Способ выделения низкомолекулярных биологически активных веществ

 

с

О П И С А Н И Е 11 578,68

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

Союз Советских

Социалистических

Республик

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свид-ву(22) Заявлено 17.05.76 (21)2355962/28-1 с присоединением заявки № (23) Приоритет (51) М. Кл.

А 61 К 35/30

С 07 G 7/0>

Государственный комитет

Совета Министров СССР

IIo делам изооретений н открытий (43) Опубликовано 05.11,77, Бюллетень №41 (53) УД1 615.475. (088.8) (45) Дата опубликования описания 26.11.77 (72) Авторы изобретения

А, А, Галоян и А. А, Арутюнян (71) Заявитель

Ереванский институт биохимии AH Армянской ССР (54) СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ НИЗКОМОЛЕКУЛЯРНЫХ, БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕШЕСТВ

Изооретейие относится к фармацевтичео» кой промышленности и касается получения биопогически -активных веществ, обладающих фармакологическим действием.

Известен способ выделения низкомалеку 5 лярных биологически .активных веществ из гипоталамуса крупного рогатого скота путем экстракции сырья уксусной кислотой, удаления из экстракта высокомолекулярных соединений, лиофилизации полученной низкомолеку-10 лярной фракции, растворения ее в дистиллир ванной воде, пропускания раствора через колонки с сефадексом д-10, элюции дистиллтерованной водой и сорбации элюированных фракций (1 ), 15

Однако этот способ не обеспечивает высокого выхода продукта, Целью изобретения является повышение выхода продукта. 20

Для этого элюат, полученный с колонки с сефадексом д-10, лиофилизируют, растворяют в буферном растворе с рН 4,0 и далее очищают на ионообменнике Я р-сефадекс д-25, со .скоростью элюции вышеупомянутт 25 го буферного раствора 60-61 мл/ч при комнатной температуре.

Способ осуществляется следующим образом.

Свежий гипоталамус крупного рогатого скота экстрагирует 0,25-0,5% уксусн и кислоты при температуре 80-85 С в течение 20-30 мин, экстракт центрифугируют

lIpH 8000-10000ст, удаляют высокомолеку лярные соединения обычными способами, ниэкомолекулярную фракцию собира;от и лиофилизир уют.

Затем 400 r лиофилизированного порошка обрабатывают ледяной уксусной кислотой в соотношении 1:3. B ледяной уксусной кисло те выпадают в осадок оставшиеся крупные пептиды и некоторые белковые комплексы.

После фильтрации: на стеклянныхфильтрах уксуснокислый экстракт наносят на колонку сефадекса д-10 (размер lOx60 см, свободный объем 2,2 л). Нейрогормоны К и У элюируют дистиллированной водой в 5-6 объемах, а нейрогормон С - в 13-14 объемах, скорость эл:оции 1,2 л/ч. Элюцпю проводят дистиллированной водой нри комнатной темпера578968

Ф ор»ула изобретения

Составитель С., Малютина редактор И. д!архоаокая ГехреаМ.!(воемеш Корректор С, Гарасиняк

Заказ 4283/9 Тираж 677 П одпис нее

1111ИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, ?К-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал llllll "1lатент", г. Ужгород, ул. Проектная, 1 туре. Фракции, в которых обнаруживают нейрогормоны Кр 9 и С, Bb»Q »»HG»oT лиофи»цзноа

Сухой остаток составляет 0,8-1,8 г ддя зс ны К и 9 и около 0,3 r для зоны C.

После гелевой фильтрации указанного количества лиофилизированного продукта нейрс гормоны очищаются более чем в 200 раз.Основная неактивная масса лиофилизированно го продукта элюируется в первых 2-3 объе мах,, 1о

Лиофилизированный порошок нейрогормона

С, а также смесь нейрогормонов К и pà творяют в 10 мл10»1

by pa рН 4,0 (источником аммиака служи»

25%ИН4ОИ ) и наносят на колонку ионообмеи- 15, Ика илй же провоцят через препаративный,, постоянно текущий бумажный эпектрофорезаПроводят также последовательно «сначала

«!.пектрофорез, затем ионообменпик °

Яр - сефадекс д-25 уравновешивают ука- 20 занным буфером. Элюц»по проводят исходным буфером, собирая фракции по 15 мл (скорост» элюции 60 мп/час, при комнатной!температуре); Нейрогормоны С, К и » элюируют с колонки соответственно в = 6.-17, 35=40 и 2

73-90 фракциях,,Фракции высушивают лио: ц»ьно, обесс оливают, повторной .хроматографией на колонке сефадекса д-10, размером

2х50.

После этого вещество наносят на продол-. жающийся электрофорез (ватман № 3, аммоний - ацетатный буфер„, рН 4, температура

-3 С, в течение 24-28ч„650=1000"К, 20=40 ма). Можно проэлюировать весь мате риал, .полученный из 400 r лиофилизирован (З5 ного порошка. Вещества К и С двигаются к аноду, а - K катоду, На всех этапах очистки провбдят испыта. ние биопогической активности нейрогормэнов, Предлагаемый способ позволяет в 100200 раз увеличить выход ценных биопогичеоки активных, веществ, которые могут быть

t использованы в качестве сырья для приготов. леиия лекарственных препаратов.

Способ выделения низкомолекулярных био логическ»» активных веществ из гипоталамуоа крупного рогатого скота путем экстракции сырья уксусной кислотой, удаления из экстракта высокомолекулярных соединений, лиофилизации полученной низкомолекулярной фракции, растворения ее в дистиллированной воде, пропускания раствора через колонки с сефадексом д-10, элюции дистиллированной водой и сорбции (элюированных фракций, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода продута, элюат, получеьный с колонки с сефадексом д-10, лиофилизируют, растворяют в буферном растворе с рН 4,0 и далее очищают на ионообменнике

Зр-сефадекс д-25, со скоростью элюции вышеупомянутого буферного раствора 60-61 мл/ч при комнатной температуре, Источники информац»ц принятые во внимание при экспертизе:

1, Авторское свидетельство СССР № 403214, кл-. С 07 5 7/00, 1975.