Способ получения поливалентной вакцины против лептоспироза животных

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советскик

Социалистических

Республик 11>555664 л

Г

Щ

Ъ г (61) Дополнительное к авт. саид-ву (22) Заявлено 18.12. 75 (21) 2300791/15 (У ) М К 1 3 с присоединением заявки ¹ (23) Приоритет

A 61 К 39/00

Государственный комитет

СССР по делам изобретений и открытий

Опубликовано 30.0133. Бюллетень ¹ 4

Р ) УДК 615. 317 (088. 8) Дата опубликования описания 30.01 83

P.Ì.ÀëåõèH, В. Н.Гущин, Г.Ф.Денисенко, A.М.Косиков, И.А. Логинов, Ю.A. Малахов, А. П. Самохвалов, И.Г.Серегин, В.С.Соловьева и A.Н.Шуплико (72) Авторы изобретения (71) Заявитель Всесоюзный государственный научно-контроль и институт ветеринарных препаратов (54 ) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПОЛИВАЛЕНТНОЙ ВАКЦИНЫ

ПРОТИВ ЛЕПТОСПИРОЗА ЖИВОТНЫХ

Изобретение относится к ветерина- рии, в частности к способам получения вакцин, применяемых для профилактики лептоспироза животных.

Известен способ изготовления поливалентной феноловой вакцины для профилактики лептоспироза сельскохозяйственных животных и пушных зве рей, включающий выращивание лепто-. спир 6 серотипов на вывороточной среде в баллонах, смешивание выращенных культур, консервирование фе- нолом, расфасовку, проверку стерильности, безвредности, активности.

Известный способ, однако, не позволяет получить в вакцине достаточную концентрацию специфических анти-, генов, что вынуждает, вводить животным большие дозы вакцины: крупному рогатому скоту .- до 25 мл, свиньямдо .17 мл. Продолжительность создаваемого иммунитета у крупного рогатого скота незначительна и составляет

1-2 мес. при однократном .и 3-8 мес. при двухкратном введении вакцины. 25 . Цель изобретения — получение вакцины, вызывающей длительный иммунитет"высокой напряженности.

Это достигается тем, что в качестве исходных штаммов берут штаммы . ЗО лептоспир: ВГНКИ-1, ВГНКИ-2, ВГИКИ-З, ВГНКИ-4, ВГНКИ-5, ВГНКИ-6, а осаждение и инактивацию лептоспир проводят одновременно добавлением в питательную среду после выращивания лептоспир трихлоруксусной кислоты в количестве 3,0-3,3% с последующей нейтрализацией этой кислоты в образовавшемся осадке из лептоспирозных антигенов и сывороточного бедка питательной среды и добавлением к нему адьюванта, например, гидроокиси алюминия в количестве 32-35%.

В процессе изготовления вакцины не происходит снижения иммуногенной и антигенной активности лептоспир благодаря использованию трихлоруксусной кислоты, взятой в оптимальных для воздействия на лептоспиры и лептоспирозные антигены количествах — 3,0-3,3% °

Исследованиями установлено, что применение трихлоруксусной кислоты в других концентрациях приводила к

;снижению иммуногенной активности вак-. цины.

Не менее важным фактором для получения вакцины, вызывающей у животных длительный иммунитет высокой напряженности и продолжительности

555664 (до 6 мес. у молодняка и 12 мес. у взрослых животных), является введение адьюванта, состоящего из 3235% гидроокиси алюминия, и наличия

6-8% осажденного сывороточного белка питательной среды в составе вакцины.

Способ изготовления концентрированной поливалентной вакцины против лептоспироза заключается в следующем.

Берут штампы лептоспир, выделенные от сельскохозяйственных животных, селекционированные по признаку максимальной иммуногенной и антигенной активности и относящиеся к шести серологическим группам:

1. Leptospira grippotyphosa

ВГНКИ-1

2. L, ictегоhaemorrhagiae ВГНКИ-2

3. L. caniсо)а ВГНКИ-3 20

4. L. tarassovi ВГНКИ-4

5. L. hebdomadis ВГИКИ-5

6. (. pomona ВГНКИ.-6.

Культуры проверяют на чистоту и интенсивность роста, определяют количество микробных тел в 1 мл сре- $5

Штаммы выращивают на сывороточной среде в реакторах или баллонах, 25 смешивают, осаждают и инактивируют трихлоруксусной кислотой в количестве 3,0-3 3%, отделяют осадок от надосадочной жидкости, кислоту нейтрализуют водным раствором аммиака, Щ добавляют гидроокись алюминия до

35%-ной концентрации, консервируют мертиолятом, расфасовывают, контролируют на стерильнбсть, безвредность, активность. 3S

Штампы лептоспир выделены от сельскохозяйственных животных и селекционированы по признаку максимальной иммуногенной и антигенной активности. Штаммы являются вакцинными и 4р по широте иммуногенного спектра обеспечивают изготовление препарата, профилактирующего заболевание сельскохозяйственных и промысловых животных в любой точке Советского Союза н в большинстве регионов мира.

Штаммы депонированы во Всесоюзном государственном научно-контрольном институте ветпрепаратов МСХ СССР и сохраняются на сывороточной среде при -190ОС.

При осуществлении способа изготовления концентрированной поливалентной вакцины против лептоспироэа животных штаммы ВГНКИ-1, ВГНКИ-2, ВГНКИ-З, ВГНКИ-4, ВГНКИ5, ВГНКИ-6 SS выращивают в отдельных реакторах. (объем 200-250 л) или бутылях (объем 20 л ) на сывороточной среде в течение 5-10 сут, при 27-28 С до мако симального накопления бактериаль- 41) ной массы. ды путем подсчета под микроскопом при увеличении в 400 раз. Культуры, содержащие 50 млн лептоспир и более в 1 мл среды, смешивают с таким расчетом, чтобы в реакторе-смесителе содержалось по 20% лептоспир серологических групп pomona tarassovi

grippotiphosa, hebdomadis и по 10% лептоспир canicola, ictегоhaemorrhagiae.

К смеси культур приливают при постоянном перемешивании насыщенный раствор трихлоруксусной кислоты до создания ее концентрации в среде 3,03,3%.

Обработанную кислотой культуру отстаивают 1 ч, надосадочную жидкость деконтнруют, оставшийся осадок центрифигируют на центрифуге с угловым или горизонтальным ротором при

3000 об/мин в течение 5 мин, а на центрифуге сепараторного типа - при скорости вращения ротора 1015 тыс. об/мин (производительность

50 л/ч).

Центрифугат, представляющий собой плотную маэеобразную массу, собирают и обрабатывают 10%-ным водным раствором аммиака, нейтрализующим трихлоруксусную кислоту. Аммиак приливают при постоянном перемешивании до установления рН 7,4-7,6. Добавляют дистиллированную воду иэ такого расчета, чтобы осадок был сгущен в 25-30 раз по сравнению с исходной культурой.

К полученной массе добавляют гидроксал до 33-35%-ной концентрации и мертиолят 1:10000, смесь тщательно перемешивают и выдерживают

5 сут.при 18-22 С.

Вакцину расфасовывают в 50100-миллитровые флаконы.

Вакцину проверяют на стерильность и безвредность общепринятыми методами.

Антигенные свойства вакцИны контролируют на пяти кроликах весом

2,0-2,5 кг, которым вводят внутримышечно однократно по 0,3 мл вакцины. Через 25 дней у привитых кроликов берут кровь и исследуют по реакции микроагглютинации и лизиса с лептоспнрами, входящими в состав вакцины.

Вакцину считают активной по антигенным свойствам, если титр антител составляет 1:800 и выше к летоспирам серологических групп pomona, tarassovi, 9Гippotiphosa, hebdomadis и не менее чем 1:200 по отношению к лептоспирам ictегоhaemorrhagiae u canicola.

Иммуногенные свойства вакцин проверяют на 30 золотистых хомяках

1,5-2-месячного возраста, 15 из которых вводят вакцину однократно

555664

Редактор Е. Хейфиц Техред М. Коштура Корректор Л. Бокшан

Заказ 10825/10 Тираж 711, Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д.4/5

Филиал ППП "Патент.", r. ужгород, ул. Проектная, 4 внутримышечно по 0,05 мл. Через

25 дней заражают контрольных и привитых хомяков оттитрованной смертельной дозой лептоспир трех серологических групп.

Вакцину считают активной при выживании не менее 12 опытных и гибели 9 контрольных хомяков.

Вакцину вводят однократно внутриьвыечно в дозе от 0,3 до 2 мл вместо 17-25 мл принятых для существующей вакцины. Она вырабатывает иммунитет высокой напряженности продолжительностью до 6 мес. у молодняка и до 12 мес. у взрослых животных.

Срок годности вакцины 12 мес. со дня изготовления.

Способ получения концентрирован-. ной поливалентной вакцины сокращает затраты биофабричного производства, а применение вакцины исключает гибель животных от лептоспироза, аборты в неблагополучных стадах, лептоспироносительство и затраты на его лечение, утилизацию продуктов убоя.

Формула-изобретения

1. Способ получения поливалентной вакцины против лептоспироза животных, включающий подбор штаммов лептсспир, выращивание их на жидкой питательной сывороточной среде, осаждение, инактивацию и консервирование их, о т л и ч а И шийся тем, что, с целью создания вакцины, вызывающей длительный иммунитет высокой напряженности, в качестве исходных штаьеаов берут штампы лепто10 спнр ВГНКИ-1, ВГНКИ-2, ВГНКИ-З, ВГНКИ-4, ВГНКИ-5, ВГНКИ-6, а осаждение и инактивацию лептоспир проводят одновременно добавлением в питательную среду после выращивания лептоспир трихлоруксусной кислоты в ко-!

5 личестве 3,0-3,3% с последующей нейтрализацией этой кислоты в образовавшемся осадке иэ лептоспирозных анантигенов и сывороточного белка питательной среды и добавлением к

2О нему адьюванта, например, гидроокиси алюминия в количестве 32-35% °

2. Способ по п. 1, о т л и ч аю шийся тем, что нейтрализацию трихлоруксусной кислоты в осадке иэ лептоспироэных антигенов и сывороточного белка питательной среды проводят, например, водным раствооом аммиака.