Способ выделения экзотоксимного комплекса

 

t, О l1 И С А Н И Е 39952I

Союз Советск й

Социалистических

Республик

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ ф Ъ@, ))3

>Ъ

° eL ф =и

Зависимое от авт. свидетельства !е

Заявлено 22.Х!.1971 (№ 1716651, 30-15) с присоединением заявки М

Приоритет

Опубликовано 03.Х.1973. Бюллетень ЛЪ 39

Дата опуолпкованпя oil!!ca»»)t:).11.1971.Ч, Кл. С 121 7 00

Государственный комитет

Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

УДК 63:576.8(08S.S) Авторы изобретения О. А. Алешина, В. Б. Фрейман, А. А. Чупин, Л. П. Синицина, Н. А. Острогская, А, И. Глушкова, С. Б. Тихомирова, А. И. Малькова, Н, А. Белова, К. В. Кирюхин, 3. П. Федосова, H. К. Федоров и 3. А. Скорикова

Всесоюзный научно-исследовательский институт микробиологических средств защиты растений и бактериальных препаратов

Заявитель

СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ ЭКЗОТОКСИННОГО КОМПЛЕКСА

ИЗ КУЛЬТУРАЛЬНОЙ ЖИДКОСТИ BACILLUS

INSECTUS Gus

Изобретение относится к сельскохозяйственной микробиологпи, в частности к способам производства энтомопатогенных препаратов, в особенности к способам выделения токсинов.

Известны способы выделения токсинов. Из пих паиболсс близким к предлагаемому как по количеству совпадающих признаков, так и достигаемому эффекту, является способ выделения и очистки экзотоксинного комплекса, описанный Варжаком и Дсдондером. Это г спосоо включает предварительную фильтрацию культуральной жидкости, последующую многоступенчатую обработку уксуснокислой ртутью, затем ccp

0,01 М этплсндиамшггетрауксусной кислоToll. H0c, 1с 3ToI о э710ПРУют TOP )IocTHOII 7hlihlll экзотокспппый комплекс аммонийпым спиртом. Получспшяй элюат высушивают под вакуумом при 40 С.

Однако такой способ не экономичен, поскольку предполагает обработку многих сотен и даже тысяч тонн жидкости для получения экзотоксина, содержание которого в

2 пей cîcòllâ.i)ic) в cl() 0,2 — 0,3",, (Ilo лхому весу).

ЦСЛЬЮ I!30 )pC ГС:11151 ЯH. !5!с ГС51 j) 1: рабОТ! ;1 способа, позволяющего Глlè»èòü затр;! I ы Iа

5 Выделение э! Зоток! 11111101 кО)! и, !Otic;1 Il.> культуральной жидкости.

Эта цель достигается тсм, чтo посс! полу)1сппЯ к) .7ьтУР!Iл1>пой il>ll;I 1300TII, со ГсРж »1Цс11 а ктивныс споры II 1:.р иста, !лl>l В pcç>) .1ьтате

)Q ьь!ращпваппя Вас. )п. .ес,Г!» С)!!к в фсрмсптсрс на жидко!1 cj)c 7c> пос. Ic l ll llc it а,1 я !й Г пз культуральпоп жидкое Гп любым известным способом, например ccH»pHpOH;III»C)l. I I:3 наДосГIДОч ной ж11. 1ЯОстп, в lloToj)011 с по . 101ЦЬ10

15 cоляноп I>IIc 70) ht 3П;111l ill!0 f)I I предела х 3,3 — —. 3,6 и) Tc) t, !() б;l н, 10111151 в ПГ с г.ксамстафосф;IT!,l»трпя 1!! МП)(РО;,1Г) до

17) 11301! коппс»!трГ!ции 1 „выдсля)от осадок

Э! ЛОТ!)и! Пll;l, IiOT()j)hilt 3 ДД;1 IHIOT Сеtl;If)IIP013il20 Illicit. В зГ)в!)сп)10cTII o t 1100t)>7);I II)toc Гll док,llIOO р!1С! I)Op51 ti)T В:)ICIIHIIIC i! Oi) HCÌC растворителя, Ital!I)Its!Op волы, для получс!!пя коппс!!тр!!Та, лицо высушив»ют любым пзвсстlI1 l:31 СПОСОО0..1, НОСКО 7hI>), Э! :>ОТОКСI!1!Нl>! и КО>125 плскс тсрмостабплсн и выдсржпв;!ст тсмпсратуру до 120 С.

I Ipliк!Сн Hit!

COI>PclTIITb ЗЗТР;111.1 1!» OUOI)%,7013

399521

Токсичность после

t . Осадка эезос хо- токсина в му вод до пер,,у вона ча л ьиоИсточник

5 пол v

Способ осли(дени я экзотоксииа экзотоксииа го ооъема 1 åî в о

1(ультуральиая жидкость, освобогкдсниа я от

СПОР lt t(Ptt CT3;Iлов

0,5

1;/ гсксамстафосфата натр11я Ilptl

pH=3,3-3,6

0,6

1 — 0,5

То >ке (контроль) Пред»cl

ИЗООР TC!IHЯ

Сос. авитсль М. Дранишников

Тсхрсд T. Ускова

Редактор Д. Пинчук

Корректор О. Тсорина

Заказ 182/8 И за, ¹ 100 Т .ра<к 407 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитеса Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4;5

Типография, пр. Сапунова, 2

1 т жидкости обрабатывают 34 кг осадка; отпадает нужда в больших количествах дорогостоящих реактивов; не требуется холодильная установка; длительность технологического процесса сокращается в пять — -шесть раз, П р H м е р. Культуралы1ую жидкость, содержащую экзотоксинный комплекс, получают путем выращивания Bacillus i17sectus GuK

B заводском фсрментере (полсзный объем 10

700 л) на обычной среде, содержащей 0,7", с технической глюкозы и 2Я> кукурузного экстракта (по сухому весу), при 28 C в течение

27и5 час при аэрации 1 объем воздуха на 1 объем среды в 1 мин, Фугат, содержащий экзотоксинный комплекс, отделяют от спор и кристаллов па сепараторе. С помощью 10ссной соляной кислоты рН фугата доводят до

3,3 — 3,6, после чего к нему добавляют гексамстафосфат натрия до конечной кош1сптра- 20 ции 1 "/ . Жидкость выдср>кива1от при KoilllaTной температуре в течение 1 час. Образовавшийся осадок азотоксинного комп IcKca отделяют на сепараторе. Собранный осадок высушивают в вакуум-сушильном шкафу прп 40 C 25 в течение 24 час. Выход экзотоксина по сухому весу (влажность 4 0) 0,5",с.

Токсичность культуральной жидкости и выдслclIHOI 0 Н3 нес экзотокси нного 1(охl и 7 Kca 30 изучена в сравнительных опыта.: и; комнатной мухе. Результаты представлены B таблице.

Ка видно из таблицы, ТоКсН шость экзотоксинного комплекса полностью сохрашьчась 35 при выделении его указанным способ(1м, : LK,„, -концентрация испытуемого раствора, вызыв<71о1цая гиосль 50;"; личинок комнатной мухи, 1. Способ Hl l;1cëñïèÿ: K80 I OKCHIIIIOI О ,7 c K C <7 H ну л ь г у р a,7 b I I O É iK H7 K O C T H B a C l! 1 u s

1пвес1пв Саик, вк;почаюгцпй удаление пз нес биомассы, спор и кристаллов, ог.1и<1а10и1ийг.<< тем, что, с целью спижсппя затрат Ila выде. гс и и с э к 3 0 т 0 K c H I I н О Г 0 и 0. 1 и л с к с а, и 0 с л сд и с с осуществляют путем подкислсния оставшейся культуралы:оп жидкости, предпочтительно соляной кислотой, до р1-1 3,3 — 3,6 и последующего добавлс1пгя гсксамстафосфата натрия.

2. Способ по п. !. отлтающш ся тем, что гсксамстафосфат натрия добавляют до копс-I11ой копцсптр:1цпп 1", ; (по сухому весу).