Способ получения вещества, снижающего уровень липидов и холестерина в крови

 

О П И С А Н И Е (») 4504I5

ИЗОБРЕТЕН Ия

Союз Советских

Социалистических

Респуолнк

К ПАТЕНТУ (61) Зависимый от патента (51) М. Кл. С 07g 17/00

А 61k 17/00 (22) Заявлено 10.03.72 (21) 1757348/31-16 (32) Приоритет — (31)— (33) Государственный комитет

Совета Министров СССР по делам нзооретеннй н OTKpblTMV (53) УДК 615.739(088.8) Опубликовано 15.11.74. Бюллетень зх" 42

Дата опубликования описания 07.05.75 (72) Авторы изобретения

Иностранцы

Тосихыро Хамакава, Мотоеси Кадзихара, Токаси Сузуе и Фумияки Огава (Япония) Иностранная фирма

«Тайхо Фармасьвтикал, Компани, Лимитед» (Япония) (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ВЕЩЕСТВА, СНИ)КАЮЩЕГО

УРОВЕНЬ ЛИПИДОВ И ХОЛЕСТЕРИНА В КРОВИ

Изобретение относится к медицине, в частности к биологически активным веществам.

Предложен способ получения вещества, снижающего уровень липидов и холестерина в крови, ранее в патентной литературе не описанный, заключающийся в том, что органы животных подвергают автолизу, из автолизата удаляют белки и соли путем диализа и осаждения и выделяют целевой продукт из концентрированного раствора осаждением органическим растворителем.

Вещество, полученное предложенным способом, представляет собой белый или слегка желтоватый порошок, легко растворимый в воде, но нерастворимый в метаноле, этаполе, ацетоне, бензоле и диэтиловом эфире. Оно обладает положительной реакцией при испытании по нингидриновому способу, способу Фолин-Лори, способу Элсона-Моргана и фенолсерному способу M. Дюбуа, реакция отрицательна на способ Фиске-Сюббероу, дифениламиновый спосоо и орцинольный способ. Интенсивность окрашивания, полученного при нингидроновой реакции, понижается, если вещество подвергают гидролизу в кислой или щелочной среде, в то же время окрашивание неинтенсивное, если указанное вещество подвергают гидролизу в присутствии протеазы.

Вещество, полученное описываемым способом, обладает термостойкостью. Даже при нагревании 10% -ного водного раствора вещества при 100 С в течение 30 мин его фармакологическая активность совсем пе уменьшается.

Однако гидролнз в присутствии кислоты, щелочи и протеазы приводит к потере всех фармакологических свойств. Кроме того, применение депротеинизирующего средства, например хлористого натрия, сульфата аммония, трихлоруксусной кислоты, надхлорной кислоты и других не приводит к осаждению вещества.

Описываемое вещество снижает содержание липидов (всех липидов, всего холсстерина и свободных алифатических карбоновых кислот) в крови и сохраняет активность липазы липопротеинов в крови, что приводит к явно выраженному антилипемическому действию.

Прим ер 1. 70 г легких кролика измельчают с помощью гомогенизатора при добавлспии 35 мл дистиллированной воды н смесь выдерживают в термостате при 25 С в течение

24 ч, что приводит к автолизу. Автолизованную смесь подщелачивают до рИ 9,0 добавлением раствора едкого натра и выдерживают при комнатной температуре в течение 1 ч. За450415

Таблица

I х

Ф х + кх.О 0>

2 1> v cs g

ОХХ 1"= Х о о ( х х х о кх -л о ьх к охи o хк ох

Ок кХ о х

v àк х к

QJ о cps рая о. к во<с

Оккх о 0 о

Щ ехо

О ц K x ах я х

Оккх

Подопы гные крысы

Нормальные

С экспериментально вызванной гипер липемней (контроль)

С зкспернментально вызванной гиперлнпемией, после введения описываемого вещество

0,090

0,120

37

186

0,82

0,10

50

0,095

0,77

Предмет изобретения

Сo

Техред М. Семенов

Редактор Л. Тюрина

Корректоры: Н, Лебедева н А, Васильева

Заказ 1060!14 Изд. No 1221 Тираж 506 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений н открытий

Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Типография, пр. Сапунова, 2 тем жидкость центрифугируют со скоростью

5000 об/мин для разделения и получ;11от 45 мл верхнего слоя жидкости. Этот верхний слой подвергают диализу в течение 15 ч с применением целлюлозной трубки. Диализ проводят дистиллированной водой, подаваемой снаружи трубки. В результате получают 46 мл недиализированной жидкости. К жидкости добавляют 35 г сульфата аммония 11 полученную смесь перемешивают примерно в течение 4 ч.

Затем проводят центрифугирование со скоростью 3000 об/мпн и получают 37 мл верхнего слоя жидкости. Полу1снпый Верхний слой жидкости снова подвергают дпализу В течение

15 ч с применением такой ?l

Полученную недиализированную жидкость затем концентрируют до 1 мл при 40 С под вакуумом. К концентрированной жидкости добавляют 20 мл ацетона и образующийся осадок отфильтровывают с получе11ием 42 мг кристаллов.

Истинная вязкость полученного продукта (q) составляет 0,1213 единиц при 25 С при использовании воды в качестве растворителя.

Анализ ИК-спектра для продукта показывает следующие пики поглощения: 3300 см —, 2950 см — 1715 см — 1650 см —, 1215 см — и

1025 см- .

Для испытаний применяют самцов крыс в возрасте 9 недель, весом примерно 200 г, по

10 крыс в каждой группе. Результаты испытаний приведены в таблице, где показано, что по отношению к крысам с гиперлипемией, вызванной внутривенным введением 20 мг «Тре1тона 1339» (поверхностно-активное вещество, используемое для экспериментального получения гиперлипемии у животных) на 100 г Веса, при введении крысам внутрибр1ошинно 0,6 мг описываемого вещества на 100 г веса, проявилОсь ярко Выраи<ен!10е ае!тилипеми !еское действие и повышение актиВности липазы липопротеина, по сравнению с контрольными крысами, которым вводили физиологический солевой раствор.

В таблице приведено содержание липидов в крови и активность липазы липопротеина в крови.

" Активность дана в единицах С. А. (фактор акT?IBH0cTH, определяемый по просветлению).

Способ получения вещества, снижающего уровень липидов и холестерина в крови, о тл и ч а ю щи и с я тем, что органы животных подвергают автолизу, из автолизата удаляют белки и соли путем диализа и осаждения и выделяют целевой продукт из концентриро40 ванного раствора осаждением органическим растворителем.