Способ получения листериозного аллергена

 

о и и с л я и-и

ИЗОБРЕТЕНИЯ

Союз Советских

Социалистических

Реслублик

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Зависимое от авт. свидетельства №вЂ”

М. Кл. А 61k 23!00

Заявлено ОЗЛ.1972 (№ 1732903р30-15) с присоединением заявки №вЂ”

Приоритет

Опубликовано 2?.1Х,1973. Бюллетень ¹" 38

Дата опубликования описания 18.1.1974

Государственный комитет

Совета Министров СССР по делам изобретений и- открытий

УДК 615.3,36(088.8) Автор изобретения

И. Г. Бузмаков

Алтайская научно-исследовательская ветеринарная станция

Заявитель

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЛИСТЕРИОЗНОГО АЛЛЕРГЕНА

Изобретение относится к способам получения биологических препаратов, например листериозного аллергена.

Известен способ получения листериозного аллергена, включающий выращивание бактерий с последующим разрушением их оболочки физическим воздействием, например замораживанием-оттаиванием, и экстракцию аллергически активных веществ. Однако этот способ не обеспечивает полного освобождения аллергически активных веществ, находящихся в оболочке микробной клетки.

С целью более полного извлечения аллергическп активных веществ и повышения специфической активности препарата по предлагаемому способу проводят дополнительное расщепление оболочки бактериальной клетки воздействием ферментов при температуре

30 — 40 и периодическом встряхивании.

Способ осуществляют следующим образом.

Берут. музейные штаммы листерий 9 — 127, 9 †1, 9 †1, 9 †1, 9 — 72 и другие с типичными морфологическими и биохимическими свойствами, принадлежащие к I — IV а и

IV в серотипам и выращивают в течение двух суток в пробирках при температуре 35 — 38 ча мясо-псптонном агаре с сахарами. Затем культуру псрссевают на матрацы с той же питательной средой. Двухсуточную культуру листерий смывают физиологическим раствором и трижды отмывают центрш11угированием при 4500 oo!òtí в течение 15 л1ин. Из полученной культуры готовят 20 миллиардную микробную взвесь на физиологическом растворе и в течение 15 суток подвергают двухкратпому замораживанию (16 II 4 час) и четырехчасовому оттаиванию с четырехкратным (по 30 11ин) шуттслпрованпсм по 2 раза утром и вечером. Степень разр шенпя мпк10 робных клеток контролиргют ItcpIIQ+II (ескоЙ микроскопией мазков и IIo количеству выросших колоний на пластинчатом агарс.

Приготовленную смесь лпстерий разбавляют в два раза универсальной буферной смс15 сью» доводят рН до 8,0 — 8,5. Далее добавляют трипспн пз расчета 0,5 г на 100 л1л микробной взвеси и выдерживают II pit температуре 30--40 в течение 3 час при псриэдпческом встрях11ванп11. В дальнсйшсм доводят

20 рН до 6,5 — 7,0 и добавляют рпбонуклсазу из расчета 40 — 60 г а 1 .11л и прп периодическом,встряхпванпп выдерживают 15 — 20 льин при указанном температурном режиме.

Доводят рI-I полученного экстракта до 7,4

25 и центрпфугпруют в течение 30 лиан при

6 000 об лен. И,"досадочную жидкост1. фильтруют через све1 : Шамбсрлспа а 5. Полученный препарат расфасовывают, автоклавируют при 0,5 атл1 в течение 30 л1ин и маркпру30 ют в серию. Аллерген, полученный предлагаеI

398253

Предмет изобретения

Составитель P. Махнюк

Техред Л. Богданова

Корректор Л, Царькова

Редактор В. Новоселова

Заказ .3694/!5 Изд. № 2029 Тираж 467 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4(б

Типография, пр. Сапунова, 2 мым сйособом, обладает повышенной специфической активностью, в 2 — 3 раза превышающей активность препаратов, полученных известными способами.

Способ получения листериозного аллергена, включающий выращивание бактерий с последующим разрушением их оболочки физическим воздействием, например замора>киванием-оттаиванием, и экстракцию аллергически активных веществ, отличающийся тем, что, с цслью более полного извлечения аллергически активных веществ и повышения специфической активности препарата, проводят дополнительное расщепление оболочки бактериа IbHQH клетки воздействием ферментов прп температуре 30 — 40 и периодическом

10 встряхивании.