Соединение, способ получения соединений, обогащенный экстракт, активные фракции обогащенного экстракта, способ получения обогащенного экстракта, способ отбора растительной биомассы для получения обогащенного экстракта, композиция и применение для лечения иммунологических нарушений

Авторы патента:

C07D311/94 - конденсированные с кольцами иными, чем шестичленные или с циклическими системами, содержащими такие кольца

A61P37/00 - Лекарственные средства против иммунологических или аллергических заболеваний

A61K36/00 - Лекарства и медикаменты для терапевтических, стоматологических или гигиенических целей (изготовление специальных лекарственных форм A61J; химические аспекты или использование материалов для дезодорации воздуха, для дезинфекции или стерилизации или для бандажей, перевязочных средств, впитывающих прокладок или хирургических приспособлений A61L; соединения как таковые C01, C07,C08,C12N; мыла C11D; микроорганизмы как таковые C12N)

A61K31/352 - конденсированные с карбоциклическими кольцами, например каннабинолы, метантелин

Владельцы патента RU 2781809:

АКЕ ЛАБОРАТОРИУС ФАРМАСЕУТИКУС С.А. (BR)

Изобретение относится к соединениям общей формулы (С), которые являются производными иполамиида, где R представляет собой H; R₁, R₁^’, R₁^” представляют собой H или OH; R₂ представляет собой H, COOH, COOCH₃ или CHO; R₃ представляет собой H или OH; и R₄, R₄^’ представляют собой H, OH, CH₂OH или CH₃. Изобретение также относится к фармацевтической композиции для блокирования активации CD8+ Т-клеток и снижения секреции IFN-γ на основе соединений формулы (С). Раскрываются также экстракты из растений рода Stachytarpheta, обогащенные производными иполамиида формулы (С), и их способ получения. Технический результат – получены новые соединения и фармацевтическая композиция на их основе, которые могут найти применение в медицине для лечения витилиго. 7 н. и 12 з.п. ф-лы, 4 ил., 4 табл.

Область техники, к которой относится изобретение

В настоящем изобретении описаны новые и изобретательские выделенные соединения и экстракты, обладающие иммуносупрессивной активностью, а также способ получения соединений из иполамиида и экстрактов из растений рода Stachytarpheta. Таким образом, настоящая заявка также описывает новые и изобретательские композиции и их применение для лечения иммунологических нарушений. Настоящее изобретение относится к области фармации, медицины и химии.

Уровень техники изобретения

Иммунологические нарушения

Иммунологические нарушения можно рассматривать как любой дисбаланс или нарушение работы иммунной системы. Эта система в первую очередь отвечает за помощь в защите организма от внешних или неизвестных агентов с помощью антител, которые распознают и борются с опасными антигенами.

Аутоиммунные заболевания являются примером иммунологических нарушений, при которых организм начинает вырабатывать антитела против собственных молекул, не делая различий между эндогенными и экзогенными агентами. В таких случаях лекарственные средства с иммуносупрессивной активностью будут крайне востребованы, чтобы помочь пациентам облегчить симптомы, вызванные этим типом расстройства.

Аутоиммунные заболевания, за исключением ревматоидного артрита и аутоиммунного тиреоидита, встречаются индивидуально редко, но вместе они поражают примерно 5% населения западных стран. Их этиология до конца не изучена. При органоспецифических и системных аутоиммунных заболеваниях наблюдается потеря способности иммунной системы отличать свое от того, что не свое. Эта способность, называемая аутотолерантностью, поддерживается в иммунокомпетентных В- и Т-клетках как центральными, так и периферическими механизмами. Потеря аутотолерантности может иметь внутренние или внешние причины. Факторы окружающей среды, такие как бактериальные и вирусные инфекции, воздействие физических и химических агентов, таких как УФ, пестициды и лекарственные средства, являются примерами внешних причин. Внутренние причины, то есть связанные с особенностями самого индивида, обычно связаны с полиморфизмами молекул гистосовместимости, компонентов врожденного иммунитета, таких как система комплемента и Toll-подобные рецепторы, компонентов приобретенного иммунитета в виде регуляторных лимфоцитов и цитокинов, в дополнение к гормональным факторам, которые находятся под генетическим контролем.

Терапевтическая стратегия при аутоиммунных заболеваниях в основном заключается в подавлении иммунологической системы с помощью иммунодепрессантов, которые действуют на подавление ранних стадий развития иммунитета. Эта терапия не выполняет селективную иммуносупрессию, которая привела к выработке различных антител. Биологические агенты могут использоваться для ингибирования действия цитокинов, как это происходит с антицитокиновыми моноклональными антителами или с использованием растворимых рецепторов, которые связываются с цитокином и блокируют их действие на клетки-мишени. Цитокины также используются в биологической терапии через аналогичные рекомбинантные белки, которые имитируют действие исходного цитокина. Основными терапевтическими мишенями в антицитокиновой терапии являются провоспалительные цитокины интерлейкин-1 (IL-1), TNFα и IL-6, и основная терапия агонистами цитокинов проводится с использованием интерферонов I типа (IFN). В семействе интерферонов I типа рекомбинантные белки IFNα и IFNβ используются в клинической практике, прежде всего для лечения вирусных гепатитов (вирус гепатита В и С) и рассеянного склероза, соответственно. Для последних, предлагаемый механизм действия является антагонизмом, который INFβ оказывает против IFNγ, который имеет большое значение в физиопатологии рассеянного склероза. IFNα также использовали для лечения кожно-слизистых, глазных и неврологических проявлений болезни Бехчета и синдрома Шурга-Штрауса. Фонтолизумаб является гуманизированным анти-IFNγ-средством, который был оценен у пациентов с аномалиями в дендритных клетках с хорошими результатами.

Моноклональные антитела обладают преимуществами при лечении аутоиммунных заболеваний по сравнению с традиционными методами лечения, поскольку они являются таргетной терапией со специфичностью и высокой селективностью. Тем не менее, они используются в качестве второй линии лечения, когда нет эффективности в борьбе с аутоиммунными заболеваниями с помощью традиционных методов лечения. В дополнение к ограничениям на эффективность, моноклональные антитела все еще имеют несколько ограничений связанных с ценой и доступностью. Некоторые аутоиммунные заболевания все еще не имеют эффективных методов лечения, с хорошей переносимостью пациентами.

Продукты природного происхождения веками использовались при лечении различных заболеваний. В последнее время основные усилия были предприняты в разработке новых исследований растительных препаратов с иммуносупрессивными эффектами. Например, несколько клинических испытаний, проведенных в Соединенных Штатах, уже показали значительные преимущества экстракта T. wilfordii у пациентов с ревматоидным артритом. Несмотря на то, что существует несколько видов и их активных компонентов с описанными механизмами действия, все еще предстоит исследовать обширную область, касающуюся исследований in vitro и in vivo и будущих клинических испытаний при иммунологически обусловленных заболеваниях. Эти продукты природного происхождения должны быть сформулированы в соответствующих фармацевтических композициях, чтобы обеспечить эффективность лечения аутоиммунных заболеваний.

Примером аутоиммунного заболевания, для которого до сих пор не существует эффективного лекарственного средства, а тем более лекарственного средства, полученного из натуральных экстрактов, может быть витилиго. Витилиго обычно связано с потерей функциональных меланоцитов и считается наиболее распространенным приобретенным нарушением депигментации у людей, поражающим по меньшей мере 0,5% населения мира. Заболевание характеризуется развитием белых пятен в результате потери эпидермальных меланоцитов, что может привести к разрушению клеток посредством специфического цитотоксического иммунного ответа на меланоциты и повреждению их адгезивной системы.

Множество механизмов связано с витилиго, таких как генетическая предрасположенность, активация окружающей среды, метаболические аномалии и изменения в иммунных и воспалительных реакциях. Кроме того, такие условия, как воздействие ультрафиолетового излучения и окислительный стресс, как известно, усугубляют это состояние.

Из-за отсутствия конкретных знаний о инициации начала заболевания, в нескольких исследованиях предпринята попытка выяснить биологические пути, вовлеченные в этот патогенез. Большинство из них указывают на сложность и проблемы, связанные с таким заболеванием, и очень трудно найти эффективное лечение. Нельзя забывать, что большинство иммунологических нарушений оказывают важное социальное воздействие, вызывая высокий уровень психологического стресса у пациентов. На сегодняшний день нет вмешательства, способного обеспечить лечение витилиго.

Таким образом, становится очевидной необходимость выявления новых соединений, способных стимулировать иммуносупрессивную активность с длительным эффектом. Таким образом, настоящее изобретение устраняет этот пробел в лечении иммунологических нарушений с помощью новых соединений, которые, будучи выделенными, демонстрируют иммуносупрессивную активность, и активных экстрактов, включающих группы активных соединений, которые получены уникальным и разработанным способом.

Подчеркивая сложность и отсутствие научных знаний о витилиго, до сих пор считалось, что структура иполамиида в его интактной форме может быть связана с иммуносупрессивной активностью, имеющей отношение к лечению пациентов с витилиго. Однако в настоящем изобретении авторы изобретения демонстрируют, что эта активность обусловлена конкретными производными иполамиида и экстрактов, включающих такие соединения, предпочтительно получаемых с помощью уникальных и разработанных способов получения, описанных в настоящем документе. Как соединения, так и экстракты обладают иммуносупрессивной активностью, подтвержденной экспериментально. Эта активность демонстрируется в настоящем документе блокированием активации CD8+ T-клеток и снижением секреции IFN-γ. Было показано, что этот механизм является перспективным для витилиго с учетом последних клинических результатов, связанных с количественным определением этих компонентов в коже пациентов. В частности, высокие концентрации CD8+ T-клеток и IFN-γ связаны с апоптозом меланоцитов и, следовательно, их модуляция является перспективным механизмом действия.

Из того, что может быть выведено из изученной литературы, не было найдено никаких документов, предвосхищающих или предлагающих идеи настоящего изобретения, так что предлагаемое в настоящем описании техническое решение обладает новизной и изобретательской активностью с учетом уровня техники.

Сущность изобретения

Настоящее изобретение описывает новые и изобретательские соединения, полученные из иполамиида, которые обладают иммуносупрессивной активностью. Поэтому их можно использовать для лечения иммунологических нарушений. Кроме того, настоящее изобретение описывает растительные экстракты, обогащенные указанными соединениями, полученные из иполамиида, полученные уникальным способом получения, также обладающие иммуносупрессивной активностью.

Таким образом, объектом настоящего изобретения являются производные иполамиида, включающие соединения общей формулы:

где R представляет собой H, OH, OGlyc (Гликозид); R₁, R_1’, R_1” представляют собой H, OH; R₂ представляет собой H, COOH, COOCH₃, CH₃, CHO; R₃ представляет собой H, OH, CH₃; R₄, R_4’ представляют собой H, OH, CH₂OH, CH₃; R₅, R_5’ представляют собой H, CH₃, COOCH₃, CHO, CH₂OH; R₆ представляет собой CHO, COOH, COOCH₃; R₇ представляет собой H, CH₃; R₈, R_8’, R_8” представляют собой CHO, CH₃, CH₂OH, COOH и пунктирные связи представляют собой одинарные (С-С) или двойные (С=С) связи между атомами углерода (до двух двойных связей на структуру).

В предпочтительном варианте осуществления по меньшей мере, одно предпочтительное соединение по настоящему изобретению может быть выбрано из группы, включающей следующие структуры:

В этом предпочтительном варианте осуществления соединение общей формулы (I) включает соединения формулы (IV), (V), (VIII) и (IX), соединение общей формулы (II) включает соединение формулы (VII), (X) и (XI) и соединение общей формулы (III) включает соединение формулы (VI).

Также объектом настоящего изобретения является способ лечения иммунологических нарушений, включающий введение пациенту соединения общей формулы (I), (II) и/или (III) в количестве, достаточном для обеспечения иммуносупрессивного эффекта. В предпочтительном варианте осуществления способ лечения предназначен для лечения витилиго.

Таким образом, также можно рассмотреть применение по меньшей мере одного соединения общей формулы (I), (II) и/или (III) в композиции для лечения иммунологических нарушений.

Кроме того, объектом настоящего изобретения является фармацевтическая композиция для лечения иммунологических нарушений, включающая, по меньшей мере, одно соединение, выбранное из групп, включающих соединения общей формулы:

a) ,

b) ; и/или

c) ,

d) фармацевтически приемлемый носитель.

В необязательном варианте осуществления композиция по настоящему изобретению дополнительно включает иполамиидное соединение.

В необязательном варианте осуществления композиция по настоящему изобретению может дополнительно включать по меньшей мере одно из следующих соединений:

Кроме того, настоящее изобретение описывает способ получения соединений общей формулы (I), (II) и/или (III), включающий стадию подвергания по меньшей мере одного иполамиидного соединения по меньшей мере одной стадии нагревания при высоких температурах в присутствии по меньшей мере одного подходящего растворителя в течение достаточного времени для получения соединений общих формул (I), (II) и/или (III).

В предпочтительном варианте осуществления высокие температуры по настоящему изобретению включают температуры выше 35°С, более предпочтительно от 35°С до 165°С.

В предпочтительном варианте осуществления способ получения соединений общей формулы (I), (II) и/или (III) включает подвергание по меньшей мере одного иполамиидного соединения по меньшей мере одной стадии гидролиза и/или сольволиза. Еще более предпочтительно, по меньшей мере одно иполамиидное соединение подвергается стадии кислотного гидролиза. Необязательно, по меньшей мере, одно соединение иполамиида подвергают стадии щелочного гидролиза/гидролиза основанием.

Как упоминалось ранее, авторы изобретения подтвердили, что выделенный иполамиид не проявляет иммуносупрессивную активность. С другой стороны, определенные группы соединений, полученных из иполамиида, обладают такой активностью. В то же время авторы изобретения также указали преимущества получения лекарственных средств растительного происхождения для лечения заболеваний, поскольку эти системы получения соединений обеспечивают ряд продуктивных взаимодействий между компонентами растения и активными соединениями, часто даже синергетически. Таким образом, чтобы кроме того получить лекарственное средство растительного происхождения, включающее такие активные соединения, авторы изобретения разработали уникальный способ получения, который позволяет получать экстракт, обогащенный интересующими соединениями. Как описано ниже, способ получения экстракта по настоящему изобретению включает уникальные стадии, которые приводят к получению экстрактов, обогащенных производными иполамиида с иммуносупрессивной активностью. Авторы изобретения проверили актуальность предварительного отбора исходных растительных биомасс, включающих от 2,5% до 3,5% иполамиида, в результате чего получают экстракт, обогащенный иполамиидом и соединениями, полученными из иполамиида, от примерно 1% до примерно 20%, предпочтительно от примерно 8,5% до примерно 11,5% содержания иполамиида и производных.

Как указывалось ранее, растительная биомасса, включающая это соединение, будет использоваться в качестве исходного материала для способа получения экстракта. Только с помощью способа получения по настоящему изобретению можно получить экстракт, обогащенный конкретными соединениями, полученными из иполамиида. Этот обогащенный экстракт, кроме того, обладает иммуносупрессивной активностью.

Таким образом, дополнительным объектом настоящего изобретения является способ получения экстракта, обогащенного соединениями, полученными из иполамиида, включающий, в основном, стадии:

а) отбора исходной растительной биомассы с содержанием иполамиида от 2,5% до 3,5%, полученной из растений рода Stachytarpheta;

b) подачи отобранной биомассы из а) на сушку в печи при температуре от 40 до 80°С, до получения стабилизации влажности от 10 до 12%;

с) измельчения растительной биомассы;

d) осуществления экстракции растительной биомассы с помощью стадий:

i. нагревания растительной биомассы при температуре от 70 до 100°С при постоянном перемешивании;

ii. мацерации растительной биомассы при комнатной температуре;

iii. нагревания растительной биомассы с температурой от 70 до 100°C.

В предпочтительном варианте осуществления способ получения по настоящему изобретению дополнительно включает стадии:

iv. фильтрации и концентрирования экстракта;

v. сушки в распылительной сушилке в течение от 1 до 60 секунд с температурой на входе от 155 до 165°C и температурой на выходе от 85 до 95°C в сочетании с осушителем.

В предпочтительном варианте осуществления способ экстракции по настоящему изобретению представляет собой водный или водно-спиртовой способ, еще более предпочтительно водный способ.

Таким образом, способ получения по настоящему изобретению позволяет получить стандартизированный экстракт, обогащенный соединениями, полученными из иполамиида, предпочтительно с выходом от примерно 8% до примерно 10%.

Следовательно, дополнительным объектом настоящего изобретения является экстракт, обогащенный соединениями, полученными из иполамиида, полученными вышеупомянутым способом. Стандартизированный экстракт, обогащенный соединениями, полученными из иполамиида по настоящему изобретению, включает, предпочтительно, соединения формулы (I), (II) и/или (III).

Растительная биомасса по настоящему изобретению включает все части растений рода Stachytarpheta. Предпочтительно растительная биомасса включает надземные части растений, более предпочтительно листья.

В предпочтительном варианте осуществления исходная растительная биомасса включает, по меньшей мере, одну растительную биомассу с равномерным содержанием иполамиида от 2,5% до 3,5%. В необязательном варианте осуществления исходная растительная биомасса включает более одной растительной биомассы, где разные растительные биомассы имеют различное содержание иполамиида независимо, но вместе достигают однородного содержания иполамиида (от 2,5% до 3,5%).

В другом предпочтительном варианте осуществления актуальное содержание иполамиида в исходной растительной биомассе может быть использовано в качестве параметра для прогнозирования теоретического содержания иполамиида и его производных в полученном экстракте. Этот прогноз может быть выполнен способом, включающим стадию применения уравнения I к некоторым параметрам, полученным экспериментально, чтобы найти идеальные пропорции иполамиида в исходной растительной биомассе, который предпочтительно прогнозирует содержание иполамиида и производных в экстракте от 8,5% до 11,5%. Уравнение I приведено ниже:

% Теоретическое содержание иполамиида и производных в экстракте = % Актуальное содержание иполамиида в растительной биомассе x DER / (<актуальное содержание иполамиида и производных в экстракте/актуальное содержание иполамиида в исходной растительной биомассе >) ± стандартное отклонение (уравнение I).

Таким образом, можно прогнозировать теоретическое содержание иполамиида и его производных в экстракте из актуального содержания иполамиида в исходной растительной биомассе. Предпочтительно соотношение между актуальным содержанием иполамиида и производных в экстракте/содержанием иполамиида в исходной растительной биомассе составляет от примерно 3,0 до примерно 3,5.

В еще более предпочтительном варианте осуществления растения по настоящему изобретению включают Stachytarpheta cayennensis.

Таким образом, дополнительным объектом настоящего изобретения является использование стандартизированного экстракта, обогащенного соединениями, полученными из иполамиида, полученного из растений рода Stachytarpheta, для получения лекарственного средства с иммуносупрессивной активностью.

Таким образом, дополнительным объектом настоящего изобретения является по меньшей мере одна активная фракция экстракта, обогащенная соединениями, полученными из иполамиида. Предпочтительно, по меньшей мере одна фракция включает по меньшей мере одно соединение, полученное из иполамиида формулы (I), (II) и/или (III).

В необязательном варианте осуществления, активная фракция обогащенного экстракта дополнительно включает иполамиид.

Таким образом, дополнительным объектом настоящего изобретения является использование по меньшей мере одной стандартизированной фракции, обогащенной соединениями, полученными из иполамиида, полученного из растений рода Stachytarpheta для получения лекарственного средства с иммуносупрессивной активностью.

Эти и другие объекты изобретения будут понятны специалистам в данной области техники и компаниям, имеющим интересы в сегменте, и будут описаны достаточно подробно для их воспроизведения в последующем описании.

Подробное описание фигур

Фиг. 1 - Упрощенная блок-схема, описывающая способ получения активного экстракта, обогащенного производными иполамиида, полученными из Stachytarpheta cayennensis.

Фиг. 2 - Эффект водного экстракта Stachytarpheta cayennensis (3, 10 и 30 мкМ, концентрация, представленная в иполамииде) и выделенного иполамиида (3, 10 и 30 мкМ) на пролиферацию CD8+ T-клеток, активированных αCD3/CD28 (A) и продукция IFNγ (B). Эффект группы соединений (IV-VIII) и пяти новых выделенных соединений (IV-VIII), полученных после кислотного гидролиза иполамиида (30 мкМ), также оценивали в тех же экспериментах, пролиферация CD8+ T-клеток, активированных αCD3/CD28, (C) и продукция IFNγ (D). Такролимус (0,5 мкМ) использовали в качестве положительного контроля для всех экспериментов. Данные представляют собой среднее ± SD трех повторностей.

Фиг. 3 - Эффект кислотного гидролиза иполамиида на образование его производных. Хроматограмма интактного иполамиида (синий); Иполамиид гидролизуют при 0,1 н. HCl при 40°С в течение 1 ч (зеленый); Иполамиид гидролизуют при 0,1 н. HCl при 40°С в течение 2 ч (красный); Иполамиид гидролизуют при 0,1 н. HCl при 40°С в течение 5 ч (пурпурный). IPO=иполамиид.

Фиг. 4 - Хроматограмма экстракта Stachytarpheta cayennensis, полученного в заявленном в настоящем описании способе получения. Фигура иллюстрирует маркер иполамиида и его специфические производные во время удерживания: 5,5; 9,7; 12,0; 14,3; 17,3 мин. IPO=иполамиид.

Подробное описание изобретения

Приведенные в настоящем описании примеры предназначены исключительно для иллюстрации одного из нескольких способов осуществления изобретения, однако без ограничения его объема.

Активные соединения

В настоящем изобретении представлены новые и изобретательские группы соединений, включающие следующие общие формулы:

Пример 1: Соединения общей формулы (I) включают следующие структуры.

Пример 2: Соединения общей формулы (II) включают следующие структуры.

Пример 3: Соединения общей формулы (III) включают следующие структуры.

Указанные выше структуры иллюстрируют химические структуры основных цепей, включенных в формулы (I), (II) или (III).

Иммунные нарушения

Термин «иммунные нарушения» по настоящему изобретению включает любую дисфункцию иммунной системы. Обычно нарушения могут характеризоваться пораженными компонентами иммунной системы или уровнем активности иммунной системы. В настоящем изобретении, предпочтительно, иммунные нарушения относятся к заболеваниям, которые имеют некоторые признаки аутоиммунитета. В настоящем изобретении можно считать, что витилиго еще более предпочтительно выбирается среди возможных иммунных нарушений.

Способ лечения иммунных нарушений

Настоящее изобретение описывает способ лечения иммунных нарушений, включающий введение пациенту соединения общей формулы (I), (II) и/или (III) в количестве, достаточном для обеспечения иммуносупрессивного эффекта. Следует отметить, что для целей настоящей патентной заявки лечение иммунных нарушений может быть достигнуто с использованием производных иполамиида и/или фракций и/или экстрактов, включающий производные иполамиида, причем любое из них обладает иммуносупрессивной активностью. В предпочтительном варианте осуществления способ лечения предназначен для лечения витилиго.

Фармацевтическая композиция, включающая выделенные соединения, полученные из иполамиида.

В одном варианте осуществления фармацевтическая композиция по настоящему изобретению включает выделенные производные иполамиида, используемые отдельно или в комбинации, для лечения иммунологических нарушений, где соединения включают, по меньшей мере, одно соединение, выбранное из группы, включающей:

a) ,

b) ; и/или

c) ,

d) фармацевтически приемлемый носитель.

В необязательном варианте осуществления вышеуказанная фармацевтическая композиция дополнительно включает иполамиидное соединение.

В предпочтительном варианте осуществления фармацевтическая композиция по настоящему изобретению включает соединения:

Фармацевтическая композиция по настоящему изобретению может дополнительно включать следующие соединения:

;

и фармацевтически приемлемый носитель.

Фармацевтически приемлемый носитель.

Для осуществления их активности, соединения общей формулы (I), (II) и/или (III) следует вводить в организмы животных, млекопитающих, в частности, человеку, предпочтительно в форме фармацевтической композиции, т.е. связанной с фармацевтически приемлемыми носителями, которые подходят для каждого пути введения.

Фармацевтические композиции по настоящему изобретению включают в качестве активного ингредиента одно или несколько соединений, предлагаемых в настоящем документе, связанных с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми носителями. Активный ингредиент обычно смешивают, разбавляют или инкапсулируют по меньшей мере с одним носителем.

Когда носитель является разбавителем, он может находиться в твердой, полутвердой или жидкой форме, выступая в качестве носителя, эксципиента или среды для активного ингредиента. Следовательно, композиция может быть в форме таблеток, пилюль, порошков, саше, суспензий, эмульсий, растворов, аэрозолей (в твердой или жидкой среде), кремов, твердых или мягких капсул, суппозиториев, растворов для инъекций.

В настоящем изобретении предпочтительно рассматривать в качестве фармацевтически подходящего носителя любое вещество, отличное от соединения общей формулы (I), (II) или (III), которое было намеренно добавлено к нему для получения фармацевтической лекарственной формы, соответствующей пути введения. Неограничивающие примеры фармацевтических эксципиентов, подходящих для получения фармацевтических композиций, описаны в Handbook of Pharmaceutical Manufacturing Formulations - Vol. 1 to 6-2004 - Sarfaraz K. Niazi - CRC Press e Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing.

Неограничивающими примерами путей введения композиции, включающей соединение общей формулы (I), (II) или (III), являются местный, пероральный, парентеральный, назальный, ректальный, трансмукозальный, трансдермальный пути.

Терапевтическая доза для использования соединений по настоящему изобретению, должна планироваться и рассчитываться в соответствии с выбранным путем введения, возрастом, массой и состоянием пациента и тяжестью нарушения, подлежащего лечению. Обычно соединения по настоящему изобретению вводят в терапевтически эффективных дозах. Эффективные дозы могут быть экстраполированы из кривых доза-ответ, полученных in vitro или на животных моделях. Как правило, врач будет вводить соединение до соответствующей дозы для достижения желаемого эффекта.

Способ получения активных соединений

Настоящее изобретение подробно описывает способ получения активных соединений общей формулы (I), (II) и/или (III). По существу, способ получения выделенных соединений включает стадию подвергания по меньшей мере одного иполамиидного соединения по меньшей мере одной стадии нагревания при высоких температурах в подходящем растворителе в течение времени, достаточного для получения соединений, полученных из иполамиида общей формулы (I), (II) и/или (III).

В предпочтительном варианте осуществления растворитель по настоящему изобретению включает воду.

Кроме того, настоящее изобретение описывает способ получения соединений общей формулы (I), (II) и/или (III), включающий стадию подвергания по меньшей мере одного иполамиидного соединения стадии нагревания при высоких температурах в подходящем растворителе в течение достаточного времени для получения соединений, полученных из иполамиида общей формулы (I), (II) и/или (III).

В предпочтительном варианте осуществления высокие концентрации соединений формулы (I), (II) и/или (III) по настоящему изобретению получают из полного превращения (100%) содержания иполамиида, используемого в соответствующем способе получения.

Еще более предпочтительно высокие концентрации по настоящему изобретению включают от примерно 0,5% до примерно 45% каждого соединения (IV-VIII) в смеси. В этом случае концентрации включают от примерно 1 до примерно 5% соединения IV, предпочтительно 4%; от примерно 15 до примерно 25% соединения V, предпочтительно 19%; от примерно 1% до примерно 6% соединения VI, предпочтительно 3%; от примерно 35% до примерно 45% соединения VII или его изомеров (например, соединения X или соединения XI), предпочтительно 37%; от примерно 0,5% до примерно 4% соединения VIII или его изомеров (например, соединения IX), предпочтительно 2%.

В другом предпочтительном варианте осуществления растворитель по настоящему изобретению включает другие подходящие растворители.

В предпочтительном варианте осуществления способ получения активных соединений, полученных из иполамиида, включает стадию гидролиза или сольволиза иполамиида.

Еще более предпочтительно, гидролиз иполамиида может быть кислотного типа. Среди кислот, пригодных для кислотного гидролиза иполамиида, могут быть упомянуты хлористоводородная кислота, соляная, серная, азотная, фосфорная и уксусная кислоты, без каких-либо конкретных ограничений по отношению к любой из них. В предпочтительном варианте осуществления в настоящем изобретении используется хлористоводородная кислота.

В необязательном варианте осуществления, гидролиз иполамиида может быть основного/щелочного типа. Среди оснований, пригодных для основного/щелочного гидролиза иполамиида, можно назвать гидроксиды щелочных металлов, без особых ограничений к любому из них. В предпочтительном варианте осуществления в настоящем изобретении используется гидроксид натрия.

В еще более предпочтительном варианте осуществления гидролиз в кислой среде сопровождается гидролизом в основной/щелочной среде. В качестве примера можно привести способ получения, включающий стадию подвергания по меньшей мере одного соединения иполамиида при высоких температурах и 0,1 н (экв./л) хлористоводородной кислоты с последующей инкубацией в течение различных временных интервалов, которые могут варьироваться от 0 до 120 минут. Затем гидролиз прерывается процессом нейтрализации с использованием, предпочтительно, гидроксида натрия 0,1 н.

В необязательном варианте осуществления, способ получения соединений общей формулы (I), (II) и/или (III) включает стадию гидролиза иполамиида в щелочной среде, проводимую с помощью водного раствора гидроксида натрия 0,1 н., поддерживаемую при 40°С в течение 2 часов.

Способ получения активных фракций/экстрактов, обогащенных производными иполамиида

Авторы изобретения подтвердили, что некоторые выделенные активные соединения по настоящему изобретению могут быть получены методами молекулярного конструирования и синтеза. В то же время авторы изобретения также указали преимущества получения лекарственных средств растительного происхождения для лечения заболеваний, поскольку эти системы получения соединений обеспечивают ряд продуктивных взаимодействий между компонентами растения и активными соединениями, часто даже синергетически. Таким образом, чтобы кроме того получить лекарственное средство растительного происхождения, включающее такие активные соединения, авторы изобретения разработали уникальный способ получения, который позволяет получать экстракт, обогащенный интересующими соединениями.

Как описано ниже, способ получения экстракта по настоящему изобретению включает уникальные стадии, которые приводят к получению экстрактов, обогащенных производными иполамиида с иммуносупрессивной активностью. Авторы изобретения проверили уместность предварительного выбора исходных растительных биомасс, включающих от 2,5% до 3,5% иполамиида, в результате чего получают экстракт, обогащенный иполамиидом и соединениями, полученными из иполамиида от примерно 8,5% до примерно 11,5%. Как было указано ранее, растительная биомасса, включающая иполамиид, будет использоваться в качестве исходного материала для способа получения экстракта. Только с помощью способа получения по настоящему изобретению можно получить экстракт, обогащенный конкретными соединениями, полученными из иполамиида. Этот обогащенный экстракт, кроме того, обладает иммуносупрессивной активностью.

Таким образом, настоящее изобретение обеспечивает способ получения стандартизированного экстракта, обогащенного производными иполамиида, из растений рода Stachytarpheta.

c) измельчения растительной биомассы;

d) осуществления экстракции растительной биомассы с помощью стадий:

i. нагревания растительной биомассы при температуре от 70 до 100°С при постоянном перемешивании;

ii. мацерации растительной биомассы при комнатной температуре;

iii. нагревания растительной биомассы с температурой от 70 до 100ºC.

iv. фильтрации и концентрирования экстракта;

% Теоретическое содержание иполамиида и производных в экстракте = % Актуальное содержание иполамиида в растительной биомассе x DER / (<актуальное содержание иполамиида и производных в экстракте/актуальное содержание иполамиида в исходной растительной биомассе >) ± стандартное отклонение (уравнение I).

Настоящее изобретение также относится к стандартизированным экстрактам, обогащенным соединениями, полученными из иполамиида, из растений рода Stachytarpheta, полученными в результате способа получения, описанного выше.

Стандартизированные экстракты из растений рода Stachytarpheta предпочтительно получают описанным выше способом получения, в результате чего получают экстракт, обогащенный иполамиидом и соединениями, полученными из иполамиида, от примерно 1% до примерно 20%, предпочтительно от примерно 8,5% до примерно 11,5% содержания иполамиида и производных.

Таким образом, дополнительным объектом настоящего изобретения является использование стандартизированных экстрактов растений рода Stachytarpheta, включающих соединения, полученные из иполамиида, для получения лекарственного средства с иммуносупрессивной активностью. Более конкретно, стандартизированные экстракты растений рода Stachytarpheta, включающие соединения, полученные из иполамиида общей формулы (I), (II) и/или (III) для получения лекарственного средства с иммуносупрессивной активностью.

Таким образом, дополнительным объектом настоящего изобретения является применение по меньшей мере одной стандартизированной фракции, обогащенной соединениями, полученными из иполамиида, полученного из растений рода Stachytarpheta, для получения лекарственного средства с иммуносупрессивной активностью.

Примеры - Предпочтительный вариант осуществления

Примеры, описанные в экспериментальной части, имеют единственную цель, заключающуюся в том, чтобы проиллюстрировать один из нескольких способов осуществления изобретения, однако без ограничения его объема.

Способ получения и идентификации активных соединений

Выделенные соединения по настоящему изобретению получали путем воздействия на иполамиидное соединение 0,1 н хлористоводородной кислоты при 40°С и 100°С в течение 1 ч, 2 ч и 5 ч. На фиг. 3 показано состояние при 40°C. Из этого эксперимента авторы изобретения могли наблюдать несколько продуктов этого гидролиза и, основываясь на хроматограммах, идентифицировать несколько производных иполамиида, таких как, например, структуры, описанные ниже, как показано на фиг. 3.

Альтернативно, гидролиз может быть осуществлен путем изменения концентрации хлористоводородной кислоты от 0,1 до 1 н, а температура эксперимента может варьироваться от 35°C до 165°C. Кроме того, время гидролиза может варьироваться от 1 минуты до 24 часов, чтобы способствовать образованию более высоких концентраций определенных производных иполамиида.

Способ получения экстракта

В соответствии с настоящим изобретением способ получения водного экстракта Stachytarpheta cayennensis, богатого производными иполамиида, в основном включает стадии получения стандартизированного экстракта, проиллюстрированные на блок-схеме на фиг.1, для получения материала для осуществления доклинических исследований в иммунологии.

Сначала семена, предпочтительно отобранные генотипированием Stachytarpheta cayennensis, подвергали процессу посева в течение двух месяцев в контролируемой среде относительно температуры, влажности и света. Посев проводили в пенополистирольные лотки, заполненные субстратом, и выдерживали в этой защищенной среде с контролируемым орошением. Всходы стали появляться через 10-15 дней. Лотки оставались в этих условиях до тех пор, пока всходы не достигли размеров и идеальных условий для постоянной высадки.

Рассаду с приблизительным размером от 5 до 8 см в высоту и с 2-3 парами окончательных листьев пересаживали на участок выращивания, который предпочтительно имел среднегодовую температуру 30°C, среднегодовую относительную влажность менее 55% и в котором почва имела предпочтительно, но не ограничиваясь, результаты конкретных химических и физических анализов почвы, например, кислотность, кальций, азот и использование органических удобрений во всех областях.

После посадки рассады первый сбор урожая проводили через 6 месяцев, а второй-через каждые 4 месяца, что гарантировало оптимизированный жизненный цикл кустарника, направленный на максимальное содержание иполамиида в исходной растительной биомассе.

После посадки растительную биомассу стабилизировали в процессе сушки в теплице при определенных условиях температуры и влажности. Растения высушивали в сушилках с теплообменником, принудительной циркуляцией воздуха и температурой от 50 до 70°С, предпочтительно 60°С. Сушка заключалась в прохождении горячего воздуха через растения, удаляя влагу, пока растительная биомасса не стабилизировалась с влажностью от 10 до 12%. В предпочтительном варианте осуществления продолжительность сушки составляла от 8 до 20 часов.

Как показано на фиг.1, растительную биомассу подвергали процессу измельчения с помощью молотковой мельницы с 1800 об/мин и 19 мм сита, получая производительность от 50 до 150 кг/час при комнатной температуре. После измельчения растительную биомассу подвергали водной экстракции при температуре от 80 до 90°C при постоянном перемешивании в течение 15 минут. Количество используемого экстрактивного раствора должно в 10 раз превышать количество используемой растительной биомассы, что гарантирует исчерпывающую экстракцию вещества, представляющего интерес, в растительной биомассе.

После предыдущей стадии материал подвергали процессу мацерации в течение 10 ч при комнатной температуре. Затем материал снова нагревали при 80-90°С в течение 15 мин.

Материал фильтровали на ротационном фильтре с полиэфирной сеткой 40 мкм. После стадии фильтрации материал концентрировали на испарителе "Bernauer" и/или испарителе с падающей пленкой до примерно 30% от общего количества твердых веществ.

Продукт этой стадии подвергали сушке в распылительной сушилке с температурой на входе от 155 до 165°С и температурой на выходе от 85 до 95°С, в сочетании с осушителем, предпочтительно типа Bry-Air, в течение 20-40 секунд, с целью получения максимально возможного остаточного содержания влаги (Таблица 1). Этот способ существенно улучшает качество обогащенного экстракта, так как остаточная влажность в материале первоначально ставит под угрозу стабильность представляющих интерес компонентов в течение срока годности растительного экстракта/производного. Этот процесс экстракции приводил к соотношению от 10 до 12:1, а выход варьировался от 8 до 10%.

Таблица 1 - Содержание влаги в экстракте после только сушки и после сушки с увлажнителем
Содержание влаги в экстракте после сушки в распылительной сушилке	Содержание влаги в экстракте после сушки в распылительной сушилке+осушитель
4,61%	1,77%

Описанный выше процесс экстракции гарантировал исчерпывающую экстракцию иполамиида для обеспечения иммуносупрессивной активности экстракта благодаря присутствию производных иполамиида, образующихся в процессе. Поэтому, было необходимо установить контроль процесса для входной растительной биомассы, чтобы актуальное содержание иполамиида и производных в экстракте составляло от 8,5 до 11,5%, как показано в таблице 2. Контроль иполамиида в растительной биомассе обеспечивает присутствие производных иполамиида с иммуносупрессивной активностью в экстракте, полученном описанным здесь способом.

Таблица 2 - Содержание иполамиида в растительной биомассе и в экстракте.
Актуальное содержание иполамиида в исходной растительной биомассе	Теоретическое содержание иполамиида и производных в экстракте	Актуальное содержание иполамиида и производных в экстракте^a	Выбор исходной растительной биомассы
1,57%	5,23% (4,44-6,02)	4,47%	Не выбрана
2,20%	7,33% (6,23-8,43)	7,62%	Не выбрана
3,00%	10% (8,5-11,5)	10,80%	Выбрана
3,30%	11% (9,35-12,65)	11,20%	Выбрана
3,07%	10,2% (8,67-11,73)	8,90%	Выбрана
3,65%	12,2% (10,37-14,03)	12,40%	Не выбрана

^aСоответствие между теоретическими и актуальными содержаниями иполамиида и его производных в экстракте демонстрирует применимость уравнения I.

При этом стало возможным определить метод прогнозирования теоретического содержания иполамиида и его производных в обогащенном активном экстракте. Для этой цели было использовано уравнение для прогнозирования содержания, которое будет получено в процессе экстракции (теоретическое) из актуального содержания иполамиида в растительной биомассе (уравнение I).

% Теоретическое содержание иполамиида и производных в экстракте = % Актуальное содержание иполамиида в растительной биомассе x DER / (<актуальное содержание иполамиида и производных в экстракте/актуальное содержание иполамиида в исходной растительной биомассе >) ± стандартное отклонение (уравнение I).

В вышеописанном уравнении, DER можно понимать как количество растительной биомассы, необходимое для получения 1 кг нативного экстракта. Соотношение между актуальным содержанием иполамиида и производных на экстракт/содержание иполамиида во входящей растительной биомассе составляет, предпочтительно, от примерно 3,0 до примерно 3,5.

Таким образом, перспективным способом, используя приведенное выше уравнение, можно выбрать только растительную биомассу (содержание иполамиида которой получают аналитическими методами, такими как ВЭЖХ), которая проецирует адекватное теоретическое содержание иполамиида и производных в экстракте между 8,5 и 11,5% и отбросить те, которые не будут проецировать этот диапазон. Новым и изобретательским способом в настоящем изобретении было подтверждено, что соотношение между актуальным содержанием иполамиида и производных в экстракте и содержанием иполамиида в исходной растительной биомассе предпочтительно будет составлять от 3,0 до 3,5.

Анализ ВЭЖХ включал стадии получения образцов растворов и стандартов и их элюирование следующим образом:

1. Получение растворов

1.1 - Раствор муравьиной кислоты 0,1% (подвижная фаза A): В 1000 мл мерную колбу, содержащую приблизительно 800 мл сверхчистой воды, добавляли 1 мл муравьиной кислоты. Объем колбы заполняли сверхчистой водой и хорошо гомогенизировали.

1.2 - Раствор разбавителя муравьиной кислоты: метанол (1:1). В химическом стакане смешивали 50 мл 0,1% раствора муравьиной кислоты с 50 мл метанола.

2. Получение образца:

Исходный материал (растительный): 1,0 г измельченных растений взвешивали и переносили в желтую колбу Эрленмейера 250 мл или покрывали алюминиевой фольгой. Добавляли 50 мл дистиллированной воды и экстрагировали с обратным холодильником при 80°С в течение 2 часов. Раствор фильтровали через бумагу в мерную колбу на 50 мл и наполняли дистиллированной водой. Раствор фильтровали через 0,22 OR мембрану 0,45 мкм во флакон для ВЭЖХ.

3. Получение стандартов:

Иполамиид стандарт 100 ч/млн: 1,0 мг иполамиидного стандарта взвешивали и переносили в желтую мерную колбу объемом 10 мл. Добавляли 5 мл разбавителя, который оставляли на ультразвуковой бане на 10 минут или до полного растворения. Заполняли разбавителем, а затем осуществляли гомогенизацию. Осуществляли анализ влажности по Карлу Фишеру для иполамиида стандарта.

4. Анализ с помощью ВЭЖХ:

4.1- Параметры/Оборудование

- Колонка: Zorbax SB-C18 (250 мм× 4 мм; 5 мкм)

- Подвижная фаза: (A) 0,1% муравьиная кислота;

(B) Метанол

Таблица 3 - градиентное элюирование иполамиида
Время (мин)	(%) A	(%) B
0	80	20
27	58	42
32	58	42
32,1	0	100
36	0	100
36,1	80	20
45	80	20

- Скорость потока: 1,0 мл/мин

- Детектирование: 254 нм.

- Продолжительность анализа: 45 минут

- Вводимый объем: 30 мкл

4.2 - РАСЧЕТ СОДЕРЖАНИЯ ИПОЛАМИИДА

Содержание иполамиида (%) = образец А × стандарт M × стандарт Р × образец D × (100-стандарт U);

стандарт A × образец M × стандарт D × 10000/100;

где:

образец A: Площадь пика иполамиида в образце

стандарт M: Масса стандартного иполамиида в мг

стандарт P: Чистота стандарта в десятичном виде

образец D: Разведение образца в мл

стандарт A: Площадь пика иполамиида в стандарте

образец M: Масса образца, используемого в г

стандарт D: Разведение стандарта в л

стандарт U: Влажность стандарта, количественно определенная по Карлу Фишеру

10000: Конвертация единиц

Результат содержания в экстракте был дан в сухом основании, то есть влажность была снижена. Поэтому расчет массы экстракта был таким:

образец M=Масса × (100 - образец U)/100;

где:

Масса=Масса сухого экстракта (в граммах)

Образец U=влажность сухого экстракта в процентах, согласно iT2-052.

5. Анализ с помощью ВЭЖХ производных иполамиида

5.1 - Параметры/Оборудование

- Колонка: Eclipse XDB Agilent - C18 (150×4,6 мм) 5 микрон

- Подвижная фаза: (A) буфер 0,1% муравьиная кислота;

(B) Ацетонитрил

Таблица 4 - градиентное элюирование производных иполамиида
Время (мин)	(%) A	(%) B
0	95	5
5,00	90	10
8,00	80	20
10,00	90	10
12,00	95	5

- Поток: 1,2 мл/мин

- Детектирование: DAD (205-280 нм).

- Продолжительность анализа: 15 минут

- Вводимый объем: 20 мкл

5.2 РАСЧЕТ СОДЕРЖАНИЯ ДЛЯ ПРОИЗВОДНЫХ ИПОЛАМИИДОВ

Для анализа данного производного иполамиида (Y) авторы изобретения поместили его в раствор с определенной концентрацией. Эта концентрация напрямую коррелирует с площадью, наблюдаемой на хроматограмме. Эта площадь, при сравнении с общей площадью хроматограммы, умноженной на ранее определенную концентрацию, дает нам процентное значение указанного производного (Y) в образце, как видно ниже:

(∑ содержание производных =% общего содержания производных иполамиида в образце.)

Биологическая/иммуносупрессивная активность

Оценку биологической активности in vitro водного экстракта Stachytarpheta cayennensis, а также иполамиида и его производных проводили, как описано ниже.

Экстракт Stachytarpheta cayennensis, иполамиид и его производные изучали на экспериментальной иммунологической модели in vitro с участием CD8+ T-клеток и IFNγ. Цель этого исследования состояла в том, чтобы оценить, действуют ли экстракт и другие вещества, выделенные или смешанные, путем блокирования активации CD8+ Т-клеток и последующей секреции IFNγ.

Мононуклеарные клетки периферической крови (РВМС) от здоровых добровольцев выделяли из слоев лейкоцитов центрифугированием Ficoll-Hystopaque. После этого человеческие CD8+ T-клетки выделяли с использованием набора для выделения CD8+ T-клеток (Miltenyi Biotec, #130-096-495). Эти клетки (3×10⁵ клеток/лунку) инкубировали в RPMI+10% среды FBS, активировали αCD3/CD28 (1 мкг/мл) и обрабатывали различными концентрациями водного экстракта Stachytarpheta cayennensis, стандартизированного в 10% иполамиида, выделенного иполамиида и производные иполамиида, полученные кислотным гидролизом, для изучения их эффекта на предотвращение активации CD8+ T-клеток и секреции IFNγ. Для оценки пролиферации клеток в качестве маркера пролиферации использовали бромодезоксиуридин (BrdU), аналог тимидина, обычно используемый для анализа пролиферации. В частности, было оценено включение BrdU через систему Biotrak ELISA (GE Healthcare, RPN250) в соответствии с инструкциями производителя. Методология количественного определения гамма-интерферона включала использование набора Human IFNγ ELISA Ready-SET-Go (eBiosciences 88-7316-88) и следовала инструкциям производителя. Как показано на наборе графиков на фиг.2, водный экстракт Stachytarpheta cayennensis, обогащенный производными иполамиида, блокировал активацию CD8+ T-клеток, индуцированную αCD3/CD28. Выделенный иполамиид не оказывал влияния на пролиферацию CD8+ T-клеток, индуцированную αCD3/CD28, или на секрецию IFNγ. Однако соединения, полученные из иполамиида в смеси, полученной для его кислотного гидролиза, значительно снижают пролиферацию CD8+ T-клеток и секрецию IFNγ. Производные иполамиида, выделенные из этой смеси, также продемонстрировали статистически значимое снижение пролиферации CD8+ T-клеток и секреции IFNγ. Такролимус, хорошо известное иммуносупрессивное средство, использовали в качестве эталонного соединения и в качестве положительного контроля для эксперимента. Эффект, полученный с помощью такролимуса, был аналогичен эффекту, полученному с гидролизованным иполамиидом, как в отношении пролиферации клеток, так и в отношении продукции IFNγ.

Таким образом, результаты показали, что иммуносупрессивная активность происходит от производных иполамиида, а не от интактной молекулы. Важно подчеркнуть, что соединения, полученные в результате экспериментального условия кислотного гидролиза выделенного иполамиида, присутствуют в водном экстракте Stachytarpheta cayennensis, как показано на фиг. 4. Однако присутствие таких соединений обусловлено способом экстракции, используемым в настоящем изобретении.

Специалисты в данной области оценят данные, представленные в настоящем документе, и могут воспроизвести изобретение в представленных вариантах осуществления и в других вариантах осуществления, попадающих в объем прилагаемой формулы изобретения.

1. Соединения общей формулы (С), которые являются производными иполамиида:

где:

R представляет собой H;

R₁, R₁^’, R₁^” представляют собой H или OH;

R₂ представляет собой H, COOH, COOCH₃ или CHO;

R₃ представляет собой H или OH; и

R₄, R₄^’ представляют собой H, OH, CH₂OH или CH₃.

2. Соединения формулы (С) по п. 1, выбранные из:

или.

3. Соединения формулы (С) по п. 1 или 2 для блокирования активации CD8+ T–клеток и снижения секреции IFN–γ.

4. Соединения формулы (С) по п. 1 или 2 для применения при лечении витилиго.

5. Способ блокирования активации CD8+ T–клеток и снижения секреции IFN–γ, включающий стадию введения пациенту одного соединения общей формулы (С), согласно п. 1 или 2, в терапевтически эффективном количестве для обеспечения иммуносупрессивного эффекта.

6. Способ лечения по п. 5 для лечения пациентов с витилиго.

7. Фармацевтическая композиция для блокирования активации CD8+ T–клеток и снижения секреции IFN–γ, включающая производные иполамиида формулы (С), как определено в п. 1 или 2, в терапевтически эффективном количестве и фармацевтически приемлемый носитель.

8. Способ получения экстракта, обогащенного производными иполамиида формулы (С), как определено в п. 1 или 2, включающий стадии:

а) отбора исходной растительной биомассы с содержанием иполамиида от 2,5% до 3,5%, полученной из растений рода Stachytarpheta;

c) измельчения растительной биомассы;

d) осуществления экстракции растительной биомассы с помощью стадий:

i) нагревания растительной биомассы при температуре от 70 до 100°С при постоянном перемешивании;

ii) мацерации растительной биомассы при комнатной температуре;

iii) нагревания растительной биомассы с температурой от 70 до 100ºC.

9. Способ получения экстракта по п. 8, дополнительно включающий стадии:

iv) фильтрации и концентрирования экстракта;

v) сушки в распылительной сушилке в течение от 1 до 60 секунд с температурой на входе от 155 до 165°C и температурой на выходе от 85 до 95°C в сочетании с осушителем.

10. Способ получения экстракта по п. 8, в котором нагревание растительной биомассы d) происходит в течение 5–30 минут.

11. Способ получения экстракта по п. 8, в котором нагревание растительной биомассы d) происходит в течение 5–15 часов.

12. Способ получения экстракта по п. 8, в котором исходная растительная биомасса включает надземные части растений рода Stachytarpheta.

13. Способ получения экстракта по п. 8, в котором растение представляет собой Stachytarpheta cayennensis.

14. Способ получения экстракта по п. 8, в котором способ включает водную экстракцию.

15. Экстракты из растений рода Stachytarpheta, обогащенные производными иполамиида формулы (С), как определено в п. 1 или 2.

16. Экстракты из растений рода Stachytarpheta, обогащенные производными иполамиида формулы (С), полученные способом, как определено в любом из пп. 8–15.

17. Экстракты из растений рода Stachytarpheta по п. 15 или 16, содержащие от 1 до 20% производных иполамиида формулы (С).

18. Применение экстрактов из растений рода Stachytarpheta, как определено в любом из пп. 15-17 для блокирования активации CD8+ T–клеток и снижения секреции IFN–γ.

19. Применение по п. 18 для лечения витилиго.

Изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей бициклическое соединение формулы и глицерид. Изобретение также относится к самому указанному соединению и способу его стабилизации.

Средство для ингибирования фермента тирозил-днк-фосфодиэстеразы 1 человека // 2612875

Изобретение относится к молекулярной биологии, биохимии и биотехнологии. Предложено средство, представляющее собой производное хроменона: , где n=1 или 2, или проявляющее способность ингибировать действие фермента тирозил-ДНК-фосфодиэстеразы 1 человека.

Диацетат рацемического 3,17 -дигидрокси-7 ,18-диметил-6-оксаэстра-1,3,5( 10 ),8(9)-тетраена, обладающий остеопротекторным, гипохолестеринемическим и антиоксидантным действием // 2422455

Изобретение относится к диацетату рацемического 3,17 -дигидрокси-7 ,18-диметил-6-оксаэстра-1,3,5(10),8(9)-тетраена формулы обладающему остеопротекторным, гипохолестеринемическим и антиоксидантным действием при пониженной утеротропной активности. .

Новые замещенные тетрациклические производные тетрагидрофурана, пирролидина и тетрагидротиофена // 2401257

Ненуклеозидные ингибиторы обратной транскриптазы, фармацевтическая композиция, содержащая их, их применение при изготовлении лекарственных средств для лечения вич-1, промежуточные для их получения // 2281284

Изобретение относится к новым ненуклеозидным ингибиторам обратной транскриптазы формулы I: где R1 представляет О, S; R2 представляет необязательно замещенный, азотсодержащий гетероцикл, в котором азот расположен в положении 2 относительно связи с (тио)мочевиной; R3 представляет Н, C1-С 3алкил, R4-R7 независимо выбраны из Н, C1-С6алкила, С2-С 6алкенила, С2-С6алкинила, галогенС 1-С6алкила, C1-С6алканоила, галогенС1-С6алканоила, C1-С 6алкокси, галогенС1-С6алкокси, гидрокси-С 1-С6алкила, циано, галогена, гидрокси; Х представляет -(CHR8)n-D(CHR8)m -; D представляет -О- или -S-; R8 представляет Н, n и m представляют независимо 0, 1 или 2; и его фармацевтически приемлемым солям.

Новые композиции и способы их стабилизации // 2275368

Изобретение относится к новым фармацевтическим композициям, содержащим бициклическое соединение формулы I: где А обозначает -СООН или их функциональное производное; X1 и Х2 обозначают атом водорода или атом галогена; V1 и V2 обозначают атомы углерода; W1 и W2 обозначают или где R4 и R5 обозначают атом водорода, гидрокси, Z обозначает атом углерода, кислорода, серы или азота; R1 обозначает насыщенный или ненасыщенный двухвалентный C1-С10 алифатический углеводородный остаток, R2 обозначает насыщенный или ненасыщенный, C1-С10 алифатический углеводородный остаток, R3 обозначает атом водорода, и глицерид, а также изобретение относится к способу их стабилизации и новым бициклическим соединениям.

4-гидроксипиран-2-оны, циклооктил-или бензопиран-2-оны, 4- гидрокси-2н-пиран-2-оны и 4-гидрокси-циклооктапиран-2-оны // 2139284

(4а r, 4вs, 9 @ s )-или (4 @ r, 4 @ r, 9 @ s )-4 @ ,6,6,9 @ -тетраметилтранспергидриндено-[2,1- -пираны как душистые компоненты парфюмерных композиций // 988818

Способ получения -декаметилен -валеролактона // 682519

Способ получения бензофуро /3,2-в/ пирилиевых солей // 434736

Соединения, обладающие агонистической активностью по отношению к рецептору s1p5 // 2781541

Изобретение относится к соединению, представленному общей формулой (V), а также к фармацевтической композиции на его основе. Технический результат: получены новые соединения, которые могут быть использованы для лечения S1P5-опосредованных заболеваний.