Гепатопротекторное средство с антиоксидантной и репаративной активностями.

Изобретение относится к применению пептида, имеющего формулу H2N-L-Glu-L-Trp-D-Ala-COOH, обладающего антиоксидантным и репаративным эффектами для гепатопротекторного воздействия при поражениях печени. Технический результат: эффективное гепатопротекторное действие при поражениях печени. 2 табл., 2 пр.

 

Изобретение относится к медицине (фармакологии, гепатологии, патофизиологии), ветеринарии и может быть использовано для повышения антиоксидантной и репаративной активностей и для достижения гепатопротекторного воздействия при применении пептида H2N-L-Glu-L-Trp-D-Ala-COOH в условиях поражения печени.

Известен пептидный препарат - тимоген, представляющий собой дипептид (H2N-L-Glu-L-Trp-COOH), который является иммуномодулятором и обладает рядом других биологических эффектов (Регистр лекарственных средств России (РЛС) Энциклопедия лекарств, 2004, 11 выпуск, с.849-850).

Однако, особенностью действия природных регуляторных пептидов является непродолжительный период их эффектов, из-за инактивации протеазами, уровень которых особенно высок в зоне воспаления (Robson, M.C. Wound infection: a failure of wound healing caused by an imbalance of bacteria / M.C. Robson // Surg. Clin. North. Am. - 1997. - Vol.77. - P. 637-650.), (Saidakhmedova, Z.T. Immunomodulating activity of thymogen in acute pancreatitis / Z.T. Saidakhmedova // Vopr. Pitan. - 2000. - Т.69, N 6. - Р. 35-36.) Одним из способов повышения устойчивости пептидов к действию протеаз считается введение в молекулу D-аминокислот (Greven H.M., De Wied D. Influence of peptides structurally related to ACTH and MSH on active avoidance in rats // Frontiers of Hormone research. 1977, v. 4, p. 140-152)

В то же время, регуляторные пептиды представляют собой особый класс сигнальных молекул, структурное сходство которых не является основанием для сходства их биологических эффектов. Даже изменение тех же аминокислот в их молекулах с L-изомера на D-изомер часто приводит к изменению направленности эффектов в противоположную сторону или их полное нивелирование (Deigin, Vladislav. EW-peptide family. One family, two drugs / Vladislav Deigin // Journal of peptide science. - 2008. - V. 14. - Issue 8. - P.163.). Особенно данные закономерности характерны для коротких пептидов (Ашмарин И.П., Антонова JI.B., Титов С.А., Максимова JI.A., Каменский А.А. Возможные механизмы разнонаправленного действия АКТГ4-10 и его аналога, содержащего D-изомер фенилаланина, на поведение // Журнал ВНД, 1980, т.ЗО, вып.6, с.1196-1202А.; А, Ярилин, «Иммунология. Учебник», Гэотар-Медиа, 2010). В связи с этим, учитывая многочисленные данные исследований биологических эффектов регуляторных пептидов, при таких модификациях их молекул, как изменение L-аминокислот на их D-изомеры, заранее невозможно предполагать, как изменятся их эффекты в сравнении с исходной молекулой. Напротив, в данном случае, можно предполагать проявление новых самых различных биологических эффектов.

Вероятно благодаря введению в молекулу тимогена с С-конца аминокислоты D-Ala (D-аланина) усиливаются иммуностимулирующая и репаративная активности. Так при введении в эквимолярных дозах пептид H2N-L-Glu-L-Trp-D-Ala-COOH в условиях кожных ран обладал более выраженным по сравнению с тимогеном (H2N-L-Glu-L-Trp-COOH) иммуностимулирующим и ранозаживляющим эффектами (Средство для заживления ран, обладающее иммуностимулирующим эффектом Корошвили В.Т.,Смахтин М.Ю., Бобынцев И.И., Ардемасова З.А., Калихевич В.Н.,Затолокина М.А. Патент РФ №2555338 Заявка №2014129154, Зарегистрировано 4 июня 2015 г.; Иммунотропные, антиоксидантные и репаративные эффекты нового аналога тимогена, модифицированного D-аланином. Смахтин М.Ю., Бобынцев Я.И., Корошвили В.Т., Чуланова А.А., Должикова И.Н. //Курский научно-практический вестник «Человек и его здоровье ». - 2019. - №1. - С.77 - 82.)

Данные о влиянии пептида общей формулы H2N-L-Glu-L-Trp-D-Ala-COOH на состояние печени и его антиоксидантную активность при патологиях этого органа в литературных источниках отсутствуют.Данное исследование было проведено впервые.

Технический результат изобретения: применение по новому назначению пептида общей формулы H2N-L-Glu-L-Trp-D-Ala-COOH для повышения антиоксидантной и репаративной активностей и для достижения гепатопротекторного воздействия при поражениях печени.

Технический результат изобретения достигается путем применения пептида общей формулы H2N-L-Glu-L-Trp-D-Ala-COOH для повышения антиоксидантной и репаративной активностей и для достижения гепатопротекторного воздействия при поражениях печени.

Предлагаемый для этого пептид получают путем химического синтеза из отдельных аминокислот.Пептид может быть синтезирован в любой лаборатории синтеза пептидов. Нами был использован препарат, синтезированный в НИИ химии Санкт-Петербургского государственного университета.

Растворенный в изотоническом растворе хлорида натрия пептид H2N-L-Glu-L-Trp-D-Ala-COOH вводился экспериментальным животным (крысы) один раз в сутки парентерально (внутрибрюшинно) в разовой дозе - 1,2 мкг/кг в течение 5 дней. В качестве гепатотропных ядов были использованы тетрахлорметан и гидразин. Пептид вводили животным в обьеме 0,1 мл один раз в сутки с интервалом в 24 часа между инъекциями. Антиоксидантную активность пептида определяли по уровню малонового диальдегида (МДА) в плазме крови и гомогенате печени (Рагино, Ю.И. Определение резистентности к окислению гепарин-осажденных в-липопротеинов сыворотки крови у больных ишемической болезнью сердца / Ю.И. Рагино, М.И. Душкин // Клин. лаб. диагностика. - 1998. - №11. - С.3-5). Навеску части печени помещали в десятикратный объем ледяного физиологического раствора и гомогенизировали. Полученный гомогенизат центрифугировали в течение 10 минут при скорости 3000 оборотов в минуту и образовавшийся супернатант использовали для исследований. МДА является конечным продуктом перекисного окисления липидов (Mihara, M. Thiobarbituric acid value on such homogenate of rat as parameter of lipid peroxidation in aging, CCl4 intoxication and vitamin E definienes / M. Mihara, M. Uchiama // Biochem. Med. - 1980. - Vol.23, №3. - P. 302-311). Подсчитывали митотический индекс (МИ) гепатоцитов, характеризующий активность их репаративной регенерации. Статистическую обработку результатов производили по расхождению границ доверительных интервалов и с помощью критерия Манна-Уитни.

Изменение уровня МДА в печени и репаративной регенерации гепатоцитов также используется при определении гепатотоксичности или гепатопротекторных эффектов фармакологических препаратов и служат показателями состояния печени (Подымова, С.Д. Болезни печени / С.Д. Подымова. - М., 1993. - 544 с.Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. - М.: Миндзрав РФ, ЗАО ИИА «Ремедиум», 2000.)

Пример конкретного выполнения.

Пример 1. Эффекты пептида H2N-L-Glu-L-Trp-D-Ala-COOH при отравлении тетрахлорметаном.

Крысам Вистар моделировали поражение печени тетрахлорметаном, путем внутрижелудочного введения его 50% раствора в растительном масле по 3 мл/кг массы тела в течение 5 дней подряд. Пятидневное введение тетрахлорметана сопровождается среднекапельной жировой дистрофией гепатоцитов (Фармакологическая коррекция пептидом GLY-HIS-LYS иммунометаболических нарушений в условиях поражения печени тетрахлорметаном / М.Ю. Смахтин, А.И. Конопля, Л.А. Северьянова, И.А. Швейнов // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. - 2003. - №2. - С.19-21.).

Навеску пептида H2N-L-Glu-L-Trp-D-Ala-COOH растворяли в стерильном изотоничном растворе хлорида натрия и вводили животным в обьеме 0,1 мл внутрибрюшинно в разовой дозе 1,2 мкг/кг массы пятикратно (один раз в сутки) одновременно с введением тетрахлорметана. Животные контрольной группы получали эквивалентные обьемы изотоничного раствора (NaCl). На следующий день после последнего введения животных выводили из эксперимента, обескровливанием под хлоралгидратным наркозом.

Антиоксидантную активность пептида определяли по уровню малонового диальдегида (МДА) в плазме крови и гомогенате печени (Рагино, Ю.И. Определение резистентности к окислению гепарин-осажденных в-липопротеинов сыворотки крови у больных ишемической болезнью сердца / Ю.И. Рагино, М.И. Душкин // Клин. лаб. диагностика. - 1998. - №11. - С.3-5). МДА является конечным продуктом перекисного окисления липидов (Mihara, M. Thiobarbituric acid value on fuch homogenate of rat as parameter of lipid peroxidation in aging, CCl4 intoxication and vitamin E definienes / M. Mihara, M. Uchiama // Biochem. Med. - 1980. - Vol.23, №3. - P. 302-311). Также кусочки печени фиксировали в 10% нейтральном формалине на 0.1 М фосфатном буфере рН=7.2 и заливали в парафин по общепринятой методике. Парафиновые срезы печени окрашивали гематоксилином и эозином. Подсчитывали митотический индекс (МИ) гепатоцитов, характеризующий активность их репаративной регенерации (Саркисов, Д.С.Микроскопическая техника / Д.С.Саркисов. - М.: Медицина, 1996. - 543 с.). Выявленные эффекты представлены в таблице 1.

Пептид H2N-L-Glu-L-Trp-D-Ala-COOH снижает уровень малонового диальдегида (МДА) в плазме крови и в печени (гомогенате), что свидетельствует о его антиоксидантной активности (таблица 1). Также пептид H2N-L-Glu-L-Trp-D-Ala-COOH стимулирует репаративную регенерацию гепатоцитов, повышая число их митозов в печени и тем самым активируя восстановление органа, пораженного тетрахлорметаном. Снижение уровня МДА в печени и повышение митотического индекса гепатоцитов свидетельствует о проявлении гепатопротекторного эффекта.

Таблица 1

Влияние пептида H2N-L-Glu-L-Trp-D-Ala-COOH на концентрацию МДА и митотический индекс (M±m, n=8) гепатоцитов в условиях отравления тетрахлорметаном

Группы животных Антиоксидантная активность Репаративная активность
МДА, мкмоль/л в плазме крови МДА, мкмоль/л в гомогенате печени Митотический индекс гепатоцитов, ‰
1.Контроль (NaCl) 6,1±0,6 6,9±0,7 2,5±0,1
2. H2N -L-Glu-L-Trp-D-Ala-COOH 1,4±0,2* 4,5±0,4* 13,1±0,4*

Примечание: * - показывает достоверные отличия, р<0,05; n - количество животных в группе.

Пример 2. Эффекты пептида H2N-L-Glu-L-Trp-D-Ala-COOH при отравлении гидразином.

В качестве другой модели острой токсической гепатопатии использовали также поражение печени однократным внутрибрюшинным введением солянокислого гидразина (50 мг/кг) (Иванова, А.П. Формирование иммунного ответа и его коррекция при токсическом поражении печени различной этиологии: Дис.…канд. мед. наук / А.П. Иванова. - Курск, 1995. - 140 с.). Навеску пептида H2N-L-Glu-L-Trp-D-Ala-COOH растворяли в стерильном изотоничном растворе хлорида натрия и вводили животным в обьеме 0,1 мл внутрибрюшинно в разовой дозе 1,2 мкг/кг массы пятитикратно (один раз в сутки) одновременно и после введения гидразина. Животные контрольной группы получали эквивалентные обьемы изотоничного раствора (NaCl). На следующий день после последнего введения животных выводили из эксперимента, обескровливанием под хлоралгидратным наркозом. Определяли те же показатели.

Выявленные эффекты представлены в таблице 2.

Таблица 2

Влияние пептида H2N-L-Glu-L-Trp-D-Ala-COOH на концентрацию МДА и митотический индекс (M±m, n=8) гепатоцитов в условиях отравления гидразином

Группы животных Антиоксидантная активность Репаративная активность
МДА, мкмоль/л в плазме крови МДА, мкмоль/л в
гомогенате печени
Митотический индекс гепатоцитов, ‰
1.Контроль (NaCl) 5,1±0,5 6,3±0,6 2,1±0,1
2. H2N -L-Glu-L-Trp-D-Ala-COOH 2,7±0,3* 4,1±0,5 * 17,3±0,5*

Примечание: * - показывает достоверные отличия, р<0,05; n - количество животных в группе.

Пептид H2N-L-Glu-L-Trp-D-Ala-COOH снижает уровень малонового диальдегида (МДА) в плазме крови и в печени (гомогенате), что свидетельствует о его антиоксидантной активности (таблица 2). Также пептид H2N-L-Glu-L-Trp-D-Ala-COOH активирует репаративную регенерацию гепатоцитов, повышая число их митозов в печени и тем самым активируя восстановление органа пораженного гидразином. Снижение уровня МДА в печени и повышение митотического индекса гепатоцитов свидетельствует о проявлении гепатопротекторного эффекта.

Таким образом, пептид, имеющий общую формулу H2N-L-Glu-L-Trp-D-Ala-COOH обладает антиоксидантным эффектом, стимулирует процессы репаративной регенерации гепатоцитов, повышая число их митозов, а следовательно, активирует процесс восстановления печени, проявляя тем самым гепатопротекторную активность.

Применение пептида общей формулы H2N-L-Glu-L-Trp-D-Ala-COOH, обладающего антиоксидантным и репаративным эффектами, для гепатопротекторного воздействия при поражениях печени.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области медицины. Предложен способ профилактики или лечения неалкогольной жировой болезни печени или неалкогольного стеатогепатита у субъекта, нуждающегося в этом, включающий введение в желудочно-кишечный тракт субъекта терапевтически эффективного количества сшитого полисахарида, имеющего модуль упругости (G') от 500 Па до 10000 Па.

Группа изобретений относится к области медицины, а именно к терапии, и предназначена для предотвращения, замедления прогрессирования, задержки или лечения метаболических нарушений. Гипогликемическая фармацевтическая комбинация содержит активатор глюкокиназы, представляющий собой соединение HMS5552, активатор рецептора PPAR, выбранный из группы, состоящей из росиглитазона, пиоглитазона, и их фармацевтически приемлемых солей.

Группа изобретений относится к фармацевтической химии и включает конкретные соединения, указанные в формуле изобретения, фармацевтическую композицию на их основе, способ лечения заболевания или расстройства, опосредованного трансглутаминазой 2, и применение соединений в производстве лекарственного средства.
Настоящее изобретение относится к лечению холестатического зуда. Способ лечения холестатического зуда, связанного с первичным билиарным холангитом, включает пероральное введение соединения, представляющего собой селаделпар или его фармацевтически приемлемую соль.

Предложенная группа изобретений относится к области медицины. Предложены способы лечения болезни Гоше у пациента, который является быстрым метаболизатором по CYP2D6 с легкой степенью печеночной недостаточности или с умеренной или тяжелой степенью почечной недостаточности.

Изобретение относится к соединению или к его таутомеру или стереоизомеру, представленному формулой I, где R1 и R2 каждый независимо выбран из -Н или -СН3 при условии, что R1 и R2 одновременно не представляют собой -Н; или R1 и R2 одновременно не представляют собой -СН3. Технический результат – получено новое соединение, которое может найти применение в медицине в производстве лекарственного средства для лечения или предупреждения связанных с АТХ заболеваний.

Настоящее изобретение относится к области клеточной биологии и медицины, в частности к получению происходящих из ткани плаценты и внеэмбриональных тканей СD106высокая CD151+ Нестин+ мезенхимальных стволовых клеток (MSC) и увеличению уровня экспрессии CD106 недифференцированных MSC, а также культурам таких клеток MSC, фармацевтическим и косметическим композициям, их содержащим.

Настоящее изобретение относится к области биотехнологии, в частности к новым антисмысловым олигонуклеотидам, и может быть использовано в медицине. Изобретение раскрывает высокоэффективный модифицированный олигонуклеотид, который способен ингибировать экспрессию мРНК поверхностного антигена вируса гепатита В (HBsAg).

Настоящее изобретение относится к области биотехнологии, в частности к новым коагонистам рецепторов глюкагона и GLP-1 длительного действия, и может быть использовано в медицине. Изобретение раскрывает пептид, способный взаимодействовать как с рецептором глюкагона, так и с рецептором GLP-1, причем по ряду положений аминокислотной последовательности такой пептид конъюгирован с жирными органическими кислотами и/или полиэтиленгликолем (ПЭГ).

Изобретение относится к пероральной фармацевтической композиции в форме липидного раствора, включающей 3α-этинил-3β-гидроксиандростан-17-она оксим и носитель. Носитель содержит 45-100% сложного моноэфира, представляющего собой моноглицерид или моноэфир пропиленгликоля, при необходимости, до 51% сложного диэфира, представляющего собой диглицерид или диэфир пропиленгликоля и при необходимости, до 10% сложного триэфира, представляющего собой триглицерид.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к пептиду, который связывается с аннексином A1, и может быть использовано в медицине. Полученный пептид с аминокислотной последовательностью C[D]T[D]I[D]T[D]W[D]P[D]T[D]M[D], где аминокислоты представлены в D-форме, может быть использован для эффективного лечения злокачественной опухоли.
Наверх