Способ определения сенсибилизации лейкоцитов к антигенам

 

((ц 712078

ОП И САН И Е

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советских

Социалистических

Республик (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 31.07.78 (21) 2657275/28-13 с присоединением заявки № (51) М. Кл.с

А 61В 10/00

G 01N ЗЗ/16 (43) Опубликовано 30.01.80. Бюллетень № 4 (45) Дата опубликования описания 30.01.80 (53) УДК D616-07 (088.8) по делам изабретеиий и открытий (72) Авторы изобретения

Д. К. Новиков, В. И. Новикова и А. П. Шмаков

Витебский государственный медицинский институт (71) Заявитель (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СЕНСИБИЛИЗАЦИИ

ЛЕЙКОЦИТОВ К АНТИГЕНАМ

ГосУдарственный комитет (23) Пр ор

Изобретение относится к области медицины и биологии и может быть использовано для выявления сенсибилпзации лейкоцитов к различным антигенам.

Известен способ определения сенсибнлнзации лейкоцитов к антигенам путем выделения лейкоцитов с последующим их отмыванием и оценкой полученных результатов (1).

Однако известный способ не обеспечивает высокой чувствительности определения.

Целью изобретения является повышение чувствительности определения.

Эта цель достигается тем, что лейкоциты перед обработкой антигеном преинкубируют при температуре 4+2,0 С в течение 121-6,0 ч в бессывороточной физиологической среде.

П р и и е р 1. Лейкоциты выделены нз крови 25 детей, больных пневмониями и сепсисом, имеющих бактерпальную аллергию. Их отмывают 3, а в контрольных опытах 6 раз раствором Хенкса, центрнфугируя при 500 об/мин, и взвешивают в этом растворе при концентрации 5 млн/мл. И кубируют при 4 С 12 ч. Для контроля аналогич»о инкубируют часть крови тех же больных с невыделенными лейкоцитами. Их выделяют из нее после ннкубации при 4 C 12 ч.

Затем надосадочную жидкость слпва1от, отмывают лейкоциты один раз раствором

Хенкса, взвешивают в этом растворе н используют в реакции лизнса лейкоцитов с бактернальнымн антигенами.

В этой же реакции испытывают с бактс5 риальными антнгспамн свежие отмытыс лейкоциты пз той же крови, а также лсйко циты, выделенные нз крови, преинкубированно11 при 4 С 12 ч. Однако такая сенсибнлизацпя выявляется с лейкоцитами, вы)О деленными и препнкубированнымн в растворе Хенкса.

Влияние преннкубацпн лейкоцитов в растворе Хснкса на выявление их сенснбнлизации к бактернальным антнгенам показано

15 в табл. 1.

Результаты (см. табл. 1) показывают, что в ряде случаев сснсибнлизация лейкоцитов к бактернальным антнгенам не выявляется с обычными лейкоцитами и полученными

2о нз крови, препнкубпрованной при 4 С 12 ч.

П р» м ср 2. Из крови 24 больных раком желудка III — IV стадии, взятой в стерильные пробирки, выделяют лейкоциты, отмывают пх 3 раза стерильным раствором

25 Хенкса, центрнфугнруя при 500 об/мин.

Часть осадка лейкоцитов взвешивают в среде 199 без сыворотки в другую часть тех же лейкоцитов добавляют 10% аутологичной плазмы. I(онцентрацня лейкоцитов—

30 10 млн/мл. Со свежими, »е инкубнрованны712078

Таблица !

Положительные реакции с лейкоцитами

Ko!tlI tCCTBO обследоSttHH 6t X оольных

Исходными

После tlpt. инк у03ltltlt!!ри 87 (." 12 ч

Пр:t 1 -С 12 ч

Анти гены

Отмытыми

6 раз

Отм ытым

:: !паза

В цельной крови

В растворе

Хенкса

В растворе

Xettt;ca!

8(5) 18!

Гемолитический стафилококк

Гемолитический стрептотококк

Протей мирабилис

12(1) !

7(6)

9(4) 12

7(2) П р и и е ч а н и е. В скобках — случаи ноложител Ill lx реакций, ис имевшиеся до иреинкубации.

Таблица 2

Положитепьная реакция подавления миграции в лейкоцитами

Количество

Преинкубированными при 4 С 12 ч

Исходными обследованных

Антигены больн61х

В среде

1(19 с !0 пя аутоилазмы

Отмытами

8 раза

В среде 199

20(!6) 9(5) 2!

Экстракты рака желудка

5(2) 2!

Экстракты слизистой же.пудка, прилежащей к опухоли

П р и и е ч а н и е. В скобках — дополчительные случаи выявления сенсибилизации.

Формула изобретения

Корректор А. Камыш ни кова

Корректор О. Гусева

Редактор 3. Ходакова

Подписное

Тираж 673

Изд, ¹ !34

Заказ 2797 2

Типография, пр. Сапунова, 2 ми лейкоцитами ставят реакцию подавления миграции лейкоцитов, используя в качестве антигенов экстракты опухолей и нормальных тканей. Оставшиеся порции лейкоцитов, взвешенных только в среде 199 и такой же среде, но с добавлением 10 а аутологичной плазмы, инкубируют прп 4 С

12 ч. После этого надосадочную жидкость сливают, лейкоциты отмывают один раз средой 199, центрифугируя их в ней прп

500 об/мин, и разводят до исходной концентрации. С полученными лейкоцитами тоже ставят реакцию подавления миграции лейкоцитов, добавляя к ним антпгены опухолей или нормальных тканей.

Влияние преинкубации лейкоцитов больных раком желудка при 4 С 12 ч на подавление их миграции в реакции подавления миграции лейкоцитов антигенами опухолей показано в табл. 2.

Лейкоциты ряда больных, не реагировавшие на антигены в реакции подавления миграции лейкоцитов, приобретают эту способность после преинкубации прп 4 С 12 ч в среде без сыворотки.

Предлагаемый способ обеспечивает высокую чувствительность определения, что позволяет расширить диагностические возможности (особенно в онкологии) реакции

5 лизиса или лейкоцитолиза лейкоцитов, реакции подавления миграции лейкоцитов, реакции бласттрансформации лимфоцитов.

Способ определения сенсибилпзацпи лейкоцитов к антигенам путем выделения лейкоцитов с последующим их отмыванием, !

5 обработкой антигеном, инкубированием и оценкой полученных результатов, о т л и ч аю шийся тем, что, с целью повышения чувствительности определения, лейкоциты перед обработкой антигеном преинкубиру20 ют при 4+-2,0 C в течение 12+-б,0 ч в бессывороточной физиологической среде.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. УК. «Лабораторное дело», 1977, М б, 25 с. 343 — 34б.