Композиция, содержащая антитело против протофибрилл абета и ингибитор бета-секретазы васе1 для лечения болезни альцгеймера

Группа изобретений относится к области фармацевтики и медицины. 1 объект представляет собой способ лечения болезни Альцгеймера, включающий введение нуждающемуся в этом субъекту комбинации терапевтически эффективного количества антитела против протофибрилл Aβ и терапевтически эффективного количества N-[3-((4aS,5R,7aS)-2-амино-5-метил-4a,5,7,7a-тетрагидро-4H-фуро[3,4-d][1,3]тиазин-7a-ил)-4-фторфенил]-5-дифторметилпиразин-2-карбоксамида и/или его фармацевтически приемлемой соли. 2 объект – комбинацию для применения в лечении болезни Альцгеймера, содержащую антитело против протофибрилл Aβ и N-[3-((4aS,5R,7aS)-2-амино-5-метил-4a,5,7,7a-тетрагидро-4H-фуро[3,4-d][1,3]тиазин-7a-ил)-4-фторфенил]-5-дифторметилпиразин-2-карбоксамид или его фармацевтически приемлемую соль. Технический результат заключается в снижении уровня Aβ42 в головном мозге и повышении мощности электроэнцефалограмм в диапазонах α1 (11-13 Гц) и β1 (13-22 Гц) при введении комбинации. 2 н. и 5 з.п. ф-лы, 2 ил., 2 табл., 4 пр.

 

[0001] По настоящей заявке испрашивается приоритет по временной заявке США № 62/413961, поданной 27 октября 2016 года, и временной заявке США № 62/415165, поданной 31 октября 2016 года, включенным в настоящее описание в качестве ссылки.

[0002] Болезнь Альцгеймера поражает 1 из 9 пожилых людей и является причиной деменции у более 5,2 миллионов жителей США и более 30 миллионов людей по всему миру. В настоящее время не существует средства для излечения или профилактики этого тяжелого заболевания. Гистологически заболевание отличается сенильными бляшками, обнаруживаемыми, главным образом, в ассоциативной зоне коры головного мозга, лимбической системе и базальных ганглиях. Основным компонентом этих бляшек является амилоидный бета-пептид (Aβ).

[0003] Aβ существует в различных конформационных состояниях -мономерах, олигомерах, протофибриллах и нерастворимых фибриллах. Детали механистической взаимосвязи между дебютом болезни Альцгеймера и продукцией Aβ неизвестны. Однако, некоторые антитела против Aβ и ингибиторы бета-секретазы (BACE1) в настоящее время проходят стадию клинических исследований в качестве потенциальных терапевтических средств от болезни Альцгеймера.

[0004] Настоящее изобретение относится к способам комбинированного лечения для лечения, профилактики и/или задержки дебюта и/или развития болезни Альцгеймера, включающим введение терапевтически эффективного количества антитела против протофибрилл Aβ и терапевтически эффективного количества ингибитора бета-секретазы. В некоторых вариантах осуществления комбинированное лечение ингибирует продукцию Aβ и/или токсического олигомерного Aβ. В некоторых вариантах осуществления комбинированное лечение снижает Aβ и/или токсические олигомерные протофибриллы Aβ в головном мозге.

[0005] Изобретение относится к способам, комбинированному лечению, фармацевтическим композициям и наборам для лечения, профилактики и/или задержки дебюта и/или развития болезни Альцгеймера с использованием комбинации антитела против протофибрилл Aβ и N-[3-((4aS,5R,7aS)-2-амино-5-метил-4a,5,7,7a-тетрагидро-4H-фуро[3,4-d][1,3]тиазин-7a-ил)-4-фторфенил]-5-дифторметилпиразин-2-карбоксамида или его фармацевтически приемлемой соли.

[0006] В рамках изобретения антитело против протофибрилл Aβ содержит (a) вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1, и (b) вариабельный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2. Приписывание аминокислот к каждому домену, как правило, соответствует определениям по SEQUENCES OF PROTEINS OF IMMUNOLOGICAL INTEREST (Kabat, et al., 5th ed., U.S.Department of Health and Human Services, NIH Publication No.91-3242, 1991, далее обозначаемой как "статья Kabat").

[0007] В некоторых вариантах осуществления антитело против протофибрилл Aβ содержит константную область человека.

[0008] В некоторых вариантах осуществления человеческая константная область антитела против протофибрилл Aβ содержит константную область тяжелой цепи, выбранную из IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgA, IgE и любого их аллельного варианта, как описано в статье Kabat. В настоящем изобретении можно использовать любую одну или более из таких последовательностей. В некоторых вариантах осуществления константную область тяжелой цепи выбирают из IgG1 и его аллельных вариантов. Аминокислотная последовательность константной области IgG1 человека известна в этой области и приведена в SEQ ID NO: 3.

[0009] В некоторых вариантах осуществления человеческая константная область антитела против Aβ содержит константную область легкой цепи, выбранную из константных областей κ-λ-цепи и любых их аллельных вариантов, как описано в статье Kabat. В настоящем изобретении можно использовать любую одну или более из таких последовательностей. В некоторых вариантах осуществления константную область легкой цепи выбирают из константной области κ-цепи и ее аллельных вариантов. Аминокислотная последовательность константной области κ-цепи человека известна в этой области и приведена в SEQ ID NO: 4.

[00010] В некоторых вариантах осуществления антитело против протофибрилл Aβ является BAN2401. mAb158 является моноклональным антителом мыши, индуцированным против протофибрилл-мишеней, и BAN2401 является гуманизированной моноклональной IgG1-версией mAb158. mAb158 описано в WO2007/108756A1 и Journal of Alzheimer's Disease 43 (2015) 575-588.

[00011] BAN2401 является гуманизированным моноклональным антителом, содержащим (a) вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1, и (b) вариабельный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2. Полноразмерная последовательность BAN2401 приведена в SEQ ID NO: 5.

[00012] Считают, что BAN2401 селективно связывает, нейтрализует и элиминирует растворимые токсические агрегаты Aβ (протофибриллы), которые, как полагают, вносят свой вклад в нейродегенеративный процесс при болезни Альцгеймера. По существу, BAN2401 демонстрирует иммуномодулирующий эффект, который может супрессировать прогрессирование болезни Альцгеймера. В настоящее время BAN2401 проходит клинические испытания фазы II.

[00013] N-[3-((4aS,5R,7aS)-2-амино-5-метил-4a,5,7,7a-тетрагидро-4H-фуро[3,4-d][1,3]тиазин-7a-ил)-4-фторфенил]-5-дифторметилпиразин-2-карбоксамид (обозначаемый в настоящем описании как "соединение X"), соответствующий химической формуле (1), представленной ниже, или его фармацевтически приемлемая соль является ингибитором фермента, расщепляющего белок-предшественни бета-амилоида 1 (BACE1). См., например, патент США № 8158620 и патент США № 8426584. Соединение X также известно как E2609, или его также можно обозначать как эленбецестат. Ингибируя BACE, соединение X может снижать Aβ-пептиды в головном мозге, потенциально улучшая симптомы и/или замедляя прогрессирование болезни Альцгеймера.

[00014] В некоторых вариантах осуществления соединение X находится в форме свободного основания.

[00015] В некоторых вариантах осуществления изобретение относится к способам профилактики, лечения и/или задержки дебюта и/или развития болезни Альцгеймера и включает введение нуждающемуся в этом субъекту терапевтически эффективного количества BAN2401 и терапевтически эффективного количества соединения X.

[00016] В некоторых вариантах осуществления субъект является субъектом, как считают, имеющим риск развития болезни Альцгеймера, например, субъектом, имеющим по меньшей мере одного члена семьи с диагностированной болезнью Альцгеймера.

[00017] В некоторых вариантах осуществления субъект является субъектом, по результатам диагностики имеющим по меньшей мере одну генетическую мутацию, ассоциированную с болезнью Альцгеймера.

[00018] В некоторых вариантах осуществления субъект является субъектом, имеющим по меньшей мере один мутантный или аномальный ген, ассоциированный с болезнью Альцгеймера (например, мутацию APP, мутацию пресенилина и/или аллель ApoE4), но которому не поставлен диагноз болезни Альцгеймера.

[00019] В некоторых вариантах осуществления субъект является субъектом, не идентифицированным как субъект, генетически предрасположенный к развитию болезни Альцгеймера.

[00020] Краткое описание чертежей

[00021] На фиг. 1 показано количество Aβ в экстрактах головного мозга мышей Tg2576.

[00022] На фиг. 2 показаны эффекты комбинированного лечения в диапазонах частот α1 и β1 на записи ЭЭГ мышей Tg2576 hetero.

[00023] В рамках изобретения термин "профилактика" включает, в качестве неограничивающих примеров, ингибирование и/или предотвращение одного или более биохимических изменений, гистологических изменений и/или поведенческих симптомов, ассоциированных с болезнью Альцгеймера. Симптомы и патологические изменения, ассоциированные с болезнью Альцгеймера, включают, в качестве неограничивающих примеров, снижение когнитивных функций, повышение образования амилоидных бляшек, количество растворимого Aβ-пептида, циркулирующего в биологических жидкостях, накопление Aβ-пептида в головном мозге и аномалии памяти, способности решать задачи, речи, вычислений, зрительно-пространственного восприятия, способности рассуждать и поведения.

[00024] В рамках изобретения термин "лечение" означает подход для достижения благоприятных и/или желаемых результатов, включая, в качестве неограничивающих примеров, клинические результаты. Неограничивающие примеры благоприятных и/или желаемых результатов включают один или более из следующего: ингибирование и/или супрессию образования амилоидных бляшек, снижение, удаление и/или устранение амилоидных бляшек, улучшение когнитивных функций и/или реверсирование снижения когнитивных функций, секвестрацию растворимого Aβ-пептида, циркулирующего в биологических жидкостях, снижение Aβ-пептида (включая растворимый и депонируемый) в ткани (например, головном мозге), ингибирование и/или снижение накопления Aβ-пептида в головном мозге, ингибирование и/или снижение токсических эффектов Aβ-пептида в ткани (например, головном мозге), снижение атрофии головного мозга, снижение одного или более симптомов, являющихся результатом заболевания (например, аномалий памяти, способности решать задачи, речи, вычислений, зрительно-пространственного восприятия, способности рассуждать и поведения, неспособности заботится о себе), повышение качества жизни, снижение дозы одного или более других лекарственных средств, необходимых для лечения заболевания, задержки прогрессирования заболевании, изменение основополагающего патологического процесса и/или течения заболевания и/или пролонгирования выживаемости.

[00025] В рамках изобретения термин "лечение" используют для описания осуществления способа после дебюта симптомов болезни Альцгеймера, в то время как термин "профилактика" используют для описания осуществления способа до дебюта симптомов, например, в отношении пациентов с риском развития болезни Альцгеймера.

[00026] В рамках изобретения пациенты с риском развития болезни Альцгеймера могут иметь или не иметь детектируемое заболевание и могут проявлять или не проявлять детектируемое заболевание перед использованием способов лечения, представленных в настоящем описании. Термин "имеющий риск" означает, что субъект имеет один или более измеримых параметров (факторов риска), коррелирующих с развитием болезни Альцгеймера. Эти факторы риска включают, в качестве неограничивающих примеров, возраст, пол, расу, питание, предшествующие заболевания в анамнезе, наличие предшественников заболевания, генетические (т.е. наследственные) факторы и воздействие факторов окружающей среды. В качестве неограничивающих примеров, субъекты с риском развития болезни Альцгеймера включают субъектов, имеющих семейный анамнез болезни Альцгеймера, субъектов, риск у которых определен посредством анализа генетических или биохимических маркеров, субъектов с положительными результатами анализа крови на любой из сигнальных белков, присутствующих в плазме крови и/или цереброспинальной жидкости ("CSF"), известных в качестве прогностических факторов при клинической диагностике болезни Альцгеймера.

[00027] В рамках изобретения термин "задержка" развития болезни Альцгеймера означает отсрочивание, препятствие, замедление, торможение, стабилизацию и/или откладывание развития заболевания, и/или замедление прогрессирования, или изменение основополагающего патологического процесса и/или течения заболевания после его развития. Эта задержка может иметь различную продолжительность в зависимости от анамнеза заболевания и/или субъекта, подвергаемого лечению. Как очевидно специалисту в этой области, достаточная или значительная задержка фактически может включать профилактику в том смысле, что у субъекта не развивается заболевание. Способ, "задерживающий" развитие болезни Альцгеймера, является способом, снижающим вероятность развития заболевания в указанный период времени и/или снижающий степень заболевания в указанный период времени по сравнению с отсутствием использования способа, включая стабилизацию одного или более симптомов, являющихся результатом заболевания (например, аномалий памяти, способности решать задачи, речи, вычислений, зрительно-пространственного восприятия, способности рассуждать и поведения, неспособности заботится о себе). Такое сравнение может быть основано на клинических исследованиях, как правило, с использованием достаточного количества субъектов для достижения статистически значимого результата. Развитие болезни Альцгеймера можно определять стандартными клиническими способами, такими как стандартный неврологический осмотр, опрос пациента, нейровизуализация, определение изменений уровней конкретных белков в сыворотке или цереброспинальной жидкости (например, амилоидных пептидов и/или тау-протеина), визуализации амилоида или тау-протеина в головном мозге посредством компьютерной томографии (КТ), магнитно-резонансной томографии (МРТ) и/или позитронно-эмиссионной томографии (ПЭТ). В рамках изобретения термин "развитие" также может относиться к прогрессированию заболевания, которое исходно может быть неопределимым, и может включать возникновение, рецидивирование, ухудшение и/или дебют.

[00028] В рамках изобретения термины "эффективное количество" и "терапевтически эффективное количество" относятся к количеству соединения или фармацевтической композиции, достаточному, чтобы вызвать желаемый терапевтический эффект, включая, в качестве неограничивающих примеров, профилактику и/или задержку дебюта и/или развития по меньшей мере одного заболевания. Терапевтически эффективное количество может варьироваться в зависимости от предполагаемого использования, субъекта, подлежащего лечению (включая, например, его массу тела и возраст), заболевания и его тяжести, пути и времени введения, желаемого эффекта (например, снижения побочных эффектов), используемой схемы дозирования и состава и системы доставки (при необходимости). В некоторых вариантах осуществления "терапевтически эффективное количество" лекарственного средства, используемого в комбинации по меньшей мере с одним другим терапевтическим средством, может быть таким же или отличаться (быть ниже или выше) от "терапевтически эффективного количества" лекарственного средства, используемого в отдельности (т.е. при монотерапии).

[00029] В некоторых вариантах осуществления описываемые способы комбинированного лечения могут включать более низкие дозы одного или более отдельных терапевтических средств, чем дозы, которые были бы необходимы, если бы отдельные терапевтические средства вводили по отдельности (т.е. при монотерапии BAN2401 и соединением X). Это снижение дозы может приводить к снижению одного или более побочных эффектов, ассоциированных с терапией. Например, в некоторых вариантах осуществления той же или большей терапевтической пользы достигают с использованием меньшего количества (например, более низкой дозы или менее частого введения) BAN2401, соединения X или и того и другого при комбинированном лечении, чем количества, как правило, используемые для монотерапии. В качестве дополнительного примера, в некоторых вариантах осуществления использование небольшого количества BAN2401, соединения X или и того, и другого приводит к снижению количества, тяжести, частоты и/или длительности одного или более побочных эффектов, ассоциированных с соединениями. В качестве неограничивающих примеров, комбинированное лечение может включать, по сравнению с дозами, как правило, используемыми для монотерапии: (i) более низкую дозу соединения X и более низкую дозу BAN2401; (ii) более низкую дозу BAN2401 и ту же дозу соединения X; (iii) более низкую дозу соединения X и ту же дозу BAN2401.

[00030] В некоторых вариантах осуществления описываемые способы комбинированного лечения могут включать более высокие дозы отдельных терапевтических средств, чем дозы, которые были бы необходимы, если бы отдельные терапевтические средства вводили по отдельности (т.е. при монотерапии BAN2401 и соединением X). Например, в некоторых вариантах осуществления способов комбинированного лечения доза одного из лекарственных средств (BAN2401 и соединения X) является более низкой, чем доза, как правило, используемая для монотерапии, в то время как другое лекарственное средство вводят той же или более высокой дозе, чем доза, как правило, используемая для монотерапии. В качестве неограничивающих примеров, комбинированное лечение может включать (i) более высокую дозу соединения X и более низкую дозу BAN2401 или (ii) более высокую дозу BAN2401 и более низкую дозу соединения X. В некоторых случаях повышение дозы одного из лекарственных средств при снижении дозы другого может иметь одно или оба из преимущества уменьшения побочных эффектов лекарственного средства с использованием более низкой дозы и преимущества достижения той же или большей терапевтической пользы, чем при монотерапии. В качестве дополнительного примера, в некоторых вариантах осуществления комбинированное лечение может включать, по сравнению с дозами, как правило, используемыми для монотерапии, (i) более высокую дозу соединения X и более высокую дозу BAN2401, (ii) более высокую дозу BAN2401 и ту же дозу соединения X или (iii) более высокую дозу соединения X и ту же дозу BAN2401.

[00031] В некоторых вариантах осуществления описываемое комбинированное позволяет снижать тяжесть одного или более симптомов, ассоциированных с болезнью Альцгеймера по меньшей мере на 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% или более 95% по сравнению с соответствующим симптомом у того же субъекта до лечения или по сравнению с соответствующим симптомом у других субъектов, не подвергаемых комбинированному лечению. Например, в некоторых вариантах осуществления введение комбинации BAN2401 и соединения X приводит к уменьшению снижения когнитивных функций, например, по меньшей мере на 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% или более 95% по сравнению с контролем.

[00032] В некоторых вариантах осуществления комбинации BAN2401 и соединения X можно вводить субъекту в одной лекарственной форме и/или посредством раздельного введения каждого активного средства.

[00033] В некоторых вариантах осуществления BAN2401 и соединение X можно составлять в таблетке, пилюле, капсуле или растворе. Можно выбирать состав BAN2401 и соединения X соответствующим образом. В некоторых вариантах осуществления BAN2401, соединение X или и то, и другое составляют в растворе для парентерального введения. В некоторых вариантах осуществления BAN2401 и соединение X можно составлять в отдельных областях капсулы или отдельных капсуловидных таблетках, заключенных в капсулу. В некоторых вариантах осуществления BAN2401 и соединение X можно составлять в виде изолированных слоев таблетки.

[00034] В некоторых вариантах осуществления изобретение относится к фармацевтической композиции для лечения, профилактики и/или задержки дебюта и/или развития болезни Альцгеймера, содержащей: терапевтически эффективное количество BAN2401, терапевтически эффективное количество соединения X и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель.

[00035] В некоторых вариантах осуществления BAN2401 и соединение X можно вводить в виде отдельных композиций и, необязательно, разных форм, например, в виде отдельных таблеток или растворов. Например, в некоторых вариантах осуществления соединение X вводят в виде пероральных таблеток для введения раз в сутки и BAN2401 вводят в виде инъекции. В качестве дополнительного неограничивающего примера, BAN2401 и соединение X вводят раздельно в виде пероральных таблеток. Также в качестве дополнительного неограничивающего примера, BAN2401 и соединение X вводят раздельно в виде инъекций.

[00036] В некоторых вариантах осуществления, если BAN2401 и соединение X вводят в виде отдельных композиций, изобретение относится к:

- фармацевтической композиции для применения в комбинации с соединением X для лечения, профилактики и/или задержки дебюта и/или развития болезни Альцгеймера, содержащей терапевтически эффективное количество BAN2401 и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель; и

- фармацевтической композиции для применения в комбинации с BAN2401 для лечения, профилактики и/или задержки дебюта и/или развития болезни Альцгеймера, содержащей терапевтически эффективное количество соединения X и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель.

[00037] В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к набору, содержащему первую фармацевтическую композицию, содержащую терапевтически эффективное количество BAN2401, вторую фармацевтическую композицию, содержащую терапевтически эффективное количество соединения X, и инструкции по использованию в лечении, профилактике и/или задержке дебюта и/или развития болезни Альцгеймера.

[00038] В некоторых вариантах осуществления BAN2401 и Соединение X можно вводить одновременно. В некоторых вариантах осуществления BAN2401 и соединение X можно вводить последовательно. В некоторых вариантах осуществления BAN2401 и соединение X можно вводить с интервалами. Продолжительность периодов между введениями BAN2401 и соединения X можно корректировать для достижения желаемого терапевтического эффекта. В некоторых вариантах осуществления BAN2401 и соединение X можно вводить с интервалом всего в несколько минут. В некоторых вариантах осуществления BAN2401 и соединение X можно вводить с интервалом в несколько часов (например, приблизительно 2, 4, 6, 10, 12, 24 или 36 ч.). В некоторых вариантах осуществления предпочтительным может быть введение нескольких доз одного из BAN2401 и соединения X между введениями другого терапевтического средства. Например, одного терапевтическое средство можно вводить через 1 час, а затем снова через 11 часов после введения другого терапевтического средства. В некоторых вариантах осуществления терапевтические эффекты каждого из BAN2401 и соединения X должны перекрываться по меньшей мере в течение части периода времени таким образом, что общий терапевтический эффект комбинированного лечения можно частично приписать комбинированному или синергическому действию комбинированного лечения.

[00039] Доза BAN2401 и соединения X может зависеть от ряда факторов, включая фармакодинамические характеристики каждого средства, путь введения, состояние здоровья пациента, подвергаемого лечению, желаемый объем лечения, природу и тип сопутствующей терапии, если ее проводят, частоту введения и природу желаемого эффекта. В некоторых вариантах осуществления BAN2401 можно вводить в дозе в диапазоне от приблизительно 0,001 мг/кг массы тела в сутки до приблизительно 200 мг/кг массы тела в сутки. В некоторых вариантах осуществления BAN2401 можно вводить в дозе в диапазоне от 0,001 мг/кг массы тела в сутки до 200 мг/кг массы тела в сутки. В некоторых вариантах осуществления соединение X можно вводить в дозе в диапазоне от 5 мг/сутки до 100 мг/сутки, от 10 мг/сутки до 75 мг/сутки, от 5 мг/сутки до 50 мг/сутки или от 15 мг/сутки до 50 мг/сутки. В некоторых вариантах осуществления соединение X можно вводить в дозе в диапазоне от приблизительно 5 мг/сутки до приблизительно 100 мг/сутки, от приблизительно 10 мг/сутки до приблизительно 75 мг/сутки, от приблизительно 5 мг/сутки до приблизительно 50 мг/сутки или от приблизительно 15 мг/сутки до приблизительно 50 мг/сутки. В некоторых вариантах осуществления соединение X можно вводить в дозе 5 мг/сутки, 10 мг/сутки, 15 мг/сутки, 20 мг/сутки, 25 мг/сутки, 30 мг/сутки или 50 мг/сутки.

[00040] В некоторых вариантах осуществления BAN2401 можно вводить в дозе в диапазоне от 2,5 мг/кг до 10 мг/кг или от 5 мг/кг до 10 мг/кг. В некоторых вариантах осуществления BAN2401 вводят в дозе 10 мг/кг каждые 2 недели. В некоторых вариантах осуществления BAN2401 вводят в дозе 5 мг/кг каждые 2 недели. В некоторых вариантах осуществления BAN2401 вводят в дозе 2,5 мг/кг каждые 2 недели. В некоторых вариантах осуществления BAN2401 вводят в дозе 5 мг/кг каждый месяц. В некоторых вариантах осуществления BAN2401 вводят в дозе 10 мг/кг каждый месяц.

[00041] В некоторых вариантах осуществления BAN2401 можно вводить в дозе в диапазоне от приблизительно 2,5 мг/кг до приблизительно 10 мг/кг или от приблизительно 5 мг/кг до приблизительно 10 мг/кг. В некоторых вариантах осуществления BAN2401 вводят в дозе приблизительно 10 мг/кг каждые 2 недели. В некоторых вариантах осуществления BAN2401 вводят в дозе приблизительно 5 мг/кг каждые 2 недели. В некоторых вариантах осуществления BAN2401 вводят в дозе приблизительно 2,5 мг/кг каждые 2 недели. В некоторых вариантах осуществления BAN2401 вводят в дозе приблизительно 5 мг/кг каждый месяц. В некоторых вариантах осуществления BAN2401 вводят в дозе приблизительно 10 мг/кг каждый месяц.

[00042] В некоторых вариантах осуществления каждое из BAN2401 и соединения X можно вводить по схеме введения, пример которой приведен в таблице 1:

Соединение X	5 мг/сутки	15 мг/сутки
BAN2401
2,5 мг/кг/2 недели
5 мг/кг/2 недели
5 мг/кг/месяц
10 мг/кг/2 недели
10 мг/кг/месяц

[00043] В некоторых вариантах осуществления каждое из BAN2401 и соединения X можно вводить по схеме введения, пример которой приведен в таблице 2:

Соединение X	25 мг/сутки	50 мг/сутки
BAN2401
2,5 мг/кг/2 недели
5 мг/кг/2 недели
5 мг/кг/месяц
10 мг/кг/2 недели
10 мг/кг/месяц

[00044] В некоторых вариантах осуществления вводят фиксированную дозу 50 мг соединения X. В некоторых вариантах осуществления частота инфузий BAN2401/плацебо составляет раз в 2 или 4 недели, а соединение X вводят раз в сутки перорально в форме по меньшей мере одной таблетки в максимальной переносимой дозе.

[00045] В некоторых вариантах осуществления диапазоны доз могут варьироваться в зависимости от возраста и массы тела субъекта, подвергаемого лечению, и предполагаемого пути введения. В некоторых вариантах осуществления дозу выбирают так, чтобы улучшать и/или сохранять эффективность и улучшать по меньшей мере одно из безопасности и переносимости. В некоторых вариантах осуществления дозу выбирают так, чтобы снижать по меньшей мере один побочный эффект и одновременно улучшать и/или сохранять эффективность.

[00046] В некоторых вариантах осуществления комбинации и способы по изобретению могут ингибировать продукцию Aβ и/или токсического олигомерного Aβ. В некоторых вариантах осуществления комбинация и способы по изобретению могут снижать Aβ и/или токсичные олигомерные протофибриллы Aβ в головном мозге.

[00047] В некоторых вариантах осуществления комбинации и способы по изобретению могут приводить к улучшению терапевтической эффективности по сравнению с монотерапией с использованием любого из компонентов в отдельности (т.е. ингибитора BACE1 в отдельности или антитела против протофибрилл Aβ в отдельности). В некоторых вариантах осуществления комбинации и способы по изобретению могут приводить к повышению безопасности, а также равной эффективности (при снижении дозы, таким образом, приводящем к снижению нежелательных явлений) по сравнению с монотерапией с использованием любого из компонентов в отдельности.

[00048] В некоторых вариантах осуществления комбинации и способы по изобретению могут соответствовать монотерапии. Комбинации и способы по изобретению могут обеспечивать более широкий выбор для адаптации многокомпонентных схем лечения к потребностям отдельного пациента.

[00049] В некоторых вариантах осуществления комбинированное лечение может приводить к большему снижению мономерного Aβ, протофибрилл/олигомерного Aβ или и того, и другого по сравнению с монотерапией с использованием любого из компонентов в отдельности.

[00050] В некоторых вариантах осуществления комбинированное лечение может приводить к большему снижению количества и/или площади образования бляшек Aβ в головном мозге по сравнению с монотерапией с использованием любого из компонентов в отдельности.

[00051] В некоторых вариантах осуществления комбинированное лечение может приводить к улучшению нарушения памяти и/или ингибированию гиперлокомоции по сравнению с монотерапией с использованием любого из компонентов в отдельности.

[00052] В некоторых вариантах осуществления комбинированное лечение может приводить к улучшению аномальной жизнеспособности нейронов и/или аномальной синаптической функции по сравнению с монотерапией с использованием любого из компонентов в отдельности.

[00053] В некоторых вариантах осуществления комбинированное лечение может приводить к улучшению дисфункции кортикальной сети по сравнению с монотерапией с использованием любого из компонентов в отдельности.

[00054] В некоторых вариантах осуществления комбинированное лечение может приводить к улучшению повышенного и/или аномального нейровоспалительного ответа по сравнению с монотерапией с использованием любого из компонентов в отдельности.

[00055] В некоторых вариантах осуществления комбинированное лечение может приводить к ингибированию формирования патологии, связанной с Aβ и/или тау-протеином, по сравнению с монотерапией с использованием любого из компонентов в отдельности.

[00056] В некоторых вариантах осуществления комбинированное лечение может приводить к улучшению жизнеспособности нейронов и/или глиальных клеток по сравнению с монотерапией с использованием любого из компонентов в отдельности.

[00057] В некоторых вариантах осуществления комбинированное лечение может приводить к ингибированию измененной экспрессии генов под действием патологического Aβ по сравнению с монотерапией с использованием любого из компонентов в отдельности.

[00058] ПРИМЕРЫ

[00059] Пример 1: Оценка комбинированного лечения in vivo на мышах Tg2576 в биохимическом исследовании

[00060] Доза

[00061] Для исследования эффектов комбинированного лечения mAb158 ("соединением A") и соединением X мышам Tg2576 hetero возрастом более 11 месяцев вводили соединение A в отдельности (12 мг/кг/неделю, n=19), соединение X в отдельности (3 мг/кг/сутки, n=19) или комбинацию соединений A и X (n=19). PBS использовали в качестве раствора-носителя для соединения A, а 0,5% раствор метилцеллюлозы, включающий 5% 1 Н HCl ("раствор MC"), использовали в качестве раствора-носителя для соединения X. Мышам Tg2576 в контрольной группе (n=20) и мышам дикого типа (n=15) вводили оба раствора-носителя, PBS (6 мл/кг/неделю) и раствор MC (10 мл/кг/сутки). Дозу соединения A вводили еженедельно и интраперитонеально, а дозу соединения X вводили раз в сутки и перорально. Мышам Tg2576 hetero в группе соединения A или соединения X также вводили раствор MC или раствор PBS, соответственно. Длительность введения составляла 3 месяца. Мышей умерщвляли для получения головного мозга, CSF и образцов плазмы. Головной мозг рассекали на отдельные полушария после реперфузии. Одно полушарие головного мозга замораживали в жидком азоте, а другое полушарие фиксировали в 10% формалине, забуференном фосфатом. Замороженные образцы головного мозга использовали для измерения видов Aβ.

[00062] Измерение Aβ в головном мозге

[00063] Замороженные полушария головного мозга мышей Tg2576 гомогенизировали в забуференном Трис физиологическом растворе (TBS, Sigma), дополненном смесью ингибиторов протеаз (cOmplete, Roche), и гомогенизированный раствор в TBS центрифугировали при 100000×g в течение 1 ч. при 4°C. От раствора в TBS после центрифугирования отделяли супернатант (растворимый экстракт) и преципитат и последовательно гомогенизировали преципитаты с использованием 70% муравьиной кислоты (в виде нерастворимого экстракта). Для каждого головного мозга концентрации Aβ в растворимом и нерастворимом экстракте измеряли с помощью ELISA Aβ (набор для ELISA Aβ(40)/(42) человека/крысы, Wako). Статистические различия уровней Aβ40/42 в каждом экстракте в контрольной группе, которой вводили носитель, и группе комбинированного лечения анализировали, главным образом, с помощью t-критерия Стьюдента с использованием GraphPad Prism (GraphPad Software, Inc.). Учитывая значимые различия между контрольной группой, которой вводили носитель, и группой комбинированного лечения, сравнение группы комбинированного лечения и группы соединения A (в отдельности) или группы соединения X (в отдельности) осуществляли с помощью критерий Даннета.

[00064] На фигуре 1 показаны результаты измерения Aβ42 в растворимом и нерастворимом экстрактах головного мозга мышей Tg2576.

[00065] Комбинированное лечение соединением A и соединением X приводило к значимому снижению уровня Aβ42 по сравнению с введением носителя (p=0,042). В случае нерастворимого экстракта комбинированное лечение приводило к значимому снижению уровня Aβ42 по сравнению с введением носителя (p=0,035). Статистические различия между контрольной группой и группой комбинированного лечения и между группой комбинированного лечения и группой соединения X указаны на фигуре, где символом * указано p<0,05 и символом ^# указано p<0,1.

[00066] Пример 2: Оценка комбинированного лечения in vivo у мышей Tg2576 в биохимическом и патологическом исследованиях и исследовании с использованием ЭЭГ

[00067] Доза

[00068] Для исследования эффектов комбинированного лечения соединением A и соединением X мышам Tg2576 возрастом более 11 месяцев вводили соединение A в отдельности (12 мг/кг/неделю, n=7), соединение X в отдельности (3 мг/кг/сутки, n=8) или комбинацию соединений A и X (n=9). Введение дозы соединения A осуществляли раз в неделю и интраперитонеально, а дозу соединения X вводили ежедневно и перорально. Раствор PBS использовали для введения соединения A, а 0,5% раствор метилцеллюлозы, включающий 5% 1 Н HCl (раствор MC), использовали для введения соединения X. Мышам Tg2576 hetero в контрольной группе (n=8) вводили оба раствора-носителя, PBS (6 мл/кг/неделю) и раствор MC (10 мл/кг/сутки). Мышам в группе соединения A или группе соединения X также вводили раствор MC или раствор PBS, соответственно. Длительность введения составляла 3 месяца. В последнюю неделю введения доз мышей подвергали функциональной оценке посредством анализа записей электроэнцефалограмм (ЭЭГ).

[00069] Анализ ЭЭГ

[00070] В условиях ингаляционной анестезии с использованием изофлурана мышей Tg2576 держали в стереотаксическом аппарате и их черепа экспонировали для имплантации записывающих электродов для ЭЭГ и электромиографии (ЭМГ). В череп помещали четыре электрода для ЭЭГ. Два из электродов помещали в положениях на правой стороне [переднезадняя ось (AP)=1,1 мм/латеральная (L)=1,3 мм и AP=-4,0 мм/L=1,3 мм], и остальные два электрода помещали на левую сторону [AP=1,1 мм/L=-1,3 мм и AP =-4,0 мм/L=-1,3 мм]. Затем электроды для ЭМГ для регистрации миоэлектрического потенциала имплантировали в правые и левые скелетные мышцы шеи.

[00071] Осуществляли регистрацию ЭЭГ и ЭМГ у мышей, помещенных в клетки для измерения ЭЭГ и ЭМГ. Сигналы ЭЭГ и ЭМГ в реальном времени отводили от электродов, имплантированных мышам Tg2576, усиливали с помощью трехканальной системы регистрации биопотенциалов (Pinnacle Technology, Inc.) и записывали на жесткий диск с использованием программного обеспечения для сбора данных (Sirenia Acquisition, Pinnacle Technology, Inc.).

[00072] Анализ спектральной мощности ЭЭГ осуществляли с использованием программного обеспечения SleepSign (KISSEI COMTEC CO., LTD.). Записанные данные ЭЭГ для каждой мыши анализировали с помощью быстрого преобразования Фурье (FFT) для получения уровня мощности ЭЭГ (необработанных значений мощности ЭЭГ) для каждой частоты.

[00073] Необработанные значения мощности ЭЭГ разделяли на 8 диапазонов частот от 1 до 100 Гц. 8 диапазонов частот выстраивали в следующем порядке: δ (1-4 Гц), θ (4-8 Гц), α1 (8-11 Гц), α2 (11-13 Гц), β1 (13-22 Гц), β2 (22-30 Гц), γ1 (30-48 Гц) и γ2 (52-100 Гц). В каждой группе мощность ЭЭГ суммировали в каждом диапазоне частот и сравнивали ее между группами.

[00074] Статистический анализ осуществляли с использованием GraphPad Prism (GraphPad Software, Inc.). Сначала с помощью t-критерия Стьюдента осуществляли статистический анализ мощностей ЭЭГ между контрольной группой, которой вводили носитель, и группой комбинированного лечения в каждом диапазоне частот δ, θ, α1, α2, β1, β2,γ1 и γ2. В случае, когда для мощности ЭЭГ в диапазоне частот наблюдали значимые различия при первом статистическом анализе, различия мощностей ЭЭГ между группой комбинированного лечения и группой соединения A или группой соединения X анализировали посредством одностороннего дисперсионного анализа (ANOVA), а затем способом наименьшей значимой разности Фишера. В группе комбинированного лечения наблюдали статистически значимое повышение мощностей ЭЭГ в α1 и β1 по сравнению с контрольной группой, которой вводили носитель. Дальнейший статистический анализ показал, что мощности ЭЭГ в группе комбинированного лечения были значимо выше, чем в группе соединения A (p=0,0009 в α1 и 0,0106 в β1, соответственно), и имели тенденцию к повышению по сравнению с группой соединения X (p=0,0512 в α1).

[00075] Известно, что признаки ЭЭГ в период покоя у пациентов с AD отличаются повышением распространенной дельта- и тета-активности а также снижением постериорной альфа- и бета-активности, и повышение мощности медленных волн ЭЭГ вместе со снижением альфа-активности связано со снижением когнитивных функций при MCI по сравнению со здоровыми субъектами (Electroencephalogram and Alzheimer's Disease: Clinical and Research Approaches (A. Tsolaki, et al., International Journal of Alzheimer's Disease, 2014); Electroencephalographic Rhythms in Alzheimer's Disease (R. Lizio et al., International Journal of Alzheimer's Disease, 2011). Эффекты комбинированного лечения в представленной модели AD на мышах свидетельствуют о том, что комбинированное лечение может улучшать аномалии ЭЭГ у пациентов с AD.

[00076] На фигуре 2 показаны эффекты комбинированного лечения на записи ЭЭГ в диапазонах частот α1 и β1 у мышей Tg2576 hetero. На фигуре показаны статистические различия между контрольной группой, которой вводили носитель, и группой комбинированного лечения и между группой комбинированного лечения и группой соединения A, где символом * указано p<0,05, и символами ^# и ^## указаны p<0,1 и p<0,05, соответственно.

[00077] Пример 3: Составы

[00078] В некоторых вариантах осуществления соединение X можно составлять в твердой лекарственной форме по примеру 1 из WO2016/056638. В частности, 2500 мг фармакологического соединения, 2285 мг лактозы (DFE Pharma Corp.), 330 мг гидроксипропилцеллюлозы с низкой степенью замещения (тип LH21, Shinetsu Chemical Co., Ltd.) и 165 мг гидроксипропилцеллюлозы (тип SL, Nippon Soda Co., Ltd.) смешивали в ступке. К полученной смеси добавляли подходящее количество водного этанола (30% масс./масс.), а затем осуществляли влажное гранулирование в ступке. После высушивания полученных гранул с использованием бани с постоянной температурой гранулы разделяли по размеру с использованием сита с отверстиями 1 мм. Добавляли 33 мг гидроксипропилцеллюлозы с низкой степенью замещения (тип LH21, Shinetsu Chemical Co., Ltd.) и 11 мг стеарилфумарата натрия (JRS Pharma Corp.) на 1056 мг разделенных гранул и смешивали в сосуде. Полученную смесь прессовали при 9 кН с использованием одноштампового устройства для таблетирования для получения таблеток с диаметром 6,5 мм и массой 110 мг.

[00079] С другой стороны, BAN2401 можно составлять общепринятым способом в жидкой лекарственной форе, содержащей, например, цитрат натрия, хлорид натрия и полисорбат 80 с pH приблизительно 5. В некоторых вариантах осуществления состав может содержать 10 мг/мл BAN2401, 25 мМ цитрат натрия, 125 мМ хлорид натрия и 0,2% (масс./об.) полисорбата 80 и иметь pH 5,7.

[00080] Пример 4: Плацебо-контролируемое, двойное слепое, 24-месячное исследование с двойной имитацией и факториальным дизайном для оценки безопасности и эффективности соединения X, BAN2401 и комбинации соединения X и BAN2401 у субъектов с ранней болезнью Альцгеймера

[00081] Дизайн исследования

[00082] Это исследование является многоцентровым, двойным слепым, плацебо-контролируемым исследованием с двойной имитацией и факториальным дизайном на субъектах с ранней болезнью Альцгеймера. Исследование включает дизайн с двойной имитацией с использованием плацебо, соответствующих внутривенным инфузиям BAN2401 и пероральным таблеткам соединения X, чтобы сделать возможной полное маскирование в группах монотерапии и совместного введения. Всех субъектов подвергали внутривенным инфузиям, и им перорально вводили таблетки.

[00083] Доза и частота введения для инфузий BAN2401/плацебо соответствовали наиболее высокой дозе и частоте из хорошо переносимых схем лечения, выбранных для разработки исследования фазы 3 с учетом результатов продолжающего исследования BAN2401-G000-201, в котором в настоящее время используют 2- и 4-недельные схемы введения. Соединение X вводят один раз в сутки в виде пероральных таблеток в максимальной переносимой дозе из продолжающего исследования. Всего рандомизировано 3064 субъектов в 4 исследуемых группах, всем из которых предлагали одобренное в настоящее время и стабильное лечение болезни Альцгеймера или его отсутствие:

- Группа A (плацебо): Плацебо, вводимые ежедневно перорально и внутривенно (IV) в виде инфузий каждые 2 (или 4) недели,

- Группа B (монотерапия соединением X): Соединение X, вводимое ежедневно перорально, и плацебо, вводимое в виде IV инфузии каждые 2 (или 4) недели,

- Группа C (монотерапия BAN2401): BAN2401, вводимое в виде IV инфузии каждые 2 (или 4) недели, и плацебо, вводимое ежедневно перорально,

- Группа D (совместное введение): BAN2401, вводимое в виде IV инфузии в 2 дозах с интервалом 2 (или 4) недели вместе с плацебо, вводимым ежедневно перорально до запланированной 3-ей дозы BAN2401. Начиная с 3-ей дозы BAN2401, BAN2401 вводят в виде IV инфузии каждые 2 (или 4) недели с соединением X, вводимым ежедневно перорально.

[00084] Субъекты подлежали рандомизации в фиксированном соотношении 1:1:1:1 по 4 исследуемым группам. Рандомизацию субъектов стратифицировали по генотипу ApoE, сопутствующей лекарственной терапии болезни Альцгеймера и тяжести болезни Альцгеймера на момент рандомизации (т.е. легкие когнитивные нарушения в результате болезни Альцгеймера/продромальная стадия по сравнению с легкой деменцией).

[00085] Критерии включения

[00086] Диагностика

[00087] Легкие когнитивные нарушения в результате болезни Альцгеймера - промежуточная вероятность связи MCI с болезнью Альцгеймера/продромальная стадия болезни Альцгеймера:

1. Соответствие основным клиническим критериям Национального института Старения и Ассоциации по борьбе с болезнью Альцгеймера (NIA-AA) для легких когнитивных нарушений в результате болезни Альцгеймера - промежуточная вероятность связи MCI с болезнью Альцгеймера;

2. Баллы по Клинической рейтинговой шкале деменции (CDR) 0,5 и баллы CDR Memory Box 0,5 или выше при скрининге и на исходном уровне; и

3. Снижения памяти у субъекта в анамнезе с постепенным началом и медленным прогрессированием за последний 1 год до скрининга.

[00088] Легкая деменция при болезни Альцгеймера:

1. Соответствие основным клиническим критериям NIA-AA для вероятной деменции при болезни Альцгеймера; и

2. Баллы CDR 1,0 и баллы Memory Box 0,5 или выше при скрининге и на исходном уровне.

[00089] Ключевые критерии включения, которым должны соответствовать все субъекты:

1. Положительный биомаркер амилоидной патологии головного мозга, на что указывает по меньшей мере одно из следующего:

a) оценка захвата визуализирующего средства в головном мозге при ПЭТ; можно использовать архивное амилоид-положительное сканирование ПЭТ, если его осуществляли в пределах 12 месяцев перед скринингом при условии, что центральная группа чтения результатов ПЭТ считает сканирование и его результаты приемлемыми

b) анализ CSF на Aβ(1-42)

2. Баллы по Краткой шкале оценки психического статуса 22 или выше при скрининге и на исходном уровне.

[00090] Исследуемое лечение

[00091] Лечение включает дизайн с двойной имитацией с использованием плацебо, соответствующего внутривенным инфузиям BAN2401 и пероральным таблеткам соединения X, чтобы сделать возможным полное маскирование в группах монотерапии и совместного введения. Всех субъектов подвергали внутривенным инфузиям, и им перорально вводили таблетки.

[00092] Дозу и частоту введения для инфузий BAN2401/плацебо выбирают из наиболее эффективной и хорошо переносимой схемы лечения с учетом результатов продолжающегося исследования BAN2401-G000-201, в котором в настоящее время используют 2- и 4-недельные схемы введения.

[00093] Соединение X вводят раз в сутки в виде пероральных таблеток в максимальной дозе, как предполагают, являющейся оптимально безопасной и эффективной с учетом данных продолжающегося исследования.

[00094] Соединение X поставляют в виде таблеток дозировкой 50 мг. Таблетки плацебо, соответствующие соединению X, имеют идентичный внешний вид. Каждому субъекту вводят одну таблетку соединения X или плацебо, подлежащую введению перорально ежедневно ("QD") утром с едой.

[00095] Лекарственный продукт BAN2401 составляют в виде стерильной, непирогенной жидкости для внутривенного введения. Каждый флакон содержит 5 мл 100 мг/мл раствора BAN2401 в изотоническом буфере. BAN2401 вводят в нормальном физиологическом растворе посредством IV инфузии. BAN2401 необходимо вводить с использованием инфузионной системы, содержащей финишный встроенный фильтр 0,22 мкм. BAN2401 вводят в пересчете на мг/кг или плацебо. Всех субъектов подвергали инфузиям раз в 2 недели или ежемесячно.

[00096] Например, BAN2401 вводят в дозе 2,5 мг/кг/2 недели, 5 мг/кг/2 недели, 10 мг/кг/2 недели, 5 мг/кг/месяц или 10 мг/кг/месяц.

[00097] В предшествующих исследованиях с использованием BAN2401/плацебо инфузионные реакции являлись распространенными AE, как правило, возникающими при первой инфузии, и их можно избегать или минимизировать с использованием профилактических лекарственных средств, вводимых перед последующими инфузиями. Таким образом, начало введения соединения X в группе совместного введения задерживают для того, чтобы осуществить его в тот же день, что и 3-ю внутривенную инфузию BAN2401 во избежание возможной путаницы при определении нежелательных явлений при инфузионных реакциях, связанных с BAN2401, и нежелательных явлений, ассоциированных с совместным введением.

[00098] Для обеспечения полного маскирования, в случае субъектов, приписанных к группе D (совместное введение), первые две инфузии BAN2401 осуществляют внутривенно, в то время как таблетки плацебо вводят субъектам перорально QD. На момент третьей инфузии субъекту начинают перорально QD вводить соединение X и продолжают введение в течение исследования.

[00099] Оценка эффективности

[000100] CDR/Клиническая рейтинговая шкала деменции по сумме ячеек, Краткая шкала оценки психического статуса, Функциональный опросный оценочный лист (FAQ) и Модифицированная шкала оценки тяжести болезни Альцгеймера-Когнитивная подшкала (ADAS-Cog14) являются хорошо известными клиническими инструментами для использования в оценке болезни Альцгеймера.

[000101] Прогрессирование заболевания определяют как повышение относительно исходного уровня по меньшей мере на 0,5 по шкале CDR на 2 последовательных посещениях, на которых осуществляют оценку по CDR. В случае субъектов с CDR 0,5 на исходном уровне, о прогрессировании заболевания свидетельствует CDR 1 и выше. В случае субъектов с CDR 1,0 на исходном уровне, о прогрессировании заболевания свидетельствует CDR 2 и выше.

--->

ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> ЭЙСАЙ Ар ЭНД Ди МЕНЕДЖМЕНТ КО., ЛТД. (EISAI R&D MANAGEMENT CO., LTD.)

<120> КОМПОЗИЦИЯ, СОДЕРЖАЩАЯ АНТИТЕЛО ПРОТИВ ПРОТОФИБРИЛЛ АБЕТА И ИНГИБИТОР

БЕТА-СЕКРЕТАЗЫ BACE1 ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ БОЛЕЗНИ АЛЬЦГЕЙМЕРА

<130> 08061.28-304

<140>

<141>

<150> 62/415,165

<151> 2016-10-31

<150> 62/413,961

<151> 2016-10-27

<160> 6

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 124

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /note="Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид"

<400> 1

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe

20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Tyr Ile Ser Ser Gly Ser Ser Thr Ile Tyr Tyr Gly Asp Thr Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Phe

65 70 75 80

Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Gly Gly Tyr Tyr Tyr Gly Arg Ser Tyr Tyr Thr Met Asp

100 105 110

Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 2

<211> 112

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /note="Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид"

<400> 2

Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Ala Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser

20 25 30

Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Arg Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Ile Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly

85 90 95

Ser His Val Pro Pro Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 3

<211> 330

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 3

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys

1 5 10 15

Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr

65 70 75 80

Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

85 90 95

Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys

100 105 110

Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro

115 120 125

Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys

130 135 140

Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp

145 150 155 160

Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu

165 170 175

Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu

180 185 190

His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn

195 200 205

Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly

210 215 220

Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu

225 230 235 240

Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr

245 250 255

Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn

260 265 270

Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe

275 280 285

Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn

290 295 300

Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr

305 310 315 320

Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

325 330

<210> 4

<211> 107

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 4

Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu

1 5 10 15

Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe

20 25 30

Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln

35 40 45

Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser

50 55 60

Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu

65 70 75 80

Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser

85 90 95

Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

100 105

<210> 5

<211> 454

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> source

<223> /note="Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид"

<400> 5

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe

20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Tyr Ile Ser Ser Gly Ser Ser Thr Ile Tyr Tyr Gly Asp Thr Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Phe

65 70 75 80

Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Gly Gly Tyr Tyr Tyr Gly Arg Ser Tyr Tyr Thr Met Asp

100 105 110

Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys

115 120 125

Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly

130 135 140

Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro

145 150 155 160

Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr

165 170 175

Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val

180 185 190

Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn

195 200 205

Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro

210 215 220

Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu

225 230 235 240

Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp

245 250 255

Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp

260 265 270

Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly

275 280 285

Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn

290 295 300

Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp

305 310 315 320

Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro

325 330 335

Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu

340 345 350

Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn

355 360 365

Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile

370 375 380

Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr

385 390 395 400

Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys

405 410 415

Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys

420 425 430

Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu

435 440 445

Ser Leu Ser Pro Gly Lys

450

<210> 6

<211> 219

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /note="Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид"

<400> 6

Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Ala Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser

20 25 30

Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Arg Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Ile Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly

85 90 95

Ser His Val Pro Pro Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu

115 120 125

Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe

130 135 140

Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln

145 150 155 160

Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser

165 170 175

Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu

180 185 190

Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser

195 200 205

Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215

<---

1. Способ лечения болезни Альцгеймера, включающий введение нуждающемуся в этом субъекту комбинации терапевтически эффективного количества антитела против протофибрилл Aβ и терапевтически эффективного количества N-[3-((4aS,5R,7aS)-2-амино-5-метил-4a,5,7,7a-тетрагидро-4H-фуро[3,4-d][1,3]тиазин-7a-ил)-4-фторфенил]-5-дифторметилпиразин-2-карбоксамида и/или его фармацевтически приемлемой соли,

где антитело содержит (a) вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1, и (b) вариабельный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2.

2. Способ по п.1, где антитело вводят каждую неделю.

3. Способ по п.1, где (a) константная область тяжелой цепи дополнительно содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3, и (b) константная область легкой цепи дополнительно содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4.

4. Способ по п.1, где N-[3-((4aS,5R,7aS)-2-амино-5-метил-4a,5,7,7a-тетрагидро-4H-фуро[3,4-d][1,3]тиазин-7a-ил)-4-фторфенил]-5-дифторметилпиразин-2-карбоксамид находится в форме свободного основания.

5. Комбинация для применения в лечении болезни Альцгеймера, содержащая антитело против протофибрилл Aβ и N-[3-((4aS,5R,7aS)-2-амино-5-метил-4a,5,7,7a-тетрагидро-4H-фуро[3,4-d][1,3]тиазин-7a-ил)-4-фторфенил]-5-дифторметилпиразин-2-карбоксамид или его фармацевтически приемлемую соль,

где антитело содержит (a) вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1, и (b) вариабельный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2.

6. Комбинация по п.5, где (a) константная область тяжелой цепи дополнительно содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3, и (b) константная область легкой цепи дополнительно содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4.

7. Комбинация по п.5, где N-[3-((4aS,5R,7aS)-2-амино-5-метил-4a,5,7,7a-тетрагидро-4H-фуро[3,4-d][1,3]тиазин-7a-ил)-4-фторфенил]-5-дифторметилпиразин-2-карбоксамид находится в форме свободного основания.