Карборановые производные 4,4-дифтор-4-бора-3а,4а-диаза-s-индацена, проявляющие противоопухолевую активность




Владельцы патента RU 2789401:

Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт элементоорганических соединений им. А.Н. Несмеянова Российской академии наук (ИНЭОС РАН) (RU)

Изобретение относится к новым карборановым производным 4,4-дифтор-4-бора-3α,4α-диаза-s-индацена общей формулы I, где

Технический результат изобретения заключается в получение новых карборансодержащих производных 4,4-дифтор-4-бора-3α,4α-диаза-s-индацена, проявляющих противоопухолевую активность, и расширении арсенала агентов для ФДТ и БНЗТ. 1 з.п. ф-лы, 1 табл., 6 пр.

 

Изобретение относится к новым соединениям, а именно к производным 4,4-дифтор-4-бора-3α,4α-диаза-s-индацена общей формулы I, в частности к их карборановым производным, проявляющим противоопухолевую активность:

,

где

Указанные соединения наиболее эффективно могут быть использованы в качестве фото/радиосенсибилизаторов в фотодинамической терапии (ФДТ) и борнейтронозахватной терапии (БНЗТ) онкологических заболеваний.

Указанные соединения формулы I, их свойства и способ получения в литературе не описаны.

ФДТ является разновидностью химиотерапии и заключается в локальной активации фотосенсибилизатора (ФС), введенного в опухоль, видимым красным светом, что в присутствии кислорода тканей приводит к развитию фотохимической реакции, разрушающей опухолевые клетки. ФДТ позволяет избежать системного (общего) воздействия на организм, характерного для обычной химиотерапии.

Фотодинамическая терапия известна с 1975 г. [Dougherty, T.G.; Grindey, G.B.; Fiel, R. J. Natl. Cancer Inst., 1975, 55, 115-121], и в последующие годы получила широкое распространение в США, Европе, Китае и Японии. В Российской Федерации ФДТ применяют с 1996 г.

Успешное применение метода ФДТ для лечения злокачественных новообразований стимулирует поиск новых фотосенсибилизаторов с улучшенными свойствами.

Известно, что некоторые производные 4,4-дифтор-4-бора-3α,4α-диаза-s-индацена позволяют существенно увеличивать генерацию активных форм кислорода с более высокими квантовыми выходами и временем жизни активных частиц, по сравнению с производными порфиринов и хлоринов, в настоящее время использующихся в клинике для ФДТ [A. Kamkaew, S. Η. Lim, Η. Β. Lee, L. V. Kiew, L. Y. Chung, K. Burgess. Chem. Soc. Rev., 2013, 42, 77-88]. Известно, что некоторые производные 4,4-дифтор-4-бора-3α,4α-диаза-s-индацена позволяют существенно увеличивать генерацию активных форм кислорода с более высокими квантовыми выходами и временем жизни активных частиц, по сравнению с производными порфиринов и хлоринов, в настоящее время использующихся в клинике для ФДТ [A. Kamkaew, S. Η. Lim, Η. Β. Lee, L. V. Kiew, L. Y. Chung, K. Burgess. Chem. Soc. Rev., 2013, 42, 77-88]. Далее в настоящей заявке иногда используется общепринятое техническое название 4,4-дифтор-4-бора-3α,4α-диаза-s-индацена - BODIPY [Tram K.; Yan Η.; Jenkins Η. Α.; Vassiliev S.; Bruce D. Dyes and Pigments, 2009, 82, 392-395]. Опубликованные к настоящему времени исследования in vivo показывают, что ряд производных BODIPY обладают повышенной способностью избирательно подавлять рост опухоли без значительного повреждения здоровых тканей [М. L. Agazzi, Μ. В. Ballatorea, Α. Μ. Durantini, Ε. Ν. Durantini, J. Photochem. Photobiol. C: Photochem. Rev., 2019, 40,21-48].

БНЗТ - перспективный метод терапевтического лечения злокачественных опухолей путем накопления в них стабильного изотопа бора-10 и последующего облучения тепловыми нейтронами. Генерируемые при реакции 10Β(n,α)7 Li высокоэнергетические α-частицы и ядра отдачи 7Li (200 и 350 кэВ мкм-1, соответственно) с длиной пробега, сравнимой с диаметром клетки, вызывают летальные повреждения опухолевых клеток, накопивших достаточное количество борсодержащего вещества. Повреждение окружающих неопухолевых клеток при этом минимально. Для успешной реализации в клинической практике уникальных возможностей БНЗТ необходимо решить комплекс сложных химических, биологических, медицинских и технических проблем, прежде всего требуется создать борсодержащие соединения, способные избирательно доставлять терапевтическое количество бора в злокачественные опухоли (20 мкг/г опухоли) с градиентом концентраций 3:1 (опухоль к нормальной ткани) или выше, обеспечивая его оптимальное микрораспределение и способность оставаться в опухоли в течение времени, необходимого для облучения [R. F. Barth, Μ. G. Η. Vicente, О. K. Harling, W.S. Kiger III, K. J. Riley, P. J. Binns, F. M. Wagner, M. Suzuki, T. Aihara, I. Kato, S. Kawabata. Radiat. Oncol, 2012, 7, 146].

В настоящее время стандартным терапевтическим препаратом, используемым при БНЗТ, является L-боронфенилаланин (ВРА) [R. F. Barth, P. Mi, W. Yang, Cancer Commun., 2018, 38, 35]. Существенным недостатком L-BPA является низкое содержание бора, поэтому особый.интерес представляют собой карбораны, которые содержат 75% бора и активно используются для модификации биомолекул, обеспечивающих доставку бора в опухоль [J. F. Valliant, K. J. Guenther, A. S. King, P. Morel, P. Schaffer, О. О. Sogbein, K. A. Stephenson, Coord. Chem. Rev., 2002, 232, 173-230].

Известно, что введение фтора в молекулы субстанций лекарственных средств в ряде случаев может повышать их устойчивость к метаболизму, биодоступность, показатели связывания с белками и обеспечивать оптимальные липофильные характеристики конечных продуктов [S. Purser, P. R. Moore, S. Swallow, V. Gouvemeur. Chem. Soc. Rev., 2008, 37, 320-330], и таким образом, синтез соединений, модифицированных атомами фтора может привести к созданию перспективных препаратов для ФДТ и БНЗТ.

Известно соединение формулы II, структура которого близка к структуре заявляемых соединений [J. Н. Gibbs, Η. Wang, Ν. V. S. D. K. Bhupathiraju, F. R. Fronczek, K.M. Smith, M. G. H. Vicente. J. Organomet. Chem., 2015, 798, 209-213].

В соединении II в качестве карборановой компоненты используется орто-карборан, который связан с фрагментом BODIPY через фенильный спейсер по атому углерода карборанового полиэдра. Данное соединение обладает низкой темновой цитотоксичностью и низкой фотоиндуцированной цитотоксичностью (IС50>100 мкМ) на опухолевых клетках, что существенно ограничивает его применение в ФДТ.

Задачей настоящего изобретения является создание производных BODIPY с высоким содержанием бора, применимых в фотодинамической терапии (ФДТ) и борнейтронозахватной терапии (БНЗТ) онкологических заболеваний.

Технический результат - получение новых карборансодержащих производных 4,4-дифтор-4-бора-3α,4α-диаза-s-индацена, проявляющих противоопухолевую активность, расширение арсенала агентов для ФДТ и БНЗТ.

Поставленная задача решается заявляемыми соединениями Ia-Ie, проявляющими противоопухолевые свойства.

,

где

Соединения I содержат уникальную совокупность фармакофорных групп, таких как индаценовый фрагмент, тетрафторфенильная группа и карборановый полиэдр, причем BODIPY связан с карборановым полиэдром через фторфенильный спейсер и атом серы. Указанная совокупность фармакофорных элементов в новых соединениях может обеспечить цитотоксическое действие в отношении раковых клеток.

Оказалось, что конъюгация орто- и мета-меркаптокарборанов с пентафторфенильными производными 4,4-дифтор-4-бора-3α,4α-диаза-s-индацена через атом бора карборанового полиэдра или введение водорастворимого 1-меркапто-1-карба-клозо-додекабората цезия в такую молекулу, а также наличие в подобных структурах фторфенильного заместителя существенно повышает как темновую цитотоксичность так и фотоиндуцированную цитотоксичность таких соединений (IC50<50 мкМ).

Таким образом, заявленные соединения могут быть применены в качестве химиотерапевтических агентов, агентов для ФДТ, а повышенное содержание атомов бора в молекуле (>20%) может позволить использовать подобные структуры в качестве агентов для БНЗТ.

Исходные BODIPY (8-(2,3,4,5,6-пентафторфенил)-4,4-дифтор-4-бора-3α,4α-диаза-s-индацен и 8-(2,3,4,5,6-пентафторфенил)-1,3,5,7-тетраметил-4,4-дифтор-4-бора-3α,4α-диаза-s-индацен) получают по известным методикам [Н. R. A. Golf, Н.-U. Reissig, A. Wiehe. Org. Lett., 2015, 77, 982-985; G. Vives, С.Giansante, R. Bofinger, G. Raffy, A. Del Guerzo, B. Kauffmann, P. Batat, GJonusauskas, N. D. McClenaghan. Chem. Commun., 2011, 47, 10425-10427].

Соединения Ia-Ir получают взаимодействием 8-(2,3,4,5,6-пентафторфенил)-4,4-дифтор-4-бора-3α,4α-диаза-s-индацена или 8-(2,3,4,5,6-пентафторфенил)-1,3,5,7-тетраметил-4,4-дифтор-4-бора-3α,4α-диаза-s-индацена с 9-меркапто-мета-карбораном или 9-меркапто-орто-карбораном в диметилформамиде в присутствии ацетата натрия и последующей стандартной очисткой.

Соединения Iд и Ie получают взаимодействием 8-(2,3,4,5,6-пентафторфенил)-4,4-дифтор-4-бора-3α,4α-диаза-s-индацена или 8-(2,3,4,5,6-пентафторфенил)-1,3,5,7-тетраметил-4,4-дифтор-4-бора-3α,4α-диаза-s-индацена с 1-меркапто-1-карба-клозо-додекаборатом цезием в диметилформамиде в присутствии карбоната калия и последующей стандартной очисткой (Схема 1).

Соединения формулы I по настоящему изобретению являются доступными веществами: их получают с высокими выходами из доступных реагентов, используя одностадийный и технологичный способ синтеза.

Все полученные производные представляют собой микрокристаллы темно-красного цвета, хорошо растворимые в хлороформе (соединения Ia-Iг), ацетоне, этилацетате, диметилсульфоксиде, диметилформамиде, воде (соединения Iд-Ie).

Изобретение иллюстрируется конкретными примерами его осуществления и результатами испытаний цитотоксичности заявляемых соединений Ia-Ie, приведенными ниже.

Общая методика получения карборановых производных BODIPY Ia-Iг

К раствору 0.2 ммоль 8-(2,3,4,5,6-пентафторфенил)-4,4-дифтор-4-бора-3α,4α-диаза-s-индацена или 8-(2,3,4,5,6-пентафторфенил)-1,3,5,7-тетраметил-4,4-дифтор-4-бора-3α,4α-диаза-s-индацена в диметилформамиде прибавляют 1.0 ммоль 9-меркапто-мета-карборана или 9-меркапто-орто-карборана и 0.2 ммоль безводного ацетата натрия. Реакционную смесь перемешивают в атмосфере аргона в течении 60 минут при комнатной температуре в темноте. Реакционную смесь выливают в 200 мл воды, экстрагируют 100 мл этилацетата, этилацетат промывают водой 3 раза по 100 мл. Растворитель упаривают в вакууме, продукт помещают на колонку с силикагелем, хроматографируют на силикагеле 40X60, элюент - гексан - этилацетат (7:3).

Пример 1

8-[4-(м-карборан-9-илтио)-2,3,5,6-тетрафторфенил]-4,4-дифтор-4-бора-3α,4α-диаза-s-индацен (Ia). Выход 68 мг.(66.1%). MS (MALDI): m/z [Μ+] для C17H17B11N2F6S вычислено 514.211; найдено 514.215. Ик-спектр (KBr), ν, см-1: 3069 (СН карборана), 2616 (ВН карборана), 1567, 1471 (С=С, C=N), 1190, 1254 (BF2). Электронный спектр ((СН3)2СО), λmax, нм, (ε 10-3): 513 (42.8). 1H-ЯМР спектр (400 МГц, CDC13) δ, м.д.: 7.99 (с, 2Н, Η пиррола), 6.84 (д, J=3.81 Гц, 2Н, Η пиррола), 6.59 (д, J=3.81 Гц, 2Н, Η пиррола). 3.05 (уш.с, 2Н, СН карборана). 11В-ЯМР спектр (128 МГц, CDCl3) δ, м.д.: 0.21 (т, J=28,39 Гц, 1B, BF2,), -1.19 (уш.с,1IB), -6.25 (д, J=158,5 Гц, 2B), -9.54 (d, J=156,1 Гц, 1B)-12.34 - -14.28 (м, 5B), -17.36 (д, 1B, J=182,1 Гц). 19F-ЯМР (376 МГц, CDC13); δ, м.д.: -129.71 (дд, J=24.42, 9.16 Гц, 2F, opmo-F), -137.48 (дд, J=21.36, 9.16 Гц, 2F, мета-F), -144.83 (дд, J=57.98, 30.52 Гц, 2F, BF2).

Пример 2

8-[4-(м-карборан-9-илтио)-2,3,5,6-тетрафторфенил]-1,3,5,7-тетраметил-4,4-дифтор-4-бора-3α,4α-диаза-s-индацен (Iб). Выход 78 мг (68.4%). MS (MALDI): m/z [Μ+] для C21H25B11N2F6S вычислено 570.274; найдено 570.271. Электронный спектр ((СН3)2СО) λmax нм (ε 10-3): 513 (46.3). ИК-спектр (KBr), ν, см-1 3063 (СН карборана), 2612 (ВН карборана), 1551, 1471 (С=С, C=N), 1190 (BF2). 1Н-ЯМР спектр (400 МГц, CDC13) δ, м.д.: 6.06 (с, 2Н, Η пиррола), 3.01 (уш.с, 2Н, СН карборана), 2.59 (с, 6Н, СН3), 1.64. (с, 6Н, СН3). 11В-ЯМР спектр (128 МГц, CDCl3) δ, м.д.: 0.268 (т, J=30,75 Гц, 1B, BF2), -1.23 (уш.с, 1B), -6.11 (д, J=170,3 Гц, 2B), -9.71 (д, J- 151,4 Гц, 1B), -12.43 - -14.35 (м, 5В), -17.46 (д, J=184,5 Гц, 1В). 19F-ЯМР спектр (376 МГц, CDCl3); δ, м.д.: -129.93 (дд, J=24.09, 11.48 Гц, 2F, opmo-F), -140.07 (дд, J=25.24, 12.63 Гц, 2F, мета-F), -146.09 (дд, J=64.25, 32.13 Гц, 2F, BF2).

Пример 3

8-[4-(о-карборан-9-илтио)-2,3,5,6-тетрафторфенил1-4,4-дифтор-4-бора-3α,4α-диаза-s-индацен (Iв). Выход 62 мг, (60.3%). MS (MALDI): m/z [М+] для C17H17B11N2F6S вычислено 514.211; найдено 514.212. ИК-спектр (KBr), ν, см-1: 3090 (СНкарборана), 2605 (ВНкарборана), 1577, 1473 (C=С, C=N), 1228 (BF2). Электронный спектр ((СН3)2СО) λmax нм (ε 10-3): 513 (41.1). 1Н-ЯМР спектр (400 МГц, CDC13) δ, м.д.: 7.99 (с, 2Н, Η пиррола), 6.84 (д, J=3.50 Гц, 2Н, Η пиррола), 6.59 (d, J=3.81 Гц, 2Н, Η пиррола). 3.67 (уш.с, 1Н, СН карборана), 3.55 (уш.с, 1Н, СН карборана). 11В-ЯМР спектр (128 МГц, CDC13) δ, м.д.: 5.42 (уш.с, 1В), 0.21 (т, 1B, J=28,4 Гц, BF2), -2.10 (д, J=144,3 Гц, 1В), -8.59 (д, J=153,7 Гц, 2В), -13.63 --16.06 (м, 6В). 19F-ЯМР спектр (376 МГц, CDC13); δ, м.д.: -129.83 (дд, J=24.41, 9.15 Гц, 2F, opmo-F), -137.82 (дд, J=24.41, 9.15 Гц, 2F, мета-F), -144.83 (дд, J=57.98, 27.47 Гц, 2F, BF2).

Пример 4

8-[4-(о-карборан-9-илтио)-2,3,5,6-тетрафторфенил]-1,3,5,7-тетраметил-4,4-дифтор-4-бора-3α,4α-диаза-s-индацен (Iг). Выход 73 мг, (64.0%). MS (MALDI): m/z [Μ+] для C21H25B11N2F6S вычислено 570.274; найдено 570.277. ИК-спектр (KBr), ν, см-1: 3073 (СН карборана), 2617 (ВН карборана), 1550, 1513, 1467 (С=С, C=N), 1190 (BF2). Электронный спектр ((СН3)2СО) λmax нм (ε 10-3): 513 (49.9). 1Н-ЯМР спектр (400 МГц, CDC13) δ, м.д.: 6.06 (с, 2Н, Η пиррола), 3.64 (уш.с, 1H, СН карборана), 3.53 (уш.с, 1H, СН карборана), 2.59 (с, 6Н, СН3), 1.64. (с, 6Н, СН3). 11В-ЯМР спектр (128 МГц, CDC13) δ, м.д.: 5.35 (уш.с, 1В), 0.68 (т, J=30,8 Гц, 1B, BF2), -2.04 (д, J=151,4 Гц, 1В), -8.68 (д, J=153,7 Гц, 2В), -13.76 - -15.97 (м, 6В). 19F-ЯМР спектр (376 МГц, CDC13); δ, м.д.: -129.95 (дд, J=24.75, 11.00 Гц, 2F, opmo-F), -140.16 (дд, J=24.75, 11.00 Гц, 2F, мета-F), -146.07 (дд, J=63.23, 30.24 Гц, 2F, BF2).

Общая методика получения карборановых производных BODIPY Iд-Ie

К раствору 0.2 ммоль 8-(2,3,4,5,6-пентафторфенил)-4,4-дифтор-4-бора-3α,4α-диаза-s-индацена или 8-(2,3,4,5,6-пентафторфенил)-1,3,5,7-тетраметил-4,4-дифтор-4-бора-3α,4α-диаза-s-индацена в диметилформамиде прибавляют 1.0 ммоль 1-меркапто-1-карба-клозо-додекабората цезия и 0.2 ммоль безводного K2CO3. Реакционную смесь перемешивают в атмосфере аргона в течение 8 часов при комнатной температуре в темноте. Реакционную смесь выливают в 200 мл воды, экстрагируют 100 мл этилацетата, этилацетат промывают водой 3 раза по 100 мл. Растворитель упаривают в вакууме, продукт помещают на колонку с силикагелем, хроматографируют на силикагеле 40X60, элюент - хлороформ - ацетон (2: 1).

Пример 5

8-[4-(1-карба-клозо-додекаборан-1 -илтио)-2,3,5,6-тетрафторфенил]-4,4-дифтор-4-бора-3α,4α-диаза-s-индацен} цезий (Iд). Выход 108 мг, (83.6%). MS (MALDI): м/z [Μ+] для C16H17B12N2F6SCs вычислено 646.126; найдено 646.129. ИК-спектр (KBr), ν, см-1: 2540 (ВН карборана), 1576, 1470 (С=С, C=N), 1259 (BF2). Электронный спектр ((СН3)2СО) λmax нм (ε 10-3): 513 (37.2). 1Η-ЯМР спектр (400 МГц, (CD3)2CO) δ, м.д.: 8.16 (с, 2Н, Η пиррола), 7.18 (д, J=3.67 Гц, 2Н, Η пиррола), 6.75 (д, J=4.11 Гц, 2Н, Η пиррола). 11В-ЯМР спектр (128 МГц, (CD3)2CO) δ, м.д.: 0.23 (т, J=28,39 Гц, 1B, BF2), -8.68 (d, J=135 Гц, 1B), -12.64 (d, J=142 Гц, 10 В). 19F-ЯМР спектр (376 МГц, (CD3)2CO); δ, м.д.: -129.14 (дд, J=24.75, 11.00 Гц, 2F, opmo-F), -140.52 (дд, J=24.75, 11.00 Гц, 2F, мета-F), -144.38 (дд, J=57.74, 30.24 Гц, 2F, BF2).

Пример 6

8-[4-(1-карба-клозо-додекаборан-1-илтио)-2,3,5,6-тетрафторфенил]-1,3,5,7-тетраметил-4,4-дифтор-4-бора-3α,4α-диаза-s-индацен} цезий (Ie). Выход 102 мг (72.6%). MS (MALDI): м/z [М+] для C20H25B12N2F6SCs вычислено 702.189; найдено 702.185. ИК-спектр (KBr), ν, см-1: 2536 (ВН карборана), 1553, 1512, 1469 (С=С, C=N), 1190, 1193 (BF2). Электронный спектр ((СН3)2СО) λmax нм (ε 10-3): 513 (51.9). 1Н-ЯМР спектр (400 МГц, (CD3)2CO) δ, м.д.: 6.28 (с, 2Н, Η пиррола), 2.55. (с, 6Н, СН3), 1.72. (с, 6Н, СН3). 11В-ЯМР спектр (128 МГц, (CD3)2CO) δ, м.д.: 0.63 (т, J=33,12 Гц, 1B, BF2), -8.66 (d, J=134,8 Гц, 1B), -12.73 (d, J=141.9 Гц, 10 В). 19F-ЯМР спектр (376 МГц, (CD3)2CO); δ, м.д.: -128.32 (дд, J=24.75, 11.00 Гц, 2F, opmo-F), -142.77 (дд, J=24.75, 11.00 Гц, 2F, мета-F), -145.58 (дд, J=63.23, 32.99 Гц, 2F, BF2).

Ниже представлены результаты серии испытаний цитотоксичности в условиях темнового эксперимента и эксперимента с фотовозбуждением представителей заявляемых соединений Ia-Ie.

Результаты испытаний показали, что соединения Ia-Ie проявляют значительную активность на культивируемых злокачественных клетках (темновая и фотоиндуцированная в терапевтических концентрациях), что позволяет считать их перспективными «drug candidates) для дальнейших исследований как противоопухолевых агентов.

Результаты исследования темновой и фототоксичности соединений на культуре опухолевых клеток

Препараты для исследований

Для исследований получены соединения Ia-Ie. Соединения растворяли в ДМСО до концентрации стокового раствора 10 мМ.

Культивируемая клеточная линия

Для экспериментов использована линия НСТ116 (карцинома толстой кишки человека). Клетки НСТ116 культивировали в среде DMEM с добавлением следующих компонентов до конечных концентраций: 5% эмбриональной телячьей сыворотки, 2 mM L-глутамина, 100 ЕД/мл пенициллина и 100 мкг/мл стрептомицина (ПанЭко, Россия), инкубация проводилась при 37°С, 5% CO2 в увлажненной атмосфере. В экспериментах использованы клетки в логарифмической фазе роста.

ΜТТ-тест для исследования цитотоксичности

Цитотоксическое действие соединений исследовали в МТТ-тесте (по восстановлению желтой соли 3-4,5-диметилтиазол-2-ил-2,5-дифенилтераразола в темно-синий кристаллический формазан митохондриями живых клеток). По результатам исследования цитотоксичности построены кривые выживаемости и определены значения концентрации, необходимые для гибели 50% клеток -IC50.

Клетки рассевали в лунки 96-луночного планшета (NUNC, США) (5000 клеток в 190 мкл культуральной среды), инкубировали 24 часа при 37°С, 5% CO2, в увлажненной атмосфере. Вносили по 10 мкл раствора исследуемых веществ в культуральной среде, приготовленных серийными разведениями из исходного раствора, до 10 конечных концентраций.

Контролем в эксперименте служили клетки без препарата (интактные).

Исследование темновой цитотоксичности

Клетки с препаратами инкубировали 72 ч при 37°С, 5% CO2, в увлажненной атмосфере. За 1 ч до окончания инкубации в лунки вносили по 20 мкл водного раствора МТТ (5 мг/мл, ПанЭко, Россия) и инкубировали при 37°С, 5% CO2, в увлажненной атмосфере 1,5 ч. После окончания инкубации культуральную среду отбирали, клетки ресуспендировали в 100 мкл ДМСО и измеряли оптическую плотность раствора на планшетном спектрофотометре Multiscan FC (Thermo Scientific, США) при длине волны 570 нм. Процент клеток, выживших при действии каждой дозы соединения, подсчитывали как частное от деления средней оптической плотности в лунках после инкубации с данной дозой к средней оптической плотности контрольных лунок (значения последних приняты за 100%). По результатам построены кривые выживаемости и определены показатели IC50.

Исследование фотоиндуцированной цитотоксичности

Клетки рассевали в лунки 96-луночного планшета (NUNC, США) (5000 клеток в 190 мкл культуральной среды), инкубировали 24 часа при 37°С, 5% CO2, в увлажненной атмосфере. Вносили по 5-10 мкл раствора исследуемых веществ в культуральной среде, приготовленных серийными разведениями из исходного раствора, до 10 конечных концентраций).

Клетки с препаратами инкубировали при 37°С, 5% CO2 в течение 72 часов. Затем освещали диодным источником на 530 нм (АФС, Полироник, Россия) с плотностью дозы 30 Дж/см2. После окончания освещения в лунки вносили по 20 мкл водного раствора МТТ (5 мг/мл, ПанЭко, Россия) и инкубировали при 37°С, 5% CO2, в увлажненной атмосфере 1,5 ч. После окончания инкубации культуральную среду отбирали, клетки ресуспендировали в 100 мкл ДМСО и измеряли оптическую плотность раствора на планшетном спектрофотометре Multiscan FC (Thermo Scientific, США) при длине волны 570 нм. Процент клеток, выживших при действии каждой дозы соединения, подсчитывали как частное от деления средней оптической плотности в лунках после инкубации с данной дозой к средней оптической плотности контрольных лунок (значения последних приняты за 100%). По результатам построены кривые выживаемости и определены показатели IC50.

1. Соединения формулы I

,

где

2. Соединения по п. 1, проявляющие противоопухолевую активность.



 

Похожие патенты:

Настоящее изобретение относится к способам получения новых каркасных борорганических соединений, а именно к способу получения спиро[адамантан-2,2′-бориранов] формулы (1а,б). Согласно предложенному способу дихлорборан RBCl2⋅SMe2, где R = циклооктил или экзонорборнил, предварительно полученный взаимодействием цис-циклооктена или норборнена с НBCl2⋅SMe2 при комнатной температуре примерно 20‒22°С в инертной атмосфере в течение 4 ч, взаимодействует с метилиденадамантаном в присутствии катализатора Cp2TiCl2 и порошка Mg при мольном соотношении RBCl2⋅SMe2:метилиденадамантан:Mg:Cp2TiCl2 = (10÷12):10:10:(1.8÷2.2) в тетрагидрофуране и инертной атмосфере при температуре примерно 60°С в течение 6-8 ч с последующим окислением кислородом воздуха.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к способу получения конъюгатов олигонуклеотидов с кластерами бора, и может быть использовано для получения конъюгатов олигонуклеотидов, содержащих 4 кластера бора на 5’-конце. Предварительно получают аминопроизводное на основе пентаэтиленгексамина и диоксониевого производного тетрабутиламмония клозо-додекабората, которое затем присоединяют к олигонуклеотиду с последующей обработкой и очисткой полученного конъюгата.

Настоящее изобретение относится к соединению, имеющему структуру Формулы (1), или к его фармацевтически приемлемой соли, обладающим иммуномодулирующими свойствами, которые действуют через TLR7 и которые полезны при лечении вирусных инфекций и раковых заболеваний. (1),где R1a выбирают из группы, состоящей из H, C1–C4 алкила и A, где алкил необязательно замещен –COOH, –SO2CH3, –SCH3, –OCH3, или A; R1b представляет собой C2–C5 алкил; X представляет собой C1–C4 алкил, где алкил необязательно замещен A или –OH; L1 выбирают из группы, состоящей из связи, –CH2–, -О- и –CH2CH2–; Y выбирают из группы, состоящей из C1–C3 алкила и С6 арила, где С6 арил необязательно замещен 1–5 заместителями, которые независимо выбирают из A, C1–C3 алкила, и C1–C3 алкокси; A выбирают из группы, состоящей из , , , , и ; L2 выбирают из группы, состоящей из связи, –(CH2)n–, –C(O)NH(CH2)n–, , и ; m представляет собой целое число от нуля до четырех; n представляет собой целое число от одного до четырех; где соединение замещено по меньшей мере одним А.

Изобретение относится к способу получения замещенного бицикло[1,1,1]пентана формулы (I). Способ включает: приведение в контакт соединения формулы (А) с соединением формулы (B) в присутствии первого катализатора на основе переходного металла, необязательно второго катализатора на основе переходного металла и необязательно основания, при условиях, выбранных для образования соединения формулы (I); причем соединение формулы (A) имеет структуру, как показано далее, где R1 выбран из группы, состоящей из C6-10 арила, замещенного незамещенным С1-4 алкилом, бензоксазола, замещенного незамещенным С1-4 алкилом, C-карбокси, замещенного незамещенным С1-4 алкилом, , и первого борсодержащего фрагмента, причем первый борсодержащий фрагмент связан посредством бора; причем первый борсодержащий фрагмент выбран из группы, состоящей из и ; где X1 выбран из группы, состоящей из –C(=O)Y, и второго борсодержащего фрагмента; причем второй борсодержащий фрагмент выбран из группы, состоящей из , и ; причем соединение формулы (B) имеет структуру R2-X2; где R2 выбран из группы, состоящей из C6-10 арила, замещенного незамещенным С1-4 алкилом или С1-4 алкокси, пиридина, замещенного С1-6 галогеналкилом, пиримидина и хинолина; где X2 выбран из группы, состоящей из хлорида, бромида, иодида и псевдогалогенида, где псевдогалогенид представляет собой сульфонат, фосфат, цианид, азид, изоцианат, тиоизоцианат или четвертичный азотный фрагмент; причем первый катализатор на основе переходного металла выбран из группы, состоящей из Pd катализатора и Ni катализатора, где Pd катализатор выбран из группы, состоящей из Pd(PPh3)4 и PdCl2(dppf); и где Ni катализатор представляет собой NiCl2⋅диметоксиэтан; причем второй катализатор на основе переходного металла представляет собой Ir катализатор, где Ir представляет собой Ir[dF(CF3)ppy]2(dtbpy)PF6; причем соединение формулы (I) имеет структуру как показано далее; причем связь между R2 и бицикло[1,1,1]пентаном в соединении формулы (I) представляет собой углерод-углеродную связь; причем Y выбран из группы, состоящей из OR6 и OM; причем R6 представляет собой водород; и где М представляет собой одновалентный катион; при условии, что по меньшей мере один из X1 и X2 не является борсодержащим фрагментом; и при условии, что если второй катализатор на основе переходного металла присутствует, то или X1 или X2 представляет собой –C(=O)Y.

Изобретение относится к способу получения замещенного бицикло[1,1,1]пентана формулы (I). Способ включает: приведение в контакт соединения формулы (А) с соединением формулы (B) в присутствии первого катализатора на основе переходного металла, необязательно второго катализатора на основе переходного металла и необязательно основания, при условиях, выбранных для образования соединения формулы (I); причем соединение формулы (A) имеет структуру, как показано далее, где R1 выбран из группы, состоящей из C6-10 арила, замещенного незамещенным С1-4 алкилом, бензоксазола, замещенного незамещенным С1-4 алкилом, C-карбокси, замещенного незамещенным С1-4 алкилом, , и первого борсодержащего фрагмента, причем первый борсодержащий фрагмент связан посредством бора; причем первый борсодержащий фрагмент выбран из группы, состоящей из и ; где X1 выбран из группы, состоящей из –C(=O)Y, и второго борсодержащего фрагмента; причем второй борсодержащий фрагмент выбран из группы, состоящей из , и ; причем соединение формулы (B) имеет структуру R2-X2; где R2 выбран из группы, состоящей из C6-10 арила, замещенного незамещенным С1-4 алкилом или С1-4 алкокси, пиридина, замещенного С1-6 галогеналкилом, пиримидина и хинолина; где X2 выбран из группы, состоящей из хлорида, бромида, иодида и псевдогалогенида, где псевдогалогенид представляет собой сульфонат, фосфат, цианид, азид, изоцианат, тиоизоцианат или четвертичный азотный фрагмент; причем первый катализатор на основе переходного металла выбран из группы, состоящей из Pd катализатора и Ni катализатора, где Pd катализатор выбран из группы, состоящей из Pd(PPh3)4 и PdCl2(dppf); и где Ni катализатор представляет собой NiCl2⋅диметоксиэтан; причем второй катализатор на основе переходного металла представляет собой Ir катализатор, где Ir представляет собой Ir[dF(CF3)ppy]2(dtbpy)PF6; причем соединение формулы (I) имеет структуру как показано далее; причем связь между R2 и бицикло[1,1,1]пентаном в соединении формулы (I) представляет собой углерод-углеродную связь; причем Y выбран из группы, состоящей из OR6 и OM; причем R6 представляет собой водород; и где М представляет собой одновалентный катион; при условии, что по меньшей мере один из X1 и X2 не является борсодержащим фрагментом; и при условии, что если второй катализатор на основе переходного металла присутствует, то или X1 или X2 представляет собой –C(=O)Y.

Изобретение относится к способу получения 18F-БФА (2-фтор-4-бор-L-фенилаланина), имеющего структуру Способ включает взаимодействие промежуточного соединения I-2 с ионом 18F с получением 18F-замещенного соединения I-2снятие защиты с 18F-замещенного соединения с получением 18F-БФА где R10 и R20 представляют собой ОН или взятые вместе с атомом бора, к которому они присоединены, представляют собой заместитель, гидролизуемый до группы борной кислоты, R3 или R4 независимо представляет собой водород, аминозащитную группу или -NR3R4 представляет собой и R5 представляет собой карбоксилзащитную группу.

Изобретение относится к способу получения 18F-БФА (2-фтор-4-бор-L-фенилаланина), имеющего структуру Способ включает взаимодействие промежуточного соединения I-2 с ионом 18F с получением 18F-замещенного соединения I-2снятие защиты с 18F-замещенного соединения с получением 18F-БФА где R10 и R20 представляют собой ОН или взятые вместе с атомом бора, к которому они присоединены, представляют собой заместитель, гидролизуемый до группы борной кислоты, R3 или R4 независимо представляет собой водород, аминозащитную группу или -NR3R4 представляет собой и R5 представляет собой карбоксилзащитную группу.

Изобретение относится к соединению, имеющему структуру формулы I или II, или его фармацевтически приемлемым солям. В формулах I и II: Y1 представляет собой CR4; (a) m представляет собой 0 или 1, R2 и R3 совместно с атомами, к которым они присоединены, образуют конденсированное кольцо или кольцевую систему, выбранную из группы, состоящей из C3-7циклоалкила и 3-10-членного гетероциклила, содержащего один или несколько атомов кислорода, каждый из которых необязательно замещен одним или более R5, и каждый из R1, R4, Ra и Rb представляет собой водород; или (b) m представляет собой 0, R3 и R4 совместно с атомами, к которым они присоединены, образуют спироциклическое кольцо или кольцевую систему, выбранную из группы, состоящей из C3циклоалкила, и каждый из R1 и R2 представляет собой водород; R5 представляет собой -Y5-(CH2)t-G; t представляет собой целое число, составляющее 0 или 1; G выбран из группы, состоящей из H, галогена и гидрокси; A представляет собой C6-10арил или 5-10-членный гетероарил, содержащий один или несколько атомов азота, каждый из которых необязательно замещен одним или более R12; R6 представляет собой -C(O)OR; R выбран из группы, состоящей из H, -CR10R11OC(O)C1-9алкила, -CR10R11OC(O)C3-7карбоциклила, -CR10R11OC(O)(3-7-членного гетероциклила, где гетероциклил содержит один или несколько атомов азота или кислорода), -CR10R11OC(O)C2-8алкоксиалкила, -CR10R11OC(O)OC1-9алкила, -CR10R11OC(O)OC3-7карбоциклила, -CR10R11OC(O)O(3-7-членного гетероциклила, где гетероциклил содержит один или несколько атомов азота или кислорода), -CR10R11OC(O)OC2-8алкоксиалкила, -CR10R11C(O)NR13R14, -CR10R11OC(O)O(CH2)1-3C(O)NR13R14, -CR10R11OC(O)O(CH2)2-3OC(O)C1-4алкила, -CR10R11OC(O)O(CH2)1-3C(O)OC1-4алкила, -CR10R11OC(O)(CH2)1-3OC(O)C1-4 алкила и ; R7 представляет собой -OH; каждый R10 и R11 независимо представляет собой H или незамещенный C1-4алкил; R12 представляет собой водород, галоген или необязательно замещенный C1-6алкокси; каждый R13 и R14 независимо представляет собой незамещенный C1-6алкил; R15 представляет собой незамещенный C1-6 алкил; Y2 представляет собой -O-; Y3 представляет собой -OH; Y4 представляет собой -OH; и Y5 отсутствует.

Изобретение относится к соединению, имеющему структуру формулы I или II, или его фармацевтически приемлемым солям. В формулах I и II: Y1 представляет собой CR4; (a) m представляет собой 0 или 1, R2 и R3 совместно с атомами, к которым они присоединены, образуют конденсированное кольцо или кольцевую систему, выбранную из группы, состоящей из C3-7циклоалкила и 3-10-членного гетероциклила, содержащего один или несколько атомов кислорода, каждый из которых необязательно замещен одним или более R5, и каждый из R1, R4, Ra и Rb представляет собой водород; или (b) m представляет собой 0, R3 и R4 совместно с атомами, к которым они присоединены, образуют спироциклическое кольцо или кольцевую систему, выбранную из группы, состоящей из C3циклоалкила, и каждый из R1 и R2 представляет собой водород; R5 представляет собой -Y5-(CH2)t-G; t представляет собой целое число, составляющее 0 или 1; G выбран из группы, состоящей из H, галогена и гидрокси; A представляет собой C6-10арил или 5-10-членный гетероарил, содержащий один или несколько атомов азота, каждый из которых необязательно замещен одним или более R12; R6 представляет собой -C(O)OR; R выбран из группы, состоящей из H, -CR10R11OC(O)C1-9алкила, -CR10R11OC(O)C3-7карбоциклила, -CR10R11OC(O)(3-7-членного гетероциклила, где гетероциклил содержит один или несколько атомов азота или кислорода), -CR10R11OC(O)C2-8алкоксиалкила, -CR10R11OC(O)OC1-9алкила, -CR10R11OC(O)OC3-7карбоциклила, -CR10R11OC(O)O(3-7-членного гетероциклила, где гетероциклил содержит один или несколько атомов азота или кислорода), -CR10R11OC(O)OC2-8алкоксиалкила, -CR10R11C(O)NR13R14, -CR10R11OC(O)O(CH2)1-3C(O)NR13R14, -CR10R11OC(O)O(CH2)2-3OC(O)C1-4алкила, -CR10R11OC(O)O(CH2)1-3C(O)OC1-4алкила, -CR10R11OC(O)(CH2)1-3OC(O)C1-4 алкила и ; R7 представляет собой -OH; каждый R10 и R11 независимо представляет собой H или незамещенный C1-4алкил; R12 представляет собой водород, галоген или необязательно замещенный C1-6алкокси; каждый R13 и R14 независимо представляет собой незамещенный C1-6алкил; R15 представляет собой незамещенный C1-6 алкил; Y2 представляет собой -O-; Y3 представляет собой -OH; Y4 представляет собой -OH; и Y5 отсутствует.

Изобретение относится к способу получения ваборбактама I. Способ включает этапы (1)-(6).

Настоящее изобретение относится к новому спиробициклическому аналогу формулы (I) или к его фармацевтически приемлемой соли присоединения , которые пригодны в качестве ингибиторов PRMT5. Кроме того, настоящее изобретение относится к фармацевтическим композициям, содержащим указанные соединения в качестве активного ингредиента, а также к промежуточным соединениям для получения данных соединений.
© Патентный поиск, поиск патентов на изобретения - FindPatent.RU 2012-2024
Политика конфиденциальности 2022-04-29 2023-02-02T12:00:27
Наверх