'союзная
ОП ИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕН ИЯ
К АВТОРСКОМУ СВМДЕТЕЛЬСТВУ
36II97
Союз Советских
Социалистических
Республик
Зависимое от авт. свидетельства №
Заявлено 16.111.1971 (№ 1634857)31-16) с присоединением заявки №
Приоритет
М. Кл. С 12d 9/14
Комитет по делам изобретений и открытий при Совете Министров
СССР
Опубликовано 07.Х|1.1972. Бюллетень № 1 за 1973
Дата опубликования описания 05.11.1973
УДК 615.779.9(088.8) Авторы изобретения
H. П. Фадеева, T. Я. Гончарская и З. М. Сингал
Всесоюзный научно-исследовательский институт антибиотиков
Заявитель
СПОСОБ ПЕРВИЧНОГО ОТБОРА ПРОТИВОВИРУСНЪ|Х
АНТИБИОТИКОВ
Изобретение относится к медицине, точнее к изысканию лекарственных препаратов, а именно к способам первичного отбора противовирусных антибиотиков.
По известному способу отбора,противовирусных антибиотиков по действию на систему фаг †индикаторн культура в качестве бактериального теста применяют кишечную палочку, в качестве системы фаг — индикаторная культура используют алнзогенную культуру и специфический фаг, полученный предварительным облучением лизогенной культуры ультрафиолетовым светом, оценку испытуемых антибиотнческих веществ проводят методом диффузии в агар.
Однако этот способ выявления антибиотиков с протнвовирусным действием осуществляется только на стадии готового препарата.
Цель изобретения — дифференцированное определение противовнрусных антибиотиков в ку льту ральны. < жидкостях актиномицетов — достигается путем использования лизогенной культуры Micrococcus lysodeil Отобранные методом диффузии в агар культу.ральные жидкости испытывают на ДНК- и РНК-содержащих тест-вирусах. Пример. Фагоиндуцнруюшучо н фагоингнбпруюшую активность в отношении фага лизогенной культуры Micrococcus lysodeii 53 — 40 (№ 5) определяют у свежевыделенных культур почвенных актнномвцетов, которые выращивают в погруженных условиях, например, на среде с кукурузным экстрактом, глюкозой, крахмалом, неорганическими солями при 26 — 28 С в течение 4 — 6 дней с помощью 10 метода диффузии в агар на чашках Петри. Первым слоем служит 1,5%-ный агар Хоттннгера (бульон Хоттннгера 70 яг-% ампнного азота, МаС! 0,5%, рН 7,2 — 7,4), вторым— 0,75%-ный агар того же состава. Для зара15 ження верхнего слоя 0,75%-ного агара используют 24 — 48-часовые клетки лизогенной и индикаторной культур в соотношении 1 — 600+ +200. Фильтр аты культур альных жидкостей вносят в количестве 0,3 л л в цилиндры, разме20 meIIIIIIe Ila поверхности агара. При наличии антифагового действия вокруг цилиндра образуются зоны усиленного роста тест-к1 льтуры, которые располагаются около цилиндра, если культура актиномицета не подавляет роста 25 тест-культур пли за бактериостатической зоной. При наличии индукции образуется большое количество негативных колоний, которые сливаясь часто образуют сплошную зону лизпса. 30 Эта зона располагается или же около цилинд361197 Составитель С. Щенева Редактор Г. Ивиенкова Корректоры: Л. Новожилова и Л. Бадылама Тсхред Т. Миронова Заказ 107/14 Изд. № 28 Тираж 404 Подписное ЦНИИПИ Когвптста по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР Москва, 7К-35, Раушская наб., д. 4/5 Типография, пр. Сапунова, 2 ра, или после бактериостатической и антифаговой зоны. Фильтраты культуральных жидкостей, индуцирующих и пе индуцирующих фаг испытывают затем в отношении ДНК-содержащего вируса, например осповакпины, и РНК-содержащего вируса, например вируса гриппа после предварительной проверки на токсичность для 10 †-дневных куриных эмбрионов. Гриппозную инфекцию получают введением в аллантоисную полость 10-дневных куриных эмбрионов алантоисной жидкости в обьеме 0,2 мл (.100 — 1000 ИД 50). Антибиотик вводят однократно в объеме 0,2 лл тем же способом. После 48 час инкубации при 37 С эмбрионы охлаждают при +4, вскрывают и для исследования отбирают аллантоисную жидкость. Интенсивность развития вируса определяют титром групповой реакции гемагглютинации (РГЛ) -ahpycoì 1 ф взвеси куриных эритроциДля, выяснения количества инфицированных эмбрионосв в"ф йпе ставят качественную пробу на наличйе гемагглютининов с аллантоиспой жидкостью каждого эмбриона. Титр групповой РГА в контроле обычно 1: 640 — 2560, реже 1: 320. Активность антибиотика оценивают индексом торможения гемагглютининов вируса (отношение титра РГА в контроле к титру РГА в опыте) . Двенадцатидневные куриные эмбрионы инфицируют вирусом осповакцины на хорионаллантоисную оболочку в объеме 0,1 л л. Антибиотик вводят в объеме 0,2 мл также на хо5 рионаллантоисную оболочку однократно. После 48 час инкубации при 37 С эмбрионы вскрывают и подсчитывают специфические поражения на хорионаллантоисных оболочках. Активность антибиотика оценивают по подав10 лению образования специфических поражений в опыте в о/о, принимая количество поражений в контроле за 100%. 15 Предмет изобретения Способ первичного отбора,противовирусных антибиотиков по действию на систему фаг— индикаторная культура с определением актив20 ности испытуемых веществ методом диффузии в агар, отличающийся тем, что, с целью дифференцированного определения антибиотиков в культуральных жидкостях актиномицетов, используют лизогенную культуру Micrococcus 25 lysodeikticus 53 — 40 в качестве источника фага и индикаторную культуру Micrococcus lysodeikticus 53 — 5, при соотношении титров культур 1 — 600+200, и отобранные методом диффузии в агар культуральные жидкости испытывают 30 па ДНК- и РНК- содержащих тест-вирусах.
