Ингибитор канцерогенеза

Изобретение относится к области медицины, а именно к применению 5-гидрокси-1-метилгидантоина или его фармацевтически приемлемой соли в качестве ингибитора канцерогенеза, где ингибирование канцерогенеза обусловлено ингибированием образования полипов. Технический результат: обеспечение ингибирующего эффекта против образования полипа 5-гидрокси-1-метилгидантоином или его фармацевтически приемлемой солью. 6 з.п. ф-лы, 1 ил., 4 табл., 4 пр.

 

[Область техники]

[0001]

Настоящее изобретение относится к новому фармацевтическому применению производного гидантоина или его фармацевтически приемлемой соли. Более конкретно, оно относится к ингибитору канцерогенеза, содержащему в качестве активного ингредиента по меньшей мере один член производного гидантоина или его фармацевтически приемлемую соль.

[Уровень техники]

[0002]

Из-за таких факторов, как старение общества во всем мире, вестернизация пищевых привычек, привычка курить и т.д., предполагается, что число больных раком возрастет в будущем не только в Японии, но и в мире. Согласно «Reports on Cancer in the World (2014)» под редакцией Word Health Organization (WHO), число пациентов, страдающих от рака в мире, увеличивается год от года, начиная с 14 миллионов в 2012 году, и оценивается в 19 миллионы в 2025 году и 24 миллиона в 2035 году. С другой стороны, хотя используются различные терапевтические методы, такие как хирургическая терапия, лучевая терапия, химиотерапия, термотерапия, иммунотерапия, фотодинамическая терапия и т.д., не существует терапевтического метода, который способен полностью вылечить любой тип рака. Даже если кажется, что лечение рака проведено хорошо, может иметь место такой результат, что раковые клетки, которые не были хорошо удалены в случае хирургической терапии или когда-то уменьшенные раковые клетки в случае химиотерапии или лучевой терапии, снова размножаются в той же или смежной области (далее он будет называться «рецидив»). Также может произойти такой исход, что тот же самый рак появляется в другой области, отличной от исходной области (далее он будет называться «метастазирование»). Ввиду вышесказанного невозможно даже в настоящее время полностью вылечить все виды рака. Таким образом, в области медицины очень ожидали, что будут предоставлены эффективные средства, предотвращающие рецидив и метастазирование, которые особенно затрудняют лечение рака.

[0003]

Ввиду вышесказанного, в последние годы подчеркивалась точка зрения ингибирования канцерогенеза, когда предотвращается возникновение рака или снижается вероятность возникновения рака, отдельно от терапии после возникновения рака. Наиболее известным средством для ингибирования канцерогенеза является пересмотр привычки к образу жизни, такой как курение и регулирование питания. Например, в причинах смерти от рака американцев, о которых сообщил Harvard Center for Cancer Prevention в 1996 году, курение указано как 30%, а диета также достигает 30%. С другой стороны, была изучена полезность химиопрофилактики, где положительно вводятся витаминные препараты, фармацевтические средства и т.п. Субъекты для химиопрофилактики включают группы высокого риска, имеющие высокую вероятность заболеть раком, такие как курильщики, лица, имеющие высокую вероятность заболеть раком генетически или профессионально, лица, имеющие предраковое поражение, такое как колоректальный полип, и лица, которые в свое время закончили лечение рака. Требование принять химиопрофилактику как таковую состоит в том, что риск побочного эффекта низок, хотя само собой разумеется, что эффективность подтверждена. Кроме того, если химиопрофилактику можно осуществить лекарственным средством или пищей (такой как добавка или здоровая пища), которые можно легко принимать перорально в повседневной жизни, то это является очень простым, удобным и предпочтительным. Когда осуществляется отличная химиопрофилактика рака, это, несомненно, очень хорошая новость для людей, которые беспокоятся о возникновении рака, а также боятся рецидивов или метастазирования рака. Кроме того, распространение химиопрофилактики рака значительно улучшит результат лечения (преимущество выживания) и в то же время будет способствовать избежанию повторных хирургических операций, сокращению медицинских расходов, вызванных тем, что назначение дорогостоящего противоракового средства, и т.п. становится ненужным, и ингибированию социальных потерь за счет того факта, что больные раком способны работать на постоянной основе.

[0004]

При разработке фармацевтических препаратов для химиопрофилактики рака как таковых, мышление, называемое перепрофилирование лекарственного препарата, получил общественный резонанс. Перепрофилирование лекарственного средства представляет собой исследование для обнаружения новых фармацевтических эффектов, отличных от общеизвестных, у существующих лекарственных средств или разрабатываемых лекарственных средств, где безопасность, внутренняя кинетика и т.п. уже установлены или подтверждены и которые приводят к практическому использованию. Как «надежность» вследствие того, что оно имеет результаты применения у человека, будучи выпущенным на рынок, и безопасность и внутренняя кинетика уже подтверждены на клиническом уровне, так и «низкая стоимость» вследствие того, что многие ранее существующие данные могут быть использованы, являются самыми высокими преимуществами с точки зрения разработки фармацевтических препаратов.

[0005]

В результате исследований рака, проводимых во всем мире до настоящего времени, многое прояснилось уже в факторах, касающихся начальной стадии возникновения рака, и в важном пути передачи сигналов, в котором участвуют такие факторы. Что касается предраковых симптомов, тесно связанных с сигнальным путем, то в качестве примеров можно привести «воспаление», «окислительный стресс» и «поддержание недифференцированного состояния», которые характеризуются контролем транскрипции с помощью специфического фактора транскрипции. Соответственно, существует вероятность того, что регуляция контроля транскрипции как таковая приводит к ингибированию канцерогенеза, и ожидается, что противовоспалительные средства и антиоксиданты могут быть кандидатами ингибиторов канцерогенеза. В настоящее время, в Международном агентстве по изучению рака (IARC) были оценены противовоспалительные средства, такие как сулиндак и индометацин, и антиоксиданты, такие как β-каротин и ретиноевая кислота, проявляют ли они профилактический эффект в отношении рака. Однако, к сожалению, среди веществ, оцениваемых как таковые, в настоящее время практически нет ни одного, обладающего достаточными научными доказательствами профилактического эффекта в отношении рака.

[0006]

Производное гидантоина или его фармацевтически приемлемая соль, которое является активным ингредиентом ингибитора канцерогенеза в соответствии с настоящим изобретением (Далее оно будет упоминаться как «настоящее соединение». Более того, даже в таком случае, когда используется простое выражение “соединение”, оно может иногда охватывать его фармацевтически приемлемую соль.), было обнаружено в качестве нового вещества, обладающего регулирующим действием для роста растений, компанией Nippon Zoki Pharmaceutical Co., Ltd., которая является заявителем настоящей заявки. В результате исследований, проведенных после этого, было показано, что настоящее соединение обладает фармакологическим действием, таким как гипогликемическое действие и гиполипидемическое действие, и является малотоксичным и почти не имеет побочных эффектов (см. выложенный патент Японии No. 57/114578 A, 60/188373 A, 61/122275 A, 62/45525 A, 62/000014 A, 01/75473 A, 01/299276 A, и т.д.). Кроме того, что касается других фармацевтических применений настоящего соединения, были поданы патентные заявки в качестве средства для снижения токсинов при уремии (выложенный патент Японии No. 03/072463 A), терапевтического средства для лечения трудноизлечимого васкулита (выложенный патент Японии No. 2000/212083 A), средства, улучшающего состояние гипоальбуминемии (выложенный патент Японии No. 2002/241283 A) и средства, подавляющего прогресс или улучшающего состояние при хроническом заболевании почек (международная публикация No. WO 2015/129750 A1) и в них были раскрыты эффекты.

В то же время, во время клинических испытаний для разработки в качестве терапевтического средства для хронического заболевания почек было подтверждено, что настоящее соединение обладает высокой безопасностью для людей.

[0007]

В частности, в патентном документе 1 раскрыто, что настоящее соединение является полезным в качестве средства для удаления активированного кислорода и свободных радикалов. Как упоминалось выше, возможность того, что антиоксидантное вещество может быть эффективным для ингибирования канцерогенеза, уже известна. Однако в действительности все антиоксидантные вещества не всегда проявляют эффект ингибирования канцерогенеза, но подтверждено, что только часть антиоксидантных веществ проявляет эффект ингибирования канцерогенеза. Кроме того, даже в антиоксидантных веществах, проявляющих ингибирующее канцерогенез действие, было также обнаружено, что ингибирующее канцерогенез действие достигается за счет противовоспалительного действия или ингибирующего фермент действия, а не за счет антиоксидантного действия. Вероятно, что антиоксидантное вещество как таковое ингибирует прогрессирование предракового симптома до рака, участвуя в «воспалении» и «поддержании недифференцированного состояния» вместо «окислительного стресса» среди вышеупомянутых предраковых симптомов «воспаления», «окислительного стресса» и «поддержания недифференцированного состояния».

[0008]

В патентном документе 1 нет ни описания, ни предположений в отношении того факта, что настоящее соединение проявляет эффект ингибирования канцерогенеза. Как упоминалось выше, уже было известно, что даже вещества, известные как так называемые антиоксиданты, не всегда достигают эффекта ингибирования канцерогенеза. Кроме того, хотя различные вещества, такие как противовоспалительное средство и фермент-ингибирующее средство, иные, чем антиоксидант, могут быть кандидатами в ингибиторы канцерогенеза, очень редко такие вещества действительно проявляют действие, ингибирующее канцерогенез, и, более того, они являются вещества, которые можно вводить или принимать перорально, и имеют низкий риск побочных эффектов. Как будет упомянуто ниже, настоящее соединение может быть превосходным ингибитором канцерогенеза, удовлетворяющим нескольким требованиям как таковым.

[Документы предшествующего уровня техники]

[Патентные документы]

[0009]

Патентный документ 1: выложенный патент Японии No. 09/227377 A

[Сущность изобретения]

[Задача, решаемая изобретением]

[0010]

Целью настоящего изобретения является создание ингибитора канцерогенеза, обладающего таким эффектом, как предотвращение канцерогенеза и снижение возможности (вероятности) канцерогенеза, включая первичное возникновение, рецидив и метастазирование рака (это называется «ингибированием канцерогенеза» в настоящей заявке), с низким риском побочных эффектов и возможностью перорального введения или приема внутрь. Ингибитор канцерогенеза по настоящему изобретению делает возможным ингибирование возникновения, рецидива и метастазирования рака путем введения или приема внутрь, в частности, человеку, имеющему высокий риск канцерогенеза, или пациентам во время и после лечения рака. Что касается его дозированной формы, наиболее предпочтительными являются фармацевтическое средство, которое можно принимать внутрь (для перорального приема), и пища, такая как добавка, которую можно принимать внутрь перорально.

[Средства для решения задач]

[0011]

Авторы настоящего изобретения неоднократно проводили исследования для средств химиопрофилактики рака. В настоящее время провели фармакологический тест путем перорального введения мышам Min модели семейного аденоматозного coli проводили с использованием производного гидантоина, представленного следующей формулой (I), или его фармацевтически приемлемой соли (настоящее соединение). Было подтверждено, что настоящее соединение ингибирует экспрессию факторов, ассоциированных с пролиферацией клеток, которые представляли собой c-Myc, CDK4 и циклин D1, в эпителии слизистой оболочки кишечника и части его полипа и способность пролиферации клеток в части полипа. Также было подтверждено, что экспрессия фактора, ассоциированного с антиоксидацией, Gpx2 в эпителии слизистой оболочки кишечника мышей Min была повышена. С другой стороны, было отмечено, что настоящее соединение приводило к изменению системы регуляции транскрипции пути Keap1-Nrf2 путем устранения активных форм кислорода (АФК), продуцируемых в клетке рака толстой кишки человека HCT-116 во время лечения перекисью водорода (H2O2), которая является генератором радикалов. Принимая во внимание эти факты, авторы настоящего изобретения экспериментально подтвердили, что настоящее соединение обладает превосходным ингибирующим канцерогенез действием.

[0012]

С другой стороны, в прошлых исследованиях было подтверждено, что настоящее соединение является безопасным не только для животных, таких как крысы и собаки, но и для людей, причем оно также соответствует требованию о том, что риск побочных эффектов является низким, что считается важным в качестве химиопрофилактического средства для рака. Кроме того, в лекарственных средствах, которые были признаны безопасными в качестве средства, устраняющего АФК, в качестве лекарственной формы было только средство для внутривенного введения, в то время как настоящее соединение продемонстрировало эффективное действие при пероральном введении, благодаря чему оно является значительно более выгодным с точки зрения введения и приема внутрь. В таком случае ингибитор канцерогенеза по настоящему изобретению может быть использован не только в качестве фармацевтического средства, но и в качестве пищи (лечебное питание, добавки и т.п.). Между тем, ингибитор канцерогенеза по настоящему изобретению можно использовать не только для людей, но и для животных (в частности, для млекопитающих), при этом ингибитор канцерогенеза по настоящему изобретению не ограничивается использованием только для людей. Принимая во внимание вышеизложенное, авторы настоящего изобретения обнаружили, что настоящее соединение может быть использовано в качестве превосходного ингибитора канцерогенеза и осуществили настоящее изобретение. Таким образом, настоящее изобретение относится к следующим пунктам, хотя оно никогда не ограничивается ими.

[0013]

(1) Ингибитор канцерогенеза, содержащий по меньшей мере один член производного гидантоина, представленного следующей формулой (I), и его фармацевтически приемлемую соль в качестве активного ингредиента:

[химическая формула 1]

где R1 и R2 одинаковы или различны, и каждый представляет собой водород, алкил, циклоалкил или бензил, который может быть замещен одним или двумя галогеном(ами), нитро, алкилом(ами) или алкокси, и X и Y являются одинаковыми или различными, и каждый представляет собой водород, карбокси, алкил или алкокси.

(2) Ингибитор канцерогенеза по вышеуказанному пункту (1), где R1 и R2 одинаковы или различны, и каждый представляет собой водород или алкил, имеющий от 1 до 3 атомов углерода, и X и Y одинаковы или различны, и каждый представляет собой водород, карбокси или алкокси, имеющую от 1 до 3 атомов углерода.

(3) Ингибитор канцерогенеза по вышеуказанному пункту (1) или (2), где R1 представляет собой алкил, имеющий от 1 до 3 атомов углерода, и R2 представляет собой водород.

(4) Ингибитор канцерогенеза по любому из указанных выше пунктов (1) - (3), где R1 представляет собой алкил, имеющий от 1 до 2 атомов углерода, и R2 представляет собой водород.

(5) Ингибитор канцерогенеза по любому из указанных выше пунктов (1) - (4), где R1 представляет собой метил и R2 представляет собой водород.

(6) Ингибитор канцерогенеза по любому из указанных выше пунктов (1) - (5), где один из X и Y представляет собой водород, а другой представляет собой карбокси.

(7) Ингибитор канцерогенеза по любому из указанных выше пунктов (1) - (6), где ингибирование канцерогенеза обусловлено ингибированием образования полипов.

(8) Ингибитор канцерогенеза по любому из указанных выше пунктов (1) - (7), где ингибирование канцерогенеза обусловлено регуляцией экспрессии фактора, связанного с антиоксидацией.

(9) Ингибитор канцерогенеза по вышеуказанному пункту (8), где ингибирование канцерогенеза обусловлено стимулированием экспрессии Gpx2.

(10) Ингибитор канцерогенеза по любому из указанных выше пунктов (1) - (9), где ингибирование канцерогенеза обусловлено элиминацией АФК.

(11) Ингибитор канцерогенеза по любому из указанных выше пунктов (1) - (10), где ингибирование канцерогенеза обусловлено регуляцией экспрессии факторов, связанных с пролиферацией клеток.

(12) Ингибитор канцерогенеза по вышеуказанному пункту (11), где ингибирование канцерогенеза обусловлено ингибированием экспрессии c-Myc, CDK4 или циклина D1.

(13) Ингибитор канцерогенеза по любому из указанных выше пунктов (1) - (12), где он является ингибитором канцерогенеза при раке пищеварительного тракта.

(14) Ингибитор канцерогенеза по вышеуказанному пункту (13), где он является ингибитором канцерогенеза при раке толстой кишки.

(15) Ингибитор канцерогенеза по любому из указанных выше пунктов (1) - (14), где он представляет собой фармацевтическую композицию.

(16) Ингибитор канцерогенеза по вышеуказанному пункту (15), где он представляет собой лекарственный препарат для перорального приема.

(17) Ингибитор канцерогенеза по вышеуказанному пункту (15), где он представляет собой инъекционный препарат.

(18) Ингибитор канцерогенеза по любому из указанных выше пунктов (1) - (14), где он представляет собой пищевую композицию.

(19) Ингибитор канцерогенеза по вышеуказанному пункту (18), где он представляет собой здоровую пищу или добавку.

[0014]

(20) Способ ингибирования канцерогенеза, включающий введение эффективного количества по меньшей мере одного члена производного гидантоина и его фармацевтически приемлемой соли, указанной в любом из вышеприведенных пунктов (1)-(6), субъекту, нуждающемуся в этом.

(21) Способ ингибирования канцерогенеза по вышеуказанному пункту (20), где ингибирование канцерогенеза осуществляют путем ингибирования образования полипов.

(22) Способ ингибирования канцерогенеза по вышеуказанному пункту (20) или (21), где ингибирование канцерогенеза осуществляют путем регуляции экспрессии фактора, связанного с антиоксидацией.

(23) Способ ингибирования канцерогенеза по вышеуказанному пункту (22), где ингибирование канцерогенеза осуществляют путем стимулирования экспрессии Gpx2.

(24) Способ ингибирования канцерогенеза по любому из вышеуказанных пунктов (20) - (23), где ингибирование канцерогенеза осуществляют путем элиминации АФК.

(25) Способ ингибирования канцерогенеза по любому из вышеуказанных пунктов (20) - (24), где ингибирование канцерогенеза осуществляют путем регуляции экспрессии фактора, связанного с пролиферацией клеток.

(26) Способ ингибирования канцерогенеза по вышеуказанному пункту (25), где ингибирование канцерогенеза осуществляют путем ингибирования экспрессии c-Myc, CDK4 или циклина D1.

(27) Способ ингибирования канцерогенеза по любому из вышеуказанных пунктов (20) - (26), где ингибируют возникновение рака желудочно-кишечного тракта.

(28) Способ ингибирования канцерогенеза по вышеуказанному пункту (27), где ингибируют возникновение рака толстой кишки.

(29) Способ ингибирования канцерогенеза по любому из вышеуказанных пунктов (20) - (28), включающий введение фармацевтической композиции, содержащей по меньшей мере один член производного гидантоина и его фармацевтически приемлемую соль.

(30) Способ ингибирования канцерогенеза по вышеуказанному пункту (29), где фармацевтическая композиция представляет собой лекарственный препарат для перорального приема.

(31) Способ ингибирования канцерогенеза по вышеуказанному пункту (29), где фармацевтическая композиция представляет собой инъекционный препарат.

(32) Способ ингибирования канцерогенеза по любому из вышеуказанных пунктов (20) - (28), включающий введение пищевой композиции, содержащей по меньшей мере один член производного гидантоина и его фармацевтически приемлемую соль.

(33) Способ ингибирования канцерогенеза по вышеуказанному пункту (32), где пищевая композиция представляет собой здоровую пищу или добавку.

[0015]

(34) Производное гидантоина или его фармацевтически приемлемая соль, указанные в любом из вышеприведенных пунктов (1) - (6), для применения в ингибировании канцерогенеза.

(35) Производное гидантоина или его фармацевтически приемлемая соль для применения по вышеуказанному пункту (34), где ингибирование канцерогенеза осуществляют путем ингибирования образования полипов.

(36) Производное гидантоина или его фармацевтически приемлемая соль для применения по вышеуказанному пункту (34) или (35), где ингибирование канцерогенеза осуществляют путем регуляции экспрессии фактора, связанного с антиоксидацией.

(37) Производное гидантоина или его фармацевтически приемлемая соль для применения по вышеуказанному пункту (36), где ингибирование канцерогенеза осуществляют путем стимулирования экспрессии Gpx2.

(38) Производное гидантоина или его фармацевтически приемлемая соль для применения по любому из вышеуказанных пунктов (34)-(37), где ингибирование канцерогенеза осуществляют путем элиминации АФК.

(39) Производное гидантоина или его фармацевтически приемлемая соль для применения по любому из вышеуказанных пунктов (34)-(38), где ингибирование канцерогенеза осуществляют путем регуляции экспрессии фактора, связанного с пролиферацией клеток.

(40) Производное гидантоина или его фармацевтически приемлемая соль для применения по вышеуказанному пункту (39), где ингибирование канцерогенеза осуществляют путем ингибирования экспрессии c-Myc, CDK4 или циклина D1.

(41) Производное гидантоина или его фармацевтически приемлемая соль для применения по любому из вышеуказанных пунктов (34)-(40), где оно ингибирует возникновение рака желудочно-кишечного тракта.

(42) Производное гидантоина или его фармацевтически приемлемая соль для применения по вышеуказанному пункту (41), где оно ингибирует возникновение рака толстой кишки.

(43) Производное гидантоина или его фармацевтически приемлемая соль для применения по любому из вышеуказанных пунктов (34)-(42), где оно представляет собой фармацевтическую композицию.

(44) Производное гидантоина или его фармацевтически приемлемая соль для применения по вышеуказанному пункту (43), где фармацевтический препарат представляет собой лекарственный препарат для перорального приема.

(45) Производное гидантоина или его фармацевтически приемлемая соль для применения по вышеуказанному пункту (43), где фармацевтический препарат представляет собой инъекционный препарат.

(46) Производное гидантоина или его фармацевтически приемлемая соль для применения по любому из вышеуказанных пунктов (34)-(42), где оно представляет собой пищевую композицию.

(47) Производное гидантоина или его фармацевтически приемлемая соль для применения по вышеуказанному пункту (46), где пищевая композиция представляет собой здоровую пищу или добавку.

[0016]

(48) Применение производного гидантоина или его фармацевтически приемлемой соли, указанных в любом из вышеприведенных пунктов (1) - (6) при изготовлении ингибитора канцерогенеза.

(49) Применение производного гидантоина или его фармацевтически приемлемой соли по вышеуказанному пункту (48), где ингибирование канцерогенеза осуществляют путем ингибирования образования полипов.

(50) Применение производного гидантоина или его фармацевтически приемлемой соли по вышеуказанному пункту (48) или (49), где ингибирование канцерогенеза осуществляют путем регуляции экспрессии фактора, связанного с антиоксидацией.

(51) Применение производного гидантоина или его фармацевтически приемлемой соли по вышеуказанному пункту (50), где ингибирование канцерогенеза осуществляют путем стимулирования экспрессии Gpx2.

(52) Применение производного гидантоина или его фармацевтически приемлемой соли по любому из вышеуказанных пунктов (48) - (51), где ингибирование канцерогенеза осуществляют путем элиминации АФК.

(53) Применение производного гидантоина или его фармацевтически приемлемой соли по любому из вышеуказанных пунктов (48) - (52), где ингибирование канцерогенеза осуществляют путем регуляции экспрессии фактора, связанного с пролиферацией клеток.

(54) Применение производного гидантоина или его фармацевтически приемлемой соли по вышеуказанному пункту (53), где ингибирование канцерогенеза осуществляют путем ингибирования экспрессии c-Myc, CDK4 или циклина D1.

(55) Применение производного гидантоина или его фармацевтически приемлемой соли по любому из вышеуказанных пунктов (48) - (54), где оно является ингибитором канцерогенеза при раке пищеварительного тракта.

(56) Применение производного гидантоина или его фармацевтически приемлемой соли по вышеуказанному пункту (55), где оно является ингибитором канцерогенеза при раке толстой кишки.

(57) Применение производного гидантоина или его фармацевтически приемлемой соли по любому из вышеуказанных пунктов (48) - (56), где ингибитор канцерогенеза представляет собой фармацевтическую композицию.

(58) Применение производного гидантоина или его фармацевтически приемлемой соли по вышеуказанному пункту (57), где фармацевтическая композиция представляет собой лекарственный препарат для перорального приема.

(59) Применение производного гидантоина или его фармацевтически приемлемой соли по вышеуказанному пункту (57), где фармацевтическая композиция представляет собой инъекционный препарат.

(60) Применение производного гидантоина или его фармацевтически приемлемой соли по любому из вышеуказанных пунктов (48) - (56), где ингибитор канцерогенеза представляет собой пищевую композицию.

(61) Применение производного гидантоина или его фармацевтически приемлемой соли по вышеуказанному пункту (60), где пищевая композиция представляет собой здоровую пищу или добавку.

[Преимущество изобретения]

[0017]

В фармакологическом тесте, который будет упомянут позже, настоящее соединение продемонстрировало превосходный ингибирующий эффект против образования полипа и экспрессии фактора, связанного с пролиферацией клеток. Кроме того, поскольку настоящее соединение демонстрирует очень высокую безопасность и достигает эффекта при пероральном введении и приеме внутрь, оно способно стать очень высокоэффективным ингибитором канцерогенеза, благодаря чему химиопрофилактика становится возможной в лекарственной форме, такой как фармацевтическое средство или пища.

[Краткое описание фигур]

[0018]

[Фиг. 1] Фиг.1 представляет собой фотографию с оптического микроскопа, показывающую результат иммуноокрашивания PCNA в части полипа слизистой оболочки тонкого кишечника мыши контрольной группы и группы, которой вводили 1000 ч/млн тестируемого вещества.

[Способ осуществления изобретения]

[0019]

Настоящее изобретение относится к ингибитору канцерогенеза, содержащему по меньшей мере один член из производного гидантоина, представленного следующей формулой (I), и его фармацевтически приемлемую соль в качестве активного ингредиента.

[химическая формула 2]

где R1 и R2 одинаковы или различны, и каждый представляет собой водород, алкил, циклоалкил или бензил, который может быть замещен одним или двумя галогеном(ами), нитро, алкилом(ами) или алкокси, и X и Y являются одинаковыми или различными, и каждый представляет собой водород, карбокси, алкил или алкокси.

[0020]

В заместителях в приведенной выше формуле (I), хотя алкил может быть любым алкилом, он предпочтительно представляет собой линейную или разветвленную алкильную группу, имеющую от 1 до 20 атомов углерода, такую как метил, этил, пропил, изопропил, бутил, изобутил, втор-бутил, трет-бутил, пентил, изопентил, неопентил, трет-пентил, гексил, изогексил, гептил, изогептил, октил, изооктил, нонил, изононил, децил, изодецил или стеарил, более предпочтительно, линейный или разветвленный алкил, имеющий 1 до 6 атомов углерода, еще более предпочтительно, линейную или разветвленную алкильную группу, имеющую от 1 до 3 атомов углерода.

[0021]

В заместителях в приведенной выше формуле (I), хотя циклоалкил может представлять собой любой циклоалкил, он предпочтительно представляет собой циклоалкильную группу, имеющую от 3 до 8 атомов углерода, такую как циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, циклогептил и циклооктил, и, более предпочтительно, он представляет собой циклоалкильную группу, имеющую от 5 до 6 атомов углерода.

[0022]

В заместителях в приведенной выше формуле (I), хотя алкокси может быть любым алкокси, он предпочтительно представляет собой линейную или разветвленную алкоксигруппу, имеющую от 1 до 6 атомов углерода, такую как метокси, этокси, пропокси, изопропокси, бутокси, изобутокси, втор-бутокси, трет-бутокси, пентокси и гексокси и, более предпочтительно, линейную или разветвленную алкоксигруппу, имеющую от 1 до 3 атомов углерода.

[0023]

В заместителях в приведенной выше формуле (I), хотя галоген может представлять собой любой галоген, он предпочтительно представляет собой фтор, хлор, бром, йод или тому подобное.

[0024]

Общий способ получения и примеры получения настоящего соединения раскрыты в выложенном патенте Японии No. 61/122275 A, выложенном патенте Японии No. 62/145068 A, и т.д. Далее приведены примеры настоящего соединения. Когда каждое из соединений упоминается ниже, будет использоваться номер соединения.

[0025]

Гидантоин [Соединение 1]

1-Метилгидантоин [Соединение 2]

3-Метилгидантоин [Соединение 3]

1-Этилгидантоин [Соединение 4]

1-Пропилгидантоин [Соединение 5]

1-Бутилгидантоин [Соединение 6]

1-т-Бутилгидантоин [Соединение 7]

1-Гексилгидантоин [Соединение 8]

1-(1,3-Диметилбутил)гидантоин [Соединение 9]

1-Децилгидантоин [Соединение 10]

1-Стеарилгидантоин [Соединение 11]

1,3-Диметилгидантоин [Соединение 12]

1,5-Диметилгидантоин [Соединение 13]

3,5-Диметилгидантоин [Соединение 14]

1-Циклопентилгидантоин [Соединение 15]

1-Циклогексилгидантоин [Соединение 16]

1-Циклогексил3-метилгидантоин [Соединение 17]

3-Циклогексилгидантоин [Соединение 18]

1,3-Дициклогексилгидантоин [Соединение 19]

5-Гидроксигидантоин [Соединение 20]

[0026]

5-гидрокси-1-метилгидантоин [Соединение 21]

5-гидрокси-3-метилгидантоин [Соединение 22]

5-гидрокси-1-этилгидантоин [Соединение 23]

5-гидрокси-1-пропилгидантоин [Соединение 24]

5-гидрокси-1-бутилгидантоин [Соединение 25]

5-гидрокси-1-т-бутилгидантоин [Соединение 26]

5-гидрокси-1-гексилгидантоин [Соединение 27]

5-гидрокси-1-(1,3-диметилбутил)гидантоин [Соединение 28]

5-гидрокси-1-децилгидантоин [Соединение 29]

5-гидрокси-1-стеарилгидантоин [Соединение 30]

5-гидрокси-1-циклопентилгидантоин [Соединение 31]

5-гидрокси-1-циклогексилгидантоин [Соединение 32]

5-гидрокси-1-циклогексил-3-метилгидантоин [Соединение 33]

5-гидрокси-1,3-диметилгидантоин [Соединение 34]

5-гидрокси-1,5-диметилгидантоин [Соединение 35]

5-гидрокси-3,5-диметилгидантоин [Соединение 36]

5-гидрокси-1,3-дициклогексилгидантоин [Соединение 37]

5-Метоксигидантоин [Соединение 38]

5-Метокси-1-метилгидантоин [Соединение 39]

5-Метокси-3-метилгидантоин [Соединение 40]

[0027]

5-Метокси-1-этилгидантоин [Соединение 41]

5-Метокси-1-пропилгидантоин [Соединение 42]

5-Метокси-1-бутилгидантоин [Соединение 43]

5-Метокси-1-циклогексилгидантоин [Соединение 44]

5-Метокси-3-циклогексилгидантоин [Соединение 45]

5-Этоксигидантоин [Соединение 46]

5-Этокси-1-метилгидантоин [Соединение 47]

5-Этокси-3-метилгидантоин [Соединение 48]

5-Этокси-1-этилгидантоин [Соединение 49]

5-Этокси1-1-пропилгидантоин [Соединение 50]

5-Этокси-1-бутилгидантоин [Соединение 51]

5-Пропоксигидантоин [Соединение 52]

5-Пропокси-1-метилгидантоин [Соединение 53]

5-Пропокси-3-метилгидантоин [Соединение 54]

5-Пропокси-1-этилгидантоин [Соединение 55]

5-Пропокси-1-пропилгидантоин [Соединение 56]

5-Пропокси-1-бутилгидантоин [Соединение 57]

5-Бутоксигидантоин [Соединение 58]

5-Бутокси-1-метилгидантоин [Соединение 59]

5-Бутокси-3-метилгидантоин [Соединение 60]

[0028]

5-т-бутоксигидантоин [Соединение 61]

5-т-Бутокси-1-метилгидантоин [Соединение 62]

5-т-Бутокси-3-бутилгидантоин [Соединение 63]

5-гидрокси-1-бензилгидантоин [Соединение 64]

5-гидрокси-1-(2-фторбензил)гидантоин [Соединение 65]

5-гидрокси-1-(3-фторбензил)гидантоин [Соединение 66]

5-гидрокси-1-(4-фторбензил)гидантоин [Соединение 67]

5-гидрокси-1-(2-хлорбензил)гидантоин [Соединение 68]

5-гидрокси-1-(4-хлорбензил)гидантоин [Соединение 69]

5-гидрокси-1-(4-бромбензил)гидантоин [Соединение 70]

5-гидрокси-1-(3-нитробензил)гидантоин [Соединение 71]

5-гидрокси-1-(4-нитробензил)гидантоин [Соединение 72]

5-гидрокси-1-(2-метилбензил)гидантоин [Соединение 73]

5-гидрокси-1-(3-метилбензил)гидантоин [Соединение 74]

5-гидрокси-1-(4-метилбензил)гидантоин [Соединение 75]

5-гидрокси-1-(2-метоксибензил)гидантоин [Соединение 76]

5-гидрокси-1-(3-метоксибензил)гидантоин [Соединение 77]

5-гидрокси-1-(4-метоксибензил)гидантоин [Соединение 78]

5-гидрокси-1-(3,4-диметоксибензил)гидантоин [Соединение 79]

5-гидрокси-1-(3,4-дихлорбензил)гидантоин [Соединение 80]

[0029]

Настоящее соединение включает соль соединения, представленного приведенной выше формулой (I), и его примеры включают соль присоединения с кислотой, такой как хлороводородная кислота, серная кислота, азотная кислота, бромистоводородная кислота, фосфорная кислота, перхлорная кислота, тиоциановая кислота, борная кислота, муравьиная кислота, уксусная кислота, галогенуксусная кислота, пропионовая кислота, гликолевая кислота, лимонная кислота, винная кислота, янтарная кислота, глюконовая кислота, молочная кислота, малоновая кислота, фумаровая кислота, антраниловая кислота, бензойная кислота, коричная кислота, п-толуолсульфоновая кислота, нафталинсульфоновая кислота или сульфаниловая кислота; и соль со щелочным металлом, таким как натрий или калий, со щелочноземельным металлом, таким как кальций, магний или барий, и с металлом, таким как алюминий или цинк. Соли как таковые могут быть получены из свободного производного гидантоина известным способом или могут быть превращены друг в друга.

[0030]

Даже когда настоящее соединение присутствует в форме стереоизомера, такого как цис-транс-изомер, оптического изомера или конформационного изомера, или в состоянии гидрата или комплекса, настоящее изобретение охватывает любой из таких его стереоизомеров, гидратов и комплексных соединений. Например, в настоящем соединении 5-гидрокси-1-метилгидантоина, 5-положение гидантоинового кольца представляет собой асимметрический углерод, в результате чего присутствуют оптические изомеры, S-энантиомер и R-энантиомер. Настоящее изобретение охватывает S и R энантиомеры как таковые и их смеси. Кроме того, известно, что в настоящем соединении 5-гидрокси-1-метилгидантоин существуют кристаллические полиморфизмы его формы I и его формы II, и настоящее соединение охватывает различные кристаллические формы (полиморфизмы), которые могут быть образованы, включая вышеуказанные кристаллы.

[0031]

Настоящее соединение может быть получено в виде фармацевтического средства путем соответствующего объединения с подходящим носителем или разбавителем для фармацевтического применения. В дополнение к лекарственным препаратам для перорального приема, таким как таблетки, капсулы, порошки и жидкость, также можно, при желании, получать препараты для парентерального применения, такие как препараты для подкожного, внутривенного, внутримышечного, внутриректального и интраназального введения. Однако, как упомянуто выше, лекарственная форма предпочтительно является пероральным препаратом в случае введения/приема внутрь в качестве ингибитора канцерогенеза по настоящему изобретению.

В рецептурах настоящее соединение может быть использовано в виде его фармацевтически приемлемой соли или может быть использовано отдельно или совместно в подходящей комбинации. Он также может быть превращено в комбинированное лекарственное средство с другим фармацевтически активным ингредиентом.

[0032]

Что касается перорального препарата, его можно получить в виде таблеток, разбавляемого порошка, гранул или капсул, или как есть, или путем соответствующего сочетания с соответствующими добавками, такими как обычно используемый эксципиент (например, лактоза, маннит, кукурузный крахмал, картофельный крахмал или цитрат кальция) вместе с производным целлюлозы (например, кристаллическая целлюлоза или гидроксипропилцеллюлоза), связующим веществом (например, аравийская камедь, кукурузный крахмал или желатин), разрыхлителем (например, кукурузный крахмал, картофельный крахмал или карбоксиметилцеллюлоза кальция), смазывающим веществом (например, тальк или стеарат магния) и другими (например, наполнитель, увлажнитель, буфер, консервант или ароматизатор) в соответствующей комбинации.

[0033]

Что касается препарата для инъекций, можно приготовить раствор, суспензию или эмульсию водного растворителя (такого как дистиллированная вода для инъекций, физиологический солевой раствор или раствор глюкозы для инъекций) или неводного растворителя (такого как растительное масло, синтетический глицерид жирной кислоты, сложный эфир высшей жирной кислоты или пропиленгликоль). При необходимости также можно соответствующим образом добавить обычно используемую добавку, такую как растворяющий адъювант, изотонирующая добавка, суспендирующий агент, эмульгирующий агент, стабилизатор или консервант.

Кроме того, в зависимости от типа заболевания и пациента можно также получить другие лекарственные формы, подходящие для лечения, такие как сироп, суппозиторий, средство для ингаляционного введения, аэрозольный препарат, глазные капли и препарат для местного применения (например, мазь, гелеобразный препарат или клейкий кожный пластырь).

[0034]

Кроме того, возможно, что настоящее соединение используется в качестве здорового пищевого продукта или добавки либо путем использования настоящего соединения как такового, либо путем смешивания с другим ингредиентом. Что касается другого ингредиента, подлежащего смешиванию, то здесь нет особых ограничений, поскольку он не денатурирует при смешивании, и его примеры включают пищу и напитки. Не существует особых ограничений для пищевых продуктов и напитков, и их примеры включают шоколад, жевательную резинку, йогурт, освежающий напиток, кофе, чай, алкогольный напиток, печенье, хлеб и желе.

[0035]

При изготовлении продуктов питания и напитков при необходимости могут быть добавлены различные вещества. Его примеры включают сахарид, такой как сахароза, фруктоза или глюкоза; сахарный спирт, такой как ксилит или эритрит; антиоксидант, такой как аминокислота, лимонная кислота, молочная кислота, яблочная кислота, флавоноид или катехин. В дополнение к этому, любое другое вещество, которое использовалось в обычном производстве пищевых продуктов, такое как желатин, витамины, краситель, отдушка, препарат кальция, сложный эфир глицерина и жирных кислот или пектин, может быть подходящим образом использовано.

[0036]

Ингибитор канцерогенеза по настоящему изобретению является полезным не только для профилактики людей, у которых рак еще не возник, но также для предотвращения рецидивов после терапии рака и для предотвращения метастазирования у людей во время терапии рака. Примеры субъекта для введения ингибитора канцерогенеза по настоящему изобретению включают группы высокого риска с высокой вероятностью возникновения рака, такие как курильщики, лица с высокой вероятностью генетического или профессионального заболевания раком, лица, имеющие предраковое поражение, такие как колоректальный полип, и лица после окончания терапии рака.

[0037]

Что касается диапазона применения ингибиторов канцерогенеза по настоящему изобретению, в качестве примеров можно привести различные типы злокачественных и доброкачественных опухолей, таких как меланома, лимфома, рак желудочно-кишечного тракта, рак легких, рак пищевода, рак желудка, колоректальный рак (рак прямой кишки и рак толстой кишки), опухоль мочеточника, рак желчного пузыря, рак желчных протоков, рак молочной железы, рак печени, рак поджелудочной железы, рак яичка, верхнечелюстной рак (верхней челюсти), рак языка, рак губы, рак ротовой полости, рак горла, рак яичника, рак матки, рак предстательной железы, рак щитовидной железы, опухоль головного мозга, саркома Капоши, ангиома, лейкоз, истинная полицитемия, нейробластома, ретинобластома, миелома, опухоль мочевого пузыря, саркома, остеосаркома, рак кожи, базально-клеточный рак, рак придатков кожи, кожный метастатический рак и меланома кожи. Ингибитор канцерогенеза по настоящему изобретению особенно полезен для ингибирования колоректального рака (рака прямой кишки и рака толстой кишки). Кроме того, ингибитор канцерогенеза по настоящему изобретению является полезным для профилактики не только злокачественной опухоли, но и доброкачественной опухоли.

[0038]

Ингибитор канцерогенеза по настоящему изобретению является полезным не только для людей, но также и для других животных или, в частности, для любого из млекопитающих (таких как мышь, крыса, свинья, лиса, кошка, кролик, собака, крупный рогатый скот, лошадь, коза и обезьяна), которые, как известно, имеют рак, и его также можно вводить этим животным или он может проглочен этим животным в качестве лекарственного средства или пищи.

[0039]

Желаемая доза настоящего соединения может варьироваться в зависимости от субъекта, получающего введение, лекарственной формы, способа введения, периода введения и т.п., и для достижения целевого эффекта обычно в случае человека вводят перорально взрослому человеку 1-10000 мг/день, предпочтительно 50-5000 мг/день и, более предпочтительно, 100-3000 мг/день в пересчете на количество активного ингредиента. В случае парентерального введения (такого как инъекционный препарат), эффект можно ожидать обычно в меньшей дозе, чем в случае перорального введения. Следовательно, при пероральном введении, вероятно, будет достаточно дозы от 3/1 до 1/10 вышеуказанной дозы.

[Примеры]

[0040]

Настоящее изобретение теперь будет более конкретно проиллюстрировано посредством следующих примеров, хотя настоящее изобретение никогда не должно быть ограничено ими.

[0041]

Экспериментальный пример 1: Оценка образования полипа в кишечнике

(1) Группирование экспериментальных животных и введение тестируемого вещества

В качестве экспериментального животного использовали мышь C57BL/6-ApcMin/+ (Min мышь), которая представляла собой модель семейного аденоматозного полипоза. Мышь Min является мышью-мутантом Apc (аденоматозный полипоз толстой кишки), и со временем у нее отмечается увеличение числа полипов. Также было известно, что у мыши Min возникает дислипидемия в состоянии сильного окислительного стресса. 5-недельных самцов мышей Min разводили и акклиматизировали в пластиковой клетке (235 × 325 × 170 H мм) (максимум шесть мышей в клетке) в лаборатории, где температура, влажность и цикл света/темноты были установлены на 24±2°С, 55% и 12 часов, соответственно. В то же время они имели свободный доступ к фильтрованной воде и основному корму (AIN-76A, CLEA Japan Inc.).

[0042]

Экспериментальных животных случайным образом разделяли на контрольную группу, группу, которой вводили 500 ч./млн. тестируемого вещества, и группу, которой вводили 1000 ч./млн. тестируемого вещества. В каждой группе 10 мышей в группе были организованы таким образом, что средняя масса тела в группе стала одинаковой. Контрольной группе давали только основной корм, а каждой группе, получавшей тестируемое вещество с концентрацией 500 ч./млн., и группе, получавшей тестируемое вещество с концентрацией 1000 ч./млн., давали смешанный корм с тестируемым веществом (соединение 21) в концентрациях 500 и 1000 ч./млн., соответственно, в течение восемь недель. В течение периода введения не было отмечено существенных различий в корме и массе тела между группами, и ежедневное количество тестируемого вещества в группе, которая получала 500 ч./млн. и 1000 ч./млн. тестируемого вещества, было рассчитано как 1,5 мг и 3 мг, соответственно.

[0043]

(2) Измерение количества полипов в кишечнике

Мышей в каждой группе умерщвляли под наркозом в возрасте 13 недель, и после лапаротомии кишечный тракт вырезали и фиксировали формалином. Тонкую кишку разделяли на проксимальный сегмент (сегмент длиной около 4 см от пилоруса), средний сегмент и дистальный сегмент, затем подсчитывали количество полипов в четырех сегментах, включая толстую кишку, под стереомикроскопом и вычисляли среднее значение в каждой группе. Примеры результатов приведены в Таблице 1.

В то же время слизистую оболочку полипной части и части, где полип не был сформирован (далее она будет называться “неполипная часть”) в проксимальной части тонкой кишки иссекали и выскабливали после анатомии и хранили путем замораживания при -80°C до использования в экспериментальных примерах 2 и 3.

[0044]

[Таблица 1]

Количество полипов в кишечнике
Тонкая кишка толстая кишка Всего
проксимальный сегмент средний сегмент дистальный отдел
Контрольная группа (n=9) 5,78 11,67 29,33 0,67 47,44
Группа, получавшая 500 ч./млн. тестируемого вещества
(n=9)
3,89 7,33 27,00 1,00 39,22
Группа, получавшая 1000 ч./млн. тестируемого вещества
(n=8)
5,13 8,25 25,63 0,38 39,38

[0045]

Как показано в Таблице 1, общее количество полипов уменьшилось примерно на 17% в обеих группах, которые получали 500 ч./млн. и 1000 ч./млн. тестируемых веществ, и количество полипов в среднем сегменте тонкой кишки уменьшилось примерно на 37% и 29% в каждой группе по сравнению с контрольной группой. Таким образом, настоящее соединение продемонстрировало превосходное ингибирующее действие на образование полипов.

[0046]

Экспериментальный пример 2: Оценка способности клеток к пролиферации в полипной части слизистой оболочки кишечника

Фиксированные формалином срезы, заключенные в парафин, полученный из полипной части слизистой оболочки тонкой кишки мыши контрольной группы и группы, которая получала 1000 ч./млн. тестируемого вещества, вырезанные в экспериментальном примере 1, погружали в ксилол на пять минут × три раза с целью депарафинизации и погружали в 99,5% спирт на пять минут × три раза для повышения гидрофильности с последующим погружением в дистиллированную воду на 10 минут. После этого срезы погружали в раствор метанола, содержащий 0,3% пероксида водорода, для проведения дезактивации эндогенной пероксидазы. Кроме того, 1 мл 0,3% раствора Triton [зарегистрированная торговая марка] X-100, содержащего 2% лошадиной сыворотки (физиологический раствор с фосфатным буфером (PBS), содержащий 0,3% Triton), с последующим блокированием в течение 30 минут.

[0047]

К срезам добавляли мышиное антитело к ядерному антигену пролиферирующих клеток (PCNA) (Calbiochem [зарегистрированная торговая марка]), разведенное в 100 раз, и первичный гуморальный ответ проводили в течение ночи при 4°C. После промывания PBS в течение 5 минут × три раза, осуществляли ответ меченого вторичного антитела, используя биотинилированное антитело против мышиного IgG (H+L) (Vector Laboratories) в качестве вторичного антитела, и после этого проводили промывание PBS в течение 5 минут × три раза. Окрашивание осуществляли с использованием раствора 3,3'-диаминобензидина (DAB) и перекиси водорода. Кстати, контрастное окрашивание (ядерное окрашивание) проводили с использованием гематоксилина. После окрашивания ядер реакцию прекращали, промывая дистиллированной водой, и после обработки 100% этанолом в течение 5 минут - три раза обработку ксилолом проводили три раза для герметизации. После ядерного окрашивания, реакцию прекращали, промывая дистиллированной водой, и после обработки 100% этанолом в течение 5 минут × три раза обработку ксилолом проводили три раза для герметизации. Положительные ответы срезов контрольной группы и группы, которая получала 1000 ч./млн. тестируемого вещества, сравнивали и наблюдали под оптическим микроскопом. Также рассчитывали отношение количества PCNA антитело-положительных клеток к общему количеству клеток в поле зрения микроскопа в каждой группе. Примеры результатов приведены на фиг. 1 и в таблице 2.

[0048]

[Таблица 2]

Отношение количества PCNA антитело-положительных клеток
к общему количеству клеток (%)
Контрольная группа (n=20) 71,26
Группа, получавшая 1000 ч./млн. тестируемого вещества (n=14) 58,40

[0049]

PCNA представляет собой белок, связанный с пролиферацией клеток, экспрессируемый с последней стадии фазы G1 (Gap1: подготовительная фаза для синтеза ДНК) до фазы S (синтез: фаза синтеза ДНК) клеточного цикла, и является так называемым маркером пролиферации клеток. Считается, что чем выше экспрессия маркера пролиферации клеток, тем больше способность к пролиферации и тем выше уровень злокачественности. Когда были измерены количества PCNA антитело-положительных клеток полипной части слизистой оболочки тонкой кишки мыши, вырезанных у мышей контрольной группы и группы, которая получала 1000 ч./млн. тестируемого вещества, в экспериментальном примере 1, результат был таким, как показано на фиг. 1 и в таблице 2, PCNA антитело-положительные клетки, окрашенные в коричневый цвет (темно-серый цвет на фиг. 1), уменьшились в группе, получавшей 1000 ч./млн. тестируемого вещества, по сравнению с контрольной группой. К тому же, клетки светло-фиолетового цвета (светло-серый цвет на фиг. 1) представляют собой окрашенные ядерным клетки. Ввиду вышеизложенного было отмечено, что настоящее соединение проявляет ингибирующий пролиферацию эффект в отношении клеток, у которых повышается способность к пролиферации.

[0050]

Экспериментальный пример 3: Оценка уровня экспрессии фактора, связанного с пролиферацией клеток, в слизистой оболочке кишечника и полипной части

(1) выделение мРНК из части кишечного полипа и неполипной части и синтез кДНК

TRIsol (Invitrogen) (500 мкл) добавляли к полипной части и неполипной части слизистой оболочки тонкой кишки мыши контрольной группы и группы, получающей 1000 ч./млн. тестируемого вещества, выскобленной в экспериментальном примере 1. После добавления 100 мкл хлороформа и смешивания с ним, смесь центрифугировали (12000 об/мин в течение 2 минут) и из нее извлекали надосадочную жидкость. К выделенной надосадочной жидкости добавляли 250 мкл этанола и из нее экстрагировали РНК и очищали с помощью колонки (QIAGEN).

После обработки ДНКазой (Invitrogen), кДНК получали из 1 мкг общей РНК с использованием наборов High-Capacity cDNA Reverse Transcription (Applied Biosystems).

В частности, реакционный раствор для ПЦР получали так, чтобы общее количество составляло 20 мкл с использованием кДНК и SYBR Green Realtime PCR Master Mix (Toyobo).

[0051]

(2) Оценка уровня экспрессии факторов, связанных с пролиферацией

Уровень экспрессии мРНК факторов, связанных с пролиферацией клеток [c-Myc, CDK4 и циклин D1], измеряли методом ПЦР в реальном времени, используя кДНК, синтезируемой из общей РНК, экстрагированной в вышеуказанном (1). Что касается полипной части, измеряли уровень экспрессии мРНК только c-Myc.

Что касается ПЦР-праймеров для каждого из факторов, связанных с пролиферацией клеток, были использованы c-Myc [прямой: GCCCGCGCCCAGACAGGATA (SEQ ID NO:1), обратный: GCGGCGGCGGAGAGGA (SEQ ID NO:2)], CDK4 [прямой: ATGGCTGCCACTCGATATGAA (SEQ ID NO:3), обратный: TGCTCCTCCATTAGGAACTCTC (SEQ ID NO:4)] и циклин D1 [прямой: TGACTGCCGAGAAGTTGTGC (SEQ ID NO:5), обратный: CTCATCCGCCTCTGGCATT (SEQ ID NO:6)]. В данном случае, в качестве устройства для ПЦР в реальном времени использовали систему MJ Research DNA Engine OPTICON 2 (MJ Research). Реакцию ПЦР проводили таким образом, что после нагревания при 94°С в течение 15 минут для линеаризации кДНК проводили стадии реакции тепловой денатурации (при 94°С в течение 20 секунд), отжига (при 60°С в течение 30 секунд) и элонгации (при 72°С в течение 30 секунд) в общей сложности в течение 39 циклов. Каждое из полученных измеренных значений делили на измеренное значение гена глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы (GAPDH), который являлся внутренним стандартом, после чего рассчитывали относительные значения. После этого относительное значение группы, получавшей 1000 ч./млн. тестируемого вещества, делили на относительное значение контрольной группы, после чего рассчитывали отношение количества экспрессии генов группы, получавшей 1000 ч./млн. тестируемого вещества, к контрольной группе (n=3 в каждой группе). Примеры результатов приведены в таблице 3 и таблице 4.

[0052]

[Таблица 3]

Отношение количества экспрессии фактора, связанного с пролиферацией клеток
Контрольная группа Группа, получавшая 1000 ч./млн. тестируемого вещества (неполипная часть)
c-Myc 1,00 0,25
CDK4 1,00 0,47
циклин D1 1,00 0,27

[0053]

[Таблица 4]

Отношение количества экспрессии фактора, связанного с пролиферацией клеток
Контрольная группа Группа, получавшая 1000 ч./млн. тестируемого вещества (полипная часть)
c-Myc 1,00 0,39

[0054]

Как показано в Таблице 3 и Таблице 4, настоящее соединение ингибировало экспрессию фактора, связанного с пролиферацией клеток, в любой полипной части и неполипной части в тонкой кишке мышей Min. На основании изложенного, было подтверждено, что настоящее соединение ингибирует экспрессию фактора, связанного с пролиферацией клеток, и что, в результате, оно ингибирует пролиферацию клетки в процессе канцерогенеза.

[0055]

Экспериментальный пример 4: Оценка безопасности настоящего соединения

(1) Методика анализа

В качестве субъект исследования использовали восемь здоровых взрослых мужчин (возраст от 21 до 24 лет) (состоящих из шести пациентов, которым вводили тестируемое вещество, и двух пациентов, которым вводили плацебо), и настоящее соединение перорально вводили неоднократно для оценки безопасности. Тестируемое вещество (соединение 21) вводили перорально в однократной дозе 400 мг таким образом, чтобы в первый и седьмой день введения один раз в день утром натощак и во второй шестые дни приема, трижды в день натощак (в 09:00, 14:00 и 19:00) вместе со 150 мл воды (всего 17 введений).

(2) Результаты

В любом из случаев не было клинического симптома, предположительно связанного с настоящим соединением, и также не было никаких аномальных изменений, предположительно связанных с настоящим соединением, даже в отношении артериального давления, частоты пульса, температуры тела, гематологического теста, биохимического анализа крови и анализа мочи.

[Промышленная применимость]

[0056]

В фармакологических тестах ингибитор канцерогенеза по настоящему изобретению показал превосходное ингибирующее действие на образование полипов и на экспрессию фактора, связанного с пролиферацией клеток. Кроме того, ингибитор канцерогенеза по настоящему изобретению демонстрирует очень высокую безопасность и достигает эффекта при пероральном введении, благодаря чему его полезность очень высока, поскольку химиопрофилактическое средство можно использовать в качестве фармацевтических препаратов, пищевых продуктов и т.п. для людей и других животных, подверженных риску возникновения, рецидива и метастазирования рака.

--->

Список последовательностей

<110> НЭШНЛ КЭНСЕР СЕНТЕР (National Cancer Center)

НИППОН ДЗОКИ ФАРМАСЬЮТИКАЛ КО., ЛТД. (Nippon Zoki Pharmaceutical

Co., Ltd.)

<120> Ингибитор канцерогенеза

<130> PC-494

<160> 6

<210> 1

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Праймер

<220>

<223> Изобретатель: МУТОХ, Митихиро (MUTOH, Michihiro); КУРОКАВА, Юрие

(KUROKAWA, Yurie); ФУДЗИИ, Ген (FUJII, Gen); МИЯМОТО, Синго

(MIYAMOTO, Shingo)

<400> 1

GCCCGCGCCC AGACAGGATA 20

<210> 2

<211> 16

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Праймер

<400> 2

GCGGCGGCGG AGAGGA 16

<210> 3

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Праймер

<400> 3

ATGGCTGCCA CTCGATATGA A 21

<210> 4

<211> 22

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Праймер

<400> 4

TGCTCCTCCA TTAGGAACTC TC 22

<210> 5

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Праймер

<400> 5

TGACTGCCGA GAAGTTGTGC 20

<210> 6

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Праймер

<400> 6

CTCATCCGCC TCTGGCATT 19

<---

1. Применение по меньшей мере одного члена, выбранного из группы, состоящей из

5-гидрокси-1-метилгидантоина и его фармацевтически приемлемой соли в качестве ингибитора канцерогенеза, где ингибирование канцерогенеза обусловлено ингибированием образования полипов.

2. Применение по п.1, где ингибирование канцерогенеза обусловлено регуляцией экспрессии факторов, связанных с пролиферацией клеток.

3. Применение по п.2, где ингибирование канцерогенеза обусловлено ингибированием экспрессии c-Myc, CDK4 или циклина D1.

4. Применение по любому из пп.1-3, где ингибитор канцерогенеза представляет собой фармацевтическую композицию.

5. Применение по п.4, где фармацевтическая композиция представляет собой лекарственный препарат для перорального приема.

6. Применение по любому из пп.1-3, где ингибитор канцерогенеза представляет собой пищевую композицию.

7. Применение по п.6, где пищевая композиция представляет собой здоровую пищу или добавку.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к полипептиду для генетического редактирования генома клетки, содержащему вариант хоуминг-эндонуклеазы (НЕ) I-OnuI, а также к полинуклеотиду, иРНК и кДНК, его кодирующим. Также раскрыты вектор и клетка, содержащие вышеуказанный полипептид или полинуклеотид.

Изобретение относится к области органической химии, а именно к гетероциклическим соединениям формулы (III), (IIIb), (II), (I), (VI), где значения радикалов R21, R22, R24, R25, L, Ar, L3, n, m, R3 имеют значения, указанные в формуле изобретения. Также изобретение относится к фармацевтической композиции на основе указанных соединений.

Изобретение относится к соединениям, которые представляют собой ингибиторы киназ ERK1/2 и подходят для лечения ERK1/2-опосредуемых патологических состояний. Соответственно, описанные соединения можно применять в терапии, в частности для лечения рака.

Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к антигенсвязывающей молекуле, которая связывает HLA-DR, а также к композиции, содержащей в качестве фармацевтически эффективного ингредиента Т-клетки, ее содержащие. Изобретение эффективно для лечения рака.

Группа изобретений относится к области медицины, а именно к комбинации, предназначенной для применения в лечении рака ободочной и прямой кишки или рака желудочно-кишечного тракта, содержащей: лекарственное средство трифлуридин-типирацил гидрохлорид (FTD-TPI), противоопухолевый платиновый комплекс, который представляет собой оксалиплатин, и модулятор контрольных точек иммунного ответа, который представляет собой ниволумаб, также относится к лекарственному средству, предназначенному для применения в лечении рака ободочной и прямой кишки или рака желудочно-кишечного тракта, содержащему, отдельно или вместе: лекарственное средство FTD-TPI, противоопухолевый платиновый комплекс, который представляет собой оксалиплатин, и модулятор контрольных точек иммунного ответа, который представляет собой ниволумаб, предназначенное для одновременного или последовательного применения, где каждый компонент предоставляют в эффективных количествах для лечения рака.

Группа изобретений относится к области фармакологии и медицины и направлена на лечение рака мочевого пузыря. Раскрыто применение соединения ABX196, имеющего формулу (I), или одной из его фармацевтически приемлемых солей в способе лечения рака мочевого пузыря, причем указанный способ не включает введение дополнительного химиотерапевтического средства и/или иммунотерапевтического агента и/или антигена.

Группа изобретений относится к биотехнологии. Представлены: антитело, содержащее первый антигенсвязывающий домен, который специфически связывается с PD1, и второй антигенсвязывающий домен, который специфически связывается с LAG3, полинуклеотид, кодирующий биспецифическое антитело, фармацевтические композиции для лечения рака и хронической вирусной инфекции, а также относится к способам получения этих молекул и их применению.

Изобретение относится к области биотехнологии. Описана группа изобретений, включающая способ скрининга, слитый белок для связывания с молекулой-мишенью (варианты), связывающий элемент для связывания с молекулой мишенью, способ получения библиотеки связывающих элементов, библиотеку связывающих элементов и способ получения связывающего элемента.

Группа изобретений относится к биотехнологии. В настоящем изобретении представлены: фармацевтические композиции, содержащие антитело к CD40 или его антигенсвязывающий фрагмент, и их применение, лиофилизированный препарат для лечения заболеваний и способ его получения, а также набор для лечения заболеваний или симптомов, связанных с CD40.

Изобретение относится к производному пиридопиримидина, представленному общей формулой (I), где значения R1-R4, G1-G3, L1 определены в формуле изобретения, способу его получения, фармацевтической композиции, содержащей указанное производное, и его применению в качестве агониста толл-подобного рецептора 8 (TLR8).

Группа изобретений относится к области фармацевтики и может быть использована для лечения заболеваний, зависящих от андрогенного сигнального пути, включая рак предстательной железы и рак молочной железы. Предложен состав ингибитора андрогеновых рецепторов HC-1119, полученный из ингредиентов со следующим массовым отношением: 1-100 частей ингибитора андрогеновых рецепторов HC-1119, 100-1000 частей растворителя и 0,11-11 частей антиоксиданта, где растворитель представляет собой комбинацию одного или более из лабразола, полиэтиленгликоля, глицерида полиэтиленгликоля и каприлового/капринового глицерида, а антиоксидант представляет собой комбинацию одного или более из бутилгидроксианизола и бутилгидрокситолуола.
Наверх