Препарат ингибитора c1-эстеразы
Настоящее изобретение относится к стабильному препарату ингибитора C1–эстеразы (C1–Inh), который является жидким или лиофилизированным, отличается содержанием гистидина 5–400 мМ, но не содержит цитрат или фосфат. Также изобретение относится к набору, включающему препарат C1–Inh. 6 н. и 25 з.п. ф-лы, 2 ил., 8 табл.
ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ
Настоящее изобретение относится к лекарственной форме препарата C1–Inh высокой чистоты и способу очистки для получения ингибитора C1–эстеразы высокой чистоты (C1–Inh или C1I) из источника, содержащего C1–Inh.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
Ингибитор C1–эстеразы представляет собой одиноцепочечный гликопротеин из 478 аминокислотных остатков и с кажущейся мономолекулярной массой приблизительно 106 кДа при измерении с помощью ДСН электрофореза. Главным образом, он продуцируется в печени и присутствует в нормальной человеческой плазме в концентрациях приблизительно 0,14–0,38 мг/мл, что эквивалентно 1 ед/мл плазмы [Production of Plasma Proteins for Therapeutic Use, First Edition, 241–258, Edited by Joseph Bertolini, Neil Goss and John Curling, 2013 John Wiley & Sons].
Известно, что качественный или количественный дефицит C1–Inh является фундаментальной причиной наследственного или врожденного ангионевротического отека (НАО), который является наследственным и редким заболеванием, проявляющимся в виде отека дермы, подкожной ткани, слизистой оболочки и подслизистых тканей. Ангионевротический отек представляет собой потенциально опасное для жизни заболевание, поскольку может возникать обструкция трахеи или дыхательных путей и, в конечном счете, асфиксия.
Одним из возможных путей лечения является замещение дефектного или отсутствующего белка функциональным ингибитором С1–эстеразы либо во время острого приступа, либо в качестве пожизненного профилактического лечения. В любом случае рекомендуется вводить концентрат C1–Inh по возможности с наибольшей чистотой, чтобы исключить развитие побочных эффектов, таких как выработка антител, направленных против C1–Inh. Таким образом, выбранный продукт должен практически не содержать каких–либо других белков, а также агрегатов C1–Inh или разложившегося или нефункционального C1–Inh, чтобы облегчить, в частности, пожизненное профилактическое лечение без развития антител или других нежелательных явлений. В случаях острых приступов с обструкцией трахеи препараты C1–Inh назначают на самой ранней стадии, чтобы избежать возможной асфиксии.
Указанные дефициты можно скорректировать заместительной терапией с внутривенным или подкожным введением препаратов C1–Inh из плазмы крови или рекомбинантного происхождения. Тем не менее, лечение связано с риском введения патогенов, например вирусов, пациенту и тем самым вызывает дополнительные нарушения. Таким образом, для восстановления C1–Inh на физиологических уровнях целесообразно применять только такие композиции C1–Inh, которые подвергали этапам снижения содержания патогенов в процессе производства, включающего этапы снижения и инактивации.
Хотя известны концентраты C1–Inh высокой чистоты и с низким содержанием агрегатов, такие препараты, в частности, нестабильны в жидкой форме. Следовательно, стабильные препараты C1–Inh были известны только в виде лиофилизированных продуктов, имеющих недостаток, связанный с потерей ценного времени на восстановление при лечении острых приступов, поражающих трахею, что ставит под угрозу жизнь пациента во время острого приступа НАО.
За последние несколько десятилетий были описаны различные способы очистки C1–Inh, включающие в большинстве случаев по меньшей мере одну стадию осаждения и несколько стадий хроматографической очистки.
Такой процесс описывают Sim и Reboul. Осаждение полиэтиленгликолем (ПЭГ) проводят на плазме крови с последующей анионообменной хроматографией (AEX) со смолой DEAE и хроматографией со смолой с Конканавалином–A. Полученный продукт показал чистоту больше 95% в геле ДСН–ПААГЭ, по меньшей мере с 2 примесями массой 60 кДа и 30 кДа.
Prograis et al. описывают способ очистки C1–Inh, начинающийся с ПЭГ–фракционирования человеческой плазмы с последующей AEX–хроматографией на смоле DEAE и металлохелатной хроматографией. В конечной стадии способ включал иммуноадсорбционную хроматографию. C1–Inh хранили в фосфатно–солевом буфере (PBS), при этом он показал небольшую примесь приблизительно 93 кДа при ДСН–ПААГЭ в невосстанавливающих условиях.
Teh и Froger раскрывают очистку C1–Inh с помощью периодической адсорбции криосупернатанта с использованием смолы DEAE с последующим осаждением ПЭГ и катионообменной хроматографией на смоле CM. Лиофилизированный и термически обработанный продукт показал чистоту больше 95% при ДСН–ПААГЭ только с одной видимой полосой.
US 4,915,945 относится к способу очистки C1 инактиватора, который включает периодическую адсорбцию криосупернатанта с использованием смолы DEAE с последующей периодической адсорбцией супернатанта после этапа адсорбции на DEAE с использованием смолы QAE. C1–Inh элюировали со смолы QAE, осаждали сульфатом аммония и повторно растворенный осадок подвергали хроматографии гидрофобных взаимодействий (HIC) на Phenyl–Sepharose®.
Способ очистки US 5,030,578 состоит из ПЭГ–фракционирования плазмы крови, хроматографии на джакалин–агарозе и HIC на Phenyl–Sepharose®. Продукт, как указано, не содержал каких–либо следов примесей согласно ДСН–ПААГЭ и был приготовлен в PBS.
WO–A2–01/46219 относится к способу получения содержащей C1–Inh композиции, который включает связывание C1–Inh на первой анионообменной смоле, элюирование связанного C1–Inh и осаждение ПЭГ, где C1–Inh остается в супернатанте. Супернатант после осаждения ПЭГ обрабатывали S/D реагентами для инактивации вирусов, после чего C1–Inh связывали со второй анионообменной смолой. Содержащий C1–Inh элюат после второй анионообменной смолы затем подвергали нанофильтрации и после замены буфера на буфер, содержащий цитрат натрия–трегалозу–хлорид натрия, лиофилизировали. Полученный продукт показал удельную активность приблизительно 6 единиц/мг белка и отношение антигенов/активности приблизительно 1,1/1.
Kumar et al. описали способ очистки, состоящий из 3 стадий хроматографической очистки с получением C1–Inh высокой чистоты. В первой стадии проводили захват C1–Inh из человеческой плазмы при использовании смолы DEAE с последующей HIC на фенильной смоле и стадией конечной очистки, включающей катионообменную хроматографию (CEX) на смоле TMAE. В конечной стадии буфер меняли на буфер, содержащий 10 мМ цитрата натрия, 0,13 М глицина и 0,14 М натрия, pH=6,8. Чистота согласно ДСН–ПААГЭ, SEC и ОФ–ВЭЖХ составила 98–99%.
Feussner et al. опубликовали биохимическое сравнение четырех доступных в продаже концентратов C1–Inh. Концентраты – Berinert®, Ruconest®, Cinryze® и Cetor®, из которых Ruconest® имеет трансгенное происхождение, тогда как остальные 3 концентрата являются продуктами, полученными из плазмы. Все препараты доступны только в виде лиофилизированных продуктов.
WO–A2–2014/145519 относится к композиции C1–Inh, изготовленной с цитратом, фосфатом, гистидином или Трис при различных значениях pH. Содержащие гистидин композиции демонстрировали приблизительно 30% снижение содержания мономера при хранении в течение 2 недель при 25°C.
До настоящего времени не было возможности удовлетворить потребность в высокой чистоте для длительного лечения, совместимости с гликозилированием человека и необходимости получения жидкого и стабильного продукта, чтобы избежать выработки антител, обеспечить наибольшую совместимость с организмом человека и предоставить жидкий продукт для немедленного применения в случае необходимости.
СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Настоящее изобретение основано на неожиданном открытии, что гистидин в достаточной степени стабилизирует C1–Inh в жидких и лиофилизированных композициях.
Таким образом, согласно первому аспекту, изобретение относится к препарату ингибитора C1–эстеразы (C1–Inh), где препарат C1–Inh содержит гистидин в концентрации 5–400 мМ, но не содержит цитрат или фосфат.
C1–Inh согласно изобретению представляет собой, в частности, C1–Inh из природного источника, такого как кровь, и получен путем очистки, включающей периодическую адсорбцию обедненной криопреципитатом плазмы на смоле с четвертичными аминоэтильными группами (QAE), обработку QAE элюата растворителем/детергентом (S/D) для инактивации вирусов, анионообменную хроматографию на диэтиламиноэтильной смоле (DEAE) с последующим осаждением полиэтиленгликолем (ПЭГ), катионообменную хроматографию на карбоксиметильной смоле (CM) и конечную очистку с помощью хроматографии гидрофобных взаимодействий (HIC). Полученный промежуточный раствор подвергают нанофильтрации для удаления патогенов и добавляют гистидин, а в конце добавляют по меньшей мере одну дополнительную аминокислоту, выбранную из аргинина и глицина. Конечный продукт устойчив либо в виде жидкости при 1–8°C, либо в лиофилизированной форме до комнатной температуры.
Эта комбинация стадий процесса приводит к композициям полученного из человеческой плазмы C1–Inh достаточно высокой чистоты, определяемой с помощью эксклюзионной жидкостной хроматографии высокого давления (ЭВЭЖХ или SEC). Композиции C1–Inh настоящего изобретения достаточно стабильны для длительного хранения. Это означает, что образование фрагментов C1–Inh сведено к минимуму, и молекулы мономера C1–Inh имеют низкую тенденцию к образованию полимеров.
Согласно второму аспекту, изобретение относится к набору, состоящему из первой емкости, содержащей препарат C1–Inh согласно первому аспекту, второй емкости, содержащей воду для инъекций, и системы для переноса, которая позволяет выполнять восстановление лиофилизата в стерильных условиях, где препарат C1–Inh лиофилизирован.
Согласно третьему аспекту, изобретение относится к набору, состоящему из шприца, предварительно наполненного препаратом C1–Inh согласно первому аспекту, где препарат C1–Inh является жидкостью, и где препарат стабилен в течение по меньшей мере 12 месяцев в условиях хранения при 1–8°C, в частности в течение по меньшей мере 24 месяцев при 1–8°C.
Согласно четвертому аспекту, изобретение относится к набору, состоящему из шприца, предварительно наполненного препаратом C1–Inh согласно первому аспекту, где препарат C1–Inh является жидкостью, и где препарат стабилен в течение по меньшей мере 12 месяцев в условиях хранения при 1–8°C, в частности в течение по меньшей мере 24 месяцев при 1–8°C.
Согласно пятому аспекту, изобретение относится к применению гистидина для стабилизации C1–Inh, где гистидин добавляют в буфер лекарственной формы C1–Inh, и где концентрация гистидина находится в пределах от 5 до 400 мМ.
Согласно шестому аспекту, изобретение относится к применению гистидина для повышения биодоступности вводимого подкожно C1–Inh, где гистидин добавляют в буфер лекарственной формы C1–Inh перед введением, и где концентрация гистидина находится в пределах от 5 до 400 мМ.
ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ
На Фигуре 1 показана типичная SEC–хроматограмма композиции C1–Inh, полученной способом, описанным ниже, и применяемой в качестве исходного материала для исследований стабильности. Максимум мономолекулярного сигнала соответствует 9,069 минуты, при этом также интегрированы две немономолекулярных весовых фракции со значениями 7,565 и 11,625 минуты. Площадь под кривой (AUC) мономолекулярного сигнала составляет 99,38% от общей AUC.
На Фигуре 2 показана типичная SEC–хроматограмма композиции C1–Inh, содержащей большие количества немономолекулярной весовой фракции. Мономолекулярный сигнал также преобладает, но его AUC составляет всего 75,38%. Четко видны две немономолекулярных весовых фракции со значениями 7,735 и 10,937 минуты. Такие препараты не были получены процессом, описанным ниже, и не применялись в исследовании стабильности. Целью Фигуры 2 является лишь иллюстрация типичных немономолекулярных весовых фракций. Сигналы, видимые со значениями приблизительно 15–16 минут, вызваны фронтом растворителя, полученным в способе SEC, и, таким образом, не предусмотрены для количественного определения.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ
Согласно первому аспекту, настоящее изобретение относится к стабильному препарату, включающему C1–Inh высокой чистоты в лекарственной форме с аминокислотой гистидином. Авторы настоящего изобретения неожиданно обнаружили, что гистидин уже в низких концентрациях способен обеспечить стабильность, в частности стабильность при хранении, препаратов C1–Inh. В частности, концентрации гистидина до 5 мМ позволяют стабилизировать C1–Inh в препаратах. Таким образом, концентрация гистидина составляет по меньшей мере 5 мМ.
При использовании в настоящем изобретении термин "гистидин" относится к протеиногенному L–гистидину. Гистидин может быть добавлен в препарат C1–Inh в чистой форме, в форме моногидрохлорида, моногидрата или в форме другой соли кроме моногидрохлорида. Нижний предел концентрации гистидина может составлять 6 мМ, 7 мМ, 8 мМ, 9 мМ, 10 мМ, 11 мМ, 12 мМ, 13 мМ, 14 мМ или 15 мМ.
Как показано в Примерах, концентрации гистидина 15 мМ и 30 мМ оказывают сильное влияние на стабилизацию препарата C1–Inh. Таким образом, согласно предпочтительному варианту осуществления нижний предел концентрации гистидина составляет 8 мМ. Более предпочтительно нижний предел концентрации гистидина составляет 10 мМ. Наиболее предпочтительно нижний предел концентрации гистидина составляет 15 мМ.
В принципе, в отношении стабилизирующего свойства не должно быть верхнего предела. По практическим причинам и, в частности, с учетом осмоляльности препарата концентрация 400 мМ представляется разумным верхним пределом. Таким образом, согласно одному варианту осуществления концентрация гистидина в препарате C1–Inh составляет 400 мМ или меньше.
Соответственно, концентрация гистидина может составлять, например, 5 мМ, 6 мМ, 7 мМ, 8 мМ, 9 мМ, 10 мМ, 11 мМ, 12 мМ, 13 мМ, 14 мМ, 15 мМ, 16 мМ, 17 мМ, 18 мМ, 19 мМ, или 20 мМ 15 мМ, 20 мМ, 25 мМ, 30 мМ, 35 мМ, 40 мМ, 45 мМ, 50 мМ, 60 мМ, 70 мМ, 80 мМ, 90 мМ, 100 мМ, 110 мМ, 120 мМ, 130 мМ, 140 мМ, 150 мМ, 160 мМ, 170 мМ, 180 мМ, 190 мМ, 200 мМ, 210 мМ, 220 мМ, 230 мМ, 240 мМ, 250 мМ, 260 мМ, 270 мМ, 280 мМ, 290 мМ, 300 мМ, 310 мМ, 320 мМ, 330 мМ, 340 мМ, 350 мМ, 360 мМ, 370 мМ, 380 мМ, 390 мМ или 400 мМ.
Как показано в примерах 200 мМ гистидина позволяет стабилизировать препараты C1–Inh с концентрациями C1–Inh 500 МЕ/мл. Согласно другому варианту осуществления концентрация гистидина составляет 300 мМ или меньше. Согласно другому варианту осуществления концентрация составляет 250 мМ или меньше. Концентрация гистидина также может составлять 200 мМ или меньше.
Согласно одному варианту осуществления концентрация гистидина находится в пределах 5–400 мМ. Согласно другому варианту осуществления концентрация гистидина находится в пределах 8–300 мМ. Согласно другому варианту осуществления концентрация гистидина находится в пределах 10–250 мМ. Согласно другому варианту осуществления концентрация гистидина находится в пределах 12–200 мМ. Согласно другому варианту осуществления концентрация гистидина находится в пределах 14–150 мМ.
Термин "высокая чистота" в рамках изобретения определяет белковую композицию с C1–Inh из природного источника, в частности человеческой крови или ее фракции, в качестве основного компонента, где процент других белковых компонентов составляет ниже 2 вес. %. Кроме того, в композиции C1–Inh высокой чистоты C1–Inh находится практически исключительно в мономерном состоянии, т.е. NMF составляет ниже 2 вес. %.
Из–за стабилизирующего эффекта гистидина препарат C1–Inh настоящего изобретения не требует буферных компонентов, обычно используемых для C1–Inh, таких как фосфатный буфер или цитратный буфер. Цитратные буферы имеют недостаток, связанный с тем, что они могут вызывать местные раздражения при введении пациенту.
Таким образом, в препарате C1–Inh согласно изобретению предпочтительно отсутствует фосфатный или цитратный буфер. Более предпочтительно отсутствуют и фосфатный, и цитратный буферы.
Препарат C1–Inh может быть в жидком состоянии или может быть лиофилизированным. Предпочтительным вариантом осуществления первого аспекта является стабильный препарат C1–Inh, который является стабильным в течение по меньшей мере 24 месяцев при 1–30°C, в частности при 1–25°C.
Согласно одному варианту осуществления препарат включает C1–Inh высокой чистоты в концентрации 50–2500 МЕ/мл, такой как в концентрации 50 МЕ/мл, 60 МЕ/мл, 70 МЕ/мл, 80 МЕ/мл, 90 МЕ/мл, 100 МЕ/мл, 150 МЕ/мл, 200 МЕ/мл, 250 МЕ/мл, 300 МЕ/мл, 350 МЕ/мл, 400 МЕ/мл, 450 МЕ/мл, 500 IU/, 550 МЕ/мл, 600 МЕ/мл, 650 МЕ/мл, 700 МЕ/мл, 750 МЕ/мл, 800 МЕ/мл, 850 МЕ/мл, 900 МЕ/мл, 950 МЕ/мл, 10000 МЕ/мл, 1100 МЕ/мл, 1200 МЕ/мл, 1300 МЕ/мл, 1400 МЕ/мл, 1500 МЕ/мл, 1600 МЕ/мл, 1700 МЕ/мл, 1800 МЕ/мл, 1900 МЕ/мл, 2000 МЕ/мл, 2100 МЕ/мл, 2200 МЕ/мл, 2300 МЕ/мл, 2400 МЕ/мл или 2500 МЕ/мл. Предпочтительно концентрация C1–Inh находится в пределах от 100 до 1500 МЕ/мл, более предпочтительно в пределах от 150 до 1000 МЕ/мл. В случае лиофилизированного препарата C1–Inh, в рамках настоящей заявки, концентрация C1–Inh определена как концентрация после восстановления.
Продукт C1–Inh с необходимой чистотой может быть получен следующим способом. Для получения из человеческой плазмы крови композиций C1–Inh достаточно высокой чистоты может быть применен следующий способ очистки.
Гепарин добавляют в охлажденную плазму, обедненную криопреципитатом. После захвата на смоле QAE и последующей элюцией проводят этап инактивации вирусов при использовании комбинации растворителя и детергента (S/D обработка). Обработанный S/D раствор затем разбавляют водой.
Этот разбавленный раствор затем подвергают анионообменной хроматографии, при которой C1–Inh связывается со смолой и затем элюируется с NaCl в буферном растворе. Полученный элюат охлаждают до 5±4°C, после чего начинают осаждение ПЭГ.
Приблизительно 60% раствор ПЭГ–4000 смешивают с элюатом для осаждения нежелательных белков. После удаления осадка, например, с помощью объемной фильтрации, полученный фильтрат C1–Inh смешивают с твердым ПЭГ для осаждения C1–Inh. Твердые частицы отделяют от жидкости, например, с помощью объемной фильтрации, и полученную пасту, которую можно хранить замороженной, сохраняют для последующей обработки, так как она содержит C1–Inh.
Пасту C1–Inh солюбилизируют в буфере при pH=6,0±0,2 и затем очищают полученный раствор. Очищенный раствор подвергают катионообменной хроматографии. Примеси смывают с нагруженной смолы, а затем C1–Inh элюируют с чистотой >90%.
Хроматографию HIC проводят с элюатом после катионообменной хроматографии с получением чистоты C1–Inh >99%. C1–Inh связывают со смолой и при снижении ионной силы элюируют в чистой форме без полимеров и примесей, на что указывает SEC AUC <1%, отличающаяся от мономерного пика. Буфер меняют с помощью ультра/диафильтрации (UDF) с использованием 10 кДа мембраны, против буфера, содержащего гистидин, хлорид натрия и аминокислоты. Полученный после замены буфера элюат C1–Inh подвергают предварительной фильтрации с последующей нанофильтрацией для удаления патогенов. Полученный нанофильтрат затем подвергают еще одной UDF с 10 кДа мембраной для концентрирования до нужной концентрации C1–Inh и добавляют требуемые вспомогательные вещества.
В альтернативе продукт C1–Inh может быть получен с помощью способов, известных из предшествующего уровня техники, таких как Kumar et al.
Было неожиданно обнаружено, что в лиофилизированные препараты настоящего изобретения не требуется добавлять объемообразующие вещества для получения лиофилизационного слоя, позволяющего производить быстрое восстановление.
Препарат C1–Inh согласно первому аспекту может включать другие природные аминокислоты в дополнение к гистидину.
Например, препарат C1–Inh может включать одну, две, три, четыре, пять или шесть дополнительных природных аминокислот. Согласно одному варианту осуществления первого аспекта препарат C1–Inh включает одну или две дополнительные аминокислоты, выбранные из аргинина и глицина.
При использовании в настоящем документе термин "аргинин" относится к протеиногенному L–аргинину. Аргинин может быть добавлен в препарат C1–Inh в чистой форме, в форме моногидрохлорида, моногидрата или в форме другой соли кроме моногидрохлорида. Глицин может быть добавлен в препарат C1–Inh в чистой форме, в форме моногидрохлорида, моногидрата или в форме соли. Аргинин может присутствовать в концентрации в пределах 5–400 мМ. Концентрация аргинина может составлять 5 мМ, 6 мМ, 7 мМ, 8 мМ, 9 мМ, 10 мМ, 15 мМ, 20 мМ, 25 мМ, 30 мМ, 35 мМ, 40 мМ, 45 мМ, 50 мМ, 60 мМ, 70 мМ, 80 мМ, 90 мМ, 100 мМ, 110 мМ, 120 мМ, 130 мМ, 140 мМ, 150 мМ, 160 мМ, 170 мМ, 180 мМ, 190 мМ, 200 мМ, 210 мМ, 220 мМ, 230 мМ, 240 мМ, 250 мМ, 260 мМ, 270 мМ, 280 мМ, 290 мМ, 300 мМ, 310 мМ, 320 мМ, 330 мМ, 340 мМ, 350 мМ, 360 мМ, 370 мМ, 380 мМ, 390 мМ или 400 мМ.
Согласно одному варианту осуществления первого аспекта концентрация аргинина находится в пределах 10–300 мМ. Согласно другому варианту осуществления концентрация аргинина находится в пределах 20–250 мМ. Согласно другому варианту осуществления концентрация аргинина находится в пределах 30–150 мМ. Согласно другому варианту осуществления концентрация аргинина находится в пределах 50–100 мМ.
Глицин может присутствовать в концентрации в пределах 2–200 мМ. Концентрация глицина в препарате C1–Inh может составлять 2 мМ, 3 мМ, 4, мМ, 5 мМ, 6 мМ, 7 мМ, 8 мМ, 9 мМ, 10 мМ, 15 мМ, 20 мМ, 25 мМ, 30 мМ, 35 мМ, 40 мМ, 45 мМ, 50 мМ, 60 мМ, 70 мМ, 80 мМ, 90 мМ, 100 мМ, 110 мМ, 120 мМ, 130 мМ, 140 мМ, 150 мМ, 160 мМ, 170 мМ, 180 мМ, 190 мМ или 200 мМ.
Согласно одному варианту осуществления первого аспекта концентрация глицина находится в пределах 5–200 мМ. Согласно другому варианту осуществления концентрация глицина находится в пределах 7–150 мМ. Согласно другому варианту осуществления, концентрация глицина находится в пределах 8–80 мМ. Согласно другому варианту осуществления концентрация глицина находится в пределах 9–60 мМ.
Согласно одному варианту осуществления препарат C1–Inh содержит аргинин и глицин. Согласно другому варианту осуществления концентрация аргинина находится в пределах 50–100 мМ, и концентрация глицина находится в пределах 9–60 мМ.
Из экспериментов видно, что, без ограничения теорией, в дополнение к присутствию гистидина для стабильности C1–Inh важна осмоляльность. Согласно одному варианту осуществления первого аспекта осмоляльность препарата C1–Inh находится в пределах от 200 до 800 мОсмоль/кг. Согласно другому варианту осуществления осмоляльность находится в пределах 200–600 мОсмоль/кг. Согласно другому варианту осуществления осмоляльность находится в пределах 250–500 мОсмоль/кг.
Для достижения осмоляльности общая концентрация аминокислот предпочтительно находится в пределах 50–600 мМ. Согласно другому варианту осуществления общая концентрация аминокислот находится в пределах 80–400 мМ. Согласно другому варианту осуществления общая концентрация аминокислот находится в пределах 90–350 мМ. Согласно другому варианту осуществления общая концентрация аминокислот находится в пределах 100–280 мМ.
Препарат C1–Inh согласно изобретению может дополнительно включать соль. Соль предпочтительно выбрана из группы, состоящей из NaCl, NaSO4, MgSO4, MgCl2, CaCl2 и KCl или их смеси.
Соль может присутствовать в концентрации в пределах 5–200 мМ. Концентрация соли в препарате C1–Inh может составлять 5 мМ, 6 мМ, 7 мМ, 8 мМ, 9 мМ, 10 мМ, 15 мМ, 20 мМ, 25 мМ, 30 мМ, 35 мМ, 40 мМ, 45 мМ, 50 мМ, 60 мМ, 70 мМ, 80 мМ, 90 мМ, 100 мМ, 110 мМ, 120 мМ, 130 мМ, 140 мМ, 150 мМ, 160 мМ, 170 мМ, 180 мМ, 190 мМ или 200 мМ.
Согласно одному варианту осуществления концентрация соли находится в пределах 8–150 мМ. Согласно другому варианту осуществления концентрация соли находится в пределах 10–100 мМ. Согласно другому варианту осуществления концентрация соли находится в пределах 15–80 мМ. Согласно другому варианту осуществления концентрация соли находится в пределах 20–60 мМ.
Согласно одному варианту осуществления первого аспекта соль является хлоридом натрия (NaCl).
Таким образом, препарат C1–Inh может включать глицин и хлорид натрия. В альтернативе препарат C1–Inh может включать аргинин и хлорид натрия. Согласно одному варианту осуществления препарат C1–Inh включает аргинин и хлорид натрия.
В лиофилизированном состоянии препарат C1–Inh согласно первому аспекту стабилен в течение по меньшей мере 18 месяцев при 1–30°C, в частности при 1–25°C, где препарат не содержит цитрат или фосфат. Требуемые свойства могут быть получены с помощью лекарственных форм настоящего изобретения в сочетании с чистотой C1–Inh, получаемой с применением способа, описанного выше, или других способов, известных из предшествующего уровня техники, таких как Kumar et al.
Другим предпочтительным вариантом осуществления первого аспекта является препарат C1–Inh в лиофилизированном состоянии, включающий C1–Inh высокой чистоты в концентрации 50–2500 МЕ/мл после восстановления, в частности 100–1500 МЕ/мл, предпочтительно 150–1000 МЕ/мл, который подходит для подкожного или внутривенного применения, содержит в своем составе гистидин и одну или две дополнительных аминокислоты, выбранных из аргинина и глицина.
Другим предпочтительным вариантом осуществления первого аспекта является лиофилизированный препарат, включающий C1–Inh высокой чистоты в буфере лекарственной формы, содержащем гистидин, хлорид натрия и одну или вторую дополнительную аминокислоту, выбранную из глицина и аргинина, где препарат имеет осмоляльность 200–800 мОсмоль/кг и значение pH 6,0–8,0, в частности значение pH в пределах 7,0–7,8, предпочтительно значение pH 7,1–7,5.
Другим предпочтительным вариантом осуществления первого аспекта является лиофилизированный препарат, включающий C1–Inh высокой чистоты в буфере лекарственной формы, содержащем гистидин, хлорид натрия и аргинин, где препарат имеет осмоляльность 200–800 мОсмоль/кг, в частности 250–500 мОсмоль/кг, и значение pH 6,0–8,0, в частности значение pH в пределах 7,0–7,8, предпочтительно значение pH 7,1–7,5.
Другим предпочтительным вариантом осуществления первого аспекта является лиофилизированный препарат C1–Inh, включающий буфер лекарственной формы, состоящий из 10–100 мМ хлорида натрия, 5–400 мМ гистидина и 5–400 мМ аргинина, отличающийся осмоляльностью 200–800 мОсмоль/кг, в частности 250–500 мОсмоль/кг, и значением pH 6,0–8,0, в частности значением pH в пределах 7,0–7,8, предпочтительно значением pH 7,1–7,5.
Другим предпочтительным вариантом осуществления первого аспекта является лиофилизированный препарат C1–Inh, содержащий 200±50 МЕ/мл C1–Inh, 25–35 мМ хлорида натрия, 10–20 мМ гистидина и 70–90 мМ аргинина, в частности приблизительно 16 мМ гистидина, приблизительно 80 мМ аргинина, приблизительно 40 мМ глицина и приблизительно 31 мМ NaCl, который доведен до pH 7,1–7,5.
Другим предпочтительным вариантом осуществления первого аспекта является лиофилизированный препарат C1–Inh, содержащий 500±125 МЕ/мл C1–Inh, 25–35 мМ хлорида натрия, 10–20 мМ гистидина и 70–90 мМ аргинина, в частности приблизительно 16 мМ гистидина, приблизительно 80 мМ аргинина, приблизительно 40 мМ глицина и приблизительно 31 мМ NaCl, который доведен до pH 7,1–7,5.
Другим предпочтительным вариантом осуществления первого аспекта является лиофилизированный препарат C1–Inh, содержащий 1000±250 МЕ/мл C1–Inh, 25–35 мМ хлорида натрия, 10–20 мМ гистидина и 70–90 мМ аргинина, в частности приблизительно 16 мМ гистидина, приблизительно 80 мМ аргинина, приблизительно 40 мМ глицина и приблизительно 31 мМ NaCl, который доведен до pH 7,1–7,5.
Согласно одному варианту осуществления первого аспекта препарат, включающий C1–Inh высокой чистоты, является жидким препаратом и стабилен в течение по меньшей мере 12 месяцев при 1–8°C, в частности в течение по меньшей мере 24 месяцев при 1–8°C, где препарат не содержит цитрат или фосфат. Требуемые свойства могут быть получены с помощью лекарственной формы настоящего изобретения в сочетании с чистотой C1–Inh, получаемой способом, описанным выше, или другими способами, известными из предшествующего уровня техники, такими как Kumar et al.
Предпочтительным вариантом осуществления первого аспекта настоящего изобретения является жидкий препарат C1–Inh, который стабилен в течение по меньшей мере одного месяца при комнатной температуре, в частности при температурах до 25°C. Такой препарат удобно брать в короткие поездки, или пациент может носить его в течение 24 часов в день в качестве возможной экстренной неотложной терапии.
Другим предпочтительным вариантом осуществления первого аспекта данного изобретения является жидкий C1–Inh, который стабилен в течение по меньшей мере одного месяца при комнатной температуре, в частности при температурах до 25°C, после того, как он хранился до 13 месяцев при 1–8°C.
Другим предпочтительным вариантом осуществления первого аспекта является жидкий препарат C1–Inh, включающий C1–Inh высокой чистоты в концентрации 50–2500 МЕ/мл, в частности 100–1500 МЕ/мл, предпочтительно 150–1000 МЕ/мл, который подходит для подкожного или внутривенного применения, содержит гистидин и одну или две дополнительных аминокислот, выбранных из аргинина и глицина.
Другим предпочтительным вариантом осуществления первого аспекта является жидкий препарат C1–Inh в буфере лекарственной формы, содержащем гистидин, хлорид натрия и одну или вторую дополнительную аминокислоту, выбранную из глицина и аргинина, где препарат имеет осмоляльность 200–800 мОсмоль/кг, в частности 250–500 мОсмоль/кг, и значение pH 6,0–8,0, в частности значение pH в пределах 7,0–7,8, предпочтительно значение pH 7,1–7,5.
Другим предпочтительным вариантом осуществления первого аспекта является жидкий препарат C1–Inh в буфере лекарственной формы, включающем гистидин, хлорид натрия и аргинин, где препарат имеет осмоляльность 200–800 мОсмоль/кг, в частности 250–500 мОсмоль/кг, и значение pH 6,0–8,0, в частности значение pH в пределах 7,0–7,8, предпочтительно значение pH 7,1–7,5.
Другим предпочтительным вариантом осуществления первого аспекта является жидкий препарат, включающий C1–Inh высокой чистоты в буфере лекарственной формы, состоящем из 10–100 мМ хлорида натрия, 5–400 мМ гистидина и 5–400 мМ аргинина, отличающемся осмоляльностью 200–800 мОсмоль/кг, в частности 250–500 мОсмоль/кг, и значением pH 6,0–8,0, в частности значением pH в пределах 7,0–7,8, предпочтительно значением pH 7,1–7,5.
Другим предпочтительным вариантом осуществления второго аспекта является жидкий препарат C1–Inh в буфере лекарственной формы, состоящем из 10–100 мМ хлорида натрия, 10–100 мМ гистидина и 30–200 мМ аргинина, отличающемся осмоляльностью 200–800 мОсмоль/кг, в частности 250–500 мОсмоль/кг, и значением pH 6,0–8,0, в частности значением pH в пределах 7,0–7,8, предпочтительно значением pH 7,1–7,5.
Другим предпочтительным вариантом осуществления второго аспекта является жидкий препарат C1–Inh в буфере лекарственной формы, состоящем из 20–50 мМ хлорида натрия, 10–50 мМ гистидина и 50–150 мМ аргинина, отличающемся осмоляльностью 200–800 мОсмоль/кг, в частности 250–500 мОсмоль/кг, и значением pH 6,0–8,0, в частности значением pH в пределах 7,0–7,8, предпочтительно значением pH 7,1–7,5.
Другим предпочтительным вариантом осуществления первого аспекта является жидкий препарат C1–Inh, включающий 25–40 мМ хлорида натрия, 100–140 мМ гистидина, 90–130 мМ аргинина и 5–30 мМ глицина, отличающийся осмоляльностью 380–500 мОсмоль/кг и значением pH 6,0–8,0, в частности значением pH в пределах 7,0–7,8, предпочтительно значением pH 7,1–7,5.
Другим предпочтительным вариантом осуществления первого аспекта является жидкий препарат C1–Inh, включающий 200±50 МЕ/мл C1–Inh, 20–50 мМ хлорида натрия, 10–20 мМ гистидина и 70–90 мМ аргинина, в частности приблизительно 16 мМ гистидина, приблизительно 80 мМ аргинина, приблизительно 40 мМ глицина и приблизительно 31 мМ NaCl, который доведен до pH 7,1–7,5.
Другим предпочтительным вариантом осуществления первого аспекта является жидкий препарат C1–Inh, содержащий 200±50 МЕ/мл C1–Inh, 25–35 мМ хлорида натрия, 10–20 мМ аргинина 70–90 мм гистидина и 35–65 мМ глицина, в частности приблизительно 15 мМ гистидина, приблизительно 80 мМ аргинина, приблизительно 55 мМ глицина и приблизительно 30 мМ NaCl, который доведен до pH 7,1–7,5.
Другой предпочтительный вариант осуществления первого аспекта включает жидкий препарат C1–Inh, содержащий 500±125 МЕ/мл C1–Inh, 25–35 мМ хлорида натрия, 25–35 мМ гистидина и 100–110 мМ аргинина, в частности приблизительно 30 мМ гистидина, приблизительно 105 мМ аргинина и приблизительно 30 мМ NaCl, который доведен до pH 7,1–7,5.
Другим предпочтительным вариантом осуществления первого аспекта является жидкий препарат, включающий C1–Inh высокой чистоты, содержащий в своем составе 500±125 МЕ/мл C1–Inh, 25–35 мМ хлорида натрия, 115–125 мМ гистидина, 105–115 мМ аргинина и 15–25 мМ глицина, в частности приблизительно 120 мМ гистидина, приблизительно 110 мМ аргинина, приблизительно 20 мМ глицина и приблизительно 33 мМ NaCl, который доведен до pH 7,1–7,5.
Другим предпочтительным вариантом осуществления первого аспекта является жидкий препарат C1–Inh, содержащий 1000±250 МЕ/мл C1–Inh, 25–35 мМ хлорида натрия, 10–20 мМ гистидина и 70–90 мМ аргинина, в частности приблизительно 16 мМ гистидина, приблизительно 80 мМ аргинина, приблизительно 40 мМ глицина и приблизительно 31 мМ NaCl, который доведен до pH 7,1–7,5. Препарат C1–Inh согласно первому аспекту, в частности, может применяться для лечения наследственного или врожденного ангионевротического отека (НАО).
Таким образом, согласно второму аспекту изобретения предложен препарат C1–Inh для применения в лечении наследственного или врожденного ангионевротического отека (НАО), где препарат C1–Inh определен согласно первому аспекту.
Препарат C1–Inh можно вводить, в частности, парентерально, например, путем внутривенного, внутримышечного или подкожного введения. Согласно одному варианту осуществления второго аспекта применение отличается подкожным введением препарата C1–Inh.
Авторы настоящего изобретения дополнительно показали, что композиции C1–Inh, изготовленные с гистидином, обладают высокой биодоступностью при подкожном введении. Согласно одному варианту осуществления препарат C1–Inh согласно изобретению имеет биодоступность более 60%, предпочтительно более 70%, более предпочтительно более 80%, наиболее предпочтительно более 90% при подкожном введении по сравнению с внутривенно вводимым C1–Inh в той же дозе. Высокая биодоступность препарата C1–Inh при подкожном введении показана в Таблице 8.
В частности, как подтверждено результатами эксперимента, показанными в Таблице 8, высокие концентрации гистидина приводят к особенно высокой биодоступности C1–Inh при подкожном введении препарата C1–Inh согласно изобретению, в частности, при высоких концентрациях C1–Inh приблизительно 500 МЕ/мл. Таким образом, препараты C1–Inh с концентрацией C1–Inh больше 300 МЕ/мл, в частности от 300 МЕ/мл до 1000 МЕ/мл. Концентрация гистидина предпочтительно находится в пределах от 50 мМ до 400 мМ, более предпочтительно в пределах 70–300 мМ. Согласно другому варианту осуществления концентрация гистидина находится в пределах 80–200 мМ. Согласно другому варианту осуществления концентрация гистидина находится в пределах 100–150 мМ. Согласно другому варианту осуществления концентрация гистидина находится в пределах 110–130 мМ.
Согласно третьему аспекту изобретения предложен набор, состоящий из первой емкости, содержащей препарат C1–Inh согласно первому аспекту, второй емкости, содержащей воду для инъекций и систему переноса, которые позволяют выполнять восстановление лиофилизата в стерильных условиях. Ресуспендированный препарат C1–Inh перед применением можно хранить до одного месяца при комнатной температуре до 20–25°C.
Согласно четвертому аспекту изобретения предложен набор, состоящий из шприца, предварительно наполненного препаратом C1–Inh согласно первому аспекту, где препарат C1–Inh является жидкостью, и где препарат стабилен в течение по меньшей мере 12 месяцев в условиях хранения при 1–8°C, в частности в течение по меньшей мере 24 месяцев при 1–8°C.
Согласно одному варианту осуществления четвертого аспекта препарат C1–Inh стабилен в течение по меньшей мере 23 месяцев в условиях хранения при 1–8°C и в течение одного дополнительного месяца после нагревания до комнатной температуры при условии, что комнатная температура 20–25°C не была превышена в течение указанного дополнительного месяца. В частности, положительным эффектом набора согласно четвертому аспекту является возможность носить набор без охлаждения, находясь в пути, для экстренного применения в случае острого приступа. Кроме того, благодаря стабильности можно будет все еще безопасно применять набор, например, после 2–3 недель при комнатной температуре, с целью профилактического лечения. Профилактическое лечение обычно проводят два раза в неделю.
Согласно другому варианту осуществления четвертого аспекта набор состоит из устройства, подходящего для п/к применения, такого как "нательный инъектор", предварительно наполненный препаратом C1–Inh согласно первому аспекту, где препарат C1–Inh является жидкостью, где препарат стабилен в течение по меньшей мере 23 месяцев в условиях хранения при 1–8°C и в течение по меньшей мере одного дополнительного месяца после нагревания до комнатной температуры при условии, что комнатная температура 20–25°C не была превышена в течение указанного дополнительного месяца.
Согласно пятому аспекту изобретение относится к применению гистидина для стабилизации C1–Inh, где гистидин добавляют в буфер лекарственной формы C1–Inh, и где концентрация гистидина находится в пределах от 5 до 400 мМ.
В применении согласно пятому аспекту может использоваться концентрация гистидина, как определено для препарата C1–Inh согласно первому аспекту. Кроме того, может использоваться концентрация C1–Inh, как определено для препарата C1–Inh согласно первому аспекту. Буфер лекарственной формы C1–Inh может дополнительно содержать любой из компонентов, определенных для препарата C1–Inh согласно первому аспекту. Препарат C1–Inh, который стабилизирован гистидином, может быть жидким или лиофилизированным.
Кроме того, отношение между молярной концентрацией гистидина и содержанием C1–Inh в МЕ/мл может быть в пределах от 1 (мМ):500 (МЕ/мл) до 8:1. Предпочтительно, отношение между молярной концентрацией гистидина и содержанием C1–Inh в МЕ/мл находится в пределах от 1:50 до 4:1, более предпочтительно отношение между молярной концентрацией гистидина и содержанием C1–Inh в МЕ/мл находится в пределах от 1:20 до 1:1.
Согласно шестому аспекту изобретение относится к применению гистидина для увеличения биодоступности подкожно вводимого C1–Inh, где гистидин добавляют в буфер лекарственной формы C1–Inh перед введением, и где концентрация гистидина находится в пределах от 5 до 400 мМ.
В применении согласно шестому аспекту может использоваться концентрация гистидина, как определено для препарата C1–Inh согласно первому аспекту. Кроме того, может использоваться концентрация C1–Inh, как определено для препарата C1–Inh согласно первому аспекту. Буфер лекарственной формы C1–Inh может дополнительно содержать любой из компонентов, определенных для препарата C1–Inh согласно первому аспекту. Препарат C1–Inh, который стабилизирован гистидином, может быть жидким или лиофилизированным.
Для достижения высокой биодоступности подкожно вводимого C1–Inh, отношение между молярной концентрацией гистидина и содержанием C1–Inh в МЕ/мл может быть в пределах от 1 (мМ):500 (МЕ/мл) до 8:1. Предпочтительно отношение между молярной концентрацией гистидина и содержанием C1–Inh в МЕ/мл находится в пределах от 1:50 до 4:1. более предпочтительно отношение между молярной концентрацией гистидина и содержанием C1–Inh в МЕ/мл находится в пределах от 1:10 до 1:1.
Определение чистоты с помощью эксклюзионной хроматографии (SEC)
SEC используют для определения чистоты раствора C1–ингибитора. Может использоваться стандартная система ВЭЖХ, оборудованная SEC колонкой Tosoh TSKgel® – Super SW3000 и УФ–детектором при 280 нм. Рабочий буфер содержит 40 мМ фосфата натрия и 300 мМ хлорида натрия при pH=6,95, при этом используется рекомендуемая производителем колонки скорость потока 0,3 мл/мин.
Для оценки хроматограммы интегрируют и суммируют площади под кривой образца продукта и вычисляют отдельные площади пиков в % от общей площади пиков. Мономолекулярный C1–Inh элюируется примерно за 9,2 минуты, а сигналы до или после этого основного сигнала представляют немономерную фракцию. Хорошие результаты получают при описанных выше условиях с концентрациями белка приблизительно 5 мг/мл, объемом вводимой пробы 10 мкл и интегрированием с 2 до 13 минут. Сигнал мономолекулярного C1–Inh является основным, и его интегрирование с 8,6 до 10,3 минут дает хорошие результаты для достаточно чистых препаратов.
Определение биодоступности
Для определения биодоступности C1–Inh, вводимого подкожно, по сравнению с C1–Inh, вводимого внутривенно, проводили исследование на животных. Из–за сходства кожи человека и свиньи в качестве животных выбрали свиней. Определяли фармакокинетику вводимого п/к и в/в C1–Inh и вычисляли биодоступность вводимого п/к C1–Inh в % от площади под кривой (AUC) вводимого в/в C1–Inh в такой же дозе (МЕ/кг). Уровни C1–Inh в крови контролировали в течение 168 часов после однократного введения.
Определение стабильности
Стабильность согласно настоящему изобретению относится к стабильности при хранении, то есть, в частности, к низкой склонности к образованию агрегатов при хранении в течение определенного периода, в частности, более 6 месяцев. Таким образом, препарат считается "стабильным" и обычно имеет низкую склонность к образованию агрегатов. Стабильность конкретного препарата также зависит от заданного времени, температуры хранения и агрегатного состояния.
Таким образом, лиофилизированный препарат C1–Inh считается стабильным в течение определенного периода, если количество немономерной фракции составляет меньше 4% после хранения при температуре 25°C или ниже в течение определенного периода. Например, препарат считается стабильным в течение по меньшей мере 12 месяцев, если в течение периода хранения длительностью 12 месяцев при температуре 25°C или ниже содержание NMF оставалось ниже 4%.
Жидкий препарат C1–Inh считается стабильным в течение определенного периода, если количество немономерной фракции составляет меньше 4% после хранения при температуре 5°C или ниже в течение определенного периода. Например, жидкий препарат считается стабильным в течение по меньшей мере 12 месяцев, если в течение периода хранения длительностью 12 месяцев при температуре 5°C содержание NMF оставалось ниже 4%.
Жидкий препарат C1–Inh считается стабильным в течение определенного периода, если количество немономерной фракции составляет меньше 15% после хранения при температуре 15°C или ниже в течение определенного периода. Например, жидкий препарат считается стабильным в течение по меньшей мере 10 месяцев, если в течение периода хранения длительностью 10 месяцев при температуре 15°C содержание NMF оставалось ниже 15%.
"Немономерная фракция", "немономолекулярная весовая фракция" или "NMF" относятся к любому компоненту с другой молекулярной массой, чем у мономерного C1–Inh, например, агрегированного C1–Inh, фрагмента C1–Inh или белковых примесей. При SEC, NMF элюируется до или после основного сигнала C1–Inh.
ПРИМЕРЫ
Аргинин и гистидин обычно использовали в виде моногидрохлорида, если не указано иное.
Лиофилизированные препараты согласно настоящему изобретению
Препаратлио 1 (Plyo 1) состоял из 200 МЕ/мл C1–Inh, 15 мМ гистидина, 80 мМ аргинина, 40 мМ глицина и 30 мМ NaCl, pH 7,3. Препарат Plyo 1 имел расчетную осмоляльность 290 мОсмоль/кг.
Препаратлио 2 (Plyo 2) состоял из 200 МЕ/мл C1–Inh, 50 мМ гистидина, 67 мМ аргинина и 28 мМ NaCl, pH 7,4. Препарат Plyo 2 имел расчетную осмоляльность приблизительно 290 мОсмоль/кг.
Препаратлио 3 (Plyo 3) состоял из 200 МЕ/мл C1–Inh, 25 мМ гистидина, 66 мМ аргинина, 9 мМ глицина и 49 мМ NaCl, pH 7,3. Препарат Plyo 3 имел расчетную осмоляльность приблизительно 290 мОсмоль/кг.
Препаратлио 4 (Plyo 4) состоял из 200 МЕ/мл C1–Inh, 25 мМ гистидина, 100 мМ аргинина и 21 мМ NaCl, pH 7,3. Препарат Plyo 4 имел расчетную осмоляльность приблизительно 290 мОсмоль/кг.
Препаратлио 6 (Plyo 6) состоял из 200 МЕ/мл C1–Inh, 10 мМ гистидина, 50 мМ аргинина, 80 мМ глицина и 50 мМ NaCl, pH 7,3. Препарат Plyo 6 имел расчетную осмоляльность приблизительно 300 мОсмоль/кг.
Препаратлио 5 (Plyo 5) состоял из 200 МЕ/мл C1–Inh, 10 мМ гистидина, 74 мМ аргинина, 9 мМ глицина и 57 мМ NaCl, pH 7,3. Препарат Plyo 5 имел расчетную осмоляльность приблизительно 290 мОсмоль/кг.
Жидкие препараты согласно настоящему изобретению
Препарат 1 (P1) состоял из 200 МЕ/мл C1–Inh, 15 мМ гистидина основания, 80 мМ аргинина, 55 мМ глицина и 30 мМ NaCl, pH 7,4. Препарат P1 имел расчетную осмоляльность приблизительно 290 мОсмоль/кг.
Препарат 2 (P2) состоял из 500 МЕ/мл C1–Inh, 30 мМ гистидина основания, 105 мМ аргинина и 30 мМ NaCl, pH 7,3. Препарат P2 имел осмоляльность приблизительно 300 мОсмоль/кг.
Препарат 3 (P3) состоял из 520 МЕ/мл C1–Inh, 120 мМ гистидина основания, 110 мМ аргинина, 20 мМ глицина и 33 мМ NaCl, pH 7,3. Препарат P3 имел осмоляльность приблизительно 430 мОсмоль/кг.
Сравнительные препараты, содержащие C1–Inh такой же высокой чистоты, но изготовленные не в соответствии с настоящим изобретением
Лиофилизированные препараты не в соответствии с настоящим изобретением
Сравнительный Препаратлио 1 (CPlyo 1) состоял из 200 МЕ/мл C1–Inh, 0 мМ гистидина (без гистидина), 80 мМ аргинина, 40 мМ глицина и 45 мМ NaCl, pH 7,3. Препарат CPlyo 1 имел расчетную осмоляльность приблизительно 290 мОсмоль/кг.
Сравнительный Препаратлио 2 (CPlyo 2) состоял из 200 МЕ/мл C1–Inh, 0 мМ гистидина (без гистидина), 50 мМ аргинин, 80 мМ глицина и 50 мМ NaCl, pH 7,3. Препарат CPlyo 2 имел расчетную осмоляльность приблизительно 280 мОсмоль/кг.
Жидкие препараты не в соответствии с настоящим изобретением
Сравнительный Препарат 1 (CP 1) состоял из 200 МЕ/мл C1–Inh, 137 мМ хлорида натрия, 2,7 мМ хлорида калия, 10 мМ гидрофосфата динатрия и 1,8 мМ дигидрофосфата калия, pH 7,3. Препарат CP 1 имел расчетную осмоляльность приблизительно 315 мОсмоль/кг.
Сравнительный Препарат 2 (CP 2) состоял из 200 МЕ/мл C1–Inh, 70,2 мМ хлорида натрия, 61,3 мМ сахарозы, 10,1 мМ цитрата натрия, 17,1 мМ L–валина, 13,5 мМ L–аланина и 37,8 мМ L–треонина, pH 7,0. Препарат CP 2 имел расчетную осмоляльность приблизительно 380 мОсмоль/кг.
Результаты
Данные SEC для немономерной фракции (NMF) обозначены в таблицах как NMF.
Таблица 1 содержит данные SEC, приведенные в % от общей площади лиофилизированных препаратов согласно изобретению, определенные непосредственно после изготовления лекарственной формы (to) и после хранения в течение нескольких месяцев при 25°C.
Таблица 2 содержит данные SEC, приведенные в % от общей площади лиофилизированных препаратов, которые не соответствуют настоящему изобретению. Данные SEC определяли непосредственно после изготовления лекарственной формы (to) и после хранения в течение нескольких месяцев при 25°C.
Таблица 3 содержит данные SEC, приведенные в % от общей площади жидких препаратов согласно изобретению, определенные непосредственно после изготовления лекарственной формы (to) и после хранения в течение нескольких месяцев при 5°C.
Таблица 4 содержит данные SEC, приведенные в % от общей площади жидких препаратов, которые не соответствуют настоящему изобретению. Данные SEC определяли непосредственно после изготовления лекарственной формы (to) и после хранения в течение нескольких месяцев при 5°C.
Таблица 5 содержит данные SEC, приведенные в % от общей площади жидких препаратов согласно изобретению, определенные непосредственно после изготовления лекарственной формы (to) и после хранения в течение нескольких месяцев при 15°C.
Таблица 6 содержит данные SEC, приведенные в % от общей площади жидких препаратов, которые не соответствуют настоящему изобретению. Данные SEC определяли непосредственно после изготовления лекарственной формы (to) и после хранения в течение нескольких месяцев при 15°C.
Таблица 7 содержит данные SEC, приведенные в % от общей площади жидких препаратов согласно изобретению, определенные непосредственно после изготовления лекарственной формы (to) и после хранения в течение одного месяца при 25°C.
Таблица 8 содержит данные, которые относятся к кинетике препаратов C1–ингибитора, применяемых подкожно и соответственно внутривенно. Данные приведены в % от площади под кривой (AUC) введенного внутривенно C1–ингибитора согласно такой же схеме применения, т.е. биодоступность.
| t0 | 1 месяц | 3 месяца | 6 месяцев | |
| Plyo 1 Мономол. C1I |
99,59 | 99,49 | 99,47 | 99,47 |
| Plyo 1 NMF | 0,41 | 0,51 | 0,53 | 0,53 |
| Plyo 2 Мономол. C1I |
99,60 | 99,58 | 99,38 | 99,33 |
| Plyo 2 NMF | 0,40 | 0,42 | 0,62 | 0,67 |
| Plyo 3 Мономол. C1I |
99,61 | 99,56 | 99,33 | 99,37 |
| Plyo 3 NMF | 0,39 | 0,44 | 0,67 | 0,63 |
| Plyo 4 Мономол. C1I |
99,61 | 99,53 | 99,48 | 99,36 |
| Plyo 4 NMF | 0,39 | 0,47 | 0,52 | 0,64 |
| Plyo 5 Мономол. C1I |
99,59 | 99,51 | 99,28 | 99,40 |
| Plyo 5 NMF | 0,41 | 0,49 | 0,72 | 0,60 |
| Plyo 6 Мономол. C1I | 99,54 | 99,47 | 99,37 | 99,17 |
| Plyo 6 NMF | 0,46 | 0,53 | 0,63 | 0,83 |
Таблица 1 (лиофилизированный, 25°C) – значения приведены в [%]
| t0 | 1 месяц | 3 месяца | 6 месяцев | |
| CPlyo 1 Мономол. C1I |
99,58 | 99,48 | 99,25 | 99,09 |
| CPlyo 1 NMF | 0,42 | 0,52 | 0,75 | 0,91 |
| CPlyo 2 Мономол. C1I |
99,58 | 99,50 | 99,33 | 99,37 |
| CPlyo 2 NMF | 0,42 | 0,50 | 0,67 | 0,63 |
Таблица 2 (лиофилизированный, 25°C) – значения приведены в [%]
| t0 | 1,5 месяца | 2 месяца | 4 месяца | 10 месяцев | 13 месяцев | |
| P1 Мономол. C1I |
99,57 | 99,56 | 99,28 | 98,96 | 98,75 | 98,77 |
| P1 NMF | 0,43 | 0,44 | 0,72 | 1,04 | 1,25 | 1,23 |
| P2 Мономол. C1I |
99,55 | 99,59 | 99,38 | 99,24 | 99,04 | 99,00 |
| P2 NMF | 0,45 | 0,41 | 0,62 | 0,76 | 0,96 | 1,00 |
Таблица 3 (жидкий, 5°C) – значения приведены в [%]
| t0 | 4 месяца | 6 месяцев | 9 месяцев | |
| CP1 Мономол. C1I |
98,24 | n.d. | 90,83 | 89,31 |
| CP1 NMF | 1,76 | n.d. | 9,17 | 10,69 |
| CP2 Мономол. C1I |
97,51 | n.d. | 76,57 | 80,30 |
| CP2 NMF | 2,49 | n.d. | 23,43 | 19,7 |
Таблица 4 (жидкий, 5°C) – значения приведены в [%]; n.d. – не определяли
| t0 | 1,5 месяца | 2 месяца | 4 месяца | 9 месяцев | 13 месяцев | |
| P1 Мономол. C1I |
99,55 | 99,02 | 98,60 | 97,64 | 88,94 | 84,59 |
| P1 NMF | 0,45 | 0,98 | 1,40 | 2,36 | 11,06 | 15,41 |
| P2 Мономол. C1I |
99,55 | 99,11 | 98,71 | 97,85 | 89,60 | 85,48 |
| P2 NMF | 0,45 | 0,89 | 1,29 | 2,15 | 10,40 | 14,52 |
Таблица 5 (жидкий, 15°C) – значения приведены в [%]
| t0 | 1,5 месяца | 2 месяца | 4 месяца | 9 месяцев | |
| CP1 Мономол. C1I |
98,24 | n.d. | n.d. | n.d. | 83,43 |
| CP1 NMF | 1,76 | n.d. | n.d. | n.d. | 16,57 |
| CP2 Мономол. C1I |
97,51 | n.d. | n.d. | n.d. | 71,50 |
| CP2 NMF | 2,49 | n.d. | n.d. | n.d. | 28,5 |
Таблица 6 (жидкий, 15°C) – значения приведены в [%]; n.d. – не определяли
| t0 | 1 месяц | |
| P1 Мономол. C1I |
99,55 | 97,36 |
| P1 NMF | 0,45 | 2,64 |
| P2 Мономол. C1I |
99,55 | 97,83 |
| P2 NMF | 0,45 | 2,17 |
Таблица 7 (жидкий, 25°C) – значения приведены в [%]
| Применяемая доза [МЕ/кг] | % AUC для в/в | |
| P2 в/в | 40 | 100 |
| P2 п/к | 40 | 72 |
| P2 в/в | 70 | 100 |
| P2 п/к | 70 | 75 |
| P3 в/в | 40 | 100 |
| P3 п/к | 40 | 95 |
Таблица 8 Биодоступность C1–ингибитора подкожно вводимых препаратов по сравнению с внутривенно вводимыми препаратами в такой же дозе.
ИСПОЛЬЗОВАННЫЕ ИСТОЧНИКИ
Kumar et al. C1–Esterase Inhibitor from Human Plasma – An Improved Process to Achieve Therapeutic Grade Purity; J. BIOPROCESS BIOTECH. 2014; 4 (6):174.
Sim and Reboul. Preparation and Properties of Human C1 Inhibitor; METHODS IN ENZYMOLOGY. 1981; Vol. 80:43–54.
Prograis et al. Purification of C1 Inhibitor; JOURNAL OF IMMUNOLOGICAL METHODS. 1987; Vol. 99:113–122.
Teh and Froger. Evaluation of the chromatographie procedure for the preparation of a high–purity C1–esterase inhibitor concentrate from cryosupernatant plasma; JOURNAL OF CHROMATOGRAPHY. 1992; Vol. 582:65–70.
Feussner et al. Biochemical comparison of four commercially available C1 esterase inhibitor concentrates for treatment of hereditary angioedema; TRANSFUSION. 2014; 54:2566–2573.
1. Препарат ингибитора C1-эстеразы (C1-Inh), где препарат C1-Inh содержит гистидин в концентрации в пределах 8-300 мМ, но не содержит цитрат или фосфат, причем препарат C1-Inh содержит аргинин и необязательно глицин, причем концентрация аргинина находится в диапазоне от 20 до 250 мМ, а концентрация глицина находится в диапазоне от 5 до 200 мМ, и причем осмоляльность препарата C1-Inh находится в диапазоне от 250 до 500 мОсмоль/кг.
2. Препарат C1-Inh по п. 1, где концентрация гистидина находится в пределах 10-250 мМ, предпочтительно в пределах 12-200 мМ, более предпочтительно в пределах 14-150 мМ.
3. Препарат C1-Inh по п. 1, где C1-Inh находится в концентрации в пределах 50-2500 МЕ/мл, предпочтительно в пределах 100-1500 МЕ/мл, более предпочтительно 150-1000 МЕ/мл.
4. Препарат C1-Inh по п.1 или 2, где препарат C1-Inh подходит для подкожного или внутривенного применения.
5. Препарат C1-Inh по п. 4, где концентрация аргинина находится в пределах 30-150 мМ, предпочтительно в пределах 50-120 мМ.
6. Препарат C1-Inh по п. 5, где концентрация глицина находится в пределах 7-150 мМ, предпочтительно в пределах 8-120 мМ, предпочтительно концентрация глицина находится в пределах 9-60 мМ.
7. Препарат C1-Inh по любому из пп. 1-6, дополнительно включающий соль, выбранную из группы, состоящей из NaCl, NaSO4, MgSO4, MgCl2, CaCl2 и KCl или их смеси, предпочтительно хлорид натрия, где концентрация соли предпочтительно находится в пределах 8-150 мМ, более предпочтительно в пределах 10-100 мМ, наиболее предпочтительно в пределах 15-80 мМ.
8. Препарат C1-Inh по любому из пп. 1-7, где pH препарата находится в пределах 6,0-8,0, предпочтительно в пределах 7,0-7,8, более предпочтительно в пределах 7,1-7,5.
9. Препарат C1-Inh по любому из пп. 1-8, где общая концентрация аминокислот в препарате C1-Inh находится в пределах 50-600 мМ, предпочтительно в пределах 80-400 мМ, более предпочтительно в пределах 90-350 мМ, наиболее предпочтительно в пределах 100-350 мМ.
10. Препарат C1-Inh по любому из пп. 1-9, где препарат C1-Inh лиофилизирован.
11. Препарат C1-Inh по п. 10, содержащий хлорид натрия и аргинин, отличающийся осмоляльностью 250-500 мОсмоль/кг и значением pH 6,0-8,0, в частности 7,0-7,8, предпочтительно значением pH 7,1-7,5.
12. Препарат C1-Inh по п. 10, содержащий 10-100 мМ хлорида натрия, 8-300 мМ гистидина и 20-250 мМ аргинина.
13. Препарат C1-Inh по п. 10, содержащий 25-35 мМ хлорида натрия, 10-20 мМ гистидина и 70-90 мМ аргинина, отличающийся осмоляльностью 250-500 мОсмоль/кг и значением pH 7,1-7,5.
14. Препарат C1-Inh по п. 10, содержащий 25-35 мМ хлорида натрия, 20-40 мМ гистидина и 90-115 мМ аргинина, отличающийся осмоляльностью 250-500 мОсмоль/кг и значением pH 7,1-7,5.
15. Препарат C1-Inh по п. 10, содержащий 25-40 мМ хлорида натрия, 100-140 мМ гистидина, 90-130 мМ аргинина и 5-30 мМ глицина, отличающийся осмоляльностью 380-500 мОсмоль/кг и значением pH 7,1-7,5.
16. Препарат C1-Inh по пп. 10-15, отличающийся биодоступностью подкожно применяемого C1-Inh больше 60% от применяемого внутривенно C1-Inh, вводимого в такой же дозе, определенной как площадь под кривой (AUC) за 168 часов.
17. Препарат C1-Inh по любому из пп. 11-16, отличающийся стабильностью в течение по меньшей мере 24 месяцев в условиях хранения при 1-35°C, в частности, при 1-30°C, еще более конкретно при 1-25°C.
18. Препарат C1-Inh по любому из пп. 1-9, где препарат является жидкостью.
19. Препарат C1-Inh по п. 18, содержащий хлорид натрия и аргинин, отличающийся осмоляльностью 250-500 мОсмоль/кг и значением pH 6,0-8,0, в частности, 7,0-7,8, еще более конкретно значением pH 7,1-7,5.
20. Препарат C1-Inh по п. 18, содержащий 10-100 мМ хлорида натрия, 8-300 мМ гистидина и 20-250 мМ аргинина, отличающийся осмоляльностью 250-500 мОсмоль/кг и значением pH 7,1-7,5.
21. Препарат C1-Inh по п. 18, содержащий 10-100 мМ хлорида натрия, 10-100 мМ гистидина и 30-200 мМ аргинина, отличающийся осмоляльностью 250-500 мОсмоль/кг и значением pH 6,0-8,0.
22. Препарат C1-Inh по п. 18, содержащий 25-35 мМ хлорида натрия, 100-140 мМ гистидина, 90-130 мМ аргинина и 5-30 мМ глицина, отличающийся осмоляльностью 380-500 мОсмоль/кг и значением pH 7,1-7,5.
23. Препарат C1-Inh по п. 18, содержащий 25-35 мМ хлорида натрия, 20-40 мМ гистидина и 90-115 мМ аргинина, отличающийся осмоляльностью 250-350 мОсмоль/кг и значением pH 7,1-7,5.
24. Препарат C1-Inh по п. 18, содержащий 25-35 мМ хлорида натрия, 10-20 мМ гистидина, 70-90 мМ аргинина и 35-65 мМ глицина и имеющий значение pH 7,1-7,5.
25. Препараты C1-Inh по пп. 18-24, отличающиеся стабильностью в течение по меньшей мере 12 месяцев при 1-8°C, в частности, стабильностью в течение по меньшей мере 24 месяцев при 1-8°C.
26. Препараты C1-Inh по пп. 18-25, отличающиеся биодоступностью подкожно применяемого C1-Inh больше 60% от применяемого внутривенно C1-Inh, вводимого в такой же дозе, определяемой как AUC за 168 часов.
27. Применение препарата C1-Inh в лечении наследственного или врожденного ангионевротического отека (НАО), где препарат C1-Inh определен согласно любому из пп. 1-26.
28. Набор для лечения НАО, состоящий из первой емкости, содержащей препарат C1-Inh по любому из пп. 10-17, второй емкости, содержащей воду для инъекций, системы переноса, позволяющей производить восстановление лиофилизата в стерильных условиях, где ресуспендированный препарат C1-Inh можно хранить при комнатной температуре до одного месяца перед применением.
29. Шприц, предварительно наполненный препаратом C1-Inh по любому из пп. 18-27, для лечения НАО, где препарат стабилен в течение по меньшей мере 12 месяцев в условиях хранения при 1-8°C, в частности, в течение по меньшей мере 24 месяцев при 1-8°C.
30. Шприц, предварительно наполненный препаратами C1-Inh по пп. 18-27, для лечения НАО, где препарат стабилен в течение по меньшей мере 12 месяцев в условиях хранения при 1-8°C и в течение одного дополнительного месяца после нагревания до комнатной температуры, при условии, что комнатная температура 20-25°C в течение указанного дополнительного месяца не была превышена.
31. Устройство, подходящее для подкожного применения, такое как "нательный инъектор", предварительно наполненное препаратами C1-Inh по пп. 18-27, для лечения НАО, где препарат стабилен в течение по меньшей мере 12 месяцев в условиях хранения при 1-8°C и в течение одного дополнительного месяца после нагревания до комнатной температуры, при условии, что комнатная температура 20-25°C в течение указанного дополнительного месяца не была превышена.
