Способ прогнозирования риска развития преэклампсии на основе генетического тестирования


G01N33/50 - химический анализ биологических материалов, например крови, мочи; испытания, основанные на способах связывания биоспецифических лигандов; иммунологические испытания (способы измерения или испытания с использованием ферментов или микроорганизмов иные, чем иммунологические, составы или индикаторная бумага для них, способы образования подобных составов, управление режимами микробиологических и ферментативных процессов C12Q)

Владельцы патента RU 2775434:

федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Белгородский государственный национальный исследовательский университет" (НИУ "БелГУ") (RU)

Изобретение относится к области медицины, в частности к медицинской диагностике, и предназначено для прогнозирования риска развития преэклампсии (ПЭ). У неродственных русских индивидуумов, уроженок Центрально-Черноземного региона РФ, выделяют ДНК из периферической венозной крови. Проводят анализ полиморфизмов гена PPP1R12C, дифференциально экспрессирующегося в плаценте. Повышенный риск развития ПЭ прогнозирует выявление гаплотипа СA гаплоблока rs2532058-rs66707428 гена PPP1R12C. Изобретение обеспечивает эффективный способ прогнозирования риска развития ПЭ у беременных русской национальности, уроженок Центрально-Черноземного региона РФ. 1 табл., 4 пр.

 

Изобретение относится к медицине, а именно к области медицинской диагностики и предназначено для прогнозирования риска развития преэклампсии на основе генетического тестирования.

Преэклампсия (ПЭ) – мультисистемное патологическое состояние, возникающее во второй половине беременности (после 20-й недели), характеризующееся артериальной гипертензией в сочетании с протеинурией (≥0,3 г/л в суточной моче), нередко, отеками и проявлениями полиорганной/полисистемной дисфункции/недостаточности (Гипертензивные расстройства во время беременности, в родах и послеродовом периоде. Преэклампсия. Эклампсия: клинические рекомендации (протокол лечения) / Л.В. Адамян, Н.В. Артымук, Н.В. Башмакова [и др.]. – Москва, 2016. – 72 с.).

Как свидетельствуют литературные данные, частота встречаемости преэклампсии во всем мире составляет 2-8% (Сидорова И.С. Обоснование современной концепции развития преэклампсии / И.С. Сидорова, Н.А. Никитина // Акушерство и гинекология. – 2019. – № 4. – С. 26-33). ПЭ является одной из основных причин материнской смертности и перинатальных смертей (The International Federation of Gynecology and Obstetrics (FIGO) initiative on pre-eclampsia: a pragmatic guide for first-trimester screening and prevention / L.C. Poon, A. Shennan, J.A. Hyett [et al.] // Int. J. Gynecol. Obstet. – 2019. – Vol. 145, suppl. 1. – P. 1-33). При развитии тяжелой преэклампсии и эклампсии существенно повышается риск развития различных осложнений (отслойка плаценты, массивные акушерские кровотечения, ДВС-синдром, HELLP-синдром, острая почечная и печеночная недостаточность и др.) (Почему преэклампсия трансформируется в HELLP-синдром? Роль системы комплемента / А.Н. Стрижаков, Е.В. Тимохина, И.А. Федюнина [и др.] // Акушерство и гинекология. – 2020. – № 5. – С. 52-57). В последующей жизни у этих женщин значительно чаще регистрируются артериальная гипертензия, ишемическая болезнь сердца, инсульт.

Этиопатогенез преэклампсии отражает широкий спектр факторов риска, а также сложность и гетерогенность данного осложнения беременности. В настоящее время к факторам риска преэклампсии относят: возраст, индекс массы тела, ожирение, возраст наступления менархе, первая беременность, многоплодная беременность, преэклампсия в предыдущую беременность, вспомогательные репродуктивные технологии, семейный анамнез преэклампсии, сопутствующая экстрагенитальная патология (сахарный диабет, артериальная гипертензия, заболевания почек и другие), курение, употребление алкоголя (Pre-pregnancy BMI, gestational weight gain and risk of preeclampsia: a birth cohort study in Lanzhou, China / Y. Shao, J. Qiu, H. Huang [et al.]. – DOI: 10.1186/s12884-017-1567-2 // BMC Pregnancy Childbirth. – 2017. – Vol. 17, № 1. – Art. 400. – URL: https://bmcpregnancychildbirth.biomedcentral.com/articles/10.1186/s12884-017-1567-2).

Современные представления о патогенезе ПЭ состоят в том, что данное осложнение возникает из-за иммунной дезадаптации между матерью и плодом. В норме течение беременности связано с иммунологической толерантностью к плоду, который является генетически чужеродным объектом для организма матери. При этом, чем больше генетические различия между организмом плода и матери, тем выше иммунологическая толерантность.

Многочисленные исследования указывают на мультифакториальность преэклампсии, что предполагает оценку генетического компонента в развитии данного осложнения беременности. В настоящее время научные исследования, посвященные молекулярно-генетическому исследованию преэклампсии, активно проводятся по всему миру.

Поиск генов-кандидатов основан на их возможной роли в патогенезе преэклампсии (A review of candidate genes and pathways in preeclampsia-an integrated bioinformatical analysis / M.A. Mohamad, N.F. Mohd Manzor, N.F. Zulkifli [et al.]. – DOI: 10.3390/biology9040062 // Biology (Basel). – 2020. – Vol. 9, № 4. – Art. 62. – URL: https://www.mdpi.com/2079-7737/9/4/62/htm). Исходя из того, что развитие преэклампсии связывают с развитием окислительного стресса и воспалительного процесса, приводящих к эндотелиальной дисфункции, многие исследования направлены на поиск генов-кандидатов, участвующих в этих процессах: гены эндотелиальной дисфункции, гены вазоактивных факторов, гены иммунных и воспалительных реакций, гены окислительного стресса, гены липидного обмена, гены ренин-ангиотензин-альдостероновой системы, гены наследственных тромбофилий.

В основе патогенеза преэклампсии лежит эндотелиальная дисфункция, связанная с развитием окислительного стресса и воспалительных реакций. В формирование этих процессов вовлечены множество различных факторов (материнские, средовые, генетические). При этом генетические факторы играют наиболее значимую роль.

Одной из групп генов-кандидатов, которые потенциально с высокой вероятностью могут быть вовлечены в развитие различных осложнений беременности, являются гены, дифференциально экспрессирующиеся в плаценте (Сереброва В.Н. Эволюционно-генетический анализ роли регуляторных участков генома в формировании структуры наследственной предрасположенности к преэклампсии: специальность 03.02.07 «Генетика» : диссертация на соискание ученой степени канд. мед. наук / В.Н. Сереброва. – Томск, 2018. – 259 с.: ил.). Это связано с тем, что именно плацента, вследствие выполняемых ею важнейших функций (барьерная, трофическая, эндокринная, иммунная, экскреторная и др.), напрямую определяет характер течения беременности и влияет на развитие плода (Burton, G. J. Pathophysiology of placental-derived fetal growth restriction / G.J. Burton, E. Jauniaux // Am.J. Obstet. Gynecol. – 2018. – Vol. 218, № 2, suppl. – P. S745-S761). Нарушение инвазии трофобласта, приводящее к плацентарной гипоксии и/или стрессу и сосудистым плацентарным повреждениям, связано с развитием плацентарной недостаточности, а так же ПЭ и ЗРП (ACOG Practice Bulletin No. 202: gestational hypertension and preeclampsia // Obstet. Gynecol. – 2019. – Vol. 133, № 1. – Art. 1. – URL: https://journals.lww.com/greenjournal/Fulltext/2019/01000/ACOG.49.aspx). Поэтому одним из перспективных направлений исследований молекулярно-генетических основ возникновения различных осложнений беременности является поиск вовлеченности в их развитие полиморфизма и уровня транскрипционной активности генов, дифференциально экспрессирующихся в плаценте (Differentially expressed genes in the pre-eclamptic placenta: a systematic review and meta-analysis / C.E. Kleinrouweler, M. van Uitert, P.D. Moerland [et al.]. – DOI: 10.1371/journal.pone.0068991 // PLoS One. – 2013. – Vol. 8, № 7. – Art. e68991. – URL: https://journals.plos.org/plosone/article?id=10.1371/journal.pone.0068991).

Ген PPP1R12C кодирует регуляторную субъединицу 12С миозинфосфатазы 1, влияющую на каталитическую активность данного фермента, и таким образом связанную со сборкой актинового цитоскелета в клетках организма (https://www.genecards.org/). Rs2532058 PPP1R12C связан с уровнем альтернативного сплайсинга транскрипта гена PPP1R12C в висцеральной жировой ткани (интрон ID: 55093233:55094355:clu_27045, β=-0,41, p=4,8*10-12, pFDR≤0,05) и крови (интрон ID: 55096178:55098784:clu_21866, β=-0,18, p=4,3*10-7, pFDR≤0,05.

С практической точки зрения представляется крайне необходимым выделение критериев индивидуального прогнозирования риска развития ПЭ на основании исследованных полиморфных вариантов гена PPP1R12C, дифференциально экспрессирующегося в плаценте и других возможных факторов риска с целью выявления беременных, предрасположенных к преэклампсии.

В Российской Федерации исследования о вовлеченности генетических вариантов rs2532058 и rs66707428 гена PPP1R12C, дифференциально экспрессирующегося в плаценте в формирование предрасположенности к ПЭ отсутствуют.

Для оценки сложившейся патентной ситуации был выполнен поиск по охранным документам за период с 1990 по 2021 гг. Анализ документов производился по направлению: способ прогнозирования риска развития преэклампсии на основе генетического тестирования в зависимости от полиморфных вариантов гена PPP1R12C, дифференциально экспрессирующегося в плаценте. Источники информации: сайты Федерального института промышленной собственности http://fips.ru.

В изученной научно-медицинской и доступной патентной литературе авторами не было обнаружено способа прогнозирования риска развития ПЭ на основе данных о генетических вариантах rs2532058 и rs66707428 гена PPP1R12C, дифференциально экспрессирующегося в плаценте.

Из области техники известен патент RU № 2730958 (опубл. 26.08.2020) «Способ диагностики тяжелой преэклампсии у беременных». Способ включает определение в плазме крови беременной концентрации внеклеточной ДНК (вк ДНК), число копий рибосомальной ДНК в составе внеклеточной ДНК (вк рДНК), число копий митохондриальной ДНК в составе внеклеточной ДНК (вк мтДНК), нуклеазную активность ДНКазы 1; в ядерной ДНК лейкоцитов определяют число копий геномной рибосомальной ДНК (геном рДНК), число копий геномной митохондриальной ДНК (геном мтДНК) и при вк ДНК более 1000 нг/мл, вк рДНК более 1000, вк мтДНК более 200, отношении вк рДНК к геном рДНК более 2, отношении вк мтДНК к геном мтДНК более 1,64, нуклеазной активности ДНКазы 1 более 10 ед/мл - диагностируют тяжелую преэклампсию. Недостатком этого способа является возможность прогнозирования только тяжелого течения преэклампсии, трудоемкость выполнения, сложность подсчетов, и кроме того не учитывается роль генетических полиморфизмов.

Известен патент RU 2693412 (опубл. 02.07.2019) способ диагностики преэклампсии путем определения в крови беременных женщин концентрации фактора некроза опухоли альфа (ФНОα), фактора роста плаценты (ФРП) и плацентарного альфа-1 микроглобулина (ПАМГ), значения индекса инсулинорезистентности (HOMA-IR), уровней инсулина и лептина, и при значении этих показателей в сроки 11-14 недель и 18-21 недель беременности. На основании данных полученных маркеров прогнозируют риск развития ранней или поздней ПЭ. Недостатком данного способа является его трудоемкость, заключающаяся в определении достаточно большого количества показателей в первом и втором триместрах беременности. Каждый из перечисленных в методе параметров может быть повышен при наличии различных патологических состояний, не связанных с беременностью, что может снижать специфичность данного метода. Не учитываются генетические факторы.

За прототип выбран патент RU № 2699974 (опубл. 11.09.2019), в котором описан способ прогнозирования риска развития преэклампсии у женщин с хронической артериальной гипертензией. Способ включает забор венозной крови, выделение геномной ДНК, проведение полимеразной цепной реакции синтеза ДНК и исследование полиморфизма гена альдостеронсинтазы CYP11B2 С(-344)Т и ангиотензиногена AGT T704C, оценивают уровень среднего артериального давления при первой явке в женскую консультацию до 12 недель беременности, учитывают факт наличия или отсутствия регулярной антигипертензивной терапии до наступления беременности и рассчитывают дискриминантную функцию (Y) по формуле: Y=0,21×Ф1+0,18×Ф2+0,31×Ф3+0,29×Ф4, где Ф1 - присутствие в генотипе женщины аллеля AGT 704С: да - 1 балл, нет - 0 баллов; Ф2 - присутствие в генотипе женщины аллеля CYP11B2 (-344)Т: да - 1 балл, нет - 0 баллов; Ф3 - наличие среднего артериального давления при первой явке в женскую консультацию до 12 недель беременности выше 95 мм рт.ст.: да - 1 балл, нет - 0 баллов; Ф4 - регулярная антигипертензивная терапия до наступления беременности: отсутствие - 1 балл, наличие - 0 баллов, и при значении Y, равном 0,68 или более, прогнозируют повышенный риск развития преэклампсии у женщин с хронической артериальной гипертензией, уроженок Центрального региона России. Недостатком данного способа является возможность его применения только у женщин с хронической артериальной гипертензией, установленной до наступления беременности, не учитываются другие генетические факторы.

Задачей настоящего исследования является расширение арсенала методов диагностики, а именно создание способа прогнозирования риска развития преэклампсии на основе данных о полиморфных вариантах rs2532058 и rs66707428 гена PPP1R12C.

Технический результат использования изобретения – получение способа прогнозирования риска развития ПЭ у беременных русской национальности, уроженок Центрально–Черноземного региона РФ, на основе данных о полиморфных вариантах rs2532058 и rs66707428 гена PPP1R12C, дифференциально экспрессирующегося в плаценте включающий:

- выделение ДНК из периферической венозной крови;

- анализ полиморфных вариантов rs2532058 и rs66707428 гена PPP1R12C, дифференциально экспрессирующегося в плаценте;

- прогнозирование высокого риска развития ПЭ у беременных при выявлении гаплотипа СA гаплоблока rs2532058-rs66707428 гена PPP1R12C, дифференциально экспрессирующегося в плаценте.

Новизна и изобретательский уровень заключаются в том, что из уровня техники не известна возможность прогноза развития ПЭ у беременных на основе данных о гаплотипе СA гаплоблока rs2532058-rs66707428 гена PPP1R12C, дифференциально экспрессирующегося в плаценте.

Способ осуществляют следующим образом:

Выделение геномной ДНК из периферической крови осуществляют методом фенольно-хлороформной экстракции (Miller, S.A. A simple salting out procedure for extracting DNA from human nucleated cells / S.A. Miller, D.D. Dykes, H.F. Polesky // Nucleic. Acids. Res. – 1988. – Vol. 16, № 3. – P. 1215) в два этапа. На первом этапе к 4 мл крови с ЭДТА добавляют 25 мл лизирующего буфера, содержащего 320мМ сахарозы, 1% тритон Х-100, 5мМ MgCl2, 10мМ трис-HCl (pH=7,6). Полученную смесь перемешивают и центрифугируют при 4°С, 4000 об/мин в течение 20 минут. После центрифугирования надосадочную жидкость сливают, к осадку добавляют 4 мл раствора, содержащего 25 мМ ЭДТА (рН=8,0) и 75 мМ NaCl, ресуспензируют. Затем прибавляют 0,4 мл 10% SDS, 35 мкл протеиназы К (10мг/мл) и инкубируют образец при 37°С в течение 16 часов.

На втором этапе из полученного лизата последовательно проводят экстракцию ДНК равными объемами фенола, фенол-хлороформа (1:1) и хлороформа с центрифугированием при 4000 об/мин в течение 10 минут. После каждого центрифугирования производят отбор водной фазы. ДНК осаждают из раствора двумя объемами охлажденного 96% этанола. После лиофилизации полученную ДНК растворяют в бидистиллированной, деионизованной воде и хранят при -20°С.

Генотипирование образцов ДНК было выполнено в Центре коллективного пользования «Медицинская геномика» Томского национального исследовательского медицинского центра РАН на базе НИИ медицинской генетики (использовался метод MALDI и масс-спектрометр MassARRAY Analyzer 4 (фирма производитель “Seqeunom”, страна производства США). Для генотипирования использовали образцы ДНК в концентрации 10-20 нг в микролитре общим обьемом 10 мкл. В процессе экспериментального анализа образцов выполняли следующие этапы: проведение мультиплексной ПЦР; осуществление SAP-реакции; выполнение iPLEX реакции с последующим обессоливанием и нанесением на SpectroCHIP; процедуры ионизации и анализа спектров с помощью масс-спектрометрии MALDI-TOF (Степанов В.А. Мультиплексное генотипирование однонуклеотидных полиморфных маркеров методом масс-спектрометрии MALDI-TOF: частоты 56 SNP в генах иммунного ответа в популяциях человека / В.А. Степанов, Е.А. Трифонова // Молекулярная биология. – 2013. – Т. 47, № 6. – С. 976-986).

Гаплоблоки конструировались на основе алгоритма «Confidence intervals» (Gabriel S.B. et al., 2002) (при D’>0,8), имплементированном в программу gPLINK v2.050 (279. PLINK: a tool set for whole-genome association and population-based linkage analyses / S. Purcell, B. Neale, K. Todd-Brown [et al.] // Am. J. Hum. Genet. – 2007. – Vol. 81, № 3. – Р. 559-575.). Так же с помощью вышеуказанного программного обеспечения проводился анализ ассоциаций гаплотипов с изучаемыми фенотипами методами логистической регрессии с необходимыми ковариатами и пермутационными процедурами (выполнялось 1000 пермутаций). Показатель pperm<0,05 при анализе ассоциаций гаплотипов был принят за статистически значимый.

Возможность использования предложенного способа для оценки прогнозирования риска развития ПЭ у беременных подтверждает анализ результатов наблюдений 997 пациенток, из них 366 беременных с ПЭ и 631 женщин контрольной группы. Основные медико-биологические и клинико-анамнестические характеристики беременных с преэклампсией и женщин группы контроля отражены в таблице 1.

В выборку для исследования вошли женщины с преэклампсией и/или задержкой роста плода и женщины контрольной группы (с физиологическим течением беременности), давшие свое информированное согласие на участие в данной исследовательской работе и соответствующие ряду критериев: русский этнос, место рождения и проживания – регион Центрального Черноземья России. Основаниями для исключения женщин из исследовательской выборки были отказ от участия в данной работе, наличие родства между ними различной степени, выявление тяжелых хр. заболеваний, проводящих к декомпенсации, нерусский этнос и иные (нежели Центральное Черноземье России) места рождения и/или проживания.

Клиническое, клинико-лабораторное, клинико-инструментальное обследование беременных и новорожденных детей, верификация диагноза осложнений беременности – ПЭ, ЗРП (или их отсутствие), сбор медико-биологической информации, результатов клинического, клинико-лабораторного, клинико-инструментального обследования беременных и новорожденных детей в специально разработанные анкеты и формирование электронной базы данных проводилось сертифицированными врачами профильных отделений перинатального центра Белгородской областной клинической больницы Святителя Иоасафа.

Таблица 1.

При расчете частот гаплотипов и анализе их ассоциаций у индивидуумов установлена связь с формированием преэклампсии гаплотипа СA гаплоблока rs2532058-rs66707428 гена PPP1R12C, дифференциально экспрессирующегося в плаценте. Гаплотип СA гаплоблока rs2532058-rs66707428 гена PPP1R12C является фактором повышенного риска развития ПЭ у женщин (ORadj=1,18).

В качестве примеров конкретного применения разработанного способа приведено обследование русских пациенток, уроженок Центрально-Черноземного региона РФ и не являющихся родственницами между собой: проведено генетическое исследование по полиморфным вариантам rs2532058 и rs66707428 гена PPP1R12C, дифференциально экспрессирующегося в плаценте.

У пациентки А. была взята венозная кровь, при генотипировании ДНК-маркеров был выявлен гаплотип СA гаплоблока rs2532058-rs66707428 гена PPP1R12C, что позволило отнести пациентку в группу больных с высоким риском развития ПЭ. Дальнейшее наблюдение подтвердило данное осложнение беременности у пациентки.

У пациентки Б. была взята венозная кровь, при генотипировании ДНК-маркеров был выявлен гаплотип СС гаплоблока rs2532058-rs66707428 гена PPP1R12C, что позволило отнести пациентку в группу беременных с низким риском развития ПЭ. Дальнейшее наблюдение не подтвердило преэклампсию у пациентки Б.

У пациентки З. была взята венозная кровь, при генотипировании ДНК-маркеров был выявлен гаплотип GG гаплоблока rs2532058-rs66707428 гена PPP1R12C, что позволило отнести пациентку в группу беременных с низким риском развития ПЭ. Дальнейшее наблюдение не подтвердило преэклампсию у пациентки.

У пациентки Т. была взята венозная кровь, при генотипировании ДНК-маркеров был выявлен гаплотип GA гаплоблока rs2532058-rs66707428 гена PPP1R12C, что позволило отнести пациентку в группу беременных с низким риском развития ПЭ. При дальнейшем наблюдении данное осложнение беременности у беременной не подтвердилось.

Применение данного способа позволит на доклиническом этапе формировать среди пациенток группы риска и своевременно реализовывать в этих группах необходимые лечебно-профилактические мероприятия по предупреждению развития ПЭ.

Способ прогнозирования риска развития преэклампсии на основе генетического тестирования у неродственных русских индивидуумов, уроженок Центрально-Черноземного региона РФ, включающий выделение ДНК из периферической венозной крови, анализ полиморфизмов, отличающийся тем, что при исследовании гена PPP1R12C, дифференциально экспрессирующегося в плаценте, повышенный риск развития преэклампсии прогнозирует выявление гаплотипа СA гаплоблока rs2532058-rs66707428 гена PPP1R12C.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области медицинской диагностики и предназначено для прогнозирования риска развития преэклампсии (ПЭ) у неродственных русских индивидуумов, уроженок Центрально-Черноземного региона РФ. Осущеcтвляют анализ генетических маркеров гена UGT2B4.

Изобретение относится к области медицины. Предложен способ прогнозирования риска развития задержки роста плода (ЗРП) у неродственных русских индивидуумов, уроженок Центрально-Черноземного региона РФ и проживающих в Белгородской области.

Изобретение относится к области медицинской диагностики. Осуществляют забор венозной крови, выделение ДНК из периферической венозной крови и анализ генетических маркеров гена LOXL1.

Изобретение относится к области медицинской диагностики. Осуществляют забор венозной крови, выделение ДНК из периферической венозной крови и анализ генетических маркеров CDKN2B-AS1 и LOXL1.

Изобретение относится к области медицины, в частности к неврологии, и может быть использовано для выделения и культивирования эндотелия микрососудов мозга. Способ включает: операции извлечения мозга крысы, удаление мозговых оболочек и крупных сосудов, диссекцию коры головного мозга в холодном растворе Хенкса и ее измельчение, диссоциацию ткани пипетированием количеством 25-30 раз, осаждение центрифугированием для отделения микрососудов от нейрональной ткани, переваривание в 0,1% растворе коллагеназы II при 37°С, осаждение и удаление фермента с последующим посевом на культуральный пластик в ростовой среде, отличающийся тем, что используют мозг крысы возрастом от 14 до 20 дней, при этом измельчают кору мозга на кусочки размером 5-7 мм, добавляют 3 миллилитра раствора Хенкса, а диссоциацию ткани осуществляют вначале пипетированием 25-30 раз пастеровской пипеткой с широким отверстием - 1,5-2 мм, после чего проводят осаждение центрифугированием, удаляют надосадок, добавляют еще 3 миллилитра раствора Хенкса и вновь пипетируют 25-30 раз пастеровской пипеткой с тонким просветом - 0,5-0,7 мм, затем центрифугируют в течение 5 минут при 1000 об/мин, удаляют надосадок и добавляют холодный 4-8°С 25% раствор бычьего сывороточного альбумина (BSA) на натрий-фосфатный буферный раствор (PBS), вновь центрифугируют в течение 10 минут при 2000 об/мин, далее надосадок пипетируют еще 25-30 раз и центрифугируют в течение 10 минут при 2000 об/мин, отбирают часть диссоциированной ткани над BSA вместе с раствором альбумина, к осадку приливают 3-4 миллилитра раствора Хенкса и центрифугируют осадок в течение 5 минут при 1000 об/мин, удаляют надосадок, добавляют к осадку 2 мл 0,1% раствора коллагеназы II на PBS и вновь пипетируют, далее пробирку с тканью помещают в роллерную установку при 37°С на 40 минут, затем после инкубации в пробирку приливают 5 миллилитров раствора Хенкса для остановки процесса переваривания, центрифугируют в течение 5 минут при 1000 об/мин, отбирают супернатант, ресуспендируют клеточную массу в ростовой среде и засевают на культуральный пластик, покрытый матригелем, при этом ростовая среда имеет следующий состав на 100 мл: DMEM/F-12 Gibco - 76 мл; телячья эмбриональная сыворотка 20% -20 мл; GlutaMAX Gibco x100 - 1 мл; глюкоза 40% - 750 мкл; гидрокортизон 1,4 мМ - 100 мкл; пируват натрия 11 мг/мл - 1 мл; антибиотик (пеницилин-5000 ед/мл:стрептомицин-5000 мкг/мл) - 1 мл.
Изобретение относится к медицине, а именно к терапии, пульмонологии, нефрологии, и может быть использовано при прогнозировании развития хронической болезни почек (ХБП) у лиц с хронической обструктивной болезнью легких (ХОБЛ). Для этого проводят оценку качества жизни пациента в баллах путем заполнения им вопросника COPD Assessment Test, оценку в баллах выраженности одышки по шкале Британского медицинского исследовательского совета, подсчитывают число обострений, перенесенных пациентом за предшествующие 12 месяцев, определяют уровень лейкоцитов, концентрации ионов хлора, интерлейкина-6 и фактора некроза опухолей α в сыворотке крови.

Изобретение относится к области медицины, в частности к фармакогенетике, и предназначено для выбора стартовых обезболивающих лекарственных препаратов в послеоперационном периоде после кардиохирургических вмешательств. Определяют полиморфизм rs1057910 гена CYP2C9.

Изобретение относится к медицине, а именно к инфекционным болезням, и может быть использовано для прогнозирования неблагоприятного клинического исхода у больных ВИЧ-инфекцией старше 18 лет с внебольничной пневмонией бактериальной этиологии. Выполняют исследование электролитов, иммунологического статуса, протромбинового индекса, глюкозы крови, микроскопическое исследование мокроты, оценивают данные показатели и прогнозируют наступление летального исхода.

Изобретение относится к медицине, а именно к инфекционным болезням, и может быть использовано для прогнозирования неблагоприятного клинического исхода у больных ВИЧ-инфекцией старше 18 лет с внебольничной пневмонией бактериальной этиологии. Выполняют исследование электролитов, иммунологического статуса, протромбинового индекса, глюкозы крови, микроскопическое исследование мокроты, оценивают данные показатели и прогнозируют наступление летального исхода.
Изобретение относится к области медицины. Предложен способ преимплантационного генетического тестирования семейной гипертрофической кардиомиопатии, предусматривающий выявление наследования патогенного варианта NC_000011.9:g.19209773C>A, NM_003476.5:c.191G>T, p.Arg64Leu в гене CSRP3.

Изобретение относится к области медицинской диагностики и предназначено для прогнозирования риска развития преэклампсии (ПЭ) у неродственных русских индивидуумов, уроженок Центрально-Черноземного региона РФ. Осущеcтвляют анализ генетических маркеров гена UGT2B4.
Наверх