Способ идентификации т и б-лимфоцитов

 

(i i) 682229

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советских

Социалистических

Республик (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 21.03.77 (21) 2459300/28-13 с присоединением заявки № (23) Приоритет

Опубликовано 30.08.79. Бюллетень ¹ 32

Дата опубликования описания 30.08.79 (51) М. Кл.-

А 61В 10/00

G 01iU 33/16

Государственный комитет

СССР по делам изобретений и открытий (53) УДК 621.111.112 (088.8) (72) Авторы изобретения Л. Г. Коркина, Г. Е. Добрецов, Э. М. Коган и Ю. А. Владимиров

2-ой Московский ордена Ленина медицинский институт им. Н. И. Пирогова (71) Заявитель (54) СПОСОБ ИДЕНТИФИКАЦИИ T- И Б-ЛИМФОЦИТОВ

Изобретение относится к области медицины, а именно к клинической и экспериментальной иммунологии.

Известен способ идентификации Т- и

Б-лимфоцитов крови путем биофизического исследования суспензии лимфоцитов.

Однако известный способ не обеспечивает высокой точности и на исследование затрачивается много времени.

Целью изобретения является повышение точности и ускорение способа.

Эта цель достигается тем, что в суспензию лимфоцитов вводят флуоресцентный зонд 3-метоксибензантрон и идентифицируют Т- и Б-форму лимфоцитов по интенсивности флуоресценции отдельных клеток суспензии.

Способ осуществляют следующим образом, У животного или человека берут тимус, лимфоузлы, селезенку или 3 — 5 мл периферической крови и готовят суспензию чистых лимфоцитов в соленом буфере.

При этом используют обычные методики выделения и очистки лимфоцитов.

Концентрацию клеток в полученной суспензии лимфоцитов подсчитывают в камере

Горяева и доводят ее до величины около

2,5 10 клеток/мл. Жизнеспособность клеток в исследованных суспензиях находится в пределах 94 — 99%. К 0,1 мл этой суспензии добавляют 0,001 мл раствора 3-меток5 сибензантрона (МБА) в диметилформамиде с тем, чтобы конечная концентрация

МБА в суспензии лимфоцитов составляла

50 мкм. Каплю окрашенной суспензии немедленно наносят на предметное стекло, 10 накрывают покровным стеклом и исследуют в люминесцентном микроскопе. Флуоресценцию МБА, связанного с мембранами лимфоцитов, возбуждают светом с длиной волны 365 нм, а интенсивность флуоресцен15 ции измеряют при длине волны 520 нм, выделяя ее с помощью интерференционного светофильтра. Свет флуоресценции, падающий на катод фотоумножителя, ограничивают световым зондом диаметром 1,5 мм так, чтобы размеры изображения клетки в плоскости катода не превышали размеров зонда. Время измерения интенсивности флуоресценции одной клетки около 5 с.

Величина интенсивности флуоресценции зонда, связанного с клеточной мембраной, позволяет выявить две различные популяции лимфоцитов: слабо светящиеся и ярко

682229

Формула изобретения

Составитель С. Малютина

Редактор Г. Прусова Техред Н. Строганова Корректор Л. Тарасова

Заказ 2112/6 Изд. № 511 Тираж 681 Подписное

НПО «Поиск» Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Типография, пр. Сапунова, 2 флуоресцирующие. Популяция слабо светящихся клеток совпадает с T-популяцией лимфоцитов, а яркие клетки составляют популяцию Б-лимфоцитов.

Предлагаемый способ позволяет за короткое время точно устанавливать соотошение Т-и Б-лимфоцитов в периферической крови человека, что является важным для диагностики некоторых видов заболеваний, а также в условиях эксперимента для вы- 10 явления и проверки новых средств и способов лечения.

Способ идентификации T- и Б-лимфоцитов крови путем биофизического исследования суспензии лимфоцитов, о т л и ч а юшийся тем, что, с целью повышения точности и ускорения способа, в суспензию лимфоцитов вводят флуоресцентный зонд

3-метоксибензантрон и идентифицируют Ти Б-форму лимфоцитов по интенсивности флуоресценции отдельных клеток суспензии.