Адъювант

 

BC =CO IO I, Ä 1

Ц ВтОит". -т=:..:;:-. C„ бколлотеи т М .1А

С А Н И 1вввЯ4ъ

Союз Советскин

Социалистических

Республик

ОП И (61) Дополнительное к авт. саид-ву (22) Заявлено 30.10,75(21) 2185540/ с присоединением заявки №вЂ” (23) Приоритет (43) Опубликовано 05.03.78. Бюллетен (45) Дата опубликования описания 0сь0

j) М. Кл.

А 61 К 35/78

Государственный комитет

Совета Министров СССР по делам нзооретеннй к открытий

3) УДК 612.017. 1..0 14.46+6 15.37 (088.8) В. К. Муравьев, Л. М. Коган, A. А. Гусев, Л. 11, Вечерка, В. П. Онуфриев и A. И. Собко (72) Авторы изобретения

ВсесОюзный научно-исследОВательский ящур11ый инсги Гу т и Всесоюзный нау IHo-исследовательский инстиQ т IIQI арстве11ных растении

,7 1) Заявители (54) АДЪ!ОБА!-1Т

Изобретение относится к ветеринарии и может быть использовано в биологической промыыленности и научно-исследовательской

-работе при производстве и разработке инактивированных противоящурных вакцин, а так- 5 же диагностических сывороток.

Иммуногенность и эффективность ииактивированных иротивоящурпых вакцин в значи— тельной степени увеличивается с использованием в технологии их изгoтовиения несиеии — f0 фических стимуляторов иммунитета — адъюва нтов.

Известно применение в качестве адъювантов при изготовлении ящурных антигенов гидроокиси алюминия AE(OH)>, которая являет- 15 ся слабым адъювантом в комплексе с «ицурными антигенами, Масляные адъюванты (типа адъюванта фрейца и др.), которые, обладая выраженнымн иммуностимулирующими свойствами, имеют повышенную реактогенность 20 и требуют создания стойких сложных эмульсий. Известны отдельные вещества из группы сапонинов, широко применяемых в настоящее время в качестве адъювантов при производстве противоящурных вакцин 1.1).

H СССР 11@iI IIOY О то 13;1е 1И1 И и 13О ти вояигу13ных вакцин испо;1ьзу1от импортный сапонин, изготовтlеи11ЫЙ фи13к10Й ЛЛЕI СК (Ф1 Г) из расте1щя м11льнлнки лак арс I I3eIIIIoif — 5 с1 ð CI. истпта оН1с1 сн Ьтв.

ОднакО все II313oc7III«1е с «Iто1щиы с одын» ваптнь1м действием (описьч11п1е в читературе, и импортируем !е из ФРГ и Англии) изготавлщ.-.щогся из р; стеиий, ие иропзрастаIoIIIих на территории и.иней сгр:3иы. Высокая стоимость импорт пях препарагoB If ежеготтное увеличение потребляемого и биоиромышле1п1ости и научно-исследовательской !заботе сапонина, увели1иьпю г затр-III.I lia его закупку за границей.

11елью изобретения является расширение ассортимента алъ,овантов. Обиап«оощих высокими иммунОсти1«1ул1тручо1ци««п1 cBollcтвами и способных заменить импортный препарат сапонпн прп производстве пиуриых .ат1тигенов, используемых цля получетп1«т противоящурных вакцин и диагностических сыворогок. Поставленная цель .достигooтся II« и-одаря применению изгестного препарат«гицсофилина в Y,ачестве адъювыта I3 про11счтодстве яшур596241

0,5 (1: (ОООО)(1;20000) Формалин (5%-ный раствор), % 1

Глицерин, % 10

Хинозоп (10%-ный рас твор), % 1

Гипсофипин (10%-ный

pBC TBOp) % 0,5-1

Антибиотики (пенициллин и стрептомицин), ЕЦ/мп 200

Готовят 10%-ный раствор гипсофипииа на дистиллированной воде, стерилизуют кг:пячекием в течение 30 мин или автоклавH-4э рованием при 1,5 атм, в течение одного часа.

По окончании .инактивации вируса ящура в реактор добавляют под давлением на«« .-«."димое количество глицерина, хинопоза и гип50 софилина. Все компоненты перемешивают

30 мин DH вакцины устанавливщот и предепах 7,6-7,8 путем давпения I}«} или 5%-кого раствора химически чистой соляной кислоты.

5» и

Вакцину охлаждают до 4-6 С и подвергают контролю ка стерильность, безвредность и иммуногенность, после !el.o ее выпускают для практического применения, Препарат гипсофипин используют также в качестве адъювакта для получения яшур ных антигенов для попучения противоя.цур" ных вакцин и диагностических сывороток.

Известно применение гипсофипина только для гемолиза эритроцитов при автоматическом счете лейкоцитов }2).

Гипсофилин, получаемый из корней колю-челисткика (мыпького КОрНН туркестакского) р«С }п )тор }«ч Efv я.)рьор}}41о}Двь Ту Р,. испопьзуется для работы в автомдтических счетчиках крови в виде 2%-кого раствора в IU

0,9%-ном растворе хлористого натрия.

Гипсофилин состоит из тритерпекового гликозида и опигосахаридов. Агпиконом spHr«арпенового гликозида является гипсогекин., а углеводородными остатками: Х}« — гпюкоза, ь}- « галактоза, Ц-глюкороновая кислота, Q, -ара-биноза, } . -рамноза, Ц-фукоза и tl-ксипоза. Гипсофилин, выпускаемый медицинской промышпенностью, представляет собой аморфный порошок от желтоватого до кремового цвета, растворимый в воде, Порядок использования гипсофи тина в про-. тивоящурной вакцине следующий.

100 л вакцины содержат:

Б ирусосодерж ащий материал, кг 6-12

Гидроокись алюминия (3%-ная), % } пикокоповый буфзр. % .

Хлороформ, %

Тиомерсад нот.э акти« =--на при изготовцекии диагн««-.тических сывороток,B етом случае гипсофипин (коъшентрация 0,5%) добавпя от в 10%-кую виру сс оде рж ашую аф тозну-ю су спе нзию, предназначен .ую дп гнпериммунизации мор«э. ких свинок, При испэльзэв кии гипссфипина в качестsB адъювакта для пэлучеккя диагкэс -ичеСккх сывэрэтэк А, О и С устакэвлекэ, чтэ их титр с гэмэлэгичкым вирусом равен I:80.

При пэлучекки диагностических сывэрэтэк с к с и эл ъз э в а и и е м к м и э рт к э г э c BIIQH HH B их ти тр къ превышает 1:40; 1:30, а без добавления адъ;эвактэв состав «яет 1:20.

В лабэратэркых опытах определяли ацъювакткые свэйства гипсэфилика для wbIIIIBH веco«I 20-22 г к морских свикэк весэм 450500 г. На мышах и морских свинках эпредедяли 50%-кую вакцикалькую дозу (ДУ О ) IIBпикизирэваккэй ГОА-фэрмэдвакцикы из вируса А„- без добавления ацъювакта, а также при введении гкпсэфипика и кэктрэдькэгэ сапэкHHB. Через 21 день после иммунизации мышей и морских свинок заражали патэгекLIûì для ких гэмэлэгичкым штаммом вируса яшура и пэ количеству выживших живэткых рассчитывали ДУ„-, . Уменьшение ДУ } при добив«некии адъювактэв в сравнении с ДУ п препарата без ких свидетельствэвалэ эб усилекии иммуHHTB.IB, т,е. эб увеличекии иммукэгеккэй активности вакцины. Откэшекке

ДУ э препа}эата с адъювактэм к ДУ О препарата без стимулятора иммукитета пэказываllD so сколько раз сравкиваемые гипсофилин и сапэкик увеличивали иммукэгеккэсть вдкпины.

В табл. 1 приведены результаты 10 опытов, поэведеккых ка мышах с испэльзэвакием гипсофипина в дозе 2 мг ка 100 г веса живэткэгэ и средние результаты 5 опытов с контрольным сапэкикэм в дозе 2,5 мг ка

100 г веса живэткэгэ.

Даккые табл. l свидетельствуют э хорошем адъювакткэм действии гип«софистика для мышей.

В табл. 2 представлены результаты излучения адъювакткых свойств гкпсэфилика дня морских свинок весом 450-500 г. Гипсэфилик и кэктрэдькый сапэккк 1906179 цримекяпк в дозах 1 и 0,5 мг ка 100 r

;кивэгэ веса животногэ.

} аким эоразэм, гипсэфилик для морских свикэк является таким же хэрэшим ацъювактэм, как и сапэкик фирмы "АМ} сМ

В табл. 3 представлены резудьтаты опыта, прэведеккэт э ка крупкэм рэгатэм скоте.

Гипсэфипик и коктрэпькый сапэкик примекялись в количестве 2,5 и 10 мг HB прививкую дэзу. О капряжеккэсти иммунитета судили пэ титрам вирускейтрализующих антител

596241

Та бл ица 1

Результаты сравнительного изучения адъювантных свойств гппсофилина и сапонина на мышах

Доза адъюУвеличение пммуногенности вакцин по сравнению с контрольной без сапон ща

Количество оп61тов ванта на

100 г веса

Адъювант животного, м

1,83 +О, 2.1

0,001

2,0

Гипсофилин

Сапонин фирмы

"Ме ck" ФРГ

0,001

1,57 +0,09

2,5

Табл ица 2

Сравнительное изучение адъювантных свойств гипсофилина и сапонина на морских свинках

Увеличение иммуногенности вакцпн по сравнению с контролем

Доза на 100 г

ДУ, мл

Адъюванты в мг

0,77

Гипсофилин

То же

Carr онин

То же

1,50

1,00

0,5

1,97

0,76

1,0

1,50

1,00

0,5

Контроль (вакцина без сапонина ) 1,50 в сыворотке крови животных с гомологичным вирусом ящура А (1000ЛД,), Средние титры вируснейтрализующих антител пэ группам выражали в логарифмах с эснованием 2 (лог.>). При этэм считали, чтэ чем выше титры вируснейтрализующих антител, тем сильнее адъювантное действие, обусловленное гипсофилином или сзпэнином.

Из табл. 3 видна,-что введение в вирусный препарат гипсофилина способствует бо- 1О лее раннему образованию вируснейтрализующих антител. Так, вакцина с гипсофилинэм в прививной дозе в количестве 2,5 и 10 мг обуславливает образование вируснейтрализующих антител на 7 день в титрах 2,9 и 15

3,24 лог.2 соответственно. Контрольный са понин в этот же срок и в таких же дозах вызывает образование антител в титрах 1,36 и 2,08 лог.<. У животных, привитых: вакцинэй без сапэнина, к этому времени антитела еще на образовались, а на 2 1 день они не превышали .2,65+ 0.57 лэг.z. У животных, привитых препаратом, содержащимгипсофилин, титр антител был 4,85+0,52 лог при дозе 2,5 мг и 4,47+ 0,52 лог, при дозе 10 мг. В эти же сроки ти р ° антител у животных, привитых препаратом, содержащим контрольный сапонин 1906179 в дэзах 2,5 и 10 мг, был равен 4,32

+ 0,54 и 4,66+ 0,46 лог.<. Таким образом результаты табл. 3 свидетельствуют о хороших адъювантныхсвойствах гипсэфилина при оценке на крупном рэгатэм скоте, при этом егэ иммунэстимулирующая активность в оТ дельных опытах даже выше, чем у импортного сапонина фирмы gerck

596241

7 8

Табл ица 3

Адъювантные свойства гипсофилина и сапонина в опытах на крупном рогатом скоте с 1 2,9 3,99 485 +0,52 <0,025 1 3,24 4,42 4,47 +0,52 <0,005

2,5

10,0

ñ1 2,36 1 2,08 (1 41

4,04 4,32 + 0,54 0,025

1,5

10,0

4,66 + 0,46 d0, 100

4,07 без сап онина

Вакцина А (серия 21) 1,8 1 2,65 + 0,57 «40,050 гз

Формула изобретения

Применение гипсофилина в качестве адъюванта, при изготовлении ящурных антигенов. зо

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе:

Составитель Л. Мурая

Редактор E. Меньшова Техред М. елемеш . Корректор H. макаревич

Заказ 930/6 Тираж 702 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, R-35, Раушская наб., д. 4/5 филиал ППП "Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Гипс офил ин

То же

Сап онин

То же

1. Воробьев А. А и Васильев H. Н. Адъюванты (Неспецифические стимуляторы иммуногенеза), М., "Медицина", 1969 r., с. 18.

2. ТУ-64-4-6-75 на Гипсофилин, ут вержденные Техническим управлением Министерства медицинской промышленности

17.01.75, с. 14.