Штамм продуцент биомассы

 

Союз Советскик

Социалистических

Республик пц727687. (61.) Дополнительное к авт. свид-ву (51)м, Кл.

С 12 К 3j00

С 12 D 13/06 (22) Заявлено 10.1177 (21) 25414). l/28-13 с присоединением заявки Ио—

Государственный комитет

СССР по делам нзрбретений и откр ытнй (23) Приоритет

Опубликовано 150430. Бюллетень HP 14

Дата опубликования описания 150480 (53) УДК бб 8. 392 (088. 8) И, А,Дудка, А, С, Бухало, Э.Ф „Соломко, Л. П, Пархоменко, М,H.Ìàðòûíåíêî и Р.К.Пчелинцева (72) Авторы изобретения (71) Заявитель

Институт ботаники им, Н.Г.Холодного ордена Ленина

AH,Óêðàèíñêîé ССР

I

1 ! ! !

1 (54) 10ТАММ Flammul ina Vel utipes HBKF-112 ПРОДУЦЕН

БИОМАССЫ

I .Изобретение относйтся к технике Морфологические признаки, Мляпка получения нового штамма путем куль- . гриба 0,5-3.,0 см в диаметре, желтовативирования мицелия штаммов безидио- то-бурая, с тонким краем, выпукломицетов на жидких питательных средах, или плоскораспростертая. Ножка гриба . ) используемого для приготовления пище- 5 длинои 3,0-7,0 см, .толщиной 0,1вой или кормовой биомассы, 8,0 см, плотная, полая внутри. Споры К" I

Известны различные штаммы иэ рода гладкие, бесцветные, размер 7,0F1ammuIina ve1utipes, способные 10,0 х 3,0-6,0 мк. Гифы бесцветные, ! расти на жидких средах в поверхност-, разветвленные, септированные, толщиной и глубинной куль-уре (1). G ной 2,0-4,5 мк с многочисленными

Выход сухого мицелия известного . пряжками, Участки гиф распадаются штамма составляет около 30-40 r на на оидии.

100 r использованной глюкозы, при : Культуральные признаки. На суслоэтом культуральный мицелий не облада- агаре колонии белые, войлочные с ет грибным ароматом. : " 3$ грибным запахом. При старении местаЦелью изобретения является полу- . ми буреют, наблюдается развитие плочение штамма, обладающего специфи« довых тел со зрелыми базидиоспорами.

ЧЕСКИМ ГРибным ароматом и обеспечИ-, На поверхности жидкого пивного вающего высокий выход культуральногб сусла .(4о по Баллингу) пушистая воймицелия при культивировании на деше- 29.лочная мицелиальная пленка с приятвых и простых по составу жидких : ным грибным ароматом, При длительном питательных средах, выращивании. мицелий местами буреет, Предлагаемый штамм ИБКР-112 выде- . на поверхности образуются зрелые лен из плодовых тел Г1апппц11па че1и плодовые тела.

tipes (зимнего опенка), которые были 25 При глубинном выращиваиии íà среЬ! собраны на пнях листвейных пород в .. дах с Пептоибм, минеральной среде с .окрестностях г,киева, Культура хна- глюкозой или мелассой и дрожжевым нится на нейтральном сусло-агаре " экстрактом растет в виде мицелиаль при 4 С в коллекции института ботани- иыХ шариков..Толщина гиф 2,0-4,0 мк. ки им, Н,Г,Холодног АН УССР. ЗО Иицелий обладает грибным ароматом.

727687

Физиологические признаки, Лэроб, Оптимум роста при 2боС Оптимальный рН вЂ” 9,0, Отношение к источникам углерода: ассимилирует глюкозу, галактозу, рафиноэу, сахарозу, мальтозу, ксилозу, лактоэу, маннит, крахмал, лигнин и целлюлозу.

Отношение к источникам азота: использует нитратный и аммонийный

" азот, пептон, аспарагин, мочевину.

Рост в культуре стимулируется . 10 добавками растительного происхождения: отвары, кормовых растений, дубовой коры и др, Штамм обнаруживает положительную реакцию на экстрацеллюларные окси- 15 даэы, отмечено образование протеолитических ферментов.

Антагонистические свойства, Проявляет антагонистические свойства - по отношению к штаммам дрожжей Can- 20

dida a1bicans.

Штамм F lammu1 in a velutipes

ИБКГ-112 испытан с лабораторных условиях на различных жидких средах сл едую щего с о ст а в а: сусло пивное (4 по Баллингу) при рН 9; среда с пептоном, г/л глюкоза 30,0, пептон 3,0; К НРО+ 2,0; KCl 1,2;

MgS04 7Н О 0,25; вода водопроводная

l.лйрирН 9; 30 минеральная среда с мелассой, г/л: меласса 25, 0; (NH+)> SO4 3, 0; К ЙРО4

1,2; дрожжевой экстракт 2,0; вода водопроводная 1 л при рН 9,0;

" йкнеральная среда с глюкозой, г/л: 35 глюкоза 30; ИН4С1 2,0; КН РО4 2,0;

КС1 1,2; МАЗО 7Н О 0,25; вода водопроводная lл при рН среди 9,0.

Гриб Культивируют поверхностно в матрацах и колбах Эрленмейера раэ- 40 личной емкости, глубинно — в пробирках на качалке при 200 об/мин и в колбах Эрленмейера на 250-500 мл --" на круговой качалке при 150 об/мин.

Температура инкубации 26-28 С. Посевной материал выращивают в колбах на 500 мл с 50 мл среды, На дно колб насыпают фарфоровые бусы,.с помощью

"Кбтор«ых перед посевом измельчают мицелиальную.пленку путем энергичного встряхивания. Среду инокулируют по- . О лученной мицелиальной вэвесью в количестве 10-20 объем Ъ, Данные накопления биомассы Flam»

mulina velutipes на минеральной среде с глюкозой при различных началь- 5$ ных значениях рН среды (г/л сухого мицелия) в поверхностной культуре приведены в табл.1.

Даннце роста Flammulina velutipes на минеральной среде с различными Щ источниками углерода, Ъ к весу мицелия на среде с глюкозой, приведены б .2 ° " ф 2 ..Ю".. «" б» в та л.2.

Данные роста Flammulina velutipes на минеральной среде с различными ф5 источниками азота, % к весу сухого мицелия на среде с ИН4С1, приведены в табл.3.

Показатели влияния концентрации глюкозы на рост. гриба Flammulina

velutipes при гЛубинном культивировании его на минеральной среде приведены в табл.4.

Данные роста Flammulina velutipes в глубинной культуре при различном содержании пептона в среде приведены в табл.5.

Данные роста Flammulina че1ц 1рез на пивном сусле при различном соотношении объемов среди и суспензии посевного мицелия, г/л сухого мицелия на 7 сутки культивирования, приведены в табл.б.

Показатели влияния СаСО> на рост

Фlammulina veictipes в глубинной культуре приведены в табл,7.

-Так как многие высшие грибы при росте на минеральных средах испытывают потребность в витаминах и естественных стимуляторах, таких как экстракты растений, почвы и т.п., проведены исследования роста Flammulina velutipes на водных (1:1) отварах некоторых, кормовых растений, исходя из того, что применение сельскохозяйственных отходов в средах для промышленного культивирования грибов может оказаться достаточно эффективным и более экономичным, чем добазление чистых витаминов и аминокислот, Данные роста Flammulina velutipes на отварах кормовых растений с добавлением .15 г/л.глюкозы представлены в табл,8.

Данные о накоплении биомассы опенка в поверхностной культуре на среде с различным содержанием отвара люцерны приведены в табл,9.

Исследован также рост штамма зимнего опенка на KoMTIsieKcHHx средах, где в качестве субстратов используют дешевые отходы пищевой промышленности, а Также гидролизат синеэеленых водо-рослей. При выращивании пбверхностным методом максимальный урожай сухого мицелия на 7 сутки культивирования составляет 15,2 г/л на среде с послеспиртовой бардой; .8,5 г/л с мелассой и 2,7 г/л с-гйдролизатом синеэеленых водорослей.

Таким образом, предлагаемый штамм съедобного гриба Flammulina velutipes (опенок зимний) обнаруживает хороший рост при культивированйи на жидких средах, сод«ержащих недооогие и доступные источники "у1лербдного, азотного и минерального питания.

На этйх""браздах при оптимальном для роста рН среды 9,0 получен следующий максимальный урожай сухого культуральйого мицелия: на пивном сусле (4 по Баллингу) на 7 сутки культивирования до 13,4 г/л в поверх1

Ы Р

7276 87! !

Мицелиальная биомасса имеет приятный грибной аромат, белок содержит все основные незаменимые аминокислоты, Кроме того, штамм образует;B культуре на плотных и жидких средах плодовые тела со зрелыми спорами, что может быть использовано для селекционных работ.

4,75 Я

4,19 сл, 3,93

3,0

2,39

Та блица 1 ла!

1,0 2,0 3,0 4,0 5,0 6,0 /,О 8,0 9,0 10,0

Исходное рН среды

Биомасса мицелия, г/л по сухому весу

4,0 4,1 4,2 4,2 4,7 5,1

Та блица 2

° t

Глюкоза Галактоза Раффиноэа Маннит Сахароза Маль- Крахмал Ксилоза Лактоза тоза .Й

115 115

62 73 . 77 96

100 (NH+) z БО, 133

100

Фаблица4

Исходное содержание глюкозы в среде, %

Продолжительность опыта, сутки

7 3 5

3 5

3 5

Использование люкозы, %

/О 76 80 6 80 3 83 3 84 8/,3 87,3 87

Вес сухого мицели я, г/л

5,4 6,6 8,1 5,8 6,0 7,5 5,6 6,0 7,3 ностной культуре, до 21,3 г/л в глубинной и до 25-27 г/л при добавлении

0,1% CaCO . При поверхностном вырашивании на среде с пептоном гриб образовал до 7,6 г/л сухого мицелия на

7 сутки роста, на минеральной среде с глюкозой и отваром люцерны до

7,0 г/л на 10 сутки и 13 г/л на 14 сутки роста, на среде с бардой

15,2 г/л, на мелассе 8,5 г/л, Максимальный выход биомассы составлял около 62 r на 100 г поглощенной иэ среды глюкозы.

Содержание сырого протеина (N @ « 6,25) в биомассе предлагаемого штамма составляет 28,4-36 0% на сухой вес, в зависимости от состава среды и возврата мицелия. Содержание аминокислот в образцах мицелия, вырашенного поверхностно на пивном сусле, % к общему белку, следующее:

Лизин 4,05 Треонин

Гисти- Аланин дин 1,60 ФенилАргинин 3,94 алании

Аспара- Валин гиновая Метионин кислота 4,19 Лейцин

Серин .2,51 Изолейцин 3,35

Глицин 11,02

Глутаминовая кислота 5,59

Сырая мицелиальная масса, вырашенная глубинно и поверхностно на укаэанных средах, обладает сильным грибным ароматом, Мицелий, высушенный

o при 40 С, сохраняет аромат в течение нескольких месяцев.

Описываемый штамм FIammuIina veIutipes HBKF-112 имеет выход мицелиальнойiбномассы в различных углеводных средах, включая дешевые отходы сельского хозяйства и пишевой промьпаленности, 62% по глюкозе, что выше, чем у описанных штам)аов этого вида.

727687

Та.блица5

Содержание пептона в среде, г/л

Вес сухого мицелия, г/л на

3 сутки 5 сут- 7 сутки ки

5,3 5,6 . 6,4

4,8 5,8 /,1

9:1 8:2

Таблицаб

Среда-инокулюм

7:3 . . 6:4

Поверхностный рост

11,0 11,2

13,4 не исследовали . Глубинный рост

15р 3 18,4.14,1 13,7"

21,3

Таблйца /

° », Количество СаСО> в среде . Контроль (без CACO) 0,01%

0i 1%

19,9

Биомасса: г/л / сут к и

18,4

25,0

105% к контролю

133

Таблица 8

Биомасса, к контролю.

Вика Люпин - Горох Фасоль .Люцерна Кукуруза Клевер

100

135

109 . 117

165

Таблица9

Содержание отвара в среде, В.

25 50

»» ЮВ»»

Продолжительность опята, сутки

10 14 10 ),4 10 14 10 14 10 14

5,7 7,6 5,6 8,4 6,1 . 8,2 8,3 9, ) 7,0 )2,8

Вес сухого мицелия, r/ë

Контроль (минеральная среда с глюкозой) 1 (3,7 5,2 7,6

5050.75.727687

Формула изобретения

Составитель A.Âðàæíèêoâà

Редактор В.Трубченко Техред И.Кузьма Корректор ".Веселовская

Заказ 1076/26 Тираж 522 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раущская наб., д. 4/5

Филиал ППП Патент, г.ужгород, ул.Проектная,4

Штамм Flanunu1ina ve1utipes

ИВКГ-112 — продуцент биомассы, Хранится в коллекции института ботаники им. Н,Г,Холодного АН УССР, Морфологические признаки. Шляпка

:гриба 0,5-3,0 см в диаметре, желтовато-бурая, с тонким краем, выпуклоили плоскораспростертая. Ножка гриба длиной 3,0-7,0 см, толщиной 0,1"0,8см, плотная, полая внутри, Споры гладкие, бесцветные, размер 7,0-10 0 < 3,06;0 мк, Гифы бесцветные, разветвлен ные, септированные, толщинсй 2,04,5 мк с многочисленными пряжками.

Участки гиф распадаются на оидии. 15

Культуральные признаки. На суслоагаре колонии белые, войлочные с грибным запахом. При старении местами буреют, Наблюдается развитие плбдовых тел со зрелыми базйдиоспорами. " 2Q

На поверхности жидкого пивного сусла (4О Баллинга) пушистая войлоч- ная мицелиальная пленка с приятным грибным ароматом. При длительном выращивании мицелий местами буреет,на р5 поверхностИ образуются зрелые плодо вые тела, При глубинном выращивании на средах с пептоном, минеральной "реде с глюкозой или мелассой и дрожжевым экстрактом, растет в виде мицелиальщ ных шариков. Толщина гиф 2,0-4,0 мк.

Мицелий обладает грибным ароматом.

Физиологические признаки. Аэроб.

Оптимум роста при 26 С, Оптимальный рН 9,0.

Отношение к источникам углерода: ассимилирует глюкозу, галактозу, рафи- — нозу, сахароэу, мальтозу, ксилозу, лактозу, маннит, крахмал, лигнин и целлюлозу.

Отношение к источникам азота: использует нит ратный и аммонййный азот, аспарагин, мочевину.

Рост в культуре стимулируется до- - I бавками раститЕльного происхождениями отвары кормовых растений, дубовой коры и др °

Штамм обнаруживает положительную реакцию на экстрацеллюларные бксидазы,отмечено образование протеолитических ферментов.

Антагонистические свойства, Проявляет антагонистические свойства по отношению к штаммам дрожжей Candida-albicans, Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1, Журнал Applied Microbiology, !

1954, т.12,.9 1, с.170-172,