Способ получения лекарственного средства "боярышника плодов настойка"
Владельцы патента RU 2772208:
Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Самарский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (RU)
Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности, а именно к способу получения настойки из плодов боярышника мягковатого. Способ получения настойки из плодов боярышника мягковатого, характеризующийся тем, что высушенные плоды боярышника мягковатого или высушенный жом плодов боярышника мягковатого измельчают и помещают в колбу в количестве 10 г, затем прибавляют 7 мл спирта этилового 70% для проведения мацерации, на следующий день в ту же колбу прибавляют 20 мл спирта этилового 70%, через сутки сливают 20 мл полученного извлечения и к остатку в колбе вновь добавляют 20 мл спирта этилового 70%, через сутки сливают 20 мл извлечения из плодов, объединив его с первой порцией, к остатку в колбе снова добавляют 10 мл спирта этилового 70%, через сутки настаивания снова сливают 10 мл извлечения, объединив его с первыми двумя порциями, полученное извлечение отстаивают в холодильнике в течение 3 суток, после чего тщательно профильтровывают. Настойка, полученная вышеописанным способом, характеризуется высоким содержанием суммы флавоноидов в пересчете на катехин, превышающим в четыре раза содержание в промышленном образце препарата. 1 табл., 1 пр.
Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и может быть использовано при производстве лекарственных препаратов из лекарственного растительного сырья.
Плоды растений различных видов рода Боярышник широко используются в отечественной и зарубежной медицине для производства кардиотонических препаратов (1, 2). Боярышник мягковатый (полумягкий) (Crataegus submollis Sarg.) широко культивируется в нашей стране как пищевое и декоративное растение, но к числу фармакопейных видов не относится. Однако именно боярышник мягковатый, на наш взгляд, является одним из самых перспективных видов для заготовки сырья (3). Плоды боярышника мягковатого содержат богатый состав биологически активных соединений (фенилпропаноиды, сапонины, стерины, витамины и др.), среди которых, по нашим данным, доминируют восстановленные формы флавоноидов - производные катехина (4). Химический состав плодов боярышника мягковатого имеет черты сходства с плодами фармакопейных видов боярышника.
Сбор плодов боярышника мягковатого возможно начинать уже в период их технической спелости в начале сентября, когда они содержат мало влаги и легче высушиваются. Высушенные плоды боярышника мягковатого не уступают по содержанию действующих веществ плодам фармакопейных видов боярышника и могут, на наш взгляд, служить сырьем для получения препарата «Боярышника плодов настойка» (4). Однако на стадии биологической спелости, когда плоды полностью созревают и наливаются соком, процесс высушивания весьма затруднителен. Выходом из ситуации является получение сока свежих плодов и высушивание жома (4).
Как показали наши исследования, сок, полученный на основе свежих плодов боярышника мягковатого, обладают диуретической активностью и антидепрессантным действием (4). В высушенном жоме плодов имеет место высокое содержание флавоноидов, поэтому он может быть использован в качестве сырья для получения экстракционных препаратов, аналогично высушенным плодам (4).
В качестве прототипа нами был выбран популярный отечественный препарат «Боярышника плодов настойка», который широко выпускается на территории нашей страны. Способ получения препарата включает экстракцию действующих веществ измельченных плодов боярышника этиловым спиртом 70% концентрации в соотношении «сырье - экстрагент» 1:10 (1). Качество полученного препарата оценивают по содержанию флавоноидов в пересчете на гиперозид методом дифференциальной спектрофотометрии при длине волны 410 нм (1). Содержание флавоноидов в «Боярышника плодов настойке» должно быть не менее 0,003%. Недостатком данного препарата является то обстоятельство, что применяемое соотношение сырья и экстрагента не позволяет получить лекарственное средство с высоким содержанием действующих веществ.
Как известно, действующая система контроля качества лекарственных препаратов требует унифицированного подхода к стандартизации лекарственного растительного сырья и средств на его основе, позволяющих объективно и селективно определять содержание целевых веществ (1). При этом метод количественного анализа существующего препарата «Боярышника плодов настойка» направлен на оценивание окисленных форм флавоноидов, которые в высушенных плодах боярышника присутствуют в незначительном количестве, а в свежих практически не обнаруживаются (4). Ранее нами был разработан способ количественного анализа суммы флавоноидов в пересчете на катехин в свежих и высушенных плодах боярышника мягковатого, а также в высушенных плодах боярышника кроваво-красного, основанный на прямой спектрофотометрии при длине волны 282 нм (4, 5).
Таким образом, целью изобретения является разработка способа получения лекарственного препарата на основе нового вида лекарственного растительного сырья -высушенных плодов боярышника мягковатого либо высушенного жома плодов боярышника мягковатого.
Цель достигается тем, что в качестве сырья используют высушенные плоды боярышника мягковатого, не подвергавшиеся прессованию либо высушенный жом плодов боярышника мягковатого, после отжима сока; экстракцию осуществляют в соотношении «сырье-экстрагент» - 1:5; оценку качества полученного лекарственного средства проводят путем определения содержания в нем суммы восстановленных форм флавоноидов в (X, %) в пересчете на катехин по формуле.
где:
D - оптическая плотность испытуемого раствора;
144 - удельный показатель поглощения стандартного образца катехина при 282 нм
Выбранное нами соотношение для сырья и экстрагента 1:5 применяется при производстве настоек в большинстве случаев и, как установлено нами опытным путем, является оптимальным и для получения настойки боярышника. Как показали исследования, проведенные нами ранее, высушенные плоды и жом плодов боярышника мягковатого содержат большое количество восстановленных форм флавоноидов (4). Поэтому расчет действующих веществ в препарате целесообразнее вести в пересчете на катехин с использованием прямой спектрофотометрии, а не на гиперозид (применяя дифференциальную спектрофотометрию) (4). При этом расчет содержания суммы флавоноидов в пересчете на катехин следует вести пользуясь формулой, полученной нами на основании проведенной работы.
где:
D - оптическая плотность испытуемого раствора;
144 - удельный показатель поглощения стандартного образца катехина при 282 нм
Способ реализуется следующим образом.
Из измельченных высушенных плодов боярышника мягковатого либо высушенного измельченного жома плодов боярышника мягковатого получают настойку в соотношении «сырье-экстрагент» - 1:5. В качестве экстрагента используется 70% этиловый спирт.
Количественное определение суммы восстановленных форм флавоноидов в полученной настойке проводят при длине волны 282 нм в пересчете на катехин. Для этого 1 мл настойки помещают в мерную колбу на 25 мл и доводят спиртом этиловым 70% концентрации до метки и перемешивают (Раствор А). 5 мл полученного раствора А помещают в мерную колбу на 25 мл и также доводят до метки спиртом этиловым 70% концентрации (Раствор Б). После перемешивания у раствора Б измеряют оптическую плотность на спектрофотометре при длине волны 282 нм. Раствором сравнения служит 70% спирт этиловый. Содержание суммы флавоноидов (X, %) в препарате в пересчете на катехин и абсолютно сухое сырье вычисляют по формуле:
где:
D - оптическая плотность испытуемого раствора (раствора Б);
144 - удельный показатель поглощения стандартного образца катехина при 282 нм
Для проведения эксперимента в качестве сырья был использован высушенный жом, оставшийся после отжима сока из свежих плодов. Также был взят образец высушенных плодов той же партии, которые не подвергались прессованию. Обе настойки получали методом модифицированной мацерации с помощью 70% этилового спирта в одинаковых условиях в одно и то же время. Соотношение «сырье-экстрагент» было выбрано 1:5. В качестве образца сравнения был использован промышленный образец настойки плодов боярышника. Во всех препаратах определялось содержание суммы восстановленных форм флавоноидов в пересчете на катехин (прямая спектрофотометрия) и содержание суммы окисленных флавоноидов в пересчете на гиперозид (дифференциальная спектрофотометрия).
Как можно заметить из таблицы 1 (приложение 1), содержание суммы флавоноидов в пересчете на катехин в настойке на основе высушенного жома плодов боярышника мягковатого выше, чем у препарата, полученного промышленным способом, и препарата, полученного на основе высушенных плодов, не подвергшихся прессованию. Причем содержание суммы флавоноидов выше и по восстановленным и по окисленным формам флавоноидов.
Пример 1. Получение препарата из высушенных плодов боярышника мягковатого не подвергавшихся прессованию
Высушенные плоды боярышника мягковатого измельчили и поместили в колбу в количестве 10 г затем прибавили 7 мл спирта этилового 70% для проведения мацерации. На следующий день в ту же колбу прибавили 20 мл спирта этилового 70%. Через сутки слили 20 мл полученного извлечения и к остатку в колбе вновь добавили 20 мл спирта этилового 70%. Через сутки слили 20 мл извлечения из плодов, объединив его с первой порцией. К остатку в колбе снова добавили 10 мл спирта этилового 70%. Через сутки настаивания снова слили 10 мл извлечения, объединив его с первыми двумя порциями. Полученное извлечение в количестве 50 мл отстаивали в холодильнике в течение 3 суток, после чего тщательно профильтровали во флакон темного стекла для хранения.
1 мл полученного препарата поместили в мерную колбу на 25 мл и довели спиртом этиловым 70% до метки и перемешали (раствор А). Далее взяли 5 мл раствора А и поместили в мерную колбу на 25 мл. Довели спиртом этиловым 70% до метки и перемешали (раствор Б). Оптическую плотность раствора Б, измеренная на спектрофотометре при длине волны 282 нм составила 0,4377.
Содержание суммы флавоноидов в пересчете на катехин в полученной настойке составило 0,38%.
Пример 2. Получение препарата из высушенного жома плодов боярышника мягковатого
Высушенный жом плодов боярышника мягковатого измельчили и поместили в колбу в количестве 10 г затем прибавили 7 мл спирта этилового 70% для проведения мацерации. На следующий день в ту же колбу прибавили 20 мл спирта этилового 70%. Через сутки слили 20 мл полученного извлечения и к остатку в колбе вновь добавили 20 мл спирта этилового 70%. Через сутки слили 20 мл извлечения, объединив его с первой порцией. К остатку в колбе снова добавили 10 мл спирта этилового 70%. Через сутки настаивания снова слили 10 мл извлечения, объединив его с первыми двумя порциями. Полученное извлечение в количестве 50 мл отстаивали в холодильнике в течение 3 суток, после чего тщательно профильтровали во флакон темного стекла для хранения.
1 мл полученного препарата поместили в мерную колбу на 25 мл и довели спиртом этиловым 70%) до метки и перемешали (раствор А). Далее взяли 5 мл раствора А и поместили в мерную колбу на 25 мл. Довели спиртом этиловым 10% до метки и перемешали (раствор Б). Оптическую плотность раствора Б, измеренная на спектрофотометре при длине волны 282 нм составила 0,4608.
Содержание суммы флавоноидов в пересчете на катехин в полученной настойке составило 0,40%.
Таким образом, предлагаемый способ получения и количественного определения суммы флавоноидов в пересчете на катехин с использованием прямой спектрофотометрии разработан впервые для высушенных плодов и жома плодов боярышника мягковатого и обладает следующими преимуществами:
1. Используемый способ получения настойки на основе высушенных плодов боярышника мягковатого и высушенного жома плодов боярышника мягковатого позволяет получить препарат, превышающий в четыре раза по содержанию суммы флавноидов в пересчете на катехин образец, выпускаемый промышленностью в настоящее время.
2. Разработанный метод количественного анализа является более специфичным и селективным, так как он позволяет определять целевые вещества плодов боярышника -восстановленные формы флавоноидов в пересчете на катехин.
3. Для плодов боярышника мягковатого, как нового источника лекарственных средств, возможна комплексная переработка сырья с получением экстракционных препаратов на основе высушенного жома свежих плодов.
Разработанный способ целесообразно применять на фармацевтических предприятиях и центрах контроля качества лекарственных средств, а также в контрольно-аналитических лабораториях при проведении количественного анализа препаратов плодов боярышника мягковатого (Crataegus submollis Sarg.).
ИСТОЧНИКИ ИНФОРМАЦИИ:
1. Государственная Фармакопея Российской Федерации. - Четырнадцатое издание. - М.: Министерство здравоохранения РФ, 2018. / URL: http://femb.ru/femb/pharmacopea.php
2. Куркин В.А. Фармакогнозия. Учебник для студентов фармацевтических вузов (факультетов). - 3-е изд., перераб. и доп. - Самара: ООО «Офорт»; ФГБОУ ВО СамГМУ Минздрава России, 2016. - 1279 с.
3. Деревья и кустарники СССР II Т. 3, Издание Академии наук СССР Москва-Ленинград, 1954. 872 с.
4. Куркин В.А., Правдивцева О.Е., Шайхутдинов И.Х., Куркина А.В., Зайцева Е.Н., Волкова Н.А. Виды рода боярышник (Crataegus L.): стандартизация и создание лекарственных препаратов: Монография. - Самара: ООО «Офорт», 2020. - 118 с.
5. Куркин В.А., Шайхутдинов И.Х., Правдивцева О.Е., Авдеева Е.В., Куркина А.В., Стеняева В.В., Варина Н.Р., Жданова А.В. Разработка подходов к стандартизации свежих плодов боярышника полумягкого // Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии. - 2020. - Т. 23, №3. - С. 37-42.
Приложение 1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЛЕКАРСТВЕННОГО СРЕДСТВА «БОЯРЫШНИКА ПЛОДОВ НАСТОЙКА» 
Способ получения настойки из плодов боярышника мягковатого, характеризующийся тем, что высушенные плоды боярышника мягковатого или высушенный жом плодов боярышника мягковатого измельчают и помещают в колбу в количестве 10 г, затем прибавляют 7 мл спирта этилового 70% для проведения мацерации, на следующий день в ту же колбу прибавляют 20 мл спирта этилового 70%, через сутки сливают 20 мл полученного извлечения и к остатку в колбе вновь добавляют 20 мл спирта этилового 70%, через сутки сливают 20 мл извлечения из плодов, объединив его с первой порцией, к остатку в колбе снова добавляют 10 мл спирта этилового 70%, через сутки настаивания снова сливают 10 мл извлечения, объединив его с первыми двумя порциями, полученное извлечение отстаивают в холодильнике в течение 3 суток, после чего тщательно профильтровывают.
