Штамм "bartha щбк-61" вируса болезни ауески для изготовления диагностических и вакцинных препаратов и способ получения вакцины против болезни ауески животных (варианты)



Владельцы патента RU 2779551:

Федеральное казенное предприятие "Щелковский биокомбинат" (RU)

Изобретение относится к области биотехнологии и касается производства профилактических и диагностических препаратов, используемых в научно-исследовательских институтах и предприятиях биологической промышленности при конструировании биопрепаратов, в частности вакцин против болезни Ауески животных. Для повышения качества целевого продукта за счет увеличения его иммуногенности при длительном его хранении получен штамм «Bartha ЩБК-61» вируса болезни Ауески для изготовления диагностических и вакцинных препаратов, относящийся к семейству Herpesviridae, подсемейству Alphaherpesvirinae, роду Varicellavirus, депонированного 24.02.2017 в Государственной коллекции вирусов Института вирусологии Федерального государственного бюджетного учреждения «Федеральный научно-исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Гамалеи» под №2882, для изготовления диагностических и вакцинных препаратов. В способе получения вакцины против болезни Ауески животных, включающем получение вируссодержащего материала из штамма вируса болезни Ауески, выращенного в перевиваемой культуре клеток суспензионным способом, инактивацией его и смешивание с масляным адъювантом, в качестве вируссодержащего материала вакцина содержит вируссодержащий материал из делеционного по гликопротеину gE штамма вируса болезни Ауески с инфекционной активностью 8,0-10,0 lg ТЦД50/см3, который перед смешиванием с адъювантом инактивируют добавлением 4-5% раствора аминоэтилэтиленимина до конечной концентрации 0,001-0,005% при рН 7,6-7,8 и температуре 35-39°С в течение 20-22 часов с периодическим перемешиванием, при определенном соотношении компонентов. Также в способе получения вакцины против болезни Ауески животных, включающем получение вируссодержащего материала из штамма вируса болезни Ауески, выращенного в перевиваемой культуре клеток суспензионным способом, инактивацией его и смешивание с масляным адъювантом, в качестве вируссодержащего материала вакцина содержит вируссодержащий материал из делеционного по гликопротеину gE штамма вируса болезни Ауески с инфекционной активностью 8,0-10,0 lg ТЦИД50/см3, который перед смешиванием с адъювантом инактивируют добавлением 4-5% раствора аминоэтилэтиленимина до конечной концентрации 0,001-0,005% при рН 7,6-7,8 и температуре 35-39°С в течение 20-22 часов с периодическим перемешиванием, дополнительно содержит стабилизатор хитозан при определенном соотношении компонентов. Также в способе получения вакцины против болезни Ауески животных в качестве масляного адъюванта используют масляный адъювант ISA 201 VG или ISA 206 VG. Также в способе получения вакцины против болезни Ауески животных в качестве перевиваемой культуры клеток используют перевиваемую культуру клеток ВНК-21/13, или перевиваемую культуру клеток ВНК-21/13-13, или первичную культуру клеток почки поросенка СП. 3 н. и 2 з.п. ф-лы, 1 табл., 13 пр.

 

Изобретение относится к области ветеринарии, ветеринарной биотехнологии для производства профилактических препаратов, используемых в научно-исследовательских институтах и предприятиях биологической промышленности при конструировании биопрепаратов, в частности вакцин против болезни Ауески.

Известен способ получения вакцины против болезни Ауески животных, включающий получение вируссодержащего материала из штамма вируса, выращенного в перевиваемой культуре клеток, и защитную среду [Патент РФ №2138289, Вирусвакцина против болезни Ауески, МПК А61К 39/245, А61К 39/12, опубликовано: 27.09.1999].

Недостаток этой вакцины заключается в недостаточной иммуногенности известной вакцины.

Известен штамм болезни Ауески и способ получения вакцины против болезни Ауески животных, включающем получение вируссодержащего материала из штамма вируса болезни Ауески, выращенного в перевиваемой культуре клеток суспензионным способом, инактивацией его и смешивание с масляным адъювантом [Патент РФ №1822345, Способ изготовления инактивированной концентрированной эмульгированной вакцины против болезни Ауески (вакцина "бак"), МПК А61К 39/295, опубликовано: 15.06.1993, Бюл. №22].

Однако известная вакцина не достаточно иммуногенна при более длительном сроке ее хранения.

Техническим решением предлагаемого изобретения является повышение иммуногенности целевого продукта при длительном хранении целевого продукта.

Предложена группа изобретений, объединенная единым изобретательским замыслом с достижением единого технического результата.

Поставленная задача достигается получением штамма «Bartha ЩБК-61» вируса болезни Ауэски для изготовления диагностических и вакцинных препаратов, относящийся к семейству Herpesviridae, подсемейству Alphaherpesvirinae, роду Varicellavirus, депонированного 24.02.2017 в Государственной коллекции вирусов Института вирусологии Федерального государственного бюджетного учреждения «Федеральный научно-исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Гамалеи» под №2882, для изготовления диагностических и вакцинных препаратов (см. приложение - удостоверение)

Поставленная задача решается также в способе получения вакцины против болезни Ауески животных, включающем получение вируссодержащего материала из штамма вируса болезни Ауески, выращенного в перевиваемой культуре клеток суспензионным способом, инактивацией его и смешивание с масляным адъювантом, тем, что в качестве вируссодержащего материала вакцина содержит вируссодержащий материал из делеционного по гликопротеину gE штамма вируса болезни Ауески с инфекционной активностью 8,0-10,0 lg ТЦД50/см3, который перед смешиванием с адъювантом инактивируют добавлением 4-5% раствора аминоэтилэтиленимина до конечной концентрации 0,001-0,005% при рН 7,6-7,8 и температуре 35-39°С в течение 20-22 часов с периодическим перемешиванием, при следующем соотношении компонентов, мас. %:

Инактивированный вируссодержащий материал и
делеционного по гликопротеину gE штамма вируса болезни
Ауески с инфекционной активностью 8,0-10,0 lg ТЦД50/см3 48,00 - 52,0
Масляный адъювант остальное

Поставленная задача также решается в способе получения вакцины против болезни Ауески животных, включающем получение вируссодержащего материала из штамма вируса болезни Ауески, выращенного в перевиваемой культуре клеток суспензионным способом, инактивацией его и смешивание с масляным адъювантом, тем, что в качестве вируссодержащего материала вакцина содержит вируссодержащий материал из делеционного по гликопротеину gE штамма вируса болезни Ауески с инфекционной активностью 8,0-10,0 lg ТЦИД50/см3, который перед смешиванием с адъювантом инактивируют добавлением 4-5% раствора аминоэтилэтиленимина до конечной концентрации 0,001-0,005% при рН 7,6-7,8 и температуре 35-39°С в течение 20-22 часов с периодическим перемешиванием, дополнительно содержит стабилизатор хитозан, при следующем соотношении компонентов, мас. %:

Хитозан 5,0 -10,0

Смесь инактивированного вируссодержащего материала из
делеционного по гликопротеину gE штамма вируса
болезни Ауески с инфекционной активностью 8,0-10,0 lg
ТЦД50/см3 и масляного адъюванта, взятых в соотношении
1:0,8-1,2, соответственно остальное.

Поставленная задача также решается в способе получения вакцины против болезни Ауески животных тем, что в качестве масляного адъюванта используют масляный адъювант ISA 201 VG, или ISA 206 VG.

Поставленная задача также решается в способе получения вакцины против болезни Ауески животных тем, что в качестве перевиваемой культуры клеток используют перевиваемую культуру клеток ВНК-21/13, или перевиваемую культуру клеток ВНК-21/13-13 или первичную культуру клеток почки поросенка СП.

Известен делеционный по гликопротеину gE штамм вируса болезни Ауески, сем. Herpesviridae, подсем, Alphaherpesvirus, рода Varicellavirus, [Патент РФ №2242247, Вирусвакцина против болезни ауески, МПК А61К 39/245, C12N 7/00; А61Р 31/12, опубликовано: 20.12.2004, Бюл. №35].

Штамм «Bartha ЩБК-61» вируса болезни Ауэски - ДНК-содержащий вирус, относящимся к семейству Herpesviridae, подсемейству Alphaherpesvirinae, роду Varicellavirus.

Родословная штамма: ФКП «Щелковский биокомбинат», прототип штамма «Скиф», получен из музея штаммов Федерального государственного бюджетного научного учреждения Всероссийского государственного Центра качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов (ФГБНУ «ВГНКИ»). Депонирован штамм 24.02.2017 в Государственной коллекции вирусов Института вирусологии Федерального государственного бюджетного учреждения «Федеральный научно-исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Гамалеи» под №2882, для изготовления диагностических и вакцинных препаратов.

Новый штамм «Bartha ЩБК-61» вируса болезни Ауэски характеризуется следующими признаками и свойствами.

Морфологические свойства. Вирион штамм «Bartha ЩБК-61» вируса болезни Ауэски содержит 2-спиральную линейную ДНК. Вирионы имеют форму икосаэдра с кубическим типом симметрии, включающим 162 капсомера. Имеется внешняя оболочка, диаметр колеблется от 120 до 150 нм.

Восприимчивые животные: кошки, кролики, овцы.

Вирулентность: Авирулентен для естественно восприимчивых животных при контактном, аэрозольном и парентеральном способах введения.

Способность вируса к распространению в естественных условиях: не распространяется.

Антигенные свойства: Активен в РН, РНГА, РДП, не агглютинирует эритроциты домашних животных, птиц и человека.

Иммуногенность: Иммуногенен в составе вакцины для поросят, свиней, крупного и мелкого рогатого скота, северных оленей, лошадей, собак, пушных зверей.

Стабильность генетических свойств: Имеет делецию гена, кодирующего гликопротеин gE.

Известен аминоэтилэтиленимин (АЭЭИ) [Патент РФ №2214276, Инактивированная эмульсионная вакцина против парвовирусной инфекции свиней, МПК А61К39/23, C12N7/00, опубликовано: 20.10.2003 Бюл. №29].

Известен также масляный адъювант ISA 201 VG и ISA 206 VG («The comparison of the efficacy of swine FMD vaccine emulsified with oil adjuvant of ISA 201 VG or ISA 206 VG", Journal of Biosciences and Medicines 01(03):22-25-January 2013 with 203 Rea).

Известна перевиваемая культура клеток ВНК-21/13 [Патент РФ №2614074, ВНК-21/13-02-перевиваемая монослойно-суспензионная сублиния клеток почки новорожденного сирийского хомячка, предназначенная для репродукции вируса ящура и вируса бешенства, МПК C12N 5/07, опубликовано: 22.03.2017, Бюл. №9].

Известна перевиваемая культура клеток ВНК-21/13-13 [Крюкова Е.Н. Параметры суспензионного культивирования культуры клеток внк-21/13-13 в масштабах биотехнологического производства / Крюкова Е.Н., Самуйленко А.Я., Мельник Р.Н. Ельников В.В., Красуткин С.Н., Литенкова И.Ю. Боровой В.Н. Мельник Н.В. Дресвянникова С.Г. // Ветеринария Кубани, - Краснодар, 2016 год, №3, с. 6-8].

Известна первичная культура клеток почки поросенка СП [Патент РФ №2646135, Способ хранения почки поросенка для получения монослоя первичнотрипсинизированных клеток и использования его в вирусологических исследованиях, МПК A01N 1/02, C12N 5/00, опубликовано: 01.03.2018, Бюл. №7]

В патентной и научно-технической литературе неизвестны технические решения аналогичные заявляемому, т.е. предложение соответствует критерию изобретения «новизна».

Заявленная композиция решает актуальную проблему ветеринарии -профилактики болезни Ауески, т.е. предложение «промышленно применимо».

В отечественной литературе не известно, что применение делеционного по гликопротеину gE штамма вируса болезни Ауески для получения вакцины и сочетанное использование выше указанных отличительных признаков, взятых в определенных соотношениях компонентов, увеличивает сроки хранения целевого продукта с сохранением его иммуногенности против болезни Ауески, что приводит к достижению технического результата. Следовательно, изобретение соответствует критерию «изобретательский уровень».

Изобретение иллюстрируется на следующих примерах:

Пример 1. Вируссодержащий материал готовят известным способом [Патент РФ №2242247, Маркированная вирусвакцина против болезни ауески, МПК А61К 39/245, C12N 7/00, опубликовано: 20.12.2004, Бюл. №35] путем размножения на 2-3-суточной перевиваемой культуре клеток ВНК-21/13, которую заражают лиофилизированным вирусом болезни Ауески из делеционного по гликопротеину gE штамма «Bartha ЩБК-61». Сбор вируса производят через 46-52 часа, когда вирус болезни Ауески накапливается с инфекционной активностью 8,0 lg ТЦД50/см3. Далее вируссодержащий материал перед смешиванием с адъювантом инактивируют добавлением 4% раствора аминоэтилэтиленимина до конечной концентрации 0,001% при рН 7,6 и температуре 35°С в течение 20 часов с периодическим перемешиванием. Затем к 48 кг инактивированного вируссодержащего материала из делеционного по гликопротеину gE штамма вируса болезни Ауески с инфекционной активностью 8,0 lg ТЦД50/см3 добавляют 52 кг масляного адъюванта ISA 201 VG, получая вакцину 1 при следующем соотношении компонентов, мас. %:

Инактивированный вируссодержащий материал из
делеционного по гликопротеину gE штамма вируса болезни
Ауески с инфекционной активностью 8,0 lg ТЦД50/см3 48,00-52,0
Масляный адъювант остальное

Пример 2. Вируссодержащий материал готовят известным способом, как и в примере 1, путем размножения на 2-3-суточной перевиваемой культуре клеток ВНК-21/13, которую заражают лиофилизированным вирусом болезни Ауески из делеционного по гликопротеину gE штамма «Bartha ЩБК-61». Сбор вируса производят через 46-52 часа, когда вирус болезни Ауески накапливается с инфекционной активностью 10,0 lg ТЦД50/см3. Далее вируссодержащий материал перед смешиванием с адъювантом инактивируют добавлением 5% раствора аминоэтилэтиленимина до конечной концентрации 0,005% при рН 7,8 и температуре 39°С в течение 22 часов с периодическим перемешиванием. Затем к 52 кг инактивированного вируссодержащего материала из делеционного по гликопротеину gE штамма вируса болезни Ауески с инфекционной активностью 10,0 lg ТЦД50/см3 добавляют 52 кг масляного адъюванта ISA 201 VG, получая вакцину 2 при следующем соотношении компонентов, мас. %:

Инактивированный вируссодержащий материал из
делеционного по гликопротеину gE штамма вируса болезни
Ауески с инфекционной активностью 10,0 lg ТЦД50/см3 48,00-52,0
Масляный адъювант остальное

Пример 3. Вируссодержащий материал готовят известным способом, как и в примере 1, путем размножения на 2-3-суточной перевиваемой культуре клеток ВНК-21/13-13, которую заражают лиофилизированным вирусом болезни Ауески из делеционного по гликопротеину gE штамма «Ваrthа ЩБК-61». Сбор вируса производят через 46-52 часа, когда вирус болезни Ауески накапливается с инфекционной активностью 8,0 lg ТЦД50/см3. Далее вируссодержащий материал перед смешиванием с адъювантом инактивируют добавлением 4% раствора аминоэтилэтиленимина до конечной концентрации 0,001% при рН 7,6 и температуре 35°С в течение 20 часов с периодическим перемешиванием. Затем к 48 кг инактивированного вируссодержащего материала из делеционного по гликопротеину gE штамма вируса болезни Ауески с инфекционной активностью 8,0 lg ТЦД50/см3 добавляют 52 кг масляного адъюванта ISA 206 VG, получая вакцину 3 при следующем соотношении компонентов, мас. %:

Инактивированный вируссодержащий материал из
делеционного по гликопротеину gE штамма вируса болезни
Ауески с инфекционной активностью 8,0 lg ТЦД50/см3 48,00-52,0
Масляный адъювант остальное

Пример 4. Вируссодержащий материал готовят известным способом, как и в примере 1, путем размножения на 2-3-суточной перевиваемой культуре клеток ВНК-21/13-13, которую заражают лиофилизированным вирусом болезни Ауески из делеционного по гликопротеину gE штамма «Ваrthа ЩБК-61». Сбор вируса производят через 46-52 часа, когда вирус болезни Ауески накапливается с инфекционной активностью 10,0 lg ТЦД50/см3. Далее вируссодержащий материал перед смешиванием с адъювантом инактивируют добавлением 5% раствора аминоэтилэтиленимина до конечной концентрации 0,005% при рН 7,8 и температуре 39°С в течение 22 часов с периодическим перемешиванием. Затем к 52 кг инактивированного вируссодержащего материала из делеционного по гликопротеину gE штамма вируса болезни Ауески с инфекционной активностью 10,0 lg ТЦД50/см3 добавляют 52 кг масляного адъюванта ISA 206 VG, получая вакцину 4 при следующем соотношении компонентов, мас. %:

Инактивированный вируссодержащий материал из
делеционного по гликопротеину gE штамма вируса
болезни Ауески с инфекционной активностью 10,0 lg ТЦД50/см3 48,0-52,0
Масляный адъювант остальное

Пример 5. Вируссодержащий материал готовят известным способом, как и в примере 1, путем размножения на 2-3-суточной культуре клеток почки поросенка СП, которую заражают лиофилизированным вирусом болезни Ауески из делеционного по гликопротеину gE штамма «Bartha ЩБК-61». Сбор вируса производят через 46-52 часа, когда вирус болезни Ауески накапливается с инфекционной активностью 8,0 lg ТЦД50/см3. Далее вируссодержащий материал перед смешиванием с адъювантом инактивируют добавлением 4% раствора аминоэтилэтиленимина до конечной концентрации 0,001% при рН 7,6 и температуре 35°С в течение 20 часов с периодическим перемешиванием. Затем к 48 кг инактивированного вируссодержащего материала из делеционного по гликопротеину gE штамма вируса болезни Ауески с инфекционной активностью 8,0 lg ТЦД50/см3 добавляют 52 кг масляного адъюванта ISA 206 VG, получая вакцину 5 при следующем соотношении компонентов, мас. %:

Инактивированный вируссодержащий материал из
делеционного по гликопротеину gE штамма вируса болезни
Ауески с инфекционной активностью 8,0-10,0 lg ТЦД50/см3 48,00-52,0
Масляный адъювант остальное

Пример 6. Вируссодержащий материал готовят известным способом, как и в примере 1, путем размножения на 2-3-суточной культуре клеток почки поросенка СП, которую заражают лиофилизированным вирусом болезни Ауески из делеционного по гликопротеину gE штамма «Bartha ЩБК-61». Сбор вируса производят через 46-52 часа, когда вирус болезни Ауески накапливается с инфекционной активностью 10,0lg ТЦД50/см3. Далее вируссодержащий материал перед смешиванием с адъювантом инактивируют добавлением 5% раствора аминоэтилэтиленимина до конечной концентрации 0,005% при рН 7,8 и температуре 39°С в течение 22 часов с периодическим перемешиванием. Затем к 52 кг инактивированного вируссодержащего материала из делеционного по гликопротеину gE штамма вируса болезни Ауески с инфекционной активностью 10,0 lg ТЦД50/см3 добавляют 52 кг масляного адъюванта ISA 206 VG, получая вакцину 6 при следующем соотношении компонентов, мас. %:

Инактивированный вируссодержащий материал из
делеционного по гликопротеину gE штамма вируса болезни
Ауески с инфекционной активностью 10,0 lg ТЦД50/см3 48,00-52,0
Масляный адъювант остальное

Пример 7. Вируссодержащий материал готовят известным способом, как и в примере 1, путем размножения на 2-3-суточной культуре клеток почки поросенка СП, которую заражают лиофилизированным вирусом болезни Ауески из делеционного по гликопротеину gE штамма «Bartha ЩБК-61». Сбор вируса производят через 46-52 часа, когда вирус болезни Ауески накапливается с инфекционной активностью 8,0 lg ТЦД50/см3. Далее вируссодержащий материал перед смешиванием с адъювантом инактивируют добавлением 4% раствора аминоэтилэтиленимина до конечной концентрации 0,001% при рН 7,6 и температуре 35°С в течение 20 часов с периодическим перемешиванием. Затем к 95 кг смеси инактивированного вируссодержащего материала из делеционного по гликопротеину gE штамма вируса болезни Ауески с инфекционной активностью 8,0 lg ТЦД50/см3 и масляного адъюванта ISA 206 VG, взятых в соотношении 1:0,8, соответственно, добавляют 5 кг хитозана, получая вакцину 7 при следующем соотношении компонентов, мас. %:

Хитозан 5,0
Смесь инактивированного вируссодержащего материала из
делеционного по гликопротеину gE штамма вируса болезни
Ауески с инфекционной активностью 8,0 lg ТЦД50/см3 и
масляного адъюванта, взятых в соотношении 1:0,8, соответственно остальное.

Пример 8. Вируссодержащий материал готовят известным способом, как и в примере 1, путем размножения на 2-3-суточной культуре клеток почки поросенка СП, которую заражают лиофилизированным вирусом болезни Ауески из делеционного по гликопротеину gE штамма «Bartha ЩБК-61». Сбор вируса производят через 46-52 часа, когда вирус болезни Ауески накапливается с инфекционной активностью 10,0 lg ТЦД50/см3. Далее вируссодержащий материал перед смешиванием с адъювантом инактивируют добавлением 5% раствора аминоэтилэтиленимина до конечной концентрации 0,005% при рН 7,8 и температуре 39°С в течение 22 часов с периодическим перемешиванием. Затем к 95 кг смеси инактивированного вируссодержащего материала из делеционного по гликопротеину gE штамма вируса болезни Ауески с инфекционной активностью 10,0 lg ТЦД50/см3 и масляного адъюванта ISA 206 VG, взятых в соотношении 1:1,2, соответственно, добавляют 10 кг хитозана, получая вакцину 8 при следующем соотношении компонентов, мас. %:

Хитозан 10,0
Смесь инактивированного вируссодержащего материала из
делеционного по гликопротеину gE штамма вируса болезни
Ауески с инфекционной активностью 10,0 lg ТЦД50/см3 и
масляного адъюванта, взятых в соотношении 1,2, соответственно остальное.

Пример 9. Вируссодержащий материал готовят известным способом, как и в примере 1, путем размножения на 2-3-суточной перевиваемой культуре клеток ВНК-21/13-13, которую заражают лиофилизированным вирусом болезни Ауески из делеционного по гликопротеину gE штамма «Bartha ЩБК-61». Сбор вируса производят через 46-52 часа, когда вирус болезни Ауески накапливается с инфекционной активностью 8,0 lg ТЦД50/см3. Далее вируссодержащий материал перед смешиванием с адъювантом инактивируют добавлением 4% раствора аминоэтилэтиленимина до конечной концентрации 0,001% при рН 7,6 и температуре 35°С в течение 20 часов с периодическим перемешиванием. Затем к 95 кг смеси инактивированного вируссодержащего материала из делеционного по гликопротеину gE штамма вируса болезни Ауески с инфекционной активностью 8,0 lg ТЦД50/см3 и масляного адъюванта ISA 206 VG, взятых в соотношении 1:0,8, соответственно, добавляют 5 кг хитозана, получая вакцину 9 при следующем соотношении компонентов, мас. %:

Хитозан 5,0
Смесь инактивированного вируссодержащего материала из
делеционного по гликопротеину gE штамма вируса болезни Ауески
с инфекционной активностью 8,0 lg ТЦД50/см3 и масляного
адъюванта, взятых в соотношении 1:0,8, соответственно остальное.

Пример 10. Вируссодержащий материал готовят известным способом, как и в примере 1, путем размножения на 2-3-суточной перевиваемой культуре клеток ВНК-21/13-13, которую заражают лиофилизированным вирусом болезни Ауески из делеционного по гликопротеину gE штамма «Bartha ЩБК-61». Сбор вируса производят через 46-52 часа, когда вирус болезни Ауески накапливается с инфекционной активностью 10,0 lg ТЦД50/см3. Далее вируссодержащий материал перед смешиванием с адъювантом инактивируют добавлением 5% раствора аминоэтилэтиленимина до конечной концентрации 0,005% при рН 7,8 и температуре 39°С в течение 22 часов с периодическим перемешиванием. Затем к 95 кг смеси инактивированного вируссодержащего материала из делеционного по гликопротеину gE штамма вируса болезни Ауески с инфекционной активностью 10,0 lg ТЦД50/см3 и масляного адъюванта ISA 206 VG, взятых в соотношении 1:1,2, соответственно, добавляют 10 кг хитозана, получая вакцину 10 при следующем соотношении компонентов, мас. %:

Хитозан 10,0
Смесь инактивированного вируссодержащего материала из
делеционного по гликопротеину gE штамма вируса болезни
Ауески с инфекционной активностью 10,0 lg ТЦД50/см3 и масляного
адъюванта, взятых в соотношении 1,2, соответственно остальное.

Пример 11. Вируссодержащий материал готовят известным способом, как и в примере 1, путем размножения на 2-3-суточной перевиваемой культуре клеток ВНК-21/13, которую заражают лиофилизированным вирусом болезни Ауески из делеционного по гликопротеину gE штамма «Bartha ЩБК-61». Сбор вируса производят через 46-52 часа, когда вирус болезни Ауески накапливается с инфекционной активностью 8,0 lg ТЦД50/см3. Далее вируссодержащий материал перед смешиванием с адъювантом инактивируют добавлением 4% раствора аминоэтилэтиленимина до конечной концентрации 0,001% при рН 7,6 и температуре 35°С в течение 20 часов с периодическим перемешиванием. Затем к 95 кг смеси инактивированного вируссодержащего материала из делеционного по гликопротеину gE штамма вируса болезни Ауески с инфекционной активностью 8,0 lg ТЦД50/см3 и масляного адъюванта ISA 201 VG, взятых в соотношении 1:0,8, соответственно, добавляют 5 кг хитозана, получая вакцину 11 при следующем соотношении компонентов, мас. %:

Хитозан 5,0
Смесь инактивированного вируссодержащего материала из
делеционного по гликопротеину gE штамма вируса болезни
Ауески с инфекционной активностью 8,0 lg ТЦД50/см3 и масляного
адъюванта, взятых в соотношении 1:0,8, соответственно остальное.

Пример 12. Вируссодержащий материал готовят известным способом, как и в примере 1, путем размножения на 2-3-суточной перевиваемой культуре клеток ВНК-21/13, которую заражают лиофилизированным вирусом болезни Ауески из делеционного по гликопротеину gE штамма «Bartha ЩБК-61». Сбор вируса производят через 46-52 часа, когда вирус болезни Ауески накапливается с инфекционной активностью 10,0 lg ТЦД50/см3. Далее вируссодержащий материал перед смешиванием с адъювантом инактивируют добавлением 5% раствора аминоэтилэтиленимина до конечной концентрации 0,005% при рН 7,8 и температуре 39°С в течение 22 часов с периодическим перемешиванием. Затем к 95 кг смеси инактивированного вируссодержащего материала из делеционного по гликопротеину gE штамма вируса болезни Ауески с инфекционной активностью 10,0 lg ТЦД50/см3 и масляного адъюванта ISA 201 VG, взятых в соотношении 1:1,2, соответственно, добавляют 10 кг хитозана, получая вакцину 12 при следующем соотношении компонентов, мас. %:

Хитозан 10,0
Смесь инактивированного вируссодержащего материала из
делеционного по гликопротеину gE штамма вируса болезни
Ауески с инфекционной активностью 10,0 lg ТЦД50/см3 и
масляного адъюванта, взятых в соотношении 1,2,
соответственно остальное.

Пример 13. Испытание иммуногенной активности вакцины по изобретению, полученной по примерам 1-12, проводят на экспериментальных животных - на поросятах живой массой 15-20 кг 6-8 недельного возраста в сравнении с прототипом. Были сформированы 14 групп животных по 10 голов: из них опытных (с первого по двенадцатый номер) - 12 групп, которым вводили вакцины 1-12, полученные по примерам 1-12) и две группы контрольные (контрольная группа 1 - не вакцинированные животные, контрольная группа 2 - вакцинированные вакциной-прототипом). Животных опытных групп 1-12 иммунизируют вакцинами 1-12, приготовленными по примеру 1-12 после хранении вакцин при температуре 4°С в течение 24 месяцев из расчета 2,0 см3 внутримышечно в область шеи за ухом однократно; контрольную группу 2 - иммунизируют известной вакциной (прототипом) после хранении вакцин при температуре 4°С в течение 24 месяцев из расчета 2,0 см3 внутримышечно в область шеи за ухом однократно. Контрольную группу 1 не вакцинируют. У животных до вакцинации, через 7 и 21 день после вакцинации были отобраны пробы крови и исследованы в ИФА (набор IDEXX PRV/ADVgB США) на наличие специфических антител к антигену gB. Их оценка проводилась по значению величины S/N против вируса болезни Ауески (см. данные таблицы 1). Контрольное заражение животных проведено через 21 день после вакцинации. Иммуногенную активность вакцины оценивают по результатам контрольного заражения вакцинированных и контрольных животных (см. данные таблицы 1).

Таким образом, полученная вакцина против болезни Ауески животных из делеционного по гликопротеину gE штамма вируса болезни Ауески обладает более высокой иммуногенной активностью при длительном ее хранении в сравнении с известным техническим решением. Вакцинирование обеспечивает высокий уровень антител в сыворотке крови у привитых животных предлагаемой вакциной (уровень антител в группах опытных животных в 3,7-6,8 раз выше, чем в группе животных, которым вводили известную вакцину). Процент заражения после применения предлагаемой вакцины снижается на 46,7%.

1. Штамм «BARTHA ЩБК-61» вируса болезни Ауески, депонированный в Государственной коллекции вирусов Института вирусологии Федерального государственного бюджетного учреждения «Федеральный научно-исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Гамалеи» под №2882.

2. Способ получения вакцины против болезни Ауески животных, включающий получение вируссодержащего материала из штамма вируса болезни Ауески, выращенного в перевиваемой культуре клеток суспензионным способом, инактивацией его и смешивание с масляным адъювантом, отличающийся тем, что в качестве вируссодержащего материала вакцина содержит вируссодержащий материал из делеционного по гликопротеину gE штамма вируса болезни Ауески «BARTHA ЩБК-61» по п. 1 с инфекционной активностью 8,0-10,0 lg ТЦД50/см3, который перед смешиванием с адъювантом инактивируют добавлением 4-5% раствора аминоэтилэтиленимина до конечной концентрации 0,001-0,005% при рН 7,6-7.8 и температуре 35-39°С в течение 20-22 часов с периодическим перемешиванием при следующем соотношении компонентов, мас. %:

Инактивированный вируссодержащий материал из
делеционного по гликопротеину gE штамма вируса
болезни Ауески «BARTHA ЩБК-61» по п. 1
с инфекционной активностью
8,0-10,0 lg ТЦД50/см3 48,00-52,0
Масляный адъювант остальное

3. Способ получения вакцины против болезни Ауески животных, включающий получение вируссодержащего материала из штамма вируса болезни Ауески, выращенного в перевиваемой культуре клеток суспензионным способом, инактивацией его и смешивание с масляным адъювантом, отличающийся тем, что в качестве вируссодержащего материала вакцина содержит вируссодержащий материал из делеционного по гликопротеину gE штамма вируса болезни Ауески «BARTHA ЩБК-61» по п. 1 с инфекционной активностью 8,0-10,0 lg ТЦИД50/см3, который перед смешиванием с адъювантом инактивируют добавлением 4-5% раствора аминоэтилэтиленимина до конечной концентрации 0,001-0,005% при рН 7,6-7,8 и температуре 35-39°С в течение 20-22 часов с периодическим перемешиванием, дополнительно содержит стабилизатор хитозан при следующем соотношении компонентов, мас. %:

Хитозан 5,0-10,0
Инактивированный вируссодержащий материал из
делеционного по гликопротеину gE штамма вируса
болезни Ауески «BARTHA ЩБК-61» по п. 1
с инфекционной активностью
8,0-10,0 lg ТЦД50/см3 48,00-52,0
Масляный адъювант остальное

4. Способ получения вакцины против болезни Ауески животных по пп. 2 и 3, отличающийся тем, что в качестве масляного адъюванта используют масляный адъювант ISA 201 VG или ISA 206 VG.

5. Способ получения вакцины против болезни Ауески животных по пп. 2 и 3, отличающийся тем, что в качестве перевиваемой культуры клеток используют перевиваемую культуру клеток ВНК-21/13, или перевиваемую культуру клеток ВНК-21/13-13, или первичную культуру клеток почки поросенка СП.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к биотехнологии. Описан рекомбинантный онколитический аденовирус, содержащий: ген, кодирующий интерлейкин 12 (IL-12); ген, кодирующий shRNA, подавляющую экспрессию VEGF (фактора роста эндотелия сосудов).

Группа изобретений относится к биотехнологии, иммунологии и микробиологии. Создан экспрессионный вектор на основе рекомбинантного аденоассоциированного вируса, со встроенной генетической конструкцией, экспрессирующий рекомбинантное антитело, имеющее CDR1, представленный аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:1, CDR2, представленный аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:2, CDR3, представленный аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:3, либо имеющее CDR1, представленный аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:4, CDR2, представленный аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:5, CDR3, представленный аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:6, либо имеющее CDR1, представленный аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:7, CDR2, представленный аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:8, CDR3, представленный аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:9, а также предложено применение данного вектора для экстренной профилактики и профилактики заболевания, вызванного вирусом SARS-CoV-2.

Изобретение относится к биотехнологии. Описан вектор экспрессии фактора VIII (FVIII) на основе аденоассоциированного вируса (ААВ).

Настоящее изобретение относится к биотехнологии, а именно к вириону рекомбинантного аденоассоциированного вируса (rAAV) для ингибирования активности фактора роста эндотелия сосудов (VEGF) в клетке глаза млекопитающего. rAAV содержит (a) вариант капсидного белка аденоассоциированного вируса (AAV), содержащий пептидную вставку в GH-петле капсидного белка, по сравнению с соответствующим исходным капсидным белком AAV, где пептидная вставка содержит аминокислотную последовательность ISDQTKH (SEQ ID NO:14), и (b) гетерологичную нуклеиновую кислоту, содержащую нуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид, который ингибирует активность VEGF, функционально связанную с последовательностью для контроля экспрессии, где нуклеотидная последовательность выбрана из группы, состоящей из: (i) нуклеотидной последовательности, указанной как SEQ ID NO: 69 (sc-ранибизумаб-LH1), (ii) нуклеотидной последовательности, указанной как SEQ ID NO:65 (афлиберцепт), (iii) нуклеотидной последовательности, указанной как SEQ ID NO:74 (бролуцизумаб), (iv) нуклеотидов 61-1578 SEQ ID NO:69, (v) нуклеотидов 79-1377 SEQ ID NO:65, (vi) нуклеотидов 61-816 SEQ ID NO:74, и (vii) нуклеотидной последовательности, имеющей по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичность с любой из (i)-(vi).

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к способу опосредованного контроля полноты инактивации антигена вируса ящура с применением nested обратно-транскриптазной полимеразной цепной реакции с последующим электрофорезом ампликонов в агарозном геле. Полноту инактивации антигена вируса ящура определяют методом nested ОТ-ПЦР с использованием двух систем оригинальных праймеров: 5'NTR-F1 и 3D-R1 (амплификация участка генома вируса ящура размером 7289 п.н.), 5'NTR-F2 и 3D-R2 (амплификация участка генома вируса ящура размером 7244 п.н.).

Изобретение относится к области биотехнологии и вирусологии. Описаны способы серотипирования и/или определения гетерогенности вирусной частицы с помощью определения массы, в частности, с помощью применения жидкостной хроматографии/масс-спектрометрии (LC/MS) или жидкостной хроматографии/масс-спектрометрии-масс-спектрометрии (LC/MS/MS).

Настоящее изобретение относится к биотехнологии. Заявлен вектор экспрессии, содержащий по меньшей мере одну гетерологичную последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую первый белок цирковируса свиней типа 3 (PCV3), выбранный из группы, состоящей из ORF1, ORF2, ORF3 и любой их комбинации, и причем белок PCV3 имеет по меньшей мере 90% гомологии последовательности с последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO.

Изобретение относится к биотехнологии. Заявлен рекомбинантный онколитический вирус простого герпеса (HSV) для лечения рака, содержащий (i) первую кассету последовательности-мишени микроРНК (кассету миР-TS), вставленную в первый вирусный ген и содержащую по меньшей мере 2 последовательности-мишени для каждой из миР-124, миР-1 и миР-143, (ii) вторую кассету миР-TS, вставленную во второй вирусный ген и содержащую по меньшей мере 2 последовательности-мишени для каждой из миР-128, миР-219a и миР-122, и (iii) третью кассету миР-TS, вставленную в третий вирусный ген и содержащую по меньшей мере 2 последовательности-мишени для каждой из миР-219a, миР-204 и миР-128.

Группа изобретений относится к биотехнологии. Предложена гетерологичная ДНК, предназначенная для введения в геном вируса “дикого” штамма Herpesvirus saimiri, включает в себя генетические последовательности, кодирующие парные химерные рецепторы против опухолевых антигенов CD44 и CD133, фланкированная участками протяженностью 300-900 пар нуклеотидных оснований, гомологичных тому участку генома Herpesvirus saimiri, в который производится интеграция целевого фрагмента посредством гомологичной рекомбинации.

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к вариантам капсидных белков аденоассоциированного вируса (AAV), имеющим одну или несколько модификаций аминокислотной последовательности относительно родительского капсидного белка AAV. Изобретение также относится к рекомбинантным вирионам AAV и фармацевтическим композициям таковых, содержащим вариант капсидного белка AAV.

Изобретение относится к области ветеринарии, ветеринарной биотехнологии и касается производства профилактических и диагностических препаратов. Представлен штамм вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней для изготовления диагностических и вакцинных препаратов, относящийся к роду Arterivirus, семейству Arteriviridae, порядку Nidovirales, депонированный в Государственной коллекции вирусов Института вирусологии Федерального государственного бюджетного учреждения «Федеральный научно-исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Гамалеи» под №2928. Представлена вакцина для профилактики репродуктивно-респираторного синдрома свиней, содержащая аттенуированный штамм вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней с титром 4,0-7,5 lg ТЦД50/см3 и смесь сахарозы, пептона и желатозы. Представлены варианты вакцины, где в качестве стабилизатора используют смесь сахарозы, пептона, желатозы и трис-HCl буфер, или в качестве стабилизатора используют смесь сахарозы, пептона, желатозы, трис-HCl буфер, этилендиаминтетрауксусную кислоту, или в качестве стабилизатора используют смесь сахарозы, пептона, желатозы, трис-HCl буфер, этилендиаминтетрауксусную кислоту и хитозан. Предложен способ получения вакцины для профилактики репродуктивно-респираторного синдрома свиней, включающий инфицирование перевиваемой культуры клеток вируссодержащим материалом из аттенуированного штамма вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней, репродукции вируса в перевиваемой культуре клеток, сбор вируссодержащего материала с последующим получением иммунизирующего антигена вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней и добавление к нему стабилизатора, в качестве вируссодержащего материала используют аттенуированный штамм вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней с титром 4,0-7,5 lg ТЦД50/см3, а в качестве перевиваемой культуры клеток используют клетки МА-104, или клетки Vero, или клетки Marc-145, или клетки CV1, причем репродукцию вируса проводят при температуре 36-38°С в течение 72-120 час при рН 7,2-7,4, а иммунизирующий антиген вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней получают путем 1-2-х кратным замораживанием и оттаиванием инфицированных клеток с последующим центрифугированием при 1000-2000 тыс. об/мин в течение 15-20 мин и отделением супернатанта, а вакцину получают добавлением к супернатанту стабилизатора. Изобретение позволяет повысить иммуногенность целевого продукта при длительном хранении целевого продукта. 6 н.п. ф-лы, 1 табл.
© Патентный поиск, поиск патентов на изобретения - FindPatent.RU 2012-2024
Политика конфиденциальности 2020-09-15 2022-09-09T07:29:47
Наверх