Способ определения -токоферилхинона в биологической жидкости

 

оъ", л нс.. н.» ."ная

ОЛ ИОАНН

ИЗОБРЕТЕН И

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВ е <вятских

Социалистических республик

< 679206 (61) Дополнительное к авт. санд-ву (г2) Заявлено lб.11.77 (ф1) 2543195/28-13 с присоединением заявки Ж— (23) Приоритет

Опубликовано 15,08.79. Бюллетень

Дата опубликования описания 15 08 7 (51)М. Кл.

А 61 В 10/00

G 01 N 33/!6

Гкуда рстлаьй ке;апет

О.N ю дулаи аэаараъпй в а. укs тца (53) УД3(616.— 003, .215 (088.8) (72) Авторы изобретения

К. P. Седов и Р. Г. Сайфутдинов с (71) Заявитель

Иркутский государственный медицинский институт (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ а-ТОКОФЕРИЛХИНОНА

В БИОЛОГИЧЕСКОЙ ЖИДКОСТИ

Изобретение относится к области биохимии и может быль использовано в медицине прн исследовании биологических жидкостей, например к рова

Известен способ определения а-токоферилхинона в биологической жидкости путем экстрагирования пробы с последующим выпарюанием и высупч ваыем экстракта Щ.

Однако известный способ не обеспечивает точного количественно; э определения е-токофе.!О рилхинона.

Целью иэобре ения является ра поспектрометрнрование целевого продукта.

Цель достигается тем, что высушенньгй экстракт ра"".-воряют в спирте, затем обрабатьгва!

5 ют щелочью.

Способ осуществляют следующим образом.

Из крови, взятой у донора в количестве !

0:."., методом центрифугирования,. предварнтеч:-.-;гнготавлив-.::ë сыворотку крови. Затем

И ! мз лворотки смешивают в пробирке, содериицсй 20 мл смеси хлороформа н метанола, взять х в соотношении 2:1, для экстракции липидов, После этого полученную смесь фильтруют и доводят ее количество до 25 мл путем добавки смеси хлороформа н метанола в,соотношении 2:1.

К полученному экстракту добавляют 5 мл дистиллированной воды, перемешивают встряхиванием и оставляют его на 12 часов для отстаивания.

После отстаивания содержимое пробирки расслаивается на две фазы, верхняя из которых содержит нелипидные компоненты, а нижняя — липнды. Верхнюю фазу отсасыванием с помощью пипетки удаляют, а границу раздела промывают ранее приготовленной смесью хлороформа, метанола и воды в соотношении 8:4:3, при этом для промывки используют только верхнюю фазу данной смеси.

После этого промытый экстракт лнпидов помещают в емкость устройства, а емкость помещают в термостат и осуществляют процесс

:выпаривания липндов с одновременной подачей азота и отгонкой растворителя через отвод вакуум-насосом. Выпаривание осуществляют в две фазы. В первую фазу — до получения сгущенного остатка, а вторую фазу осуществляют

679206

Формула изобретения

Составитель С. Малютина

Редактор О. Торгашева Техред Э,Чужик .. Корректор„М. Шароши

Заказ 4638/2 Тираж 672 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4I5

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4

3 ле перемещения сгущенного остатка иэ емкости ! / в ампулу-капилляр путем наклона емкости в сто. рону ампулы до полного перемещения сгущенного остатка иэ емкости в ампулу. Выпаривание so второй фазе до остатка постоянного объема осуществляют в ампуле путем помещения его в термостат также в условиях вакуума с подачей азота.

После выпаривания ампулу-капилляр отсоединяют от отвода, закрывают пробкой-шлифом, а затем лнпиды, находящиеся в ампуле, раство- 10 ряют в 0,1 мл этилового спирта, добавляют 5 капель 1% КОН н тем самым осуществляют перевод а-токоферилхинона в семихиноидное со<стояние, при этом процесс перевода осуществляют при одновременном продувании азотом в те- 1 чение 2 мин. После этого ампулу с содержимым помещают в резонатор радиоспектрометра "Рубин" и проводят исследование содержимого путем записи сигнала. первую запись сигнала осуществляют в диапазоне мощности СВЧ 0,5 мВт, модуляции 7э, Не 3540э, ЬН 720э, скорость развертки 30 э.

r 0,03. Запись в виде синглета проводят для количественногй оценки по стандартному эталону мп в решетке MgO.

Вторую запись того же сигнала проводят nph скорости развертки Зэ и модуляции 1з. Уменьшение скорости развертки и модуляции позво ляет выявить сверхтонкую структуру сигнала.

Учитывая параметры, заданные pagaocne метром, 17 компонент сверхтонкой структуры, константу связи 1,924 и 0,934, распределение относительной интенсивности линий, относят дан 4 ныи сигнал к а-токоферилхинону, что подтверждается следующими данными: полученный сигнал при диапазоне мощности 0,5 мВт. Не 3540 э

ЬН 720 э, скорости разверкти 30 э, r 0,03, модуляции 7 э, относится к классу свободных радикалов. Это подтверждается быстрым насыщенным в микроволновом поле, g2,,005 t 0,001, шириной линии около 15 э.

При записи в диапазоне скорости развертки, равной Зэ, модуляции 1э выявляется сверхтонкая структура в 17 линий. После получения четкого спектра, с ясными компонентами, т.е. хорошим разрешением проводят расшифровку спектра. Расшифровка осуществляется по определенным правилам.

Предлагаемый способ является более чувствительным, обеспечивает высокую точность определения, требует меньших материальных затрат, и времени для его осуществления.

Способ определения а токоферилхипона в биологической жидкости путем экстрагировання пробы с последующим выпариванием н высушиванием экстракта, отличающийся тем, что, с целью радиоспектрометрирования целевого продукта высушенный экстракт растворяют в спирте, затем обрабатывают щелочью;

Источники информации, принятые во внимание цри экспертизе

1. Вопросы медицинской химии, т. 13, 61, 1967, а 44.