Способ обнаружения опаковых форм кукурузы

 

ОП ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕ76ЛЬСТВУ

Союз Советсних

Социалистиыеснин

Республин (,1.1) 5453С) 6 (61) Дополнительное к авт, свил-ву (22) Заявлено 28.05.75 (21) 2138100/15 с присоединением заявки № (23) Приоритет (43) Опубликовано05.02.77.Бюллетень М 5 (45) Дата опубликования описания 28.03.77 (51) М. Ел,-

А 01 Н 1/06

Государственный комитет

Соаета Министров СССР по делам изобретений н открытий (53) УДК 575.113 (088.8 ) . (72) Автор изобретения

П, Н, Пыльнева

Всесоюзный ордена Ленина и ордена Трудового Красного Знамени селекционно-генетический институт (71) Заявитель (54) СПОСОБ ОБНАРУЖЕНИЯ ОПАКОВЫХ ФОРМ

КУКУРУЗЫ

Изобретение относится к селекционно— генетическим исследованиям зерновых культур

Известен способ обнаружения опаковых форм кукурузы, при котором из зерен выделяют эндосперм, у которого зерна B отдельности размалывают и полученную муку обезжиривают. Далее готовят спирторастворимую вытяжку, которую подвергают электрофорезу,E13. !

О

Известен также способ, при котором проводят сложную систему анализируюших скрешиваний, а затем визуально по непрозрачности опакового зерна судят о наличии гена 0 (Оро ре 2) E2) .

Предлагаемый способ обнаружения опаковых форм зерновых культур, при котором присутствие или отсутствие гена 02 выявляют по электрофоретическому спектру спир-20 торастворимой вытяжки из муки цельного зерна кукурузы, а именно по присутствию или отсутствию медленноподвижного компонента белка в стартовой части электрофореграммы. 25

Способ осушествляют следуюшим образом.

После размола целого зерна кукурузы на мельнице типа Пируэт" муку обрабатывают 80%-ным этпловым спиртом (1:3) без предварительного обезжиривания„

Для электрофореза берут непосредственно спиртовую вытяжку, Спирторастворнмую фракцию извлекают в течение 3 час при комнатной температуре и при периодическом помешивании. После центрифугирования в течение 8 мин при 6000 об/мин к 1 мл спиртового экстракта добавляют 0,48 г мочевины, 0,32 г сахарозы и 0,1 мл ледяной уксусной кислоты.

Электрофорез проводят в полиакриламидном геле, приготовленном по прописи

В. Г. Конарева в трубках с внутренним диаметром 0,5-0,6 см и длиной 7 см, за% . полненных только нижним (разделяюшим гелем). В качестве элвктродчого буфера используют 0,026 М уксусную кислоту без гликоля. В каждую трубку вносят 0,05;

0,1 и 0,15 мл исследуемого раствора, поверх которого микропипеткой наслаивают

545З06

1бб I j I jl jj О -б1 Ill - I 1111 б

:я,;:. ;: j (б,rrfr, 11 g lllr(ljjj;j "( б Я-, —:; К,Ч1 :1Я1ИЗУ

Составитель Л. Марченкова

Г еквктор 11. Скворкоее Текрек r1 11 „Корректор

Заказ 264/6 Тираж 75 9 Подписнде

Ш!ИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113О35, Москва, Ж-35, Раушская наб., д, 4/5

Филиал ППП Патент, r, Ужгород, ул. Проектная, 4 ее электродный буфер. Сосуд помешают в холодильник и проводят электрофорез 5 час при силе тока 2-Э ма на трубку в первый час и 4,R — 5,0 ма в последуюшие часы, Из трубок гель извлекают с помошью шприца и помешают на ночь в 5%-ный раствор ТХУ, в когором к утру очень четко обозначаются отдельные компоненгы белка, По наличию или отсутствию белкового компонента в стартовой части электрофореограммы судят о присутствии (в случае прозрачности и отсутствия медленноподвижб ного белкового компонента в верхней части геля) гена 0 или его отсутствии в данном генотипе (в случае наличия белкового компопснта в стартовой зоне геля).

1 1..,T -, » 1 j ji r jrссоб иск.j jnrjn -"r поопесс бя,1к1 ускоряет I, I,lr, lll,j,l l".rjll:.;1я1а Е еяпапияу .

Формула изобретения

Способ обнаружения опаковых форм кукурузы, включаюший электрсфорез спиртораст ь воримой вытяжки размолотого зерна, о т— л и ч а ю ш и и с я тем, что, с целью более точного выявления гена 02 (Орojgue

° I

2), в спирторастворимой вытяжке размолотоГо зерна определяют отсутствие или налиЮ чие полосы медленноподвижного компонента белка в стартовой части электрофореограммы.

Источники информацйи, принятые во внимание при экспертизе: ! ."1

1, Конарев В, Г. и др. Зеин мутанта кукурузы опак-2 и возможности выявления мутантного гена j3 гибридах Доклады ВАСХНИЛ, М„1 96 9., И О стр. 2Я-З 1 (прототип).

„ц 2. Сг!с бbaniej L. F)ude дев ргoteines ojfcoofo o ЮиЬСеь de a 1аг пе de Bee, B cjchiтп е, 9 7 5, v. 55; t4 0, р. р 1 2 7- 3 2 Z 5, (а налог ) .