Структуры мирнк с высокой активностью и сниженным воздействием вне мишени

Предложенная группа изобретений относится к медицине, а именно к фармацевтике. Предложена молекула RNAi для понижения экспрессии целевой мРНК, состоящая из полинуклеотидной смысловой цепи и полинуклеотидной антисмысловой цепи. Молекула имеет область дуплекса от 15 до 30 нуклеотидов в длину, в которой один или более нуклеотидов в антисмысловой цепи в положениях с 3 до 8 от 5'-конца области дуплекса представляют собой дезоксинуклеотиды, где 5'-конец антисмысловой цепи соответствует 5'-концу области дуплекса, где антисмысловая цепь имеет дезоксинуклеотиды во множестве положений в области затравки указанной антисмысловой цепи. Предложена фармацевтическая композиция для лечения злокачественных опухолей, содержащая указанную молекулу и фармацевтически приемлемый носитель. Предложена клетка для экспрессии молекулы RNAi, содержащая указанную молекулу. Предложен способ лечения злокачественных опухолей у субъекта посредством сайленсинга генов. Предложено применение фармацевтической композиции для лечения злокачественных опухолей у субъекта и применение композиции для получения или изготовления лекарственного средства для лечения злокачественных опухолей у субъекта, нуждающегося в этом. Предложенная группа изобретений обеспечивает увеличение активности нокдауна генов за счет использования молекулы RNAi, в которой один или более дезоксинуклеотидов расположен в области затравки миРНК. 6 н. и 21 з.п. ф-лы, 15 ил., 22 табл., 22 пр.

 

ТЕХНИЧЕСКАЯ ОБЛАСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[0001] Данное изобретение относится к области биофармацевтических и терапевтических средств, состоящих из молекул на основе нуклеиновых кислот. Более конкретно, данное изобретение относится к структурам соединений, использующих РНК-интерференцию (RNAi) для модулирования экспрессия генов, и к их использованию.

СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

[0002] Данная заявка содержит список последовательностей, поданный в электронной форме в виде ASCII файла, созданного 18 апреля 2018 года, с названием Списки последовательностей.txt, который имеет размер 183581 байт и включен, таким образом, посредством ссылки в полном объеме.

ПРЕДПОСЫЛКИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[0003] РНК-интерференцию (RNAi) использовали у животных для посттранскрипционного сайленсинга генов со специфической последовательностью, опосредованного малыми интерферирующими РНК (миРНК). См., например, Zamore et al., Cell, 2000, том 101, стр. 25-33; Fire et al., Nature, 1998, том 391, стр. 806811; Sharp, Genes & Development, 1999, том 13, стр. 139-141.

[0004] Ответ RNAi в клетках можно запускать с помощью двухцепочечной РНК (дцРНК), несмотря на то, что механизм еще не понят полностью. В целом, миРНК может составлять приблизительно от 21 приблизительно до 23 нуклеотидов в длину и содержать область дуплекса из пар оснований приблизительно 19 нуклеотидов в длину.

[0005] В RNAi вовлечен эндонуклеазный комплекс, известный как РНК-индуцированный комплекс сайленсинга (RISC). миРНК имеет антисмысловую или направляющую цепь, которая попадает в RISC комплекс и опосредует расщепление одноцепочечной РНК мишени, имеющей последовательность, комплементарную антисмысловой цепи миРНК дуплекса. Другая цепь миРНК представляет собой сопровождающую цепь. Расщепление РНК мишени происходит в середине области, комплементарной антисмысловой цепи миРНК дуплекса. См., например, Elbashir et al., Genes & Development, 2001, том 15, стр. 188-200.

[0006] Чтобы усовершенствовать свойства миРНК соединений для применения в качестве лекарственных средств, структуру миРНК соединений модифицировали различными способами для усовершенствования стабильности и снижения эффектов вне мишени. Активность миРНК вне мишени включает модуляцию клеточных нуклеиновых кислот, отличных от целевой РНК, которая может происходить через различные механизмы.

[0007] Модификации миРНК соединений включают структурные вариации их основания, сахара и/или остова любых из нуклеотидов. Один путь модификации миРНК нуклеотидов состоит в замене определенных рибонуклеотидов в миРНК на дезоксинуклеотиды. В частности, дезоксинуклеотиды часто используют в липких концах или концевых нуклеотидах миРНК структуры.

[0008] Однако недостаток использования дезоксинуклеотидов в миРНК структуре состоит в том, что дезоксинуклеотиды нельзя использовать в области затравки миРНК. Это обусловлено тем, что такая модификация миРНК не является благоприятной по причине снижения активности сайленсинга генов.

[0009] Существует острая необходимость в RNAi структурах для модулирования экспрессия генов, которые снижают действие вне мишени без потери активности.

[0010] В частности, для терапевтических средств на основе RNAi супрессии онкогенов и генов, связанных со злокачественными опухолями, необходимые высоко активные и стабильные последовательности и структуры миРНК.

[0011] Необходимы соединения миРНК с высоко активной структурой для модулирования экспрессии гена.

КРАТКОЕ ИЗЛОЖЕНИЕ СУЩНОСТИ

[0012] Данное изобретение относится к соединениям, композициям и способам модулирования экспрессии генов-мишеней с использованием РНК-интерференции. миРНК соединения и структуры по данному раскрытию могут быть высоко активны при модулировании экспрессии гена.

[0013] RNAi структуры по данному изобретению можно использовать для модулирования экспрессии генов с удивительно высокими уровнями активности и сниженным действием вне мишени.

[0014] В некоторых вариантах осуществления данное изобретение предусматривает молекулы для сайленсинга генов посредством РНК-интерференции, которые снижают действие вне мишени, без потери активности.

[0015] В дополнительных вариантах осуществления данное изобретение предусматривает молекулы для сайленсинга генов посредством РНК-интерференции, которые снижают действие вне мишени, с неожиданно высокой активностью сайленсинга генов.

[0016] RNAi молекулы по данному изобретению могут предусматривать высоко активные и стабильные миРНК структуры, которые можно использовать для терапевтических средств на основе RNAi супрессии генов.

[0017] В дополнительных вариантах осуществления структуры, молекулы и композиции по данному изобретению можно использовать в способах предотвращения или лечения заболеваний или улучшения симптомов состояний или нарушений, связанных с одним или более генами.

[0018] Варианты осуществления данного изобретения включают следующее:

[0019] Молекула нуклеиновой кислоты, где:

a) молекула имеет полинуклеотидную смысловую цепь и полинуклеотидную антисмысловую цепь;

b) каждая цепь молекулы составляет от 15 до 30 нуклеотидов в длину;

c) непрерывная область от 15 до 30 нуклеотидов антисмысловой цепи комплементарна последовательности мРНК;

d) по меньшей мере часть смысловой цепи комплементарна по меньшей мере части антисмысловой цепи, и молекула имеет область дуплекса от 15 до 30 нуклеотидов в длину, где один или более нуклеотидов в области дуплекса в положениях с 3 до 8 от 5'-конца антисмысловой цепи представляют собой дезоксинуклеотиды. мРНК может представлять собой мРНК человека.

[0020] В некоторых вариантах осуществления антисмысловая цепь молекулы нуклеиновой кислоты может иметь дезоксинуклеотиды во множестве положений, множество положений представляет собой одно из следующего:

каждое из положений 4, 6 и 8 от 5'-конца антисмысловой цепи;

каждое из положений 3, 5 и 7 от 5'-конца антисмысловой цепи;

каждое из положений 1, 3, 5 и 7 от 5'-конца антисмысловой цепи;

каждое из положений 3-8 от 5'-конца антисмысловой цепи; и

каждое из положений 5-8 от 5'-конца антисмысловой цепи.

[0021] Молекулы нуклеиновой кислоты могут представлять собой RNAi молекулы, которые активны при модулировании экспрессии мРНК.

[0022] В определенных вариантах осуществления молекулы нуклеиновой кислоты могут быть активны при ингибировании экспрессии гена, выбранного из кодирующих белок генов, протоонкогенов, онкогенов, генов-супрессоров опухолей и генов клеточной сигнализации.

[0023] В дополнительных вариантах осуществления мРНК может представлять собой мРНК человека, экспрессирующую любой элемент или подэлемент семейства белков человека, включая SRY, β-глобин, RAS, цитозольную GST, митохондриальную GST, MAPEG GST, GST-π, p16, p21, p53, сывороточный альбумин, коллаген VII типа, C3 комплемента, аполипопротеин B, фенилаланингидроксилазу, фактор VIII, гентингтин, белок ретинобластомы RB1, CFTR, титин, атрофин и дистрофин.

[0024] Молекулы нуклеиновой кислоты могут иметь IC₅₀ для нокдауна мРНК меньше 100 пМ, или меньше 50 пМ, или меньше 10 пМ. В определенных вариантах осуществления молекулы нуклеиновой кислоты могут ингибировать мРНК по меньшей мере на 25% in vivo после одного введения молекул.

[0025] В некоторых вариантах осуществления каждая цепь молекулы составляет от 18 до 22 нуклеотидов в длину. Область дуплекса может составлять 19 нуклеотидов в длину. В определенных вариантах осуществления полинуклеотидную смысловую цепь и полинуклеотидную антисмысловую цепь можно соединять в виде одной цепи и формировать область дуплекса, соединенную на одном конце с помощью петли.

[0026] Молекулы нуклеиновой кислоты могут иметь тупой конец. В определенных вариантах осуществления молекулы нуклеиновой кислоты могут иметь один или более 3' липких концов.

[0027] Варианты осуществления данного изобретения включают молекулы нуклеиновой кислоты, имеющие один или более нуклеотидов в области дуплекса, которые модифицированы или химически модифицированы. Модифицированные или химически модифицированные нуклеотиды могут представлять собой 2′-O-алкилзамещенные нуклеотиды, 2′-дезокси-2′-фторзамещенные нуклеотиды, фосфотиоатные нуклеотиды, замкнутые нуклеотиды или любое их сочетание.

[0028] Это изобретение, кроме того, предусматривает фармацевтические композиции, содержащие молекулы нуклеиновой кислоты и фармацевтически приемлемый носитель. Носитель может представлять собой липидную молекулу или липосому.

[0029] Варианты осуществления данного изобретения, кроме того, включают вектор или клетку, содержащие молекулы нуклеиновой кислоты.

[0030] Это изобретение также предусматривает способы предотвращения, лечения или улучшения заболевания у субъекта, нуждающегося в сайленсинге генов, посредством введения субъекту композиции, содержащей молекулы нуклеиновой кислоты. Заболевание может представлять собой злокачественную опухоль, саркому или карциному.

[0031] Варианты осуществления данного изобретения включают использование композиции молекул нуклеиновой кислоты для предотвращения, улучшения или лечения заболевания или состояния у субъекта, нуждающегося в этом.

[0032] В определенных вариантах осуществления композиция по данному изобретению может быть для использования в медицинской терапии.

[0033] В дополнительных вариантах осуществления композиция по данному изобретению может быть для использования в лечении организма человека или животного.

[0034] В дополнительных вариантах осуществления композиция по данному изобретению может быть для получения или изготовления лекарственного средства для предотвращения, улучшения или лечения заболевания или состояния у субъекта, нуждающегося в этом.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ФИГУР

[0035] Фиг. 1: на фиг. 1 показано выраженное снижение ортотопических опухолей из злокачественной опухоли легких in vivo с помощью миРНК по данному изобретению, направленных на GST-π. GST-π миРНК вводили в липосомном составе в дозе 2 мг/кг бестимусным голым мышам, несущим ортотопические опухоли из злокачественной опухоли легких A549. Конечные массы первичной опухоли измеряли при вскрытии для группы лечения и группы контроля носителем. GST-π миРНК демонстрировала значительный эффект ингибирования опухолей из злокачественной опухоли легких в этом 6-недельном исследовании. Как показано на фиг. 1, после 43 суток, GST-π миРНК демонстрировала заметно благоприятное ингибирование опухоли, со значительно уменьшенными конечными усредненными массами первичных опухолей в 2,8 раза по сравнению с контролем.

[0036] Фиг. 2: на фиг. 2 представлен эффект ингибирования опухоли in vivo для GST-π миРНК. Модель ксенотрансплантата злокачественной опухоли с использованием клеток A549 использовали при относительно низкой дозе миРНК 0,75 мг/кг. GST-π миРНК демонстрировала благоприятное ингибирование опухоли в пределах нескольких суток. После 36 суток GST-π миРНК демонстрировала заметно благоприятное ингибирование опухоли, со значительно сниженными конечными усредненными объемами опухоли приблизительно в 2 раза по сравнению с контролем.

[0037] Фиг. 3: на фиг. 3 представлен эффект ингибирования опухоли in vivo для GST-π миРНК в конечной точке на фиг. 2. GST-π миРНК демонстрировала благоприятное ингибирование опухоли при сниженных усредненных массах опухоли больше чем в 2 раз.

[0038] Фиг. 4: на фиг. 4 показано, что GST-π миРНК по данному изобретению значительно увеличивала гибель клеток злокачественной опухоли посредством апоптоза in vitro. GST-π миРНК вызывала повышающую регуляцию PUMA, биологического маркера апоптоза, который связан с потерей жизнеспособности клетками. На фиг. 4 экспрессия PUMA значительно увеличена со 2-6 суток после трансфекции GST-π миРНК.

[0039] Фиг. 5: на фиг. 5 показано, что GST-π миРНК по данному изобретению обеспечивала эффект нокдауна для ксенотрансплантатных опухолей A549 in vivo. Дозозависимый нокдаун GST-π мРНК наблюдали у самок бестимусных голых (nu/nu) мышей (Charles River) при использовании миРНК, направленной на GST-π. Как показано на фиг. 5, при дозе 4 мг/кг обнаруживали значительное снижение GST-π мРНК приблизительно на 40% через 24 часа после инъекции.

[0040] Фиг. 6: на фиг. 6 показано, что GST-π миРНК по данному изобретению ингибировала ксенотрансплантатные опухоли из злокачественной опухоли поджелудочной железы in vivo. GST-π миРНК обеспечивала активность сайленсинга генов in vivo при введении в липосомном составе в ксенотрансплантатные опухоли из злокачественной опухоли поджелудочной железы у самок бестимусных голых мышей в возрасте от 6 до 8 недель. Как показано на фиг. 6, эффекта дозы достигали при использовании доз в диапазоне от 0,375 мг/кг до 3 мг/кг миРНК, направленной на GST-π. GST-π миРНК демонстрировала благоприятное ингибирование опухоли в пределах нескольких суток после введения, в конечной точке происходило уменьшение объема опухоли приблизительно в 2 раза.

[0041] Фиг. 7: на фиг. 7 показано, что GST-π миРНК по данному изобретению демонстрировала повышенную стабильность в сыворотке. Как показано на фиг. 7, время полужизни (t_1/2) в сыворотке как для смысловой цепи, (фиг. 7, сверху), так и для антисмысловой цепи (фиг. 7, внизу) GST-π миРНК составляло приблизительно 100 минут.

[0042] Фиг. 8: на фиг. 8 показано, что GST-π миРНК по данному изобретению демонстрировала увеличенную стабильность в составе в плазме. На фиг. 8 представлена инкубация липосомного состава GST-π миРНК в 50% сыворотке человека в PBS и обнаружение остающейся миРНК в различные моменты времени. Как показано на фиг. 8, время полужизни (t_1/2) состава GST-π миРНК в плазме значительно превышало 100 часов.

[0043] Фиг. 9: на фиг. 9 представлен нокдаун in vitro для направляющей цепи GST-π миРНК. Как показано на фиг. 9, нокдаун направляющей цепи GST-π миРНК был приблизительно экспоненциальным по сравнению с контролем с перемешанной последовательностью, которая не демонстрировала эффекта.

[0044] Фиг. 10: на фиг. 10 представлен нокдаун in vitro для сопровождающей цепи GST-π миРНК с фиг. 9. Как показано на фиг. 10, нокдаун сопровождающей цепи вне мишени для GST-π миРНК значительно снижен и по существу не оказывает эффекта.

[0045] Фиг. 11: на фиг. 11 представлен нокдаун in vitro для направляющих цепей нескольких высоко активных GST-π миРНК. Как показано на фиг. 11, активности нокдауна направляющих цепей GST-π миРНК были приблизительно экспоненциальными.

[0046] Фиг. 12: на фиг. 12 представлен in vitro нокдаун для сопровождающей цепи из GST-π миРНК с фиг. 11. Как показано на фиг. 12, активности нокдауна сопровождающей цепи вне мишени для GST-π миРНК значительно снижены, ниже приблизительно 500 пМ.

[0047] Фиг. 13: на фиг. 13 представлен нокдаун in vitro для направляющей цепи высоко активной GST-π миРНК. Как показано на фиг. 13, активность нокдауна направляющей цепи из GST-π миРНК была приблизительно экспоненциальной.

[0048] Фиг. 14: на фиг. 14 представлен нокдаун in vitro для сопровождающей цепи из GST-π миРНК с фиг. 13. Как показано на фиг. 14, активность нокдауна сопровождающей цепи вне мишени для GST-π миРНК значительно снижена.

[0049] Фиг. 15: на фиг. 15 представлен эффект ингибирования опухоли in vivo для p21 миРНК. Модель ксенотрансплантата злокачественной опухоли с использованием клеток A549 использовали при относительно низкой дозе миРНК 0,75 мг/кг. p21 миРНК демонстрировала благоприятное ингибирование опухоли в пределах нескольких суток. После 30 суток GST-π миРНК демонстрировала заметно благоприятное ингибирование опухоли при значительно уменьшенных конечных усредненных объемах опухоли больше чем в 2 раза по сравнению с контролем.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[0050] Данное изобретение относится к соединениям, композициям и способам для терапевтических средств на основе нуклеиновых кислот для модулирования экспрессии гена.

[0051] В некоторых вариантах осуществления данное изобретение предусматривает молекулы, активные при РНК-интерференции, а также структуры и композиции, которые могут обеспечивать сайленсинг экспрессии гена.

[0052] Структуры и композиции по данному раскрытию можно использовать при предотвращении или лечении различных заболеваний.

[0053] В дополнительных вариантах осуществления данное изобретение предусматривает композиции для доставки и захвата одной или более терапевтических RNAi молекул по данному изобретению, а также способы их использования. Композиции на основе РНК по данному изобретению можно использовать в способах предотвращения или лечения злокачественных опухолей, таких как злокачественные новообразования.

[0054] Терапевтические композиции по данному изобретению включают молекулы нуклеиновой кислоты, которые активны при РНК-интерференции. Терапевтические молекулы нуклеиновой кислоты могут быть направлены на различные гены для сайленсинга генов.

[0055] В различных вариантах осуществления данное изобретение предусматривает ряд молекул, которые могут быть активными в качестве малой интерферирующей РНК (миРНК) и могут регулировать или обеспечивать сайленсинг экспрессии гена.

[0056] Варианты осуществления данного изобретения дополнительно предусматривают носитель, состав или состав липидных наночастиц для доставки патентоспособной миРНК субъектам, нуждающимся в предотвращении или лечении заболевания. Это изобретение, кроме того, предусматривает способы введения миРНК в качестве терапевтических средств млекопитающим.

[0057] Терапевтические молекулы и композиции по данному изобретению можно использовать для РНК-интерференции, направленной на предотвращение или лечение заболевания, посредством введения соединения или композиции субъекту, нуждающемуся в этом.

[0058] Данное изобретение предусматривает ряд RNAi молекул, где каждая молекула имеет полинуклеотидную смысловую цепь и полинуклеотидную антисмысловую цепь; каждая цепь молекулы составляет от 15 до 30 нуклеотидов в длину; непрерывная область от 15 до 30 нуклеотидов антисмысловой цепи по меньшей мере частично комплементарна последовательности мРНК; и по меньшей мере часть смысловой цепи комплементарна по меньшей мере части антисмысловой цепи, и молекула имеет область дуплекса от 15 до 30 нуклеотидов в длину.

[0059] RNAi молекула по данному изобретению может иметь непрерывную область от 15 до 30 нуклеотидов антисмысловой цепи, комплементарную последовательности мРНК человека, которая расположена в области дуплекса молекулы.

[0060] В некоторых вариантах осуществления RNAi молекула может иметь непрерывную область от 15 до 30 нуклеотидов антисмысловой цепи, которая комплементарна последовательности мРНК человека.

[0061] Варианты осуществления данного изобретения дополнительно могут предусматривать способы предотвращения, лечения или улучшения одного или более симптомов заболевания или состояния или уменьшения риска развития заболевания или состояния или задержки начала заболевания или состояния у млекопитающего, нуждающегося в этом.

[0062] RNAi структуры для универсального геномного сайленсинга

[0063] Варианты осуществления данного изобретения могут предусматривать RNAi молекулы, направленные на любой ген, которые проявляют высокую активность сайленсинга экспрессии гена.

[0064] RNAi молекулы по данному раскрытию могут проявлять к удивлению высокую активность сайленсинга экспрессии гена, при этом обеспечивая сниженные эффекты вне мишени.

[0065] В некоторых вариантах осуществления RNAi молекула по данному изобретению содержит один или более 2′-дезоксинуклеотидов. В этих вариантах осуществления один или более 2′-дезоксинуклеотидов можно располагать в области затравки в миРНК.

[0066] Один или более 2′-дезоксинуклеотидов могут представлять собой моно-дезоксинуклеотиды.

[0067] Как используют в настоящем описании, дезоксинуклеотид относится к моно-2′-дезоксинуклеотиду.

[0068] 2′-дезоксинуклеотид можно замещать в 2'-положении галогеном.

[0069] В определенных вариантах осуществления RNAi молекула по данному изобретению содержит один или более 2′-дезоксинуклеотидов в антисмысловой или направляющей цепи миРНК. Более конкретно, один или более дезоксинуклеотидов можно располагать в положениях с 1 до 8 от 5'-конца антисмысловой цепи миРНК. В определенных вариантах осуществления один или более дезоксинуклеотидов можно располагать в положениях со 2 до 8 от 5'-конца антисмысловой цепи миРНК. В дополнительных вариантах осуществления один или более дезоксинуклеотидов можно располагать в положениях с 3 до 8 от 5'-конца антисмысловой цепи миРНК.

[0070] Это изобретение предусматривает миРНК структуры, которые могут иметь антисмысловую цепь, содержащую дезоксинуклеотиды во множестве положений.

[0071] В некоторых вариантах осуществления миРНК структура может иметь антисмысловую цепь, содержащую дезоксинуклеотиды в каждом из положений 4, 6 и 8 от 5'-конца антисмысловой цепи.

[0072] В дополнительных вариантах осуществления миРНК структура может иметь антисмысловую цепь, содержащую дезоксинуклеотиды в каждом из положений 3, 5 и 7 от 5'-конца антисмысловой цепи.

[0073] В дополнительных вариантах осуществления миРНК структура может иметь антисмысловую цепь, содержащую дезоксинуклеотиды в каждом из положений 1, 3, 5 и 7 от 5'-конца антисмысловой цепи.

[0074] В определенных вариантах осуществления миРНК структура может иметь антисмысловую цепь, содержащую дезоксинуклеотиды в каждом из положений с 3 до 8 от 5'-конца антисмысловой цепи.

[0075] В некоторых вариантах осуществления миРНК структура может иметь антисмысловую цепь, содержащую дезоксинуклеотиды в каждом из положений с 5 до 8 от 5'-конца антисмысловой цепи.

[0076] Любые из этих структур можно комбинировать с одним или более модифицированными или химически модифицированными нуклеотидами в других положениях.

[0077] RNAi молекулы по данному изобретению могут ингибировать экспрессию мРНК гена с благоприятной IC₅₀ меньше приблизительно 200 пМ. В определенных вариантах осуществления RNAi молекулы по данному изобретению могут ингибировать экспрессию мРНК гена с благоприятной IC₅₀ меньше приблизительно 100 пМ, или меньше приблизительно 50 пМ, или меньше приблизительно 30 пМ, или меньше приблизительно 20 пМ, или меньше приблизительно 10 пМ, или меньше приблизительно 5 пМ, или меньше приблизительно 1 пМ.

[0078] В дополнительных вариантах осуществления RNAi молекулы по данному изобретению могут ингибировать экспрессию мРНК гена на определенном уровне, по меньшей мере на 25% in vivo, после одного введения.

[0079] миРНК по данному изобретению можно направлять на любой ген.

[0080] Примеры генов, на которые можно направлять миРНК по данному изобретению, включают гены, перечисленные в Gene Families Index из HUGO Gene Nomenclature Committee.

[0081] Примеры генов, на которые можно направлять миРНК по данному изобретению, включают ядерные гены, митохондриальные гены, кодирующие белок гены, протоонкогены, онкогены, гены-супрессоры опухолей и гены клеточной сигнализации.

[0082] Примеры генов, на которые можно направлять миРНК по данному изобретению, включают гены, экспрессирующие любой элемент или подэлемент семейства белков человека, включая SRY, β-глобин, RAS, цитозольную GST, митохондриальную GST, MAPEG GST, GST-π, p16, p21, p53, сывороточный альбумин, коллаген VII типа, C3 комплемента, аполипопротеин B, фенилаланингидроксилазу, фактор VIII, гентингтин, белок ретинобластомы RB1, CFTR, титин, атрофин и дистрофин.

[0083] Модифицированная и химически модифицированная миРНК

[0084] Варианты осуществления данного изобретения охватывают миРНК молекулы, которые модифицированы или химически модифицированы для обеспечения усиленных свойств для терапевтического использования, таких как увеличенная активность сайленсинга генов. Данное изобретение предусматривает модифицированные или химически модифицированные миРНК молекулы, которые могут обладать повышенной стабильностью в сыворотке, а также сниженными эффектами вне мишени, без потери активности миРНК молекул при модуляции генов и сайленсинге генов. В некоторых аспектах данное изобретение предусматривает миРНК, которая имеет модификации или химические модификации в различных комбинациях, которые увеличивают стабильность и эффект миРНК.

[0085] Как используют в настоящем описании, термины модифицированный и химически модифицированный относятся к изменениям, выполненным в структуре встречающегося в природе нуклеотида или структуре нуклеиновой кислоты в миРНК, которые охватывают миРНК, имеющие один или более нуклеотидных аналогов, измененных нуклеотидов, не стандартных нуклеотидов, не встречающихся в природе нуклеотидов и их сочетания.

[0086] В некоторых вариантах осуществления число модифицированных или химически модифицированных структур в миРНК может включать все структурные компоненты и/или все нуклеотиды миРНК молекулы.

[0087] Примеры модифицированной и химически модифицированной миРНК включают миРНК, имеющую модификацию сахарной группы нуклеотида, модификацию нуклеинового основания нуклеотида, модификацию остова или связи в нуклеиновой кислоте, модификацию структуры нуклеотида или нуклеотидов на конце цепи миРНК и их сочетания.

[0088] Примеры модифицированной и химически модифицированной миРНК включают миРНК, имеющую модификацию заместителя на 2'-углероде сахара.

[0089] Примеры модифицированной и химически модифицированной миРНК включают миРНК, имеющую модификацию на 5'-конце, 3'-конце или на обоих концах цепи.

[0090] Примеры модифицированной и химически модифицированной миРНК включают миРНК, имеющую модификации, которые создают несовпадения комплементарности между цепями.

[0091] Примеры модифицированной и химически модифицированной миРНК включают миРНК, имеющую 5'-пропиламинную концевую, 5'-фосфорилированную концевую, 3'-пуромициновую концевую или 3'-биотинновую концевую группу.

[0092] Примеры модифицированной и химически модифицированной миРНК включают миРНК, имеющую 2'-фторзамещенный рибонуклеотид, 2'-OMe-замещенный рибонуклеотид, 2'-дезоксирибонуклеотид, 2'-аминозамещенный рибонуклеотид, 2'-тиозамещенный рибонуклеотид.

[0093] Примеры модифицированной и химически модифицированной миРНК включают миРНК, имеющую один или более 5-галогеноуридинов, 5-галогеноцитидинов, 5-метилцитидинов, риботимидинов, 2-аминопуринов, 2,6-диаминопуринов, 4-тиоуридинов или 5-аминоаллилуридинов.

[0094] Примеры модифицированной и химически модифицированной миРНК включают миРНК, имеющую одну или более фосфотиоатных групп.

[0095] Примеры модифицированной и химически модифицированной миРНК включают миРНК, имеющую один или более 2'-фторзамещенных рибонуклеотидов, 2'-фторуридинов, 2'-фторцитидинов, 2'-дезоксирибонуклеотидов, 2'-дезоксиаденозинов или 2'-дезоксигуанозинов.

[0096] Примеры модифицированной и химически модифицированной миРНК включают миРНК, имеющую одну или более фосфотиоатных связей.

[0097] Примеры модифицированной и химически модифицированной миРНК включают миРНК, имеющую одну или более алкилендиоловых связей, оксиалкилтио-связей или оксикарбонилокси-связей.

[0098] Примеры модифицированной и химически модифицированной миРНК включают миРНК, имеющую одну или более дезоксиабазических групп, инозинов, N3-метилуридинов, N6,N6-диметиладенозинов, псевдоуридинов, пуриновых рибонуклеозидов и рибавиринов.

[0099] Примеры модифицированной и химически модифицированной миРНК включают миРНК, имеющую одну или более 3'- или 5'-инвертированных концевых групп.

[00100] Примеры модифицированной и химически модифицированной миРНК включают миРНК, имеющую один или более 5-(2-амино)пропилуридинов, 5-бромуридинов, аденозинов, 8-бромгуанозинов, 7-деазааденозинов или N6-метиладенозин.

[00101] GST-π и RNAi молекулы

[00102] Обнаружено, что различные ткани злокачественных опухолей человека коррелируют с возникновением мутантного гена KRAS. В некоторых случаях в тканях также присутствует повышенный уровень экспрессии глутатион-S-трансферазы пи (GST-π). (Miyanishi et al., Gastroenterology, 2001, том 121:865-874, реферат) Например, повышенные уровни GST-π в сыворотке наблюдали у пациентов с различными желудочно-кишечными злокачественными новообразованиями. (Niitsu et al., Cancer, 1989, том 63, № 2, стр. 317-323, реферат)

[00103] GST-π является членом семейства ферментов GST, которые играют роль в детоксикации посредством катализа конъюгации гидрофобных и электрофильных соединений с восстановленным глутатионом. Экспрессию GST-π можно снижать in vitro с использованием миРНК. (Niitsu et al., US 2014/0315975 A1). Однако существует множество недостатков существующих миРНК средств, таких как недостаточная активность, эффекты вне мишени, недостаток стабильности в сыворотке и недостаток активности или эффекта in vivo.

[00104] Последовательность нуклеиновой кислоты образцовой целевой мРНК глутатион-S-трансферазы пи человека (GST-π человека) раскрыт под номером доступа Genbank NM_000852.3 (hGSTP1) и составляет 986 нуклеотиды в длину.

[00105] Специалист в данной области поймет, что приведенная последовательность может меняться с течением времени, и включит любые необходимые изменения в молекулы нуклеиновой кислоты в настоящем описании соответствующим образом.

[00106] Варианты осуществления данного изобретения могут предусматривать композиции и способы для сайленсинга экспрессии генов GST-π с использованием небольших молекул нуклеиновой кислоты. Примеры молекул нуклеиновой кислоты включают молекулы, активные при РНК-интерференции (RNAi молекулы), молекулы малой интерферирующей РНК (миРНК), двухцепочечной РНК (дцРНК), микроРНК (мкРНК) и короткой шпилечной РНК (shRNA), а также РНК, направляемую с помощью ДНК (ddRNA), РНК, взаимодействующую с Piwi (piRNA), и ассоциированную с повторами миРНК (rasiRNA). Такие молекулы способны опосредовать РНК-интерференцию против экспрессии гена GST-π.

[00107] Композицию и способы, раскрытые в настоящем описании, также можно использовать при лечении злокачественных опухолей различных типов у субъекта.

[00108] Молекулы нуклеиновой кислоты и способы по данному изобретению можно использовать для понижающей регуляции экспрессии генов, которые кодируют GST-π.

[00109] Композиции и способы по данному изобретению могут включать одну или более молекул нуклеиновой кислоты, которые, независимо или в комбинации, могут модулировать или регулировать экспрессию белка GST-π и/или генов, кодирующих белки GST-π, белков и/или генов, кодирующих GST-π, которые связаны с поддержанием и/или развитием заболеваний, состояний или нарушений, связанных с GST-π, таких как злокачественная опухоль.

[00110] Композиции и способы по данному изобретению описаны со ссылкой на образцовые последовательности GST-π. Специалист в данной области поймет, что различные аспекты и варианты осуществления изобретения направлены на любые связанные гены, последовательности или варианты GST-π, такие как гомологичные гены и транскрипционные варианты, а также полиморфизмы, в том числе однонуклеотидный полиморфизм (SNP), связанный с любыми генами GST-π.

[00111] В некоторых вариантах осуществления композиции и способы по данному изобретению могут предусматривать двухцепочечную молекулу малой интерферирующей нуклеиновой кислоты (миРНК), которая осуществляет понижающую регуляцию экспрессии гена GST-π, например, GST-π человека.

[00112] RNAi молекулу по данному изобретению можно направлять на GST-π и любые гомологичные последовательности, например, с использованием комплементарных последовательностей или посредством встраивания неканонических пар оснований, например, несовпадений и/или неоднозначно совпадающих пар оснований, которые могут предусматривать дополнительные последовательности-мишени.

[00113] В случаях, когда идентифицируют несовпадения, неканонические пары оснований, например, несовпадения и/или неоднозначно совпадающие основания можно использовать для того, чтобы создавать молекулы нуклеиновой кислоты, которые направлены больше чем на одну последовательность гена.

[00114] Например, неканонические пары оснований, такие как пары оснований UU и CC, можно использовать для того, чтобы создавать молекулы нуклеиновой кислоты, которые способны направленно воздействовать на последовательности для различных мишеней GST-π, которые обладают гомологией последовательностей. Таким образом, RNAi молекулу можно направлять на нуклеотидную последовательность, которая консервативна между гомологичными генами, и одну RNAi молекулу можно использовать для того, чтобы ингибировать экспрессию больше чем одного гена.

[00115] В некоторых аспектах композиции и способы по данному изобретению включают RNAi молекулы, которые активны против GST-π мРНК, где RNAi молекула содержит последовательность, комплементарную любой мРНК, кодирующей последовательность GST-π.

[00116] В некоторых вариантах осуществления RNAi молекула по данному раскрытию может обладать активностью против GST-π РНК, где RNAi молекула содержит последовательность, комплементарную РНК, имеющей вариант последовательности, кодирующей GST-π, например, мутантного гена GST-π, который, как известно в данной области, связан со злокачественной опухолью.

[00117] В дополнительных вариантах осуществления RNAi молекула по данному изобретению может содержать нуклеотидную последовательность, которая может взаимодействовать с нуклеотидной последовательностью гена GST-π и опосредовать сайленсинг экспрессии гена GST-π.

[00118] Молекулы нуклеиновой кислоты для ингибирования экспрессии GST-π могут иметь смысловую цепь и антисмысловую цепь, в которой цепи образуют область дуплекса. Молекулы нуклеиновой кислоты могут иметь один или более нуклеотидов в области дуплекса, которые модифицированы или химически модифицированы, в том числе такие модификации, как известно в данной области. Любой нуклеотид в липком конце миРНК также может быть модифицированным или химически модифицированным.

[00119] В некоторых вариантах осуществления предпочтительные модифицированные или химически модифицированные нуклеотиды представляют собой 2′-дезоксинуклеотиды. В дополнительных вариантах осуществления модифицированные или химически модифицированные нуклеотиды могут включать 2′-O-алкилзамещенные нуклеотиды, 2′-дезокси-2′-фторзамещенные нуклеотиды, фосфотиоатные нуклеотиды, замкнутые нуклеотиды или любое их сочетание.

[00120] В определенных вариантах осуществления предпочтительная структура может иметь антисмысловую цепь, содержащую дезоксинуклеотиды во множестве положений, множество положений представляет собой одно из следующего: каждое из положений 4, 6 и 8 от 5'-конца антисмысловой цепи; каждое из положений 3, 5 и 7 от 5'-конца антисмысловой цепи; каждое из положений 1, 3, 5 и 7 от 5'-конца антисмысловой цепи; каждое из положений 3-8 от 5'-конца антисмысловой цепи; и каждое из положений 5-8 от 5'-конца антисмысловой цепи. Любые из этих структур можно комбинировать с одним или более 2′-дезокси-2′-фторзамещенными нуклеотидами в области дуплекса.

[00121] Молекулы нуклеиновой кислоты по данному изобретению могут ингибировать экспрессию GST-π мРНК с благоприятной IC₅₀ меньше приблизительно 200 пМ. Кроме того, молекулы нуклеиновой кислоты могут ингибировать экспрессию мРНК GST-π на определенных уровнях, по меньшей мере на 25% in vivo, после одного введения.

[00122] В данном изобретении предусмотрены фармацевтические композиции, которые могут содержать одну или более миРНК, как раскрыто в настоящем описании, в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем. Любой подходящий носитель можно использовать, в том числе те, которые известны в данной области, а также липидные молекулы, наночастицы или липосомы, любые из которых могут инкапсулировать миРНК молекулы.

[00123] В данном изобретении раскрыты способы лечения заболевания, связанного с экспрессией GST-π, эти способы включают введение субъекту, нуждающемуся в этом, композиции, содержащей одну или более миРНК. Заболевания, подлежащие лечению, могут включать злокачественную опухоль, злокачественное новообразование, злокачественное новообразование, обусловленное клетками, экспрессирующими мутантный KRAS, саркому и карциному, среди прочих.

[00124] Примеры RNAi молекул по данному изобретению, направленных на GST-π мРНК, представлены в таблице 1.

Таблица 1: последовательности RNAi молекул для GST-π

ID	Эталонн. полож-е	SEQ ID №	СМЫСЛОВАЯ ЦЕПЬ (5'-->3') SEQ ID №№ с 1 до 65	SEQ ID №	АНТИСМЫСЛОВАЯ ЦЕПЬ (5'-->3') SEQ ID №№ с 66 до 130
A1	652	1	UCCCAGAACCAGGGAGGCAtt	66	UGCCUCCCUGGUUCUGGGAca
A10	635	2	CUUUUGAGACCCUGCUGUCtt	67	GACAGCAGGGUCUCAAAAGgc
A11	649	3	CUGUCCCAGAACCAGGGAGtt	68	CUCCCUGGUUCUGGGACAGca
A12	650	4	UGUCCCAGAACCAGGGAGGtt	69	CCUCCCUGGUUCUGGGACAgc
A13	631	5	AAGCCUUUUGAGACCCUGCtt	70	GCAGGGUCUCAAAAGGCUUca
A14	638	6	UUGAGACCCUGCUGUCCCAtt	71	UGGGACAGCAGGGUCUCAAaa
A15	636	7	UUUUGAGACCCUGCUGUCCtt	72	GGACAGCAGGGUCUCAAAAgg
A16	640	8	GAGACCCUGCUGUCCCAGAtt	73	UCUGGGACAGCAGGGUCUCaa
A17	332	9	GCUGGAAGGAGGAGGUGGUtt	74	ACCACCUCCUCCUUCCAGCtc
A18	333	10	CUGGAAGGAGGAGGUGGUGtt	75	CACCACCUCCUCCUUCCAGct
A19	321	11	UCAGGGCCAGAGCUGGAAGtt	76	CUUCCAGCUCUGGCCCUGAtc
A2	639	12	UGAGACCCUGCUGUCCCAGtt	77	CUGGGACAGCAGGGUCUCAaa
A20	323	13	AGGGCCAGAGCUGGAAGGAtt	78	UCCUUCCAGCUCUGGCCCUga
A21	331	14	AGCUGGAAGGAGGAGGUGGtt	79	CCACCUCCUCCUUCCAGCUct
A22	641	15	AGACCCUGCUGUCCCAGAAtt	80	UUCUGGGACAGCAGGGUCUca
A23	330	16	GAGCUGGAAGGAGGAGGUGtt	81	CACCUCCUCCUUCCAGCUCtg
A25	647	17	UGCUGUCCCAGAACCAGGGtt	82	CCCUGGUUCUGGGACAGCAgg
A26	653	18	CCCAGAACCAGGGAGGCAAtt	83	UUGCCUCCCUGGUUCUGGGac
A3	654	19	CCAGAACCAGGGAGGCAAGtt	84	CUUGCCUCCCUGGUUCUGGga
A4	637	20	UUUGAGACCCUGCUGUCCCtt	85	GGGACAGCAGGGUCUCAAAag
A5	642	21	GACCCUGCUGUCCCAGAACtt	86	GUUCUGGGACAGCAGGGUCtc
A6	319	22	GAUCAGGGCCAGAGCUGGAtt	87	UCCAGCUCUGGCCCUGAUCtg
A7	632	23	AGCCUUUUGAGACCCUGCUtt	88	AGCAGGGUCUCAAAAGGCUtc
A8	633	24	GCCUUUUGAGACCCUGCUGtt	89	CAGCAGGGUCUCAAAAGGCtt
A9	634	25	CCUUUUGAGACCCUGCUGUtt	90	ACAGCAGGGUCUCAAAAGGct
AG7	632	26	CGCCUUUUGAGACCCUGCAtt	91	UGCAGGGUCUCAAAAGGCGtc
AK1	257	27	CCUACACCGUGGUCUAUUUtt	92	AAAUAGACCACGGUGUAGGgc
AK10	681	28	UGUGGGAGACCAGAUCUCCtt	93	GGAGAUCUGGUCUCCCACAat
AK11	901	29	GCGGGAGGCAGAGUUUGCCtt	94	GGCAAACUCUGCCUCCCGCtc
AK12	922	30	CCUUUCUCCAGGACCAAUAtt	95	UAUUGGUCCUGGAGAAAGGaa
AK13/A24	643	31	ACCCUGCUGUCCCAGAACCtt	96	GGUUCUGGGACAGCAGGGUct
AK2	267	32	GGUCUAUUUCCCAGUUCGAtt	97	UCGAACUGGGAAAUAGACCac
AK3	512	33	CCCUGGUGGACAUGGUGAAtt	98	UUCACCAUGUCCACCAGGGct
AK4	560	34	ACAUCUCCCUCAUCUACACtt	99	GUGUAGAUGAGGGAGAUGUat
AK5	593	35	GCAAGGAUGACUAUGUGAAtt	100	UUCACAUAGUCAUCCUUGCcc
AK6	698	36	CCUUCGCUGACUACAACCUtt	101	AGGUUGUAGUCAGCGAAGGag
AK7	313	37	CUGGCAGAUCAGGGCCAGAtt	102	UCUGGCCCUGAUCUGCCAGca
AK8	421	38	GACGGAGACCUCACCCUGUtt	103	ACAGGGUGAGGUCUCCGUCct
AK9	590	39	CGGGCAAGGAUGACUAUGUtt	104	ACAUAGUCAUCCUUGCCCGcc
AU10	635	40	CUUUUGAGACCCUGCUGUAtt	105	UACAGCAGGGUCUCAAAAGgc
AU23	330	41	GAGCUGGAAGGAGGAGGUAtt	106	UACCUCCUCCUUCCAGCUCtg
AU24	643	42	ACCCUGCUGUCCCAGAACAtt	107	UGUUCUGGGACAGCAGGGUct
AU25	648	43	UGCUGUCCCAGAACCAGGAtt	108	UCCUGGUUCUGGGACAGCAgg
AU7	632	44	AGCCUUUUGAGACCCUGCAtt	109	UGCAGGGUCUCAAAAGGCUtc
AU9	634	45	CCUUUUGAGACCCUGCUGAtt	110	UCAGCAGGGUCUCAAAAGGct
B1	629	46	UGAAGCCUUUUGAGACCCUtt	111	AGGGUCUCAAAAGGCUUCAgt
B10	627	47	ACUGAAGCCUUUUGAGACCtt	112	GGUCUCAAAAGGCUUCAGUtg
B11	596	48	AGGAUGACUAUGUGAAGGCtt	113	GCCUUCACAUAGUCAUCCUtg
B12	597	49	GGAUGACUAUGUGAAGGCAtt	114	UGCCUUCACAUAGUCAUCCtt
B13	598	50	GAUGACUAUGUGAAGGCACtt	115	GUGCCUUCACAUAGUCAUCct
B14	564	51	CUCCCUCAUCUACACCAACtt	116	GUUGGUGUAGAUGAGGGAGat
B2	630	52	GAAGCCUUUUGAGACCCUGtt	117	CAGGGUCUCAAAAGGCUUCag
B3	563	53	UCUCCCUCAUCUACACCAAtt	118	UUGGUGUAGAUGAGGGAGAtg
B4	567	54	CCUCAUCUACACCAACUAUtt	119	AUAGUUGGUGUAGAUGAGGga
B5	566	55	CCCUCAUCUACACCAACUAtt	120	UAGUUGGUGUAGAUGAGGGag
B6	625	56	CAACUGAAGCCUUUUGAGAtt	121	UCUCAAAAGGCUUCAGUUGcc
B7	626	57	AACUGAAGCCUUUUGAGACtt	122	GUCUCAAAAGGCUUCAGUUgc
B8	628	58	CUGAAGCCUUUUGAGACCCtt	123	GGGUCUCAAAAGGCUUCAGtt
B9	565	59	UCCCUCAUCUACACCAACUtt	124	AGUUGGUGUAGAUGAGGGAga
BG3	563	60	GCUCCCUCAUCUACACCAAtt	125	UUGGUGUAGAUGAGGGAGCtg
BU2	630	61	GAAGCCUUUUGAGACCCUAtt	126	UAGGGUCUCAAAAGGCUUCag
BU10	627	62	ACUGAAGCCUUUUGAGACAtt	127	UGUCUCAAAAGGCUUCAGUtg
BU14	565	63	CUCCCUCAUCUACACCAAAtt	128	UUUGGUGUAGAUGAGGGAGat
BU4	567	64	CCUCAUCUACACCAACUAAtt	129	UUAGUUGGUGUAGAUGAGGga
C1-934	934	65	ACCAAUAAAAUUUCUAAGAtt	130	UCUUAGAAAUUUUAUUGGUcc

[00125] Ключ к таблице 1: A, G, C и U в верхнем регистре относятся к рибо-A, рибо-G, рибо-C и рибо-U, соответственно. Буквы в нижнем регистре a, u, g, c, t относятся к 2'-дезокси-A, 2'-дезокси-U, 2'-дезокси-G, 2'-дезокси-C и дезокситимидину, соответственно.

[00126] Примеры RNAi молекул по данному изобретению, направленных на GST-π мРНК, представлены в таблице 2.

Таблица 2: последовательности RNAi молекул для GST-π

ID	SEQ ID №	СМЫСЛОВАЯ ЦЕПЬ (5'-->3') SEQ ID №№ с 131 до 156	SEQ ID №	АНТИСМЫСЛОВАЯ ЦЕПЬ (5'-->3') SEQ ID №№ с 157 до 182
BU2'	131	GAAGCCUUUUGAGACCCUANN	157	UAGGGUCUCAAAAGGCUUCNN
14	132	GAAGCCUUUUGAGACCCUAUU	158	UAGGGUCUCAAAAGGCUUCUU
15	133	GAAGCCUUUUGAGACCCUAUU	159	uagggucuCAAAAGGCUUCUU
16	134	GAAGCCUUUUGAGACCCUAUU	160	UagggucuCAAAAGGCUUCUU
17	135	GAAGCCUUUUGAGACCCUAUU	161	UAgggucuCAAAAGGCUUCUU
18	136	GAAGCCUUUUGAGACCCUAUU	162	UAGggucuCAAAAGGCUUCUU
19	137	GAAGCCUUUUGAGACCCUAUU	163	UAGGgucuCAAAAGGCUUCUU
20	138	GAAGCCUUUUGAGACCCUAUU	164	uAgGgUcUCAAAAGGCUUCUU
21	139	GAAGCCUUUUGAGACCCUAUU	165	UAgGgUcUCAAAAGGCUUCUU
22	140	GAAGCCUUUUGAGACCCUAUU	166	UaGgGuCuCAAAAGGCUUCUU
23	141	GAAGCCUUUUGAGACCCUAUU	167	UAGgGuCuCAAAAGGCUUCUU
24	142	GAAGCCUUUUGAGACCCUAtt	168	UagggucuCAAAAGGCUUCUU
25	143	GAAGCCUUUUGAGACCCUAUU	169	UAGGGUCUCAAAAGGCUUCUU
26	144	GAAGCCUUUUGAGACCCUAUU	170	fUAGGGUCUCAAAAGGCUUCUU
27	145	GAAGCCUUUUGAGACCCUAUU	171	uAGGGUCUCAAAAGGCUUCUU
28	146	GAAGCCUUUUGAGACCCUAUU	172	UsAGGGUCUCAAAAGGCUUCUU
29	147	GAAGCCUUUUGAGACCCUfAUU	173	fUAGGGUCUfCAAAAGGCfUUCUU
30	148	GAAGCCUUUUGAGfACCCUfAUU	174	fUAGGGUCUfCAfAfAAGGCfUUCUU
31	149	GAAGCCUUUUGAGACCCUAUU	175	UAGGGUCUCAAAAGGCUUCUU
31'	150	GAAGCCUUUUGAGACCCUAUU	176	fUAGGGUCUCAAAAGGCUUCUU
32	151	GAAGCCUUUUGAGACCCUAUU	177	UAGGGUCUCAAAAGGCUUCUU
39	152	GAAGCCUUUUGAGACCCUAUU	178	UAGgGuCuCAAAAGGCUUCUU
45	153	GAAGCCUUUUGAGACCCUAUU	179	UAGgGuCuCAAAAGGCUUCUU
46	154	GAAGCCUUUUGAGACCCUAUU	180	UAGgGuCuCAAAAGGCUUCUU
47	155	GAAGCCUUUUGAGACCCUAUU	181	UAGgGuCuCAAAAGGCUUCUU
48	156	GAAGCCUUUUGAGACCCUAUU	182	fUAGgGuCuCAAAAGGCUUCUU

[00127] Ключ к таблице 2: A, G, C и U в верхнем регистре относятся к рибо-A, рибо-G, рибо-C и рибо-U, соответственно. Буквы в нижнем регистре a, u, g, c, t относятся к 2'-дезокси-A, 2'-дезокси-U, 2'-дезокси-G, 2'-дезокси-C, и дезокситимидин (dT=T=t), соответственно. Подчеркивание относится к 2'-OMe-замещенному, например, U. Буква в нижнем регистре f относится к 2'-дезокси-2'-фторзамещению, например, fU представляет собой 2'-дезокси-2'-фтор-U. N представляет собой A, C, G, U, U, a, c, g, u, t или модифицированный, инвертированный или химически модифицированный нуклеотид.

[00128] Примеры RNAi молекул по данному изобретению, направленных на GST-π мРНК, представлены в таблице 3.

Таблица 3: последовательности RNAi молекул для GST-π

ID	SEQ ID №	СМЫСЛОВАЯ ЦЕПЬ (5'-->3') SEQ ID №№ с 183 до 194	SEQ ID №	АНТИСМЫСЛОВАЯ ЦЕПЬ (5'-->3') SEQ ID №№ с 195 до 206
A9'	183	CCUUUUGAGACCCUGCUGUNN	195	ACAGCAGGGUCUCAAAAGGNN
1	184	CCUCAUCUACACCAACUAUUU	196	AUAGUUGGUGUAGAUGAGGUU
2	185	CCUCAUCUACACCAACUAUUU	197	auaguuggUGUAGAUGAGGUU
3	186	CCUCAUCUACACCAACUAUUU	198	AuaguuggUGUAGAUGAGGUU
4	187	CCUCAUCUACACCAACUAUUU	199	AUaguuggUGUAGAUGAGGUU
5	188	CCUCAUCUACACCAACUAUUU	200	AUAguuggUGUAGAUGAGGUU
6	189	CCUCAUCUACACCAACUAUUU	201	AUAGuuggUGUAGAUGAGGUU
7	190	CCUCAUCUACACCAACUAUUU	202	aUaGuUgGUGUAGAUGAGGUU
8	191	CCUCAUCUACACCAACUAUUU	203	AUaGuUgGUGUAGAUGAGGUU
9	192	CCUCAUCUACACCAACUAUUU	204	AuAgUuGgUGUAGAUGAGGUU
10	193	CCUCAUCUACACCAACUAUUU	205	AUAgUuGgUGUAGAUGAGGUU
11	194	CCUCAUCUACACCAACUAUUU	206	AuaguuggUGUAGAUGAGGUU

[00129] Ключ к таблице 3: A, G, C и U в верхнем регистре относятся к рибо-A, рибо-G, рибо-C и рибо-U, соответственно. Буквы в нижнем регистре a, u, g, c, t относятся к 2'-дезокси-A, 2'-дезокси-U, 2'-дезокси-G, 2'-дезокси-C и дезокситимидину (dT=T=t), соответственно. Подчеркивание относится к 2'-OMe-замещенному, например, U. Буква в нижнем регистре f относится к 2'-дезокси-2'-фторзамещению, например, fU представляет собой 2'-дезокси-2'-фтор-U. N представляет собой A, C, G, U, U, a, c, g, u, t или модифицированный, инвертированный или химически модифицированный нуклеотид.

[00130] Примеры RNAi молекул по данному изобретению, направленных на GST-π мРНК, представлены в таблице 4.

Таблица 4: последовательности RNAi молекул для GST-π

ID	SEQ ID №	СМЫСЛОВАЯ ЦЕПЬ (5'-->3') SEQ ID №№ с 207 до 221	SEQ ID №	АНТИСМЫСЛОВАЯ ЦЕПЬ (5'-->3') SEQ ID №№ с 222 до 236
B13'	207	GAUGACUAUGUGAAGGCACNN	222	GUGCCUUCACAUAGUCAUCNN
4	208	GGAUGACUAUGUGAAGGCAUU	223	UGCCUUCACAUAGUCAUCCUU
5	209	GGAUGACUAUGUGAAGGCAUU	224	ugccuucaCAUAGUCAUCCUU
6	210	GGAUGACUAUGUGAAGGCAUU	225	UgccuucaCAUAGUCAUCCUU
7	211	GGAUGACUAUGUGAAGGCAUU	226	UGccuucaCAUAGUCAUCCUU
8	212	GGAUGACUAUGUGAAGGCAUU	227	UGCcuucaCAUAGUCAUCCUU
9	213	GGAUGACUAUGUGAAGGCAUU	228	UGCCuucaCAUAGUCAUCCUU
10	214	GGAUGACUAUGUGAAGGCAUU	229	uGcCuUcACAUAGUCAUCCUU
11	215	GGAUGACUAUGUGAAGGCAUU	230	UGcCuUcACAUAGUCAUCCUU
12	216	GGAUGACUAUGUGAAGGCAUU	231	UgCcUuCaCAUAGUCAUCCUU
13	217	GGAUGACUAUGUGAAGGCAUU	232	UGCcUuCaCAUAGUCAUCCUU
14	218	GGAUGACUAUGUGAAGGCAUU	233	UgccuucaCAUAGUCAUCCUU
15	219	GGAUGACUAUfGUfGAAGGCAUU	234	UGCfCUUCACAUAGUCAUCCUU
17	220	GGAUGACUAUGUGAAGGCAUU	235	UGCCUUCACAUAGUCAUCCUU
18	221	GGAUGACUAUGUGAAGGCAUU	236	UGCCUUCACAUAGUCAUCCUU

[00131] Ключ к таблице 4: A, G, C и U в верхнем регистре относятся к рибо-A, рибо-G, рибо-C и рибо-U, соответственно. Буквы в нижнем регистре a, u, g, c, t относятся к 2'-дезокси-A, 2'-дезокси-U, 2'-дезокси-G, 2'-дезокси-C и дезокситимидину (dT=T=t), соответственно. Подчеркивание относится к 2'-OMe-замещенному, например, U. Буква в нижнем регистре f относится к 2'-дезокси-2'-фторзамещению, например, fU представляет собой 2'-дезокси-2'-фтор-U. N представляет собой A, C, G, U, U, a, c, g, u, t или модифицированный, инвертированный или химически модифицированный нуклеотид.

[00132] Примеры RNAi молекул по данному изобретению, направленных на GST-π мРНК, представлены в таблице 5.

Таблица 5: последовательности RNAi молекул для GST-π

ID	SEQ ID №	СМЫСЛОВАЯ ЦЕПЬ (5'-->3') SEQ ID №№ с 237 до 248	SEQ ID №	АНТИСМЫСЛОВАЯ ЦЕПЬ (5'-->3') SEQ ID №№ с 249 до 260
B2'	237	GAAGCCUUUUGAGACCCUGNN	249	CAGGGUCUCAAAAGGCUUCNN
1	238	GAAGCCUUUUGAGACCCUGUU	250	CAGGGUCUCAAAAGGCUUCUU
2	239	GAAGCCUUUUGAGACCCUGUU	251	cagggucuCAAAAGGCUUCUU
3	240	GAAGCCUUUUGAGACCCUGUU	252	CagggucuCAAAAGGCUUCUU
4	241	GAAGCCUUUUGAGACCCUGUU	253	CAgggucuCAAAAGGCUUCUU
5	242	GAAGCCUUUUGAGACCCUGUU	254	CAGggucuCAAAAGGCUUCUU
6	243	GAAGCCUUUUGAGACCCUGUU	255	CAGGgucuCAAAAGGCUUCUU
7	244	GAAGCCUUUUGAGACCCUGUU	256	cAgGgUcUCAAAAGGCUUCUU
8	245	GAAGCCUUUUGAGACCCUGUU	257	CAgGgUcUCAAAAGGCUUCUU
9	246	GAAGCCUUUUGAGACCCUGUU	258	CaGgGuCuCAAAAGGCUUCUU
10	247	GAAGCCUUUUGAGACCCUGUU	259	CAGgGuCuCAAAAGGCUUCUU
11	248	GAAGCCUUUUGAGACCCUGUU	260	CagggucuCAAAAGGCUUCUU

[00133] Ключ к таблице 5: A, G, C и U в верхнем регистре относятся к рибо-A, рибо-G, рибо-C и рибо-U, соответственно. Буквы в нижнем регистре a, u, g, c, t относятся к 2'-дезокси-A, 2'-дезокси-U, 2'-дезокси-G, 2'-дезокси-C и дезокситимидину (dT=T=t), соответственно. Подчеркивание относится к 2'-OMe-замещенному, например, U. Буква в нижнем регистре f относится к 2'-дезокси-2'-фторзамещению, например, fU представляет собой 2'-дезокси-2'-фтор-U. N представляет собой A, C, G, U, U, a, c, g, u, t или модифицированный, инвертированный или химически модифицированный нуклеотид.

[00134] Примеры RNAi молекул по данному изобретению, направленных на GST-π мРНК, представлены в таблице 6.

Таблица 6: последовательности RNAi молекул для GST-π

ID	SEQ ID №	СМЫСЛОВАЯ ЦЕПЬ (5'-->3') SEQ ID №№ с 261 до 272	SEQ ID №	АНТИСМЫСЛОВАЯ ЦЕПЬ (5'-->3') SEQ ID №№ с 273 до 284
B4'	261	CCUCAUCUACACCAACUAUNN	273	AUAGUUGGUGUAGAUGAGGNN
1	262	CCUCAUCUACACCAACUAUUU	274	AUAGUUGGUGUAGAUGAGGUU
2	263	CCUCAUCUACACCAACUAUUU	275	auaguuggUGUAGAUGAGGUU
3	264	CCUCAUCUACACCAACUAUUU	276	AuaguuggUGUAGAUGAGGUU
4	265	CCUCAUCUACACCAACUAUUU	277	AUaguuggUGUAGAUGAGGUU
5	266	CCUCAUCUACACCAACUAUUU	278	AUAguuggUGUAGAUGAGGUU
6	267	CCUCAUCUACACCAACUAUUU	279	AUAGuuggUGUAGAUGAGGUU
7	268	CCUCAUCUACACCAACUAUUU	280	aUaGuUgGUGUAGAUGAGGUU
8	269	CCUCAUCUACACCAACUAUUU	281	AUaGuUgGUGUAGAUGAGGUU
9	270	CCUCAUCUACACCAACUAUUU	282	AuAgUuGgUGUAGAUGAGGUU
10	271	CCUCAUCUACACCAACUAUUU	283	AUAgUuGgUGUAGAUGAGGUU
11	272	CCUCAUCUACACCAACUAUUU	284	AuaguuggUGUAGAUGAGGUU

[00135] Ключ к таблице 6: A, G, C и U в верхнем регистре относятся к рибо-A, рибо-G, рибо-C и рибо-U, соответственно. Буквы в нижнем регистре a, u, g, c, t относятся к 2'-дезокси-A, 2'-дезокси-U, 2'-дезокси-G, 2'-дезокси-C и дезокситимидину (dT=T=t), соответственно. Подчеркивание относится к 2'-OMe-замещенному, например, U. Буква в нижнем регистре f относится к 2'-дезокси-2'-фторзамещению, например, fU представляет собой 2'-дезокси-2'-фтор-U. N представляет собой A, C, G, U, U, a, c, g, u, t или модифицированный, инвертированный или химически модифицированный нуклеотид.

[00136] В некоторых вариантах осуществления данное изобретение предусматривает ряд молекул нуклеиновой кислоты, в которых: a) молекула имеет полинуклеотидную смысловую цепь и полинуклеотидную антисмысловую цепь; b) каждая цепь молекулы составляет от 15 до 30 нуклеотидов в длину; c) непрерывная область от 15 до 30 нуклеотидов антисмысловой цепи комплементарна последовательности мРНК, кодирующей GST-π; d) по меньшей мере часть смысловой цепи комплементарна по меньшей мере части антисмысловой цепи и молекула имеет область дуплекса от 15 до 30 нуклеотидов в длину.

[00137] В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты может иметь непрерывную область от 15 до 30 нуклеотидов антисмысловой цепи, которая комплементарна последовательности мРНК, кодирующей GST-π, расположена в области дуплекса молекулы.

[00138] В дополнительных вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты может иметь непрерывную область от 15 до 30 нуклеотидов антисмысловой цепи, которая комплементарна последовательности мРНК, кодирующей GST-π.

[00139] В определенных вариантах осуществления каждая цепь молекулы нуклеиновой кислоты может составлять от 18 до 22 нуклеотидов в длину. Область дуплекса молекулы нуклеиновой кислоты может составлять 19 нуклеотидов в длину.

[00140] В альтернативных формах молекула нуклеиновой кислоты может иметь полинуклеотидную смысловую цепь и полинуклеотидную антисмысловую цепь, которые соединяют в виде одной цепи, и формировать область дуплекса, соединенную на одном конце с помощью петли.

[00141] Некоторые варианты осуществления молекулы нуклеиновой кислоты по данному раскрытию могут иметь тупой конец. В определенных вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты может иметь один или более нуклеотидов 3' липкого конца.

[00142] Данное изобретение предусматривает ряд молекул нуклеиновой кислоты, которые являются RNAi молекулами, активными для сайленсинга генов. Патентоспособные молекулы нуклеиновой кислоты могут представлять собой дцРНК, миРНК, микроРНК или shRNA, активные для сайленсинга генов, а также РНК, направляемую с помощью ДНК (ddRNA), РНК, взаимодействующую с Piwi, (piRNA) или ассоциированную с повторами миРНК (rasiRNA). Молекулы нуклеиновой кислоты могут быть активны для ингибирования экспрессии GST-π.

[00143] Варианты осуществления данного изобретения дополнительно предусматривают молекулы нуклеиновой кислоты, имеющие IC₅₀ для нокдауна GST-π меньше 100 пМ.

[00144] Дополнительные варианты осуществления данного изобретения предусматривают молекулы нуклеиновой кислоты, имеющие IC₅₀ для нокдауна GST-π меньше 50 пМ.

[00145] Это изобретение дополнительно предусматривает композиции, содержащие одну или более патентоспособных молекул нуклеиновой кислоты, наряду с фармацевтически приемлемым носителем. В определенных вариантах осуществления носитель может представлять собой липидную молекулу или липосому.

[00146] Соединения и композиции по данному изобретению можно использовать в способах предотвращения или лечения заболевания, ассоциированного с GST-π, посредством введения соединения или композиции субъекту, нуждающемуся в этом.

[00147] Способы по данному изобретению позволяют использовать патентоспособные соединения для предотвращения или лечения злокачественной опухоли. Злокачественная опухоль может быть представлена в различных заболеваниях, например, злокачественных опухолях, связанных с экспрессией GST-π, злокачественных опухолях, обусловленных клетками, экспрессирующими мутантный KRAS, саркомах, фибросаркоме, озлокачествленной фиброзной гистиоцитоме, липосаркоме, рабдомиосаркоме, лейомиосаркоме, ангиосаркоме, саркоме Капоши, лимфангиосаркоме, синовиальной саркоме, хондросаркоме, остеосаркоме, карциномах, опухоли головного мозга, злокачественной опухоли головы и шеи, злокачественной опухоли молочной железы, злокачественной опухоли легких, злокачественной опухоли пищевода, злокачественной опухоли желудка, злокачественной опухоли двенадцатиперстной кишки, злокачественной опухоли аппендикса, злокачественной опухоли толстой кишки, злокачественной опухоли прямой кишки, злокачественной опухоли печени, злокачественной опухоли поджелудочной железы, злокачественной опухоли желчного пузыря, злокачественной опухоли желчных протоков, злокачественной опухоли ануса, злокачественной опухоли почки, злокачественной опухоли уретры, злокачественной опухоли мочевого пузыря, злокачественной опухоли предстательной железы, злокачественной опухоли яичек, злокачественной опухоли матки, злокачественной опухоли яичника, злокачественной опухоли кожи, лейкозе, злокачественной лимфоме, злокачественных эпителиальных опухолях и злокачественных неэпителиальных опухолях.

[00148] P21 и RNAi молекулы

[00149] p21 представляет собой белок регуляции клеточного цикла, кодируемый геном CDKN1A и относящийся к семейству CIP/KIP. Этот белок обладает функцией ингибирования прохождения клеточного цикла в фазе G1 и фазе G2/M посредством ингибирования эффекта комплекса циклин-CDK через связывание с этим комплексом. В частности, ген p21 подвергается активации с помощью p53, одного из генов-супрессоров опухолей. Сообщалось о том, что при активации p53 из-за повреждения ДНК или тому подобного, p53 активирует p21 так, что происходит задержание клеточного цикла в фазе G1 и фазе G2/M.

[00150] p21 сверхэкспрессирован в различных злокачественных опухолях человека, в том числе предстательной железы, шейки матки, молочной железы и плоскоклеточных карциномах, и, во многих случаях, повышающая регуляция p21 положительно коррелирует со степенью дифференцировки опухоли, инвазивностью и агрессивностью. См., например, Chang et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2000, том 97, № 8, стр. 4291-96. Также сообщалось, что повышающая регуляция p21 связана с онкогенностью и неблагоприятным прогнозом при многих формах злокачественных опухолей, в том числе злокачественных опухолях головного мозга, предстательной железы, яичников, молочной железы и клеток пищевода. См., например, Winters et al., Breast Cancer Research, 2003, том 5, № 6, стр. R242-R249. Также заболевание может представлять собой возрастные заболевания, в том числе атеросклероз, болезнь Альцгеймера, амилоидоз и артрит. См., например, Chang et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2000, том 97, № 8, стр. 4291-96.

[00151] p21 присутствует у различных животных, включая человека. Информацию о последовательности CDKN1A человека (p21) можно найти по: NM_000389.4, NM_078467.2, NM_001291549.1, NM_001220778.1, NM_001220777.1 (NP_001207707.1, NP_001278478.1, NP_001207706.1, NP_510867.1, NP_000380.1).

[00152] Целевая p21 мРНК человека раскрыта под номером доступа Genbank NM_000389.4 (CDKN1A) и составляет 2175 пар оснований в длину.

[00153] Специалист в данной области поймет, что приведена последовательность может меняться с течением времени, и включит любые необходимые изменения в молекулы нуклеиновой кислоты в настоящем описании соответствующим образом.

[00154] Варианты осуществления данного изобретения могут предусматривать композиции и способы для сайленсинга экспрессии гена p21 с использованием небольших молекул нуклеиновой кислоты. Примеры молекул нуклеиновой кислоты включают молекулы, активные при РНК-интерференции (RNAi молекулы), молекулы малой интерферирующей РНК (миРНК), микроРНК (мкРНК) и короткой шпилечной РНК (shRNA), а также РНК, направляемую с помощью ДНК (ddRNA), РНК, взаимодействующую с Piwi (piRNA), и ассоциированную с повторами миРНК (rasiRNA). Такие молекулы способны опосредовать РНК-интерференцию против экспрессии гена p21.

[00155] Композиция и способы, раскрытые в настоящем описании, также можно использовать при лечении злокачественных опухолей различных типов у субъекта.

[00156] Молекулы нуклеиновой кислоты и способы по данному изобретению можно использовать для понижающей регуляции экспрессии генов, которые кодируют p21.

[00157] Композиции и способы по данному изобретению могут содержать одну или более молекул нуклеиновой кислоты, которые, независимо или в комбинации, могут модулировать или регулировать экспрессию белка p21 и/или генов, кодирующих белки p21, белки и/или гены, кодирующие p21, связанные с поддержанием и/или развитием заболеваний, состояний или нарушений, связанных с p21, таких как злокачественная опухоль.

[00158] Композиции и способы по данному изобретению описаны со ссылкой на образцовые последовательности p21. Специалист в данной области поймет, что различные аспекты и варианты осуществления изобретения направлены на любые родственные гены, последовательности или варианты p21, такие как гомологичные гены и транскрипционные варианты и полиморфизмы, в том числе однонуклеотидный полиморфизм (SNP), связанный с любыми генами p21.

[00159] В некоторых вариантах осуществления композиции и способы по данному изобретению могут предусматривать двухцепочечную молекулу малой интерферирующей нуклеиновой кислоты (миРНК), которая осуществляет понижающую регуляцию экспрессии гена p21, например, CDKN1A человека.

[00160] RNAi молекулу по данному изобретению можно направлять на p21 и любые гомологичные последовательности, например, с использованием комплементарных последовательностей или посредством встраивания неканонических пар оснований, например, несовпадений и/или неоднозначно совпадающих пар оснований, которые могут предусматривать дополнительные последовательности-мишени.

[00161] В случаях, когда идентифицируют несовпадения, неканонические пары оснований, например, несовпадения и/или неоднозначно совпадающие основания, можно использовать для того, чтобы создавать молекулы нуклеиновой кислоты, которые направлены больше чем на одну последовательность гена.

[00162] Например, неканонические пары оснований, такие как пары оснований UU и CC, можно использовать для того, чтобы создавать молекулы нуклеиновой кислоты, которые способны направленно воздействовать на последовательности для различных мишеней p21, которые обладают гомологией последовательностей. Таким образом, RNAi молекулу можно направлять на нуклеотидную последовательность, которая является консервативной между гомологичными генами, и одну RNAi молекулу можно использовать для того, чтобы ингибировать экспрессию больше чем одного гена.

[00163] В некоторых аспектах композиции и способы по данному изобретению включают RNAi молекулы, которые активны против p21 мРНК, где RNAi молекула содержит последовательность, комплементарную любой мРНК, кодирующей последовательность p21.

[00164] В некоторых вариантах осуществления RNAi молекула по данному раскрытию может обладать активностью против p21 РНК, где RNAi молекула содержит последовательность, комплементарную РНК, имеющей вариант последовательности, кодирующей p21, например, мутантного гена p21, который, как известно в данной области, связан со злокачественной опухолью.

[00165] В дополнительных вариантах осуществления RNAi молекула по данному изобретению может содержать нуклеотидную последовательность, которая может взаимодействовать с нуклеотидной последовательностью гена p21 и опосредовать сайленсинг экспрессии гена p21.

[00166] Молекулы нуклеиновой кислоты для ингибирования экспрессии p21 могут иметь смысловую цепь и антисмысловую цепь, в которой цепи образуют область дуплекса. Молекулы нуклеиновой кислоты могут в области дуплекса иметь один или более нуклеотидов, модифицированных или химически модифицированных, в том числе такие модификации, как известно в данной области. Любой нуклеотид в липком конце миРНК также может быть модифицированным или химически модифицированным.

[00167] В некоторых вариантах осуществления предпочтительные модифицированные или химически модифицированные нуклеотиды представляют собой 2′-дезоксинуклеотиды. В дополнительных вариантах осуществления модифицированные или химически модифицированные нуклеотиды могут включать 2′-O-алкилзамещенные нуклеотиды, 2′-дезокси-2′-фторзамещенные нуклеотиды, фосфотиоатные нуклеотиды, замкнутые нуклеотиды или любое их сочетание.

[00168] В определенных вариантах осуществления предпочтительная структура может иметь антисмысловую цепь, содержащую дезоксинуклеотиды во множестве положений, множество положений представляет собой одно из следующего: каждое из положений 4, 6 и 8 от 5'-конца антисмысловой цепи; каждое из положений 3, 5 и 7 от 5'-конца антисмысловой цепи; каждое из положений 1, 3, 5 и 7 от 5'-конца антисмысловой цепи; каждое из положений 3-8 от 5'-конца антисмысловой цепи; и каждое из положений 5-8 от 5'-конца антисмысловой цепи. Любые из этих структур можно комбинировать с одним или более 2′-дезокси-2′-фторзамещенными нуклеотидами в области дуплекса.

[00169] Молекулы нуклеиновой кислоты по данному изобретению могут ингибировать экспрессию p21 мРНК с благоприятной IC₅₀ меньше приблизительно 200 пМ. Кроме того, молекулы нуклеиновой кислоты могут ингибировать экспрессию p21 мРНК на определенных уровнях, по меньшей мере на 25% in vivo, после одного введения.

[00170] В данном изобретении предусмотрены фармацевтические композиции, которые могут содержать одну или более миРНК, как раскрыто в настоящем описании, в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем. Можно использовать любой подходящий носитель, в том числе тот, который известен в данной области, а также липидные молекулы, наночастицы или липосомы, любые из которых могут инкапсулировать молекулы миРНК.

[00171] В данном изобретении раскрыты способы лечения заболевания, которое может быть связано с экспрессией p21, эти способы включают введение субъекту, нуждающемуся в этом, композиции, содержащей одну или более миРНК. Заболевания, подлежащие лечению, могут включать злокачественную опухоль, злокачественную опухоль, обусловленную клетками, экспрессирующими мутантный KRAS, саркому и карциному, среди прочих.

[00172] Примеры RNAi молекул по данному изобретению, направленных на p21 мРНК, представлены в таблице 7.

Таблица 7: последовательности RNAi молекул для p21

Эталонн. полож-е	SEQ ID №	СМЫСЛОВАЯ ЦЕПЬ (5'-->3') SEQ ID №№ с 285 до 312	SEQ ID №	АНТИСМЫСЛОВАЯ ЦЕПЬ (5'-->3') SEQ ID №№ с 313 до 340
2085	285	CUUAGUGACUUUACUUGUAmUmU	313	UACAAGUAAAGUCACUAAGmUmU
500	286	CAGACCAGCAUGACAGAUUmUmU	314	AAUCUGUCAUGCUGGUCUGmUmU
540	287	UGAUCUUCUCCAAGAGGAAmUmU	315	UUCCUCUUGGAGAAGAUCAmUmU
1706	288	GUUCAUUGCACUUUGAUUAmUmU	316	UAAUCAAAGUGCAAUGAACmUmU
1709	289	CAUUGCACUUUGAUUAGCAmUmU	317	UGCUAAUCAAAGUGCAAUGmUmU
210	290	AGCGAUGGAACUUCGACUUmUmU	318	AAGUCGAAGUUCCAUCGCUmUmU
211	291	GCGAUGGAACUUCGACUUUmUmU	319	AAAGUCGAAGUUCCAUCGCmUmU
1473	292	GGGAAGGGACACACAAGAAmUmU	320	UUCUUGUGUGUCCCUUCCCmUmU
1507	293	UCUACCUCAGGCAGCUCAAmUmU	321	UUGAGCUGCCUGAGGUAGAmUmU
2067	294	GGUGCUCAAUAAAUGAUUCmUmU	322	GAAUCAUUUAUUGAGCACCmUmU
1063	295	CAUCAUCAAAAACUUUGGAmUmU	323	UCCAAAGUUUUUGAUGAUGmUmU
1735	296	AAGGAGUCAGACAUUUUAAmUmU	324	UUAAAAUGUCUGACUCCUUmUmU
783	297	GUGCUGGGCAUUUUUAUUUmUmU	325	AAAUAAAAAUGCCCAGCACmUmU
869	298	GCCGGCUUCAUGCCAGCUAmUmU	326	UAGCUGGCAUGAAGCCGGCmUmU
1060	299	GGGCAUCAUCAAAAACUUUmUmU	327	AAAGUUUUUGAUGAUGCCCmUmU
1492	300	GAAGGGCACCCUAGUUCUAmUmU	328	UAGAACUAGGGUGCCCUUCmUmU
1704	301	CAGUUCAUUGCACUUUGAUmUmU	329	AUCAAAGUGCAAUGAACUGmUmU
1733	302	ACAAGGAGUCAGACAUUUUmUmU	330	AAAAUGUCUGACUCCUUGUmUmU
1847	303	UGGAGGCACUGAAGUGCUUmUmU	331	AAGCACUUCAGUGCCUCCAmUmU
2000	304	GCAGGGACCACACCCUGUAmUmU	332	UACAGGGUGUGGUCCCUGCmUmU
2014	305	CUGUACUGUUCUGUGUCUUmUmU	333	AAGACACAGAACAGUACAGmUmU
677	306	UUAAACACCUCCUCAUGUAmUmU	334	UACAUGAGGAGGUGUUUAAmUmU
475	307	AGACUCUCAGGGUCGAAAAmUmU	335	UUUUCGACCCUGAGAGUCUmUmU
508	308	CAUGACAGAUUUCUACCACmUmU	336	GUGGUAGAAAUCUGUCAUGmUmU
514	309	AGAUUUCUACCACUCCAAAmUmU	337	UUUGGAGUGGUAGAAAUCUmUmU
549	310	CCAAGAGGAAGCCCUAAUCmUmU	338	GAUUAGGGCUUCCUCUUGGmUmU
382	311	GACAGCAGAGGAAGACCAUmUmU	339	AUGGUCUUCCUCUGCUGUCmUmU
2042	312	CUCCCACAAUGCUGAAUAUmUmU	340	AUAUUCAGCAUUGUGGGAGmUmU

[00173] Ключ к таблице 7: A, G, C и U в верхнем регистре относятся к рибо-A, рибо-G, рибо-C и рибо-U, соответственно. Буквы в нижнем регистре a, g, c, t представляют 2'-дезокси-A, 2'-дезокси-G, 2'-дезокси-C и тимидин, соответственно. mU представляет собой 2'-метокси-U.

[00174] Примеры RNAi молекул по данному изобретению, направленных на p21 мРНК, представлены в таблице 8.

Таблица 8: последовательности RNAi молекул для p21

Эталонн. полож-е	SEQ ID №	СМЫСЛОВАЯ ЦЕПЬ (5'-->3') SEQ ID №№ с 341 до 354	SEQ ID №	АНТИСМЫСЛОВАЯ ЦЕПЬ (5'-->3') SEQ ID №№ с 355 до 368
1735'	341	AAGGAGUCAGACAUUUUAANN	355	UUAAAAUGUCUGACUCCUUNN
1	342	AAGGAGUCAGACAUUUUAAUU	356	UUAaAaUgUCUGACUCCUUUU
2	343	AAGGAGUCAGACAUUUUAAUU	357	UUAaAaUgUCUGACUCCUUUU
3	344	AAGGAGUCAGACAUUUUAAUU	358	UUAaAaUgUCUGACUCCUUUU
4	345	AAGGAGUCAGACAUUUUAAUU	359	UUAaAaUgUCUGACUCCUUUU
5	346	AAGGAGUCAGACAUUUUAAUU	360	UUaaaaugUCUGACUCCUUUU
6	347	AAGGAGUCAGACAUUUUAAUU	361	UUAAaaugUCUGACUCCUUUU
7	348	AAGGAGUCAGACAUUUUAAUU	362	uUaAaAuGUCUGACUCCUUUU
8	349	AAGGAGUCAGACAUUUUAAUU	363	UUaAaAuGUCUGACUCCUUUU
9	350	AAGGAGUCAGACAUUUUAAUU	364	UUAaAaUgUCUGACUCCUUUU
10	351	AAGGAGUCAGACAUUUUAAUU	365	UUAAAAUGUCUGACUCCUUUU
	11	AAGGAGUCAGACAUUUUAAUU	366	UUAAAAUGUCUGACUCCUUUU
12	353	AAGGAGUCAGACAUUUUAAUU	367	UUAAAAUGUCUGACUCCUUUU
13	354	AAGGAGUCAGACAUUUUAAUU	368	UUAAAAUGUCUGACUCCUUUU

[00175] Ключ к таблице 8: A, G, C и U в верхнем регистре относятся к рибо-A, рибо-G, рибо-C и рибо-U, соответственно. Буквы в нижнем регистре a, u, g, c, t относятся к 2'-дезокси-A, 2'-дезокси-U, 2'-дезокси-G, 2'-дезокси-C и дезокситимидину (dT=T=t), соответственно. Подчеркивание относится к 2'-OMe-замещенному, например, U. N представляет собой A, C, G, U, U, a, c, g, u, t или модифицированный, инвертированный или химически модифицированный нуклеотид.

[00176] Варианты осуществления данного изобретения охватывают миРНК молекулы из таблиц 1-8, которые модифицированы или химически модифицированы в соответствии с примерами, приведенными выше.

[00177] В некоторых вариантах осуществления данное изобретение предусматривает ряд молекул нуклеиновой кислоты, где a) молекула имеет полинуклеотидную смысловую цепь и полинуклеотидную антисмысловую цепь; b) каждая цепь молекулы составляет от 15 до 30 нуклеотидов в длину; c) непрерывная область от 15 до 30 нуклеотидов антисмысловой цепи комплементарна последовательности мРНК, кодирующей p21; и d) по меньшей мере часть смысловой цепи комплементарна по меньшей мере части антисмысловой цепи и молекула имеет область дуплекса от 15 до 30 нуклеотидов в длину.

[00178] В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты может иметь непрерывную область от 15 до 30 нуклеотидов антисмысловой цепи, которая комплементарна последовательности мРНК, кодирующей p21, и расположена в области дуплекса молекулы.

[00179] В дополнительных вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты может иметь непрерывную область от 15 до 30 нуклеотидов антисмысловой цепи, которая комплементарна последовательности мРНК, кодирующей p21.

[00180] В дополнительных аспектах молекула нуклеиновой кислоты по данному изобретению может иметь каждую цепь молекулы, составляющую от 18 до 22 нуклеотидов в длину. Молекула нуклеиновой кислоты может иметь область дуплекса 19 нуклеотидов в длину.

[00181] В определенных вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты может иметь полинуклеотидную смысловую цепь и полинуклеотидную антисмысловую цепь, которые соединены в виде одной цепи и образуют область дуплекса, соединенную на одном конце с помощью петли.

[00182] Молекулы нуклеиновой кислоты по данному изобретению могут иметь тупой конец, и могут иметь один или более липких 3'-концов.

[00183] Молекулы нуклеиновой кислоты по данному изобретению могут представлять собой RNAi молекулы, которые активны для сайленсинга генов, например, дцРНК, которая активна для сайленсинга генов, миРНК, микроРНК или shRNA, активную для сайленсинга генов, а также РНК, направляемую с помощью ДНК (ddRNA), РНК, взаимодействующую с Piwi (piRNA), и ассоциированную с повторами миРНК (rasiRNA).

[00184] Данное изобретение предусматривает ряд молекул нуклеиновой кислоты, которые активны для ингибирования экспрессии p21. В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты может иметь IC₅₀ для нокдауна p21 меньше 100 пМ.

[00185] В дополнительных вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты может иметь IC₅₀ для нокдауна p21 меньше 50 пМ.

[00186] Это изобретение дополнительно предусматривает композиции, содержащие одну или более патентоспособных молекул нуклеиновой кислоты и фармацевтически приемлемый носитель. Носителем может быть липидная молекула или липосома.

[00187] Соединения и композиции по данному изобретению можно использовать в способах предотвращения или лечения заболевания, ассоциированного с p21, посредством введения соединения или композиции субъекту, нуждающемуся в этом.

[00188] В дополнительных аспектах данное изобретение включает способы лечения заболевания, связанного с экспрессией p21, посредством введения субъекту, нуждающемуся в этом, композиции, содержащей одну или более патентоспособных молекул нуклеиновой кислоты. Заболевание может представлять собой злокачественную опухоль, которая может присутствовать при заболевании, таком как злокачественные опухоли, связанные с экспрессией p21, среди прочих.

[00189] Способы по данному изобретению позволяют использовать патентоспособные соединения для предотвращения или лечения злокачественной опухоли. Злокачественная опухоль может быть представлена в различных заболеваниях, например, злокачественных опухолях, связанных с экспрессией p21, злокачественных опухолях, обусловленных клетками, экспрессирующими мутантный KRAS, саркомах, фибросаркоме, озлокачествленной фиброзной гистиоцитоме, липосаркоме, рабдомиосаркоме, лейомиосаркоме, ангиосаркоме, саркоме Капоши, лимфангиосаркоме, синовиальной саркоме, хондросаркоме, остеосаркоме, карциномах, опухоли головного мозга, злокачественной опухоли головы и шеи, злокачественной опухоли молочной железы, злокачественной опухоли легких, злокачественной опухоли пищевода, злокачественной опухоли желудка, злокачественной опухоли двенадцатиперстной кишки, злокачественной опухоли аппендикса, злокачественной опухоли толстой кишки, злокачественной опухоли прямой кишки, злокачественной опухоли печени, злокачественной опухоли поджелудочной железы, злокачественной опухоли желчного пузыря, злокачественной опухоли желчных протоков, злокачественной опухоли почки, злокачественной опухоли уретры, злокачественной опухоли мочевого пузыря, злокачественной опухоли предстательной железы, злокачественной опухоли яичек, злокачественной опухоли матки, злокачественной опухоли яичника, злокачественной опухоли кожи, лейкозе, злокачественной лимфоме, эпителиальных злокачественных опухолях и неэпителиальных злокачественных опухолях.

[00190] Варианты осуществления данного изобретения могут предусматривать RNAi молекулы, которые можно использовать для понижающей регуляции или ингибирования экспрессии гена и/или белка.

[00191] RNAi молекулы по данному раскрытию можно использовать индивидуально или в комбинации с другими миРНК для модулирования экспрессии одного или более генов.

[00192] RNAi молекулы по данному раскрытию можно использовать индивидуально или в комбинации или в сочетании с другими известными лекарственными средствами для предотвращения или лечения заболеваний или улучшения симптомов состояний или нарушений.

[00193] RNAi молекулы по данному изобретению можно использовать для того, чтобы модулировать или ингибировать экспрессию гена со специфичной последовательностью.

[00194] RNAi молекулы по данному раскрытию могут включать направляющая цепь, для которой ряд смежных нуклеотидов по меньшей мере частично комплементарен мРНК человека.

[00195] Варианты осуществления данного изобретения могут включать способы предотвращения, лечения или улучшения симптомов заболевания или состояния у нуждающегося в этом субъекта.

[00196] В некоторых вариантах осуществления способы предотвращения, лечения или улучшения симптомов злокачественной опухоли у субъекта могут включать введение субъекту RNAi молекулы по данному изобретению для того, чтобы модулировать экспрессию гена у субъекта или в организме.

[00197] В некоторых вариантах осуществления это изобретение предусматривает способы понижающей регуляции экспрессии гена в клетке или организме, посредством приведения клетки или организма в контакт с RNAi молекулой по данному изобретению.

[00198] RNAi молекулы, направленные на Hsp47

[00199] В некоторых вариантах осуществления данное изобретение может предусматривать ряд RNAi молекул и композиций для модулирования экспрессии белка теплового шока 47 (Hsp47), коллаген-специфического молекулярного шаперона для внутриклеточного транспорта и созревания.

[00200] Некоторые примеры миРНК для Hsp47 приведены в US 8,710,209, который, таким образом, включен посредством ссылки в полном объеме для всех целей.

[00201] Hsp47 или гомологичная ему генная последовательность раскрыты, например, под номером доступа GenBank AB010273 (человек), X60676 (мышь) или M69246 (крыса, gp46).

[00202] Средства для супрессии Hsp47 раскрыты для ингибирования фиброза. См., например, US 8,173,170 B2, который, таким образом, включен посредством ссылки в полном объеме для всех целей. Однако существует ограниченная информация, касающаяся эффекта ингибирования Hsp47 при развитии, прогрессировании и росте злокачественных опухолей.

[00203] В некоторых вариантах осуществления каждая цепь миРНК молекулы по данному изобретению может составлять от 15 до 60 нуклеотидов в длину или от 15 до 40 нуклеотидов в длину или от 19 до 25 нуклеотидов в длину.

[00204] В определенных вариантах осуществления данное изобретение предусматривает фармацевтическую композицию, содержащую RNAi молекулы для лечения злокачественной опухоли, которые представляют собой RNAi молекулы, направленные на Hsp47.

[00205] Примеры RNAi молекул по данному раскрытию, направленных на Hsp47 мРНК, представлены в таблице 9.

Таблица 9: последовательности RNAi молекул для Hsp47

	SEQ ID №	СМЫСЛОВАЯ ЦЕПЬ (5'-->3') SEQ ID №№ с 369 до 389	SEQ ID №	АНТИСМЫСЛОВАЯ ЦЕПЬ (5'-->3') SEQ ID №№ с 390 до 410
мышь	369	CGAGAACAGUUUGUACAAGUU	390	CUUGUACAAACUGUUCUCGUU
	370	CAGGCCUCUACAACUACUATT	391	UAGUAGUUGUAGAGGCCUGTT
	371	GAGCACUCCAAGAUCAACUUCCGCG	392	CGCGGAAGUUGAUCUUGGAGUGCUCUU
	372	GGACAGGCCUCUACAACUATT	393	UAGUUGUAGAGGCCUGUCCTT
	373	GAGCACUCCAAGAUCAACUTT	394	AGUUGAUCUUGGAGUGCUCTT
	374	GAACACUCCAAGAUCAACUTT	395	AGUUGAUCUUGGAGUGUUCTT
	375	CAGGCCUCUACAACUACUACGACGA	396	UCGUCGUAGUAGUUGUAGAGGCCUGUU
	376	GAACACUCCAAGAUCAACUUCCGAG	397	CUCGGAAGUUGAUCUUGGAGUGUUCUU
	377	GGACAGGCCUCUACAACUACUACGA	398	UCGUAGUAGUUGUAGAGGCCUGUCCUU
	378	CAGGCCUCUACAACUACUAdTdTdAdAdAdAdA	399	UAGUAGUUGUAGAGGCCUGdTdT
	379	CAGGCCUCUACAACUACUA	400	UAGUAGUUGUAGAGGCCUGdTdT
	380	CAGGCCUCUACAACUACUAdTdTdAdAdAdAdAdAdAdAdAdAdAdA	401	UAGUAGUUGUAGAGGCCUGdTdT
	381	dAdAdAdAdACAGGCCUCUACAACUACUAdTdT	402	UAGUAGUUGUAGAGGCCUGdTdT
	382	CAGGCCUCUACAACUACUAdTdTdAdAdAdAdAdAdAdA	403	UAGUAGUUGUAGAGGCCUGdTdT
	383	dAdAdAdAdAdAdAdACAGGCCUCUACAACUACUAdTdT	404	UAGUAGUUGUAGAGGCCUGdTdT
	384	CAGGCCUCUACAACUACUAdTdTdAdAdAdAdAdAdAdAdAdAdAdA	405	UAGUAGUUGUAGAGGCCUGdTdT
	385	dAdAdAdAdAdAdAdAdAdAdAdAdAdAdAdACAGGCCUCUACAACUACUAdTdT	406	UAGUAGUUGUAGAGGCCUGdTdT
	386	CAGGCCUCUACAACUACUAdTdTdAdAdAdAdAdAdAdAdAdAdAdAdAdAdAdA	407	UAGUAGUUGUAGAGGCCUGdTdT
	387	CAGGCCUCUACAACUACUAdTdT	408	UAGUAGUUGUAGAGGCCUGdTdT
мышь	388	GGACAGGCCUGUACAACUAdTdT	409	UAGUUGUACAGGCCUGUCCdTdT
человек	389	GGACAGGCCUCUACAACUAdTdT	410	UAGUUGUAGAGGCCUGUCCdTdT

[00206] Ключ к таблице 9: A, G, C и U в верхнем регистре относятся к рибо-A, рибо-G, рибо-C и рибо-U, соответственно. d в нижнем регистре обозначает «дезокси».

[00207] В таблице 9 антисмысловая цепь любой из RNAi молекул, направленных на Hsp47, может альтернативно иметь дезоксинуклеотиды во множестве положений, множество положений представляет собой одно из следующего: каждое из положений 4, 6 и 8 от 5'-конца антисмысловой цепи; каждое из положений 3, 5 и 7 от 5'-конца антисмысловой цепи; каждое из положений 1, 3, 5 и 7 от 5'-конца антисмысловой цепи; каждое из положений 3-8 от 5'-конца антисмысловой цепи; и каждое из положений 5-8 от 5'-конца антисмысловой цепи.

[00208] Дополнительные примеры RNAi молекул по данному раскрытию, направленных на Hsp47 мРНК, представлены в таблице 10.

Таблица 10: последовательности RNAi молекул и контроль для Hsp47

SEQ ID №	Последовательность	Название
411	3'-C3-25rU-25rC-25rC-25rU-25rU-rC-rA-rA-rC-rU-rA-rG-rA-rA-rC-rC-rU-rC-rA-idAB-5'	Смысловая «A»
412	3'-C3-C3-mU-rG-mA-rG-mG-rU-mU-rC-mU-rA-rG-mU-25rU-mG-rA-mA-rG-mG-rA-5'	Антисмысловая «A»
413	3'-C3-rA-rG-mU-rG-rG-rG-mU-rA-mC-rA-25rC-rA-rG-rA-rG-mU-rC-rC-rU-idAB-5'	Смысловая «B»
414	3'-C3-C3-rA-rG-rG-rA-mC-rU-rC-rU-mG-rU-rG-mU-rA-25rC-rC-mC-rA-rC-mU-5'	Антисмысловая «B»
415	5'-idAB-rG-rA-rG-rA-rC-rA-rC-rA-rU-rG-rG-rG-rU-rG-25rC-25rU-25rA-25rU-25rA-C3-P-3'	Смысловая «C»
416	5'-mU-rA-mU-rA-mG-rC-25rA-rC-mC-rC-mA-rU-mG-rU-mG-rU-mC-rU-mC-C3-C3-3'	Антисмысловая «C»
417	5'-idAB-rC-mU-mU-rA-mC-rG-mC-mU-25rG-rA-rG-mU-rA-mC-mU-rU-mC-rG-rU-C3-3'	Смысловая «D», Отрицательный контроль
418	5'-rA-mC-rG-rA-rA-25rG-mU-rA-rC-rU-mC-rA-rG-rC-rG-mU-rA-rA-rG-C3-C3-3'	Антисмысловая «D», Отрицательный контроль

[00209] Ключ к таблице 10: обозначения: rX представляет рибонуклеотиды, mX представляет 2'-O-Метил рибонуклеотиды, 25rX представляет рибонуклеотиды с 2'-5' связями, C3 представляет 1,3-пропандиоловый спейсер, idAB представляет инвертированную 1,2-дидезокси-D-рибозу, P представляет фосфатную группу 3'-конца.

[00210] В таблице 10 антисмысловая цепь любой из RNAi молекул, направленных на Hsp47, может альтернативно иметь дезоксинуклеотиды во множестве положений, множество положений представляет собой одно из следующего: каждое из положений 4, 6 и 8 от 5'-конца антисмысловой цепи; каждое из положений 3, 5 и 7 от 5'-конца антисмысловой цепи; каждое из положений 1, 3, 5 и 7 от 5'-конца антисмысловой цепи; каждое из положений 3-8 от 5'-конца антисмысловой цепи; и каждое из положений 5-8 от 5'-конца антисмысловой цепи.

[00211] RNAi молекулы, направленные на MCL1

[00212] В некоторых вариантах осуществления данное изобретение может предусматривать ряд RNAi молекул и композиций для модулирования экспрессии мРНК транскрипционного варианта 2 гена лейкоза миелоидных клеток 1 (MCL1) Homo sapiens.

[00213] MCL1 раскрыт, например, под № доступа NM_182763.2 (человек).

[00214] Примеры RNAi молекул по данному раскрытию, направленных на MCL1 мРНК, представлены в таблице 11.

Таблица 11: последовательности RNAi молекул для MCL1

SEQ ID №	СМЫСЛОВАЯ ЦЕПЬ (5'-->3') SEQ ID №№ с 419 до 426	SEQ ID №	АНТИСМЫСЛОВАЯ ЦЕПЬ (5'-->3') SEQ ID №№ с 427 до 434
419	GCCUUCCAAGGAUGGGUUUGU	427	AAACCCAUCCUUGGAAGGCCG
420	GGAGUUCUUCCAUGUAGAGGA	428	CUCUACAUGGAAGAACUCCAC
421	CCAUGUAGAGGACCUAGAAGG	429	UUCUAGGUCCUCUACAUGGAA
422	GCCUUCCAAGGAUGGGUUUGU	430	AAAcCcAuCCUUGGAAGGCCG
423	GCCUUCCAAGGAUGGGUUUGU	431	AAaCcCaUCCUUGGAAGGCCG
424	GCCUUCCAAGGAUGGGUUUGU	432	aAaCcCaUCCUUGGAAGGCCG
425	GCCUUCCAAGGAUGGGUUUGU	433	AAacccauCCUUGGAAGGCCG
426	GCCUUCCAAGGAUGGGUUUGU	434	AAACccauCCUUGGAAGGCCG

[00215] Ключ к таблице 11: A, G, C и U в верхнем регистре относятся к рибо-A, рибо-G, рибо-C и рибо-U, соответственно. d в нижнем регистре представляет «дезокси».

[00216] В таблице 11 антисмысловая цепь любой из RNAi молекул, направленных на MCL1, может альтернативно иметь дезоксинуклеотиды во множестве положений, множество положений представляет собой одно из следующего: каждое из положений 4, 6 и 8 от 5'-конца антисмысловой цепи; каждое из положений 3, 5 и 7 от 5'-конца антисмысловой цепи; каждое из положений 1, 3, 5 и 7 от 5'-конца антисмысловой цепи; каждое из положений 3-8 от 5'-конца антисмысловой цепи; и каждое из положений 5-8 от 5'-конца антисмысловой цепи.

[00217] RNAi молекулы, направленные на ARAF

[00218] В некоторых вариантах осуществления данное изобретение может предусматривать ряд RNAi молекул и композиций для модулирования экспрессии мРНК транскрипционного варианта 1 гена протоонкогена серин/треониновой киназы A-Raf (ARAF) Homo sapiens.

[00219] ARAF раскрыта, например, под № доступа NM_001654.4 (человек).

[00220] Примеры RNAi молекул по данному раскрытию, направленных на ARAF мРНК, представлены в таблице 12.

Таблица 12: последовательности RNAi молекул для ARAF

SEQ ID №	СМЫСЛОВАЯ ЦЕПЬ (5'-->3') SEQ ID №№ с 435 до 442	SEQ ID №	АНТИСМЫСЛОВАЯ ЦЕПЬ (5'-->3') SEQ ID №№ с 443 до 450
435	GCUCAUUGUCGAGGUCCUUGA	443	AAGGACCUCGACAAUGAGCUC
436	GCCAAACCUGUGGCUACAAGU	444	UUGUAGCCACAGGUUUGGCAA
437	GGAAGACGCGACAUGUCAACA	445	UUGACAUGUCGCGUCUUCCUG
438	GCUCAUUGUCGAGGUCCUUGA	446	AAGgAcCuCGACAAUGAGCUC
439	GCUCAUUGUCGAGGUCCUUGA	447	AAgGaCcUCGACAAUGAGCUC
440	GCUCAUUGUCGAGGUCCUUGA	448	aAgGaCcUCGACAAUGAGCUC
441	GCUCAUUGUCGAGGUCCUUGA	449	AAggaccuCGACAAUGAGCUC
442	GCUCAUUGUCGAGGUCCUUGA	450	AAGGaccuCGACAAUGAGCUC

[00221] Ключ к таблице 12: A, G, C и U в верхнем регистре относятся к рибо-A, рибо-G, рибо-C и рибо-U, соответственно. d в нижнем регистре представляет «дезокси».

[00222] В таблице 12 антисмысловая цепь любой из RNAi молекул, направленных на ARAF, может альтернативно иметь дезоксинуклеотиды во множестве положений, множество положений представляет собой одно из следующего: каждое из положений 4, 6 и 8 от 5'-конца антисмысловой цепи; каждое из положений 3, 5 и 7 от 5'-конца антисмысловой цепи; каждое из положений 1, 3, 5 и 7 от 5'-конца антисмысловой цепи; каждое из положений 3-8 от 5'-конца антисмысловой цепи; и каждое из положений 5-8 от 5'-конца антисмысловой цепи.

[00223] РНК-интерференция

[00224] В целом, миРНК может составлять приблизительно от 21 приблизительно до 23 нуклеотидов в длину и содержать область дуплекса из пар оснований приблизительно 19 нуклеотидов в длину.

[00225] В RNAi вовлечен эндонуклеазный комплекс, известный как РНК-индуцированный комплекс сайленсинга (RISC). миРНК имеет антисмысловую или направляющую цепь, которая попадает в RISC комплекс и опосредует расщепление одноцепочечной РНК мишени, имеющей последовательность, комплементарную антисмысловой цепи миРНК дуплекса. Другой цепью миРНК является сопровождающая цепь. Расщепление РНК мишени происходит в середине области, комплементарной антисмысловой цепи миРНК дуплекса. См., например, Elbashir et al., Genes & Development, 2001, том 15, стр. 188-200.

[00226] Как используют в настоящем описании, термин «смысловая цепь» относится к нуклеотидной последовательности миРНК молекулы, которая частично или полностью комплементарна по меньшей мере части соответствующей антисмысловой цепи миРНК молекулы. Смысловая цепь миРНК молекулы может содержать последовательность нуклеиновой кислоты, обладающую гомологией с последовательностью-мишенью нуклеиновой кислоты.

[00227] Как используют в настоящем описании, термин «антисмысловая цепь» относится к нуклеотидной последовательности миРНК молекулы, которая частично или полностью комплементарна по меньшей мере части последовательности-мишени нуклеиновой кислоты. Антисмысловая цепь миРНК молекулы может содержать последовательность нуклеиновой кислоты, которая комплементарна по меньшей мере части соответствующей смысловой цепи миРНК молекулы.

[00228] RNAi молекулы могут осуществлять понижающую регуляцию или нокдаун экспрессии гена через опосредование РНК-интерференции со специфичностью к последовательности. См., например, Zamore et al., Cell, 2000, том 101, стр. 25-33; Elbashir et al., Nature, 2001, том 411, стр. 494-498; Kreutzer et al., WO2000/044895; Zernicka-Goetz et al., WO2001/36646; Fire et al., WO1999/032619; Plaetinck et al., WO2000/01846; Mello et al., WO2001/029058.

[00229] Как используют в настоящем описании, термины «ингибировать», «осуществлять понижающую регуляцию» или «снижать» в отношении экспрессии гена обозначают, что происходит снижение экспрессии гена или уровня молекул мРНК, кодирующих один или более белков, или активности одного или более кодируемых белков ниже того, что наблюдают в отсутствие RNAi молекулы или миРНК по данному изобретению. Например, уровень экспрессии, уровень мРНК или уровень активности кодируемого белка можно снижать по меньшей мере на 1%, или по меньшей мере на 10%, или по меньшей мере на 20%, или по меньшей мере на 50%, или по меньшей мере на 90% или больше относительно того, что наблюдают в отсутствие RNAi молекулы или миРНК по данному изобретению.

[00230] RNAi молекулы также можно использовать для нокдауна экспрессии вирусного гена и, следовательно, влиять на репликацию вируса.

[00231] RNAi молекулы можно выполнять из отдельных полинуклеотидных цепей: смысловой цепи или сопровождающей цепи и антисмысловой цепи или направляющей цепи. Направляющая и сопровождающая цепи по меньшей мере частично комплементарны. Направляющая цепь и сопровождающая цепь могут формировать область дуплекса, имеющую приблизительно от 15 приблизительно до 49 пар оснований.

[00232] В некоторых вариантах осуществления область дуплекса миРНК может иметь 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48 или 49 пар оснований.

[00233] В определенных вариантах осуществления RNAi молекула может быть активна в RISC комплексе, причем отрезок области дуплекса активен для RISC.

[00234] В дополнительных вариантах осуществления RNAi молекула может быть активна в качестве субстрата дайсера для превращения в RNAi молекулу, которая может быть активна в RISC комплексе.

[00235] В некоторых аспектах RNAi молекула может иметь комплементарные части направляющей и сопровождающей последовательностей на противоположных концах длинной молекулы с тем, чтобы молекула могла формировать область дуплекса из комплементарных частей последовательностей, а цепи соединены на одном конце области дуплекса с помощью нуклеотидных или не нуклеотидных линкеров. Например, структура шпильки или структура из стебля и петли. Взаимодействия линкера с цепями могут представлять собой ковалентные связи или нековалентные взаимодействия.

[00236] RNAi молекула по данному раскрытию может содержать нуклеотидный, не нуклеотидный или смешанный нуклеотидный/не нуклеотидный линкер, которые соединяет смысловую область нуклеиновой кислоты с антисмысловой областью нуклеиновой кислоты. Нуклеотидный линкер может представлять собой линкер≥2 нуклеотида в длину, например, приблизительно 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 нуклеотидов в длину. Нуклеотидный линкер может представлять собой аптамер нуклеиновой кислоты. Под «аптамером» или «аптамером нуклеиновой кислоты», как используют в настоящем описании, понимают молекулу нуклеиновой кислоты, которая связывается специфично с молекулой-мишенью, где молекула нуклеиновой кислоты имеет последовательность, которая содержит последовательность, распознаваемую молекулой-мишенью в ее природном окружении. С другой стороны, аптамером может быть молекула нуклеиновой кислоты, которая связывается с молекулой-мишенью, где молекула-мишень не связывается с нуклеиновой кислотой естественным путем. Например, аптамер можно использовать для связывания с лиганд-связывающим доменом белка, тем самым предотвращая взаимодействие встречающегося в природе лиганда с белком. См., например, Gold et al., Annu Rev Biochem, 1995, том 64, стр. 763-797; Brody et al., J. Biotechnol., 2000, том 74, стр. 5-13; Hermann et al., Science, 2000, том 287, стр. 820-825.

[00237] Примеры не нуклеотидного линкера включают абазический нуклеотид, простой полиэфир, полиамин, полиамид, пептид, углевод, липид, полиуглеводород или другие полимерные соединения, например, полиэтиленгликоли, такие как те, которые имеют от 2 до 100 звеньев этиленгликоля. Некоторые примеры описаны в Seela et al., Nucleic Acids Research, 1987, том 15, стр. 3113-3129; Cload et al., J. Am. Chem. Soc., 1991, том 113, стр. 6324-6326; Jaeschke et al., Tetrahedron Lett., 1993, том 34, стр. 301; Arnold et al., WO1989/002439; Usman et al., WO1995/006731; Dudycz et al., WO1995/011910 и Ferentz et al., J. Am. Chem. Soc., 1991, том 113, стр. 4000-4002.

[00238] RNAi молекула может иметь один или более липких концов от области дуплекса. Липкие концы, которые представляют собой одноцепочечные области неспаренных оснований, могут составлять от одного до восьми нуклеотидов в длину или длиннее. Липкий конец может представлять собой 3′-концевой липкий конец, где 3′-конец цепи одноцепочечную область от одного до восьми нуклеотидов. Липкий конец может представлять собой 5′-концевой липкий конец, где 5′-конец цепи имеет одноцепочечную область от одного до восьми нуклеотидов.

[00239] Липкие концы RNAi молекулы могут иметь одну и ту же длину или могут быть различной длины.

[00240] RNAi молекула может иметь один или более нуклеотидов тупого конца, где область дуплекса не заканчивается липким концом, и основания цепей спарены до конца области дуплекса.

[00241] RNAi молекула по данному раскрытию может иметь один или более тупых концов или может иметь один или более липких концов или может иметь комбинацию тупого конца и липкого конца.

[00242] 5′-конец цепи RNAi молекулы может быть в тупом конце или может быть в липком конце. 3′-конец цепи RNAi молекулы может быть в тупом конце или может быть в липком конце.

[00243] 5′-конец цепи RNAi молекулы может быть в тупом конце, тогда как 3′-конец находится в липком конце. 3′-конец цепи RNAi молекулы может быть в тупом конце, тогда как 5′-конец находится в липком конце.

[00244] В некоторых вариантах осуществления оба конца RNAi молекула представляют собой тупые концы.

[00245] В дополнительных вариантах осуществления оба конца RNAi молекулы имеют липкий конец.

[00246] Липкие концы на 5′- и 3′-концах могут быть различной длины.

[00247] В определенных вариантах осуществления RNAi молекула может иметь тупой конец, где 5′-конец антисмысловой цепи и 3′-конец смысловой цепи не имеют какие-либо нуклеотиды липкого конца.

[00248] В дополнительных вариантах осуществления RNAi молекула может иметь тупой конец, где 3′-конец антисмысловой цепи и 5′-конец смысловой цепи не имеют какие-либо нуклеотиды липкого конца.

[00249] RNAi молекула может иметь несовпадения в образовании пар оснований в области дуплекса.

[00250] Любой нуклеотид в липком конце RNAi молекулы может представлять собой дезоксирибонуклеотид или рибонуклеотид.

[00251] Один или более дезоксирибонуклеотидов могут находиться на 5′-конце, где 3′-конец другой цепи RNAi молекулы может не иметь липкий конец или может не иметь дезоксирибонуклеотидный липкий конец.

[00252] Один или более дезоксирибонуклеотидов могут находиться на 3′-конце, где 5′-конец другой цепи RNAi молекулы может не иметь липкий конец или может не иметь дезоксирибонуклеотидный липкий конец.

[00253] В некоторых вариантах осуществления один или более или все нуклеотиды липкого конца RNAi молекулы могут представлять собой 2′-дезоксирибонуклеотиды.

[00254] RNAi молекулы субстрата дайсера

[00255] В некоторых аспектах RNAi молекула может иметь длину, подходящую в качестве субстрата дайсера, который может быть процессирован для получения RISC активной RNAi молекулы. См., например, Rossi et al., US2005/0244858.

[00256] Двухцепочечная РНК (дцРНК), которая является субстратом дайсера, может иметь такую достаточную длину, что ее процессирует дайсер для получения активной RNAi молекулы, и дополнительно может иметь одно или более из следующих свойств: (i) дцРНК субстрата дайсера может быть асимметричным, например, имеющим липкий 3′-конец на антисмысловой цепи, и (ii) дцРНК субстрата дайсера может иметь модифицированный 3′-конец на смысловой цепи для того, чтобы определять ориентацию дайсера, связывающего и процессирующуего дцРНК в активную RNAi молекулу.

[00257] В определенных вариантах осуществления самая длинная цепь в дцРНК субстрата дайсера может составлять 24-30 нуклеотидов в длину.

[00258] дцРНК субстрата дайсера может быть симметричной или асимметричной.

[00259] В некоторых вариантах осуществления дцРНК субстрата дайсера может иметь смысловую цепь 22-28 нуклеотидов и антисмысловая цепь 24-30 нуклеотидов.

[00260] В определенных вариантах осуществления дцРНК субстрата дайсера может иметь липкий конец на 3′-конце антисмысловой цепи.

[00261] В дополнительных вариантах осуществления дцРНК субстрата дайсера может иметь смысловую цепь 25 нуклеотидов в длину и антисмысловая цепь 27 нуклеотидов в длину, с липким 3′-концом из 2 оснований. Липкий конец может составлять 1, 2 или 3 нуклеотида в длину. Смысловая цепь также может иметь 5′-фосфат.

[00262] Асимметричная дцРНК субстрата дайсера может иметь два дезоксирибонуклеотида на 3′-конце смысловой цепи вместо двух рибонуклеотидов.

[00263] Смысловая цепь дцРНК субстрата дайсера может составлять приблизительно от 22 приблизительно до 30, или приблизительно от 22 приблизительно до 28; или приблизительно от 24 приблизительно до 30; или приблизительно от 25 приблизительно до 30; или приблизительно от 26 приблизительно до 30; или приблизительно от 26 и 29; или приблизительно от 27 приблизительно до 28 нуклеотидов в длину.

[00264] Смысловая цепь дцРНК субстрата дайсера может составлять 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 или 30 нуклеотидов в длину.

[00265] В определенных вариантах осуществления дцРНК субстрата дайсера может иметь смысловую и антисмысловую цепи, которые составляют по меньшей мере приблизительно 25 нуклеотидов в длину и не более приблизительно 30 нуклеотидов в длину.

[00266] В определенных вариантах осуществления дцРНК субстрата дайсера может иметь смысловую и антисмысловую цепи, которые составляют от 26 до 29 нуклеотидов в длину.

[00267] В определенных вариантах осуществления дцРНК субстрата дайсера может иметь смысловую и антисмысловую цепи, которые составляют 27 нуклеотидов в длину.

[00268] Смысловая и антисмысловая цепи дцРНК субстрата дайсера могут иметь одну и ту же длину, как при тупых концах, или различные длины, как при липких концах, или могут иметь тупой конец и липкий конец.

[00269] дцРНК субстрата дайсера может иметь область дуплекса 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26 или 27 нуклеотидов в длину.

[00270] Антисмысловая цепь дцРНК субстрата дайсера может иметь любую последовательность, которая отжигается с по меньшей мере частью последовательности смысловой цепи при биологических условиях, таких как в цитоплазме эукариотической клетки.

[00271] Субстрат дайсера со смысловой и антисмысловой цепью можно соединять с помощью третьей структуры, такой как линкерная группа или линкерный олигонуклеотид. Линкер соединяет две цепи в дцРНК, например, с тем, чтобы формировать шпильку при отжиге.

[00272] Смысловая и антисмысловая цепи субстрата дайсера в целом комплементарны, но могут иметь несовпадения в образовании пар оснований.

[00273] В некоторых вариантах осуществления дцРНК субстрата дайсера может быть асимметричной, так что смысловая цепь имеет 22-28 нуклеотидов и антисмысловая цепь имеет 24-30 нуклеотидов.

[00274] Область одной из цепей, в частности, антисмысловой цепи, дцРНК субстрата дайсера может иметь отрезок последовательности по меньшей мере в 19 нуклеотидов, где эти нуклеотиды находятся в области из 21 нуклеотида, смежной с 3′-концом антисмысловой цепи, и достаточно комплементарны нуклеотидной последовательности РНК, полученной с гена-мишени.

[00275] Антисмысловая цепь дцРНК субстрата дайсера может иметь от 1 до 9 рибонуклеотидов на 5′-конце, чтобы давать длину 22-28 нуклеотидов. Когда антисмысловая цепь имеет длину 21 нуклеотид, тогда 1-7 рибонуклеотидов, или 2-5 рибонуклеотидов, или 4 рибонуклеотида можно добавлять на 3′-конце. Добавленные рибонуклеотиды могут иметь любую последовательность.

[00276] Смысловая цепь дцРНК субстрата дайсера может иметь 24-30 нуклеотидов. Смысловая цепь может быть по существу комплементарной антисмысловой цепи для отжига с антисмысловой цепью при биологических условиях.

[00277] Способы использования RNAi молекул

[00278] Молекулы нуклеиновой кислоты и RNAi молекулы по данному изобретению можно доставлять в клетку или ткань посредством прямого внесения молекулы или с использованием молекул в комбинации с носителем или разбавителем.

[00279] Молекулы нуклеиновой кислоты и RNAi молекулы по данному изобретению можно доставлять или вводить в клетку, ткань, орган или субъекту посредством прямого внесения молекул с носителем или разбавителем или любым другим носителем для доставки, который действует для поддержки, усиления или облегчения попадания в клетку, например, вирусными последовательностями, вирусным веществом или липидными или липосомными составами.

[00280] Молекулы нуклеиновой кислоты и RNAi молекулы по данному изобретению могут образовывать комплексы с катионными липидами, могут быть упакованы в липосомы или могут быть иным образом доставлены в клетки или ткани мишени. Нуклеиновую кислоту или комплексы нуклеиновой кислоты можно локально вводить в релевантные ткани ex vivo или in vivo через прямое нанесение на кожу, трансдермальное применение или инъекцию.

[00281] Системы доставки могут включать, например, водные и неводные гели, кремы, эмульсии, микроэмульсии, липосомы, мази, водные и неводные растворы, лосьоны, аэрозоли, углеводородные основы и порошки и могут содержать эксципиенты, такие как солюбилизаторы и усилители проникновения.

[00282] Композиции и способы по данному раскрытию могут включать экспрессирующий вектор, который содержит последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну RNAi молекулу по данному изобретению, таким образом, который допускает экспрессию молекулы нуклеиновой кислоты.

[00283] Молекулы нуклеиновой кислоты и RNAi молекулы по данному изобретению можно экспрессировать с транскрипционных единиц, вставленных в ДНК или РНК векторы. Рекомбинантные векторы могут представлять собой ДНК плазмиды или вирусные векторы. Можно использовать вирусные векторы, которые обеспечивают временную экспрессию молекул нуклеиновой кислоты.

[00284] Например, вектор может содержать последовательности, кодирующие обе цепи RNAi молекулы дуплекса или одну молекулу нуклеиновой кислоты, которая является самокомплементарной и, таким образом, образует RNAi молекулу. Экспрессирующий вектор может содержать последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую две или больше молекул нуклеиновой кислоты.

[00285] Молекулу нуклеиновой кислоты можно экспрессировать в клетках с эукариотических промоторов. Специалисты в данной области понимают, что с подходящего ДНК/РНК вектора в эукариотических клетках можно экспрессировать любую нуклеиновую кислоту.

[00286] В некоторых аспектах вирусную конструкцию можно использовать для введения экспрессионной конструкции в клетку для транскрипции конструкции дцРНК, кодируемой экспрессионной конструкцией.

[00287] Липидные составы можно вводить животным посредством внутривенной, внутримышечной или интраперитонеальной инъекции или перорально или посредством ингаляции или другими способами, как известно в данной области.

[00288] Известны фармацевтически приемлемые составы для введения олигонуклеотидов, которые можно использовать.

[00289] Способы лечения заболевания

[00290] Примеры заболеваний включают злокачественную опухоль, саркомы, фибросаркому, озлокачествленную фиброзную гистиоцитому, липосаркому, рабдомиосаркому, лейомиосаркому, ангиосаркому, саркому Капоши, лимфангиосаркому, синовиальную саркому, хондросаркому, остеосаркому и карциномы.

[00291] В определенных аспектах в способах по данному изобретению можно использовать патентоспособные соединения для предотвращения или лечения злокачественных опухолей и злокачественных новообразований в любом органе или ткани, в том числе, например, опухоли головного мозга, злокачественной опухоли головы и шеи, злокачественной опухоли молочной железы, злокачественной опухоли легких, злокачественной опухоли пищевода, злокачественной опухоли желудка, злокачественной опухоли двенадцатиперстной кишки, злокачественной опухоли толстой кишки, злокачественной опухоли печени, злокачественной опухоли поджелудочной железы, злокачественной опухоли желчного пузыря, злокачественной опухоли желчных протоков, злокачественной опухоли почки, злокачественной опухоли уретры, злокачественной опухоли мочевого пузыря, злокачественной опухоли предстательной железы, злокачественной опухоли яичек, злокачественной опухоли матки, злокачественной опухоли яичника, злокачественной опухоли кожи, лейкоза, злокачественной лимфомы, эпителиальных злокачественных опухолей и неэпителиальных злокачественных опухолей.

[00292] Пример протокола нокдауна in vitro

[00293] За одни сутки до трансфекции клетки высевали в 96-луночный планшет по 2×10³ клеток на лунку с 100 мкл DMEM (HyClone № по каталогу SH30243.01), содержащей 10% FBS, и культивировали в 37°C инкубаторе, содержащем увлажненную атмосферу из 5% CO₂ в воздухе. Перед трансфекцией среду заменяли на 90 мкл Opti-MEM I Reduced Serum Medium (Life Technologies, № по каталогу 31985-070), содержащей 2% FBS. Затем 0,2 мкл липофектамина RNAiMax (Life Technologies, № по каталогу 13778-100) смешивали с 4,8 мкл Opti-MEM I в течение 5 минут при комнатной температуре. Затем 1 мкл миРНК смешивали с 4 мкл Opti-MEM I и объединяли с раствором LF2000 и аккуратно перемешивали, без завихрений. После 5 минут при комнатной температуре смесь инкубировали в течение дополнительных 10 минут при комнатной температуре для того, чтобы сделать возможным образование комплексов РНК-RNAiMax. Кроме того, в лунку добавляли 10 мкл комплексов РНК-RNAiMax и планшет аккуратно встряхивали руками. Клетки инкубировали в 37°C инкубаторе, содержащем увлажненную атмосферу 5% CO₂ в воздухе в течение 2 часов. Среду меняли на свежую Opti-MEM I Reduced Serum Medium, содержащую 2% FBS. Через 24 часа после трансфекции клетки промывали в ледяном PBS один раз. Клетки лизировали с использованием 50 мкл Cell-to-Ct Lysis Buffer (Life Technologies, № по каталогу 4391851 C) в течение 5-30 минут при комнатной температуре. Добавляли 5 мкл Stop Solution и инкубировали в течение 2 минут при комнатной температуре. Незамедлительно измеряли уровень мРНК с помощью RT-qPCR с TAQMAN. Образцы могли быть заморожены при -80°C и проанализированы в дальнейшем.

[00294] Образцовый протокол для стабильности в сыворотке

[00295] 0,2 мг/мл миРНК инкубировали с 10% сывороткой человека при 37°C. В определенные моменты времени (0, 5, 15 и 30 мин) брали аликвоту образца 200 мкл и экстрагировали ее с использованием 200 мкл растворителя для экстрагирования (хлороформ:фенол:изоамиловый спирт=24:25:1). Образец энергично перемешивали и центрифугировали на 13000 об/мин в течение 10 мин при RT, затем раствор верхнего слоя переносили и фильтровали его через 0,45 мкм фильтр. Фильтрат переносили в 300 мкл флакон для ВЭЖХ впрыска. Для LCMS подвижная фаза представляла собой MPA: 100 мМ HFIP+7 мМ TEA в H₂O, MPB: 50% метанол+50% ацетонитрил. Колонка: Waters Acquity OST 2,1×50 мм, 1,7 мкм.

[00296] ПРИМЕРЫ

[00297] Пример 1: обнаружено, что миРНК по данному изобретению, направленная на GST-π, активна для сайленсинга генов in vitro. Обнаружено, что дозозависимые активности GST-π миРНК для нокдауна генов проявляются при IC₅₀ ниже приблизительно 250 пикомолей (пМ) и равной всего лишь 1 пМ.

[00298] Трансфекцию in vitro осуществляли в клеточной линии A549 для того, чтобы определять эффект нокдауна миРНК. Дозозависимый нокдаун для GST-π мРНК наблюдали при использовании миРНК из таблицы 1, как показано в таблице 13.

Таблица 13: дозозависимый нокдаун для GST-π мРНК в клеточной линии A549

Структура миРНК	IC50 (пМ)
A9 (SEQ ID №№ 25 и 90)	24
B2 (SEQ ID №№ 52 и 117)	121
B3 (SEQ ID №№ 53 и 118)	235
B4 (SEQ ID №№ 54 и 119)	229
B13 (SEQ ID №№ 50 и 115)	17
BU2 (SEQ ID №№ 61 и 126)	31

[00299] Как показано в таблице 13, активности GST-π миРНК из таблицы 1 находились в диапазоне 17-235 пМ, который подходит для многих использований, в том числе в качестве лекарственного средства, подлежащего использованию in vivo.

[00300] Пример 2: структура GST-π миРНК по данному изобретению, имеющая дезоксинуклеотиды, расположенные в области затравки антисмысловой цепи миРНК, обеспечивала неожиданно и благоприятно увеличенную активность нокдауна генов in vitro.

[00301] Трансфекцию in vitro осуществляли в клеточной линии A549 для того, чтобы определять эффект нокдауна для GST-π миРНК на основе структуры BU2' (SEQ ID №№ 131 и 157). Дозозависимый нокдаун GST-π мРНК наблюдали при использовании GST-π миРНК на основе структуры BU2', как показано в таблице 14.

Таблица 14: дозозависимый нокдаун GST-π мРНК в клеточной линии A549 для GST-π миРНК на основе структуры BU2'

Структура GST-π миРНК	IC50 (пМ)
BU2 без дезоксинуклеотидов в области дуплекса (SEQ ID №№ 61 и 126)	31
BU2 с дезоксинуклеотидами в положениях 3, 5 и 7 области затравки антисмысловой цепи (SEQ ID №№ 139 и 165)	5
BU2 с дезоксинуклеотидами в положениях 4, 6 и 8 области затравки антисмысловой цепи (SEQ ID №№ 141 и 167)	8
BU2 с дезоксинуклеотидами в положениях 4, 6 и 8 области затравки антисмысловой цепи (SEQ ID №№ 156 и 182)	5

[00302] Как показано в таблице 14, активности GST-π миРНК на основе структуры BU2', имеющих три дезоксинуклеотида в области затравки антисмысловой цепи, к удивлению и неожиданно увеличены вплоть до 6 раз по сравнению с GST-π миРНК без дезоксинуклеотидов в области дуплекса.

[00303] Эти данные показывают, что GST-π миРНК, имеющая структуру с тремя дезоксинуклеотидами, расположенными в положениях 3, 5 и 7 или в положениях 4, 6 и 8 в области затравки антисмысловой цепи, обеспечивала к удивлению увеличенную активность нокдауна генов по сравнению с GST-π миРНК без дезоксинуклеотидов в области дуплекса.

[00304] Активности, представленные в таблице 14 для GST-π миРНК, имеющих три дезоксинуклеотида в области затравки антисмысловой цепи, находились в диапазоне от 5 до 8 пМ, который исключительно подходит для многих использований, в том числе в качестве лекарственного средства, подлежащего использованию in vivo.

[00305] Пример 3: структура GST-π миРНК по данному изобретению, имеющая дезоксинуклеотиды, расположенные в области затравки антисмысловой цепи миРНК, обеспечивала неожиданно и благоприятно увеличенную активность нокдауна генов in vitro.

[00306] Трансфекцию in vitro осуществляли в клеточной линии A549 для того, чтобы определять эффект нокдауна для GST-π миРНК на основе структуры A9' (SEQ ID №№ 183 и 195). Дозозависимый нокдаун GST-π мРНК наблюдали при использовании GST-π миРНК на основе структуры A9', как показано в таблице 15.

Таблица 15: дозозависимый нокдаун GST-π мРНК в клеточной линии A549 для GST-π миРНК на основе структуры структур* A9'

Структура GST-π миРНК	IC50 (пМ)
A9 без дезоксинуклеотидов в области дуплекса (SEQ ID №№ 25 и 90)	24
A9 с дезоксинуклеотидами в положениях 4, 6 и 8 области затравки антисмысловой цепи (SEQ ID №№ 193 и 205)	1
A9 с дезоксинуклеотидами в положениях 1, 3, 5 и 7 области затравки антисмысловой цепи (SEQ ID №№ 190 и 202)	5
A9 с дезоксинуклеотидами в положениях 3-8 области затравки антисмысловой цепи (SEQ ID №№ 187 и 199)	6
A9 с дезоксинуклеотидами в положениях 5-8 области затравки антисмысловой цепи (SEQ ID №№ 189 и 201)	7
A9 с дезоксинуклеотидами в положениях 3, 5 и 7 области затравки антисмысловой цепи (SEQ ID №№ 191 и 203)	15

[00307] Как показано в таблице 15, активности GST-π миРНК на основе структуры A9', имеющих от трех до шести дезоксинуклеотидов в области затравки антисмысловой цепи, к удивлению увеличены вплоть до 24 раз по сравнению с GST-π миРНК без дезоксинуклеотидов в области дуплекса.

[00308] Эти данные показывают, что GST-π миРНК, имеющая структуру с 3-6 дезоксинуклеотидами, расположенными в положениях 4, 6 и 8, или в положениях 1, 3, 5 и 7, или в положениях 3-8, или в положениях 5-8, или в положениях 3, 5 и 7 в области затравки антисмысловой цепи, обеспечивала неожиданно увеличенную активность нокдауна генов по сравнению с GST-π миРНК без дезоксинуклеотидов в области дуплекса.

[00309] Активность, представленная в таблице 15 для GST-π миРНК, имеющей от трех до шести дезоксинуклеотидов в области затравки антисмысловой цепи, находилась в диапазоне от 1 до 15 пМ, который исключительно подходит для многих использований, в том числе в качестве лекарственного средства, подлежащего использованию in vivo.

[00310] Пример 4: структура GST-π миРНК, имеющая дезоксинуклеотиды, расположенные в области затравки антисмысловой цепи миРНК, обеспечивала неожиданно и благоприятно увеличенную активность нокдауна генов in vitro.

[00311] Трансфекцию in vitro осуществляли в клеточной линии A549 для того, чтобы определять эффект нокдауна для GST-π миРНК на основе структуры B13' (SEQ ID №№ 207 и 222). Дозозависимый нокдаун GST-π мРНК наблюдали при использовании GST-π миРНК на основе структуры B13', как показано в таблице 16.

Таблица 16: дозозависимый нокдаун GST-π мРНК в клеточной линии A549 для GST-π миРНК на основе структуры B13'

Структура GST-π миРНК	IC50 (пМ)
B13 без дезоксинуклеотидов в области дуплекса (SEQ ID №№ 50 и 115)	17
B13 с дезоксинуклеотидами в положениях 4, 6 и 8 области затравки антисмысловой цепи (SEQ ID №№ 217 и 232)	11

[00312] Как показано в таблице 16, активность GST-π миРНК на основе структуры B13', имеющей три дезоксинуклеотида в области затравки антисмысловой цепи, неожиданно увеличена по сравнению с GST-π миРНК без дезоксинуклеотидов в области дуплекса.

[00313] Эти данные показывают, что GST-π миРНК, имеющая структуру с тремя дезоксинуклеотидами, расположенными в положениях 4, 6 и 8 в области затравки антисмысловой цепи, обеспечивала неожиданно увеличенную активность нокдауна генов по сравнению с GST-π миРНК без дезоксинуклеотидов в области дуплекса.

[00314] Активность, представленная в таблице 16 для GST-π миРНК, имеющей три дезоксинуклеотида в области затравки антисмысловой цепи, находилась в пикомолярном диапазоне и составляла 11 пМ, что исключительно подходит для многих использований, в том числе в качестве лекарственного средства, подлежащего использованию in vivo.

[00315] Пример 5: структура GST-π миРНК, имеющая дезоксинуклеотиды, расположенные в области затравки антисмысловой цепи миРНК, обеспечивала неожиданно и благоприятно увеличенную активность нокдауна генов in vitro.

[00316] Трансфекцию in vitro осуществляли в клеточной линии A549 для того, чтобы определять эффект нокдауна для GST-π миРНК на основе структуры B4' (SEQ ID №№ 261 и 273). Дозозависимый нокдаун GST-π мРНК наблюдали при использовании GST-π миРНК на основе структуры B4', как показано в таблице 17.

Таблица 17: дозозависимый нокдаун GST-π мРНК в клеточной линии A549 для GST-π миРНК на основе структуры B4'

Структура GST-π миРНК	IC50 (пМ)
B4 без дезоксинуклеотидов в области дуплекса (SEQ ID №№ 54 и 119)	229
B4 с дезоксинуклеотидами в положениях 3-8 области затравки антисмысловой цепи (SEQ ID №№ 265 и 277)	113

[00317] Как показано в таблице 17, активности GST-π миРНК на основе структуры B4', имеющей шесть дезоксинуклеотидов в области затравки антисмысловой цепи, неожиданно увеличена больше чем в 2 раза по сравнению с GST-π миРНК без дезоксинуклеотидов в области дуплекса.

[00318] Эти данные показывают, что GST-π миРНК, имеющая структуру с шестью дезоксинуклеотидами, расположенными в положениях 3-8 в области затравки антисмысловой цепи, обеспечивала к удивлению увеличенную активность нокдауна генов по сравнению с GST-π миРНК без дезоксинуклеотидов в области дуплекса.

[00319] Активность, представленная в таблице 17 для GST-π миРНК, имеющей шесть дезоксинуклеотидов в области затравки антисмысловой цепи, находилась в пикомолярном диапазоне и составляла 113 пМ, что исключительно подходит для многих использований, в том числе в качестве лекарственного средства, подлежащего использованию in vivo.

[00320] Пример 6: структура GST-π миРНК, имеющая дезоксинуклеотиды, расположенные в области затравки антисмысловой цепи миРНК, обеспечивала неожиданно и благоприятно увеличенную активность нокдауна генов in vitro.

[00321] Трансфекцию in vitro осуществляли в клеточной линии A549 для того, чтобы определять эффект нокдауна для GST-π миРНК на основе структуры B2' (SEQ ID №№ 237 и 249). Дозозависимый нокдаун GST-π мРНК наблюдали при использовании GST-π миРНК на основе структуры B2', как показано в таблице 18.

Таблица 18: дозозависимый нокдаун GST-π мРНК в клеточной линии A549 для GST-π миРНК на основе структуры B2'

Структура GST-π миРНК	IC50 (пМ)
B2 без дезоксинуклеотидов в области дуплекса (SEQ ID №№ 52 и 117)	121
B2 с дезоксинуклеотидами в положениях 5-8 области затравки антисмысловой цепи (SEQ ID №№ 243 и 255)	30
B2 с дезоксинуклеотидами в положениях 1, 3, 5 и 7 области затравки антисмысловой цепи (SEQ ID №№ 244 и 256)	50
B2 с дезоксинуклеотидами в положениях 3, 5 и 7 области затравки антисмысловой цепи (SEQ ID №№ 245 и 257)	100

[00322] Как показано в таблице 18, активности GST-π миРНК на основе структуры B2', имеющей от трех до четырех дезоксинуклеотидов в области затравки антисмысловой цепи, к удивлению увеличены вплоть до 4 раз по сравнению с GST-π миРНК без дезоксинуклеотидов в области дуплекса.

[00323] Эти данные показывают, что GST-π миРНК, имеющая структуру с 3-4 дезоксинуклеотидами, расположенными в положениях 5-8, или в положениях 1, 3, 5 и 7, или в положениях 3, 5 и 7 в области затравки антисмысловой цепи, обеспечивала неожиданно увеличенную активность нокдауна генов по сравнению с GST-π миРНК без дезоксинуклеотидов в области дуплекса.

[00324] Активности, представленные в таблице 18 для GST-π миРНК, имеющей от трех до четырех дезоксинуклеотидов в области затравки антисмысловой цепи, находились в диапазоне 30-100 пМ, который исключительно подходит для многих использований, в том числе в качестве лекарственного средства, подлежащего использованию in vivo.

[00325] Пример 7: структура GST-π миРНК, содержащая один или более 2'-дезокси-2'-фторзамещенных нуклеотидов, обеспечивала неожиданно увеличенную активность нокдауна генов in vitro.

[00326] Трансфекцию in vitro осуществляли в клеточной линии A549 для того, чтобы определять эффект нокдауна для GST-π миРНК на основе структуры BU2' (SEQ ID №№ 131 и 157). Дозозависимый нокдаун GST-π мРНК наблюдали при использовании GST-π миРНК на основе структуры BU2', как показано в таблице 19.

Таблица 19: дозозависимый нокдаун GST-π мРНК в клеточной линии A549 для GST-π миРНК на основе структуры BU2'

Структура GST-π миРНК	IC50 (пМ)
BU2 без 2'-F-дезоксинуклеотидов (SEQ ID №№ 61 и 126)	31
BU2 с семью 2'-F-дезоксинуклеотидами, один в положении 1 на 3'-конце антисмысловой цепи (SEQ ID №№ 148 и 174)	3
BU2 с четырьмя 2'-F-дезоксинуклеотидами, один в положении 1 на 3'-конце антисмысловой цепи (SEQ ID №№ 147 и 173)	11
BU2 с одним 2'-F-дезоксинуклеотидом в положении 1 на 3'-конце антисмысловой цепи (SEQ ID №№ 144 и 170)	13

[00327] Как показано в таблице 19, активности GST-π миРНК на основе структуры BU2', имеющей один или более 2'-F-дезоксинуклеотидов, к удивлению, увеличена вплоть 10 раз по сравнению с GST-π миРНК без 2'-F-дезоксинуклеотидов.

[00328] Эти данные показывают, что GST-π миРНК, имеющая структуру с одним или более 2'-F-дезоксинуклеотидами, обеспечивала неожиданно увеличенную активность нокдауна генов по сравнению с GST-π миРНК без 2'-F-дезоксинуклеотида.

[00329] Активности, представленные в таблице 19 для GST-π миРНК, имеющей один или более 2'-F-дезоксинуклеотидов, находились в диапазоне от 3 до 13 пМ, который исключительно подходит для многих использований, в том числе в качестве лекарственного средства, подлежащего использованию in vivo.

[00330] Пример 8: структура GST-π миРНК, содержащая один или более 2'-дезокси-2'-фторзамещенных нуклеотидов, обеспечивала неожиданно увеличенную активность нокдауна генов in vitro.

[00331] Трансфекцию in vitro осуществляли в клеточной линии A549 для того, чтобы определять эффект нокдауна для GST-π миРНК на основе структуры B13' (SEQ ID №№ 207 и 222). Дозозависимый нокдаун GST-π мРНК наблюдали при использовании GST-π миРНК на основе структуры B13', как показано в таблице 20.

Таблица 20: дозозависимый нокдаун GST-π мРНК в клеточной линии A549 для GST-π миРНК на основе структуры B13'

Структура GST-π миРНК	IC50 (пМ)
B13 без 2'-F-дезоксинуклеотидов (SEQ ID №№ 50 и 115)	17
B13 с тремя 2'-F-дезоксинуклеотидами, расположенными в положениях вне липких концов (SEQ ID №№ 219 и 234)	6

[00332] Как показано в таблице 20, активность GST-π миРНК на основе структуры B13', имеющей три 2'-F-дезоксинуклеотида, расположенных в положениях вне липких концов, к удивлению увеличена приблизительно в 3 раза по сравнению с GST-π миРНК без 2'-F-дезоксинуклеотидов.

[00333] Эти данные показывают, что GST-π миРНК, имеющая структуру с одним или более 2'-F-дезоксинуклеотидами, обеспечивала неожиданно увеличенную активность нокдауна генов по сравнению с GST-π миРНК без 2'-F-дезоксинуклеотида.

[00334] Активность, представленная в таблице 20 для GST-π миРНК, имеющей один или более 2'-F-дезоксинуклеотидов, находилась в пикомолярном диапазоне и составляла 6 пМ, что исключительно подходит для многих использований, в том числе в качестве лекарственного средства, подлежащего использованию in vivo.

[00335] Пример 9: модель ортотопической злокачественной опухоли легких A549 на мышах. GST-π миРНК по данному изобретению может проявлять выраженное снижение ортотопических опухолей из злокачественной опухоли легких in vivo. В этом примере, GST-π миРНК обеспечивала активность нокдауна генов in vivo при введении в липосомном составе в ортотопические опухоли из злокачественной опухоли легких у бестимусных голых мышей.

[00336] В целом, модель ортотопической опухоли может проявлять непосредственную клиническую релевантность для эффекта и активности лекарственного средства, также как и усовершенствованная предсказательная способность. В модели ортотопической опухоли, опухолевые клетки имплантируют непосредственно в орган определенного типа, из которого происходят клетки.

[00337] Противоопухолевый эффект миРНК состава против злокачественной опухоли легких человека A549 оценивали посредством сравнения конечной массы первичных опухолей, измеряемой при вскрытии, для группы лечения и группы контроля носителем.

[00338] На фиг. 1 представлено ингибирование ортотопической опухоли из злокачественной опухоли легких in vivo для GST-π миРНК на основе структуры BU2 (SEQ ID №№ 61 и 126). Модель ортотопической A549 злокачественной опухоли легких на мышах использовали при относительно низкой дозе 2 мг/кг миРНК, направленной на GST-π.

[00339] GST-π миРНК демонстрировала значительный и неожиданно благоприятный эффект ингибирования опухоли легких в этом 6-недельном исследовании. Как показано на фиг. 1, после 43 суток GST-π миРНК демонстрировала заметно благоприятный эффект ингибирования опухоли при значительном снижении конечных усредненных масс опухолей в 2,8 раза по сравнению с контролем.

[00340] Для этого исследования использовали самцов мышей NCr nu/nu в возрасте 5-6 недель. Экспериментальных животных содержали в среде с HEPA-фильтрацией в течение экспериментального периода. Перед использованием миРНК составы хранили при 4°C и нагревали до комнатной температуры за 10 минут до инъекции мыши.

[00341] Для этой ортотопической модели злокачественной опухоли легких человека A549 в сутки хирургической ортотопической имплантации (SOI) стоковые опухоли собирали из подкожной локализации животных, несущих ксенотрансплантат опухоли A549, и помещали в среду RPMI-1640. Некротизированные ткани удаляли и жизнеспособные ткани резали на куски 1,5-2 мм³. Животных анестезировали ингаляцией изофлурана и хирургическое поле стерилизовали йодом и спиртом. В левой стенке грудной клетки мыши выполняли поперечный разрез приблизительно 1,5 см в длину с использованием пары хирургических ножниц. Межреберный разрез выполняли между третьим и четвертым ребрами и оставляли легкое обнаженным. Один фрагмент опухоли A549 трансплантировали на поверхность легкого с использованием 8-0 хирургической нити (нейлон). Грудную клетку закрывали с использованием 6-0 хирургической нити (шелк). Легкое снова надували посредством интраторакального прокола с использованием 3 см³ шприца с иглой 25 G × 1 1/2 для того, чтобы откачивать воздух, остающийся в полости грудной клетки. Стенку грудной клетки закрывали 6-0 хирургической шелковой нитью. Все процедуры операции, описанной выше, осуществляли под микроскопом с 7× увеличением в ламинарном шкафу с HEPA-фильтрацией.

[00342] Через трое суток после имплантации опухоли модельных мышей-опухоленосителей случайным образом делили на группы по 10 мышей на группу. Для группы, представляющей интерес, лечение 10 мышей начинали через 3 суток после имплантации опухоли.

[00343] Для группы, представляющей интерес, состав представлял собой (ионизируемый липид:холестерин:DOPE:DOPC:DPPE-PEG-2K:DSPE-PEG-2K), липосомную композицию. Липосомы инкапсулировали GST-π миРНК.

[00344] В конечной точке исследования экспериментальных мышей умерщвляли через 42 суток после начала лечения. Первичные опухоли иссекали и взвешивали на электронных весах для последующего анализа.

[00345] Для оценки токсичности соединения, средняя масса тела мышей в группах лечения и контроля сохранялась в нормальном диапазоне в течение всего экспериментального периода. Другие симптомы токсичности у мышей не наблюдали.

[00346] Пример 10: GST-π миРНК по данному изобретению демонстрировала выраженное уменьшение ксенотрансплантатных злокачественных опухолей in vivo. GST-π миРНК обеспечивала активность нокдауна генов in vivo при введении в липосомном составе в ксенотрансплантатные злокачественные опухоли.

[00347] На фиг. 2 представлен эффект ингибирования опухоли для GST-π миРНК (SEQ ID №№ 156 и 182). Модель ксенотрансплантата злокачественной опухоли использовали при относительно низкой дозе 0,75 мг/кг миРНК, направленной на GST-π.

[00348] GST-π миРНК демонстрировала значительный и неожиданно благоприятный эффект ингибирования опухоли в пределах нескольких суток после введения. После 36 суток GST-π миРНК демонстрировала заметно благоприятный эффект ингибирования опухоли при уменьшении объема опухоли в 2 раза по сравнению с контролем.

[00349] Как показано на фиг. 3, GST-π миРНК демонстрировала значительный и неожиданно благоприятный эффект ингибирования опухоли в сутки конечной точки. В частности, происходило уменьшение массы опухоли больше чем в 2 раза.

[00350] GST-π миРНК вводили двумя инъекциями (сутки 1 и 15) липосомного состава, имеющего композицию (ионизируемый липид:холестерин:DOPE:DOPC:DPPE-PEG-2K) (25:30:20:20:5).

[00351] Для модели ксенотрансплантата злокачественной опухоли клеточную линию A549 получали из ATCC. Клетки поддерживали в культуральной среде с добавлением 10% эмбриональной телячьей сыворотки и 100 Ед/мл пенициллина и 100 мкг/мл стрептомицина. Клетки разделяли за 48 ч до инокуляции с тем, чтобы клетки находились в логарифмической фазе роста при сборе. Клетки слегка трипсинизировали с использованием трипсина-EDTA и собирали из тканевой культуры. Число жизнеспособных клеток считали и определяли в гемоцитометре в присутствии трипанового синего (считали только жизнеспособные клетки). Клетки ресуспендировали до концентрации 5×10⁷/мл в средах без сыворотки. Затем клеточную суспензию смешивали с ледяным оттаявшим BD Matrigel в соотношении 1:1 для инъекции.

[00352] Мыши - самки бестимусных голых мышей (nu/nu) из Charles River Laboratory, иммунодефицитные, возраст 6-8 недель, 7-8 мышей на группу.

[00353] Для получения модели опухоли, каждой мыши инокулировали подкожно в правый бок 0,1 мл инокулята 2,5×10⁶ клеток A549 с использованием иглы 25 G и шприца, один инокулят на мышь. Для инокуляции мышей анестезировали.

[00354] Для измерения объема опухолей и рандомизации, размер опухоли измеряли до ближайшей 0,1 мм. Объем опухолей вычисляли с использованием формулы: объем опухоли=длина × ширина²/2. Когда развившиеся опухоли достигали приблизительно 120-175 мм³, усредненный объем опухоли составлял приблизительно 150 мм³, мышей относили к различным группам контроля носителем и лечения так, что средние объемы опухоли в группах лечения находились в пределах 10% от среднего объема опухоли в группе контроля носителем, в идеале, CV% объема опухоли составлял меньше 25%. В те же сутки тестовые изделия и контрольный носитель вводили в соответствии со схемой дозирования. Мониторинг объемов опухолей осуществляли три раза в течение недели 1, два раза в течение остальных недель, в том числе в сутки завершения исследования.

[00355] Для введения дозы в сутки дозирования тестовые изделия доставали из холодильника на -80°C и оттаивали на льду. Перед переносом в шприцы, бутылку, содержащую состав, переворачивали руками несколько раз. Все тестовые изделия дозировали по 0,75 мг/кг внутривенно, q2w × 2, по 10 мл/кг.

[00356] Для массы тела, мышей взвешивали до ближайшей 0,1 г. Мониторинг массы тела осуществляли, и ее регистрировали ежедневно в течение 7 суток после дозирования первой дозы. Мониторинг массы тела осуществляли, и ее регистрировали два раза в течение недель, в течение остальных недель, в том числе в сутки завершения исследования.

[00357] При сборе опухолей, на 28 сутки после первого дозирования измеряли объем опухоли, опухоль иссекали для измерения массы и хранили для PD исследования биологических маркеров. Регистрировали массу опухоли.

[00358] Пример 11: GST-π миРНК по данному изобретению демонстрировала увеличенную гибель клеток злокачественной опухоли посредством апоптоза клеток злокачественной опухоли in vitro. GST-π миРНК обеспечивала нокдаун GST-π, который вел к повышающей регуляции PUMA, биологического маркера апоптоза, и который связан с утратой жизнеспособности клеток.

[00359] GST-π миРНК SEQ ID №№ 156 и 182, которые содержали комбинацию дезоксинуклеотидов в области затравки, 2'-F-замещенный дезоксинуклеотид и 2'-OMe-замещенные рибонуклеотиды, обеспечивали неожиданно увеличенный апоптоз клеток злокачественной опухоли.

[00360] Уровень экспрессии PUMA для GST-π миРНК SEQ ID №№ 156 и 182 измеряли, как показано на фиг. 4. На фиг. 4 экспрессия PUMA значительно снижена со 2-4 суток после трансфекции GST-π миРНК.

[00361] Эти данные показывают, что структура GST-π миРНК, содержащей комбинацию дезоксинуклеотидов в области затравки, 2'-F-замещенный дезоксинуклеотид и 2'-OMe-замещенные рибонуклеотиды, обеспечивала неожиданно увеличенный апоптоз клеток злокачественной опухоли.

[00362] Протокол для биологического маркера PUMA представлял собой следующее. За одни сутки до трансфекции клетки высевали в 96-луночный планшет по 2×10³ клеток на лунку со 100 мкл DMEM (HyClone, № по каталогу SH30243.01), содержащей 10% FBS, и культивировали в 37°C инкубаторе, содержащем увлажненную атмосферу 5% CO₂ в воздухе. В следующие сутки, перед трансфекцией, среду заменяли на 90 мкл Opti-MEM I Reduced Serum Medium (Life Technologies, № по каталогу 31985-070), содержащей 2% FBS. Затем 0,2 мкл липофектамина RNAiMAX (Life Technologies, № по каталогу 13778-100) смешивали с 4,8 мкл Opti-MEM I в течение 5 минут при комнатной температуре. 1 мкл GST-π миРНК (стоков. конц. 1 мкМ) смешивали с 4 мкл Opti-MEM I и объединяли с раствором RNAiMAX и затем аккуратно перемешивали. Смесь инкубировали в течение 10 минут при комнатной температуре для того, чтобы сделать возможным формирование комплексов РНК-RNAiMAX. 10 мкл комплексов РНК-RNAiMAX добавляли в каждую лунку, до конечной концентрации миРНК 10 нМ. Клетки инкубировали в течение 2 часов и среду меняли на свежую Opti-MEM I Reduced Serum Medium, содержащую 2% FBS. В 1, 2, 3, 4 и 6 сутки после трансфекции клетки промывали ледяным PBS один раз, и затем лизировали с использованием 50 мкл Cell-to-Ct Lysis Buffer (Life Technologies, № по каталогу 4391851 C) в течение 5-30 минут при комнатной температуре. Добавляли 5 мкл Stop Solution и инкубировали в течение 2 минут при комнатной температуре. Уровни мРНК PUMA (BBC3, № по каталогу Hs00248075, Life Technologies) измеряли посредством qPCR с использованием TAQMAN.

[00363] Пример 12: GST-π миРНК по данному изобретению может демонстрировать выраженное уменьшение ксенотрансплантатных злокачественных опухолей in vivo. GST-π миРНК может обеспечивать активность нокдауна генов in vivo при введении в липосомном составе в ксенотрансплантатные злокачественные опухоли.

[00364] На фиг. 5 представлен эффект ингибирования опухоли для GST-π миРНК (SEQ ID №№ 61 и 126). Дозозависимый нокдаун GST-π мРНК наблюдали in vivo с использованием миРНК, направленной на GST-π. Модель ксенотрансплантата злокачественной опухоли использовали при относительно низкой дозе 0,75 мг/кг миРНК, направленной на GST-π.

[00365] GST-π миРНК демонстрировала значительный и неожиданно благоприятный эффект ингибирования опухоли в пределах нескольких суток после введения. Как показано на фиг. 5, лечение с использованием GST-π миРНК вело к значительному снижению экспрессии GST-π мРНК на 4 сутки после инъекции в липидном составе. При более высокой дозе 4 мг/кг значительное снижение приблизительно на 40% обнаруживали через 24 часа после инъекции.

[00366] GST-π миРНК вводили одной инъекцией 10 мл/кг липосомного состава, имеющего композицию (ионизируемый липид:холестерин:DOPE:DOPC:DPPE-PEG-2K) (25:30:20:20:5).

[00367] Для модели ксенотрансплантата злокачественной опухоли клеточную линию A549 получали из ATCC. Клетки поддерживали в RPMI-1640 с добавлением 10% эмбриональной телячьей сыворотки и 100 Ед/мл пенициллина и 100 мкг/мл стрептомицина. Клетки разделяли за 48 ч до инокуляции с тем, чтобы клетки находились в логарифмической фазе роста при сборе. Клетки слегка трипсинизировали с использованием трипсиан-EDTA и собирали из тканевой культуры. Число жизнеспособных клеток подсчитывали и определяли в гемоцитометре в присутствии трипанового синего (считали только жизнеспособные клетки). Клетки ресуспендировали до концентрации 4×10⁷/мл в средах RPMI без сыворотки. Затем клеточную суспензию хорошо перемешивали с ледяным оттаявшим BD Matrigel в соотношении 1:1 для инъекции.

[00368] Мыши - самки бестимусных голых мышей (nu/nu) из Charles River Laboratory, иммунодефицитные, возраст 6-8 недель, 3 мыши на группу.

[00369] Для получения модели опухоли, каждой мыши инокулировали подкожно в правый бок 0,1 мл инокулята 2×10⁶ клеток A549 с использованием иглы 25 G и шприца, один инокулят на мышь. Для инокуляции мышей анестезировали.

[00370] Для измерения объема опухолей и рандомизации, размер опухоли измеряли до ближайшей 0,1 мм. Объем опухолей вычисляли с использованием формулы: объем опухоли=длина × ширина²/2. Мониторинг объема опухоли осуществляли два раза в неделю. Когда развившиеся опухоли достигали приблизительно 350-600 мм³, мышей относили к группам с различными моментами времени. В те же сутки тестовые изделия вводили в соответствии со схемой дозирования.

[00371] Для введения дозы, в сутки, когда развившиеся опухоли достигали приблизительно 350-600 мм³, тестовые изделия брали из холодильника на 4°C. Перед переносом в шприцы, бутылку, содержащую состав, переворачивали руками несколько раз для получения гомогенного раствора.

[00372] Для массы тела, мышей взвешивали до ближайшей 0,1 г. Мониторинг массы тела осуществляли, и ее регистрировали два раза в течение недель, в течение остальных недель, в том числе в сутки завершения исследования.

[00373] При сборе опухолей, животных умерщвляли посредством передозировки CO₂ и иссекали опухоли через 0, 24, 48, 72, 96 (необязательно) и 168 часов после дозирования. Сначала определяли влажную массу опухолей, и затем делили их на три части для анализа KD, распределения и биологических маркеров. Образцы быстро замораживали в жидком азоте и хранили при -80°C до готовности для обработки.

[00374] Пример 13: GST-π миРНК по данному изобретению ингибировала ксенотрансплантатные опухоли из злокачественной опухоли поджелудочной железы in vivo. GST-π миРНК обеспечивала активность нокдауна генов in vivo при введении в липосомном составе в ксенотрансплантатные опухоли из злокачественной опухоли поджелудочной железы.

[00375] В этой ксенотрансплантатной модели, каждой мыши инокулировали подкожно в правый бок 0,1 мл инокулята 2,5×10⁶ клеток PANC-1. Использовали самок бестимусных голых мышей, 6-8 недель, Charles River. Размер опухоли измеряли до ближайшей 0,1 мм. Когда развившиеся опухоли достигали приблизительно 150-250 мм³ (усредненный объем опухоли приблизительно 200 мм³), мышей относили к различным группам контроля носителем и лечения так, что средние объемы опухоли в группах лечения находились в пределах 10% от среднего объема опухоли в группе контроля носителем. В те же сутки тестовые изделия и контрольный носитель вводили в соответствии со схемой дозирования. Мониторинг объемов опухолей осуществляли три раза в течение недели 1, два раза в течение остальных недель, в том числе в сутки завершения исследования.

[00376] На фиг. 6 представлен эффект ингибирования опухоли для GST-π миРНК (SEQ ID №№ 61 и 126). Как показано на фиг. 6, эффект дозы получали при дозах в диапазоне от 0,375 мг/кг до 3 мг/кг миРНК, направленной на GST-π. GST-π миРНК демонстрировала значительный и неожиданно благоприятный эффект ингибирования опухоли в пределах нескольких суток после введения. Таким образом, GST-π миРНК демонстрировала значительный и неожиданно благоприятный эффект ингибирования опухоли в конечной точке.

[00377] GST-π миРНК вводили в липосомном составе, имеющем композицию (ионизируемый липид:холестерин:DOPE:DOPC:DPPE-PEG-2K) (25:30:20:20:5).

[00378] Пример 14: GST-π миРНК по данному изобретению демонстрировала повышенную стабильность в сыворотке.

[00379] На фиг. 7 представлена инкубация в сыворотке человека и обнаружение остающейся миРНК в различные моменты времени посредством HPLS/LCMS. Как показано на фиг. 7, время полужизни (t_1/2) в сыворотке как для смысловой цепи (фиг. 7, вверху), так и антисмысловой цепи (фиг. 7, внизу) GST-π миРНК (SEQ ID №№ 61 и 126) составляло приблизительно 100 минут.

[00380] Пример 15: GST-π миРНК по данному изобретению демонстрировала увеличенную стабильность в составе в плазме.

[00381] На фиг. 8 представлена инкубация состава в плазме и обнаружение остающейся миРНК в различные моменты времени. Как показано на фиг. 8, время полужизни (t_1/2) в плазме состава GST-π миРНК (SEQ ID №№ 61 и 126) составляло значительно больше 100 часов.

[00382] GST-π миРНК получали в липосомном составе, имеющем композицию (ионизируемый липид:холестерин:DOPE:DOPC:DPPE-PEG-2K) (25:30:20:20:5). Z-усредненный размер липосомных наночастиц составлял 40,0 нм и миРНК была инкапсулирована на 91%.

[00383] Состав инкубировали в 50% сыворотке человека в PBS в течение 40 мин, 1,5 ч, 3 ч, 24 ч и 96 ч. Количество GST-π миРНК определяли с помощью анализа на основе ELISA.

[00384] Пример 16: GST-π миРНК по данному изобретению с помощью сопровождающей цепи демонстрировала сниженные эффекты вне мишени.

[00385] Для GST-π миРНК (SEQ ID №№ 156 и 182) на фиг. 9 показано, что нокдаун для направляющей цепи in vitro был приблизительно экспоненциальным по сравнению с контролем с использованием перемешанной последовательности, который не демонстрировала эффект. IC₅₀ этой миРНК измеряли равной 5 пМ. На фиг. 10 представлен in vitro нокдаун для сопровождающей цепи той же GST-π миРНК. Как показано на фиг. 10, нокдаун сопровождающей цепи вне мишени для GST-π миРНК значительно снижен, больше чем в 100 раз.

[00386] Для GST-π миРНК (SEQ ID №№ 187 и 199), (SEQ ID №№ 189 и 201) и (SEQ ID №№ 190 и 202) на фиг. 11 показано, что нокдауны in vitro для направляющих цепей были приблизительно экспоненциальными. IC₅₀ этих миРНК измеряли равными 6, 7 и 5 пМ, соответственно. Как показано на фиг. 12, нокдауны in vitro для сопровождающих цепей этих GST-π миРНК были значительно снижены по меньшей мере в 10 раз. Все эти GST-π миРНК имели дезоксинуклеотиды в области затравки области дуплекса, без других модификаций в области дуплекса.

[00387] Для GST-π миРНК (SEQ ID №№ 217 и 232) на фиг. 13 показано, что нокдаун in vitro для направляющей цепи этой высоко активной GST-π миРНК был приблизительно экспоненциальным. IC₅₀ этой миРНК измеряли равной 11 пМ. Как показано на фиг. 14, нокдаун in vitro для сопровождающей цепи этой GST-π миРНК был значительно снижен больше чем в 100 раз. Эта GST-π миРНК имела дезоксинуклеотиды в области затравки области дуплекса, без других модификаций в области дуплекса.

[00388] Эффекты вне мишени определяли с использованием плазмиды репортера экспрессии psiCHECK-2, которая кодирует ген люциферазы Renilla. (Dual-Luciferase Reporter Assay System, Promega, № по каталогу: E1960). Концентрация миРНК обычно составляла 50 пМ. Протокол: сутки 1, высевали клетки HeLa по 5-7,5×10³/100 мкл/лунка. Сутки 2, совместная трансфекция при конфлюентность клеток приблизительно 80%. Сутки 3, клетки собирали для измерения активности люциферазы. Активность люциферазы измеряли с использованием Promega's Luciferase Assay System (E4550), в соответствии с протоколом производителя.

[00389] Вектор psiCHECK-2 позволял осуществлять мониторинг изменений экспрессии гена-мишени, слитого с репортерным геном люциферазы Renilla. миРНК конструкции клонировали в сайт множественного клонирования и вектор совместно трансфицировали с миРНК в клетки HeLa. Если специфичная миРНК связывается с мРНК-мишенью и инициирует процесс RNAi, происходит расщепление и впоследствии разрушение слитой конструкции из люциферазы Renilla и мРНК, что снижает сигнал люциферазы Renilla.

[00390] Например, вставки плазмид для миРНК со структурой BU2' представляли собой следующее:

[00391] Вставка плазмиды psiCHECK-2 (F):

SEQ ID №: 451

ctcgag gggcaacTGAAGCCTTTTGAGACCCTGcTgTcccag gcggccgc

[00392] Вставка плазмиды psiCHECK-2 (R):

SEQ ID №: 452

ctcgag cTgggacagCAGGGTCTCAAAAGGCTTCagTTgccc gcggccgc

[00393] Пример 17: GST-π миРНК по данному изобретению демонстрировали благоприятно сниженные мкРНК-подобные эффекты вне мишени, которые представляют собой зависящий от затравки непредусмотренный сайленсинг генов вне мишени.

[00394] Для GST-π миРНК (SEQ ID №№ 156 и 182), (SEQ ID №№ 187 и 199), (SEQ ID №№ 189 и 201), (SEQ ID №№ 190 и 202) и (SEQ ID №№ 217 и 232) обнаружено, что активность имитирующей мкРНК вне мишени по существу несущественна. Зависящий от затравки непредусмотренный сайленсинг генов вне мишени для этих GST-π миРНК был по меньшей мере в 10-100 раз меньше, чем активность направляющей цепи на мишени.

[00395] Для тестирования мкРНК-зависимых эффектов вне мишени, от одного до четырех повторов подходящих по затравке последовательностей-мишеней, комплементарных всей области, содержащей затравку, положения 1-8 от 5'-конца антисмысловой цепи, но не остальную область вне затравки, положения 9-21, вводили в область, соответствующую 3'UTR мРНК люциферазы, чтобы определять эффективность зависящих от затравки непредусмотренных эффектов вне мишени. Вставки плазмид использовали для имитации мкРНК с полным совпадением в области затравки и несовпадениями (петлями) вне области затравки.

[00396] Например, вставки плазмид для миРНК со структурой BU2' представляли собой следующее:

[00397] Вставка плазмиды psiCHECK-2 (Fmi1):

SEQ ID №: 453

ctcgag gggcaacTCTACGCAAAACAGACCCTGcTgTcccag gcggccgc

[00398] Вставка плазмиды psiCHECK-2 (Fmi2):

SEQ ID №: 454

ctcgag gggcaacTCTACGCAAAACAGACCCTGcT CTACGCAAAACAGACCCTGcT gTcccag gcggccgc

[00399] Вставка плазмиды psiCHECK-2 (Fmi3):

SEQ ID №: 455

ctcgag gggcaacTCTACGCAAAACAGACCCTGcT CTACGCAAAACAGACCCTGcT CTACGCAAAACAGACCCTGcT gTcccag gcggccgc

[00400] Вставка плазмиды psiCHECK-2 (Fmi4):

SEQ ID №: 456

ctcgag gggcaacTCTACGCAAAACAGACCCTGcT CTACGCAAAACAGACCCTGcT CTACGCAAAACAGACCCTGcT CTACGCAAAACAGACCCTGcT gTcccag gcggccgc

[00401] Варианты осуществления, описанные в настоящем описании, не являются ограничивающими, и специалист в данной области без труда примет во внимание, что конкретные комбинации модификаций, описанных в настоящем описании, можно тестировать без излишних экспериментов в направлении идентификации молекулы нуклеиновой кислоты с усовершенствованной RNAi активностью.

[00402] Пример 18: обнаружено, что миРНК по данному изобретению, направленные на p21, активны для сайленсинга генов in vitro. Обнаружено, что дозозависимые активности p21 миРНК для нокдауна гена демонстрируют IC₅₀ ниже приблизительно 3 пикомолей (пМ) и всего лишь 1 пМ.

[00403] Трансфекцию in vitro осуществляли в клеточной линии A549, чтобы определять миРНК эффект нокдауна. Дозозависимый нокдаун для p21 мРНК наблюдали при использовании миРНК из таблицы 7, как показано в таблице 21.

Таблица 21: дозозависимый нокдаун p21 мРНК в клеточной линии A549

Структура p21 миРНК	IC50 (пМ)
1735 (SEQ ID №№ 296 и 324)	0,3
2042 (SEQ ID №№ 312 и 340)	10

[00404] Как показано в таблице 21, активности p21 миРНК из таблицы 7 находились в диапазоне 0,3-10 пМ, который подходит для многих использований, в том числе в качестве лекарственного средства, подлежащего использованию in vivo.

[00405] Пример 19: структура p21 миРНК по данному изобретению, имеющей дезоксинуклеотиды, расположенные в области затравки антисмысловой цепи миРНК, обеспечивала неожиданно и благоприятно увеличенную активность нокдауна генов.

[00406] Трансфекцию in vitro осуществляли в клеточной линии A549 для того, чтобы определять эффект нокдауна для p21 миРНК на основе структуры 1735' (SEQ ID №№ 341 и 355). Дозозависимый нокдаун p21 мРНК наблюдали при использовании p21 миРНК на основе структуры 1735', как показано в таблице 22.

Таблица 22: дозозависимый нокдаун p21 мРНК в клеточной линии A549 для p21 миРНК на основе структуры 1735'

Структура P21 миРНК	IC50 (пМ)
1735 без дезоксинуклеотидов в области дуплекса (SEQ ID №№ 296 и 324)	0,3
1735 с дезоксинуклеотидами в положениях 4, 6 и 8 области затравки антисмысловой цепи и дополнительными 2'-Ome-нуклеотидами (SEQ ID №№ 342 и 356)	0,05
1735 с дезоксинуклеотидами в положениях 4, 6 и 8 области затравки антисмысловой цепи и дополнительными 2'-Ome-нуклеотидами (SEQ ID №№ 343 и 357)	0,001
1735 с дезоксинуклеотидами в положениях 4, 6 и 8 области затравки антисмысловой цепи и дополнительными 2'-Ome-нуклеотидами (SEQ ID №№ 344 и 358)	0,1

[00407] Как показано в таблице 22, активности p21 миРНК на основе структуры 1735', имеющей три дезоксинуклеотида в области затравки антисмысловой цепи, к удивлению и неожиданно увеличены вплоть до 300 раз по сравнению с p21 миРНК без дезоксинуклеотидов в области дуплекса.

[00408] Эти данные показывают, что p21 миРНК, имеющая структуру с дезоксинуклеотидами в области затравки антисмысловой цепи, обеспечивала к удивлению увеличенную активность нокдауна генов по сравнению с p21 миРНК без дезоксинуклеотидов в области дуплекса.

[00409] Активности, представленные в таблице 22, для p21 миРНК, имеющей три дезоксинуклеотида в области затравки антисмысловой цепи, находились в диапазоне от 0,001 до 0,1 пМ, который исключительно подходит для многих использований, в том числе в качестве лекарственного средства, подлежащего использованию in vivo.

[00410] Пример 20: p21 миРНК по данному изобретению может демонстрировать выраженное уменьшение ксенотрансплантатных злокачественных опухолей in vivo. p21 миРНК может обеспечивать активность нокдауна генов in vivo при введении в липосомном составе в ксенотрансплантатные злокачественные опухоли.

[00411] На фиг. 15 представлен эффект ингибирования опухоли для p21 миРНК (SEQ ID №№ 341 и 355, где N=U). Модель ксенотрансплантата злокачественной опухоли использовали при относительно низкой дозе 0,75 мг/кг миРНК, направленной на p21.

[00412] p21 миРНК демонстрировала значительный и неожиданно благоприятный эффект ингибирования опухоли в пределах нескольких суток после введения. После 30 суток p21 миРНК демонстрировала заметно благоприятный эффект ингибирования опухоли при уменьшении объема опухоли больше чем в 2 раза по сравнению с контролем.

[00413] p21 миРНК вводили в дозе 0,75 мг/кг четырьмя инъекциями 10 мл/кг (сутки 1, 8, 15 и 22) липосомного состава, имеющего композицию (ионизируемый липид:холестерин:DOPE:DOPC:DPPE-PEG-2K) (25:30:20:20:5).

[00414] Для модели ксенотрансплантата злокачественной опухоли клеточную линию A549 получали из ATCC. Клетки поддерживали в культуральной среде с добавлением 10% эмбриональной телячьей сыворотки и 100 Ед/мл пенициллина и 100 мкг/мл стрептомицина. Клетки разделяли за 48 ч до инокуляции с тем, чтобы клетки находились в логарифмической фазе роста при сборе. Клетки слегка трипсинизировали с использованием трипсиан-EDTA и собирали из тканевой культуры. Число жизнеспособных клеток подсчитывали и определяли в гемоцитометре в присутствии трипанового синего (считали только жизнеспособные клетки). Клетки ресуспендировали до концентрации 5×10⁷/мл в средах без сыворотки. Затем клеточную суспензию тщательно перемешивали с ледяным оттаявшим BD Matrigel в соотношении 1:1 для инъекции.

[00415] Мыши - самки бестимусных голых мышей (nu/nu) из Charles River Laboratory, иммунодефицитные, возраст 6-8 недель, 7-8 мышей на группу.

[00416] Для получения модели опухоли, каждой мыши инокулировали подкожно в правый бок 0,1 мл инокулята 2,5×10⁶ клеток A549 с использованием иглы 25 G и шприца, один инокулят на мышь. Для инокуляции мышей анестезировали.

[00417] Для измерения объема опухолей и рандомизации, размер опухоли измеряли до ближайшей 0,1 мм. Объем опухолей вычисляли с использованием формулы: объем опухоли=длина × ширина²/2. Когда развившиеся опухоли достигали приблизительно 120-175 мм³, усредненный объем опухоли составлял приблизительно 150 мм³, мышей относили к различным группам контроля носителем и лечения так, что средние объемы опухоли в группах лечения находились в пределах 10% от среднего объема опухоли в группе контроля носителем, в идеале, CV% объема опухоли составлял меньше 25%. В те же сутки тестовые изделия и контрольный носитель вводили в соответствии со схемой дозирования. Мониторинг объемов опухолей осуществляли три раза в течение недели 1, два раза в течение остальных недель, в том числе в сутки завершения исследования.

[00418] Для введения дозы в сутки дозирования тестовые изделия доставали из холодильника на -80°C и оттаивали на льду. Перед переносом в шприцы, бутылку, содержащую состав, переворачивали руками несколько раз. Все тестовые изделия дозировали по 0,75 мг/кг внутривенно.

[00419] Для массы тела, мышей взвешивали до ближайшей 0,1 г. Мониторинг массы тела осуществляли, и ее регистрировали ежедневно в течение 7 суток после дозирования первой дозы. Мониторинг массы тела осуществляли, и ее регистрировали два раза в течение недель, в течение остальных недель, в том числе в сутки завершения исследования.

[00420] При сборе опухолей, на 28 сутки после первого дозирования измеряли объем опухоли, опухоль иссекали для измерения массы и хранили для PD исследования биологических маркеров. Регистрировали массу опухоли.

[00421] Варианты осуществления, описанные в настоящем описании, не являются ограничивающими, и специалист в данной области без труда примет во внимание, что конкретные комбинации модификаций, описанных в настоящем описании, можно тестировать без излишних экспериментов в направлении идентификации молекулы нуклеиновой кислоты с усовершенствованной RNAi активностью.

[00422] Пример 21: получали миРНК по данному изобретению, направленные MCL1, и обнаружено, что они активны для сайленсинга генов in vitro. Обнаружено, что дозозависимые активности MCL1 миРНК для нокдауна генов демонстрируют IC₅₀ ниже приблизительно 100 пикомолей (пМ).

[00423] Трансфекцию in vitro осуществляли в клеточной линии A549 для того, чтобы определять миРНК эффект нокдауна. Дозозависимый нокдаун для MCL1 мРНК наблюдали с использованием миРНК из таблицы 11.

[00424] Пример 22: получали миРНК по данному изобретению, направленные ARAF, и обнаружено, что они активны для сайленсинга генов in vitro. Обнаружено, что дозозависимые активности ARAF миРНК для нокдауна генов демонстрируют IC₅₀ ниже приблизительно 100 пикомолей (пМ).

[00425] Трансфекцию in vitro осуществляли в клеточной линии A549 для того, чтобы определять миРНК эффект нокдауна. Дозозависимый нокдаун для ARAF мРНК наблюдали с использованием миРНК из таблицы 12.

[00426] Все публикации, патенты и литературные источники, конкретно указанные в настоящем описании, включены в данное описание посредством ссылки в полном объеме для всех целей.

[00427] Понятно, что данное изобретение не ограничено конкретными описанными способами, протоколами, материалами и реактивами, поскольку они могут варьировать. Также следует понимать, что терминология, используемая в настоящем описании, служит лишь цели описания конкретных вариантов осуществления и не предназначена для того, чтобы ограничивать объем настоящего изобретения. Специалист в данной области без труда поймет, что различные замещения и модификации можно выполнять в описании, раскрытом в настоящем документе, не отступая от сущности и объема описания, и что эти варианты осуществления входят в объем этого описания и приложенной формулы изобретения.

[00428] Следует отметить, что как используют в настоящем описании и в приложенной формуле изобретения, формы единственного числа включают множественное число до тех пор, пока контекст явно не диктует иное. Также формы единственного числа и термины «один или более» и «по меньшей мере один» можно использовать взаимозаменяемо в настоящем описании. Также следует отметить, что термины «содержит», «содержащий», «включающий» и «имеющий» можно использовать взаимозаменяемо, и они подлежат открытому прочтению и без ограничения.

[00429] Перечисление диапазонов значений в настоящем описании лишь предназначено в качестве способа сокращения для индивидуального указания каждого отдельного значения, попадающего в диапазон, если не указано иное в настоящем описании, и каждое отдельное значение включено в описание, как если бы оно было индивидуально указано в настоящем описании. Для групп Маркуша, специалистам в данной области понятно, что это описание включает индивидуальные элементы, а также подгруппы элементов из группы Маркуша.

[00430] Без дополнительной проработки полагают, что специалист в данной области может, на основе вышеприведенного описания, использовать настоящее изобретение в его самой полной мере. Следовательно, следующие конкретные варианты осуществления следует толковать лишь в качестве иллюстративных и не ограничивающих остальное раскрытие каким-либо образом вообще.

[00431] Все признаки, раскрытые в этом описании можно комбинировать в любой комбинации. Каждый признак, раскрытый в этом описании можно заменить на альтернативный признак, служащий той же, эквивалентной или схожей цели.

--->

СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> NITTO DENKO CORPORATION

<120> СТРУКТУРЫ МИРНК С ВЫСОКОЙ АКТИВНОСТЬЮ И СНИЖЕННЫМ ВОЗДЕЙСТВИЕМ

ВНЕ МИШЕНИ

<130> ND6122770WO

<140>

<141>

<150> 62/266,675

<151> 2015-12-13

<160> 456

<170> PatentIn версии 3.5

<210> 1

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 1

ucccagaacc agggaggcat t 21

<210> 2

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 2

cuuuugagac ccugcuguct t 21

<210> 3

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 3

cugucccaga accagggagt t 21

<210> 4

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 4

ugucccagaa ccagggaggt t 21

<210> 5

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 5

aagccuuuug agacccugct t 21

<210> 6

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 6

uugagacccu gcugucccat t 21

<210> 7

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 7

uuuugagacc cugcugucct t 21

<210> 8

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 8

gagacccugc ugucccagat t 21

<210> 9

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 9

gcuggaagga ggagguggut t 21

<210> 10

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 10

cuggaaggag gagguggugt t 21

<210> 11

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 11

ucagggccag agcuggaagt t 21

<210> 12

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 12

ugagacccug cugucccagt t 21

<210> 13

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 13

agggccagag cuggaaggat t 21

<210> 14

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 14

agcuggaagg aggagguggt t 21

<210> 15

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 15

agacccugcu gucccagaat t 21

<210> 16

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 16

gagcuggaag gaggaggugt t 21

<210> 17

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 17

ugcuguccca gaaccagggt t 21

<210> 18

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 18

cccagaacca gggaggcaat t 21

<210> 19

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 19

ccagaaccag ggaggcaagt t 21

<210> 20

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 20

uuugagaccc ugcuguccct t 21

<210> 21

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 21

gacccugcug ucccagaact t 21

<210> 22

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 22

gaucagggcc agagcuggat t 21

<210> 23

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 23

agccuuuuga gacccugcut t 21

<210> 24

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 24

gccuuuugag acccugcugt t 21

<210> 25

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 25

ccuuuugaga cccugcugut t 21

<210> 26

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 26

cgccuuuuga gacccugcat t 21

<210> 27

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 27

ccuacaccgu ggucuauuut t 21

<210> 28

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 28

ugugggagac cagaucucct t 21

<210> 29

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 29

gcgggaggca gaguuugcct t 21

<210> 30

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 30

ccuuucucca ggaccaauat t 21

<210> 31

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 31

acccugcugu cccagaacct t 21

<210> 32

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 32

ggucuauuuc ccaguucgat t 21

<210> 33

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 33

cccuggugga cauggugaat t 21

<210> 34

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 34

acaucucccu caucuacact t 21

<210> 35

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 35

gcaaggauga cuaugugaat t 21

<210> 36

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 36

ccuucgcuga cuacaaccut t 21

<210> 37

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 37

cuggcagauc agggccagat t 21

<210> 38

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 38

gacggagacc ucacccugut t 21

<210> 39

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 39

cgggcaagga ugacuaugut t 21

<210> 40

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 40

cuuuugagac ccugcuguat t 21

<210> 41

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 41

gagcuggaag gaggagguat t 21

<210> 42

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 42

acccugcugu cccagaacat t 21

<210> 43

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 43

ugcuguccca gaaccaggat t 21

<210> 44

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 44

agccuuuuga gacccugcat t 21

<210> 45

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 45

ccuuuugaga cccugcugat t 21

<210> 46

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 46

ugaagccuuu ugagacccut t 21

<210> 47

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 47

acugaagccu uuugagacct t 21

<210> 48

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 48

aggaugacua ugugaaggct t 21

<210> 49

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 49

ggaugacuau gugaaggcat t 21

<210> 50

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 50

gaugacuaug ugaaggcact t 21

<210> 51

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 51

cucccucauc uacaccaact t 21

<210> 52

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 52

gaagccuuuu gagacccugt t 21

<210> 53

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 53

ucucccucau cuacaccaat t 21

<210> 54

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 54

ccucaucuac accaacuaut t 21

<210> 55

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 55

cccucaucua caccaacuat t 21

<210> 56

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 56

caacugaagc cuuuugagat t 21

<210> 57

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 57

aacugaagcc uuuugagact t 21

<210> 58

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 58

cugaagccuu uugagaccct t 21

<210> 59

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 59

ucccucaucu acaccaacut t 21

<210> 60

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 60

gcucccucau cuacaccaat t 21

<210> 61

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 61

gaagccuuuu gagacccuat t 21

<210> 62

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 62

acugaagccu uuugagacat t 21

<210> 63

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 63

cucccucauc uacaccaaat t 21

<210> 64

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 64

ccucaucuac accaacuaat t 21

<210> 65

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 65

accaauaaaa uuucuaagat t 21

<210> 66

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 66

ugccucccug guucugggac a 21

<210> 67

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 67

gacagcaggg ucucaaaagg c 21

<210> 68

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 68

cucccugguu cugggacagc a 21

<210> 69

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 69

ccucccuggu ucugggacag c 21

<210> 70

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 70

gcagggucuc aaaaggcuuc a 21

<210> 71

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 71

ugggacagca gggucucaaa a 21

<210> 72

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 72

ggacagcagg gucucaaaag g 21

<210> 73

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 73

ucugggacag cagggucuca a 21

<210> 74

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 74

accaccuccu ccuuccagct c 21

<210> 75

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 75

caccaccucc uccuuccagc t 21

<210> 76

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 76

cuuccagcuc uggcccugat c 21

<210> 77

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 77

cugggacagc agggucucaa a 21

<210> 78

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 78

uccuuccagc ucuggcccug a 21

<210> 79

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 79

ccaccuccuc cuuccagcuc t 21

<210> 80

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 80

uucugggaca gcagggucuc a 21

<210> 81

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 81

caccuccucc uuccagcuct g 21

<210> 82

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 82

cccugguucu gggacagcag g 21

<210> 83

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 83

uugccucccu gguucuggga c 21

<210> 84

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 84

cuugccuccc ugguucuggg a 21

<210> 85

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 85

gggacagcag ggucucaaaa g 21

<210> 86

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 86

guucugggac agcaggguct c 21

<210> 87

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 87

uccagcucug gcccugauct g 21

<210> 88

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 88

agcagggucu caaaaggcut c 21

<210> 89

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 89

cagcaggguc ucaaaaggct t 21

<210> 90

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 90

acagcagggu cucaaaaggc t 21

<210> 91

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 91

ugcagggucu caaaaggcgt c 21

<210> 92

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 92

aaauagacca cgguguaggg c 21

<210> 93

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 93

ggagaucugg ucucccacaa t 21

<210> 94

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 94

ggcaaacucu gccucccgct c 21

<210> 95

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 95

uauugguccu ggagaaagga a 21

<210> 96

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 96

gguucuggga cagcaggguc t 21

<210> 97

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 97

ucgaacuggg aaauagacca c 21

<210> 98

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 98

uucaccaugu ccaccagggc t 21

<210> 99

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 99

guguagauga gggagaugua t 21

<210> 100

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 100

uucacauagu cauccuugcc c 21

<210> 101

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 101

agguuguagu cagcgaagga g 21

<210> 102

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 102

ucuggcccug aucugccagc a 21

<210> 103

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 103

acagggugag gucuccgucc t 21

<210> 104

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 104

acauagucau ccuugcccgc c 21

<210> 105

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 105

uacagcaggg ucucaaaagg c 21

<210> 106

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 106

uaccuccucc uuccagcuct g 21

<210> 107

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 107

uguucuggga cagcaggguc t 21

<210> 108

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 108

uccugguucu gggacagcag g 21

<210> 109

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 109

ugcagggucu caaaaggcut c 21

<210> 110

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 110

ucagcagggu cucaaaaggc t 21

<210> 111

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 111

agggucucaa aaggcuucag t 21

<210> 112

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 112

ggucucaaaa ggcuucagut g 21

<210> 113

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 113

gccuucacau agucauccut g 21

<210> 114

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 114

ugccuucaca uagucaucct t 21

<210> 115

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 115

gugccuucac auagucaucc t 21

<210> 116

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 116

guugguguag augagggaga t 21

<210> 117

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 117

cagggucuca aaaggcuuca g 21

<210> 118

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 118

uugguguaga ugagggagat g 21

<210> 119

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 119

auaguuggug uagaugaggg a 21

<210> 120

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 120

uaguuggugu agaugaggga g 21

<210> 121

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 121

ucucaaaagg cuucaguugc c 21

<210> 122

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 122

gucucaaaag gcuucaguug c 21

<210> 123

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 123

gggucucaaa aggcuucagt t 21

<210> 124

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 124

aguuggugua gaugagggag a 21

<210> 125

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 125

uugguguaga ugagggagct g 21

<210> 126

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 126

uagggucuca aaaggcuuca g 21

<210> 127

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 127

ugucucaaaa ggcuucagut g 21

<210> 128

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 128

uuugguguag augagggaga t 21

<210> 129

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 129

uuaguuggug uagaugaggg a 21

<210> 130

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 130

ucuuagaaau uuuauugguc c 21

<210> 131

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> a, c, t, g, u, неизвестное или другое

<400> 131

gaagccuuuu gagacccuan n 21

<210> 132

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 132

gaagccuuuu gagacccuau u 21

<210> 133

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 133

gaagccuuuu gagacccuau u 21

<210> 134

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 134

gaagccuuuu gagacccuau u 21

<210> 135

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 135

gaagccuuuu gagacccuau u 21

<210> 136

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 136

gaagccuuuu gagacccuau u 21

<210> 137

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 137

gaagccuuuu gagacccuau u 21

<210> 138

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 138

gaagccuuuu gagacccuau u 21

<210> 139

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 139

gaagccuuuu gagacccuau u 21

<210> 140

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 140

gaagccuuuu gagacccuau u 21

<210> 141

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 141

gaagccuuuu gagacccuau u 21

<210> 142

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 142

gaagccuuuu gagacccuat t 21

<210> 143

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 143

gaagccuuuu gagacccuau u 21

<210> 144

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 144

gaagccuuuu gagacccuau u 21

<210> 145

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 145

gaagccuuuu gagacccuau u 21

<210> 146

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 146

gaagccuuuu gagacccuau u 21

<210> 147

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (19)..(19)

<223> 2’-дезокси-2’-фторнуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 147

gaagccuuuu gagacccuau u 21

<210> 148

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (14)..(14)

<223> 2’-дезокси-2’-фторнуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (19)..(19)

<223> 2’-дезокси-2’-фторнуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 148

gaagccuuuu gagacccuau u 21

<210> 149

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (19)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 149

gaagccuuuu gagacccuau u 21

<210> 150

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (19)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 150

gaagccuuuu gagacccuau u 21

<210> 151

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (1)..(3)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 151

gaagccuuuu gagacccuau u 21

<210> 152

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (1)..(3)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (8)..(8)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (10)..(10)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (18)..(18)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 152

gaagccuuuu gagacccuau u 21

<210> 153

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (1)..(3)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 153

gaagccuuuu gagacccuau u 21

<210> 154

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (1)..(3)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (8)..(8)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (10)..(10)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (18)..(18)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 154

gaagccuuuu gagacccuau u 21

<210> 155

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (1)..(3)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (8)..(8)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (10)..(10)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (18)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 155

gaagccuuuu gagacccuau u 21

<210> 156

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (1)..(3)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (8)..(8)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (10)..(10)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (18)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 156

gaagccuuuu gagacccuau u 21

<210> 157

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> a, c, t, g, u, неизвестное или другое

<400> 157

uagggucuca aaaggcuucn n 21

<210> 158

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 158

uagggucuca aaaggcuucu u 21

<210> 159

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (1)..(1)

<223> 2’-дезоксинуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (6)..(6)

<223> 2’-дезоксинуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (8)..(8)

<223> 2’-дезоксинуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 159

uagggucuca aaaggcuucu u 21

<210> 160

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (6)..(6)

<223> 2’-дезоксинуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (8)..(8)

<223> 2’-дезоксинуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 160

uagggucuca aaaggcuucu u 21

<210> 161

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (6)..(6)

<223> 2’-дезоксинуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (8)..(8)

<223> 2’-дезоксинуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 161

uagggucuca aaaggcuucu u 21

<210> 162

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (6)..(6)

<223> 2’-дезоксинуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (8)..(8)

<223> 2’-дезоксинуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 162

uagggucuca aaaggcuucu u 21

<210> 163

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (6)..(6)

<223> 2’-дезоксинуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (8)..(8)

<223> 2’-дезоксинуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 163

uagggucuca aaaggcuucu u 21

<210> 164

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (1)..(1)

<223> 2’-дезоксинуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 164

uagggucuca aaaggcuucu u 21

<210> 165

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 165

uagggucuca aaaggcuucu u 21

<210> 166

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (6)..(6)

<223> 2’-дезоксинуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (8)..(8)

<223> 2’-дезоксинуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 166

uagggucuca aaaggcuucu u 21

<210> 167

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (6)..(6)

<223> 2’-дезоксинуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (8)..(8)

<223> 2’-дезоксинуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 167

uagggucuca aaaggcuucu u 21

<210> 168

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (6)..(6)

<223> 2’-дезоксинуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (8)..(8)

<223> 2’-дезоксинуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (14)..(14)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (16)..(16)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (18)..(18)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 168

uagggucuca aaaggcuucu u 21

<210> 169

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (1)..(1)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 169

uagggucuca aaaggcuucu u 21

<210> 170

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (1)..(1)

<223> 2’-дезокси-2’-фторнуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 170

uagggucuca aaaggcuucu u 21

<210> 171

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (1)..(1)

<223> 2’-дезоксинуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 171

uagggucuca aaaggcuucu u 21

<210> 172

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (1)..(2)

<223> Фосфотиоатная связь

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 172

uagggucuca aaaggcuucu u 21

<210> 173

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (1)..(1)

<223> 2’-дезокси-2’-фторнуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (9)..(9)

<223> 2’-дезокси-2’-фторнуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (17)..(17)

<223> 2’-дезокси-2’-фторнуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 173

uagggucuca aaaggcuucu u 21

<210> 174

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (1)..(1)

<223> 2’-дезокси-2’-фторнуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (9)..(9)

<223> 2’-дезокси-2’-фторнуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (11)..(12)

<223> 2’-дезокси-2’-фторнуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (17)..(17)

<223> 2’-дезокси-2’-фторнуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 174

uagggucuca aaaggcuucu u 21

<210> 175

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (1)..(1)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (9)..(9)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (17)..(17)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 175

uagggucuca aaaggcuucu u 21

<210> 176

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (1)..(1)

<223> 2’-дезокси-2’-фторнуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (9)..(9)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (17)..(17)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 176

uagggucuca aaaggcuucu u 21

<210> 177

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 177

uagggucuca aaaggcuucu u 21

<210> 178

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (6)..(6)

<223> 2’-дезоксинуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (8)..(8)

<223> 2’-дезоксинуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 178

uagggucuca aaaggcuucu u 21

<210> 179

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (1)..(1)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (6)..(6)

<223> 2’-дезоксинуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (8)..(8)

<223> 2’-дезоксинуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (9)..(9)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (11)..(12)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (18)..(18)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 179

uagggucuca aaaggcuucu u 21

<210> 180

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (1)..(1)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (6)..(6)

<223> 2’-дезоксинуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (8)..(8)

<223> 2’-дезоксинуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (9)..(9)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (11)..(12)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (18)..(18)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 180

uagggucuca aaaggcuucu u 21

<210> 181

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (1)..(1)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (6)..(6)

<223> 2’-дезоксинуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (8)..(8)

<223> 2’-дезоксинуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (9)..(9)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (11)..(12)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (17)..(18)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 181

uagggucuca aaaggcuucu u 21

<210> 182

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (1)..(1)

<223> 2’-дезокси-2’-фторнуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (6)..(6)

<223> 2’-дезоксинуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (8)..(8)

<223> 2’-дезоксинуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (9)..(9)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (11)..(12)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (17)..(18)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 182

uagggucuca aaaggcuucu u 21

<210> 183

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> a, c, t, g, u, неизвестное или другое

<400> 183

ccuuuugaga cccugcugun n 21

<210> 184

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 184

ccucaucuac accaacuauu u 21

<210> 185

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 185

ccucaucuac accaacuauu u 21

<210> 186

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 186

ccucaucuac accaacuauu u 21

<210> 187

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 187

ccucaucuac accaacuauu u 21

<210> 188

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 188

ccucaucuac accaacuauu u 21

<210> 189

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 189

ccucaucuac accaacuauu u 21

<210> 190

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 190

ccucaucuac accaacuauu u 21

<210> 191

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 191

ccucaucuac accaacuauu u 21

<210> 192

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 192

ccucaucuac accaacuauu u 21

<210> 193

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 193

ccucaucuac accaacuauu u 21

<210> 194

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (1)..(1)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (3)..(3)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (5)..(5)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (7)..(7)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (9)..(9)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 194

ccucaucuac accaacuauu u 21

<210> 195

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> a, c, t, g, u, неизвестное или другое

<400> 195

acagcagggu cucaaaaggn n 21

<210> 196

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 196

auaguuggug uagaugaggu u 21

<210> 197

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (2)..(2)

<223> 2’-дезоксинуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (5)..(6)

<223> 2’-дезоксинуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 197

auaguuggug uagaugaggu u 21

<210> 198

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (2)..(2)

<223> 2’-дезоксинуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (5)..(6)

<223> 2’-дезоксинуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 198

auaguuggug uagaugaggu u 21

<210> 199

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (5)..(6)

<223> 2’-дезоксинуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 199

auaguuggug uagaugaggu u 21

<210> 200

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (5)..(6)

<223> 2’-дезоксинуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 200

auaguuggug uagaugaggu u 21

<210> 201

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (5)..(6)

<223> 2’-дезоксинуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 201

auaguuggug uagaugaggu u 21

<210> 202

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (5)..(5)

<223> 2’-дезоксинуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 202

auaguuggug uagaugaggu u 21

<210> 203

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (5)..(5)

<223> 2’-дезоксинуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 203

auaguuggug uagaugaggu u 21

<210> 204

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (2)..(2)

<223> 2’-дезоксинуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (6)..(6)

<223> 2’-дезоксинуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 204

auaguuggug uagaugaggu u 21

<210> 205

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (6)..(6)

<223> 2’-дезоксинуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 205

auaguuggug uagaugaggu u 21

<210> 206

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (2)..(2)

<223> 2’-дезоксинуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (5)..(6)

<223> 2’-дезоксинуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (14)..(14)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (16)..(16)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (18)..(18)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 206

auaguuggug uagaugaggu u 21

<210> 207

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> a, c, t, g, u, неизвестное или другое

<400> 207

gaugacuaug ugaaggcacn n 21

<210> 208

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 208

ggaugacuau gugaaggcau u 21

<210> 209

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 209

ggaugacuau gugaaggcau u 21

<210> 210

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 210

ggaugacuau gugaaggcau u 21

<210> 211

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 211

ggaugacuau gugaaggcau u 21

<210> 212

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 212

ggaugacuau gugaaggcau u 21

<210> 213

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 213

ggaugacuau gugaaggcau u 21

<210> 214

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 214

ggaugacuau gugaaggcau u 21

<210> 215

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 215

ggaugacuau gugaaggcau u 21

<210> 216

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 216

ggaugacuau gugaaggcau u 21

<210> 217

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 217

ggaugacuau gugaaggcau u 21

<210> 218

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (1)..(1)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (3)..(3)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (5)..(5)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (7)..(7)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 218

ggaugacuau gugaaggcau u 21

<210> 219

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (11)..(11)

<223> 2’-дезокси-2’-фторнуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (13)..(13)

<223> 2’-дезокси-2’-фторнуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 219

ggaugacuau gugaaggcau u 21

<210> 220

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (1)..(2)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 220

ggaugacuau gugaaggcau u 21

<210> 221

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (1)..(2)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 221

ggaugacuau gugaaggcau u 21

<210> 222

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> a, c, t, g, u, неизвестное или другое

<400> 222

gugccuucac auagucaucn n 21

<210> 223

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 223

ugccuucaca uagucauccu u 21

<210> 224

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (1)..(1)

<223> 2’-дезоксинуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (5)..(6)

<223> 2’-дезоксинуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 224

ugccuucaca uagucauccu u 21

<210> 225

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (5)..(6)

<223> 2’-дезоксинуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 225

ugccuucaca uagucauccu u 21

<210> 226

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (5)..(6)

<223> 2’-дезоксинуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 226

ugccuucaca uagucauccu u 21

<210> 227

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (5)..(6)

<223> 2’-дезоксинуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 227

ugccuucaca uagucauccu u 21

<210> 228

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (5)..(6)

<223> 2’-дезоксинуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 228

ugccuucaca uagucauccu u 21

<210> 229

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (1)..(1)

<223> 2’-дезоксинуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (5)..(5)

<223> 2’-дезоксинуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 229

ugccuucaca uagucauccu u 21

<210> 230

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (5)..(5)

<223> 2’-дезоксинуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 230

ugccuucaca uagucauccu u 21

<210> 231

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (6)..(6)

<223> 2’-дезоксинуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 231

ugccuucaca uagucauccu u 21

<210> 232

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (6)..(6)

<223> 2’-дезоксинуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 232

ugccuucaca uagucauccu u 21

<210> 233

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (5)..(6)

<223> 2’-дезоксинуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (14)..(14)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (16)..(16)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (18)..(18)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 233

ugccuucaca uagucauccu u 21

<210> 234

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (4)..(4)

<223> 2’-дезокси-2’-фторнуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 234

ugccuucaca uagucauccu u 21

<210> 235

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (9)..(9)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (11)..(11)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (13)..(13)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (15)..(15)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (17)..(17)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (19)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 235

ugccuucaca uagucauccu u 21

<210> 236

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (11)..(11)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (13)..(13)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (15)..(15)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (17)..(17)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (19)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 236

ugccuucaca uagucauccu u 21

<210> 237

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> a, c, t, g, u, неизвестное или другое

<400> 237

gaagccuuuu gagacccugn n 21

<210> 238

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 238

gaagccuuuu gagacccugu u 21

<210> 239

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 239

gaagccuuuu gagacccugu u 21

<210> 240

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 240

gaagccuuuu gagacccugu u 21

<210> 241

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 241

gaagccuuuu gagacccugu u 21

<210> 242

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 242

gaagccuuuu gagacccugu u 21

<210> 243

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 243

gaagccuuuu gagacccugu u 21

<210> 244

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 244

gaagccuuuu gagacccugu u 21

<210> 245

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 245

gaagccuuuu gagacccugu u 21

<210> 246

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 246

gaagccuuuu gagacccugu u 21

<210> 247

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 247

gaagccuuuu gagacccugu u 21

<210> 248

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (1)..(1)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (3)..(3)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (5)..(5)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (7)..(7)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (9)..(9)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 248

gaagccuuuu gagacccugu u 21

<210> 249

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> a, c, t, g, u, неизвестное или другое

<400> 249

cagggucuca aaaggcuucn n 21

<210> 250

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 250

cagggucuca aaaggcuucu u 21

<210> 251

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (6)..(6)

<223> 2’-дезоксинуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (8)..(8)

<223> 2’-дезоксинуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 251

cagggucuca aaaggcuucu u 21

<210> 252

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (6)..(6)

<223> 2’-дезоксинуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (8)..(8)

<223> 2’-дезоксинуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 252

cagggucuca aaaggcuucu u 21

<210> 253

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (6)..(6)

<223> 2’-дезоксинуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (8)..(8)

<223> 2’-дезоксинуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 253

cagggucuca aaaggcuucu u 21

<210> 254

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (6)..(6)

<223> 2’-дезоксинуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (8)..(8)

<223> 2’-дезоксинуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 254

cagggucuca aaaggcuucu u 21

<210> 255

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (6)..(6)

<223> 2’-дезоксинуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (8)..(8)

<223> 2’-дезоксинуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 255

cagggucuca aaaggcuucu u 21

<210> 256

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 256

cagggucuca aaaggcuucu u 21

<210> 257

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 257

cagggucuca aaaggcuucu u 21

<210> 258

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (6)..(6)

<223> 2’-дезоксинуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (8)..(8)

<223> 2’-дезоксинуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 258

cagggucuca aaaggcuucu u 21

<210> 259

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (6)..(6)

<223> 2’-дезоксинуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (8)..(8)

<223> 2’-дезоксинуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 259

cagggucuca aaaggcuucu u 21

<210> 260

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (6)..(6)

<223> 2’-дезоксинуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (8)..(8)

<223> 2’-дезоксинуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (14)..(14)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (16)..(16)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (18)..(18)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 260

cagggucuca aaaggcuucu u 21

<210> 261

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> a, c, t, g, u, неизвестное или другое

<400> 261

ccucaucuac accaacuaun n 21

<210> 262

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 262

ccucaucuac accaacuauu u 21

<210> 263

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 263

ccucaucuac accaacuauu u 21

<210> 264

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 264

ccucaucuac accaacuauu u 21

<210> 265

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 265

ccucaucuac accaacuauu u 21

<210> 266

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 266

ccucaucuac accaacuauu u 21

<210> 267

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 267

ccucaucuac accaacuauu u 21

<210> 268

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 268

ccucaucuac accaacuauu u 21

<210> 269

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 269

ccucaucuac accaacuauu u 21

<210> 270

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 270

ccucaucuac accaacuauu u 21

<210> 271

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 271

ccucaucuac accaacuauu u 21

<210> 272

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (1)..(1)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (3)..(3)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (5)..(5)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (7)..(7)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (9)..(9)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 272

ccucaucuac accaacuauu u 21

<210> 273

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> a, c, t, g, u, неизвестное или другое

<400> 273

auaguuggug uagaugaggn n 21

<210> 274

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 274

auaguuggug uagaugaggu u 21

<210> 275

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (2)..(2)

<223> 2’-дезоксинуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (5)..(6)

<223> 2’-дезоксинуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 275

auaguuggug uagaugaggu u 21

<210> 276

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (2)..(2)

<223> 2’-дезоксинуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (5)..(6)

<223> 2’-дезоксинуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 276

auaguuggug uagaugaggu u 21

<210> 277

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (5)..(6)

<223> 2’-дезоксинуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 277

auaguuggug uagaugaggu u 21

<210> 278

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (5)..(6)

<223> 2’-дезоксинуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 278

auaguuggug uagaugaggu u 21

<210> 279

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (5)..(6)

<223> 2’-дезоксинуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 279

auaguuggug uagaugaggu u 21

<210> 280

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (5)..(5)

<223> 2’-дезоксинуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 280

auaguuggug uagaugaggu u 21

<210> 281

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (5)..(5)

<223> 2’-дезоксинуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 281

auaguuggug uagaugaggu u 21

<210> 282

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (2)..(2)

<223> 2’-дезоксинуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (6)..(6)

<223> 2’-дезоксинуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 282

auaguuggug uagaugaggu u 21

<210> 283

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (6)..(6)

<223> 2’-дезоксинуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 283

auaguuggug uagaugaggu u 21

<210> 284

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (2)..(2)

<223> 2’-дезоксинуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (5)..(6)

<223> 2’-дезоксинуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (14)..(14)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (16)..(16)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (18)..(18)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 284

auaguuggug uagaugaggu u 21

<210> 285

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-метоксинуклеотид

<400> 285

cuuagugacu uuacuuguau u 21

<210> 286

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-метоксинуклеотид

<400> 286

cagaccagca ugacagauuu u 21

<210> 287

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-метоксинуклеотид

<400> 287

ugaucuucuc caagaggaau u 21

<210> 288

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-метоксинуклеотид

<400> 288

guucauugca cuuugauuau u 21

<210> 289

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-метоксинуклеотид

<400> 289

cauugcacuu ugauuagcau u 21

<210> 290

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-метоксинуклеотид

<400> 290

agcgauggaa cuucgacuuu u 21

<210> 291

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-метоксинуклеотид

<400> 291

gcgauggaac uucgacuuuu u 21

<210> 292

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-метоксинуклеотид

<400> 292

gggaagggac acacaagaau u 21

<210> 293

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-метоксинуклеотид

<400> 293

ucuaccucag gcagcucaau u 21

<210> 294

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-метоксинуклеотид

<400> 294

ggugcucaau aaaugauucu u 21

<210> 295

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-метоксинуклеотид

<400> 295

caucaucaaa aacuuuggau u 21

<210> 296

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-метоксинуклеотид

<400> 296

aaggagucag acauuuuaau u 21

<210> 297

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-метоксинуклеотид

<400> 297

gugcugggca uuuuuauuuu u 21

<210> 298

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-метоксинуклеотид

<400> 298

gccggcuuca ugccagcuau u 21

<210> 299

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-метоксинуклеотид

<400> 299

gggcaucauc aaaaacuuuu u 21

<210> 300

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-метоксинуклеотид

<400> 300

gaagggcacc cuaguucuau u 21

<210> 301

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-метоксинуклеотид

<400> 301

caguucauug cacuuugauu u 21

<210> 302

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-метоксинуклеотид

<400> 302

acaaggaguc agacauuuuu u 21

<210> 303

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-метоксинуклеотид

<400> 303

uggaggcacu gaagugcuuu u 21

<210> 304

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-метоксинуклеотид

<400> 304

gcagggacca cacccuguau u 21

<210> 305

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-метоксинуклеотид

<400> 305

cuguacuguu cugugucuuu u 21

<210> 306

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-метоксинуклеотид

<400> 306

uuaaacaccu ccucauguau u 21

<210> 307

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-метоксинуклеотид

<400> 307

agacucucag ggucgaaaau u 21

<210> 308

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-метоксинуклеотид

<400> 308

caugacagau uucuaccacu u 21

<210> 309

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-метоксинуклеотид

<400> 309

agauuucuac cacuccaaau u 21

<210> 310

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-метоксинуклеотид

<400> 310

ccaagaggaa gcccuaaucu u 21

<210> 311

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-метоксинуклеотид

<400> 311

gacagcagag gaagaccauu u 21

<210> 312

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-метоксинуклеотид

<400> 312

cucccacaau gcugaauauu u 21

<210> 313

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-метоксинуклеотид

<400> 313

uacaaguaaa gucacuaagu u 21

<210> 314

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-метоксинуклеотид

<400> 314

aaucugucau gcuggucugu u 21

<210> 315

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-метоксинуклеотид

<400> 315

uuccucuugg agaagaucau u 21

<210> 316

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-метоксинуклеотид

<400> 316

uaaucaaagu gcaaugaacu u 21

<210> 317

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-метоксинуклеотид

<400> 317

ugcuaaucaa agugcaaugu u 21

<210> 318

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-метоксинуклеотид

<400> 318

aagucgaagu uccaucgcuu u 21

<210> 319

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-метоксинуклеотид

<400> 319

aaagucgaag uuccaucgcu u 21

<210> 320

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-метоксинуклеотид

<400> 320

uucuugugug ucccuucccu u 21

<210> 321

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-метоксинуклеотид

<400> 321

uugagcugcc ugagguagau u 21

<210> 322

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-метоксинуклеотид

<400> 322

gaaucauuua uugagcaccu u 21

<210> 323

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-метоксинуклеотид

<400> 323

uccaaaguuu uugaugaugu u 21

<210> 324

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-метоксинуклеотид

<400> 324

uuaaaauguc ugacuccuuu u 21

<210> 325

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-метоксинуклеотид

<400> 325

aaauaaaaau gcccagcacu u 21

<210> 326

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-метоксинуклеотид

<400> 326

uagcuggcau gaagccggcu u 21

<210> 327

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-метоксинуклеотид

<400> 327

aaaguuuuug augaugcccu u 21

<210> 328

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-метоксинуклеотид

<400> 328

uagaacuagg gugcccuucu u 21

<210> 329

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-метоксинуклеотид

<400> 329

aucaaagugc aaugaacugu u 21

<210> 330

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-метоксинуклеотид

<400> 330

aaaaugucug acuccuuguu u 21

<210> 331

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-метоксинуклеотид

<400> 331

aagcacuuca gugccuccau u 21

<210> 332

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-метоксинуклеотид

<400> 332

uacagggugu ggucccugcu u 21

<210> 333

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-метоксинуклеотид

<400> 333

aagacacaga acaguacagu u 21

<210> 334

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-метоксинуклеотид

<400> 334

uacaugagga gguguuuaau u 21

<210> 335

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-метоксинуклеотид

<400> 335

uuuucgaccc ugagagucuu u 21

<210> 336

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-метоксинуклеотид

<400> 336

gugguagaaa ucugucaugu u 21

<210> 337

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-метоксинуклеотид

<400> 337

uuuggagugg uagaaaucuu u 21

<210> 338

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-метоксинуклеотид

<400> 338

gauuagggcu uccucuuggu u 21

<210> 339

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-метоксинуклеотид

<400> 339

auggucuucc ucugcugucu u 21

<210> 340

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-метоксинуклеотид

<400> 340

auauucagca uugugggagu u 21

<210> 341

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> a, c, t, g, u, неизвестное или другое

<400> 341

aaggagucag acauuuuaan n 21

<210> 342

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (1)..(3)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (8)..(8)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (12)..(12)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (17)..(17)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 342

aaggagucag acauuuuaau u 21

<210> 343

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (1)..(3)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (8)..(8)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (12)..(12)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (14)..(15)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (17)..(17)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 343

aaggagucag acauuuuaau u 21

<210> 344

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (1)..(3)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (8)..(8)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (12)..(12)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (14)..(15)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (17)..(17)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 344

aaggagucag acauuuuaau u 21

<210> 345

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (1)..(3)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (8)..(8)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (12)..(12)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (17)..(17)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 345

aaggagucag acauuuuaau u 21

<210> 346

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 346

aaggagucag acauuuuaau u 21

<210> 347

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 347

aaggagucag acauuuuaau u 21

<210> 348

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 348

aaggagucag acauuuuaau u 21

<210> 349

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 349

aaggagucag acauuuuaau u 21

<210> 350

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 350

aaggagucag acauuuuaau u 21

<210> 351

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 351

aaggagucag acauuuuaau u 21

<210> 352

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (8)..(8)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (12)..(12)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (17)..(17)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 352

aaggagucag acauuuuaau u 21

<210> 353

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (1)..(3)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 353

aaggagucag acauuuuaau u 21

<210> 354

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (1)..(3)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (8)..(8)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (12)..(12)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (17)..(17)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 354

aaggagucag acauuuuaau u 21

<210> 355

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> a, c, t, g, u, неизвестное или другое

<400> 355

uuaaaauguc ugacuccuun n 21

<210> 356

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (2)..(2)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (7)..(7)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (11)..(11)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 356

uuaaaauguc ugacuccuuu u 21

<210> 357

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (2)..(2)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (7)..(7)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (11)..(11)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 357

uuaaaauguc ugacuccuuu u 21

<210> 358

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (2)..(2)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 358

uuaaaauguc ugacuccuuu u 21

<210> 359

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (2)..(2)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 359

uuaaaauguc ugacuccuuu u 21

<210> 360

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (7)..(7)

<223> 2’-дезоксинуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 360

uuaaaauguc ugacuccuuu u 21

<210> 361

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (7)..(7)

<223> 2’-дезоксинуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 361

uuaaaauguc ugacuccuuu u 21

<210> 362

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (1)..(1)

<223> 2’-дезоксинуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (7)..(7)

<223> 2’-дезоксинуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 362

uuaaaauguc ugacuccuuu u 21

<210> 363

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (7)..(7)

<223> 2’-дезоксинуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 363

uuaaaauguc ugacuccuuu u 21

<210> 364

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 364

uuaaaauguc ugacuccuuu u 21

<210> 365

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (2)..(2)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (7)..(7)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (11)..(11)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 365

uuaaaauguc ugacuccuuu u 21

<210> 366

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 366

uuaaaauguc ugacuccuuu u 21

<210> 367

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 367

uuaaaauguc ugacuccuuu u 21

<210> 368

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (20)..(21)

<223> 2’-OMe-нуклеотид

<400> 368

uuaaaauguc ugacuccuuu u 21

<210> 369

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 369

cgagaacagu uuguacaagu u 21

<210> 370

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 370

caggccucua caacuacuat t 21

<210> 371

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 371

gagcacucca agaucaacuu ccgcg 25

<210> 372

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 372

ggacaggccu cuacaacuat t 21

<210> 373

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 373

gagcacucca agaucaacut t 21

<210> 374

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 374

gaacacucca agaucaacut t 21

<210> 375

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 375

caggccucua caacuacuac gacga 25

<210> 376

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 376

gaacacucca agaucaacuu ccgag 25

<210> 377

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 377

ggacaggccu cuacaacuac uacga 25

<210> 378

<211> 26

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 378

caggccucua caacuacuat taaaaa 26

<210> 379

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 379

caggccucua caacuacua 19

<210> 380

<211> 33

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 380

caggccucua caacuacuat taaaaaaaaa aaa 33

<210> 381

<211> 26

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 381

aaaaacaggc cucuacaacu acuatt 26

<210> 382

<211> 29

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 382

caggccucua caacuacuat taaaaaaaa 29

<210> 383

<211> 29

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 383

aaaaaaaaca ggccucuaca acuacuatt 29

<210> 384

<211> 33

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 384

caggccucua caacuacuat taaaaaaaaa aaa 33

<210> 385

<211> 37

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 385

aaaaaaaaaa aaaaaacagg ccucuacaac uacuatt 37

<210> 386

<211> 37

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 386

caggccucua caacuacuat taaaaaaaaa aaaaaaa 37

<210> 387

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 387

caggccucua caacuacuat t 21

<210> 388

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 388

ggacaggccu guacaacuat t 21

<210> 389

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 389

ggacaggccu cuacaacuat t 21

<210> 390

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 390

cuuguacaaa cuguucucgu u 21

<210> 391

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 391

uaguaguugu agaggccugt t 21

<210> 392

<211> 27

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 392

cgcggaaguu gaucuuggag ugcucuu 27

<210> 393

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 393

uaguuguaga ggccugucct t 21

<210> 394

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 394

aguugaucuu ggagugcuct t 21

<210> 395

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 395

aguugaucuu ggaguguuct t 21

<210> 396

<211> 27

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 396

ucgucguagu aguuguagag gccuguu 27

<210> 397

<211> 27

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 397

cucggaaguu gaucuuggag uguucuu 27

<210> 398

<211> 27

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 398

ucguaguagu uguagaggcc uguccuu 27

<210> 399

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 399

uaguaguugu agaggccugt t 21

<210> 400

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 400

uaguaguugu agaggccugt t 21

<210> 401

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 401

uaguaguugu agaggccugt t 21

<210> 402

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 402

uaguaguugu agaggccugt t 21

<210> 403

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 403

uaguaguugu agaggccugt t 21

<210> 404

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 404

uaguaguugu agaggccugt t 21

<210> 405

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 405

uaguaguugu agaggccugt t 21

<210> 406

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 406

uaguaguugu agaggccugt t 21

<210> 407

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 407

uaguaguugu agaggccugt t 21

<210> 408

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 408

uaguaguugu agaggccugt t 21

<210> 409

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 409

uaguuguaca ggccugucct t 21

<210> 410

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 410

uaguuguaga ggccugucct t 21

<210> 411

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> 5’-инвертированная 1,2-дидезокси-D-рибоза

<220>

<221> смешанные признаки

<222> (15)..(19)

<223> 2’-5’ связь между нуклеотидами

<220>

<223> 3’-C3 спейсер

<400> 411

acuccaagau caacuuccu 19

<210> 412

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (2)..(2)

<223> 2’-O-метилрибонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (4)..(4)

<223> 2’-O-метилрибонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (6)..(6)

<223> 2’-O-метилрибонуклеотид

<220>

<221> смешанные признаки

<222> (7)..(8)

<223> 2’-5’ связь между нуклеотидами

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (8)..(8)

<223> 2’-O-метилрибонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (11)..(11)

<223> 2’-O-метилрибонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (13)..(13)

<223> 2’-O-метилрибонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (15)..(15)

<223> 2’-O-метилрибонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (17)..(17)

<223> 2’-O-метилрибонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (19)..(19)

<223> 2’-O-метилрибонуклеотид

<220>

<223> 3’-C3-C3 спейсер

<400> 412

aggaaguuga ucuuggagu 19

<210> 413

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> 5’-инвертированная 1,2-дидезокси-D-рибоза

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (4)..(4)

<223> 2’-O-метилрибонуклеотид

<220>

<221> смешанные признаки

<222> (9)..(10)

<223> 2’-5’ связь между нуклеотидами

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (11)..(11)

<223> 2’-O-метилрибонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (13)..(13)

<223> 2’-O-метилрибонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (17)..(17)

<223> 2’-O-метилрибонуклеотид

<220>

<223> 3’-C3 спейсер

<400> 413

uccugagaca cauggguga 19

<210> 414

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (1)..(1)

<223> 2’-O-метилрибонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (4)..(4)

<223> 2’-O-метилрибонуклеотид

<220>

<221> смешанные признаки

<222> (6)..(7)

<223> 2’-5’ связь между нуклеотидами

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (8)..(8)

<223> 2’-O-метилрибонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (11)..(11)

<223> 2’-O-метилрибонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (15)..(15)

<223> 2’-O-метилрибонуклеотид

<220>

<223> 3’-C3-C3 спейсер

<400> 414

ucacccaugu gucucagga 19

<210> 415

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> 5’-инвертированная 1,2-дидезокси-D-рибоза

<220>

<221> смешанные признаки

<222> (15)..(19)

<223> 2’-5’ связь между нуклеотидами

<220>

<223> 3’-C3-спейсер-фосфат

<400> 415

gagacacaug ggugcuaua 19

<210> 416

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (1)..(1)

<223> 2’-O-метилрибонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (3)..(3)

<223> 2’-O-метилрибонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (5)..(5)

<223> 2’-O-метилрибонуклеотид

<220>

<221> смешанные признаки

<222> (7)..(8)

<223> 2’-5’ связь между нуклеотидами

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (9)..(9)

<223> 2’-O-метилрибонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (11)..(11)

<223> 2’-O-метилрибонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (13)..(13)

<223> 2’-O-метилрибонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (15)..(15)

<223> 2’-O-метилрибонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (17)..(17)

<223> 2’-O-метилрибонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (19)..(19)

<223> 2’-O-метилрибонуклеотид

<220>

<223> 3’-C3-C3-спейсер

<400> 416

uauagcaccc augugucuc 19

<210> 417

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> 5’-инвертированная 1,2-дидезокси-D-рибоза

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (2)..(3)

<223> 2’-O-метилрибонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (5)..(5)

<223> 2’-O-метилрибонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (7)..(8)

<223> 2’-O-метилрибонуклеотид

<220>

<221> смешанные признаки

<222> (9)..(10)

<223> 2’-5’ связь между нуклеотидами

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (12)..(12)

<223> 2’-O-метилрибонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (14)..(15)

<223> 2’-O-метилрибонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (17)..(17)

<223> 2’-O-метилрибонуклеотид

<220>

<223> 3’-C3-спейсер

<400> 417

cuuacgcuga guacuucgu 19

<210> 418

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (2)..(2)

<223> 2’-O-метилрибонуклеотид

<220>

<221> смешанные признаки

<222> (6)..(7)

<223> 2’-5’ связь между нуклеотидами

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (7)..(7)

<223> 2’-O-метилрибонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (11)..(11)

<223> 2’-O-метилрибонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (16)..(16)

<223> 2’-O-метилрибонуклеотид

<220>

<223> 3’-C3-C3-спейсер

<400> 418

acgaaguacu cagcguaag 19

<210> 419

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 419

gccuuccaag gauggguuug u 21

<210> 420

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 420

ggaguucuuc cauguagagg a 21

<210> 421

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 421

ccauguagag gaccuagaag g 21

<210> 422

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 422

gccuuccaag gauggguuug u 21

<210> 423

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 423

gccuuccaag gauggguuug u 21

<210> 424

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 424

gccuuccaag gauggguuug u 21

<210> 425

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 425

gccuuccaag gauggguuug u 21

<210> 426

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 426

gccuuccaag gauggguuug u 21

<210> 427

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 427

aaacccaucc uuggaaggcc g 21

<210> 428

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 428

cucuacaugg aagaacucca c 21

<210> 429

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 429

uucuaggucc ucuacaugga a 21

<210> 430

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (8)..(8)

<223> 2’-дезоксинуклеотид

<400> 430

aaacccaucc uuggaaggcc g 21

<210> 431

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 431

aaacccaucc uuggaaggcc g 21

<210> 432

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 432

aaacccaucc uuggaaggcc g 21

<210> 433

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (8)..(8)

<223> 2’-дезоксинуклеотид

<400> 433

aaacccaucc uuggaaggcc g 21

<210> 434

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (8)..(8)

<223> 2’-дезоксинуклеотид

<400> 434

aaacccaucc uuggaaggcc g 21

<210> 435

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 435

gcucauuguc gagguccuug a 21

<210> 436

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 436

gccaaaccug uggcuacaag u 21

<210> 437

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 437

ggaagacgcg acaugucaac a 21

<210> 438

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 438

gcucauuguc gagguccuug a 21

<210> 439

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 439

gcucauuguc gagguccuug a 21

<210> 440

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 440

gcucauuguc gagguccuug a 21

<210> 441

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 441

gcucauuguc gagguccuug a 21

<210> 442

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 442

gcucauuguc gagguccuug a 21

<210> 443

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 443

aaggaccucg acaaugagcu c 21

<210> 444

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 444

uuguagccac agguuuggca a 21

<210> 445

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 445

uugacauguc gcgucuuccu g 21

<210> 446

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (8)..(8)

<223> 2’-дезоксинуклеотид

<400> 446

aaggaccucg acaaugagcu c 21

<210> 447

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 447

aaggaccucg acaaugagcu c 21

<210> 448

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 448

aaggaccucg acaaugagcu c 21

<210> 449

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (8)..(8)

<223> 2’-дезоксинуклеотид

<400> 449

aaggaccucg acaaugagcu c 21

<210> 450

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (8)..(8)

<223> 2’-дезоксинуклеотид

<400> 450

aaggaccucg acaaugagcu c 21

<210> 451

<211> 50

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 451

ctcgaggggc aactgaagcc ttttgagacc ctgctgtccc aggcggccgc 50

<210> 452

<211> 50

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 452

ctcgagctgg gacagcaggg tctcaaaagg cttcagttgc ccgcggccgc 50

<210> 453

<211> 50

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 453

ctcgaggggc aactctacgc aaaacagacc ctgctgtccc aggcggccgc 50

<210> 454

<211> 71

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 454

ctcgaggggc aactctacgc aaaacagacc ctgctctacg caaaacagac cctgctgtcc 60

caggcggccg c 71

<210> 455

<211> 92

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 455

ctcgaggggc aactctacgc aaaacagacc ctgctctacg caaaacagac cctgctctac 60

gcaaaacaga ccctgctgtc ccaggcggcc gc 92

<210> 456

<211> 113

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 456

ctcgaggggc aactctacgc aaaacagacc ctgctctacg caaaacagac cctgctctac 60

gcaaaacaga ccctgctcta cgcaaaacag accctgctgt cccaggcggc cgc 113

<---

1. Молекула RNAi для понижения экспрессии целевой мРНК, где:

a) молекула имеет полинуклеотидную смысловую цепь и полинуклеотидную антисмысловую цепь;

b) каждая цепь молекулы составляет от 15 до 30 нуклеотидов в длину;

c) непрерывная область от 15 до 30 нуклеотидов антисмысловой цепи комплементарна последовательности мРНК;

d) по меньшей мере часть смысловой цепи комплементарна по меньшей мере части антисмысловой цепи, и молекула имеет область дуплекса от 15 до 30 нуклеотидов в длину, в которой один или более нуклеотидов в антисмысловой цепи в положениях с 3 до 8 от 5'-конца области дуплекса представляют собой дезоксинуклеотиды, где 5'-конец антисмысловой цепи соответствует 5'-концу области дуплекса, где антисмысловая цепь имеет дезоксинуклеотиды во множестве положений в области затравки указанной антисмысловой цепи, где множество положений представляет собой одно из следующих:

каждое из положений 4, 6 и 8 от 5'-конца антисмысловой цепи;

каждое из положений 3, 5 и 7 от 5'-конца антисмысловой цепи;

каждое из положений 1, 3, 5 и 7 от 5'-конца антисмысловой цепи;

каждое из положений 3-8 от 5'-конца антисмысловой цепи; и

каждое из положений 5-8 от 5'-конца антисмысловой цепи.

2. Молекула по п. 1, где модулирование экспрессии мРНК представляет собой ингибирование экспрессии гена, выбранного из кодирующих белок генов, протоонкогенов, онкогенов, генов-супрессоров опухолей и генов клеточной сигнализации.

3. Молекула по п. 1, в котором мРНК представляет собой мРНК человека.

4. Молекула по п. 1, в котором мРНК представляет собой мРНК человека, экспрессирующую любой элемент или подэлемент семейства белков человека, включающего SRY, β-глобин, RAS, цитозольную GST, митохондриальную GST, MAPEG GST, GST-π, p16, p21, p53, сывороточный альбумин, коллаген VII типа, C3 комплемента, аполипопротеин B, фенилаланингидроксилазу, фактор VIII, гентингтин, белок ретинобластомы RB1, CFTR, титин, атрофин и дистрофин.

5. Молекула по п. 1, где молекула имеет IC₅₀ для нокдауна мРНК меньше чем 100 пМ.

6. Молекула по п. 1, где молекула имеет IC₅₀ для нокдауна мРНК меньше чем 50 пМ.

7. Молекула по п. 1, где молекула имеет IC₅₀ для нокдауна мРНК меньше чем 10 пМ.

8. Молекула по п. 1, где одно введение молекулы ингибирует мРНК по меньшей мере на 25% in vivo.

9. Молекула по п. 1, в которой каждая цепь молекулы составляет от 18 до 22 нуклеотидов в длину.

10. Молекула по п. 1, в которой область дуплекса составляет 19 нуклеотидов в длину.

11. Молекула по п. 1, в которой полинуклеотидная смысловая цепь и полинуклеотидная антисмысловая цепь соединены в виде одной цепи и образуют область дуплекса, соединенную на одном конце с помощью петли.

12. Молекула по п. 1, где молекула имеет тупой конец.

13. Молекула по п. 1, где молекула имеет один или более 3'- липких концов.

14. Молекула по п. 1, в которой один или более нуклеотидов в области дуплекса модифицирован или химически модифицирован.

15. Молекула по п. 14, в которой модифицированные или химически модифицированные нуклеотиды представляют собой 2'-O-алкилзамещенные нуклеотиды, 2'-дезокси-2'-фторзамещенные нуклеотиды, фосфотиоатные нуклеотиды, замкнутые нуклеотиды или любое их сочетание.

16. Молекула по п. 1, в которой последовательность оснований антисмысловой цепи представляет собой SEQ ID № 157 и последовательность оснований смысловой цепи представляет собой SEQ ID № 131.

17. Молекула по п. 1, в которой антисмысловая цепь представляет собой SEQ ID № 182 и смысловая цепь представляет собой SEQ ID № 156.

18. Молекула по п. 1, в которой последовательность оснований антисмысловой цепи представляет собой SEQ ID № 195 и последовательность оснований смысловой цепи представляет собой SEQ ID № 183.

19. Молекула по п. 1, в которой антисмысловая цепь представляет собой SEQ ID № 205 и смысловая цепь представляет собой SEQ ID № 193.

20. Молекула по п. 1, в которой антисмысловая цепь представляет собой SEQ ID № 357 и смысловая цепь представляет собой SEQ ID № 343.

21. Молекула по п. 1, в которой антисмысловая цепь представляет собой SEQ ID № 356 и смысловая цепь представляет собой SEQ ID № 342.

22. Фармацевтическая композиция для лечения злокачественных опухолей, содержащая молекулу по любому из пп. 1-21 и фармацевтически приемлемый носитель.

23. Фармацевтическая композиция по п. 22, в которой носитель содержит липидную молекулу или липосому.

24. Клетка для экспрессии молекулы RNAi, содержащая молекулу по любому из пп. 1-21.

25. Способ лечения злокачественных опухолей у субъекта, нуждающегося в этом, посредством сайленсинга генов, где способ включает введение субъекту композиции по п. 22.

26. Применение композиции по п. 22 для лечения злокачественных опухолей у субъекта, нуждающегося в этом.

27. Применение композиции по п. 22 для получения или изготовления лекарственного средства для лечения злокачественных опухолей у субъекта, нуждающегося в этом.