Способ получения ингибитора ацетилхолинэстеразы (ache) и ингибитор, полученный способом
Владельцы патента RU 2779555:
Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Российский университет дружбы народов" (РУДН) (RU)
Изобретение относится к области фармацевтической химии и технологии получения лекарств, конкретно к способу получения ингибиторов ацетилхолинэстеразы (AChE) формулы (VI). Способ состоит из двух этапов. На первом этапе получают соединение формулы (I) взаимодействием соединений, охарактеризованных структурными формулами (II), (III), (IV) и (V) соответственно, в присутствии метанола с последующей обработкой реакционной смеси последовательно хлороформом и насыщенным раствором NaHCO3 с дальнейшим выпариванием растворителя и очисткой конечного продукта флэш-хроматографией с использованием смеси растворителей дихлорметан/МеОН при объемном соотношении растворителей 30:1, содержащей 0,1 мас.% NH3, с получением конечного продукта в виде сиропа от бледно-желтого до белого аморфного твердого вещества. На втором этапе получают соединение формулы (VI) взаимодействием соединений, охарактеризованных формулами (I), (VII) соответственно, при этом соединение (I) растворяют в ацетоне и метилируют диметилсульфатом (1 экв.) с получением соединения формулы (VI) в виде бледно-желтого сиропа. В указанных формулах R1 представляет собой бензил, н-пропил, R2 представляет собой н-бутил, циклогексил, n = 1, 2. Предлагаемый способ позволяет получать новые ингибиторы ацетилхолинэстеразы (AChE). Изобретение относится также к ингибитору ацетилхолинэстеразы (AChE), который получен данным способом. 2 н.п. ф-лы, 65 ил., 6 табл., 8 пр.
Данное изобретение относится к области фармацевтической химии и технологии получения лекарств, а именно к применению новых модифицированных производных 1а - N-бензил-N-(2-(бутиламино)-2-оксоэтил)-3-(диметиламино)пропанамид (N-benzyl-N-(2-(butylamino)-2-oxoethyl)-3-(dimethylamino)propanamid)e, 1b - N-бензил-N-(2-(циклогексиламино)-2-оксоэтил)-3-(диметиламино)пропанамид (N-benzyl-N-(2-(cyclohexylamino)-2-oxoethyl)-3-(dimethylamino)propanamide), 1c - N-(2-(бутиламино)-2-оксоэтил)-3-(диметиламино)-N-пропилпропанамид (N-(2-(butylamino)-2-oxoethyl)-3-(dimethylamino)-N-propylpropanamide), 1d - N-бензил-N-(2-(бутиламино)-2-оксоэтил)-2-(диметиламино)ацетамид (1d, N-benzyl-N-(2-(butylamino)-2-oxoethyl)-2-(dimethylamino)acetamide). Более конкретно, заявленное изобретение относится к области синтетически активных соединений и касается разработки новых соединений - ингибиторов ацетилхолинэстеразы (AChE), полученных методом образования четвертичных аммониевых соединений (Quaternary Ammonium Formation). Ингибитор AChE в своей химической структуре содержит фрагмент бис-амида, который, как известно, проявляет ингибирующую активность в отношении AChE и холиновый фрагмент, и, потенциально, может обладать лекарственно устойчивыми эффектами для лечения болезнь Альцгеймера.
Ацетилхолин является главным нейротрансмиттером парасимпатической вегетативной нервной системы, как внутренний передатчик для симпатической нервной системы и конечным продуктом, выделяемым парасимпатической вегетативной нервной системой.
В центральной нервной системе ацетилхолин (Ach) влияет на пластичность и возбуждение не единообразно, а также играет ключевую роль в памяти и обучении и в повышении бдительности. Было показано, что дефицит ацетилхолина в мозге у людей приведет к болезни Альцгеймера и Паркинсона (БП) вследствие повреждения холинергической системы в головном мозге.
Все ранее предпринятые попытки использовать хлорид ацетилхолина в качестве холинергических стимуляторов не увенчались успехом. Было обнаружено, что он не обладает устойчивым эффектом из-за его слишком малой продолжительности действия за счет его быстрого гидролиза ферментом AChE и отсутствия специфичности.
Были синтезированы препараты, которые направлены на подавление активности AChE, как Донепезил [1], Ривастигмин [2], Галантамин [3], Такрин [4] и т.д.
Таким образом, ингибиторы ацетилхолинэстеразы (ИАХЭ) сегодня можно рассматривать как препараты не только заместительной, но и патогенетической, болезнь-модифицирующей терапии [5].
Однако, первые попытки применения «классического» ИАХЭ - физостигмина - при БА не привели к ожидаемым результатам и, кроме того, сопровождались рядом серьезных побочных эффектов, связанных с гиперактивностью холинергической системы.
Более оптимистичными выглядели результаты применения другого ингибитора АХЭ - препарата Такрина (тетрагидроаминоакридин), засвидетельствовавшие положительное влияние данного средства на когнитивные функции и поведенческие расстройства [6, 7].
В то же время в ряде исследований не отмечалась какая-либо положительная динамика при применении Такрина даже на самых ранних стадиях дементного процесса [8].
Кроме того, Такрин оказался весьма гепатотоксичным препаратом, а также вызывал расстройства функций желудочно-кишечного тракта (рвота, диарея), что часто приводило к отказу от дальнейшего лечения.
Во многом недостаточная эффективность и побочные эффекты упомянутых средств могут быть связаны с отсутствием их селективного влияния на ЦНС по сравнению с действием на АХЭ периферических органов. В связи с этим значительные ожидания связаны с внедрением в клиническую практику селективных ИАХЭ «нового поколения» - Донепезила, Ривастигмина и Галантамина.
Галантамин можно рассматривать не только с узкой точки зрения, как препарат для коррекции когнитивных нарушений, а как нейро- и геропротектор в широком смысле этого термина, тормозящий развитие возрастных изменений мозга, служащих фундаментом для последующего развития дементного процесса. Подобные свойства не характерны ни для одного из известных ИАХЭ, что повышает ценность Галантамина с клинико-фармакологических позиций как инструмента фармакотерапии деменций.
В то же время, доказательная база эффективности Галантамина при БА и СД уступает таковой для Донепезила и Ривастигмина вследствие ограниченного количества клинических испытаний данного препарата, проведенных в современном формате рандомизированных двойных слепых плацебо-контролируемых исследований. Хотя сегодня имеются достаточно убедительные свидетельства эффективности Галантамина в терапии БА [9, 10] и СД [11], следует отметить, что в целом сфера его клинического действия ограничена влиянием на когнитивные функции и не затрагивает психоэмоциональных и поведенческих расстройств. Это сужает возможности применения Галантамина при деменциях по сравнению с Ривастигмином, однако позволяет сопоставить их с таковыми для Донепезила. К тому же при применении галантамина достаточно часто встречаются такие побочные эффекты, как диспепсические расстройства, гипотензия и нарушения проводимости миокарда [12], что сужает возможности его практического применения и осложняет достижение комплайенса.
Таким образом, необходимо отметить, что сегодня препараты ИАХЭ остаются наиболее обоснованными и востребованными инструментами фармакотерапии деменций. Дальнейшее накопление мирового опыта применения данных средств у разных категорий пациентов с различными формами деменций и стадиями течения патологического процесса, изучение особенностей их клинико-фармакологических эффектов будет способствовать реальному прогрессу в борьбе с одной из важнейших форм патологии в современном обществе.
Принимая во внимание нехолинергические аспекты холинергического фермента AChE, их взаимосвязь с признаками болезни Альцгеймера и роль периферийного сайта AChE во всех этих функциях, выявляется перспективная мишень для разработки новых лекарственных средств, направленных против деменций. Периферийные или двухсайтовые ингибиторы AChE могут одновременно облегчить нарушение познавательной способности у пациентов, страдающих болезнью Альцгеймера, и, что еще более важно, избежать агрегации β-амилоида, что представляет собой новый путь для замедления развития нейродегенеративного процесса.
Таким образом, лиганды, способные взаимодействовать одновременно с активными и периферийными сайтами, могли бы заключать в себе несколько преимуществ по сравнению с известными ингибиторами. С одной стороны, они должны значительно улучшить ингибирующую эффективность, и, с другой стороны, они должны быть вовлечены в нейротропную активность.
В международной патентной публикации WO 03033489 А1, опубл. 24.04.2003 описаны производные пиперидина, имеющие ингибирующее действие на ацетилхолинэстеразу и на агрегацию бета-амилоида.
В международной патентной публикации WO 0117529 А1, опубл. 15.03.2001 раскрыты галогензамещенные производные такрина или бистакрина для лечения болезни Альцгеймера. Одна из подгрупп представляет остаток индола, соединенный с такрином через короткий линкер.
Castro Α.; Martinez A. Mini Rev. Med. Chem., 2001, 1, 267-272 описывает несколько семейств ингибиторов AChE со сродством к периферийному и одновременно двум типам вышеуказанных сайтов, включая некоторые производные такрина.
Международная патентная публикация WO 2004032929 A3, опубл. 22.04.2004 раскрывает ингибиторы AChE со сродством одновременно к двум вышеопределенным сайтам (т.е., ингибиторы AChE двойного действия), содержащие остаток такрина, соединенный посредством линкера с определенными гетероциклами, такими как остаток такрина, инданона или тиадиазолидинона.
Недостатком известных технических решений является то, что заявленные в них химические структуры проявляют низкую ингибирующую способность, а также не содержат в своем составе пептидоподобную (бис-амид) структуру и холиновый фрагмент.
Данное изобретение касается нового семейства химических соединений, для получения новых соединений, которые можно использовать в качестве ингибитора ацетилхолинэстеразы (AChE).
Задачей настоящего изобретения является получение нового химического соединения, обладающего повышенной эффективностью в ингибировании (AChE).
Технический результат - повышение эффективности ингибирования (AChE).
Технический результат достигается получением новых производных композиций за счет взаимодействия новых модифицированных производных соединений продуктов Ugi 1a - N-бензил-N-(2-(бутиламино)-2-оксоэтил)-3-(диметиламино)пропанамид (N-benzyl-N-(2-(butylamino)-2-oxoethyl)-3-(dimethylamino)propanamid)e, 1b - N-бензил-N-(2-(циклогексиламино)-2-оксоэтил)-3-(диметиламино)пропанамид (N-benzyl-N-(2-(cyclohexylamino)-2-oxoethyl)-3-(dimethylamino)propanamide), 1c - N-(2-(бутиламино)-2-оксоэтил)-3-(диметиламино)-N-пропилпропанамид (N-(2-(butylamino)-2-oxoethyl)-3-(dimethylammo)-N-propylpropanarmd 1d - N-бензил-N-(2-(бутиламино)-2-оксоэтил)-2-(диметиламино)ацетамид (1d, N-benzyl-N-(2-(butylamino)-2-oxoethyl)-2-(dimethylamino)acetamide) - химическая структура с формулой (II) с Диметилсульфатом - структура с формулой (III) и Ацетоном - структура с формулой (IV) методом образования четвертичных аммониевых соединений с получением формулы I
где R1 представляет собой бензил, н-пропил; R2 представляет собой - н-бутил, циклогексил, n=1, 2.
где R1 представляет собой бензил, н-пропил; R2 представляет собой - н-бутил, циклогексил, n=1, 2.
Технический результат продуктов Ugi - химическая структура с формулой (I) достигается за счет получения новых производных аминокислот взаимодействием Ν,Ν-диметил глицина или Ν,Ν-диметил β-аланина - химическая структура с формулой (II) с формальдегидом - структура с формулой (III), первичным амином - структура с формулой (IV) и изоцианидом - структура с формулой (V) путем четырехкомпонентной реакции (Ugi-4 CR).
где R1 представляет собой бензил, н-пропил; R2 представляет собой - н-бутил, циклогексил, n=1, 2.
где R1 представляет собой бензил, н-пропил; R2 представляет собой - н-бутил, циклогексил, n=1, 2.
При этом, вышеуказанный синтез позволяет получать новые соединения: 1а - N-бензил-N-(2-(бутиламино)-2-оксоэтил)-3-(диметиламино)пропанамид (N-benzyl-N-(2-(butylamino)-2-oxoethyl)-3-(dimethylamino)propanamid)e, 1b - Ν-бензил-N-(2-(циклогексиламино)-2-оксоэтил)-3-(диметиламино)пропанамид (N-benzyl-N-(2-(cyclohexylamino)-2-oxoethyl)-3-(dimethylamino)propanamide), 1с - N-(2-(бутиламино)-2-оксоэтил)-3-(диметиламино)-N-пропилпропанамид (N-(2-(butylamino)-2-oxoethyl)-3-(dimethylamino)-N-propylpropanamide), 1d - N-бензил-N-(2-(бутиламино)-2-оксоэтил)-2-(диметиламино)ацетамид (1d, N-benzyl-N-(2-(butylamino)-2-oxoethyl)-2-(dimethylamino)acetamide) 2a - 3-(benzyl(2-(butylamino)-2-oxoethyl)amino)-N,N,N-trimethyl-3-oxopropan-1-aminium, 2b - 3-(benzyl(2-(cyclohexylamino)-2-oxoethyl)amino)-N,N,N-trimethyl-3-oxopropan-1-aminium, 2c - 3-((2-(butylamino)-2-oxoethyl)(propyl)amino)-N,N,N-trimethyl-3-oxopropan-1-aminium, 2d - 2-(benzyl(2-(butylammo)-2-oxoethyl)amino)-N,N,N-trimethyl-2-oxoethan-1-aminium, имеющие следующие формулы:
Описание общего принципа
Таким образом, изобретение относится к способу синтеза соединений 2а-2d, а также изучения их свойств в качестве ингибитора ацетилхолинэстеразы.
На первом этапе данного изобретения, для получения заявленного соединения, был проведен предварительный синтез, согласно которому было получено соединение, отвечающее формуле (II) и представляющее собой модифицированные производные соединения продуктов Ugi.
Далее на втором этапе изобретения был осуществлен синтез конечного продукта за счет реакции взаимодействия соединения, отвечающего формуле (II), Диметилсульфата и Ацетона в реакция образования четвертичных аммониевых соединений с последующей обработкой реакционной смеси и выделением конечного продукта.
Полученный продукт был изучен на предмет ингибирующей активности в отношении ацетилхолинэстеразы.
Донепезил был использован в качестве стандарта для сравнения результатов ингибирующего действия с ним, что показано на диаграммах.
Дополнительные варианты осуществления, особенности и преимущества настоящего изобретения, а также структура и работа различных вариантов осуществления настоящего изобретения подробно описаны ниже со ссылкой на прилагаемые рисунки и фигуры.
Используемые здесь термины имеют указанные значения
Термин «n-alkyl» относится к алкильной группе и представляет собой н-бутил или n-пропил, который присоединен к фрагменту исходной молекулы через атом азота.
Термин «alkylamine» представляет собой радикал, в котором одна или несколько аминогрупп замещают атом водорода в алкильном радикале.
Используемые здесь термины «benzyl» относятся к бензильному радикалу.
Используемый здесь термин «carbonyl» означает группу -С(О)-.
Используемый здесь термин «carboxy» относится к -С(О)ОН или соответствующему «карбоксилатному» аниону, например, в соли карбоновой кислоты.
Термин «cyanide», используемый здесь, отдельно или в комбинации, относится к -CN.
Термин «ester», относится к фрагменту, включающему сложноэфирную группу.
Термин DCM относится к дихлорметану, DMSO относится к диметилсульфоксиду и МеОН относится к спирту и метанолу, который действует как растворитель для хроматографии, a DMSO используется для обнаружения ЯМР.
Термин «amino-component», используемый здесь, отдельно или в комбинации, относится к первичному амину, в котором одна группа R замещена бензиламином.
Термин «amino-component», используемый здесь, отдельно или в комбинации, относится к аминосодержащему фрагменту.
Термин «amide» здесь относится к амидной группе, которая замещена R1 и R2. R1 выбран из группы, состоящей из алкила с прямой цепью бензила; и R2 представляет собой линейный н-алкил.
Термин «aldehyde» относится к формальдегиду или параформальдегиду (раствор формальдегида в воде), который использовался в реакции Ugi - 4 CR.
Термин «isocyanide» относится к замещенному изоцианиду, включающему заместитель - циклогексил, или н-бутил.
Термин «keton» относится к ацетону, который использовался в реакции quaternary ammonium formation.
Термин «Dimethyl sulfate» который использовался в реакции quaternary ammonium formation.
Термин «ингибитор холинэстеразы» относится к соединениям, которые обладают способностью ингибировать этот фермент, который играет важную роль в гидролизе нейротранзиттера Ach.
Термин «нейродегенеративное расстройство» в контексте настоящего описания относится к любому заболеванию, нарушению, состоянию или симптому, характеризующимся структурной или функциональной потерей нейронов. Нейродегенеративные нарушения включают, например, болезнь Альцгеймера, болезнь Паркинсона, болезнь Хантингтона, деменцию с тельцами Леви и боковой амиотрофический склероз (БАС).
Термин «ESI-MS», масс-спектрометрия с ионизацией электрораспылением
Термини « HR-MS», масс-спектрометрия высокого разрешения
Термини « ЯМР», ядерный магнитный резонанс;
Термини «RT» - комнатная температура
Термини «ТСХ», тонкослойная хроматография.
Изобретение поясняется чертежами, рисунками и таблицами где:
На Фиг. 1 показана общая формула I трех соединений (1a), (1b), (1с);
На Фиг. 2 показана формула II Ν,Ν-диметил β-аланин, где n=2 атома углерода (С);
На Фиг. 3 показана формула III формальдегид;
На Фиг. 4 показана формула IV первичный амин, где R1 представляет собой бензил или n-алкил;
На Фиг. 5 показана формула V n-алкилизоцианида, R2 представляет собой n-алкил или циклогексил;
На Фиг. 6. Структурные формулы соединений;
На Фиг. 7. Принципиальный метод синтеза получения формулы 1. (Схема I)
На Фиг. 8. Синтез N,N-диметил-β-аланина
На Фиг. 9. ESI-HRMS для N,N-диметил-β-аланина.
На Фиг. 10. 1Η NMR spectrum (400 MHz, DMSO-d6) для Ν,N-диметил-β-аланина.
На Фиг. 11. 13С NMR spectrum (100 MHz, DMSO-d6) для Ν,N-диметил-β-аланина.
На Фиг. 12. Синтез структурную формулу соединения (1а). где В - Ugi_- 4 CR реакция.
На Фиг. 13. ESI-HRMS для 1а.
На Фиг. 14. 1Н NMR spectrum (400 MHz, DMSO-d6) для 1a.
На Фиг. 15. 13С NMR spectrum (100 MHz, DMSO-d6) для 1a.
На Фиг. 16. Синтез структурную формулу соединения (1b), где В - Ugi -реакция.
На Фиг. 17. ESI-HRMS для 1b.
На Фиг. 18. 1H NMR spectrum (400 MHz, DMSO-d6) для 1b.
На Фиг. 19. 13С NMR spectrum (100 MHz, DMSO-d6) для 1b.
На Фиг. 20. Синтез структурную формулу соединения (1с). где В - Ugi_реакция.
На Фиг. 21. ESI-HRMS для 1с.
На Фиг. 22. 1Н NMR spectrum (400 MHz, DMSO-d6) для 1c.
На Фиг. 23. 13С NMR spectrum (100 MHz, DMSO-d6) для 1c.
На Фиг. 24. Результаты испытаний в разных концентрациях (1а), (1b) и (1с).
На Фиг. 25. Результаты испытаний в разных концентрациях (1а), (1b) и (1с).
На Фиг. 26. показана общая формула I соединения (1d);
На Фиг. 27. показана формула II Ν,Ν-диметилглицин;
На Фиг. 28. показана формула III формальдегид;
На Фиг. 29. показана формула IV первичный амин, где R1 представляет собой бензил;
На Фиг. 30. показана формула V n-алкилизоцианида, R2 представляет собой n-бутил;
На Фиг. 31. Структурная формула соединения;
На Фиг. 32. Принципиальный метод синтеза получения формулы 1. (Схема II)
На Фиг. 33. Синтез Ν,Ν-диметилглицина
На Фиг. 34. ESI-HRMS для Ν,Ν-диметилглицина.
На Фиг. 35. 1H NMR spectrum (400 MHz, DMSO-d6) для Ν,Ν-диметилглицина.
На Фиг. 36. 13С NMR spectrum (100 MHz, DMSO-d6) для Ν,Ν-диметилглицина.
На Фиг. 37. Синтез структурную формулу соединения (1d), где В - Ugi - 4 CR_реакция.
На Фиг. 38. ESI-HRMS для 1d.
На Фиг. 39. 1H NMR spectrum (400 MHz, DMSO-d6) для 1d.
На Фиг. 40. 13C NMR spectrum (100 MHz, DMSO-d6) для 1d.
На Фиг. 41. Результаты испытаний в разных концентрациях (1d).
На Фиг. 42. Результаты испытаний в разных концентрациях (1d).
На фиг.43. показана общая формула I Четырех соединений (2а), (2b), (2с) и (2d);
На фиг.44. показана формула VII диметилсульфат;
На фиг.45. показана формула VIII ацетон;
На фиг.46. Структурные формулы формальдегид;
На фиг.47. Принципиальный метод синтеза получения формулы VI. (Схема III)
На Фиг. 48. Синтез структурную формулу соединения (2а). где С - Quaternary Ammonium Formation.
На Фиг. 49. ESI-HRMS для 2а.
На Фиг. 50. 1H NMR spectrum (400 MHz, DMSO-d6) для 2a.
На Фиг. 51. 13С NMR spectrum (100 MHz, DMSO-d6) для 2a.
На Фиг. 52. Синтез структурную формулу соединения (2b). где С - Quaternary Ammonium Formation.
На Фиг. 53. ESI-HRMS для 2b.
На Фиг. 54. 1H NMR spectrum (400 MHz, DMSO-d6) для 2b.
На Фиг. 55. 13С NMR spectrum (100 MHz, DMSO-d6) для 2b.
На Фиг. 56. Синтез структурную формулу соединения (2с). где С - Quaternary Ammonium Formation.
На Фиг. 57. ESI-HRMS для 1c.
На Фиг. 58. 1Н NMR spectrum (400 MHz, DMSO-d6) для 2с.
На Фиг. 59. 13С NMR spectrum (100 MHz, DMSO-d6) для 2с.
На Фиг. 60. Синтез структурную формулу соединения (2d), где С - Quaternary Ammonium Formation.
На Фиг. 61. ESI-HRMS для 2d.
На Фиг. 62. 1Н NMR spectrum (400 MHz, DMSO-d6) для 2d.
На Фиг. 63. 13С NMR spectrum (100 MHz, DMSO-d6) для 2d.
На Фиг. 64. Результаты испытаний в разных концентрациях (2а), (2b) и (2с) и (2d).
На Фиг. 65. Результаты испытаний в разных концентрациях (2а), (2b) и (2с) и (2d).
Таблица 1. Результаты анализов всех композиций (1a-1с). где DF - фактор разбавления, RI% - Относительное ингибирование %, RA% - Относительная активность %.
Таблица 2. Результаты испытаний на токсичность 1с.
Таблица 3. Результаты анализов композиции 1d. где DF - фактор разбавления, RI% - Относительное ингибирование %, RA% - Относительная активность %.
Таблица 4. Результаты испытаний на токсичность 1d.
Таблица 5. Результаты анализов всех композиций (2a-2d). где DF - фактор разбавления, RI% - Относительное ингибирование %, RA% - Относительная активность %.
Таблица 6. Результаты испытаний на токсичность (2а и 2d).
Синтез нового ингибитора
На Фиг. 47. В схеме III описан Quaternary Ammonium Formation синтез получения соединения, отвечающего формуле (VI) и представляющий собой взаимодействие модифицированных производных соединений продуктов Ugi, Диметилсульфата и Ацетона, R1 представляет собой бензил, н-пропил; R2 представляет собой - н-бутил, циклогексил, n=1, 2.
Осуществление изобретения
Соединения, являющиеся предметом настоящего изобретения, могут быть получены с использованием описанных ниже синтетических методов. Перечисленные методы не являются исчерпывающими и допускают введение разумных модификаций. Указанные реакции должны проводиться с использованием подходящих растворителей и материалов. При реализации данных общих методик для синтеза конкретных веществ необходимо учитывать присутствующие в веществах функциональные группы и их влияние на протекание реакции.
Синтез соединений, являющихся предметом данного изобретения, может быть осуществлен в соответствии со схемой I- по стандартным методикам.
N, N-диметил-β-аланина (Ν,N-dimethyl-β-alanine) - промежуточный продукт полученный по схеме I для синтеза соединения - (1a-1с) - схемой I (Фиг. 7).
На первом аспекте первого этапа по схеме I происходит синтез (Ν,N-dimethyl-β-alanine), полученного двойным метилированием путем восстановительного аминирования. Затем на втором аспекте первого этапа по схеме I (Фиг. 7) происходит взаимодействие этого интермедиата по реакции Ugi - 4 CR с получением формулы II.
Операция способа:
Синтез N,N-диметил-β-аланина
Двойное метилирование путем восстановительного аминирования: в трехгорлой круглодонной колбе 10 ммоль аминокислоты β-аланина растворяют в 20 мл смеси вода / МеОН 1:1 (об./об.). Добавляют 37 мас. % раствор формальдегида (1,62 мл, 22 ммоль) и Pd (С) (100 мг) и в присутствии H2 (г) суспензию перемешивают при комнатной температуре (RT) в течение 11 часов. Полученную смесь фильтруют через целит, и растворитель выпаривают при пониженном давлении до сухости, получая чистую диметиламинокислоту в виде расплывающегося желтоватого твердого вещества.
Результаты HR-MS, 1H NMR и 13С NMR для N,N-диметил-β-аланина:
HR-MS m/z: 118.0875 [М+Н]+, calculated for C5H12NO2: 118.0868. 1H NMR (400 MHz, Methanol-d4) δ 3.25 (t, J=6.4 Hz, 2H), 2.86 (d, J=0.7 Hz, 6H), 2.55 (t, J=6.3 Hz, 2H). 13C NMR (101 MHz, Methanol-d4) δ 177.48, 56.48, 43.10, 31.81.
Пример 1. Способ синтез композиции (1a) по Ugi-4CR:
Реакция Ugi-4CR: в колбе на 50 мл 3 ммоль параформальдегида и 3 ммоль аминного компонента (бензиламин) суспендируют в МеОН (20 мл). Реакционной смеси дают перемешиваться при комнатной температуре до растворения параформальдегида, что указывает на полное образование соответствующего имина (около 1.5 часов). Затем добавляют 3 ммоль дважды метилированной аминокислоты (β-аланин) и 3 ммоль изоцианидного компонента - н-бутилизоцианид. и смесь перемешивают 32 ч при КТ. Растворитель удаляют, смесь разбавляют 50 мл хлороформа и последовательно промывают насыщенным раствором NaHCO3 (2×15 мл) и рассолом (2×15 мл). Смесь сушат над Na2SO4 (безводным) и растворитель выпаривают. Очистку проводят флэш-хроматографией с использованием смеси растворителей DCM / МеОН 30:1 (об./об.), содержащей 0,1 мас. % NH3, с получением конечного продукта в виде сиропа от бледно-желтого до белого аморфного твердого вещества.
Результаты HR-MS, 1H NMR и 13С NMR для 1а.
HR-MS m/z: 320.2400 [М+Н]+, calcd for C18H30N3O2: 320.2338. 1Н NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.97 (t, J=5.7 Hz, 1H), 7.73 (d, J=5.8 Hz, 1H), 7.37 - 7.16 (m, 5H), 4.61 (s, 1H),4.45 (s, 1H), 3.86 (s, 1H), 3.82 (s, 1H), 3.10-3.01 (m, 2H), 2.13 (s, 3H), 2.07 (s, 3H), 1.44-1.29 (m, 2H), 1.29 - 1.19 (m, 2H), 0.86 (t, J=7.3 Hz, 3H). 13C NMR (101 MHz, DMSO-d6) δ 172.04, 171.85, 167.72, 137.69, 137.46, 128.62, 128.31, 127.57, 127.22, 126.93, 126.68, 54.95, 54.93, 51.58, 49.55, 48.99, 48.38, 45.10, 31.23, 31.10, 30.69, 30.53, 19.47, 13.64, 13.59.
Пример 2. Способ синтез композиции (1b) по Ugi-4CR:
Ugi-4CR_реация: в колбе на 50 мл 3 ммоль параформальдегида и 3 ммоль аминного компонента бензиламин суспендируют в МеОН (20 мл). Реакционной смеси дают перемешиваться при комнатной температуре до растворения параформальдегида, что указывает на полное образование соответствующего имина (около 1.5 часов). Затем добавляют 3 ммоль дважды метилированной аминокислоты (β-аланин) и 3 ммоль изоцианидного компонента циклогексилизоцианид и смесь перемешивают 32 ч при КТ. Растворитель удаляют, смесь разбавляют 50 мл хлороформа и последовательно промывают насыщенным раствором NaHCO3 (2×15 мл) и рассолом (2×15 мл). Смесь сушат над Na2SO4 (безводным) и растворитель выпаривают.Очистку проводят флэш-хроматографией с использованием смеси растворителей DCM / МеОН 30:1 (об./об.), содержащей 0,1 мас. % NH3, с получением конечного продукта в виде сиропа от бледно-желтого до белого аморфного твердого вещества.
Результаты HR-MS, 1H NMR и 13С NMR для 1b.
HR-MS m/z: 346.2545 [М+Н]+, calcd for C20H32N3O2: 346.2495. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.86 (d, J=7.9 Hz, 1H), 7.59 (d, J=7.9 Hz, 1H), 7.40 - 7.19 (m, 5H), 4.60 (s, 1H), 4.45 (s, 1H), 3.86 (s, 1H), 3.82 (s, 1H), 3.57 - 3.48 (m, 1H), 3.32 (s, 2H), 2.47-2.40 (m, 2H), 2.15(s, 3H), 2.08 (s, 3H), 1.71 -1.61 (m, 4H), 1.58-1.48 (m, 1H), 1.30-1.18 (m, 2H), 1.15-1.02 (m, 3H). 13C NMR (101 MHz, DMSO-d6) δ 172.02, 171.75, 166.84, 137.72, 137.47, 128.61, 128.30, 127.61, 127.21, 126.92, 126.72, 55.99, 54.90, 54.88, 51.55, 49.59, 49.08, 48.56, 48.22, 47.62, 47.46, 45.03, 45.01, 32.39, 32.28, 30.61, 30.43, 25.16, 25.13, 24.51, 24.42, 18.52.
Пример 3. Способ синтез композиции (1c) по Ugi-4 CR:
Реакция Ugi-4CR: в колбе на 50 мл 3 ммоль параформальдегида и 3 ммоль аминного компонента - н-пропиламин суспендируют в МеОН (20 мл). Реакционной смеси дают перемешиваться при комнатной температуре до растворения параформальдегида, что указывает на полное образование соответствующего имина (около 1.5 часов). Затем добавляют 3 ммоль дважды метилированной аминокислоты (β-аланин) и 3 ммоль изоцианидного компонента - н-бутилизоцианид и смесь перемешивают 32 ч при КТ. Растворитель удаляют, смесь разбавляют 50 мл хлороформа и последовательно промывают насыщенным раствором NaHCO3 (2×15 мл) и рассолом (2×15 мл). Смесь сушат над Na2SO4 (безводным) и растворитель выпаривают. Очистку проводят флэш-хроматографией с использованием смеси растворителей DCM / МеОН 30: 1 (об./об.), содержащей 0,1 мас. % NH3, с получением конечного продукта в виде сиропа от бледно-желтого до белого аморфного твердого вещества.
Результаты HR-MS, 1H NMR и 13С NMR для 1с.
HR-MS m/z: 272.2401 [М+Н]+, calcd for C14H30N3O2: 272.2338. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.98 (t, J=5.8 Hz, 1H), 7.66 (t, J=5.8 Hz, 1H), 3.91 (s, 1H), 3.81 (s, 1Η), 3.27-3.22 (m, 1H), 3.21-3.12 (m, 1H), 3.12-2.98 (m, 2H), 2.44-2.41 (m, 1H), 2.36-2.28 (m, 1H), 2.14 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.51 (h, J=7.4 Hz, 1H), 1.44 - 1.32 (m, 3H), 1.32 - 1.20 (m, 2H), 0.89 - 0.82 (m, 3H), 0.78 (t, J=7.4 Hz, 3Н). 13C NMR (101 MHz, DMSO-d6) δ 171.49, 171.22, 168.19, 168.09, 55.16, 54.96, 50.24, 48.02, 45.22, 45.08, 38.18, 38.10, 31.27, 31.14, 30.65, 30.49, 21.32, 20.20, 19.47, 13.64, 13.59, 11.17, 10.95.
Ν,Ν-диметилглицин (Ν,Ν-dimethyl-Glycine) - промежуточный продукт полученный по схеме I (Фиг. 7) для синтеза соединения - (1d) - схемой II. (Фиг. 32).
На первом аспекте первого этапа по схеме II происходит синтез (Ν,Ν-dimethyl-Glycine), полученного двойным метилированием путем восстановительного аминирования. Затем На втором аспекте первого этапа по схеме II происходит взаимодействие этого интермедиата по реакции Ugi - 4 CR с получением формулы II.
Операция способа:
Синтез Ν,Ν-dimethyl glycine
Глицин (0,75 г, 10 ммоль) смешивают с раствором формальдегида (1,62 мл, 22 ммоль, 37 мас. %) и 100 мг Pd (С) в присутствии Н2 (г) с получением Ν,N-диметилглицина (1,03 г, 100 мас. %) в соответствии с процедурой А, описанной ниже.
Двойное метилирование путем восстановительного аминирования: в трехгорлой круглодонной колбе 10 ммоль аминокислоты растворяют в 20 мл смеси вода / МеОН 1:1 (об./об.). Добавляют 37 мас. % раствор формальдегида в воде (1,62 мл, 22 ммоль) и Pd (С) (100 мг) и в присутствии H2 (г) суспензию перемешивают при комнатной температуре (RT) в течение 11 часов. Полученную смесь фильтруют через целит, и растворитель выпаривают при пониженном давлении до сухости, получая чистую диметиламинокислоту в виде расплывающегося желтоватого твердого вещества.
Результаты HR-MS, 1H NMR и 13С NMR для Ν,Ν-dimethyl glycine:
HR-MS m/z: 104.0725 [М+Н]+, calcd for C4H10NO2: 104.0712. 1H NMR (400 MHz, Methanol-d4) δ 3.63 (s, 2H), 2.90 (s, 6H). 13C NMR (101 MHz, Methanol-d4) δ 169.84, 61.28, 44.19.
Пример 4. Способ синтез композиции (1d) по Ugi-4 CR:
Комбинация Ν,Ν-диметил-глицина (309 мг, 3 ммоль), параформальдегида (раствор формальдегида в воде) (90 мг, 3 ммоль), бензиламина (327 мкл, 3 ммоль) и н-бутилизоцианида (327 мкл, 3 ммоль) в реакции Ugi - 4 CR описанной выше, давала соединение 1d (439 мг, 48 мас. %) в виде желтого твердого вещества.
Реакция Ugi-4 CR: в колбе на 50 мл 3 ммоль параформальдегида и 3 ммоль аминного компонента - бензиламин суспендируют в МеОН (20 мл). Реакционной смеси дают перемешиваться при комнатной температуре до растворения параформальдегида, что указывает на полное образование соответствующего имина (около 1.5 часов). Затем добавляют 3 ммоль дважды метилированной аминокислоты (Глицин) и 3 ммоль изоцианидного компонента (н-бутилизоцианид) и смесь перемешивают 32 ч при комнатной температуре (КТ). Растворитель удаляют, смесь разбавляют 50 мл хлороформа и последовательно промывают насыщенным раствором NaHCO3 (2×15 мл) и рассолом (2×15 мл). Смесь сушат над Na2SO4 (безводным) и растворитель выпаривают.Очистку проводят флэш-хроматографией с использованием смеси растворителей DCM / МеОН в объемном соотношении 30:1, содержащей 0,1 мас. % NH3 (раствор NH3 в воде), с получением конечного продукта в виде сиропа от бледно-желтого до белого аморфного твердого вещества.
Результаты HR-MS, 1H NMR и 13С NMR для 1d.
HR-MS m/z: 306.2258 [M+H]+, calcd for C17H28N3O2: 306.2182. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.95 (t, J=5.7 Hz, 1H), 7.70 (t, J=5.7 Hz, 1H), 7.34 - 7.22 (m, 5H), 4.70 (s, 1H), 4.44 (s, 1H), 3.99 (s, 1H), 3.72 (s, 1H), 3.07 - 3.01 (m, 2H), 2.20 (s, 3H), 2.18 (s, 3H), 1.40 - 1.32 (m, 2H), 1.30 - 1.22 (m, 2H), 0.90 - 0.82 (m, 3H). 13C NMR (101 MHz, DMSO-d6) δ 170.01, 169.79, 167.84, 167.45, 137.55, 137.36, 128.58, 128.38, 127.55, 127.23, 127.13, 127.03, 61.80, 61.69, 54.87, 51.21, 49.14, 48.83, 47.39, 45.12, 45.08, 38.19, 38.08, 31.18, 31.10, 19.46, 13.62, 13.59.
Модифицированные производные соединения продуктов Ugi - промежуточный продукт, отвечающего формуле (I) полученный по схеме I для синтеза соединения - (2а-2d) - схемой III.
На втором этапе изобретения по схемой III происходит синтез конечного продукта за счет реакции взаимодействия соединения, отвечающего формуле (II) по Quaternary Ammonium Formation с получением формулы VI.
Пример 5. Синтез композиции (2а).
Метилирование соединения (1а) - химическая структура с формулой (II) (160 мг, 0,50 ммоль) с диметилсульфатом (48 мкл, 0,50 ммоль) в соответствии со схемой I дает соединение (2а) (223 мг, 100%) в виде желтоватого сиропа.
Результаты HR-MS, 1H NMR и 13С NMR для (2а):
HR-MS m/z: 334,2580 [М]+, calcd for C19H32N3O2+: 334.2489. 1H NMR (400 MHz, Methanol-d4) δ 7.39 (t, J=7.3 Hz, 1H), 7.35 - 7.21 (m, 5H), 4.73 (s, 1H), 4.57 (s, 1H), 4.09 (s, 1H), 3.98 (s, 1H), 3.78 (t, J=6.9 Hz, 1H), 3.72 (t, J=7.3 Hz, 1H), 3.17 (s, 5H), 3.13 (s, 4H), 3.08 - 3.02 (m, 2H), 1.50 - 1.37 (m, 2H), 1.38 - 1.24 (m, 2H), 0.92 (t, J=7.3 Hz, 3H). 13C NMR (101 MHz, cd3od) δ 171.73, 171.72, 171.40, 170.55, 170.18, 137.82, 137.45, 130.10, 129.64, 129.32, 129.00, 128.67, 128.40, 63.70, 63.67, 63.64, 63.61, 55.11, 53.87, 53.84, 53.80, 53.36, 51.24, 50.69, 40.32, 40.17, 32.47, 32.36, 28.22, 28.11, 21.06, 21.01, 14.07, 14.05.
Пример 6. Синтез композиции (2b).
Метилирование соединения 1b - химическая структура с формулой (II) (250 мг, 0,72 ммоль) с диметилсульфатом (69 мкл, 0,72 ммоль) в соответствии со схемой I давало соединение 2b (341 мг, 100%) в виде желтоватого сиропа.
Результаты HR-MS, 1H NMR и 13С NMR для 2b:
HR-MS m/z: 360.2691 [М]+, calcd for C21H34N3O2+: 360.2646. 1Н NMR (400 MHz, Methanol-d4) δ 7.39 (t, J=7.4 Hz, 1H), 7.34 - 7.22 (m, 5H), 4.72 (s, 1H), 4.57 (s, 1H), 4.08 (s, 1H), 3.98 (s, 1H), 3.78 (t, J=6.8 Hz, 1H), 3.72 (d, J=7.3 Hz, 1H), 3.48 (q, J=7.1 Hz, 2H), 3.17 (s, 5H), 3.13 (s, 4H), 1.81 - 1.67 (m, 4H), 1.65 - 1.56 (m, 1H), 1.38 - 1.23 (m, 4H), 1.17 (t, J=7.0 Hz, 5H). 13C NMR (101 MHz, cd3od) δ 171.76, 169.54, 169.23, 137.84, 137.50, 130.10, 129.64, 129.39, 129.00, 128.67, 128.42, 66.87, 63.71, 63.68, 63.65, 59.45, 55.10, 53.88, 53.84, 53.80, 53.36, 51.34, 50.80, 50.06, 33.63, 33.59, 30.66, 28.25, 28.09, 26.57, 26.53, 26.09, 26.00, 25.79, 24.21, 15.44.
Пример 7. Синтез композиции (2с).
Метилирование соединения 1с - химическая структура с формулой (II) (150 мг, 0,55 ммоль) с диметилсульфатом (52 мкл, 0,55 ммоль) в соответствии со схемой I давало соединение 2с (220 мг, 100%) в виде желтоватого сиропа.
Результаты HR-MS, 1H NMR и 13С NMR для 2с:
HR-MS m/z: 285.2585 [М]+, calcd for C15H32N3O2+: 286.2489. 1H NMR (400 MHz, Methanol-d4) δ 4.14 (s, 1H), 4.00 (s, 1H), 3.95 (s, 1H), 3.73 (t, J=6.8 Hz, 2H), 3.70 (s, 1H), 3.42 - 3.37 (m, 1H), 3.33 - 3.28 (m, 1H), 3.25 - 3.21 (m, 2H), 3.18 (s, 5H), 3.16 (s, 4H), 3.06 (t, J=7.2 Hz, 1H), 2.97 (ddd, J=7.1, 5.3, 1.7 Hz, 1H), 1.66 (h, J=7.4 Hz, 1Η), 1.57 - 1.45 (m, 3H), 1.42 - 1.29 (m, 2H), 1.00 - 0.90 (m, 3H), 0.88 (t, J=7.4 Hz, 3H). 13C NMR (101 MHz, Methanol-d4) δ 171.34, 171.33, 170.88, 170.65, 63.76, 63.72, 63.69, 63.67, 63.64, 63.61, 55.09, 55.09, 53.91, 53.87, 53.83, 53.79, 53.75, 51.83, 51.48, 50.41, 40.35, 40.15, 32.50, 32.42, 28.19, 27.74, 22.47, 21.63, 21.06, 21.01, 14.08, 14.04, 11.54, 11.36.
Пример 8. Синтез композиции (2d).
Метилирование соединения 1d - химическая структура с формулой (II) (180 мг, 0,59 ммоль) с диметилсульфатом (56 мкл, 0,59 ммоль) в соответствии со схемой I давало соединение 2d (254 мг, 100%) в виде желтоватого сиропа.
Результаты HR-MS, 1H NMR и 13С NMR для 2d:
HR-MS m/z: 320.2399 [М]+, calcd for C18H30N3O2+: 320.2333. 1Н NMR (400 MHz, Methanol-d4) δ 7.34 - 7.24 (m, 5H), 4.62 (s, 1H), 4.58 (s, 1H), 4.57 (s, 1H), 4.49 (s, 1H), 3.99 (s, 1H), 3.97 (s, 1H), 3.39 (s, 5H), 3.37 (s, 4H), 3.34 - 3.27 (m, 2H), 3.18 (t, J=7.0 Hz, 1H), 3.11 (t, J=7.1 Hz, 1H), 1.49- 1.38 (m, 2H), 1.35 - 1.25 (m, 2H), 0.97 - 0.88 (m, 3Н). 13C NMR (101 MHz, cd3od) δ 169.90, 169.36, 166.46, 165.93, 137.16, 136.33, 130.18, 129.73, 129.54, 129.29, 128.89, 128.66, 64.52, 64.28, 59.44, 55.12, 55.11, 54.87, 52.87, 51.19, 50.08, 49.85, 40.39, 40.18, 32.44, 32.30, 21.06, 21.00, 14.05, 14.04.
Ферментативные исследования
Для проведения испытаний заявленных структур в отношении способности ингибировать AChE использовали набор (К-197) для скрининга ингибиторов AChE - компании BioVision для выявления потенциальных ингибиторов активности AChE. Он использует способность активного фермента AChE человека гидролизовать предоставленный колориметрический субстрат, создавая желтый хромофор, который может быть обнаружен путем измерения оптической плотности при 412 нм. В присутствии мощного обратимого ингибитора AChE донепезила активность фермента подавляется, предотвращая образование хромофора. Набор для анализа адаптирован к 96-луночному формату и обеспечивает быстрый, простой и надежный тест для высокопроизводительного скрининга ингибиторов AChE. Измерение проводилось на приборе iMark™ Фотометр для микропланшетов - Компания Bio-Rad.
Соединение разбавили в буфере в разных концентрациях (1:1, 1:10 и т.д.)
Ниже приведен результат испытаний соединений на их способность ингибировать AChE.
Проблема разработки новых препаратов, оказывающих эффективное терапевтическое действие остается актуально. Лекарственные средства, которые используются, как правило, не всегда эффективны, зачастую приводят к различным побочным эффектам после длительного использования.
Работая в этом направлении, нами экспериментально были исследованы бактерицидные свойства для 1c, 1d, 2а и 2b.
Согласно ГОСТ 32893-2014 Образцы 1с и 1d приводят к тушению свечения биосенсора по сравнению с контролем менее чем на 20%. Это свидетельствует о том, что образцы 1с и 1d безвредны для человека.
Согласно ГОСТ 32893-2014 образцы 2а и 2b вызывают тушение свечения биосенсора более чем на 20% по сравнению с контролем. В этом случае образцы 2а и 2b считаются токсичными.
Преимущество соединений в том, что они в своей структуре имеют бис-амиды и холиновые фрагменты, синтезированы путем многокомпонентной реакции (Ugi-4 CR) и методом образования четвертичных аммониевых соединений, реакция (Ugi-4 CR) в отличие от других реакционных методов, дает пептидоподобную структуру, известную как бис-амиды или пептомеры, которые классифицируются как пептидомиметики и обладают многообещающими фармакологическими свойствами. Кроме того, реакция U-4CR является экономичной и экологически чистой, поскольку ее также можно проводить в воде в качестве растворителя. Реакция (Ugi-4 CR) считается ключевым этапом в синтезе многих природных продуктов.
Список литературы:
1. https://go.drugbank.com/drugs/DB00843
2. https://go.drugbank.com/drugs/DB00989
3. https://go.drugbank.com/drugs/DB00674
4. https://go.drugbank.com/drugs/DB00382
5. Жариков Г.Α., Калiн Я.Б., Колiхалов И.В. и др. Опыт применения арисепта (донепезила) в лечении болезни Альцгеймера // Болезнь Альцгеймера и старение. - М.: Пульс, 2003. - С.76-87.
6. Волошин П.В., Мiщенко Т.С., Дмитрiева О.В. Судинна деменцiя // Мистецтво лiкування. - 2004. - №5. - С.36-40.
7. Burns Α., Rossor Μ., Hecker J. et al. The effect of donepezil in Alzheimer's disease: results from a multinational trial // Dementia Cognitive Geriatr. Disord. - 1999. -Vol. 10 - P. 237-244.
8. Мищенко T.C. Деменция - это не нозологическая форма, а синдром // НейроNews. - 2009. - №2/1. - С.6-9.
9. Cummings J.L., Frank J.С., Cherry D. et al. Guidelines for managing Alzheimer's disease // Amer. Fam. Physician. - 2002. - Vol. 65. - P. 2525-2534.
10. Gauthier S., Emre M., Farlow M.R. et al. Strategies for continued successful treatment of Alzheimer's disease: switching cholinesterase inhibitors // Curr. Med. Res. Opin. - 2003. - Vol. 19. - P. 707-714.
11. Farlow M.R., Cummings J.L., Effective pharmacological management of Alzheimer's disease // Amer. J. Med. - 2007. - Vol. 120. - P. 388-397.
12. Mendez M.F., Cummings J.L. Dementia. - Philadelphia: Butterworth Heinemann, 2003. - 654 p.
1. Способ получения ингибитора ацетилхолинэстеразы (AChE) формулы (VI)
,
где R1 представляет собой бензил, н-пропил, R2 представляет собой н-бутил, циклогексил, n = 1, 2,
состоящий из двух этапов, на первом этапе получают соединение формулы (I)
,
где R1 представляет собой бензил, н-пропил, R2 представляет собой н-бутил, циклогексил, n = 1, 2,
взаимодействием соединений, охарактеризованных структурными формулами (II), (III), (IV) и (V) соответственно
,
в которых R1, R2 и n имеют указанные выше значения,
в присутствии метанола с последующей обработкой реакционной смеси последовательно хлороформом и насыщенным раствором NaHCO3 с дальнейшим выпариванием растворителя и очисткой конечного продукта флэш-хроматографией с использованием смеси растворителей дихлорметан/МеОН при объемном соотношении растворителей 30:1, содержащей 0,1 мас.% NH3, с получением конечного продукта в виде сиропа от бледно-желтого до белого аморфного твердого вещества,
на втором этапе получают соединение формулы (VI) взаимодействием соединений, охарактеризованных формулами (I), (VII) соответственно
,
при этом соединение (I) растворяют в ацетоне и метилируют диметилсульфатом (1 экв.) с получением соединения формулы (VI) в виде бледно-желтого сиропа.
2. Ингибитор ацетилхолинэстеразы (AChE), полученный способом по п. 1.