Библиотека

 

О П И С А Н И Е 370228

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советски

Социалистическими

Республик

3 а виси мое от а вт. свидетел ьства №

Заявлено 23.11.1971 (№ 1625089. 28-18) с присоединением заявки №

Приоритет

Опубликовано 15.11.1973. Бюллетень ¹ 11

Дата опубликования описания 21.IV.1973

М, Кл, С 12d 1/02

С 07с 5li00

Комитет по делам изобретений и открытий при Совете Министров

СССР

УДК 663 11(088 8) Авторы изобретения

И. И. Старовойтов, Л. А. Головлева, Г. К. Скрябин, В. Н. Кулаков и Л. В. Андреев

Институт биохимии и физиологии микроорганизмов АН СССР

Заявитель

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ 2,6-НАФТАЛИНДИКАРБОНОВОЙ

КИСЛОТЫ

MgSO4 7НзО

FeSO4 7НзО

СаС1е 6НеО

CuSO4.5Н О

НзРОс

ZnSО4 НзО

Мп504 Н О

ХаеМо04 2НзО

С!2 6НзО

0,05 1

0,01

0,01

0,002

0,0006

0,002

0,0003

0,0003

0,0005

Раствор микроэлементов

Изобретение относится к микробиологической промышленности.

Известен способ получения 2,6-нафталиндикарбоновой кислоты (НДКК) химическим путем прямым окислением 2,6-диметилнафталина (ДМН).

Предлагаемый способ получения 2,6-нафталиндикарбоновой кислоты является более простым по сравнению с известным.

Он дает возможность проводить окисление при помощи микроорганизмов рода Pseudomonas, выращенных на среде, содержащей глюкозу в качестве источника углерода, в частности вид putida штамм Р, а также микроорганизмы рода Nocardia, выращенные на среде, содержащей в качестве источника углерода н-алканы, в частности вид ораса штамм 264А. Процесс окисления ведут при атмосферном давлении при температуре 28—

30 С без образования побочных продуктов.

Пример 1. Культуру Pseudomonas поддерживают на мясопептонном атаре (МПА), выращивают в течение суток на среде МПА и суспензию выросшей культуры высевают в колбы Эрленмейера на 250 мл с жидкой средой, разлитой по 50 мл.

Состав среды следующий, мл:

К2НР04 10,0

КН2Р04 1,0

NH4NOc 2,0

1о СоС1з 6НеО 0,0005

Глюкоза 4,0

Одновременно с засевом в колбы вносят следовые количества 2,6-ДМН и после инкубации в течение 20 «ас при 30 С в колбах на

15 качалке вносят 30 мг 2,6-ДМН. Ферментация заканчивается спустя 48 «ас. Культуральную жидкость центрифугируют при 10000 об/мин, упаривают досуха на роторном испарителе при 50 С. Сухой остаток экстрагируют

20 10% -ным раствором уксусной кислоты в диэтиловом эфире для удаления неиспользованной глюкозы. К сухому остатку после экстракции добавляют 25%-ный раствор ХН,ОН. Нерастворимый остаток отфильтровывают и от25 брасывают. Фильтрат подкисляют ледяной

CHCOOH до рН 6,0 и оставляют на холоде.

Выпавшие кристаллы ам моний ной соли

2,6-НДКК отфильтровывают,,промывают небольшими порциями дистиллированной вольr зо и используют для идентификации. Идентич370228

0,8

0,5

0,7

1,5

65 ность аммонийной соли выделенной кислоты с аммонийной солью известной 2,6-НДКК установлена методами ИК-а 1Ф спектроскопии (1Ф-спектр Х„277 1; 286+1; 297+1 растворитель аммиак — изопропанол 6: 1) и методом тонкослойной хроматографии на окиси алюминия в системе метанол: аммиак: диметилформамид 2: 2: 1 Rf — 0,28 и на силикагеле (Silufol) в системе абсолютный этанол: аммиак 15: 1, Rf — 0,31. Т. пл. свыше

300 С с разложением.

Пример 2. Культуру Nocardia поддерживают на агаризованной среде Бушпель-Хааса с гексадексаном в качестве источника углерода, выращивают в течение д|вух суток и суспензию .выросшей культуры высевают в колбы

Эрленмейера на 250 мл с жидкой средой

8 — Е, разлитой по 50 мл.

Состав среды, г/л:

MgSO4 ° 7Н О

NaCl

КН2Р04 (NH4) НР04

Вода водопроводная до 1 л.

КН Р04 и (NH4) НР04 стерилизуются отдельно на дистиллированной воде.

Гексадекан добавляется дробно в течение трех дней в количестве 10 г/л.

Через 24 час после инокулирования в среду вносят 50 мг 2,6-ДМН. Процесс трансформации прослеживают с помощью хроматографии. Окисление прекращают на пятые сутки, культуральную жидкость упаривают досуха на роторном иопарителе при 55 С, осадок обрабатывают эфиром для удаления, парафина и алкилнафталина. Остаток растворяют в аммиаке, прогоняют через колонку с окисью алюминия, элюируя кислоту с колонки смесью аммиака и пропилового спирта, экстракт упаривают досуха и получают аммонийную соль

2,6-НДКК кислоты. Идентичность аммонийной соли выделенной кислоты с аммонийной солью известной 2,6-НДКК установлена методами

ИК-а и 1Ф спектроскопии (1Ф-спектр л.ш„., 277 +- 1, 286=1, 297+ 1, растворитель — аммиак: изопропанол 6: 1) и методом тонкослойной хроматографии на окиси алюминия в системе метанол: аммиак: диметилформамнд

2: 2: 1, Rf — 0,28 и на силикагеле (Silufol), в системе абсолютный этанол: аммиак 15: 1, Rf — 0,31. Т. пл. свыше 300 С с разложением.

Характеристика штамма P. Выделен из почвенных образцов, взятых на территории

Запорожского коксохимического завода в местах загрузки нафталина.

Культуральные признаки. Колонии на твердых питательных средах гладкие, плоские, блестящие, бесцветные или серовато-белые. На стандартной среде, предложенной Kimeg-etal образует флюоресцирующий пигмент.

Морфология культуры. Клетки палочковидные с округленными концами, 1,5 — 3,0 >< 0,6 р,, 5

1О

2О

25 зо

5О

55 подвижные с двумя-тремя полярными жгутиками, грамм-отрицательные.

Экологические признаки. Растет при 4 С, оптимум роста при 25" С, не растет при 41 С.

Физиологические признаки. Растет на обычных питательных средах, на синтетических средах растет предпочтительнее с нитратной формой азота, чем с аммиачной. Желатину не разжижает, молоко не изменяет, индол не продуцирует. Культура обладает запахом 3-метиламина. Нитраты восстанавливает.

Биохимические признаки. Трансформирует ароматические соединения нафталинового ряда в соокислительных условиях.

Характеристика штамма 264А. Выделен из активных илов Ангарского нефтеперерабатывающего завода.

Культуральные признаки. Колонии на мясопептонном агаре пастообразные, гладкие, блестящие, розово-палевые; колонии на суслоагаре — слизистые, водянистые, розоватые.

Морфология культуры. 24-часовая культур а на мясопвптонном бульоне имеет вид крупных палочек и нитей, искривленных с отчетливым ветвлением, длина отдельных клеток до 20 р,.

Через двое суток культура распадается на кокковидные фрагменты и имеет вид конгломератов из кокков.

Экологические признаки. Растет при температуре от 4 до 28 С, при значении рН от 5,0 до 9,0 растет при концентрации солей в среде до 5,0 /о.

Физиологические признаки. Строгий аэроб, растет на синтетических средах с добавлением комплекса витаминов группы В, усваивает глюкозу, галактозу, ксилозу, арабинозу, сахарозу, мальтозу, трегалозу, лактозу, раффинозу, маннит, глицерин, этанол, ацетат, бутират, лактат, сукцинат, фенол в качестве источников углерода.

Не усваивает пропионат, цитрат, бензоат.

В качестве источников азота усваивает нитратные и аммонийные соли, мочевину, аспарагин, пептон, гидролизат казеина.

Нитраты восстанавливает, ассимилирует н-парафин от октана до гептадекана включительно.

Биохимические признаки. Обладает каталазной активностью, пероксидазной не обладает, экстрацеллюлярную линазу не синтезирует, желатину, казеин, целлюлозу и крахмал не гидролизует.

Трансформирует ароматические соединения бензольного и нафталинового ряда в соокислительных условиях.

Предмет изобретения

1. Способ получения 2,6-нафталиндикарбоновой кислоты путем окисления 2,6-диметилнафталина, отличающийся тем, что, .с целью упрощения процесса, окисление проводят при помощи микроорганизмов.

370228

Составн гель М. Ларина

Техред Е. Борисова

Редактор А. Бер

Корректоры: В. Петрова и E. Давыдкина

Заказ 1015, 4 1! зд. М 224 Тир а ж 467 Подписное

Ц1-1ИИПИ Комитета по делам изобретений н открытий при Совете Министров СССР

Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4, 5

Типография, пр. Сапунова, 2

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что используют микроорганизмы рода Pseudomonas, выращенные на среде, содержащей глюкозу в качестве источника углерода.

3. Способ по пп. 1 и 2, отличающийся тем, что из рода Рзeudomonas используют вид

putida шта мм P.

4. Способ по п. 1, отличающийся тем, что используют микроорганизмы рода iNocardia, выращенные на среде, содержащей .в качестве источника углерода н-алканы.

5. Способ по п. 4, отличающийся тем, что из рода Nocardia используют вид ораса штамм

264А.