcaggg ttggagccct gcacggcgtc ctctatgtgc tggagtgcga 8700

cctgctggac gacactgcca agcagctcat cccggtcatc agcgactatc tcctctccaa 8760

cctgaaaggg atcgcccact gcgtgaacat tcacagccag cagcacgtac tggtcatgtg 8820

tgccactgcg ttttacctca ttgagaacta tcctctggac gtagggccgg aattttcagc 8880

atcaataata cagatgtgtg gggtgatgct gtctggaagt gaggagtcca ccccctccat 8940

catttaccac tgtgccctca gaggcctgga gcgcctcctg ctctctgagc agctctcccg 9000

cctggatgca gaatcgctgg tcaagctgag tgtggacaga gtgaacgtgc acagcccgca 9060

ccgggccatg gcggctctgg gcctgatgct cacctgcatg tacacaggaa aggagaaagt 9120

cagtccgggt agaacttcag accctaatcc tgcagccccc gacagcgagt cagtgattgt 9180

tgctatggag cgggtatctg ttctttttga taggatcagg aaaggctttc cttgtgaagc 9240

cagagtggtg gccaggatcc tgccccagtt tctagacgac ttcttcccac cccaggacat 9300

catgaacaaa gtcatcggag agtttctgtc caaccagcag ccataccccc agttcatggc 9360

caccgtggtg tataaggtgt ttcagactct gcacagcacc gggcagtcgt ccatggtccg 9420

ggactgggtc atgctgtccc tctccaactt cacgcagagg gccccggtcg ccatggccac 9480

gtggagcctc tcctgcttct ttgtcagcgc gtccaccagc ccgtgggtcg cggcgatcct 9540

cccacatgtc atcagcagga tgggcaagct ggagcaggtg gacgtgaacc ttttctgcct 9600

ggtcgccaca gacttctaca gacaccagat agaggaggag ctcgaccgca gggccttcca 9660

gtctgtgctt gaggtggttg cagccccagg aagcccatat caccggctgc tgacttgttt 9720

acgaaatgtc cacaaggtca ccacctgctg agcgccatgg tgggagagac tgtgaggcgg 9780

cagctggggc cggagccttt ggaagtctgc gcccttgtgc cctgcctcca ccgagccagc 9840

ttggtcccta tgggcttccg cacatgccgc gggcggccag gcaacgtgcg tgtctctgcc 9900

atgtggcaga agtgctcttt gtggcagtgg ccaggcaggg agtgtctgca gtcctggtgg 9960

ggctgagcct gaggccttcc agaaagcagg agcagctgtg ctgcacccca tgtgggtgac 10020

caggtccttt ctcctgatag tcacctgctg gttgttgcca ggttgcagct gctcttgcat 10080

ctgggccaga agtcctccct cctgcaggct ggctgttggc ccctctgctg tcctgcagta 10140

gaaggtgccg tgagcaggct ttgggaacac tggcctgggt ctccctggtg gggtgtgcat 10200

gccacgcccc gtgtctggat gcacagatgc catggcctgt gctgggccag tggctggggg 10260

tgctagacac ccggcaccat tctcccttct ctcttttctt ctcaggattt aaaatttaat 10320

tatatcagta aagagattaa ttttaacgta actctttcta tgcccgtgta aagtatgtga 10380

atcgcaaggc ctgtgctgca tgcgacagcg tccggggtgg tggacagggc ccccggccac 10440

gctccctctc ctgtagccac tggcatagcc ctcctgagca cccgctgaca tttccgttgt 10500

acatgttcct gtttatgcat tcacaaggtg actgggatgt agagaggcgt tagtgggcag 10560

gtggccacag caggactgag gacaggcccc cattatccta ggggtgcgct cacctgcagc 10620

ccctcctcct cgggcacaga cgactgtcgt tctccaccca ccagtcaggg acagcagcct 10680

ccctgtcact cagctgagaa ggccagccct ccctggctgt gagcagcctc cactgtgtcc 10740

agagacatgg gcctcccact cctgttcctt gctagccctg gggtggcgtc tgcctaggag 10800

ctggctggca ggtgttggga cctgctgctc catggatgca tgccctaaga gtgtcactga 10860

gctgtgtttt gtctgagcct ctctcggtca acagcaaagc ttggtgtctt ggcactgtta 10920

gtgacagagc ccagcatccc ttctgccccc gttccagctg acatcttgca cggtgacccc 10980

ttttagtcag gagagtgcag atctgtgctc atcggagact gccccacggc cctgtcagag 11040

ccgccactcc tatccccagg ccaggtccct ggaccagcct cctgtttgca ggcccagagg 11100

agccaagtca ttaaaatgga agtggattct ggatggccgg gctgctgctg atgtaggagc 11160

tggatttggg agctctgctt gccgactggc tgtgagacga ggcaggggct ctgcttcctc 11220

agccctagag gcgagccagg caaggttggc gactgtcatg tggcttggtt tggtcatgcc 11280

cgtcgatgtt ttgggtattg aatgtggtaa gtggaggaaa tgttggaact ctgtgcaggt 11340

gctgccttga gacccccaag cttccacctg tccctctcct atgtggcagc tggggagcag 11400

ctgagatgtg gacttgtatg ctgcccacat acgtgagggg gagctgaaag ggagcccctc 11460

ctctgagcag cctctgccag gcctgtatga ggcttttccc accagctccc aacagaggcc 11520

tcccccagcc aggaccacct cgtcctcgtg gcggggcagc aggagcggta gaaaggggtc 11580

cgatgtttga ggaggccctt aagggaagct actgaattat aacacgtaag aaaatcacca 11640

ttccgtattg gttgggggct cctgtttctc atcctagctt tttcctggaa agcccgctag 11700

aaggtttggg aacgagggga aagttctcag aactgttggc tgctccccac ccgcctcccg 11760

cctcccccgc aggttatgtc agcagctctg agacagcagt atcacaggcc agatgttgtt 11820

cctggctaga tgtttacatt tgtaagaaat aacactgtga atgtaaaaca gagccattcc 11880

cttggaatgc atatcgctgg gctcaacata gagtttgtct tcctcttgtt tacgacgtga 11940

tctaaaccag tccttagcaa ggggctcaga acaccccgct ctggcagtag gtgtccccca 12000

cccccaaaga cctgcctgtg tgctccggag atgaatatga gctcattagt aaaaatgact 12060

tcacccacgc atatacataa agtatccatg catgtgcata tagacacatc tataatttta 12120

cacacacacc tctcaagacg gagatgcatg gcctctaaga gtgcccgtgt cggttcttcc 12180

tggaagttga ctttccttag acccgccagg tcaagttagc cgcgtgacgg acatccaggc 12240

gtgggacgtg gtcagggcag ggctcattca ttgcccacta ggatcccact ggcgaagatg 12300

gtctccatat cagctctctg cagaagggag gaagacttta tcatgttcct aaaaatctgt 12360

ggcaagcacc catcgtatta tccaaatttt gttgcaaatg tgattaattt ggttgtcaag 12420

ttttgggggt gggctgtggg gagattgctt ttgttttcct gctggtaata tcgggaaaga 12480

ttttaatgaa accagggtag aattgtttgg caatgcactg aagcgtgttt ctttcccaaa 12540

atgtgcctcc cttccgctgc gggcccagct gagtctatgt aggtgatgtt tccagctgcc 12600

aagtgctctt tgttactgtc caccctcatt tctgccagcg catgtgtcct ttcaagggga 12660

aaatgtgaag ctgaaccccc tccagacacc cagaatgtag catctgagaa ggccctgtgc 12720

cctaaaggac acccctcgcc cccatcttca tggagggggt catttcagag ccctcggagc 12780

caatgaacag ctcctcctct tggagctgag atgagcccca cgtggagctc gggacggata 12840

gtagacagca ataactcggt gtgtggccgc ctggcaggtg gaacttcctc ccgttgcggg 12900

gtggagtgag gttagttctg tgtgtctggt gggtggagtc aggcttctct tgctacctgt 12960

gagcatcctt cccagcagac atcctcatcg ggctttgtcc ctcccccgct tcctccctct 13020

gcggggagga cccgggacca cagctgctgg ccagggtaga cttggagctg tcctccagag 13080

gggtcacgtg taggagtgag aagaaggaag atcttgagag ctgctgaggg accttggaga 13140

gctcaggatg gctcagacga ggacactcgc ttgccgggcc tgggcctcct gggaaggagg 13200

gagctgctca gaatgccgca tgacaactga aggcaacctg gaaggttcag gggccgctct 13260

tcccccatgt gcctgtcacg ctctggtgca gtcaaaggaa cgccttcccc tcagttgttt 13320

ctaagagcag agtctcccgc tgcaatctgg gtggtaactg ccagccttgg aggatcgtgg 13380

ccaacgtgga cctgcctacg gagggtgggc tctgacccaa gtggggcctc cttgtccagg 13440

tctcactgct ttgcaccgtg gtcagaggga ctgtcagctg agcttgagct cccctggagc 13500

cagcagggct gtgatgggcg agtcccggag ccccacccag acctgaatgc ttctgagagc 13560

aaagggaagg actgacgaga gatgtatatt taatttttta actgctgcaa acattgtaca 13620

tccaaattaa aggaaaaaaa tggaaaccat caaaaaaaaa aaaaaaaaa 13669

<210> 3

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 3

uuaacgucag uucauaaacu u 21

<210> 4

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический олигонуклеотид

<400> 4

uuaacgucag uucauaaact t 21

<210> 5

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 5

ugucgguacc gucuaacacu u 21

<210> 6

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический олигонуклеотид

<400> 6

ugucgguacc gucuaacact t 21

<210> 7

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 7

uaagcaugga gcuagcaggu u 21

<210> 8

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический олигонуклеотид

<400> 8

uaagcaugga gcuagcaggt t 21

<210> 9

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 9

uacaacgaga cugaauugcu u 21

<210> 10

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический олигонуклеотид

<400> 10

uacaacgaga cugaauugct t 21

<210> 11

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 11

uucaguucau aaaccuggau u 21

<210> 12

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический олигонуклеотид

<400> 12

uucaguucau aaaccuggat t 21

<210> 13

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 13

uaacgucagu ucauaaaccu u 21

<210> 14

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический олигонуклеотид

<400> 14

uaacgucagu ucauaaacct t 21

<210> 15

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 15

uccggucaca acauuguggu u 21

<210> 16

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический олигонуклеотид

<400> 16

uccggucaca acauuguggt t 21

<210> 17

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 17

uugcacgguu cuuugugacu u 21

<210> 18

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический олигонуклеотид

<400> 18

uugcacgguu cuuugugact t 21

<210> 19

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 19

uuuuauaaca agagguucau u 21

<210> 20

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический олигонуклеотид

<400> 20

uuuuauaaca agagguucat t 21

<210> 21

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 21

uccaaauacu gguugucggu u 21

<210> 22

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический олигонуклеотид

<400> 22

uccaaauacu gguugucggt t 21

<210> 23

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 23

uauuuuagga auuccaaugu u 21

<210> 24

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический олигонуклеотид

<400> 24

uauuuuagga auuccaaugt t 21

<210> 25

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 25

uuuaggaauu ccaaugaucu u 21

<210> 26

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический олигонуклеотид

<400> 26

uuuaggaauu ccaaugauct t 21

<210> 27

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический олигонуклеотид

<400> 27

uuaaucucuu uacugauaut t 21

<210> 28

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический олигонуклеотид

<400> 28

gauuuuagga auuccaaugt t 21

<210> 29

<211> 22

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 29

uaagcaugga gcuagcaggc uu 22

<210> 30

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический олигонуклеотид

<400> 30

uaagcaugga gcuagcaggg u 21

<210> 31

<211> 22

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 31

aaggacuuga gggacucgaa gu 22

<210> 32

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 32

aaggacuuga gggacucgaa g 21

<210> 33

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 33

aaggacuuga gggacucga 19

<210> 34

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 34

aggacuugag ggacucgaag u 21

<210> 35

<211> 22

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 35

gaggacuuga gggacucgaa gu 22

<210> 36

<211> 22

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 36

aaggacuuga gggacucgaa gu 22

<210> 37

<211> 23

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 37

aaggacuuga gggacucgaa guu 23

<210> 38

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 38

aaggacuuga gggacucgaa g 21

<210> 39

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 39

aaggacuuga gggacucga 19

<210> 40

<211> 22

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 40

aaggacuuga gggacucgaa gg 22

<210> 41

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 41

aaggacuuga gggacucgaa u 21

<210> 42

<211> 22

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 42

aaggacuuga gggacucgaa ga 22

<210> 43

<211> 22

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 43

aaggacuuga gggacucgaa gg 22

<210> 44

<211> 23

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 44

aaggacuuga gggacucgaa ggu 23

<210> 45

<211> 23

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 45

aaggacuuga gggacucgaa gga 23

<210> 46

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 46

aaggacuuga gggacucgaa g 21

<210> 47

<211> 22

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 47

aaggacuuga gggacucgaa gu 22

<210> 48

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 48

aaggacuuga gggacucga 19

<210> 49

<211> 23

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 49

aaggacuuga gggacucgaa gga 23

<210> 50

<211> 22

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 50

aaggacuuga gggacucgaa gg 22

<210> 51

<211> 24

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 51

aaggacuuga gggacucgaa ggau 24

<210> 52

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 52

aaggacuuga gggacucgaa ggauu 25

<210> 53

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 53

aaggacuuga gggacucgaa g 21

<210> 54

<211> 24

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 54

aaggacuuga gggacucgaa ggaa 24

<210> 55

<211> 23

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 55

gaugaagugc acacauugga uga 23

<210> 56

<211> 22

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 56

gaugaacugc acacauugga ug 22

<210> 57

<211> 23

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 57

gaugaauugc acacaguaga uga 23

<210> 58

<211> 24

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 58

aaggacuuga gggacucgaa gguu 24

<210> 59

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 59

aaggacuuga gggacucgaa gguuu 25

<210> 60

<211> 23

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 60

aaggacuuga gggacucgaa ggu 23

<210> 61

<211> 26

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 61

aaggacuuga gggacucgaa gguuuu 26

<210> 62

<211> 27

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 62

aaggacuuga gggacucgaa gguuuuu 27

<210> 63

<211> 22

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 63

aaggacuuga gggacucgaa gg 22

<210> 64

<211> 22

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 64

uaaggacuug agggacucga ag 22

<210> 65

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 65

aaggacuuga gggacucgaa g 21

<210> 66

<211> 22

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 66

aaggacuuga gggacucgaa gu 22

<210> 67

<211> 30

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 67

aaggacuuga gggacucgaa gacgaguccc 30

<210> 68

<211> 31

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 68

aaggacuuga gggacucgaa gacgaguccc a 31

<210> 69

<211> 31

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 69

aaggacuuga gggacucgaa gacgaguccc u 31

<210> 70

<211> 23

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 70

gaugaagugc acacauugga uac 23

<210> 71

<211> 24

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 71

gaugaagugc acacauugga uaca 24

<210> 72

<211> 30

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 72

gaugaagugc acacauugga uacaaugugu 30

<210> 73

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 73

gaugaagugc acacauugga u 21

<210> 74

<211> 22

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 74

gaugaagugc acacauugga ua 22

<210> 75

<211> 23

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 75

gaugaauugc acacaguaga uau 23

<210> 76

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 76

gaugaauugc acacaguaga uauac 25

<210> 77

<211> 30

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 77

gaugaauugc acacaguaga uauacugugu 30

<210> 78

<211> 24

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 78

gaugaauugc acacaguaga uaua 24

<210> 79

<211> 24

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 79

augaauugca cacaguagau auac 24

<210> 80

<211> 22

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 80

gaugaauugc acacaguaga ua 22

<210> 81

<211> 30

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 81

gaugaauugc acacaguaga uauacugugu 30

<210> 82

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 82

uacaacgaga cugaauugcu 20

<210> 83

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 83

acaacgagac ugaauugcuu 20

<210> 84

<211> 22

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 84

uccggucaca acauuguggu uc 22

<210> 85

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 85

uccggucaca acauuguggu 20

<210> 86

<211> 18

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 86

uccggucaca acauugug 18

<210> 87

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 87

ccggucacaa cauugugguu 20

<210> 88

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 88

uuuuauaaca agagguucau 20

<210> 89

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 89

uuuauaacaa gagguucauu 20

<210> 90

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 90

uaagcaugga gcuagcaggu 20

<210> 91

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 91

aagcauggag cuagcagguu 20

<210> 92

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 92

ccaaauacug guugucgguu 20

<210> 93

<211> 22

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 93

uacaacgaga cugaauugcu uu 22

<210> 94

<211> 22

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 94

uaacgucagu ucauaaaccu uu 22

<210> 95

<211> 22

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 95

guccggucac aacauugugg uu 22

<210> 96

<211> 23

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 96

uccggucaca acauuguggu uug 23

<210> 97

<211> 22

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 97

uccggucaca acauuguggu uu 22

<210> 98

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 98

uccggucaca acauugugg 19

<210> 99

<211> 22

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 99

uaagcaugga gcuagcaggu uu 22

<210> 100

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 100

aagcauggag cuagcagguu u 21

<210> 101

<211> 22

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 101

uccaaauacu gguugucggu uu 22

<210> 102

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 102

ccaaauacug guugucgguu u 21

<210> 103

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 103

guuuaugaac ugaucuuacc c 21

<210> 104

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 104

guguuagacg guacugaucc c 21

<210> 105

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 105

ccugcuagcu ccaugcuucc c 21

<210> 106

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 106

guuuaugaac ugaucuuagc c 21

<210> 107

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 107

guguuagacg guacugaugc c 21

<210> 108

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 108

ccugcuagcu ccaugcuugc c 21

<210> 109

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 109

guuuaugaag ugaucuuaac c 21

<210> 110

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 110

guguuagacc guacugauac c 21

<210> 111

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 111

ccugcuagca ccaugcuuac c 21

<210> 112

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 112

guuuaugaac ugaucuuaac c 21

<210> 113

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 113

guguuagacg guacugauac c 21

<210> 114

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 114

ccugcuagcu ccaugcuuac c 21

<210> 115

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический олигонуклеотид

<400> 115

ccugcuagcu ccaugcuuat t 21

<210> 116

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 116

guuuaugaac ugaucuugcc c 21

<210> 117

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 117

guuuaugaac ugaucuuggc c 21

<210> 118

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 118

guuuaugaac ugaucuugac c 21

<210> 119

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 119

gcaauucagu cucguugucc c 21

<210> 120

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 120

uccagguuua ugaacugacc c 21

<210> 121

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 121

gguuuaugaa cugacguucc c 21

<210> 122

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 122

ccacaauguu gugacuggcc c 21

<210> 123

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 123

gucacaaaga accguguacc c 21

<210> 124

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 124

ugaaccucuu guuauaaacc c 21

<210> 125

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 125

ccgacaacca guauuuggcc c 21

<210> 126

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 126

gcaauucagu cucguugugc c 21

<210> 127

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 127

uccagguuua ugaacugagc c 21

<210> 128

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 128

gguuuaugaa cugacguugc c 21

<210> 129

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 129

ccacaauguu gugacugggc c 21

<210> 130

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 130

gucacaaaga accguguagc c 21

<210> 131

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 131

ugaaccucuu guuauaaagc c 21

<210> 132

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 132

ccgacaacca guauuugggc c 21

<210> 133

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 133

gcaauucagu cucguuguac c 21

<210> 134

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический олигонуклеотид

<400> 134

gcaauucagu cucguuguat t 21

<210> 135

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 135

uccagguuua ugaacugaac c 21

<210> 136

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический олигонуклеотид

<400> 136

uccagguuua ugaacugaat t 21

<210> 137

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 137

gguuuaugaa cugacguuac c 21

<210> 138

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 138

ccacaauguu gugacuggac c 21

<210> 139

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 139

gucacaaaga accguguaac c 21

<210> 140

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 140

ugaaccucuu guuauaaaac c 21

<210> 141

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический олигонуклеотид

<400> 141

ugaaccucuu guuauaaaat t 21

<210> 142

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 142

ccgacaacca guauuuggac c 21

<210> 143

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический олигонуклеотид

<400> 143

ccgacaacca guauuuggat t 21

<210> 144

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 144

gcaauucaga cucguuguac c 21

<210> 145

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 145

uccagguuuu ugaacugaac c 21

<210> 146

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 146

gguuuaugau cugacguuac c 21

<210> 147

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 147

ccacaaugua gugacuggac c 21

<210> 148

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 148

gucacaaagu accguguaac c 21

<210> 149

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 149

ugaaccucua guuauaaaac c 21

<210> 150

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 150

ccgacaaccu guauuuggac c 21

<210> 151

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 151

cauuggaauu ccuaaaauuc c 21

<210> 152

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 152

gaucauugga auuccuaauc c 21

<210> 153

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 153

cauuggaauu ccuaaaaugc c 21

<210> 154

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 154

gaucauugga auuccuaagc c 21

<210> 155

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 155

cauuggaauu ccuaaaauac c 21

<210> 156

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический олигонуклеотид

<400> 156

cauuggaauu ccuaaaauat t 21

<210> 157

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 157

gaucauugga auuccuaaac c 21

<210> 158

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический олигонуклеотид

<400> 158

gaucauugga auuccuaaat t 21

<210> 159

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 159

cauuggaaua ccuaaaauac c 21

<210> 160

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 160

gaucauuggu auuccuaaac c 21

<210> 161

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический олигонуклеотид

<400> 161

guuuaugaac ugacguuaat t 21

<210> 162

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический олигонуклеотид

<400> 162

guguuagacg guaccgacat t 21

<210> 163

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический олигонуклеотид

<400> 163

auaucaguaa agagauuaat t 21

<210> 164

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический олигонуклеотид

<400> 164

gguuuaugaa cugacguuat t 21

<210> 165

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический олигонуклеотид

<400> 165

ccacaauguu gugaccggat t 21

<210> 166

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический олигонуклеотид

<400> 166

gucacaaaga accgugcaat t 21

<210> 167

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический олигонуклеотид

<400> 167

cauuggaauu ccuaaaauct t 21

<210> 168

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 168

ccugcuagcu ccaugcuugc u 21

<210> 169

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 169

ccugcuagcu ccaugcuuga u 21

<210> 170

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 170

ccugcuagcu ccaugcuuau u 21

<210> 171

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 171

ccugcuagcu ccaugcuugu u 21

<210> 172

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 172

uucgaguccc ucaaguagcu 20

<210> 173

<211> 22

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 173

uucgaguccc ucaaguagcu uu 22

<210> 174

<211> 22

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 174

ucgagucccu caaguccauu cu 22

<210> 175

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 175

uuccagucca ucaagucaau u 21

<210> 176

<211> 22

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 176

uuccgagucu aaaaguccuu gg 22

<210> 177

<211> 23

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 177

uuccgagucu aaaaguccuu ggc 23

<210> 178

<211> 23

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 178

cuuccgaguc uaaaaguccu ugg 23

<210> 179

<211> 23

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 179

uuccgagucu aaaaguccuu ggu 23

<210> 180

<211> 24

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 180

uuccgagucu aaaaguccuu ggcu 24

<210> 181

<211> 23

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 181

uccaauguga aacuucaucg gcu 23

<210> 182

<211> 22

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 182

uccaauguga aacuucaucg gc 22

<210> 183

<211> 22

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 183

auccaaugug aaacuucauc gu 22

<210> 184

<211> 23

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 184

auccaaugug aaacuucauc ggu 23

<210> 185

<211> 22

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 185

uccaauguga aacuucaucg gu 22

<210> 186

<211> 24

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 186

uccaauguga aacuucaucg gcuu 24

<210> 187

<211> 22

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 187

aucuacugug aaaauucauc gg 22

<210> 188

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 188

ucuacuguga aaauucaucg g 21

<210> 189

<211> 22

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 189

ucuacuguga aaauucaucg gc 22

<210> 190

<211> 23

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 190

aucuacugug aaaauucauc ggu 23

<210> 191

<211> 22

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 191

ucuacuguga aaauucaucg gu 22

<210> 192

<211> 23

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 192

ucuacuguga aaauucaucg gcu 23

<210> 193

<211> 22

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 193

ccuucggucc ucaaguccuu ca 22

<210> 194

<211> 24

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 194

uucgagucca ucaaauccua uagu 24

<210> 195

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 195

uacaaugugu gcacuucaua u 21

<210> 196

<211> 23

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 196

uauacugugu gcaauucauu ucu 23

<210> 197

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 197

gcaauucagu cucguugucc 20

<210> 198

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 198

gcaauucagu cucguuguc 19

<210> 199

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 199

caauucaguc ucguuguccc 20

<210> 200

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 200

caauucaguc ucguugucc 19

<210> 201

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 201

gcaauucagu cucguugugc 20

<210> 202

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 202

caauucaguc ucguugugcc 20

<210> 203

<211> 22

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 203

ccacaauguu gugacugggc cu 22

<210> 204

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 204

ccacaauguu gugacugggc 20

<210> 205

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 205

cacaauguug ugacugggcc 20

<210> 206

<211> 22

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 206

ugaaccucuu guuauaaagc cu 22

<210> 207

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 207

ugaaccucuu guuauaaagc 20

<210> 208

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 208

gaaccucuug uuauaaagcc 20

<210> 209

<211> 22

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 209

ccugcuagcu ccaugcuugc cu 22

<210> 210

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 210

ccugcuagcu ccaugcuugc 20

<210> 211

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 211

ccugcuagcu ccaugcuug 19

<210> 212

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 212

cugcuagcuc caugcuugcc 20

<210> 213

<211> 22

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 213

ccgacaacca guauuugggc cu 22

<210> 214

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 214

ccgacaacca guauuugggc 20

<210> 215

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 215

ccgacaacca guauuuggg 19

<210> 216

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 216

cgacaaccag uauuugggcc 20

<210> 217

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 217

cgacaaccag uauuugggc 19

<210> 218

<211> 22

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 218

gcaauucagu cucguuguac cu 22

<210> 219

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 219

gcaauucagu cucguuguac 20

<210> 220

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 220

gcaauucagu cucguugua 19

<210> 221

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 221

caauucaguc ucguuguacc 20

<210> 222

<211> 22

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 222

gcaauucaga cucguuguac cu 22

<210> 223

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 223

gcaauucaga cucguuguac 20

<210> 224

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 224

gcaauucaga cucguugua 19

<210> 225

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 225

caauucagac ucguuguacc 20

<210> 226

<211> 22

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 226

agcaauucag ucucguugua cc 22

<210> 227

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 227

agcaauucag ucucguugua c 21

<210> 228

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 228

agguuuauga acugacguua c 21

<210> 229

<211> 22

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 229

agguuuauga acugacguua cc 22

<210> 230

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 230

accacaaugu ugugacugga c 21

<210> 231

<211> 22

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 231

accacaaugu ugugacugga cc 22

<210> 232

<211> 23

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 232

ccacaauguu gugacuggac cgu 23

<210> 233

<211> 22

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 233

ccacaauguu gugacuggac cg 22

<210> 234

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 234

ccacaauguu gugacuggac 20

<210> 235

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 235

cacaauguug ugacuggacc 20

<210> 236

<211> 22

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 236

accugcuagc uccaugcuuc cc 22

<210> 237

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 237

accugcuagc uccaugcuuc c 21

<210> 238

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 238

accugcuagc uccaugcuuc 20

<210> 239

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 239

ccugcuagcu ccaugcuucc 20

<210> 240

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 240

ccugcuagcu ccaugcuuc 19

<210> 241

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 241

cugcuagcuc caugcuuccc 20

<210> 242

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 242

cugcuagcuc caugcuucc 19

<210> 243

<211> 22

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 243

accgacaacc aguauuugga cc 22

<210> 244

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 244

accgacaacc aguauuugga c 21

<210> 245

<211> 23

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 245

ccgacaacca guauuuggac cgu 23

<210> 246

<211> 23

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 246

ccgacaacca guauuuggac cgu 23

<210> 247

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 247

ccgacaacca guauuuggac 20

<210> 248

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 248

cgacaaccag uauuuggacc 20

<210> 249

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 249

ccugcuagca ccgugcuuac c 21

<210> 250

<211> 54

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 250

gugcugggcg gggggcggcg ggcccucccg cagaacacca ugcgcucuuc ggaa 54

<210> 251

<211> 100

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 251

gaagcaaaga aggggcagag ggagcccgug agcugagugg gccagggacu gggagaagga 60

gugaggaggc agggccggca ugccucugcu gcuggccaga 100

<210> 252

<211> 54

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 252

gugcugggcg gggggcggcg ggcccucccg cagaacacca ugcgcuccac ggaa 54

<210> 253

<211> 35

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 253

gggcccuccc gcagaacacc augcgcucca cggaa 35

<210> 254

<211> 30

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 254

cucccgcaga acaccaugcg cuccacggaa 30

<210> 255

<211> 55

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 255

gugcugggcg gggggcggcg ggcccucccg cagaacacca ugcgcuccac ggaag 55

<210> 256

<211> 54

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 256

gugcugggcg gggggcggcg ggcccucccg cagaacacca ugcgcuccuc ggaa 54

<210> 257

<211> 10

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 257

ugugaccugg 10

<210> 258

<211> 10

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 258

ugugauuugg 10

<210> 259

<211> 18

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 259

gucugcaccu gucacuag 18

<210> 260

<211> 10

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 260

gugacccaag 10

<210> 261

<211> 15

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 261

guggccacug agaag 15

<210> 262

<211> 10

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 262

gugacccaau 10

<210> 263

<211> 10

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 263

gugacccaac 10

<210> 264

<211> 15

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 264

guggccacug agaaa 15

<210> 265

<211> 52

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 265

cugaggagcg ccuugacagc agccauggga gggccgcccc cuaccucagu ga 52

<210> 266

<211> 52

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 266

cuguggagcg ccuugacagc agccauggga gggccgcccc cuaccucagu ga 52

<210> 267

<211> 100

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 267

uggccgugua gugcuaccca gcgcuggcug ccuccucagc auugcaauuc cucucccauc 60

ugggcaccag ucagcuaccc uggugggaau cuggguagcc 100

<210> 268

<211> 35

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 268

cugaggagcg ccuugacagc agccauggga gggcc 35

<210> 269

<211> 52

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид

<400> 269

cugcggagcg ccuugacagc agccauggga gggccgcccc cuaccucagu ga 52

<210> 270

<211> 158

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 270

gugcugggcg gggggcggcg ggcccucccg cagaacacca ugcgcucuuc ggaauccagg 60

uuuaugaacu gacccuguga ccugguucag uucauaaacc uggauucuga ggagcgccuu 120

gacagcagcc augggagggc cgcccccuac cucaguga 158

<210> 271

<211> 158

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 271

gugcugggcg gggggcggcg ggcccucccg cagaacacca ugcgcucuuc ggaauccagg 60

uuuaugaacu gagccuguga ccugguucag uucauaaacc uggauucuga ggagcgccuu 120

gacagcagcc augggagggc cgcccccuac cucaguga 158

<210> 272

<211> 158

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 272

gugcugggcg gggggcggcg ggcccucccg cagaacacca ugcgcucuuc ggaauccagg 60

uuuaugaacu gaaccuguga uuugguucag uucauaaacc uggauucuga ggagcgccuu 120

gacagcagcc augggagggc cgcccccuac cucaguga 158

<210> 273

<211> 158

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 273

gugcugggcg gggggcggcg ggcccucccg cagaacacca ugcgcucuuc ggaauccagg 60

uuuuugaacu gaaccuguga ccugguucag uucauaaacc uggauucugu ggagcgccuu 120

gacagcagcc augggagggc cgcccccuac cucaguga 158

<210> 274

<211> 158

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 274

gugcugggcg gggggcggcg ggcccucccg cagaacacca ugcgcucuuc ggaauccagg 60

uuuaugaacu gaaccuguga ccugguucag uucauaaacc uggauucugu ggagcgccuu 120

gacagcagcc augggagggc cgcccccuac cucaguga 158

<210> 275

<211> 260

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 275

gaagcaaaga aggggcagag ggagcccgug agcugagugg gccagggacu gggagaagga 60

gugaggaggc agggccggca ugccucugcu gcuggccaga uccagguuua ugaacugaac 120

cgucugcacc ugucacuagu gucgguaccg ucuaacacuu uggccgugua gugcuaccca 180

gcgcuggcug ccuccucagc auugcaauuc cucucccauc ugggcaccag ucagcuaccc 240

uggugggaau cuggguagcc 260

<210> 276

<211> 158

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 276

gugcugggcg gggggcggcg ggcccucccg cagaacacca ugcgcucuuc ggaagguuua 60

ugaacugacg uucccuguga ccugguaacg ucaguucaua aaccuucuga ggagcgccuu 120

gacagcagcc augggagggc cgcccccuac cucaguga 158

<210> 277

<211> 158

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 277

gugcugggcg gggggcggcg ggcccucccg cagaacacca ugcgcucuuc ggaagguuua 60

ugaacugacg uugccuguga ccugguaacg ucaguucaua aaccuucuga ggagcgccuu 120

gacagcagcc augggagggc cgcccccuac cucaguga 158

<210> 278

<211> 158

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 278

gugcugggcg gggggcggcg ggcccucccg cagaacacca ugcgcucuuc ggaagguuua 60

ugaacugacg uuaccuguga uuugguaacg ucaguucaua aaccuucuga ggagcgccuu 120

gacagcagcc augggagggc cgcccccuac cucaguga 158

<210> 279

<211> 158

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 279

gugcugggcg gggggcggcg ggcccucccg cagaacacca ugcgcucuuc ggaagguuua 60

ugaucugacg uuaccuguga ccugguaacg ucaguucaua aaccuucugu ggagcgccuu 120

gacagcagcc augggagggc cgcccccuac cucaguga 158

<210> 280

<211> 158

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 280

gugcugggcg gggggcggcg ggcccucccg cagaacacca ugcgcucuuc ggaagguuua 60

ugaacugacg uuaccuguga ccugguaacg ucaguucaua aaccuucugu ggagcgccuu 120

gacagcagcc augggagggc cgcccccuac cucaguga 158

<210> 281

<211> 260

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 281

gaagcaaaga aggggcagag ggagcccgug agcugagugg gccagggacu gggagaagga 60

gugaggaggc agggccggca ugccucugcu gcuggccaga gguuuaugaa cugacguuac 120

cgucugcacc ugucacuagu aacgucaguu cauaaaccuu uggccgugua gugcuaccca 180

gcgcuggcug ccuccucagc auugcaauuc cucucccauc ugggcaccag ucagcuaccc 240

uggugggaau cuggguagcc 260

<210> 282

<211> 158

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 282

gugcugggcg gggggcggcg ggcccucccg cagaacacca ugcgcucuuc ggaaguuuau 60

gaacugaucu uacccuguga ccugguuaac gucaguucau aaacuucuga ggagcgccuu 120

gacagcagcc augggagggc cgcccccuac cucaguga 158

<210> 283

<211> 158

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 283

gugcugggcg gggggcggcg ggcccucccg cagaacacca ugcgcucuuc ggaaguuuau 60

gaacugaucu uagccuguga ccugguuaac gucaguucau aaacuucuga ggagcgccuu 120

gacagcagcc augggagggc cgcccccuac cucaguga 158

<210> 284

<211> 158

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 284

gugcugggcg gggggcggcg ggcccucccg cagaacacca ugcgcucuuc ggaaguuuau 60

gaacugaucu uacccuguga uuugguuaac gucaguucau aaacuucuga ggagcgccuu 120

gacagcagcc augggagggc cgcccccuac cucaguga 158

<210> 285

<211> 158

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 285

gugcugggcg gggggcggcg ggcccucccg cagaacacca ugcgcucuuc ggaaguuuau 60

gaagugaucu uaaccuguga ccugguuaac gucaguucau aaacuucugu ggagcgccuu 120

gacagcagcc augggagggc cgcccccuac cucaguga 158

<210> 286

<211> 158

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 286

gugcugggcg gggggcggcg ggcccucccg cagaacacca ugcgcucuuc ggaaguuuau 60

gaacugaucu uaaccuguga ccugguuaac gucaguucau aaacuucugu ggagcgccuu 120

gacagcagcc augggagggc cgcccccuac cucaguga 158

<210> 287

<211> 260

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 287

gaagcaaaga aggggcagag ggagcccgug agcugagugg gccagggacu gggagaagga 60

gugaggaggc agggccggca ugccucugcu gcuggccaga guuuaugaac ugaucuuacc 120

cgucugcacc ugucacuagu uaacgucagu ucauaaacuu uggccgugua gugcuaccca 180

gcgcuggcug ccuccucagc auugcaauuc cucucccauc ugggcaccag ucagcuaccc 240

uggugggaau cuggguagcc 260

<210> 288

<211> 158

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 288

gugcugggcg gggggcggcg ggcccucccg cagaacacca ugcgcucuuc ggaaguuuau 60

gaacugaucu ugcccuguga ccugguuaac gucaguucau aaacuucuga ggagcgccuu 120

gacagcagcc augggagggc cgcccccuac cucaguga 158

<210> 289

<211> 158

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 289

gugcugggcg gggggcggcg ggcccucccg cagaacacca ugcgcucuuc ggaaguuuau 60

gaacugaucu uggccuguga ccugguuaac gucaguucau aaacuucuga ggagcgccuu 120

gacagcagcc augggagggc cgcccccuac cucaguga 158

<210> 290

<211> 158

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 290

gugcugggcg gggggcggcg ggcccucccg cagaacacca ugcgcucuuc ggaaguuuau 60

gaacugaucu ugcccuguga uuugguuaac gucaguucau aaacuucuga ggagcgccuu 120

gacagcagcc augggagggc cgcccccuac cucaguga 158

<210> 291

<211> 158

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 291

gugcugggcg gggggcggcg ggcccucccg cagaacacca ugcgcucuuc ggaaguuuau 60

gaacugaucu ugaccuguga ccugguuaac gucaguucau aaacuucugu ggagcgccuu 120

gacagcagcc augggagggc cgcccccuac cucaguga 158

<210> 292

<211> 260

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 292

gaagcaaaga aggggcagag ggagcccgug agcugagugg gccagggacu gggagaagga 60

gugaggaggc agggccggca ugccucugcu gcuggccaga guuuaugaac ugaucuugcc 120

cgucugcacc ugucacuagu uaacgucagu ucauaaacuu uggccgugua gugcuaccca 180

gcgcuggcug ccuccucagc auugcaauuc cucucccauc ugggcaccag ucagcuaccc 240

uggugggaau cuggguagcc 260

<210> 293

<211> 158

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 293

gugcugggcg gggggcggcg ggcccucccg cagaacacca ugcgcucuuc ggaaccacaa 60

uguugugacu ggcccuguga ccugguccgg ucacaacauu gugguucuga ggagcgccuu 120

gacagcagcc augggagggc cgcccccuac cucaguga 158

<210> 294

<211> 158

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 294

gugcugggcg gggggcggcg ggcccucccg cagaacacca ugcgcucuuc ggaaccacaa 60

uguugugacu gggccuguga ccugguccgg ucacaacauu gugguucuga ggagcgccuu 120

gacagcagcc augggagggc cgcccccuac cucaguga 158

<210> 295

<211> 158

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 295

gugcugggcg gggggcggcg ggcccucccg cagaacacca ugcgcucuuc ggaaccacaa 60

uguugugacu ggaccuguga uuugguccgg ucacaacauu gugguucuga ggagcgccuu 120

gacagcagcc augggagggc cgcccccuac cucaguga 158

<210> 296

<211> 158

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 296

gugcugggcg gggggcggcg ggcccucccg cagaacacca ugcgcucuuc ggaaccacaa 60

uguagugacu ggaccuguga ccugguccgg ucacaacauu gugguucugu ggagcgccuu 120

gacagcagcc augggagggc cgcccccuac cucaguga 158

<210> 297

<211> 158

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 297

gugcugggcg gggggcggcg ggcccucccg cagaacacca ugcgcucuuc ggaaccacaa 60

uguugugacu ggaccuguga ccugguccgg ucacaacauu gugguucugu ggagcgccuu 120

gacagcagcc augggagggc cgcccccuac cucaguga 158

<210> 298

<211> 260

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 298

gaagcaaaga aggggcagag ggagcccgug agcugagugg gccagggacu gggagaagga 60

gugaggaggc agggccggca ugccucugcu gcuggccaga ccacaauguu gugacuggac 120

cgucugcacc ugucacuagu ccggucacaa cauugugguu uggccgugua gugcuaccca 180

gcgcuggcug ccuccucagc auugcaauuc cucucccauc ugggcaccag ucagcuaccc 240

uggugggaau cuggguagcc 260

<210> 299

<211> 158

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 299

gugcugggcg gggggcggcg ggcccucccg cagaacacca ugcgcucuuc ggaaguguua 60

gacgguacug aucccuguga ccuggugucg guaccgucua acacuucuga ggagcgccuu 120

gacagcagcc augggagggc cgcccccuac cucaguga 158

<210> 300

<211> 158

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 300

gugcugggcg gggggcggcg ggcccucccg cagaacacca ugcgcucuuc ggaaguguua 60

gacgguacug augccuguga ccuggugucg guaccgucua acacuucuga ggagcgccuu 120

gacagcagcc augggagggc cgcccccuac cucaguga 158

<210> 301

<211> 158

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 301

gugcugggcg gggggcggcg ggcccucccg cagaacacca ugcgcucuuc ggaaguguua 60

gacgguacug aucccuguga uuuggugucg guaccgucua acacuucuga ggagcgccuu 120

gacagcagcc augggagggc cgcccccuac cucaguga 158

<210> 302

<211> 158

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 302

gugcugggcg gggggcggcg ggcccucccg cagaacacca ugcgcucuuc ggaaguguua 60

gaccguacug auaccuguga ccuggugucg guaccgucua acacuucugu ggagcgccuu 120

gacagcagcc augggagggc cgcccccuac cucaguga 158

<210> 303

<211> 158

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 303

gugcugggcg gggggcggcg ggcccucccg cagaacacca ugcgcucuuc ggaaguguua 60

gacgguacug auaccuguga ccuggugucg guaccgucua acacuucugu ggagcgccuu 120

gacagcagcc augggagggc cgcccccuac cucaguga 158

<210> 304

<211> 260

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 304

gaagcaaaga aggggcagag ggagcccgug agcugagugg gccagggacu gggagaagga 60

gugaggaggc agggccggca ugccucugcu gcuggccaga guguuagacg guacugaucc 120

cgucugcacc ugucacuagu gucgguaccg ucuaacacuu uggccgugua gugcuaccca 180

gcgcuggcug ccuccucagc auugcaauuc cucucccauc ugggcaccag ucagcuaccc 240

uggugggaau cuggguagcc 260

<210> 305

<211> 158

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 305

gugcugggcg gggggcggcg ggcccucccg cagaacacca ugcgcucuuc ggaaccgaca 60

accaguauuu ggcccuguga ccugguccaa auacugguug ucgguucuga ggagcgccuu 120

gacagcagcc augggagggc cgcccccuac cucaguga 158

<210> 306

<211> 158

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 306

gugcugggcg gggggcggcg ggcccucccg cagaacacca ugcgcucuuc ggaaccgaca 60

accaguauuu gggccuguga ccugguccaa auacugguug ucgguucuga ggagcgccuu 120

gacagcagcc augggagggc cgcccccuac cucaguga 158

<210> 307

<211> 158

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 307

gugcugggcg gggggcggcg ggcccucccg cagaacacca ugcgcucuuc ggaaccgaca 60

accaguauuu ggaccuguga uuugguccaa auacugguug ucgguucuga ggagcgccuu 120

gacagcagcc augggagggc cgcccccuac cucaguga 158

<210> 308

<211> 158

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 308

gugcugggcg gggggcggcg ggcccucccg cagaacacca ugcgcucuuc ggaaccgaca 60

accuguauuu ggaccuguga ccugguccaa auacugguug ucgguucugu ggagcgccuu 120

gacagcagcc augggagggc cgcccccuac cucaguga 158

<210> 309

<211> 158

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 309

gugcugggcg gggggcggcg ggcccucccg cagaacacca ugcgcucuuc ggaaccgaca 60

accaguauuu ggaccuguga ccugguccaa auacugguug ucgguucugu ggagcgccuu 120

gacagcagcc augggagggc cgcccccuac cucaguga 158

<210> 310

<211> 260

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 310

gaagcaaaga aggggcagag ggagcccgug agcugagugg gccagggacu gggagaagga 60

gugaggaggc agggccggca ugccucugcu gcuggccaga ccgacaacca guauuuggac 120

cgucugcacc ugucacuagu ccaaauacug guugucgguu uggccgugua gugcuaccca 180

gcgcuggcug ccuccucagc auugcaauuc cucucccauc ugggcaccag ucagcuaccc 240

uggugggaau cuggguagcc 260

<210> 311

<211> 158

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 311

gugcugggcg gggggcggcg ggcccucccg cagaacacca ugcgcucuuc ggaagucaca 60

aagaaccgug uacccuguga ccugguugca cgguucuuug ugacuucuga ggagcgccuu 120

gacagcagcc augggagggc cgcccccuac cucaguga 158

<210> 312

<211> 158

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 312

gugcugggcg gggggcggcg ggcccucccg cagaacacca ugcgcucuuc ggaagucaca 60

aagaaccgug uagccuguga ccugguugca cgguucuuug ugacuucuga ggagcgccuu 120

gacagcagcc augggagggc cgcccccuac cucaguga 158

<210> 313

<211> 158

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 313

gugcugggcg gggggcggcg ggcccucccg cagaacacca ugcgcucuuc ggaagucaca 60

aagaaccgug uaaccuguga uuugguugca cgguucuuug ugacuucuga ggagcgccuu 120

gacagcagcc augggagggc cgcccccuac cucaguga 158

<210> 314

<211> 158

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 314

gugcugggcg gggggcggcg ggcccucccg cagaacacca ugcgcucuuc ggaagucaca 60

aaguaccgug uaaccuguga ccugguugca cgguucuuug ugacuucugu ggagcgccuu 120

gacagcagcc augggagggc cgcccccuac cucaguga 158

<210> 315

<211> 158

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 315

gugcugggcg gggggcggcg ggcccucccg cagaacacca ugcgcucuuc ggaagucaca 60

aagaaccgug uaaccuguga ccugguugca cgguucuuug ugacuucugu ggagcgccuu 120

gacagcagcc augggagggc cgcccccuac cucaguga 158

<210> 316

<211> 260

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 316

gaagcaaaga aggggcagag ggagcccgug agcugagugg gccagggacu gggagaagga 60

gugaggaggc agggccggca ugccucugcu gcuggccaga gucacaaaga accguguaac 120

cgucugcacc ugucacuagu ugcacgguuc uuugugacuu uggccgugua gugcuaccca 180

gcgcuggcug ccuccucagc auugcaauuc cucucccauc ugggcaccag ucagcuaccc 240

uggugggaau cuggguagcc 260

<210> 317

<211> 158

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 317

gugcugggcg gggggcggcg ggcccucccg cagaacacca ugcgcucuuc ggaaugaacc 60

ucuuguuaua aacccuguga ccugguuuua uaacaagagg uucauucuga ggagcgccuu 120

gacagcagcc augggagggc cgcccccuac cucaguga 158

<210> 318

<211> 158

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 318

gugcugggcg gggggcggcg ggcccucccg cagaacacca ugcgcucuuc ggaaugaacc 60

ucuuguuaua aagccuguga ccugguuuua uaacaagagg uucauucuga ggagcgccuu 120

gacagcagcc augggagggc cgcccccuac cucaguga 158

<210> 319

<211> 158

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 319

gugcugggcg gggggcggcg ggcccucccg cagaacacca ugcgcucuuc ggaaugaacc 60

ucuuguuaua aaaccuguga uuugguuuua uaacaagagg uucauucuga ggagcgccuu 120

gacagcagcc augggagggc cgcccccuac cucaguga 158

<210> 320

<211> 158

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 320

gugcugggcg gggggcggcg ggcccucccg cagaacacca ugcgcucuuc ggaaugaacc 60

ucuaguuaua aaaccuguga ccugguuuua uaacaagagg uucauucugu ggagcgccuu 120

gacagcagcc augggagggc cgcccccuac cucaguga 158

<210> 321

<211> 158

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 321

gugcugggcg gggggcggcg ggcccucccg cagaacacca ugcgcucuuc ggaaugaacc 60

ucuuguuaua aaaccuguga ccugguuuua uaacaagagg uucauucugu ggagcgccuu 120

gacagcagcc augggagggc cgcccccuac cucaguga 158

<210> 322

<211> 260

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 322

gaagcaaaga aggggcagag ggagcccgug agcugagugg gccagggacu gggagaagga 60

gugaggaggc agggccggca ugccucugcu gcuggccaga ugaaccucuu guuauaaaac 120

cgucugcacc ugucacuagu uuuauaacaa gagguucauu uggccgugua gugcuaccca 180

gcgcuggcug ccuccucagc auugcaauuc cucucccauc ugggcaccag ucagcuaccc 240

uggugggaau cuggguagcc 260

<210> 323

<211> 158

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 323

gugcugggcg gggggcggcg ggcccucccg cagaacacca ugcgcucuuc ggaagaucau 60

uggaauuccu aauccuguga ccugguuuag gaauuccaau gaucuucuga ggagcgccuu 120

gacagcagcc augggagggc cgcccccuac cucaguga 158

<210> 324

<211> 158

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 324

gugcugggcg gggggcggcg ggcccucccg cagaacacca ugcgcucuuc ggaagaucau 60

uggaauuccu aagccuguga ccugguuuag gaauuccaau gaucuucuga ggagcgccuu 120

gacagcagcc augggagggc cgcccccuac cucaguga 158

<210> 325

<211> 158

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 325

gugcugggcg gggggcggcg ggcccucccg cagaacacca ugcgcucuuc ggaagaucau 60

uggaauuccu aaaccuguga uuugguuuag gaauuccaau gaucuucuga ggagcgccuu 120

gacagcagcc augggagggc cgcccccuac cucaguga 158

<210> 326

<211> 158

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 326

gugcugggcg gggggcggcg ggcccucccg cagaacacca ugcgcucuuc ggaagaucau 60

ugguauuccu aaaccuguga ccugguuuag gaauuccaau gaucuucugu ggagcgccuu 120

gacagcagcc augggagggc cgcccccuac cucaguga 158

<210> 327

<211> 158

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 327

gugcugggcg gggggcggcg ggcccucccg cagaacacca ugcgcucuuc ggaagaucau 60

uggaauuccu aaaccuguga ccugguuuag gaauuccaau gaucuucugu ggagcgccuu 120

gacagcagcc augggagggc cgcccccuac cucaguga 158

<210> 328

<211> 260

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 328

gaagcaaaga aggggcagag ggagcccgug agcugagugg gccagggacu gggagaagga 60

gugaggaggc agggccggca ugccucugcu gcuggccaga gaucauugga auuccuaaac 120

cgucugcacc ugucacuagu uuaggaauuc caaugaucuu uggccgugua gugcuaccca 180

gcgcuggcug ccuccucagc auugcaauuc cucucccauc ugggcaccag ucagcuaccc 240

uggugggaau cuggguagcc 260

<210> 329

<211> 158

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 329

gugcugggcg gggggcggcg ggcccucccg cagaacacca ugcgcucuuc ggaacauugg 60

aauuccuaaa auuccuguga ccugguauuu uaggaauucc aauguucuga ggagcgccuu 120

gacagcagcc augggagggc cgcccccuac cucaguga 158

<210> 330

<211> 158

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 330

gugcugggcg gggggcggcg ggcccucccg cagaacacca ugcgcucuuc ggaacauugg 60

aauuccuaaa augccuguga ccugguauuu uaggaauucc aauguucuga ggagcgccuu 120

gacagcagcc augggagggc cgcccccuac cucaguga 158

<210> 331

<211> 158

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 331

gugcugggcg gggggcggcg ggcccucccg cagaacacca ugcgcucuuc ggaacauugg 60

aauuccuaaa auaccuguga uuugguauuu uaggaauucc aauguucuga ggagcgccuu 120

gacagcagcc augggagggc cgcccccuac cucaguga 158

<210> 332

<211> 158

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 332

gugcugggcg gggggcggcg ggcccucccg cagaacacca ugcgcucuuc ggaacauugg 60

aauaccuaaa auaccuguga ccugguauuu uaggaauucc aauguucugu ggagcgccuu 120

gacagcagcc augggagggc cgcccccuac cucaguga 158

<210> 333

<211> 158

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 333

gugcugggcg gggggcggcg ggcccucccg cagaacacca ugcgcucuuc ggaacauugg 60

aauuccuaaa auaccuguga ccugguauuu uaggaauucc aauguucugu ggagcgccuu 120

gacagcagcc augggagggc cgcccccuac cucaguga 158

<210> 334

<211> 260

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 334

gaagcaaaga aggggcagag ggagcccgug agcugagugg gccagggacu gggagaagga 60

gugaggaggc agggccggca ugccucugcu gcuggccaga cauuggaauu ccuaaaauac 120

cgucugcacc ugucacuagu auuuuaggaa uuccaauguu uggccgugua gugcuaccca 180

gcgcuggcug ccuccucagc auugcaauuc cucucccauc ugggcaccag ucagcuaccc 240

uggugggaau cuggguagcc 260

<210> 335

<211> 158

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 335

gugcugggcg gggggcggcg ggcccucccg cagaacacca ugcgcucuuc ggaagcaauu 60

cagucucguu gucccuguga ccugguacaa cgagacugaa uugcuucuga ggagcgccuu 120

gacagcagcc augggagggc cgcccccuac cucaguga 158

<210> 336

<211> 158

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 336

gugcugggcg gggggcggcg ggcccucccg cagaacacca ugcgcucuuc ggaagcaauu 60

cagucucguu gugccuguga ccugguacaa cgagacugaa uugcuucuga ggagcgccuu 120

gacagcagcc augggagggc cgcccccuac cucaguga 158

<210> 337

<211> 158

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 337

gugcugggcg gggggcggcg ggcccucccg cagaacacca ugcgcucuuc ggaagcaauu 60

cagucucguu guaccuguga uuugguacaa cgagacugaa uugcuucuga ggagcgccuu 120

gacagcagcc augggagggc cgcccccuac cucaguga 158

<210> 338

<211> 158

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 338

gugcugggcg gggggcggcg ggcccucccg cagaacacca ugcgcucuuc ggaagcaauu 60

cagacucguu guaccuguga ccugguacaa cgagacugaa uugcuucugu ggagcgccuu 120

gacagcagcc augggagggc cgcccccuac cucaguga 158

<210> 339

<211> 158

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 339

gugcugggcg gggggcggcg ggcccucccg cagaacacca ugcgcucuuc ggaagcaauu 60

cagucucguu guaccuguga ccugguacaa cgagacugaa uugcuucugu ggagcgccuu 120

gacagcagcc augggagggc cgcccccuac cucaguga 158

<210> 340

<211> 260

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 340

gaagcaaaga aggggcagag ggagcccgug agcugagugg gccagggacu gggagaagga 60

gugaggaggc agggccggca ugccucugcu gcuggccaga gcaauucagu cucguuguac 120

cgucugcacc ugucacuagu acaacgagac ugaauugcuu uggccgugua gugcuaccca 180

gcgcuggcug ccuccucagc auugcaauuc cucucccauc ugggcaccag ucagcuaccc 240

uggugggaau cuggguagcc 260

<210> 341

<211> 158

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 341

gugcugggcg gggggcggcg ggcccucccg cagaacacca ugcgcucuuc ggaaccugcu 60

agcuccaugc uucccuguga ccugguaagc auggagcuag cagguucuga ggagcgccuu 120

gacagcagcc augggagggc cgcccccuac cucaguga 158

<210> 342

<211> 158

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 342

gugcugggcg gggggcggcg ggcccucccg cagaacacca ugcgcucuuc ggaaccugcu 60

agcuccaugc uugccuguga ccugguaagc auggagcuag cagguucuga ggagcgccuu 120

gacagcagcc augggagggc cgcccccuac cucaguga 158

<210> 343

<211> 158

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 343

gugcugggcg gggggcggcg ggcccucccg cagaacacca ugcgcucuuc ggaaccugcu 60

agcuccaugc uucccuguga uuugguaagc auggagcuag cagguucuga ggagcgccuu 120

gacagcagcc augggagggc cgcccccuac cucaguga 158

<210> 344

<211> 158

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 344

gugcugggcg gggggcggcg ggcccucccg cagaacacca ugcgcucuuc ggaaccugcu 60

agcaccaugc uuaccuguga ccugguaagc auggagcuag cagguucugu ggagcgccuu 120

gacagcagcc augggagggc cgcccccuac cucaguga 158

<210> 345

<211> 158

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 345

gugcugggcg gggggcggcg ggcccucccg cagaacacca ugcgcucuuc ggaaccugcu 60

agcuccaugc uuaccuguga ccugguaagc auggagcuag cagguucugu ggagcgccuu 120

gacagcagcc augggagggc cgcccccuac cucaguga 158

<210> 346

<211> 260

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 346

gaagcaaaga aggggcagag ggagcccgug agcugagugg gccagggacu gggagaagga 60

gugaggaggc agggccggca ugccucugcu gcuggccaga ccugcuagcu ccaugcuucc 120

cgucugcacc ugucacuagu aagcauggag cuagcagguu uggccgugua gugcuaccca 180

gcgcuggcug ccuccucagc auugcaauuc cucucccauc ugggcaccag ucagcuaccc 240

uggugggaau cuggguagcc 260

<210> 347

<211> 158

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 347

gugcugggcg gggggcggcg ggcccucccg cagaacacca ugcgcucuuc ggaaccugcu 60

agcuccaugc uugcugugac ccaaguaagc auggagcuag cagguucuga ggagcgccuu 120

gacagcagcc augggagggc cgcccccuac cucaguga 158

<210> 348

<211> 158

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 348

gugcugggcg gggggcggcg ggcccucccg cagaacacca ugcgcuccac ggaaccugcu 60

agcuccaugc uugcugugac ccaaguaagc auggagcuag cagguucuga ggagcgccuu 120

gacagcagcc augggagggc cgcccccuac cucaguga 158

<210> 349

<211> 163

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 349

gugcugggcg gggggcggcg ggcccucccg cagaacacca ugcgcuccac ggaaccugcu 60

agcuccaugc uugcuguggc cacugagaag uaagcaugga gcuagcaggu ucugaggagc 120

gccuugacag cagccauggg agggccgccc ccuaccucag uga 163

<210> 350

<211> 122

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 350

gggcccuccc gcagaacacc augcgcucca cggaaccugc uagcuccaug cuugcuguga 60

cccaaguaag cauggagcua gcagguucug aggagcgccu ugacagcagc caugggaggg 120

cc 122

<210> 351

<211> 117

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 351

cucccgcaga acaccaugcg cuccacggaa ccugcuagcu ccaugcuugc ugugacccaa 60

guaagcaugg agcuagcagg uucugaggag cgccuugaca gcagccaugg gagggcc 117

<210> 352

<211> 160

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 352

gugcugggcg gggggcggcg ggcccucccg cagaacacca ugcgcuccac ggaagccugc 60

uagcuccaug cuugcuguga cccaaguaag cauggagcua gcaggcuucu gaggagcgcc 120

uugacagcag ccaugggagg gccgcccccu accucaguga 160

<210> 353

<211> 158

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 353

gugcugggcg gggggcggcg ggcccucccg cagaacacca ugcgcuccac ggaaccugcu 60

agcuccaugc uugaugugac ccaauuaagc auggagcuag cagguucuga ggagcgccuu 120

gacagcagcc augggagggc cgcccccuac cucaguga 158

<210> 354

<211> 158

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 354

gugcugggcg gggggcggcg ggcccucccg cagaacacca ugcgcuccuc ggaaccugcu 60

agcuccaugc uugcugugac ccaaguaagc auggagcuag cagguucugc ggagcgccuu 120

gacagcagcc augggagggc cgcccccuac cucaguga 158

<210> 355

<211> 158

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 355

gugcugggcg gggggcggcg ggcccucccg cagaacacca ugcgcucuuc ggaacauugg 60

aauuccuaaa auuccuguga ccugguauuu uaggaauucc aauguucuga ggagcgccuu 120

gacagcagcc augggagggc cgcccccuac cucaguga 158

<210> 356

<211> 158

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 356

gugcugggcg gggggcggcg ggcccucccg cagaacacca ugcgcucuuc ggaagaucau 60

uggaauuccu aauccuguga ccugguuuag gaauuccaau gaucuucuga ggagcgccuu 120

gacagcagcc augggagggc cgcccccuac cucaguga 158

<210> 357

<211> 158

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 357

gugcugggcg gggggcggcg ggcccucccg cagaacacca ugcgcucuuc ggaacauugg 60

aauuccuaaa augccuguga ccugguauuu uaggaauucc aauguucuga ggagcgccuu 120

gacagcagcc augggagggc cgcccccuac cucaguga 158

<210> 358

<211> 158

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 358

gugcugggcg gggggcggcg ggcccucccg cagaacacca ugcgcucuuc ggaagaucau 60

uggaauuccu aagccuguga ccugguuuag gaauuccaau gaucuucuga ggagcgccuu 120

gacagcagcc augggagggc cgcccccuac cucaguga 158

<210> 359

<211> 158

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 359

gugcugggcg gggggcggcg ggcccucccg cagaacacca ugcgcucuuc ggaacauugg 60

aauuccuaaa auaccuguga uuugguauuu uaggaauucc aauguucuga ggagcgccuu 120

gacagcagcc augggagggc cgcccccuac cucaguga 158

<210> 360

<211> 158

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 360

gugcugggcg gggggcggcg ggcccucccg cagaacacca ugcgcucuuc ggaagaucau 60

uggaauuccu aaaccuguga uuugguuuag gaauuccaau gaucuucuga ggagcgccuu 120

gacagcagcc augggagggc cgcccccuac cucaguga 158

<210> 361

<211> 158

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 361

gugcugggcg gggggcggcg ggcccucccg cagaacacca ugcgcucuuc ggaacauugg 60

aauaccuaaa auaccuguga ccugguauuu uaggaauucc aauguucugu ggagcgccuu 120

gacagcagcc augggagggc cgcccccuac cucaguga 158

<210> 362

<211> 158

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 362

gugcugggcg gggggcggcg ggcccucccg cagaacacca ugcgcucuuc ggaagaucau 60

ugguauuccu aaaccuguga ccugguuuag gaauuccaau gaucuucugu ggagcgccuu 120

gacagcagcc augggagggc cgcccccuac cucaguga 158

<210> 363

<211> 158

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 363

gugcugggcg gggggcggcg ggcccucccg cagaacacca ugcgcucuuc ggaacauugg 60

aauuccuaaa auaccuguga ccugguauuu uaggaauucc aauguucugu ggagcgccuu 120

gacagcagcc augggagggc cgcccccuac cucaguga 158

<210> 364

<211> 158

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 364

gugcugggcg gggggcggcg ggcccucccg cagaacacca ugcgcucuuc ggaagaucau 60

uggaauuccu aaaccuguga ccugguuuag gaauuccaau gaucuucugu ggagcgccuu 120

gacagcagcc augggagggc cgcccccuac cucaguga 158

<210> 365

<211> 260

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 365

gaagcaaaga aggggcagag ggagcccgug agcugagugg gccagggacu gggagaagga 60

gugaggaggc agggccggca ugccucugcu gcuggccaga cauuggaauu ccuaaaauac 120

cgucugcacc ugucacuagu auuuuaggaa uuccaauguu uggccgugua gugcuaccca 180

gcgcuggcug ccuccucagc auugcaauuc cucucccauc ugggcaccag ucagcuaccc 240

uggugggaau cuggguagcc 260

<210> 366

<211> 260

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 366

gaagcaaaga aggggcagag ggagcccgug agcugagugg gccagggacu gggagaagga 60

gugaggaggc agggccggca ugccucugcu gcuggccaga gaucauugga auuccuaaac 120

cgucugcacc ugucacuagu uuaggaauuc caaugaucuu uggccgugua gugcuaccca 180

gcgcuggcug ccuccucagc auugcaauuc cucucccauc ugggcaccag ucagcuaccc 240

uggugggaau cuggguagcc 260

<210> 367

<211> 158

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 367

gugcugggcg gggggcggcg ggcccucccg cagaacacca ugcgcuccac ggaauaagca 60

uggagcuagc agggugugac ccaacccugc uagcuccaug cuuauucuga ggagcgccuu 120

gacagcagcc augggagggc cgcccccuac cucaguga 158

<210> 368

<211> 163

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 368

gugcugggcg gggggcggcg ggcccucccg cagaacacca ugcgcuccuc ggaauaagca 60

uggagcuagc agguuguggc cacugagaaa ccugcuagcu ccaugcuugu ucugcggagc 120

gccuugacag cagccauggg agggccgccc ccuaccucag uga 163

<210> 369

<211> 2211

<212> ДНК

<213> Аденоассоциированный вирус 1

<400> 369

atggctgccg atggttatct tccagattgg ctcgaggaca acctctctga gggcattcgc 60

gagtggtggg acttgaaacc tggagccccg aagcccaaag ccaaccagca aaagcaggac 120

gacggccggg gtctggtgct tcctggctac aagtacctcg gacccttcaa cggactcgac 180

aagggggagc ccgtcaacgc ggcggacgca gcggccctcg agcacgacaa ggcctacgac 240

cagcagctca aagcgggtga caatccgtac ctgcggtata accacgccga cgccgagttt 300

caggagcgtc tgcaagaaga tacgtctttt gggggcaacc tcgggcgagc agtcttccag 360

gccaagaagc gggttctcga acctctcggt ctggttgagg aaggcgctaa gacggctcct 420

ggaaagaaac gtccggtaga gcagtcgcca caagagccag actcctcctc gggcatcggc 480

aagacaggcc agcagcccgc taaaaagaga ctcaattttg gtcagactgg cgactcagag 540

tcagtccccg atccacaacc tctcggagaa cctccagcaa cccccgctgc tgtgggacct 600

actacaatgg cttcaggcgg tggcgcacca atggcagaca ataacgaagg cgccgacgga 660

gtgggtaatg cctcaggaaa ttggcattgc gattccacat ggctgggcga cagagtcatc 720

accaccagca cccgcacctg ggccttgccc acctacaata accacctcta caagcaaatc 780

tccagtgctt caacgggggc cagcaacgac aaccactact tcggctacag caccccctgg 840

gggtattttg atttcaacag attccactgc cacttttcac cacgtgactg gcagcgactc 900

atcaacaaca attggggatt ccggcccaag agactcaact tcaaactctt caacatccaa 960

gtcaaggagg tcacgacgaa tgatggcgtc acaaccatcg ctaataacct taccagcacg 1020

gttcaagtct tctcggactc ggagtaccag cttccgtacg tcctcggctc tgcgcaccag 1080

ggctgcctcc ctccgttccc ggcggacgtg ttcatgattc cgcaatacgg ctacctgacg 1140

ctcaacaatg gcagccaagc cgtgggacgt tcatcctttt actgcctgga atatttccct 1200

tctcagatgc tgagaacggg caacaacttt accttcagct acacctttga ggaagtgcct 1260

ttccacagca gctacgcgca cagccagagc ctggaccggc tgatgaatcc tctcatcgac 1320

caatacctgt attacctgaa cagaactcaa aatcagtccg gaagtgccca aaacaaggac 1380

ttgctgttta gccgtgggtc tccagctggc atgtctgttc agcccaaaaa ctggctacct 1440

ggaccctgtt atcggcagca gcgcgtttct aaaacaaaaa cagacaacaa caacagcaat 1500

tttacctgga ctggtgcttc aaaatataac ctcaatgggc gtgaatccat catcaaccct 1560

ggcactgcta tggcctcaca caaagacgac gaagacaagt tctttcccat gagcggtgtc 1620

atgatttttg gaaaagagag cgccggagct tcaaacactg cattggacaa tgtcatgatt 1680

acagacgaag aggaaattaa agccactaac cctgtggcca ccgaaagatt tgggaccgtg 1740

gcagtcaatt tccagagcag cagcacagac cctgcgaccg gagatgtgca tgctatggga 1800

gcattacctg gcatggtgtg gcaagataga gacgtgtacc tgcagggtcc catttgggcc 1860

aaaattcctc acacagatgg acactttcac ccgtctcctc ttatgggcgg ctttggactc 1920

aagaacccgc ctcctcagat cctcatcaaa aacacgcctg ttcctgcgaa tcctccggcg 1980

gagttttcag ctacaaagtt tgcttcattc atcacccaat actccacagg acaagtgagt 2040

gtggaaattg aatgggagct gcagaaagaa aacagcaagc gctggaatcc cgaagtgcag 2100

tacacatcca attatgcaaa atctgccaac gttgatttta ctgtggacaa caatggactt 2160

tatactgagc ctcgccccat tggcacccgt taccttaccc gtcccctgta a 2211

<210> 370

<211> 736

<212> Белок

<213> Аденоассоциированный вирус 1

<400> 370

Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser

1 5 10 15

Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Asp Leu Lys Pro Gly Ala Pro Lys Pro

20 25 30

Lys Ala Asn Gln Gln Lys Gln Asp Asp Gly Arg Gly Leu Val Leu Pro

35 40 45

Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro

50 55 60

Val Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp

65 70 75 80

Gln Gln Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Arg Tyr Asn His Ala

85 90 95

Asp Ala Glu Phe Gln Glu Arg Leu Gln Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly

100 105 110

Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gln Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro

115 120 125

Leu Gly Leu Val Glu Glu Gly Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg

130 135 140

Pro Val Glu Gln Ser Pro Gln Glu Pro Asp Ser Ser Ser Gly Ile Gly

145 150 155 160

Lys Thr Gly Gln Gln Pro Ala Lys Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gln Thr

165 170 175

Gly Asp Ser Glu Ser Val Pro Asp Pro Gln Pro Leu Gly Glu Pro Pro

180 185 190

Ala Thr Pro Ala Ala Val Gly Pro Thr Thr Met Ala Ser Gly Gly Gly

195 200 205

Ala Pro Met Ala Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Asn Ala

210 215 220

Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Thr Trp Leu Gly Asp Arg Val Ile

225 230 235 240

Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His Leu

245 250 255

Tyr Lys Gln Ile Ser Ser Ala Ser Thr Gly Ala Ser Asn Asp Asn His

260 265 270

Tyr Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn Arg Phe

275 280 285

His Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gln Arg Leu Ile Asn Asn Asn

290 295 300

Trp Gly Phe Arg Pro Lys Arg Leu Asn Phe Lys Leu Phe Asn Ile Gln

305 310 315 320

Val Lys Glu Val Thr Thr Asn Asp Gly Val Thr Thr Ile Ala Asn Asn

325 330 335

Leu Thr Ser Thr Val Gln Val Phe Ser Asp Ser Glu Tyr Gln Leu Pro

340 345 350

Tyr Val Leu Gly Ser Ala His Gln Gly Cys Leu Pro Pro Phe Pro Ala

355 360 365

Asp Val Phe Met Ile Pro Gln Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn Asn Gly

370 375 380

Ser Gln Ala Val Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro

385 390 395 400

Ser Gln Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Thr Phe Ser Tyr Thr Phe

405 410 415

Glu Glu Val Pro Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gln Ser Leu Asp

420 425 430

Arg Leu Met Asn Pro Leu Ile Asp Gln Tyr Leu Tyr Tyr Leu Asn Arg

435 440 445

Thr Gln Asn Gln Ser Gly Ser Ala Gln Asn Lys Asp Leu Leu Phe Ser

450 455 460

Arg Gly Ser Pro Ala Gly Met Ser Val Gln Pro Lys Asn Trp Leu Pro

465 470 475 480

Gly Pro Cys Tyr Arg Gln Gln Arg Val Ser Lys Thr Lys Thr Asp Asn

485 490 495

Asn Asn Ser Asn Phe Thr Trp Thr Gly Ala Ser Lys Tyr Asn Leu Asn

500 505 510

Gly Arg Glu Ser Ile Ile Asn Pro Gly Thr Ala Met Ala Ser His Lys

515 520 525

Asp Asp Glu Asp Lys Phe Phe Pro Met Ser Gly Val Met Ile Phe Gly

530 535 540

Lys Glu Ser Ala Gly Ala Ser Asn Thr Ala Leu Asp Asn Val Met Ile

545 550 555 560

Thr Asp Glu Glu Glu Ile Lys Ala Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu Arg

565 570 575

Phe Gly Thr Val Ala Val Asn Phe Gln Ser Ser Ser Thr Asp Pro Ala

580 585 590

Thr Gly Asp Val His Ala Met Gly Ala Leu Pro Gly Met Val Trp Gln

595 600 605

Asp Arg Asp Val Tyr Leu Gln Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His

610 615 620

Thr Asp Gly His Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Leu

625 630 635 640

Lys Asn Pro Pro Pro Gln Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala

645 650 655

Asn Pro Pro Ala Glu Phe Ser Ala Thr Lys Phe Ala Ser Phe Ile Thr

660 665 670

Gln Tyr Ser Thr Gly Gln Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gln

675 680 685

Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Val Gln Tyr Thr Ser Asn

690 695 700

Tyr Ala Lys Ser Ala Asn Val Asp Phe Thr Val Asp Asn Asn Gly Leu

705 710 715 720

Tyr Thr Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Pro Leu

725 730 735

<210> 371

<211> 4718

<212> ДНК

<213> Аденоассоциированный вирус 1

<400> 371

ttgcccactc cctctctgcg cgctcgctcg ctcggtgggg cctgcggacc aaaggtccgc 60

agacggcaga gctctgctct gccggcccca ccgagcgagc gagcgcgcag agagggagtg 120

ggcaactcca tcactagggg taatcgcgaa gcgcctccca cgctgccgcg tcagcgctga 180

cgtaaattac gtcatagggg agtggtcctg tattagctgt cacgtgagtg cttttgcgac 240

attttgcgac accacgtggc catttagggt atatatggcc gagtgagcga gcaggatctc 300

cattttgacc gcgaaatttg aacgagcagc agccatgccg ggcttctacg agatcgtgat 360

caaggtgccg agcgacctgg acgagcacct gccgggcatt tctgactcgt ttgtgagctg 420

ggtggccgag aaggaatggg agctgccccc ggattctgac atggatctga atctgattga 480

gcaggcaccc ctgaccgtgg ccgagaagct gcagcgcgac ttcctggtcc aatggcgccg 540

cgtgagtaag gccccggagg ccctcttctt tgttcagttc gagaagggcg agtcctactt 600

ccacctccat attctggtgg agaccacggg ggtcaaatcc atggtgctgg gccgcttcct 660

gagtcagatt agggacaagc tggtgcagac catctaccgc gggatcgagc cgaccctgcc 720

caactggttc gcggtgacca agacgcgtaa tggcgccgga ggggggaaca aggtggtgga 780

cgagtgctac atccccaact acctcctgcc caagactcag cccgagctgc agtgggcgtg 840

gactaacatg gaggagtata taagcgcctg tttgaacctg gccgagcgca aacggctcgt 900

ggcgcagcac ctgacccacg tcagccagac ccaggagcag aacaaggaga atctgaaccc 960

caattctgac gcgcctgtca tccggtcaaa aacctccgcg cgctacatgg agctggtcgg 1020

gtggctggtg gaccggggca tcacctccga gaagcagtgg atccaggagg accaggcctc 1080

gtacatctcc ttcaacgccg cttccaactc gcggtcccag atcaaggccg ctctggacaa 1140

tgccggcaag atcatggcgc tgaccaaatc cgcgcccgac tacctggtag gccccgctcc 1200

gcccgcggac attaaaacca accgcatcta ccgcatcctg gagctgaacg gctacgaacc 1260

tgcctacgcc ggctccgtct ttctcggctg ggcccagaaa aggttcggga agcgcaacac 1320

catctggctg tttgggccgg ccaccacggg caagaccaac atcgcggaag ccatcgccca 1380

cgccgtgccc ttctacggct gcgtcaactg gaccaatgag aactttccct tcaatgattg 1440

cgtcgacaag atggtgatct ggtgggagga gggcaagatg acggccaagg tcgtggagtc 1500

cgccaaggcc attctcggcg gcagcaaggt gcgcgtggac caaaagtgca agtcgtccgc 1560

ccagatcgac cccacccccg tgatcgtcac ctccaacacc aacatgtgcg ccgtgattga 1620

cgggaacagc accaccttcg agcaccagca gccgttgcag gaccggatgt tcaaatttga 1680

actcacccgc cgtctggagc atgactttgg caaggtgaca aagcaggaag tcaaagagtt 1740

cttccgctgg gcgcaggatc acgtgaccga ggtggcgcat gagttctacg tcagaaaggg 1800

tggagccaac aaaagacccg cccccgatga cgcggataaa agcgagccca agcgggcctg 1860

cccctcagtc gcggatccat cgacgtcaga cgcggaagga gctccggtgg actttgccga 1920

caggtaccaa aacaaatgtt ctcgtcacgc gggcatgctt cagatgctgt ttccctgcaa 1980

gacatgcgag agaatgaatc agaatttcaa catttgcttc acgcacggga cgagagactg 2040

ttcagagtgc ttccccggcg tgtcagaatc tcaaccggtc gtcagaaaga ggacgtatcg 2100

gaaactctgt gccattcatc atctgctggg gcgggctccc gagattgctt gctcggcctg 2160

cgatctggtc aacgtggacc tggatgactg tgtttctgag caataaatga cttaaaccag 2220

gtatggctgc cgatggttat cttccagatt ggctcgagga caacctctct gagggcattc 2280

gcgagtggtg ggacttgaaa cctggagccc cgaagcccaa agccaaccag caaaagcagg 2340

acgacggccg gggtctggtg cttcctggct acaagtacct cggacccttc aacggactcg 2400

acaaggggga gcccgtcaac gcggcggacg cagcggccct cgagcacgac aaggcctacg 2460

accagcagct caaagcgggt gacaatccgt acctgcggta taaccacgcc gacgccgagt 2520

ttcaggagcg tctgcaagaa gatacgtctt ttgggggcaa cctcgggcga gcagtcttcc 2580

aggccaagaa gcgggttctc gaacctctcg gtctggttga ggaaggcgct aagacggctc 2640

ctggaaagaa acgtccggta gagcagtcgc cacaagagcc agactcctcc tcgggcatcg 2700

gcaagacagg ccagcagccc gctaaaaaga gactcaattt tggtcagact ggcgactcag 2760

agtcagtccc cgatccacaa cctctcggag aacctccagc aacccccgct gctgtgggac 2820

ctactacaat ggcttcaggc ggtggcgcac caatggcaga caataacgaa ggcgccgacg 2880

gagtgggtaa tgcctcagga aattggcatt gcgattccac atggctgggc gacagagtca 2940

tcaccaccag cacccgcacc tgggccttgc ccacctacaa taaccacctc tacaagcaaa 3000

tctccagtgc ttcaacgggg gccagcaacg acaaccacta cttcggctac agcaccccct 3060

gggggtattt tgatttcaac agattccact gccacttttc accacgtgac tggcagcgac 3120

tcatcaacaa caattgggga ttccggccca agagactcaa cttcaaactc ttcaacatcc 3180

aagtcaagga ggtcacgacg aatgatggcg tcacaaccat cgctaataac cttaccagca 3240

cggttcaagt cttctcggac tcggagtacc agcttccgta cgtcctcggc tctgcgcacc 3300

agggctgcct ccctccgttc ccggcggacg tgttcatgat tccgcaatac ggctacctga 3360

cgctcaacaa tggcagccaa gccgtgggac gttcatcctt ttactgcctg gaatatttcc 3420

cttctcagat gctgagaacg ggcaacaact ttaccttcag ctacaccttt gaggaagtgc 3480

ctttccacag cagctacgcg cacagccaga gcctggaccg gctgatgaat cctctcatcg 3540

accaatacct gtattacctg aacagaactc aaaatcagtc cggaagtgcc caaaacaagg 3600

acttgctgtt tagccgtggg tctccagctg gcatgtctgt tcagcccaaa aactggctac 3660

ctggaccctg ttatcggcag cagcgcgttt ctaaaacaaa aacagacaac aacaacagca 3720

attttacctg gactggtgct tcaaaatata acctcaatgg gcgtgaatcc atcatcaacc 3780

ctggcactgc tatggcctca cacaaagacg acgaagacaa gttctttccc atgagcggtg 3840

tcatgatttt tggaaaagag agcgccggag cttcaaacac tgcattggac aatgtcatga 3900

ttacagacga agaggaaatt aaagccacta accctgtggc caccgaaaga tttgggaccg 3960

tggcagtcaa tttccagagc agcagcacag accctgcgac cggagatgtg catgctatgg 4020

gagcattacc tggcatggtg tggcaagata gagacgtgta cctgcagggt cccatttggg 4080

ccaaaattcc tcacacagat ggacactttc acccgtctcc tcttatgggc ggctttggac 4140

tcaagaaccc gcctcctcag atcctcatca aaaacacgcc tgttcctgcg aatcctccgg 4200

cggagttttc agctacaaag tttgcttcat tcatcaccca atactccaca ggacaagtga 4260

gtgtggaaat tgaatgggag ctgcagaaag aaaacagcaa gcgctggaat cccgaagtgc 4320

agtacacatc caattatgca aaatctgcca acgttgattt tactgtggac aacaatggac 4380

tttatactga gcctcgcccc attggcaccc gttaccttac ccgtcccctg taattacgtg 4440

ttaatcaata aaccggttga ttcgtttcag ttgaactttg gtctcctgtc cttcttatct 4500

tatcggttac catggttata gcttacacat taactgcttg gttgcgcttc gcgataaaag 4560

acttacgtca tcgggttacc cctagtgatg gagttgccca ctccctctct gcgcgctcgc 4620

tcgctcggtg gggcctgcgg accaaaggtc cgcagacggc agagctctgc tctgccggcc 4680

ccaccgagcg agcgagcgcg cagagaggga gtgggcaa 4718

<210> 372

<211> 3131

<212> ДНК

<213> Аденоассоциированный вирус

<400> 372

gcggccgcga attcgccctt ggctgcgtca actggaccaa tgagaacttt cccttcaatg 60

attgcgtcga caagatggtg atctggtggg aggagggcaa gatgacggcc aaggtcgtgg 120

agtccgccaa ggccattctc ggcggcagca aggtgcgcgt ggaccaaaag tgcaagtcgt 180

ccgcccagat cgaccccacc cccgtgatcg tcacctccaa caccaacatg tgcgccgtga 240

ttgacgggaa cagcaccacc ttcgagcacc agcagcctct ccaggaccgg atgtttaagt 300

tcgaactcac ccgccgtctg gagcacgact ttggcaaggt gacaaagcag gaagtcaaag 360

agttcttccg ctgggccagt gatcacgtga ccgaggtggc gcatgagttt tacgtcagaa 420

agggcggagc cagcaaaaga cccgcccccg atgacgcgga taaaagcgag cccaagcggg 480

cctgcccctc agtcgcggat ccatcgacgt cagacgcgga aggagctccg gtggactttg 540

ccgacaggta ccaaaacaaa tgttctcgtc acgcgggcat gcttcagatg ctgtttccct 600

gcaaaacgtg cgagagaatg aatcggaatt tcaacatttg cttcacacac ggggtcagag 660

actgctcaga gtgtttcccc ggcgtgtcag aatctcaacc ggtcgtcaga aagaggacgt 720

atcggaaact ccgtgcgatt catcatctgc tggggcgggc tcccgagatt gcttgctcgg 780

cctgcgatct ggtcaacgtg gacctggatg actgtgtttc tgagcaataa atgacttaaa 840

ccaggtatgg ctgccgatgg ttatcttcca gattggctcg aggacaacct ctctgagggc 900

attcgcgagt ggtgggcgct gaaacctgga gccccgaagc ccaaagccaa ccagcaaaag 960

caggacgacg gccggggtct ggtgcttcct ggctacaagt acctcggacc cttcaacgga 1020

ctcgacaagg gggagcccgt caacgcggcg gacgcagcgg ccctcgagca cgacaaggct 1080

tacgaccagc agctgcaggc gggtgacaat ccgtacctgc ggtataacca cgccgacgcc 1140

gagtttcagg agcgtctgca agaagatacg tcttttgggg gcaacctcgg gcgagcagtc 1200

ttccaggcca agaagcgggt tctcgaacct ctcggtctgg ttgaggaagg cgctaagacg 1260

gctcctggaa agaagagacc ggtagagcca tcaccccagc gttctccaga ctcctctacg 1320

ggcatcggca agaaaggcca acagcccgcc agaaaaagac tcaattttgg tcagactggc 1380

gactcagagt cagttccaga ccctcaacct ctcggagaac ctccagcagc gccctctggt 1440

gtgggaccta atacaatggc tgcaggcggt ggcgcaccaa tggcagacaa taacgaaggc 1500

gccgacggag tgggtagttc ctcgggaaat tggcattgcg attccacatg gctgggcgac 1560

agagtcatca ccaccagcac ccgaacctgg gccctgccca cctacaacaa ccacctctac 1620

aagcaaatct ccaacgggac atcgggagga gccaccaacg acaacaccta cttcggctac 1680

agcaccccct gggggtattt tgactttaac agattccact gccacctttc accacgtgac 1740

tggcagcgac tcatcaacaa caactgggga ttccgaccca agagactcag cttcaagctc 1800

ttcaacatcc aggtcaagga ggtcacgcag aatgaaggca ccaagaccat cgccaataac 1860

ctcaccagca ccatccaggt gtttacggac tcggagtacc agctgccgta cgttctcggc 1920

tctgtccacc agggctgcct gcctccgttc ccggcggacg tgttcatgat tccccagtac 1980

ggctacctaa cactcaacaa cggtagtcag gccgtgggac gctcctcctt ctactgcctg 2040

gaatactttc cttcgcagat gctgagaacc ggcaacaact tccagtttac ttacaccttc 2100

gaggacgtgc ctttccacag cagctacgcc cacagctaga gcttggaccg gctgatgaat 2160

cctctgattg accagtacct gtactacttg tctcggactc aaacaacagg aggcacggca 2220

aatacgcaga ctctgggctt cagccaaggt gggcctaata caatggccaa tcaggcaaag 2280

aactggctgc caggaccctg ttaccgccaa caacgcgtct caacgacaac cgggcaaaac 2340

aacaatagca actttgcctg gactgctggg accaaatacc atctgaatgg aagaaattca 2400

ttggctaatc ctggcatcgc tatggcaaca cacaaagacg acgaggagcg tttttttccc 2460

agtaacggga tcctgatttt tggcaaacaa aatgctgcca gagacaatgc ggattacagc 2520

gatgtcatgc tcaccagcga ggaagaaatc aaaaccacta accctgtggc tacagaggaa 2580

tacggtatcg tggcagataa cttgcagcag caaaacacgg ctcctcaaat tggaactgtc 2640

aacagccagg gggccttacc cggtatggtc tggcagaacc gggacgtgta cctgcagggt 2700

cccatctggg ccaagattcc tcacacggac ggcaacttcc acccgtctcc gctgatgggc 2760

ggctttggcc tgaaacatcc tccgcctcag atcctgatca agaacacgcc tgtacctgcg 2820

gatcctccga ccaccttcaa ccagtcaaag ctgaactctt tcatcacgca atacagcacc 2880

ggacaggtca gcgtggaaat tgaatgggag ctgcagaagg aaaacagcaa gcgctggaac 2940

cccgagatcc agtacacctc caactactac aaatctataa gtgtggactt tgctgttaat 3000

acagaaggcg tgtactctga accccgcccc attggcaccc gttacctcac ccgtaatctg 3060

taattgcctg ttaatcaata aaccggttga ttcgtttcag ttgaactttg gtctctgcga 3120

agggcgaatt c 3131

<210> 373

<211> 255

<212> ДНК

<213> Аденоассоциированный вирус 10

<400> 373

ggtaattcct ccggaaattg gcattgcgat tccacatggc tgggcgacag agtcatcacc 60

accagcaccc gaacctgggt cctgcccacc tacaacaacc acatctacaa gcaaatctcc 120

agcgagacag gagccaccaa cgacaaccac tacttcggct acagcacccc ctgggggtat 180

tttgacttta acagattcca ctgccacttt tcaccacgtg actggcagcg actcatcaac 240

aacaactggg gattc 255

<210> 374

<211> 738

<212> Белок

<213> Аденоассоциированный вирус 10

<400> 374

Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser

1 5 10 15

Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Asp Leu Lys Pro Gly Ala Pro Lys Pro

20 25 30

Lys Ala Asn Gln Gln Lys Gln Asp Asp Gly Arg Gly Leu Val Leu Pro

35 40 45

Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro

50 55 60

Val Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp

65 70 75 80

Gln Gln Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Arg Tyr Asn His Ala

85 90 95

Asp Ala Glu Phe Gln Glu Arg Leu Gln Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly

100 105 110

Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gln Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro

115 120 125

Leu Gly Leu Val Glu Glu Ala Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg

130 135 140

Pro Val Glu Pro Ser Pro Gln Arg Ser Pro Asp Ser Ser Thr Gly Ile

145 150 155 160

Gly Lys Lys Gly Gln Gln Pro Ala Lys Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gln

165 170 175

Thr Gly Glu Ser Glu Ser Val Pro Asp Pro Gln Pro Ile Gly Glu Pro

180 185 190

Pro Ala Gly Pro Ser Gly Leu Gly Ser Gly Thr Met Ala Ala Gly Gly

195 200 205

Gly Ala Pro Met Ala Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Ser

210 215 220

Ser Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Thr Trp Leu Gly Asp Arg Val

225 230 235 240

Ile Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His

245 250 255

Leu Tyr Lys Gln Ile Ser Asn Gly Thr Ser Gly Gly Ser Thr Asn Asp

260 265 270

Asn Thr Tyr Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn

275 280 285

Arg Phe His Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gln Arg Leu Ile Asn

290 295 300

Asn Asn Trp Gly Phe Arg Pro Lys Arg Leu Ser Phe Lys Leu Phe Asn

305 310 315 320

Ile Gln Val Lys Glu Val Thr Gln Asn Glu Gly Thr Lys Thr Ile Ala

325 330 335

Asn Asn Leu Thr Ser Thr Ile Gln Val Phe Thr Asp Ser Glu Tyr Gln

340 345 350

Leu Pro Tyr Val Leu Gly Ser Ala His Gln Gly Cys Leu Pro Pro Phe

355 360 365

Pro Ala Asp Val Phe Met Ile Pro Gln Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn

370 375 380

Asn Gly Ser Gln Ala Val Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr

385 390 395 400

Phe Pro Ser Gln Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Glu Phe Ser Tyr

405 410 415

Thr Phe Glu Asp Val Pro Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gln Ser

420 425 430

Leu Asp Arg Leu Met Asn Pro Leu Ile Asp Gln Tyr Leu Tyr Tyr Leu

435 440 445

Ser Arg Thr Gln Ser Thr Gly Gly Thr Gln Gly Thr Gln Gln Leu Leu

450 455 460

Phe Ser Gln Ala Gly Pro Ala Asn Met Ser Ala Gln Ala Lys Asn Trp

465 470 475 480

Leu Pro Gly Pro Cys Tyr Arg Gln Gln Arg Val Ser Thr Thr Leu Ser

485 490 495

Gln Asn Asn Asn Ser Asn Phe Ala Trp Thr Gly Ala Thr Lys Tyr His

500 505 510

Leu Asn Gly Arg Asp Ser Leu Val Asn Pro Gly Val Ala Met Ala Thr

515 520 525

His Lys Asp Asp Glu Glu Arg Phe Phe Pro Ser Ser Gly Val Leu Met

530 535 540

Phe Gly Lys Gln Gly Ala Gly Arg Asp Asn Val Asp Tyr Ser Ser Val

545 550 555 560

Met Leu Thr Ser Glu Glu Glu Ile Lys Thr Thr Asn Pro Val Ala Thr

565 570 575

Glu Gln Tyr Gly Val Val Ala Asp Asn Leu Gln Gln Ala Asn Thr Gly

580 585 590

Pro Ile Val Gly Asn Val Asn Ser Gln Gly Ala Leu Pro Gly Met Val

595 600 605

Trp Gln Asn Arg Asp Val Tyr Leu Gln Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile

610 615 620

Pro His Thr Asp Gly Asn Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe

625 630 635 640

Gly Leu Lys His Pro Pro Pro Gln Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val

645 650 655

Pro Ala Asp Pro Pro Thr Thr Phe Ser Gln Ala Lys Leu Ala Ser Phe

660 665 670

Ile Thr Gln Tyr Ser Thr Gly Gln Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu

675 680 685

Leu Gln Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gln Tyr Thr

690 695 700

Ser Asn Tyr Tyr Lys Ser Thr Asn Val Asp Phe Ala Val Asn Thr Glu

705 710 715 720

Gly Thr Tyr Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg

725 730 735

Asn Leu

<210> 375

<211> 738

<212> Белок

<213> Аденоассоциированный вирус 10

<400> 375

Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser

1 5 10 15

Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Asp Leu Lys Pro Gly Ala Pro Lys Pro

20 25 30

Lys Ala Asn Gln Gln Lys Gln Asp Asp Gly Arg Gly Leu Val Leu Pro

35 40 45

Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro

50 55 60

Val Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp

65 70 75 80

Gln Gln Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Arg Tyr Asn His Ala

85 90 95

Asp Ala Glu Phe Gln Glu Arg Leu Gln Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly

100 105 110

Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gln Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro

115 120 125

Leu Gly Leu Val Glu Glu Gly Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg

130 135 140

Pro Val Glu Pro Ser Pro Gln Arg Ser Pro Asp Ser Ser Thr Gly Ile

145 150 155 160

Gly Lys Lys Gly Gln Gln Pro Ala Lys Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gln

165 170 175

Thr Gly Asp Ser Glu Ser Val Pro Asp Pro Gln Pro Ile Gly Glu Pro

180 185 190

Pro Ala Gly Pro Ser Gly Leu Gly Ser Gly Thr Met Ala Ala Gly Gly

195 200 205

Gly Ala Pro Met Ala Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Ser

210 215 220

Ser Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Thr Trp Leu Gly Asp Arg Val

225 230 235 240

Ile Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His

245 250 255

Leu Tyr Lys Gln Ile Ser Asn Gly Thr Ser Gly Gly Ser Thr Asn Asp

260 265 270

Asn Thr Tyr Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn

275 280 285

Arg Phe His Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gln Arg Leu Ile Asn

290 295 300

Asn Asn Trp Gly Phe Arg Pro Lys Arg Leu Asn Phe Lys Leu Phe Asn

305 310 315 320

Ile Gln Val Lys Glu Val Thr Gln Asn Glu Gly Thr Lys Thr Ile Ala

325 330 335

Asn Asn Leu Thr Ser Thr Ile Gln Val Phe Thr Asp Ser Glu Tyr Gln

340 345 350

Leu Pro Tyr Val Leu Gly Ser Ala His Gln Gly Cys Leu Pro Pro Phe

355 360 365

Pro Ala Asp Val Phe Met Ile Pro Gln Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn

370 375 380

Asn Gly Ser Gln Ala Val Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr

385 390 395 400

Phe Pro Ser Gln Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Glu Phe Ser Tyr

405 410 415

Gln Phe Glu Asp Val Pro Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gln Ser

420 425 430

Leu Asp Arg Leu Met Asn Pro Leu Ile Asp Gln Tyr Leu Tyr Tyr Leu

435 440 445

Ser Arg Thr Gln Ser Thr Gly Gly Thr Ala Gly Thr Gln Gln Leu Leu

450 455 460

Phe Ser Gln Ala Gly Pro Asn Asn Met Ser Ala Gln Ala Lys Asn Trp

465 470 475 480

Leu Pro Gly Pro Cys Tyr Arg Gln Gln Arg Val Ser Thr Thr Leu Ser

485 490 495

Gln Asn Asn Asn Ser Asn Phe Ala Trp Thr Gly Ala Thr Lys Tyr His

500 505 510

Leu Asn Gly Arg Asp Ser Leu Val Asn Pro Gly Val Ala Met Ala Thr

515 520 525

His Lys Asp Asp Glu Glu Arg Phe Phe Pro Ser Ser Gly Val Leu Met

530 535 540

Phe Gly Lys Gln Gly Ala Gly Lys Asp Asn Val Asp Tyr Ser Ser Val

545 550 555 560

Met Leu Thr Ser Glu Glu Glu Ile Lys Thr Thr Asn Pro Val Ala Thr

565 570 575

Glu Gln Tyr Gly Val Val Ala Asp Asn Leu Gln Gln Gln Asn Ala Ala

580 585 590

Pro Ile Val Gly Ala Val Asn Ser Gln Gly Ala Leu Pro Gly Met Val

595 600 605

Trp Gln Asn Arg Asp Val Tyr Leu Gln Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile

610 615 620

Pro His Thr Asp Gly Asn Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe

625 630 635 640

Gly Leu Lys His Pro Pro Pro Gln Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val

645 650 655

Pro Ala Asp Pro Pro Thr Thr Phe Ser Gln Ala Lys Leu Ala Ser Phe

660 665 670

Ile Thr Gln Tyr Ser Thr Gly Gln Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu

675 680 685

Leu Gln Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gln Tyr Thr

690 695 700

Ser Asn Tyr Tyr Lys Ser Thr Asn Val Asp Phe Ala Val Asn Thr Asp

705 710 715 720

Gly Thr Tyr Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg

725 730 735

Asn Leu

<210> 376

<211> 258

<212> ДНК

<213> Аденоассоциированный вирус 11

<400> 376

ggtaattcct ccggaaattg gcattgcgat tccacatggc tgggcgacag agtcatcacc 60

accagcaccc gaacctgggc cctgccaacc tacaacaacc acctctacaa acaaatctcc 120

agcgcttcaa cgggggccag caacgacaac cactactttg gctacagcac cccctggggg 180

tattttgact ttaacagatt ccactgccac ttctcaccac gtgactggca gcgactcatc 240

aacaacaact ggggattc 258

<210> 377

<211> 255

<212> ДНК

<213> Аденоассоциированный вирус 12

<400> 377

ggtaattcct ccggaaattg gcattgcgat tccacatggc tgggcgaccg agtcattacc 60

accagcaccc ggacttgggc cctgcccacc tacaacaacc acctctacaa gcaaatctcc 120

agccaatcgg gtgccaccaa cgacaaccac tacttcggct acagcacccc ttgggggtat 180

tttgatttca acagattcca ctgccatttc tcaccacgtg actggcagcg actcatcaac 240

aacaactggg gattc 255

<210> 378

<211> 2208

<212> ДНК

<213> Аденоассоциированный вирус 2

<400> 378

atggctgccg atggttatct tccagattgg ctcgaggaca ctctctctga aggaataaga 60

cagtggtgga agctcaaacc tggcccacca ccaccaaagc ccgcagagcg gcataaggac 120

gacagcaggg gtcttgtgct tcctgggtac aagtacctcg gacccttcaa cggactcgac 180

aagggagagc cggtcaacga ggcagacgcc gcggccctcg agcacgacaa agcctacgac 240

cggcagctcg acagcggaga caacccgtac ctcaagtaca accacgccga cgcggagttt 300

caggagcgcc ttaaagaaga tacgtctttt gggggcaacc tcggacgagc agtcttccag 360

gcgaaaaaga gggttcttga acctctgggc ctggttgagg aacctgttaa gacggctccg 420

ggaaaaaaga ggccggtaga gcactctcct gtggagccag actcctcctc gggaaccgga 480

aaggcgggcc agcagcctgc aagaaaaaga ttgaattttg gtcagactgg agacgcagac 540

tcagtacctg acccccagcc tctcggacag ccaccagcag ccccctctgg tctgggaact 600

aatacgatgg ctacaggcag tggcgcacca atggcagaca ataacgaggg cgccgacgga 660

gtgggtaatt cctcgggaaa ttggcattgc gattccacat ggatgggcga cagagtcatc 720

accaccagca cccgaacctg ggccctgccc acctacaaca accacctcta caaacaaatt 780

tccagccaat caggagcctc gaacgacaat cactactttg gctacagcac cccttggggg 840

tattttgact tcaacagatt ccactgccac ttttcaccac gtgactggca aagactcatc 900

aacaacaact ggggattccg acccaagaga ctcaacttca agctctttaa cattcaagtc 960

aaagaggtca cgcagaatga cggtacgacg acgattgcca ataaccttac cagcacggtt 1020

caggtgttta ctgactcgga gtaccagctc ccgtacgtcc tcggctcggc gcatcaagga 1080

tgcctcccgc cgttcccagc agacgtcttc atggtgccac agtatggata cctcaccctg 1140

aacaacggga gtcaggcagt aggacgctct tcattttact gcctggagta ctttccttct 1200

cagatgctgc gtaccggaaa caactttacc ttcagctaca cttttgagga cgttcctttc 1260

cacagcagct acgctcacag ccagagtctg gaccgtctca tgaatcctct catcgaccag 1320

tacctgtatt acttgagcag aacaaacact ccaagtggaa ccaccacgca gtcaaggctt 1380

cagttttctc aggccggagc gagtgacatt cgggaccagt ctaggaactg gcttcctgga 1440

ccctgttacc gccagcagcg agtatcaaag acatctgcgg ataacaacaa cagtgaatac 1500

tcgtggactg gagctaccaa gtaccacctc aatggcagag actctctggt gaatccgggc 1560

ccggccatgg caagccacaa ggacgatgaa gaaaagtttt ttcctcagag cggggttctc 1620

atctttggga agcaaggctc agagaaaaca aatgtggaca ttgaaaaggt catgattaca 1680

gacgaagagg aaatcaggac aaccaatccc gtggctacgg agcagtatgg ttctgtatct 1740

accaacctcc agagaggcaa cagacaagca gctaccgcag atgtcaacac acaaggcgtt 1800

cttccaggca tggtctggca ggacagagat gtgtaccttc aggggcccat ctgggcaaag 1860

attccacaca cggacggaca ttttcacccc tctcccctca tgggtggatt cggacttaaa 1920

caccctcctc cacagattct catcaagaac accccggtac ctgcgaatcc ttcgaccacc 1980

ttcagtgcgg caaagtttgc ttccttcatc acacagtact ccacgggaca ggtcagcgtg 2040

gagatcgagt gggagctgca gaaggaaaac agcaaacgct ggaatcccga aattcagtac 2100

acttccaact acaacaagtc tgttaatgtg gactttactg tggacactaa tggcgtgtat 2160

tcagagcctc gccccattgg caccagatac ctgactcgta atctgtaa 2208

<210> 379

<211> 735

<212> Белок

<213> Аденоассоциированный вирус 2

<400> 379

Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Thr Leu Ser

1 5 10 15

Glu Gly Ile Arg Gln Trp Trp Lys Leu Lys Pro Gly Pro Pro Pro Pro

20 25 30

Lys Pro Ala Glu Arg His Lys Asp Asp Ser Arg Gly Leu Val Leu Pro

35 40 45

Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro

50 55 60

Val Asn Glu Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp

65 70 75 80

Arg Gln Leu Asp Ser Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala

85 90 95

Asp Ala Glu Phe Gln Glu Arg Leu Lys Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly

100 105 110

Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gln Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro

115 120 125

Leu Gly Leu Val Glu Glu Pro Val Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg

130 135 140

Pro Val Glu His Ser Pro Val Glu Pro Asp Ser Ser Ser Gly Thr Gly

145 150 155 160

Lys Ala Gly Gln Gln Pro Ala Arg Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gln Thr

165 170 175

Gly Asp Ala Asp Ser Val Pro Asp Pro Gln Pro Leu Gly Gln Pro Pro

180 185 190

Ala Ala Pro Ser Gly Leu Gly Thr Asn Thr Met Ala Thr Gly Ser Gly

195 200 205

Ala Pro Met Ala Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Asn Ser

210 215 220

Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Thr Trp Met Gly Asp Arg Val Ile

225 230 235 240

Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His Leu

245 250 255

Tyr Lys Gln Ile Ser Ser Gln Ser Gly Ala Ser Asn Asp Asn His Tyr

260 265 270

Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn Arg Phe His

275 280 285

Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gln Arg Leu Ile Asn Asn Asn Trp

290 295 300

Gly Phe Arg Pro Lys Arg Leu Asn Phe Lys Leu Phe Asn Ile Gln Val

305 310 315 320

Lys Glu Val Thr Gln Asn Asp Gly Thr Thr Thr Ile Ala Asn Asn Leu

325 330 335

Thr Ser Thr Val Gln Val Phe Thr Asp Ser Glu Tyr Gln Leu Pro Tyr

340 345 350

Val Leu Gly Ser Ala His Gln Gly Cys Leu Pro Pro Phe Pro Ala Asp

355 360 365

Val Phe Met Val Pro Gln Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn Asn Gly Ser

370 375 380

Gln Ala Val Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro Ser

385 390 395 400

Gln Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Thr Phe Ser Tyr Thr Phe Glu

405 410 415

Asp Val Pro Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gln Ser Leu Asp Arg

420 425 430

Leu Met Asn Pro Leu Ile Asp Gln Tyr Leu Tyr Tyr Leu Ser Arg Thr

435 440 445

Asn Thr Pro Ser Gly Thr Thr Thr Gln Ser Arg Leu Gln Phe Ser Gln

450 455 460

Ala Gly Ala Ser Asp Ile Arg Asp Gln Ser Arg Asn Trp Leu Pro Gly

465 470 475 480

Pro Cys Tyr Arg Gln Gln Arg Val Ser Lys Thr Ser Ala Asp Asn Asn

485 490 495

Asn Ser Glu Tyr Ser Trp Thr Gly Ala Thr Lys Tyr His Leu Asn Gly

500 505 510

Arg Asp Ser Leu Val Asn Pro Gly Pro Ala Met Ala Ser His Lys Asp

515 520 525

Asp Glu Glu Lys Phe Phe Pro Gln Ser Gly Val Leu Ile Phe Gly Lys

530 535 540

Gln Gly Ser Glu Lys Thr Asn Val Asp Ile Glu Lys Val Met Ile Thr

545 550 555 560

Asp Glu Glu Glu Ile Arg Thr Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu Gln Tyr

565 570 575

Gly Ser Val Ser Thr Asn Leu Gln Arg Gly Asn Arg Gln Ala Ala Thr

580 585 590

Ala Asp Val Asn Thr Gln Gly Val Leu Pro Gly Met Val Trp Gln Asp

595 600 605

Arg Asp Val Tyr Leu Gln Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His Thr

610 615 620

Asp Gly His Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Leu Lys

625 630 635 640

His Pro Pro Pro Gln Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala Asn

645 650 655

Pro Ser Thr Thr Phe Ser Ala Ala Lys Phe Ala Ser Phe Ile Thr Gln

660 665 670

Tyr Ser Thr Gly Gln Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gln Lys

675 680 685

Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gln Tyr Thr Ser Asn Tyr

690 695 700

Asn Lys Ser Val Asn Val Asp Phe Thr Val Asp Thr Asn Gly Val Tyr

705 710 715 720

Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu

725 730 735

<210> 380

<211> 621

<212> Белок

<213> Аденоассоциированный вирус 2

<400> 380

Met Pro Gly Phe Tyr Glu Ile Val Ile Lys Val Pro Ser Asp Leu Asp

1 5 10 15

Gly His Leu Pro Gly Ile Ser Asp Ser Phe Val Asn Trp Val Ala Glu

20 25 30

Lys Glu Trp Glu Leu Pro Pro Asp Ser Asp Met Asp Leu Asn Leu Ile

35 40 45

Glu Gln Ala Pro Leu Thr Val Ala Glu Lys Leu Gln Arg Asp Phe Leu

50 55 60

Thr Glu Trp Arg Arg Val Ser Lys Ala Pro Glu Ala Leu Phe Phe Val

65 70 75 80

Gln Phe Glu Lys Gly Glu Ser Tyr Phe His Met His Val Leu Val Glu

85 90 95

Thr Thr Gly Val Lys Ser Met Val Leu Gly Arg Phe Leu Ser Gln Ile

100 105 110

Arg Glu Lys Leu Ile Gln Arg Ile Tyr Arg Gly Ile Glu Pro Thr Leu

115 120 125

Pro Asn Trp Phe Ala Val Thr Lys Thr Arg Asn Gly Ala Gly Gly Gly

130 135 140

Asn Lys Val Val Asp Glu Cys Tyr Ile Pro Asn Tyr Leu Leu Pro Lys

145 150 155 160

Thr Gln Pro Glu Leu Gln Trp Ala Trp Thr Asn Met Glu Gln Tyr Leu

165 170 175

Ser Ala Cys Leu Asn Leu Thr Glu Arg Lys Arg Leu Val Ala Gln His

180 185 190

Leu Thr His Val Ser Gln Thr Gln Glu Gln Asn Lys Glu Asn Gln Asn

195 200 205

Pro Asn Ser Asp Ala Pro Val Ile Arg Ser Lys Thr Ser Ala Arg Tyr

210 215 220

Met Glu Leu Val Gly Trp Leu Val Asp Lys Gly Ile Thr Ser Glu Lys

225 230 235 240

Gln Trp Ile Gln Glu Asp Gln Ala Ser Tyr Ile Ser Phe Asn Ala Ala

245 250 255

Ser Asn Ser Arg Ser Gln Ile Lys Ala Ala Leu Asp Asn Ala Gly Lys

260 265 270

Ile Met Ser Leu Thr Lys Thr Ala Pro Asp Tyr Leu Val Gly Gln Gln

275 280 285

Pro Val Glu Asp Ile Ser Ser Asn Arg Ile Tyr Lys Ile Leu Glu Leu

290 295 300

Asn Gly Tyr Asp Pro Gln Tyr Ala Ala Ser Val Phe Leu Gly Trp Ala

305 310 315 320

Thr Lys Lys Phe Gly Lys Arg Asn Thr Ile Trp Leu Phe Gly Pro Ala

325 330 335

Thr Thr Gly Lys Thr Asn Ile Ala Glu Ala Ile Ala His Thr Val Pro

340 345 350

Phe Tyr Gly Cys Val Asn Trp Thr Asn Glu Asn Phe Pro Phe Asn Asp

355 360 365

Cys Val Asp Lys Met Val Ile Trp Trp Glu Glu Gly Lys Met Thr Ala

370 375 380

Lys Val Val Glu Ser Ala Lys Ala Ile Leu Gly Gly Ser Lys Val Arg

385 390 395 400

Val Asp Gln Lys Cys Lys Ser Ser Ala Gln Ile Asp Pro Thr Pro Val

405 410 415

Ile Val Thr Ser Asn Thr Asn Met Cys Ala Val Ile Asp Gly Asn Ser

420 425 430

Thr Thr Phe Glu His Gln Gln Pro Leu Gln Asp Arg Met Phe Lys Phe

435 440 445

Glu Leu Thr Arg Arg Leu Asp His Asp Phe Gly Lys Val Thr Lys Gln

450 455 460

Glu Val Lys Asp Phe Phe Arg Trp Ala Lys Asp His Val Val Glu Val

465 470 475 480

Glu His Glu Phe Tyr Val Lys Lys Gly Gly Ala Lys Lys Arg Pro Ala

485 490 495

Pro Ser Asp Ala Asp Ile Ser Glu Pro Lys Arg Val Arg Glu Ser Val

500 505 510

Ala Gln Pro Ser Thr Ser Asp Ala Glu Ala Ser Ile Asn Tyr Ala Asp

515 520 525

Arg Tyr Gln Asn Lys Cys Ser Arg His Val Gly Met Asn Leu Met Leu

530 535 540

Phe Pro Cys Arg Gln Cys Glu Arg Met Asn Gln Asn Ser Asn Ile Cys

545 550 555 560

Phe Thr His Gly Gln Lys Asp Cys Leu Glu Cys Phe Pro Val Ser Glu

565 570 575

Ser Gln Pro Val Ser Val Val Lys Lys Ala Tyr Gln Lys Leu Cys Tyr

580 585 590

Ile His His Ile Met Gly Lys Val Pro Asp Ala Cys Thr Ala Cys Asp

595 600 605

Leu Val Asn Val Asp Leu Asp Asp Cys Ile Phe Glu Gln

610 615 620

<210> 381

<211> 4675

<212> ДНК

<213> Аденоассоциированный вирус 2

<400> 381

ttggccactc cctctctgcg cgctcgctcg ctcactgagg ccgggcgacc aaaggtcgcc 60

cgacgcccgg gctttgcccg ggcggcctca gtgagcgagc gagcgcgcag agagggagtg 120

gccaactcca tcactagggg ttcctggagg ggtggagtcg tgacgtgaat tacgtcatag 180

ggttagggag gtcctgtatt agaggtcacg tgagtgtttt gcgacatttt gcgacaccat 240

gtggtcacgc tgggtattta agcccgagtg agcacgcagg gtctccattt tgaagcggga 300

ggtttgaacg cgcagccgcc atgccggggt tttacgagat tgtgattaag gtccccagcg 360

accttgacgg gcatctgccc ggcatttctg acagctttgt gaactgggtg gccgagaagg 420

aatgggagtt gccgccagat tctgacatgg atctgaatct gattgagcag gcacccctga 480

ccgtggccga gaagctgcag cgcgactttc tgacggaatg gcgccgtgtg agtaaggccc 540

cggaggccct tttctttgtg caatttgaga agggagagag ctacttccac atgcacgtgc 600

tcgtggaaac caccggggtg aaatccatgg ttttgggacg tttcctgagt cagattcgcg 660

aaaaactgat tcagagaatt taccgcggga tcgagccgac tttgccaaac tggttcgcgg 720

tcacaaagac cagaaatggc gccggaggcg ggaacaaggt ggtggatgag tgctacatcc 780

ccaattactt gctccccaaa acccagcctg agctccagtg ggcgtggact aatatggaac 840

agtatttaag cgcctgtttg aatctcacgg agcgtaaacg gttggtggcg cagcatctga 900

cgcacgtgtc gcagacgcag gagcagaaca aagagaatca gaatcccaat tctgatgcgc 960

cggtgatcag atcaaaaact tcagccaggt acatggagct ggtcgggtgg ctcgtggaca 1020

aggggattac ctcggagaag cagtggatcc aggaggacca ggcctcatac atctccttca 1080

atgcggcctc caactcgcgg tcccaaatca aggctgcctt ggacaatgcg ggaaagatta 1140

tgagcctgac taaaaccgcc cccgactacc tggtgggcca gcagcccgtg gaggacattt 1200

ccagcaatcg gatttataaa attttggaac taaacgggta cgatccccaa tatgcggctt 1260

ccgtctttct gggatgggcc acgaaaaagt tcggcaagag gaacaccatc tggctgtttg 1320

ggcctgcaac taccgggaag accaacatcg cggaggccat agcccacact gtgcccttct 1380

acgggtgcgt aaactggacc aatgagaact ttcccttcaa cgactgtgtc gacaagatgg 1440

tgatctggtg ggaggagggg aagatgaccg ccaaggtcgt ggagtcggcc aaagccattc 1500

tcggaggaag caaggtgcgc gtggaccaga aatgcaagtc ctcggcccag atagacccga 1560

ctcccgtgat cgtcacctcc aacaccaaca tgtgcgccgt gattgacggg aactcaacga 1620

ccttcgaaca ccagcagccg ttgcaagacc ggatgttcaa atttgaactc acccgccgtc 1680

tggatcatga ctttgggaag gtcaccaagc aggaagtcaa agactttttc cggtgggcaa 1740

aggatcacgt ggttgaggtg gagcatgaat tctacgtcaa aaagggtgga gccaagaaaa 1800

gacccgcccc cagtgacgca gatataagtg agcccaaacg ggtgcgcgag tcagttgcgc 1860

agccatcgac gtcagacgcg gaagcttcga tcaactacgc agacaggtac caaaacaaat 1920

gttctcgtca cgtgggcatg aatctgatgc tgtttccctg cagacaatgc gagagaatga 1980

atcagaattc aaatatctgc ttcactcacg gacagaaaga ctgtttagag tgctttcccg 2040

tgtcagaatc tcaacccgtt tctgtcgtca aaaaggcgta tcagaaactg tgctacattc 2100

atcatatcat gggaaaggtg ccagacgctt gcactgcctg cgatctggtc aatgtggatt 2160

tggatgactg catctttgaa caataaatga tttaaatcag gtatggctgc cgatggttat 2220

cttccagatt ggctcgagga cactctctct gaaggaataa gacagtggtg gaagctcaaa 2280

cctggcccac caccaccaaa gcccgcagag cggcataagg acgacagcag gggtcttgtg 2340

cttcctgggt acaagtacct cggacccttc aacggactcg acaagggaga gccggtcaac 2400

gaggcagacg ccgcggccct cgagcacgta caaagcctac gaccggcagc tcgacagcgg 2460

agacaacccg tacctcaagt acaaccacgc cgacgcggag tttcaggagc gccttaaaga 2520

agatacgtct tttgggggca acctcggacg agcagtcttc caggcgaaaa agagggttct 2580

tgaacctctg ggcctggttg aggaacctgt taagacggct ccgggaaaaa agaggccggt 2640

agagcactct cctgtggagc cagactcctc ctcgggaacc ggaaaggcgg gccagcagcc 2700

tgcaagaaaa agattgaatt ttggtcagac tggagacgca gactcagtac ctgaccccca 2760

gcctctcgga cagccaccag cagccccctc tggtctggga actaatacga tggctacagg 2820

cagtggcgca ccaatggcag acaataacga gggcgccgac ggagtgggta attcctccgg 2880

aaattggcat tgcgattcca catggatggg cgacagagtc atcaccacca gcacccgaac 2940

ctgggccctg cccacctaca acaaccacct ctacaaacaa atttccagcc aatcaggagc 3000

ctcgaacgac aatcactact ttggctacag caccccttgg gggtattttg acttcaacag 3060

attccactgc cacttttcac cacgtgactg gcaaagactc atcaacaaca actggggatt 3120

ccgacccaag agactcaact tcaagctctt taacattcaa gtcaaagagg tcacgcagaa 3180

tgacggtacg acgacgattg ccaataacct taccagcacg gttcaggtgt ttactgactc 3240

ggagtaccag ctcccgtacg tcctcggctc ggcgcatcaa ggatgcctcc cgccgttccc 3300

agcagacgtc ttcatggtgc cacagtatgg atacctcacc ctgaacaacg ggagtcaggc 3360

agtaggacgc tcttcatttt actgcctgga gtactttcct tctcagatgc tgcgtaccgg 3420

aaacaacttt accttcagct acacttttga ggacgttcct ttccacagca gctacgctca 3480

cagccagagt ctggaccgtc tcatgaatcc tctcatcgac cagtacctgt attacttgag 3540

cagaacaaac actccaagtg gaaccaccac gcagtcaagg cttcagtttt ctcaggccgg 3600

agcgagtgac attcgggacc agtctaggaa ctggcttcct ggaccctgtt accgccagca 3660

gcgagtatca aagacatctg cggataacaa caacagtgaa tactcgtgga ctggagctac 3720

caagtaccac ctcaatggca gagactctct ggtgaatccg gccatggcaa gccacaagga 3780

cgatgaagaa aagttttttc ctcagagcgg ggttctcatc tttgggaagc aaggctcaga 3840

gaaaacaaat gtgaacattg aaaaggtcat gattacagac gaagaggaaa tcggaacaac 3900

caatcccgtg gctacggagc agtatggttc tgtatctacc aacctccaga gaggcaacag 3960

acaagcagct accgcagatg tcaacacaca aggcgttctt ccaggcatgg tctggcagga 4020

cagagatgtg taccttcagg ggcccatctg ggcaaagatt ccacacacgg acggacattt 4080

tcacccctct cccctcatgg gtggattcgg acttaaacac cctcctccac agattctcat 4140

caagaacacc ccggtacctg cgaatccttc gaccaccttc agtgcggcaa agtttgcttc 4200

cttcatcaca cagtactcca cgggacacgg tcagcgtgga gatcgagtgg gagctgcaga 4260

aggaaaacag caaacgctgg aatcccgaaa ttcagtacac ttccaactac aacaagtctg 4320

ttaatcgtgg acttaccgtg gatactaatg gcgtgtattc agagcctcgc cccattggca 4380

ccagatacct gactcgtaat ctgtaattgc ttgttaatca ataaaccgtt taattcgttt 4440

cagttgaact ttggtctctg cgtatttctt tcttatctag tttccatggc tacgtagata 4500

agtagcatgg cgggttaatc attaactaca aggaacccct agtgatggag ttggccactc 4560

cctctctgcg cgctcgctcg ctcactgagg ccgggcgacc aaaggtcgcc cgacgcccgg 4620

gctttgcccg ggcggcctca gtgagcgagc gagcgcgcag agagggagtg gccaa 4675

<210> 382

<211> 4679

<212> ДНК

<213> Аденоассоциированный вирус 2

<400> 382